專利名稱：梓醇在制備治療缺血性腦卒中后遺癥藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明公開了ー種梓醇的新用途，具體是梓醇在制備治療缺血性腦卒中后遺癥藥物中的應(yīng)用，以及在制備改善缺血性腦卒中后遺癥神經(jīng)功能缺損癥狀藥物中的應(yīng)用，屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
缺血性腦卒中后遺癥是指患者急性腦梗塞發(fā)作經(jīng)治療存活后而遺留不同程度的偏癱、失語、意識輕度障礙等局灶性癥狀。腦卒中是危害人類生命和健康的常見病和多發(fā)病，全球每年約有1500萬腦卒中患者，其中缺血性腦卒中占有相當(dāng)大的比例(75%-85%)。在既往報道的大量缺血性腦卒中病例中，僅少數(shù)患者完全恢復(fù)，大多數(shù)患者殘留有不同程度的神經(jīng)功能障礙即后遺癥狀，主要表現(xiàn)為肢體運(yùn)動感覺功能障礙。缺血性腦卒中后遺癥
狀可伴隨患者持續(xù)加重直到死亡，給患者帶來了很大的痛苦，也給家庭造成了很大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。但是，迄今為止，缺血性腦卒中后遺癥尚無特殊的良效藥物治療，相對而言，中藥具有毒副作用小，適合長期服用，成本低的優(yōu)點(diǎn)。因此，發(fā)掘中醫(yī)藥寶庫，創(chuàng)新缺血性腦卒中后遺癥治療理論，尋找治療缺血性腦卒中后遺癥更為有效的中藥制劑，已經(jīng)倍受國內(nèi)外的關(guān)注。
故
於
梓醇化學(xué)結(jié)構(gòu)式梓醇是ー種環(huán)烯醚萜單糖苷類化合物，分子式C15H22010。梓醇廣泛分布于合瓣花亞綱、馬錢科醉魚草屬、玄參科泡梧屬及地黃屬、柴葳科樟屬、列當(dāng)科肉蓯蓉屬、車前科車前屬等植物中，來源及其豐富。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種梓醇的新用途，即梓醇在制備治療缺血性腦卒中后遺癥藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所說的梓醇的新用途，是梓醇在制備改善缺血性腦卒中后遺癥神經(jīng)功能缺損癥狀藥物中的應(yīng)用。根據(jù)上述的梓醇在制備治療缺血性腦卒中后遺癥、改善缺血性腦卒中后遺癥神經(jīng)功能缺損癥狀藥物中的應(yīng)用，梓醇具有減輕神經(jīng)元病理改變的作用。根據(jù)上述的梓醇在制備治療缺血性腦卒中后遺癥、改菩缺血性腦卒中后遺癥神經(jīng)功能缺損癥狀藥物中的應(yīng)用，梓醇具有改善腦組織中能量代謝障礙的作用。根據(jù)上述的梓醇在制備治療缺血性腦卒中后遺癥、改菩缺血性腦卒中后遺癥神經(jīng)功能缺損癥狀藥物中的應(yīng)用，其特征是梓醇在藥物中的含量為10-90 %。本發(fā)明在現(xiàn)有的腦缺血損傷認(rèn)識基礎(chǔ)上，對大鼠采用線栓法永久性腦缺血損傷大鼠模型，觀察梓醇對腦缺血損傷大鼠神經(jīng)缺損功能的影響、對神經(jīng)元存活、修復(fù)及結(jié)構(gòu)完整性的作用以及對大鼠腦能量代謝紊亂的影響。結(jié)果表明(I)對神經(jīng)功能缺損癥狀的影響梓醇給藥組可明顯的改善神經(jīng)缺損癥狀，明顯改善橫木行走能力、提高抓握力量(同模型組相比較，P < 0.05, P < 0. 01)，且作用明顯好于陽性對照藥天保寧，與依達(dá)拉奉作用相似，表明梓醇對永久性腦缺血損傷大鼠恢復(fù)早期具有神經(jīng)保護(hù)作用，能明顯的改善腦缺血神經(jīng)功能缺損癥狀，促進(jìn)受損的肢體運(yùn)動感覺功 能恢復(fù)；(2)對神經(jīng)元病理改變的影響梓醇給藥組能顯著増加缺血側(cè)皮層的完整神經(jīng)元細(xì)胞的數(shù)量，促進(jìn)神經(jīng)元尼氏小體的表達(dá)(同模型組相比較，p < 0. 05, p < 0. 01),上述作用與陽性對照藥依達(dá)拉奉相似，表明梓醇可不同程度的促進(jìn)神經(jīng)元存活、修復(fù)再生及其結(jié)構(gòu)完整性；(3)對能量代謝障礙的影響梓醇組能顯著降低腦組織或腦皮質(zhì)中乳酸的含量，明顯提高丙酮酸、Na+, K+-ATPase和Ca2+，Mg2+_ATPase的含量(同模型組相比較，p
<0. 05,p < 0. 01)，上述作用與陽性對照藥天保寧、依達(dá)拉奉相似，表明梓醇可以促進(jìn)永久性腦缺血損傷大鼠恢復(fù)早期能量代謝障礙的改善，增強(qiáng)能量及改善乳酸酸中毒癥狀。說明書附I腦缺血14天缺血側(cè)皮層HE染色(I 200)圖2腦缺血14天缺血側(cè)皮層尼氏小體表達(dá)(I 400)
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I對神經(jīng)功能缺損癥狀的影響1.1 目的采用線栓法永久性腦缺血損傷大鼠模型，觀察梓醇對腦缺血損傷大鼠神經(jīng)缺損功能的影響，以確定其是否具有促進(jìn)缺血性腦卒中后遺癥狀恢復(fù)的作用。I. 2試驗材料I. 2. I動物健康SD雄性大鼠，體重260_290g。I. 2. 2 藥物I. 2. 2. I 受試藥梓醇，白色或無色粉末，稱0. 3g粉末，用去離子水溶至100ml，灌胃給藥lml/100g體重。I. 2. 2. 2 陽性藥天保寧浙江康恩貝制藥股份有限公司生產(chǎn)，臨床每日用量為6片。配制方法取片劑7片，研磨成粉后用去離子水溶解定溶至100ml，灌胃給藥lml/100g體重。依達(dá)拉奉南京先聲藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，臨床每日用量為60mg。按照體重直接取相應(yīng)含量的注射液腹腔注射給藥即可。
I. 2. 3主要實(shí)驗儀器YLS-12A大小鼠抓カ測試儀，山東科學(xué)技術(shù)設(shè)備站生產(chǎn)。I. 3方法與結(jié)果I. 3. I大鼠大腦中動脈永久性局灶性缺血(pMCAO)模型的制備參照MCAO制作方法稍加改進(jìn)制作 大腦中動脈永久性局灶性缺血模型。大鼠用10%水合氯醛0. 35g/kg腹腔注射麻酔，分離右側(cè)頸總動脈、頸內(nèi)動脈及頸外動脈，于頸外動脈與頸內(nèi)動脈分叉處作一切ロ，從切ロ處插入頭端成圓球形的光滑釣魚尼龍線，插入深度18-19_左右，實(shí)現(xiàn)右側(cè)大腦中動脈阻塞導(dǎo)致腦缺血。結(jié)扎切ロ處，固定尼龍線，逐層縫合肌肉和皮膚，剪掉皮外的尼龍線，消毒。假手術(shù)組動物除不栓塞大腦中動脈外，余處理同缺血組。腦缺血過程中保持室溫25°C，常規(guī)分籠飼養(yǎng)。按照Zea Longa 5級評分法，大鼠清醒后評定無明顯神經(jīng)癥狀，0分；不能完全伸展左側(cè)前爪，I分；向左側(cè)旋轉(zhuǎn)，2分；行走時向左側(cè)傾倒，3分；不能自行行走，4分。1-3分大鼠入選后續(xù)實(shí)驗。I. 3. 2分組與給藥將神經(jīng)癥狀1-3分的大鼠分成模型組；梓醇組；天保寧陽性對照組；依達(dá)拉奉陽性對照組。以及假手術(shù)組。缺血后3d至14d灌胃給藥，依達(dá)拉奉組腹腔注射給藥，假手術(shù)組與模型組給予等量食用油灌胃和相應(yīng)生理鹽水腹腔注射，每天一次。I. 3. 3 方法I. 3. 3. I橫木行走實(shí)驗橫木行走實(shí)驗評價運(yùn)動的協(xié)調(diào)和整合缺損。橫木寬2. Ocm,長120cm,厚I. Ocm,距地面80cm水平懸空放置，橫木一端連接ー個暗盒，用噪音刺激大鼠通過橫木走進(jìn)暗盒。評分標(biāo)準(zhǔn)不能呆在橫木上，0分；能呆在橫木上但不能動，I分；試圖通過，但從橫木上摔下，2分；走上橫木，但損傷的后肢滑落次數(shù)超過50%，3分；超過I次但不到50%，4分；僅滑落I次，5分；順利通過，6分。術(shù)前訓(xùn)練5d，每天一次，讓所有大鼠評到6分為止。以缺血3、6、
9、12、14d為觀察時間點(diǎn)進(jìn)行檢測。I. 3. 3. 2抓握力量測試抓握力量測試評價抓握力量的大小。大鼠兩前肢抓住拉カ測試儀的拉カ橫桿，測試者左手先固定拉カ板，右手向后拉住鼠尾，松開左手，右手加力向后拉拽大鼠身體，大鼠為了不從橫桿滑脫會抓握橫桿不放，直至滑脫，讀取使大鼠滑脫的最大拉カ值，每只測2次，取最大值。以缺血3、6、9、12、14d為觀察時間點(diǎn)進(jìn)行檢測。I. 4 結(jié)果見表1_1、1_2、1_3，表 1_4、1_5、1_6。 表1-1梓醇對pMCAO模型大鼠神經(jīng)癥狀評分的影響(;土s)
組別 n 術(shù)后3天 n 術(shù)后6天n 術(shù)后9天 n 術(shù)后12天 n 術(shù)后14天
假手術(shù) 10 0±0 林10 0±0**10 0 土 0林 10 0±0**10 0±0 料
模型 14 1.29±0.61 12 I. 17±0.39 10 0.80土0.42 9 0.67±0.50 9 0.67±0.50梓醇 12 1.25±0.62 12 0.58±0.51** 11 0.73±0.47 10 0.50±0.53 10 0.20 + 0.42*天保寧 12 I. 17土0.39 11 0.82±0.40* 10 0.70±0.48 10 0.50±0.53 10 0.20土0.42*
注與模型組比較*p < 0. 05，**p < 0. 01。從表1-1可見，假手術(shù)組大鼠沒有神經(jīng)功能缺損表現(xiàn)，各缺血組大鼠神經(jīng)癥狀表現(xiàn)明顯，但隨著時間的延長而逐漸的自行恢復(fù)，而給藥組大鼠的神經(jīng)缺損的恢復(fù)速度明顯快于模型組，但在觀察期內(nèi)仍然有部分大鼠未能完全恢復(fù)到正常水平。術(shù)后6d和術(shù)后14d各給藥組與模型組比較均具有顯著性差異；術(shù)后12d時，各給藥組均未見明顯的改善神經(jīng)癥狀的作用，各給藥組與模型組比較均無顯著性差異，但可見不同程度的改善神經(jīng)缺損癥狀。表1-2梓醇對pMCAO模型大鼠橫木行走能力的影響(;±s)
組別 n 術(shù)后3天 n 術(shù)后6天 n 術(shù)后9天 n 術(shù)后12天 n術(shù)后14天·
假手術(shù) 10 6±0**10 6±0林10 6±0 林10 6±0林10 6±0**
模型 14 1.71±1.07 12 2.33±1.56 10 3.30±1.70 9 4. 11±1.27 9 4.67±1.41梓醇 12 2.08±1.16 12 4.42 ±0.90** 11 4.91±1.51*10 5.2±1.03* 10 5.80±0.63*天保寧 _12 _1.92±1.08_ 11 _3. 18±1.60_10 _ 4.20±1.93 _10 4.80±1.62 _10 _5.60±0.70*注與模型組比較*p < 0. 05，**p < 0. 01。從表1-2可見，假手術(shù)組大鼠橫木行走能力沒有變化，各缺血組大鼠橫木行走能カ隨著時間的延長而明顯改善，而給藥組大鼠的橫木行走能力的恢復(fù)速度明顯快于模型組，但在觀察期內(nèi)仍然有個別大鼠未完全恢復(fù)到正常水平。在術(shù)后6、9、12、14d，梓醇均能夠促進(jìn)大鼠行走能力的恢復(fù)，與模型組比較行走評分顯著提高，(P < 0. 05，p < 0. 01);天保寧組在術(shù)后14d表現(xiàn)出明顯的促進(jìn)橫木行走能力恢復(fù)的作用。表1-3梓醇對pMCAO模型大鼠抓握力量的影響(一x 士s)
組別 n術(shù)后3天 n術(shù)后6天 n術(shù)后9天 n術(shù)后12天 n術(shù)后14天
假手術(shù) 10 714. 7+63.9**10 777. 8土92. 8**10 829. 5±85. 8**10 829. 7±64. I** 10 890.2 + 111.6**模型 14 486.8 土 80.0 12 535.9±93.0 10 583. 6 ± 138. 4 9 615.0±95.2 9 661.8±74.9梓醇 12 489.0±91.3 12 599. 3±84. 2* 11 659. I ±116. 9 10 676. 5± 106. 2 10 764. 9 ± 114. 5*天保寧 12 452.0土88_ 8 11 589.3±112.5 10 628.7±149.5 10 689.8±136. 0 10 764.8±111. 0*注與模型組比較*p < 0. 05，**p < 0. 01。從表1-3可見，腦缺血后大鼠前肢的抓握力量顯著降低，缺血14d，與模型組比較，梓醇組，天保寧組能明顯增加大鼠的前肢抓握力量，p < 0.05, p < 0. 01。表1-4梓醇對pMCAO模型大鼠神經(jīng)癥狀評分的影響(S 士s)
組別n 術(shù)后3天術(shù)后7天術(shù)后10天術(shù)后14天
假手術(shù)100±0林0±0林0±0**0±0**
模型101.4±0.71.1±0.30.8±0.40.7±0.5
梓醇101.3土0.70.7土0.5*0.5±0.50.2±0.4*
依達(dá)拉奉 101.4±0. 70.8土0.4*0.4±0. 5*0.2土0.4*注與模型組比較*p < 0. 05，林p < 0. 01。
從表1-4可見，假手術(shù)組大鼠沒有神經(jīng)功能缺損表現(xiàn)，各缺血組大鼠神經(jīng)癥狀表現(xiàn)明顯，但隨著時間的延長而逐漸的自行恢復(fù)，而給藥組大鼠的神經(jīng)缺損的恢復(fù)速度明顯快于模型組，但在觀察期內(nèi)仍然有部分大鼠未能完全恢復(fù)到正常水平。術(shù)后14d，各給藥組與模型組比較均有顯著性差異，可明顯的改善神經(jīng)缺損癥狀，P < 0. 05。表1-5梓醇對pMCAO模型大鼠橫木行走能力的影響(;±s)
權(quán)利要求
1.梓醇在制備治療缺血性腦卒中后遺癥藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述，梓醇在制備改善缺血性腦卒中后遺癥神經(jīng)功能缺損癥狀藥物中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述，梓醇具有減輕神經(jīng)元病理改變的作用。
4.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述，梓醇具有改善腦組織中能量代謝障礙的作用。
5.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的梓醇新用途，其特征是梓醇在藥物中的含量為10-90%。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種梓醇的新用途，屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。具體是梓醇在制備治療缺血性腦卒中后遺癥藥物中的應(yīng)用，以及在制備改善缺血性腦卒中后遺癥神經(jīng)功能缺損癥狀藥物中的應(yīng)用。梓醇具有減輕神經(jīng)元病理改變、改善腦組織中能量代謝障礙的作用。
文檔編號A61K31/7048GK102861043SQ20111018479
公開日2013年1月9日 申請日期2011年7月4日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月4日
發(fā)明者玄振玉 申請人:蘇州玉森新藥開發(fā)有限公司