專利名稱：蛇孢菌素類二倍半萜化合物及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種蛇孢菌素類二倍半萜化合物及其制備方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
蛇孢菌素(ophiobolin)類二倍半職烯化合物已有一些文獻(xiàn)報(bào)道,該類化合物顯示了廣譜的抗菌活性，如抗線蟲、抗真菌及抗細(xì)菌等。據(jù)報(bào)道，該家族的ophiobolin A能抑制鈣離子活化的環(huán)核苷酸磷酸二酯酶的活性并導(dǎo)致小鼠白血病細(xì)胞L1210細(xì)胞的凋亡。到目前為止已發(fā)現(xiàn)該類化合物30余種，該類化合物的結(jié)構(gòu)特征均具有一個5-8-5三環(huán)結(jié)構(gòu)。此外，有14、17位形成環(huán)氧結(jié)構(gòu)的，如ophiobolin A、ophiobolin J等(Evidente A, Andolfi A, Cimmino A, Vurro M, Fracchiolla M, Charudattan R, MottaA.0phiobolin E and 8~ep1-ophiobolin J produced by Drechslera gigantea，apotential mycoherbicide of weedy grasses.Phytochemistry.2006.67(20):2281-7.)；有 16、17 位雙鍵被氣化而飽和的，如 ophiobolins B_D、ophiobolin F、ophiobolin M等(Tsipouras A， Adefarati AA, Tkacz JS, etal.0phiobolin M and analogues，noncompetitive inhibitors of ivermectin binding with nematocidal activity.Bioorg Med Chem.1996.4⑷:531-6.)；有5、21位之間形成內(nèi)酯環(huán)或半縮酮的，如ophiobolin A lactone、ophiobolin H、ophiobolin L 等(Wei, H ;Itoh，T ;Kinoshita，M ；Nakai, Y ;Kurotaki，M;Kobayashi，M；Cytotoxic sesterterpenes，6-epi_ophiobolin Gand 6-ep1-ophiobolin N， from marine derived fungus Emericella variecolor GF10.Tetrahedron.2004.60(28):6015-9)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種具有抗腫瘤活性的新化合物及其制備方法。本發(fā)明所提供的化合物是首次從地衣內(nèi)生真菌Ulocladium sp.的發(fā)酵物中分離的結(jié)構(gòu)新穎的蛇孢菌素(ophiobolin)類二倍半職烯化合物,其結(jié)構(gòu)式如式I所示:
權(quán)利要求
1.結(jié)構(gòu)式如式I所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑合物:
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑合物，其特征在于:所述化合物為下述I)-5)中的任意一種: 1)式I中，C3與C4之間形成碳碳雙鍵、R2為4-甲基-3，4-二羥基-戊烯基的化合物，其結(jié)構(gòu)式如式II所示； 2)式I中，C3與C4之間形成碳碳雙鍵、R2為3-甲氧基-4-甲基-4-羥基-戊烯基的化合物，其結(jié)構(gòu)式如式III所示； 3)式I中，C3與C4之間形成碳碳單鍵且R1為羥基、R2為3-甲氧基-4-甲基-4-羥基-戊烯基的化合物，其結(jié)構(gòu)式如式IV所示； 4)式I中，C3與C4之間形成碳碳雙鍵、民為2-(2’，2’，4’，4’-四甲基_1’，3’ -二氧戊環(huán)基)-乙烯基的化合物，其結(jié)構(gòu)式如式V所示； 5)式I中，C3與C4之間形成碳碳雙鍵、R2為2，2-二甲基-2，5- 二氫呋喃環(huán)基的化合物，其結(jié)構(gòu)式如式VI所示；
3.制備權(quán)利要求1中式I所示化合物的方法，包括下述步驟: 1)將Ulocladiumsp.進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng),得到菌絲體和發(fā)酵液的發(fā)酵培養(yǎng)物； 2)將所述發(fā)酵培養(yǎng)物中的菌絲體和發(fā)酵液分離，所得菌絲體破碎后用丙酮水溶液浸提，將丙酮水溶液浸提液濃縮至不含丙酮，水層用乙酸乙酯進(jìn)行萃取，對萃取液濃縮得菌絲體浸膏；再將所述發(fā)酵液濃縮后用乙酸乙酯進(jìn)行萃取，對萃取液濃縮得發(fā)酵液浸膏；將所述菌絲體浸膏和發(fā)酵液浸膏合并，即為粗提物； 3)將所述粗提物經(jīng)硅膠柱層析分離，以石油醚-丙酮為溶劑進(jìn)行梯度洗脫，收集石油醚-丙酮體積比為10: I梯度的洗脫物；將收集的洗脫物經(jīng)凝膠柱層析，以氯仿-甲醇體積比為1:1的溶劑為洗脫劑；洗脫產(chǎn)物再經(jīng)反相硅膠柱層析，以甲醇-水為溶劑進(jìn)行梯度洗脫，收集甲醇-水體積比為70: 30梯度的洗脫產(chǎn)物；將所述洗脫產(chǎn)物經(jīng)制備HPLC柱分離純化，以甲醇-水為溶劑進(jìn)行梯度洗脫，得到式I所示的化合物； 所述經(jīng)制備HPLC柱分離純化的過程中，以甲醇-水為溶劑進(jìn)行梯度洗脫時，起始洗脫溶劑為甲醇-水體積比為20: 80的混合溶劑，終止洗脫溶劑為100%甲醇，洗脫時間為60分鐘。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于:步驟I)中所述發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)基組成為:每升培養(yǎng)基含土豆200g、葡萄糖20g，其pH值為6.5 ; 所述發(fā)酵培養(yǎng)的條件為:在25-30°C靜置培養(yǎng)14-21天； 所述Ulocladium sp.，它的保藏編號為CGMCC N0.5507 ； 步驟2)中所述丙酮水溶液中丙酮的體積分?jǐn)?shù)60-90%，具體為70%。
5.權(quán)利要求1或2所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑合物在制備真核生物腫瘤細(xì)胞增殖抑制劑中的應(yīng)用或在制備預(yù)防和/或治療腫瘤藥物中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于:所述真核生物為哺乳動物；所述腫瘤細(xì)胞為癌細(xì)胞，所述癌細(xì)胞具體為宮頸癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、口腔表皮樣癌細(xì)胞或肝癌細(xì)胞。
7.權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于:所述腫瘤為癌；所述癌具體為宮頸癌、肺癌、口腔癌或肝癌。
8.—種藥物，它的有效成分為權(quán)利要求1或2中所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑合物；所述藥物為抑制真核生物腫瘤細(xì)胞增殖的藥物或預(yù)防和/或治療腫瘤的藥物。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥物，其特征在于:所述真核生物為哺乳動物；所述腫瘤細(xì)胞為癌細(xì)胞；所述癌細(xì)胞具體為宮頸癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、口腔表皮樣癌細(xì)胞或肝癌細(xì)胞； 所述腫瘤為癌；所述癌具體為宮頸癌、肺癌、口腔癌或肝癌。
10.Ulocladium sp.，其保藏號為 CGMCC N0.5507。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種蛇孢菌素類二倍半萜化合物及其制備方法與應(yīng)用。本發(fā)明所提供的化合物的結(jié)構(gòu)式如式I所示，其中，R2為-CH＝CH-R3、含氧雜環(huán)基或烷基取代的含氧雜環(huán)基；所述R3為烴基或含氧雜環(huán)基或烷基取代的含氧雜環(huán)基；C3與C4之間形成碳碳單鍵或碳碳雙鍵，當(dāng)C3與C4之間形成碳碳雙鍵時，R1不存在；當(dāng)C3與C4之間形成碳碳單鍵時，R1為羥基。上述化合物是分離得到地衣內(nèi)生真菌Ulocladium sp.經(jīng)過液體發(fā)酵，對發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行分離純化得到的。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，該類化合物可作為細(xì)胞增殖抑制劑或抗腫瘤劑。
文檔編號A61P35/00GK103172507SQ20111043175
公開日2013年6月26日 申請日期2011年12月21日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月21日
發(fā)明者劉宏偉, 張立新, 王全新, 郭良棟 申請人:中國科學(xué)院微生物研究所