專(zhuān)利名稱(chēng)：用于治療關(guān)節(jié)疾病和損傷的關(guān)節(jié)內(nèi)補(bǔ)充方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生產(chǎn)包含脫乙酰殼多糖和藻酸鹽的混合物的球狀水凝膠小珠的方法。本發(fā)明還涉及用于治療關(guān)節(jié)病癥、特別是骨關(guān)節(jié)炎的新型補(bǔ)充方法(supplementation me thod)和組合物。
背景技術(shù)：
骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis, 0A)是一種伴有疼痛的進(jìn)行性退行性病癥,其特征在于關(guān)節(jié)中軟骨的斷裂、關(guān)節(jié)內(nèi)存在的滑液的變質(zhì)和所導(dǎo)致的骨硬化。骨關(guān)節(jié)炎隨年齡增加，在60歲以上的人中具有高于60%的可能性。目前，為了緩解伴隨OA的機(jī)械性疼痛，目前的療法通常是通過(guò)施用鎮(zhèn)痛劑或抗炎藥劑的治療或通過(guò)部分或整個(gè)關(guān)節(jié)置換的外科手術(shù)療法。備選方法是粘性補(bǔ)充療法(viscosupplementation),其是向關(guān)節(jié)內(nèi)注射減少摩擦和疼痛的生物相容性粘性(例如，透明質(zhì)酸)潤(rùn)滑劑。粘性補(bǔ)充療法用于補(bǔ)充潤(rùn)滑并且保護(hù)關(guān)節(jié)的滑液。事實(shí)上，在OA患者中，滑液的變化是透明質(zhì)素(或透明質(zhì)酸HA的鹽)的濃度和分子量(Mw)的減少。包含高分子量HA制劑的關(guān)節(jié)內(nèi)注射劑目前是可獲得的并且被用于治療膝蓋，髖部，拇指或踝的腕掌關(guān)節(jié)。這些制劑需要一次(Durolane TM,Q-Med AB，Uppsala，瑞典)、三
次(Synvisc ，高分子量交聯(lián)的 HA，Ortliovise ')至五次(.Hyalgan'81，Supartz :)關(guān)節(jié)內(nèi)(IA)注射(根據(jù)關(guān)節(jié)，每次注射I至3ml，包含5至20mg/ml的HA)。表I :透明質(zhì)酸(HA)制劑
商標(biāo)名公司平均Mw (kD)
Synvisc (Hylan G-20) Biornatrix(IllltAj)6.000-7.000
Healon Pliarrnacia/ Upjohn ( 典)丨.900-3900
Ortliovisc Anika (美 I )1.700-2.900
Artlirum LCA (法 N)2.000
Adant Meiji Seika (I I 木)900-1.200
S叩A(chǔ)rtz ，Artz ，Seikagaku (丨 I 木)600-1 ..200
_Artzal ___
Ostenil Cliemedica (法丨丨;:丨)丨 _200
Hyalgan _Fidia (意大利)__500-730_
DurolaneIMQ-Med AB (瑞典)2 9000HA制劑有多種特征變化，包括，例如，HA的來(lái)源(動(dòng)物來(lái)源的或細(xì)菌的)，HA的濃度和Mw以及所用的化學(xué)交聯(lián)的類(lèi)型和程度(如果存在的話)。通常，大部分注射型HA制劑在注射后具有數(shù)小時(shí)至數(shù)天的停留半衰期。一些研究已經(jīng)比較了上述產(chǎn)品的功效并且差異性地推論出患有膝蓋OA的患者有顯著的疼痛減輕及功能改善。一些研究的結(jié)論是與安慰劑注射相比較充其量存在些微作用。其他研究觀察到每周注射3-5次上述產(chǎn)品中的一種，顯著改善OA患者的疼痛和功能狀態(tài)，并且，盡管改善滯后3-4周發(fā)生，但是作用在治療終止后可以持續(xù)至少六個(gè)月以上。其他研究觀察到對(duì)OA癥狀(不僅對(duì)膝蓋OA而且對(duì)踝部或拇指的腕掌關(guān)節(jié)0A)的有益效果，但是也有不利效果。 此外，臨床效果可以在第I周迅速出現(xiàn)并且可以持續(xù)6個(gè)月以上，但是在所有情形中，主要由于大部分HA制劑的短的停留半衰期，對(duì)于骨關(guān)節(jié)疼痛的持久(六個(gè)月至一年)作用必需進(jìn)行多次注射。最后，W02007/135114描述了使用不產(chǎn)生不溶性團(tuán)聚體的藻酸鹽和脫乙酰殼多糖的混合物的多糖組合物的粘性補(bǔ)充療法。團(tuán)聚體是由于脫乙酰殼多糖的聚陽(yáng)離子性質(zhì)導(dǎo)致，該性質(zhì)使其難以與其他多糖如透明質(zhì)酸(一種聚陰離子)或藻酸鹽相容。根據(jù)W02007/135114，多糖如脫乙酰殼多糖和藻酸鹽的沉淀/團(tuán)聚阻止其任何制劑用作可注射的組合物。因此，在W02007/135114中，具有至少40%的高衍生度的脫乙酰殼多糖和藻酸鹽的水性混合物的組合物被描述為是高度粘性的但不產(chǎn)生不溶性團(tuán)聚體。對(duì)于開(kāi)發(fā)保護(hù)軟骨免受機(jī)械張力、為OA患者提供有效緩解而無(wú)須多次注射并且避免不利作用的新型關(guān)節(jié)內(nèi)補(bǔ)充產(chǎn)品存在持續(xù)的需求。現(xiàn)在我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)制備包含藻酸鹽和脫乙酰殼多糖的均質(zhì)水凝膠基質(zhì)的新方法，其中脫乙酰殼多糖具有低的分子量和團(tuán)聚體?？赏ㄟ^(guò)該新方法得到的所產(chǎn)生的藻酸鹽/脫乙酰殼多糖小珠當(dāng)用于關(guān)節(jié)內(nèi)補(bǔ)充時(shí)保持令人驚訝的均質(zhì)性和穩(wěn)定性?，F(xiàn)在我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)用于脫乙酰殼多糖/藻酸鹽小珠的單次關(guān)節(jié)內(nèi)補(bǔ)充的新方法和組合物，所述脫乙酰殼多糖/藻酸鹽小珠在關(guān)節(jié)內(nèi)長(zhǎng)期停留(至少兩周)，而不增加滑液的粘度。前述概述和下述描述不是對(duì)所要求的發(fā)明的限制。發(fā)明概述本發(fā)明的一個(gè)方面涉及制備水凝膠基質(zhì)的方法，所述方法包括下述步驟-提供藻酸鹽溶液，-提供具有低于60kD的Mw的脫乙酰殼多糖的溶液，-將藻酸鹽溶液與脫乙酰殼多糖溶液混合，其中所述混合溶液包含0.5-0. 7% (w/v)的脫乙酰殼多糖和1-1.4% (w/v)的藻酸鹽，-將所述混合溶液的液滴引入到具有Ca2+或Sr2+陽(yáng)離子的溶液中，和-從所述具有陽(yáng)離子的溶液分離凝膠化(gellified)的小珠。在本發(fā)明方法的特定實(shí)施方案中，將混合溶液的液滴引入到Sr2+離子溶液中。在該方法的具體實(shí)施方案中，所述混合溶液包含0. 6%的脫乙酰殼多糖和或包含I. 2%的藻酸鹽。在本發(fā)明方法的具體實(shí)施方案中，所述混合溶液中藻酸鹽與脫乙酰殼多糖之間的比例是I. 4-2. 8，或I. 75-2. 25或約為2。在本發(fā)明方法的具體實(shí)施方案中，所述脫乙酰殼多糖具有35_45kD的Mw和/或是動(dòng)物來(lái)源的，或優(yōu)選是植物來(lái)源的。
在本發(fā)明方法的另一些具體實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括將所述小珠混合在熱敏性水凝膠中的步驟。此處，小珠和水凝膠之間的比例如為5/1至1/1，或4/1至2/1。在本發(fā)明方法的另一些具體實(shí)施方案中，小珠的形成通過(guò)使液滴穿過(guò)針頭來(lái)進(jìn)行，從而得到直徑為0. 01-5mm的小珠。本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及包含脫乙酰殼多糖和藻酸鹽的均質(zhì)混合物的球形水凝膠小珠，其中所述小珠可以通過(guò)上述方法得到。本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及包含脫乙酰殼多糖和藻酸鹽的均質(zhì)混合物、直徑為
0.01-5mm的球形水凝膠小珠，其特征在于所述小珠包含1_1. 4%的藻酸鹽和0. 5-0. 7%的 脫乙酰殼多糖，例如，所述小珠包含I. 2%的藻酸鹽，或例如，所述小珠包含0. 6%的脫乙酰
殼多糖。在本發(fā)明小珠的具體實(shí)施方案中，藻酸鹽/脫乙酰殼多糖的比為I.4-2.8，優(yōu)選
1.75-2. 25，最優(yōu)選 I. 8-2. 2。在本發(fā)明小珠的另一些具體實(shí)施方案中，所述脫乙酰殼多糖具有35_45kD的Mw和/或是動(dòng)物來(lái)源的或植物來(lái)源的。本發(fā)明還涉及關(guān)節(jié)內(nèi)補(bǔ)充物，所述關(guān)節(jié)內(nèi)補(bǔ)充物包含直徑為0.01_5mm、包含藻酸鹽和分子量低于60kD的脫乙酰殼多糖的均質(zhì)混合物的球形水凝膠小珠，其特征在于所述小珠包含1-1. 4%的藻酸鹽和0. 5-0. 7%的脫乙酰殼多糖。所述關(guān)節(jié)內(nèi)補(bǔ)充物可以進(jìn)一步包含粘性熱凝膠，例如，多糖水凝膠，特別是脫乙酰殼多糖水凝膠。提及多糖，人們意指生物聚合物，如透明質(zhì)酸(已知其具有由葡萄糖醛酸和N-乙酰-葡糖胺組成的重復(fù)二糖單位)，藻酸鹽和脫乙酰殼多糖。脫乙酰殼多糖是一種自然中可廣泛獲得的多糖，其通過(guò)殼多糖的化學(xué)脫乙酰作用獲得，并且是甲殼類(lèi)動(dòng)物外骨骼的主要組成成分，而且還來(lái)自蘑菇壁。其由D-葡糖胺單位和N-乙酸-D-葡糖胺單位組成。關(guān)節(jié)內(nèi)補(bǔ)充物還可以包含選自由下列各項(xiàng)組成的組的成分非留體抗炎藥、麻醉齊U、阿片類(lèi)鎮(zhèn)痛劑、皮質(zhì)類(lèi)固醇、抗腫瘤藥、單克隆抗體、嵌合單克隆抗體、維生素、礦物質(zhì)、
營(yíng)養(yǎng)制品。關(guān)節(jié)內(nèi)補(bǔ)充物還可以包含另外的活性或非活性成分，包括，例如，非甾體抗炎藥(NSAIDS)，例如，雙氯芬酸 TM(diclofenacTM)，布洛芬 TM(ibuprofenTM)，批羅昔康TM(piroxicamTM)；鎮(zhèn)痛劑，例如，利多卡因TM(LidocaineTM)和布比卡因TM(BupivacaineTM);阿片類(lèi)鎮(zhèn)痛劑，例如可待因(codeine)和嗎啡(morphine);皮質(zhì)類(lèi)固醇類(lèi)，例如，地塞米松(dexamethasone)和潑尼松(prednisone);抗腫瘤劑，如甲氨蝶呤TM (MethotrexateTM);抗病毒藥劑，例如阿昔洛韋TM (AcyclovirTM)和阿糖腺苷TM(VidarabineTM);單克隆抗體,例如HumiraTM和嵌合單克隆抗體，例如英利昔單抗TM (inf IiximabTM)。關(guān)節(jié)內(nèi)注射型補(bǔ)充物還可以包含下述成分,如細(xì)胞，蛋白質(zhì)、DNA、礦物質(zhì)(例如硒、鍶)、維生素(例如生育酚)、營(yíng)養(yǎng)制品(例如姜黃素(curcumin))或其他需要的生物活性物質(zhì)。本發(fā)明還涉及用于治療受試者的關(guān)節(jié)病癥和用于減輕與關(guān)節(jié)損傷或關(guān)節(jié)病(包括骨關(guān)節(jié)炎和創(chuàng)傷性軟骨損傷(traumatic cartilage lesions))相關(guān)的疼痛和不適的補(bǔ)充方法。所述關(guān)節(jié)病的實(shí)例包括骨關(guān)節(jié)炎(原發(fā)性(自發(fā)性的)或繼發(fā)性的)、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis)、關(guān)節(jié)損傷(joint injury)(例如創(chuàng)傷性或反復(fù)性運(yùn)動(dòng)損傷(traumatic or repetitive motion injury))、軟骨病變(cartilage pathology)(例如軟骨隹丐沉著癥(chondrocalconsis)、軟骨軟化癥(chondromalacia))、膿毒性關(guān)節(jié)炎(septicarthritis)。本發(fā)明還提供減輕與所述疾病相關(guān)的疼痛，修復(fù)骨骼和軟骨損傷和減緩疾病進(jìn)展的方法。治療關(guān)節(jié)病癥的補(bǔ)充方法包括施用按照本發(fā)明制備的關(guān)節(jié)內(nèi)補(bǔ)充物。補(bǔ)充方法可以包括單次或多次關(guān)節(jié)內(nèi)注射或植入足以提供治療效果的量的補(bǔ)充物。
關(guān)節(jié)內(nèi)注射或植入在人或非人哺乳動(dòng)物的骨骼和/或軟骨缺陷中例如通過(guò)關(guān)節(jié)鏡檢查或使用注射裝置如注射器直接進(jìn)行。施用位點(diǎn)的實(shí)例包括,膝部、肩部、踝部、顳下頜(temporo-madibular)和腕掌關(guān)節(jié)、肘部、髖部、腕部、椎間盤(pán)。本發(fā)明還提供一種補(bǔ)充設(shè)備，其包括具有單次劑量的補(bǔ)充物的預(yù)填充、單次用注射器。附圖
簡(jiǎn)要說(shuō)明圖I顯示按照本發(fā)明的方法得到的小珠。圖2顯示藻酸鹽小珠(A)和脫乙酰殼多糖/藻酸鹽小珠⑶的截面[脫乙酰殼多糖深灰色小梁(trabeculae);藻酸鹽淺灰色背景]。圖3以低的放大率顯示包埋在脫乙酰殼多糖水凝膠中的脫乙酰殼多糖/藻酸鹽小珠。圖4顯示包含0. 6%脫乙酰殼多糖/I. 2%藻酸鹽小珠的熱敏性脫乙酰殼多糖水凝膠(雙孢蘑燕(A. bisporus)脫乙酰殼多糖(40kD))的植入。圖5顯示植入15天后植入物的組織學(xué)評(píng)估。A :軟骨下骨；B :細(xì)胞群集的(cell-colonized)的水凝膠；C :細(xì)胞群集的脫乙酰殼多糖/藻酸鹽小珠；D :包埋在脫乙酰殼多糖空隙(lacunae)中的細(xì)胞。發(fā)明詳述本發(fā)明的一個(gè)方面涉及生產(chǎn)水凝膠基質(zhì)的方法。該方法包括下述步驟-提供藻酸鹽溶液，-提供具有低于60kD的Mw的脫乙酰殼多糖的溶液，-將藻酸鹽溶液與脫乙酰殼多糖溶液混合，其中所述混合溶液包含0.5-0. 7% (w/v)的脫乙酰殼多糖和1-1. 4%的藻酸鹽，-將所述混合溶液的液滴引入到具有Ca2+或Sr2+離子的溶液中-從具有陽(yáng)離子的溶液分離凝膠化的小珠。通過(guò)該方法得到的水凝膠產(chǎn)生藻酸鈣和脫乙酰殼多糖的均質(zhì)基質(zhì)。如在本發(fā)明中得到的基質(zhì)與現(xiàn)有技術(shù)的基質(zhì)不同，現(xiàn)有技術(shù)的基質(zhì)具有一種成分的核，其被另一種成分的層包被。與首先被凍干以獲得某種程度的孔隙度的基質(zhì)相比，如在本發(fā)明中得到的基質(zhì)具有優(yōu)點(diǎn)，即，該基質(zhì)的孔隙度可以更準(zhǔn)確地確定。如在本發(fā)明中得到的基質(zhì)具有優(yōu)點(diǎn)，即，由低分子量的(尤其是15_50kDA的)脫乙酰殼多糖組成，其在藻酸鹽基質(zhì)中自發(fā)形成均質(zhì)網(wǎng)絡(luò)。如在實(shí)施例部分所示，用于制備水凝膠的藻酸鹽和脫乙酰殼多糖溶解在具有殺菌作用的強(qiáng)的堿性或酸性緩沖液中。這是本發(fā)明另外的優(yōu)點(diǎn)。在根據(jù)本發(fā)明的方法中，可以混合藻酸鹽和脫乙酰殼多糖溶液以得到具有不同濃度的小珠。本發(fā)明的具體實(shí)施方案涉及這樣的小珠，其中，在通過(guò)鈣離子或鍶離子凝膠化之前，組合物包含 0. 4,0. 45,0. 5,0. 55,0. 60,0. 65,0. 70,0. 75 或 0. 80 % (w/v)的脫乙酰 殼多糖，并且獨(dú)立于其地包含 0. 9,0. 95,0. 1,0. 105,0. 11,0. 115,0. 12,0. 125,0. 13,0. 135、0. 14、0. 145或I. 5% (w/v)的藻酸鹽。在具體實(shí)施方案中，脫乙酰殼多糖的濃度范圍在
0.5-0.7%，或0.55-0. 65%。在其他具體實(shí)施方案中，藻酸鹽的濃度范圍在I.至I. 4%或
1.25至I. 35%。水凝膠的一個(gè)具體實(shí)施方案包含約0. 6%的脫乙酰殼多糖和約I. 2%的藻酸鹽。本發(fā)明的方法和組合物的其他實(shí)施方案涉及水凝膠組合物和其所得到的小珠，其中在混合溶液中藻酸鹽與脫乙酰殼多糖的比為I. 4-2. 8，更特別為I. 5-2. 7，更特別為
I.6-2. 6，或 I. 75-2. 25。該比率的具體值為約 I. 9，I. 95，2. 0，2. 05 和 I。在本發(fā)明的方法中，小珠的平均尺寸可以調(diào)整并且通過(guò)調(diào)節(jié)用于形成被引入到鈣或鍶溶液中的液滴的針頭的直徑而憑經(jīng)驗(yàn)確定。本文考慮直徑為0.01-5_的小珠。這些尺寸在操作容易性與營(yíng)養(yǎng)物擴(kuò)散到小珠中之間提供折衷。來(lái)自本發(fā)明的脫乙酰殼多糖可以分離自不同的動(dòng)物來(lái)源，如甲殼類(lèi)動(dòng)物(crustaceans)(對(duì)奸殼)或?yàn)踬\類(lèi)動(dòng)物。備選地，脫乙酰殼多糖可以是植物來(lái)源的，更特別是真菌來(lái)源的，如毛霉目(Mucoralean)菌株，總狀毛霉(Mucor racemosus)和雅致小克銀漢霉(Cunninghamella elegans),卵形抱球托霉(Gongronella butleri),黑曲霉(Aspergillus niger)，稻根霉菌(Rhizopus oryzae)，香 (Lentinus edodes)，鳳尾燕(Pleurotus sajo-caju),魯氏接合酵母(Zygosaccharomyces rouxii),白色念珠菌(Candida albicans)或雙抱蘑 (Agaricus bisporus)。脫乙酰殼多糖還以多種類(lèi)型的分子量存在。此處，脫乙酰殼多糖的鏈長(zhǎng)可以對(duì)水凝膠的三維結(jié)構(gòu)起作用。用于本發(fā)明的典型的脫乙酰殼多糖可以具有15-50kD、更具體是35-45kD的平均分子量。上述制備小珠的方法導(dǎo)致形成包含脫乙酰殼多糖和藻酸鹽的均質(zhì)混合物的球形水凝膠小珠。在具體的實(shí)施方案中，補(bǔ)充物被配制成由小珠和粘性凝膠形成的兩相補(bǔ)充材料。該補(bǔ)充物包括聚合基質(zhì)(“凝膠”)和包含脫乙酰殼多糖和藻酸鹽的球形三維小珠。這允許配制可植入的或可注射的凝膠，其在植入時(shí)確保在宿主組織或器官中的最佳空間分布。此處典型地與通過(guò)本發(fā)明方法制備的小珠一起用于補(bǔ)充物中的凝膠是熱敏性凝膠。這些凝膠在環(huán)境溫度保持液態(tài)(在用于引入到患者中的裝置中)，但是當(dāng)引入機(jī)體時(shí)在約37°C變成固體。這種原位凝膠化保持小珠的空間分布。體外測(cè)試已經(jīng)證明當(dāng)加熱至37°C時(shí)，小珠在這樣的水凝膠中均勻分布。熱敏性水凝膠的實(shí)例包括聚(N-異丙基丙烯酰胺)(PNIPAAm)。其一種具體的類(lèi)型是脫乙酰殼多糖。
不受理論限制，據(jù)信在微珠內(nèi)的脫乙酰殼多糖網(wǎng)絡(luò)賦予小珠特定的機(jī)械特性，以使它們與僅由藻酸鹽制成的小珠相比更不可壓縮且更抗壓。本發(fā)明的基質(zhì)提供在藻酸鹽凝膠內(nèi)的相互連接的脫乙酰殼多糖小梁(trabeculae),其通過(guò)提供中性pH的水性介質(zhì)而產(chǎn)生有利于細(xì)胞培養(yǎng)的環(huán)境。這樣的小梁由不溶性脫乙酰殼多糖得到，所述不溶性脫乙酰殼多糖在與藻酸鹽混合時(shí)形成團(tuán)聚體，所述團(tuán)聚體產(chǎn)生籃狀結(jié)構(gòu)網(wǎng)絡(luò)或小梁。小梁的厚度和長(zhǎng)度可變，并且為小珠提供特定的生物學(xué)特性和機(jī)械特性，如表型穩(wěn)定性、可變形性、彈性和壓縮模量。
實(shí)施例實(shí)施例I.制備藻酸鹽/脫乙酰殼多糖小珠由脫乙酰殼多糖(最終為0. 6% )和藻酸鹽(最終為I. 2% )的均質(zhì)混合物制備小珠。在混合之前，分別制備這兩種溶液。藻酸鹽和脫乙酰殼多糖溶液以下述方式制備制備在0. 16M NaOH中的2. 4% (W/v)的藻酸鹽溶液和在I. 666M HAc中的I. 333% (w/v)的脫乙酰殼多糖溶液。向10體積的藻酸鹽溶液中，加入I體積的IM Hepes (4-(2-羥乙基)-1_哌嗪乙烷磺酸)溶液。均質(zhì)化后，逐漸加入9體積的脫乙酰殼多糖溶液，同時(shí)規(guī)律且劇烈攪拌。將脫乙酰殼多糖/藻酸鹽溶液緩慢通過(guò)25號(hào)針(25 gauges needle),以逐滴形式進(jìn)A 102mM CaCl2溶液(Sigma-Aldrich (西格瑪-奧德里奇)，Bornem,比利時(shí))中。在瞬時(shí)凝膠化后，允許小珠在該CaCl2溶液中再凝膠化10分鐘。在微觀尺度下，脫乙酰殼多糖(被曙紅染成紅色)形成由不同厚度和長(zhǎng)度的小梁或纖維組成的籃狀結(jié)構(gòu)(見(jiàn)圖2和3)。此處的間隙由藻酸鹽(蘇木精染色成紫色)填充。實(shí)施例2.將小珠配制在熱敏性水凝膠中將小珠與植物(雙孢蘑燕)脫乙酰殼多糖水凝膠(Kitozyme,Alleur,比利時(shí))混合。該步驟在低于27°C進(jìn)行以避免水凝膠膠凝。使用3/l(v/v)的小珠/水凝膠的比。實(shí)施例3.在動(dòng)物模型中植入將如實(shí)施例2所述的凝膠植入到具有軟骨下骨和軟骨缺陷關(guān)節(jié)的兔中。(圖4)。植入15天后，評(píng)價(jià)所述植入物(圖5)。損傷仍然被植入物填充。小珠和粘性水凝膠在注射后至少兩周在損傷的關(guān)節(jié)內(nèi)保持不變，同時(shí)保持安全性特征。此外，還觀察到植入物群集有來(lái)源于下面的骨髓的細(xì)胞。細(xì)胞匯集(encountered)在固定的熱敏性脫乙酰殼多糖水凝膠⑶以及在脫乙酰殼多糖藻酸鹽小珠(C)中(脫乙酰殼多糖小梁顯示為D)。該測(cè)試證實(shí)兩相植入物能夠容易地操作和植入。植入物的生物可降解性質(zhì)確保植入后的逐漸吸收。實(shí)施例4.脫乙酰殼多糖分子量對(duì)小珠形成的影響在根據(jù)本發(fā)明的方法中已經(jīng)使用了不同分子量的天然脫乙酰殼多糖。測(cè)量混合溶液(與軟骨細(xì)胞一起)的不同物理參數(shù)如PH和粘度。按照本領(lǐng)域公知的技術(shù)測(cè)量所得到的水凝膠的滲透性。表I
權(quán)利要求
1.一種生產(chǎn)用于關(guān)節(jié)內(nèi)補(bǔ)充物的水凝膠的方法，所述方法包括下述步驟 -提供藻酸鹽溶液， -提供具有低于60kD的Mw的脫乙酰殼多糖的溶液， -將所述藻酸鹽溶液與所述脫乙酰殼多糖溶液混合，其中所述混合溶液包含O. 5-0. 7% (w/v)的脫乙酰殼多糖和1-1.4% (w/v)的藻酸鹽， -將所述混合溶液的液滴引入到具有Ca2+或Sr2+陽(yáng)離子的溶液中，和 -從所述具有陽(yáng)離子的溶液分離凝膠化的小珠。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其中所述混合溶液包含O.6%的脫乙酰殼多糖。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的方法，其中所述混合溶液包含I.2%的藻酸鹽。
4.根據(jù)權(quán)利要求I至3中任一項(xiàng)所述的方法，其中在所述混合溶液中，藻酸鹽和脫乙酰殼多糖以I. 75-2. 25的比率存在。
5.根據(jù)權(quán)利要求I至4中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述脫乙酰殼多糖具有35-45kD的Mw0
6.根據(jù)權(quán)利要求I至5中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述液滴通過(guò)針，以得到直徑為O. OI-5mm的小珠。
7.根據(jù)權(quán)利要求I至6中任一項(xiàng)所述的方法，其中脫乙酰殼多糖是動(dòng)物來(lái)源的或植物來(lái)源的。
8.一種包含藻酸鹽和Mw低于60kD的脫乙酰殼多糖的均質(zhì)混合物、直徑為O. 01-5mm的球形水凝膠小珠，其特征在于所述小珠包含1-1. 4%的藻酸鹽和O. 5-0. 7%的脫乙酰殼多糖。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的小珠，其中所述小珠包含I.2%的藻酸鹽。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的小珠，其中所述小珠包含O.6%的脫乙酰殼多糖。
11.根據(jù)權(quán)利要求8至10中任一項(xiàng)所述的小珠，其中所述脫乙酰殼多糖具有35-45kD的Mw。
12.權(quán)利要求8至11中任一項(xiàng)所述的小珠用于關(guān)節(jié)內(nèi)補(bǔ)充的應(yīng)用。
13.一種包含直徑為O. 01-5mm的球形水凝膠小珠的關(guān)節(jié)內(nèi)補(bǔ)充物，所述球形水凝膠小珠包含藻酸鹽和Mw低于60kD的脫乙酰殼多糖的均質(zhì)混合物，其特征在于所述小珠包含1-1. 4%的藻酸鹽和O. 5-0. 7%的脫乙酰殼多糖。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的關(guān)節(jié)內(nèi)補(bǔ)充物，其還包含粘性熱凝膠，優(yōu)選脫乙酰殼多糖水凝膠。
15.根據(jù)權(quán)利要求13至14中任一項(xiàng)所述的關(guān)節(jié)內(nèi)補(bǔ)充物，其中脫乙酰殼多糖是動(dòng)物來(lái)源的或優(yōu)選植物來(lái)源的。
16.根據(jù)權(quán)利要求13至15中任一項(xiàng)所述的關(guān)節(jié)內(nèi)補(bǔ)充物，其還包含選自由下列各項(xiàng)組成的組的成分非留體抗炎藥、麻醉劑、阿片類(lèi)鎮(zhèn)痛劑、皮質(zhì)類(lèi)固醇、抗腫瘤藥、單克隆抗體、嵌合單克隆抗體、維生素、礦物質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)制品。
17.一種用于治療人受試者或動(dòng)物的關(guān)節(jié)的補(bǔ)充方法，所述方法包括權(quán)利要求8至11中任一項(xiàng)所述的水凝膠小珠的單次或多次關(guān)節(jié)內(nèi)施用。
18.一種補(bǔ)充裝置，其包含權(quán)利要求8至11中任一項(xiàng)所述的水凝膠小珠。
全文摘要
一種生產(chǎn)用于關(guān)節(jié)內(nèi)補(bǔ)充物的水凝膠的方法，所述方法包括下述步驟提供藻酸鹽溶液，提供具有低于60kD的Mw的脫乙酰殼多糖的溶液，將藻酸鹽溶液與脫乙酰殼多糖溶液混合，其中所述混合溶液包含0.5-0.7％(w/v)的脫乙酰殼多糖和1-1.4％(w/v)的藻酸鹽，將所述混合溶液的液滴引入到具有Ca2+或Sr2+陽(yáng)離子的溶液中，和從所述具有陽(yáng)離子的溶液分離聚合的小珠。
文檔編號(hào)A61L27/52GK102762233SQ201180008577
公開(kāi)日2012年10月31日 申請(qǐng)日期2011年2月11日 優(yōu)先權(quán)日2010年2月25日
發(fā)明者伊夫·昂羅丹, 克里斯泰勒·桑謝, 弗雷德里克·奧普雷涅茨克, 皮埃爾·德里翁 申請(qǐng)人:列日大學(xué), 基多塞米股份公司