專利名稱：蛋白酶抑制劑樣品采集系統(tǒng)的制作方法
蛋白酶抑制劑樣品采集系統(tǒng)本申請要求申請日為2002年5月13日的美國臨時專利申請流水號60/379，399 的優(yōu)先權(quán)。本發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及用于直接從患者體內(nèi)采集和穩(wěn)定生物學(xué)樣品，特別是采集全血樣品的方法和裝置。更具體地講，本發(fā)明涉及其中裝有穩(wěn)定添加劑的樣品采集容器，用于在采集生物學(xué)樣品時立即穩(wěn)定蛋白酶，并且用于在樣品保存期間抑制蛋白降解和/或分解。本
背景技術(shù)：
在臨床診斷措施中，經(jīng)常需要在各種容器或試管中采集諸如全血，紅血細(xì)胞濃縮物，血小板濃縮物，白細(xì)胞濃縮物，組織，骨髓吸出物，血漿，血清，腦脊液，糞便，尿液，培養(yǎng)的細(xì)胞，唾液，口腔分泌物，和鼻腔分泌物等的生物學(xué)樣品，以便隨后進(jìn)行測試和分析。通常，所述樣品隨后必須轉(zhuǎn)移到不同的地方，如實(shí)驗(yàn)室，在這里，由員工對所述樣品進(jìn)行特定測試。一般，在獲得樣品和對它進(jìn)行分析之間具有很大的時間跨度。因此，常見的和重復(fù)發(fā)生的問題是，以合適的方式保持所述生物學(xué)樣品，以便在作為測試樣本對所述生物學(xué)樣品進(jìn)行分析之前，防止在操作和/或制備期間重要材料的降解、改變或分解。所有細(xì)胞都包括多種蛋白酶，并且只要所述細(xì)胞是完整的，這些蛋白酶就不會破壞細(xì)胞成分。不過，一旦細(xì)胞被冷凍，破壞或分裂，蛋白酶就開始與細(xì)胞蛋白發(fā)生非專一性反應(yīng)，從而很快降解細(xì)胞蛋白。在蛋白分離中，這有可能導(dǎo)致降解的或分解的蛋白。這還有可能導(dǎo)致在生物學(xué)樣品的儲存和運(yùn)輸期間蛋白水平的下降，從而限制了測試方法的靈敏度。因此，蛋白產(chǎn)量可能急劇降低，并且可能不利于所有進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)，例如，蛋白定量，蛋白的2-D凝膠作圖，藥物開發(fā)，Western印跡，報(bào)道基因分析，免疫沉淀，表位標(biāo)記，特殊蛋白活性測定等。很久以前就已經(jīng)認(rèn)識到，在將體液樣品作為測試樣本進(jìn)行分析之前，必須在操作和/或制備期間對所述樣品進(jìn)行保持和保護(hù)。為了在制備階段保持測試樣品的細(xì)胞級份或非細(xì)胞成分的穩(wěn)定性，業(yè)已開發(fā)了多種不同的組合物。例如，所述組合物包括使用諸如 ATP的水溶性磷酸鹽，以及螯合劑保存完整細(xì)胞和細(xì)胞成分(公開號EP 431385-A)；將酸， 抗細(xì)菌藥物，和含氟化合物組合用于穩(wěn)定尿液中的細(xì)胞(日本專利公開號05M9104-A)； 將乙醇，脂族二醇和聚乙二醇的水溶液用于保護(hù)細(xì)胞和血液成分(日本專利公開號 03295465-A)；用于生物學(xué)測定的試劑組合物，它包括可還原的水溶性三價鈷復(fù)合物，可金屬絡(luò)合染料，和水溶性聚合物(美國專利號5，171，669)；用于測定尿液樣品中的尿膽素原的穩(wěn)定性控制溶液(美國專利號4，677，075和4，703，01 ；將含有磷酸緩沖液，白蛋白，甘氨酸，和半胱氨酸的水溶液用于穩(wěn)定脫氫酶(德國專利公開號DE^^9808-A)；用于穩(wěn)定冷凍干燥蛋白組合物的緩沖液，丙氨酸和甘露糖醇的穩(wěn)定組合物(公開號EP6^944-A1)；以及將水溶液中的陽離子聚電解質(zhì)和環(huán)polyiol用于穩(wěn)定蛋白，以防在干燥時變性(美國專利號5，240, 843)。業(yè)已商業(yè)化生產(chǎn)和銷售了多種穩(wěn)定制劑，著名的例子是在從動物和植物組織中提取期間用于抑制蛋白酶的COMPLETED 蛋白酶抑制劑混合物片劑。盡管穩(wěn)定制劑和組合物業(yè)已開發(fā)并且商業(yè)銷售，但其中的絕大多數(shù)因?yàn)樗鼈兊目?br> 4用性和效力是十分有限的，并且針對特殊的臨床問題和多種不同的臨床和分析措施，必須對它們進(jìn)行重大改進(jìn)和改變。例如，所述組合物不能夠穩(wěn)定樣品中的蛋白酶，因此不能保護(hù)生物學(xué)樣品中的敏感蛋白。在血液采集領(lǐng)域，在離心將血液分離成細(xì)胞層之前，常用于血液樣品中的常見添加劑是抗凝固添加劑。通常，所述抗凝固添加劑是檸檬酸或肝素的緩沖水溶液。裝有抗凝固劑的血液采集試管是商業(yè)化生產(chǎn)和銷售的。在授予Smith等的美國專利號5，667，963中披露了這種試管的一種例子。業(yè)已嘗試通過向樣品中添加EDTA和/或蛋白裂解抑制劑阻止肽的降解。例如，美國專利號5，541, 116披露了將兩種蛋白酶抑制劑anastatin和亮肽素與EDTA組合用于穩(wěn)定全血，血清或血漿樣品中的肽。不過，該專利披露了通過在獲得樣品之后或在采集之后被冷凍的樣品被解凍之后向所述樣品中添加適量的穩(wěn)定組合物。另外，已知在某些實(shí)驗(yàn)室研究proteomics中，將蛋白酶抑制劑混合物人工吸入注射器，并且隨后注射到血液采集試管中。不過，這種方法是危險(xiǎn)的，因?yàn)橛锌赡馨l(fā)生針頭刺破損傷。另外，蛋白酶抑制劑混合物的體積會在不同技術(shù)人員之間發(fā)生波動，這是因?yàn)閷⒌鞍酌敢种苿┗旌衔镅b載到所述試管中的人工方法所致。蛋白酶抑制混合物，即蛋白酶抑制劑的組合的工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化問題同樣是重要的。首先，不同的公司和不同的研究人員將多種蛋白酶抑制劑導(dǎo)入采集的樣品，特別是血液或血液成分中。所述蛋白酶抑制劑以及它們的組合的效果和性能差異顯然還沒有進(jìn)行充分研究，因此，要想將一個研究者的分析結(jié)果與另一個研究者的分析結(jié)果關(guān)聯(lián)在一起是極其困難的。例如，對于業(yè)已導(dǎo)入了由Sigma-Aldrich公司提供的蛋白酶抑制劑混合物的血液來說，2-D凝膠能夠提供特定類型的信息，而對于導(dǎo)入了由Becton，Dickinson and Company或由Hoffmarm-La Roche, Inc.提供的蛋白酶抑制劑混合物的血液來說，能夠提供不同類型的信息。另外，大部分蛋白酶抑制劑的毒性在中等毒性至劇毒性之間變化。目前，對這些毒素的潛在的接觸還沒有控制和/或限制，因此使保健和實(shí)驗(yàn)室工作者的安全受到威脅。為了分離和純化蛋白，必須采取措施來抑制內(nèi)源蛋白酶。還必須采取會導(dǎo)致工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化的措施。因此，本行業(yè)對血液和其他生物學(xué)樣品的采集的改進(jìn)的方法和采集裝置一直存在需求，所述方法和裝置能夠保護(hù)出現(xiàn)在所述生物學(xué)樣品中的蛋白。發(fā)明概述出人意料的是，現(xiàn)在業(yè)已發(fā)現(xiàn)，從患者體內(nèi)采集生物學(xué)樣品，并且將所述樣品導(dǎo)入裝有穩(wěn)定劑的容器中，能夠有效保持蛋白含量和組成。在立即要與生物學(xué)樣品接觸的采集裝置中添加穩(wěn)定劑，能明顯抑制蛋白的降解和/或分解，這種現(xiàn)象有可能出現(xiàn)在采集樣品的時間和添加穩(wěn)定劑的時間之間。其結(jié)果是，大大提高了完整蛋白的百分比。因此，本發(fā)明涉及用于采集生物學(xué)樣品的方法和裝置。更具體地講，本發(fā)明涉及采集容器并且涉及采集生物學(xué)樣品的方法，該方法包括讓所述樣品立即與穩(wěn)定添加劑接觸， 以便抑制內(nèi)源蛋白酶，從而分離和純化蛋白。本發(fā)明的穩(wěn)定劑是合適的制劑，它能夠抑制， 阻止或減少在生物學(xué)樣品儲存期間的蛋白降解和/或分解。因此，本發(fā)明的主要方面是提供用于在存在能夠抑制內(nèi)源蛋白酶的穩(wěn)定劑的情況下直接從患者體內(nèi)采集生物學(xué)樣品的方法和裝置，以便分離和純化蛋白。所述穩(wěn)定添加劑是以能夠穩(wěn)定所述生物學(xué)樣品并且抑制內(nèi)源蛋白酶的有效量添加的，以便分離和純化蛋白。理想的是，所述樣品是全血或血液成分；不過，所述樣品可以是任何含有蛋白的樣品。本發(fā)明的一個方面是制備在室溫下能長時間保持穩(wěn)定的少有或沒有蛋白降解或分解的生物學(xué)樣品。因此，提供了用于在室溫下能長時間保持穩(wěn)定，在儲存期間少有或沒有蛋白降解或分解發(fā)生的生物學(xué)樣品的方法。本發(fā)明的另一方面是提供用于抑制生物學(xué)樣品中的蛋白降解或分解的方法和裝置。本發(fā)明的另一方面是提供用于接收和采集生物學(xué)樣品的采集容器，其中，所述容器事先用一定數(shù)量的穩(wěn)定劑進(jìn)行預(yù)先密封。所述穩(wěn)定劑能夠以任何形式，例如液體，液體或固體氣溶膠，小球，粉末或凝膠形式提供到所述容器的任意表面。本發(fā)明的另一方面是提供用于在從患者體內(nèi)采集之后立即穩(wěn)定生物學(xué)樣品，特別是全血或其成分的方法，以便在各種溫度下保存所述樣品時抑制或阻止蛋白的降解或分解。本發(fā)明的另一方面是提供添加了有效量的穩(wěn)定劑的抽真空的容器，其中，所述容器的內(nèi)部壓力低到足以將預(yù)定體積的生物學(xué)樣品吸入該容器。本發(fā)明的另一方面提供了血液采集容器，用于采集一定量的血液，并且用于在采集點(diǎn)將所述血液與穩(wěn)定劑混合，以便產(chǎn)生能阻制蛋白降解或分解的穩(wěn)定的血液樣品，從而能夠在隨后的時間對所述樣品中的蛋白進(jìn)行分離和純化。通過提供用于采集生物學(xué)樣品的裝置，基本上實(shí)現(xiàn)了本發(fā)明的以上目的。所述裝置總體上包括一個容器，它包括至少一個內(nèi)壁，由它形成一個儲庫部分，用于容納一定體積的生物學(xué)樣品，并且包括至少一個與所述儲庫部分連通的開口。所述容器包括至少一種穩(wěn)定劑，穩(wěn)定劑的用量能有效保護(hù)所述生物學(xué)樣品，并且阻止或抑制蛋白的降解或分解。在采集所述樣品之前，所述容器優(yōu)選用所述穩(wěn)定劑進(jìn)行預(yù)處理。通過提供制備穩(wěn)定的生物學(xué)樣品的方法，還可實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的所述目的，該方法包括提供樣品采集容器。理想的是，所述容器具有至少一個側(cè)壁和底部，形成一個內(nèi)部腔室， 其中，該容器的內(nèi)部腔室包括至少一種穩(wěn)定劑，該穩(wěn)定劑的使用量足以阻止或抑制蛋白的降解或分解，并且保護(hù)生物學(xué)樣品。獲得生物學(xué)樣品，并且將所述生物學(xué)樣品與所述穩(wěn)定劑混合，以便形成穩(wěn)定化的生物學(xué)樣品。在一種實(shí)施方案中，將所述樣品直接導(dǎo)入包括至少一種穩(wěn)定劑的容器中。本發(fā)明的以上目的還可以通過提供采集和穩(wěn)定全血樣品的方法實(shí)現(xiàn)，該方法包括提供樣品采集容器，它具有至少一個側(cè)壁和底部，形成內(nèi)部腔室。該容器裝填了有效量的穩(wěn)定劑，以便穩(wěn)定全血樣品中的蛋白。所述內(nèi)部腔室中的壓力優(yōu)選低于大氣壓力。將來自患者的全血樣品直接采集到所述采集容器中，并且將所述血液樣品與所述穩(wěn)定劑混合，以便形成穩(wěn)定的全血樣品。當(dāng)所述生物學(xué)樣品被吸入到所述采集裝置中時，它能立即接觸所述穩(wěn)定劑，并且保護(hù)蛋白分析物的過程在導(dǎo)入樣品時立即開始。本發(fā)明的方法和采集裝置具有若干獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)。該采集裝置的一個優(yōu)點(diǎn)是提供了一種系統(tǒng)，優(yōu)選封閉系統(tǒng)，它包括所述穩(wěn)定劑，并且能夠保護(hù)所述樣品受到破壞。另一個優(yōu)點(diǎn)是可以減少人工生產(chǎn)所述采集裝置的勞動力。另一個優(yōu)點(diǎn)是用常規(guī)生產(chǎn)線生產(chǎn)所述采集裝置，以便可以對所述產(chǎn)品實(shí)施質(zhì)量控制措施和方法。另一個優(yōu)點(diǎn)是所述采集裝置的標(biāo)準(zhǔn)化，其中，目前還沒有行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，并且，本行業(yè)正在呼吁這樣的標(biāo)準(zhǔn)化。另外，通過保護(hù)能夠提高蛋白研究和分析的相關(guān)性，并且能夠以盡可能地接近活體狀態(tài)的狀態(tài)表征和研究蛋白。通過本發(fā)明的以下詳細(xì)說明，特別是結(jié)合附圖閱讀這些說明，能夠更好地理解本發(fā)明的上述方面，優(yōu)點(diǎn)和其他潛在特征。附圖的簡要說明

圖1是典型的血液采集管的透視圖。圖2檢測板的透視圖。圖3a是樣品采集組件的透視圖，而圖北是所述樣品采集組件的剖視圖。圖4是注射器的縱剖視圖。圖5是注射器的另一種實(shí)施方案的縱剖視圖。圖6a是導(dǎo)管組件的側(cè)視圖，而圖6b是所述導(dǎo)管的部分側(cè)視圖。圖7是吸液管的透視圖。圖8是表示血液采集袋的透視圖。發(fā)明的詳細(xì)說明盡管本發(fā)明能夠通過多種不同形式的實(shí)施方案實(shí)現(xiàn)，這里將詳細(xì)披露本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，應(yīng)當(dāng)將本說明書視為本發(fā)明原理的典范，而不要將本發(fā)明局限于所示出的和說明的實(shí)施方案。在不超出本發(fā)明構(gòu)思的前提下，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以進(jìn)行各種改變。本發(fā)明的范圍是由所附權(quán)利要求書及其等同物所確定的。本發(fā)明涉及用于穩(wěn)定生物學(xué)樣品，以便能夠更好地分離和純化蛋白的方法和裝置。更具體地講，本發(fā)明涉及用于在儲存期間抑制生物學(xué)樣品中蛋白降解和/或分解的方法和裝置。根據(jù)本發(fā)明，所述裝置包括裝有一定量的穩(wěn)定劑的容器，用于在采集所述樣品時立即與生物學(xué)樣品混合。另外，根據(jù)本發(fā)明，所述方法包括提供裝有穩(wěn)定劑的樣品采集容器，所述穩(wěn)定劑的量足以阻止或抑制蛋白的降解和/或分解，并且包括向所述容器中添加生物學(xué)樣品。盡管本發(fā)明可以使用任何含有蛋白的生物學(xué)樣品，但優(yōu)選的生物學(xué)樣品是從患者體內(nèi)抽取的任何體液。最優(yōu)選的是，所述生物學(xué)樣品是全血或其成分。其他生物學(xué)樣品的例子包括含有細(xì)胞的組合物，如血液紅細(xì)胞濃縮物，血小板濃縮物，白細(xì)胞濃縮物，血漿，血清，尿液，骨髓吸出物，腦脊液，組織，細(xì)胞，糞便，唾液和口腔分泌液，鼻腔分泌物，和淋巴液寸。本發(fā)明的樣品采集系統(tǒng)可以包括任何采集裝置，這些裝置包括但不限于管子，如試管和離心管；封閉系統(tǒng)血液采集裝置，如采集袋；注射器，特別是預(yù)先填充的注射器；導(dǎo)管；微量滴定板和其他多孔平板；陣列；管類；實(shí)驗(yàn)室容器，如燒瓶，旋轉(zhuǎn)燒瓶，滾瓶，小瓶， 顯微鏡載玻片，顯微鏡載玻片組件，蓋玻片，薄膜和多孔基質(zhì)和組件；吸液管和吸液管頭等； 組織和其他生物學(xué)樣品采集容器；以及任何其他適合容納生物學(xué)樣品的容器，以及與轉(zhuǎn)移樣品相關(guān)的容器和部件。在本發(fā)明的特別理想的方面，樣品采集管使用了具有用于分離血液成分的分離部件(例如，機(jī)械分離部件或凝膠)。在以上方面，所述管的內(nèi)部和/或所述分離部件的外部可以用所述穩(wěn)定劑處理。根據(jù)本發(fā)明，所述采集裝置裝有用于穩(wěn)定所述生物學(xué)樣品的穩(wěn)定劑。通常將塑料或玻璃用于生產(chǎn)本發(fā)明的采集裝置。用于生產(chǎn)所述采集裝置的某些優(yōu)選的材料包括聚丙烯，聚乙烯，聚乙二醇對苯二甲酸酯，聚苯乙烯，聚碳酸酯和纖維素制品。 還可以使用更昂貴的塑料，如聚四氟乙烯和其他含氟的聚合物。除了上面所提到過的材料之外，用于本發(fā)明的采集裝置的其他合適材料的例子包括聚烯烴，聚酰胺，聚酯，硅酮，聚亞安酯，環(huán)氧樹脂類，丙烯酸樹脂，聚丙烯酸酯，聚砜，聚甲基丙烯酸酯，PEEK,聚酰亞胺和含氟聚合物，如PTFETef Ion ,FEPTefIon ,Tefzel ，聚偏二氟乙烯，pvdf和全氟烷氧基樹脂。包括硅玻璃的玻璃制品也可用于生產(chǎn)所述采集裝置。一種典型的玻璃制品是 PYREX (由Corning Glass公司提供，Corning，New York)。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，可以使用陶瓷采集裝置。還可以將諸如紙和強(qiáng)化紙容器的纖維素制品用于生產(chǎn)本發(fā)明的采集
直ο本發(fā)明的穩(wěn)定劑是能夠在生物學(xué)樣品儲存期間抑制蛋白酶(即蛋白酶)活性和蛋白降解的合適的制劑。所述制劑能穩(wěn)定所述生物學(xué)樣品，如血液樣品，以便生產(chǎn)穩(wěn)定的組合物，它能抑制或阻止存在于所述生物學(xué)樣品中的蛋白的降解和/或分解。根據(jù)本發(fā)明的一種實(shí)施方案，所述采集裝置是用所述穩(wěn)定劑預(yù)處理過的，優(yōu)選是由生產(chǎn)者預(yù)處理的，并且以可直接使用的形式包裝。通常，對包裝的采集裝置進(jìn)行消毒，并且同樣是用無菌包裝材料包裝的。本發(fā)明可以被醫(yī)藥公司，生物技術(shù)公司，合同研究機(jī)構(gòu)，大學(xué)研究人員，研究醫(yī)院和對研究蛋白感興趣的任何學(xué)院或個人所采用。本發(fā)明使得研究者能夠方便地和容易地保護(hù)并且處理蛋白樣品，以便進(jìn)行下游的分析。本發(fā)明的采集裝置可以作為前端樣品采集裝置，它針對的分析目標(biāo)包括，但不局限于以下所列蛋白庫，蛋白識別和表征，蛋白表達(dá)，蛋白定量，蛋白-蛋白相互作用，蛋白功能分析的開發(fā)，蛋白目標(biāo)發(fā)現(xiàn)和驗(yàn)證，預(yù)測性毒理學(xué)， 測定藥物作用，藥物驗(yàn)證，3-D蛋白結(jié)構(gòu)分析和計(jì)算機(jī)模擬。穩(wěn)定劑優(yōu)選包括或由至少一種蛋白酶抑制劑組成。合適的例子包括，但不局限于蛋白酶抑制劑，如絲氨酸蛋白酶，半胱氨酸蛋白酶，天冬氨酸蛋白酶，金屬蛋白酶，硫醇蛋白酶，和外肽酶等的抑制劑。其中，特別感興趣的是絲氨酸和半胱氨酸蛋白酶抑制劑，金屬蛋白酶抑制劑也是重要的。絲氨酸蛋白酶抑制劑的非限定性例子包括抗痛素，抑肽酶，抑糜酶素，彈性蛋白酶抑制劑，氟代苯甲基磺酰(PMSF)，APMSF，TLCK，TPCK，亮肽素和大豆胰蛋白酶抑制劑。例如半胱氨酸蛋白酶的抑制劑包括，IAA(吲哚乙酸)和E-64。天冬氨酸蛋白酶抑制劑的合適的例子包括抑胃肽和VdLPFFVdL。金屬蛋白酶抑制劑的非限定性例子包括 EDTA，以及1，10-二氮雜菲和膦酰二肽(phosphoramodon)。例如，外肽酶的抑制劑包括抑氨肽酶素，苯丁抑制素，雙肌球吸附蛋白(diprotirOA和雙肌球吸附蛋白B。蛋白酶抑制劑的其他合適的例子包括α-2-巨球蛋白，大豆或利馬豆胰蛋白酶抑制劑，胰蛋白酶抑制劑，卵白抑制素(ovostatin)和卵白半胱氨酸蛋白酶抑制劑。蛋白酶抑制劑的組合通常被所述抑制劑的商業(yè)提供者稱作"蛋白酶抑制劑混合物"，還可以將其用作穩(wěn)定劑。所述"蛋白酶抑制混合物"一般是有利的，即它們能提供對多種感興趣的蛋白的穩(wěn)定作用；因此，含有兩種以上蛋白酶抑制劑的穩(wěn)定劑一般是理想的。所述穩(wěn)定劑可以是任何合適形式的，包括，但不局限于溶液，懸浮液或其他液體， 丸，片劑，膠囊，噴霧干燥材料，冷凍干燥材料，粉末，顆粒，凝膠，結(jié)晶或低溫干燥材料。由于很多蛋白酶抑制劑的半衰期很短，優(yōu)選將所述穩(wěn)定劑以這種形式導(dǎo)入所述采集裝置，以便能夠優(yōu)化所述蛋白酶抑制劑的貨架壽命。冷凍干燥似乎是特別有用的，因?yàn)樗峁┝肆己玫姆€(wěn)定性，并且還能夠進(jìn)行隨后的消毒，這兩個條件從自動化和標(biāo)準(zhǔn)化角度考慮都是重要的。所述穩(wěn)定劑可位于所述采集裝置的任何表面上。所述穩(wěn)定劑還可以位于用于封閉所述裝置的塞子和密封裝置上，或位于放置在所述裝置中的機(jī)械，或其他插入部件上。所述穩(wěn)定劑優(yōu)選位于所述采集裝置的至少一種內(nèi)壁的任意地方，或位于所述儲庫部分內(nèi)的任何地方。另外，某些蛋白酶抑制劑具有光敏感性。因此，需要對所述穩(wěn)定劑實(shí)施蔽光。對于這樣的抑制劑來說，使用不透明的試管，例如，琥珀色試管是有利的。另外，將所述穩(wěn)定劑放入膠囊，例如以粉末形式放入膠囊，并且防止它接觸光照，然后將所述膠囊放入試管也可以解決這一問題。將所述制劑膠囊化還可以避免容器內(nèi)的制劑和其他成分的其他不希望的相互作用。在樣品采集時能溶解的膠囊材料為本領(lǐng)域所熟知?？梢酝ㄟ^多種方法中的任意一種將所述穩(wěn)定劑涂在所述采集裝置上。例如，可以在所述采集裝置的內(nèi)壁的表面上對所述穩(wěn)定劑進(jìn)行噴霧干燥，疏松地分配或冷凍干燥。另外，例如，凝膠或液體形式的穩(wěn)定劑可以放入所述采集裝置的儲庫部分。為所述采集裝置提供穩(wěn)定劑的其他方法也是可行的。通常，為了將需要數(shù)量的穩(wěn)定劑放入容器，人們重建固體形式的穩(wěn)定劑，然后將合適數(shù)量的液體分配到所述容器中?？梢詫⑺鲆后w噴霧干燥，沉積到所述容器的底部或者隨后冷凍干燥。穩(wěn)定劑的量和位置是由若干種變量確定的，包括使用形式，所使用的特定穩(wěn)定劑， 采集裝置的內(nèi)部體積和內(nèi)部壓力，以及被吸入該容器中的生物學(xué)樣品的體積。所述穩(wěn)定劑的濃度足以穩(wěn)定所述蛋白酶，并且阻止蛋白降解。每毫升樣本中穩(wěn)定劑的濃度取決于所使用的特定穩(wěn)定劑，為大約1-200 μ M，0. I-IOmM或0. 6-25 μ g。表I提供了合適蛋白酶抑制劑的非限定性例子，以及可以用作穩(wěn)定劑的每毫升樣本中它們的合適的濃度范圍。表 I
權(quán)利要求
1.一種用于采集和穩(wěn)定全血或其成分的滅菌和抽真空的試管，包括第一端，第二端和至少一個內(nèi)壁，形成用于接納所述血液的儲庫部分；其中抗凝固劑噴霧干燥在至少一個內(nèi)壁的至少一部分上；其中所述儲庫包含蛋白穩(wěn)定劑；所述蛋白穩(wěn)定劑包含至少兩種冷凍干燥的蛋白酶抑制劑，其中第一抑制劑是絲氨酸蛋白酶抑制劑，第二抑制劑是另一種類的蛋白酶抑制劑；和可用針頭刺破以向所述儲庫提供血液的密封裝置。
2.如權(quán)利要求1的試管，其中所述內(nèi)壁包括塑料或玻璃。
3.如權(quán)利要求1的試管，其中所述儲庫包括兩種以上冷凍干燥的蛋白酶抑制劑。
4.如權(quán)利要求1或3的試管，其中冷凍干燥的蛋白酶抑制劑包括至少兩種絲氨酸蛋白酶抑制劑和至少一種半胱氨酸蛋白酶抑制劑。
5.如權(quán)利要求1或3的試管，其中冷凍干燥的蛋白酶抑制劑包括至少一種絲氨酸蛋白酶抑制劑，至少一種半胱氨酸蛋白酶抑制劑和半胱氨酸/絲氨酸蛋白酶抑制劑。
6.如權(quán)利要求1或3的試管，其中冷凍干燥的蛋白酶抑制劑包括至少一種絲氨酸蛋白酶抑制劑，至少一種半胱氨酸蛋白酶抑制劑和至少一種半胱氨酸/絲氨酸蛋白酶抑制劑、 天冬氨酸蛋白酶抑制劑、金屬蛋白酶抑制劑，和外肽酶抑制劑。
7.如權(quán)利要求6的試管，其中所述絲氨酸蛋白酶抑制劑選自AEBSF、抑肽酶、抗凝血酶、彈性蛋白酶抑制劑、亮肽素、APMSF、DFP、胰蛋白酶及其混合物。
8.如權(quán)利要求7的試管，其中，所述絲氨酸蛋白酶抑制劑包括AEBSF、抑肽酶和亮肽素。
9.如權(quán)利要求7的試管，其中所述至少兩種冷凍干燥的蛋白酶抑制劑包括AEBSF，其在采集的血液或其成分中的全血體積中的濃度少于ImM。
10.如權(quán)利要求6的試管，其中所述半胱氨酸蛋白酶抑制劑是E-64。
11.如權(quán)利要求6的試管，其中所述半胱氨酸/絲氨酸蛋白酶抑制劑選自TPCK、 TLCK-HCl (L-1-氯-3-[4-甲苯磺酰氨基]_7_氨基-2-庚酮-HC1)、抗痛素-HCl及其混合物。
12.如權(quán)利要求6的試管，其中所述天冬氨酸蛋白酶抑制劑選自鈣激活中性蛋白酶、 N-乙酰-leu-leu-正亮氨酸、N-乙酰-leu-leu-甲硫氨酸、抑胃肽、VdPFFVdL及其混合物。
13.如權(quán)利要求6的試管，其中所述金屬蛋白酶抑制劑選自EDTA、1，10-二氮雜菲、膦酰二肽及其混合物。
14.如權(quán)利要求6的試管，其中所述外肽酶抑制劑選自抑氨肽酶素，苯丁抑制素，雙肌球吸附蛋白A、雙肌球吸附蛋白B及其混合物。
15.如權(quán)利要求1或3的試管，進(jìn)一步包括分離元件。
16.如權(quán)利要求15的試管，其中所述分離元件包括凝膠組合物。
17.如權(quán)利要求16的試管，其中所述凝膠組合物包括觸變凝膠。
18.如權(quán)利要求16的試管，其中所述凝膠組合物包含于膠囊中。
19.如權(quán)利要求15的試管，其中所述分離元件包括機(jī)械分離元件。
20.如權(quán)利要求1或3的試管，進(jìn)一步包括抗凝固劑。
21.如權(quán)利要求20的試管，其中所述抗凝固劑被噴霧干燥在所述試管的至少一部分內(nèi)壁上。
22.如權(quán)利要求20的試管，其中所述抗凝固劑包括EDTA或其鹽。
23.如權(quán)利要求20的試管，其中所述抗凝固劑包括肝素。
24.如權(quán)利要求1或3的試管，還包括采集的血液。
25.如權(quán)利要求1或3的試管，還包括全血的成分。
26.如權(quán)利要求25的試管，其中所述全血的成分包括血清或血漿。
全文摘要
本發(fā)明涉及蛋白酶抑制劑樣品采集系統(tǒng)。具體地，本發(fā)明涉及用于采集生物學(xué)樣品，特別是全血的采集容器和方法。所述采集容器包括能穩(wěn)定和抑制蛋白降解和/或分解的有效量的至少一種穩(wěn)定劑。所述穩(wěn)定劑能夠通過在儲存生物樣品時抑制樣品中的蛋白質(zhì)的降解和/或分解來穩(wěn)定生物學(xué)樣品，特別是在采血點(diǎn)生物學(xué)樣品中的蛋白酶。所述穩(wěn)定劑包括或由一種或多種蛋白酶抑制劑構(gòu)成。
文檔編號A61B5/154GK102353569SQ201110253579
公開日2012年2月15日 申請日期2003年5月13日 優(yōu)先權(quán)日2002年5月13日
發(fā)明者A·達(dá)斯塔尼, B·海伍德, F-C·林, T·史蒂文斯 申請人:貝克頓·迪金森公司