專利名稱：一種含有倍半萜葡萄糖苷和黃酮類成分組合物的制備的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥材的提取物及該提取物的制備方法，特別涉及一種短葶山麥冬須根的提取物及該提取物的制備方法。
背景技術(shù)：
短葶山麥冬來源為百合科山麥冬屬植物短葶山麥冬Liriope muscari (Decn.) Baily的干燥塊根。短葶山麥冬喜溫暖氣候、較潮濕和蔭蔽的環(huán)境，野生于海拔2000m以下的坡陰濕處，常在有闊葉林的山間分布得較多，針葉林地則很少。在我國分布于主要分布于福建泉州市洛江區(qū)及莆田市仙游縣等地，具有養(yǎng)陰生津、潤肺清心的功效，用于治療肺燥干咳，陰虛癆嗽，喉痹咽痛，津傷口渴，心煩失眠，腸燥便秘。傳統(tǒng)上一般以短葶山麥冬的塊根入藥，而塊根上連帶的大量須根在山麥冬藥材采集時作為廢物被棄用。但是據(jù)我們的研究發(fā)現(xiàn)須根中也含有大量的有效成分，并且須根中的有效成分含量較塊根中高。因此，為了開發(fā)新的藥用資源，我們發(fā)明了從短葶山麥冬須根中制備倍半萜葡萄糖苷和黃酮類成分的方法，希望能廢物利用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明人在對短葶山麥冬須根中的倍半萜葡萄糖苷和黃酮類提取物進行研究中， 發(fā)現(xiàn)所得到的含有倍半萜葡萄糖苷和黃酮類提取物，因而完成了本發(fā)明的內(nèi)容。本發(fā)明提供了一種來自短葶山麥冬須根中的倍半萜葡萄糖苷和黃酮類成分提取物，其中至少含有倍半萜葡萄糖苷成分，該提取物中倍半萜葡萄糖苷的含量以重量百分?jǐn)?shù)計至少不低于5 %，優(yōu)選30 %，但不超過80 %。本發(fā)明還提供了來自短葶山麥冬須根的上述提取物的提取方法，以得到倍半萜葡萄糖苷和黃酮類成分提取物。根據(jù)本發(fā)明提供的倍半萜葡萄糖苷和黃酮類提取物，其中至少含有倍半萜葡萄糖苷，每克提取物中含有的倍半萜葡萄糖苷和黃酮類成分以倍半萜葡萄糖苷計不少于500毫克。尤其是，每克提取物中含有倍半萜葡萄糖苷不少于50毫克。本發(fā)明的提取物可以來自任何含有所述倍半萜葡萄糖苷和黃酮類成分的原料藥， 優(yōu)選來自短葶山麥冬須根原料藥中倍半萜葡萄糖苷和黃酮類成分。通過對成分的試驗摸索，本發(fā)明尤其提供了應(yīng)用大孔吸附樹脂和水飽和正丁醇的提取方法得到的短葶山麥冬須根提取物，具有比較高的倍半萜葡萄糖苷和黃酮類有效成分含量，并且保持了天然原料的成分。本發(fā)明所稱“倍半萜葡萄糖苷類”是指含有21個碳原子的化合物。根據(jù)前面所述，本發(fā)明的提取物來自短葶山麥冬須根，除含有倍半萜葡萄糖苷類成分外，還可以包括任何黃酮類部位。本發(fā)明的提取物可以是通過任何可行的方法得到，優(yōu)選地可以是采用大孔吸附樹脂吸附精制得到，使產(chǎn)物具有比較高的純度和收率。
本發(fā)明采用原料生藥，是未加工的短葶山麥冬須根生藥，可進行除去雜質(zhì)、清洗、 干燥等加工作為前期處理，提取方法如下短葶山麥冬須根藥材粉碎，加入生藥量6 10倍量的50 95%的甲醇或乙醇進行浸漬或加熱回流提取1 3次；合并提取液，減壓回收溶劑；將得到的濃縮液注入大孔吸附樹脂柱，先用4 8倍量柱體積的純凈水洗脫至無糖反應(yīng)，然后用4 10倍量柱體積 10% 50%溶劑洗脫至無皂苷反應(yīng)，再用4 10倍量柱體積30% 95%溶劑洗脫，優(yōu)選 80% 95%濃度洗脫，合并洗脫液，減壓回收溶劑，用水飽和正丁醇進行萃取，萃取液濃縮， 干燥，得到化合物倍半萜葡萄糖苷和黃酮類成分為主的組分。結(jié)構(gòu)鑒定倍半萜葡萄糖苷類化合物1 1β，6β-二羥基-cis-桉-3-烯-6-0-i3_D-吡喃葡萄糖苷。白色粉末，mp 169-171 °C。易溶于甲醇等極性溶劑。ESI-MS (m/z)譜給出 423 (M+Na+)分子離子峰，推斷分子量為400。1H-NMR(DMSO-CI6)譜中，高場區(qū)給出兩個雙峰形式的甲基質(zhì)子信號δ 0. 91 (3Η，d， J = 6. 5Ηζ)，δ 0. 85 (3H，d，J = 6.0Hz)和兩個單峰形式的甲基質(zhì)子信號δ 1.64(3H, s)， δ 1. 10 (3Η，s) ； δ 5. 19 (br. s)為烯氫信號，δ 4. 23 (1Η，d，J = 7. 7Hz)為葡萄糖端基質(zhì)子信號，為-0- β -D構(gòu)型，δ 3. 67 4. 24處，給出多個H，為葡萄糖中H質(zhì)子信號。13C-NMR(DMS0-d6)譜中共出現(xiàn)21個碳原子，提示可能為倍半萜葡萄糖苷類。 δ 105. 30(C-1，) ,77. 47(C_5，),77. 05(C_3，), 74. 90(C_2，) ,71. 90(C_4，) ,61. 85(C_6，)。 δ 133. 55、120. 09為雙鍵上的碳信號。綜合以上分析，得出其分子式為C21H36O7，參考文獻(xiàn)[1]，確認(rèn)此化合物結(jié)構(gòu)如

圖1所示，為1 β，6 β - 二羥基-Cis-桉-3-烯-6-0- β -D-吡喃葡萄糖苷?；衔? 1 β，6 α - 二羥基-cis-桉_3_烯-6_0_ β β -D-吡喃葡萄糖苷。白色粉末，易溶于甲醇等極性溶劑。ESI-MS (m/z)譜給出423 (Μ+Na+)分子離子峰， 推斷分子量為400。在1H-NMR(DMSO-CI6)譜中，高場區(qū)給出兩個雙峰形式的甲基質(zhì)子信號δ 0. 95 (3Η， d，J = 6. 5Hz)，δ 0· 87 (3Η，d，J = 6. OHz)和兩個單峰形式的甲基質(zhì)子信號δ 1. 79 (3Η，s)， δ 0. 86 (3Η，s) ； δ 5. 08 (br. s)為烯氫信號；δ 4. 25 (1Η，d，J = 7. OHz)為葡萄糖端基質(zhì)子信號，為-Ο-β-D構(gòu)型，δ 2. 86 3. 10處，給出多個H，為葡萄糖中H質(zhì)子信號。13C-NMR(DMS0-d6)譜中共出現(xiàn)21個碳原子，δ 60 80處有7個碳，δ 102. 50為糖的端基碳原子，進一步說明化合物可能為倍半萜葡萄糖苷類。S 135. 53、118.42為雙鍵上的碳信號。ROESY譜中，Me-14 β與Η_5 β，Η_6 β與Η_5 β有相關(guān)點，推斷該化合物的相對構(gòu)型為1 β，6 α - 二羥基-cis-桉-3-烯-6-0- α -D-吡喃葡萄糖苷。綜合以上分析，得出其分子式為C21H36O7，參考文獻(xiàn)[2]，確認(rèn)此化合物結(jié)構(gòu)如圖1所示，為1 β，6 α - 二羥基-cis-桉-3-烯-6-0- β -D-吡喃葡萄糖苷?；衔? 1，4-環(huán)氧-cis-桉-6-0-β-D-吡喃葡萄糖苷。白色粉末，易溶于甲醇等極性溶劑。ESI-MS (m/z)譜給出423 (Μ+Na+)分子離子峰， 推斷分子量為400。
在1H-WR (DMSO-Cl6)譜中，δ 0. 89 (3Η, d, J = 6. OHz), δ 0. 87 (3Η, d, J = 6. OHz)和 δ 1.85(lH，m)是異丙基上質(zhì)子信號；δ 1.40(3H,s), δ 1.06(3H,s)是以兩個單峰形式的甲基質(zhì)子信號；S 4. 19(lH，d，J = 7. 7Hz)為葡萄糖端基質(zhì)子信號，為_0_ β-D構(gòu)型，δ 3. 01 3. 70處，給出多個H，為葡萄糖中H質(zhì)子信號。13C-NMR (DMS0-d6)譜中共出現(xiàn)21個碳原子，提示可能為倍半萜葡萄糖苷類。 δ 102. 76(C-1，) ,77. 44(C_5，),77. 16(C_3，), 74. 46 (C~2' ),70. 65(C_4，) ,61. 72(C_6，)。 δ 87. 66,85. 47,76. 21為與氧相連的碳，但該化合物苷元部分中只含有2個氧原子，提示分子式中可能存在一個氧橋。與已知化合物[1]對比，C-I和C-4的化學(xué)位移均向低場移動，說明C-I和C-4之間形成氧橋。 依據(jù)H-H cosy譜、HSQC譜及HMBC譜，歸屬該化合物的氫譜和碳譜數(shù)據(jù)。綜合以上分析，參考文獻(xiàn)[1]，得出其分子式為C21H36O7,確認(rèn)此化合物結(jié)構(gòu)如圖3所示，為1，4-環(huán)氧-Cis-桉-6-0- β -D-吡喃葡萄糖苷，經(jīng)檢索文獻(xiàn)，未見相關(guān)報道，化合物3 為一新化合物?；衔? 1 α，6 β - 二羥基 _5，lO-bis-印i_ 桉 _4 (15)烯-6-0- β -D-吡喃葡萄糖苷。白色粉末，易溶于甲醇等極性溶劑。ESI-MS (m/z)譜給出423 (Μ+Na+)分子離子峰， 推斷分子量為400。在1H-WR (DMS0-d6)譜中，δ 1. 07 (3Η, d, J = 6. 4Hz)，δ 0. 98 (3Η, d, J = 6. 4Hz) 和δ 2. 25 (1Η，br. s)是異丙基上質(zhì)子信號；δ 0. 99 (3Η，s)是以單峰形式的甲基質(zhì)子信號； δ 4. 61 (1Η，d，J = 7. 7Hz)為葡萄糖端基質(zhì)子信號，為_0_β -D構(gòu)型。13C-NMR (DMS0-d6)譜中共出現(xiàn)21個碳原子，提示可能為倍半萜葡萄+糖苷類?；衔?與化合物2的區(qū)別在于雙鍵的位置不同，即C-4和C-15之間形成雙鍵。 δ 100. 39(C-1，) ,76. 50(C_5，), 75. 60(C_3，), 74. 92(C_2，), 70. 67 (C-4 ‘ ) ,61. 76(C_6，)。綜合以上分析，參考已知化合物[3]，得出其分子式為C21H36O7,確認(rèn)此化合物結(jié)構(gòu)如圖1所示，為1 α，6 β - 二羥基-5，10-bis-epi-桉_4 (15)烯-6-0- β -D-吡喃葡萄糖苷，化合物4首次從短葶山麥冬植物中分離得到。Table INMR data for compounds l，2，3and 4( δ in DMS0_d6)
權(quán)利要求
1.倍半萜葡萄糖苷和黃酮類提取物，其特征在于所述提取物至少含有倍半萜葡萄糖苷，每克提取物中含有的倍半萜葡萄糖苷和黃酮類成分以倍半萜葡萄糖苷計不少于500毫克。
2.如權(quán)利要求1所述的倍半萜葡萄糖苷和黃酮類提取物，其中，每克提取物中含有倍半萜葡萄糖苷不少于300毫克。
3.如權(quán)利要求2所述的提取物，其中含有倍半萜葡萄糖苷和黃酮類提取物來自短葶山麥冬須根原料藥。
4.如權(quán)利要求1-3中任一項所述的倍半萜葡萄糖苷和黃酮類提取物的制備方法，其特征在于該方法為取短葶山麥冬須根，加入生藥量6 10倍量的50 95%的甲醇或乙醇進行浸漬或加熱回流提取1 3次；合并提取液，減壓回收溶劑；將得到的濃縮液注入大孔吸附樹脂柱，先用4 8倍量柱體積的純凈水洗脫至無糖反應(yīng)，然后用4 10倍量柱體積 10% 50%醇溶劑洗脫至無皂苷反應(yīng)，再用4 10倍量柱體積30% 95%醇溶劑洗脫至無倍半萜葡萄糖苷和黃酮類反應(yīng)，合并洗脫液，減壓回收溶劑，用水飽和正丁醇進行萃取， 萃取液濃縮，干燥，粉碎。
5.如權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于該方法為取短葶山麥冬須根，加入生藥量10倍量的50%的乙醇加熱回流提取2小時，濾過，濾液備用；殘渣再加8倍量的50%的乙醇加熱回流提取兩次，每次1小時，濾過，合并三次濾液，減壓濃縮，濃縮液放置至室溫， 注入AB-8大孔吸附樹脂柱，先用8倍柱體積的純凈水洗脫至無糖反應(yīng)，然后用10倍量柱體積50%乙醇洗脫至無皂苷反應(yīng)，再用10倍柱體積的90%乙醇洗脫，合并洗脫液，減壓回收溶劑，用水飽和正丁醇進行萃取，萃取液濃縮，干燥，粉碎。
6.如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于該方法為取短葶山麥冬須根，加入生藥量8倍量的80%的乙醇加熱回流提取2小時，濾過，濾液備用；殘渣再加6倍量的80%的乙醇加熱回流提取兩次，每次1小時，濾過，合并三次濾液，減壓濃縮至相對密度為1. 25 1. 30，濃縮液放置至室溫，注入AB-8大孔吸附樹脂柱，先用6倍柱體積的純凈水洗脫至無糖反應(yīng)，然后用8倍量柱體積50%乙醇洗脫至無皂苷反應(yīng)，再用6倍柱體積的80%乙醇洗脫， 合并洗脫液，減壓回收溶劑，用水飽和正丁醇進行萃取，萃取液濃縮，干燥，粉碎即得。
7.如權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其中倍半萜葡萄糖苷和黃酮類提取物的重量比例至少不低于10%。
8.如權(quán)利要求7或8所述的藥物組合物，其中倍半萜葡萄糖苷和黃酮類提取物的重量比例為10% 95%。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種來自短葶山麥冬須根中倍半萜葡萄糖苷和黃酮類提取物以及該提取物的制備方法。其制備方法為短葶山麥冬須根用一定濃度的醇溶劑提取，回收提取溶劑并濃縮至一定的相對密度，通過大孔吸附樹脂，先用水洗脫至無糖反應(yīng)，然后用低濃度的醇溶劑洗脫至無皂苷反應(yīng)，再用較高濃度的醇溶劑進行洗脫，合并洗脫液，減壓回收溶劑，用水飽和正丁醇進行萃取，萃取液濃縮，干燥，粉碎而得。本發(fā)明的提取方法簡單實用，提純效果良好；本發(fā)明可利用廢物短葶山麥冬須根、節(jié)約資源，成本低廉。
文檔編號A61P1/10GK102380034SQ20111033873
公開日2012年3月21日 申請日期2011年11月1日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月1日
發(fā)明者劉子沐, 張海鳴, 杜樹山, 林瑞超, 王剛力, 王成芳, 費超 申請人:北京師范大學(xué)