專(zhuān)利名稱(chēng)：一種可以調(diào)節(jié)相變溫度的脂質(zhì)體復(fù)合磷脂及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種可以調(diào)節(jié)相變溫度的脂質(zhì)體復(fù)合磷脂及其在藥物制劑中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
相變溫度(phase transition temperature, Tm)是脂質(zhì)體膜最重要的理化特征參數(shù)之一，當(dāng)溫度達(dá)到相變溫度時(shí)，脂質(zhì)體膜即磷脂雙分子層從固晶相(solid gel phase)變成了無(wú)序液晶相(liquid disordered phase)，磷脂烷基鏈中的C_C單鍵由全反式構(gòu)象轉(zhuǎn)變?yōu)猷徫唤徊媸綐?gòu)象，導(dǎo)致烴鏈所占的總體積大幅度增加，從而導(dǎo)致脂質(zhì)體膜通透性隨之急劇增加，藥物從脂質(zhì)體中快速、完全地釋放出來(lái)。脂質(zhì)體相變溫度的高低取決于用于制備脂質(zhì)體的磷脂種類(lèi)。應(yīng)用相變溫度的原理設(shè)計(jì)了熱敏脂質(zhì)體，又稱(chēng)為溫度敏感脂質(zhì)體，其所用的磷脂材料常選用二棕櫚酰磷酸膽堿(DPPC)，相變溫度為4廣42°C。靜脈注射載藥熱敏脂質(zhì)體后， 對(duì)靶部位加熱到脂質(zhì)體膜相變溫度以上可以實(shí)現(xiàn)靶向釋放藥物載藥熱敏脂質(zhì)體到達(dá)靶部位前在37°C體溫下(低于相變溫度)，脂質(zhì)體膜處于固晶相、通透性低，藥物基本不泄漏；而到達(dá)靶部位的熱敏脂質(zhì)體，脂質(zhì)體膜溫度被加熱到相變溫度以上，從而有選擇性地在靶部位迅速、完全地釋放藥物。目前由于相變溫度介于4(T50°C范圍內(nèi)的磷脂只有二棕櫚酰磷酸膽堿(DPPC)，因此其是目前熱敏脂質(zhì)體制備必備的磷脂材料，但價(jià)格比較昂貴。溫度高于50°C的二硬脂酰磷酸膽堿(DSPC)、氫化大豆磷脂(HSPC)等磷脂材料還不能作為熱敏脂質(zhì)體的主要磷脂材料，因?yàn)槿绻麑?duì)靶部位的加熱溫度超過(guò)50°C對(duì)大多數(shù)正常組織和生理功能的損傷會(huì)加劇。熱敏脂質(zhì)體的脂質(zhì)材料組成除膽固醇、靶向修飾材料(如隱形修飾材料二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000)以外，一般僅由一種磷脂組成，相變溫度主要取決于該磷脂材料所具備的相變溫度。但是藥物的加入往往又改變了載藥脂質(zhì)體的相變溫度，例如加入替莫洛芬(Temoporfin)后，二棕櫚酰磷酸膽堿(DPPC)脂質(zhì)體的相變溫度顯著下降，甚至低于 37°C體溫(Kuntsche J, Freisleben I, Steiniger F, et al. Temoporfin-loaded liposomes: physicochemical characterization [J]· European Journal of Pharmaceutical Sciences, 2010, 40: 305-315.)。因此急需一種能夠靈活調(diào)節(jié)脂質(zhì)體相變溫度的磷脂材料，能夠?qū)⑤d藥后藥物對(duì)脂質(zhì)體相變溫度的影響消除，從而保證熱敏脂質(zhì)體的靶向釋藥效果。此外，DPPC熱敏脂質(zhì)體在37 °C體溫下的穩(wěn)定性有限，部分藥物在37 °C體溫下便發(fā)生泄漏，從而降低藥物療效，因此很有必要在現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)上研究篩選一種既能提高熱敏脂質(zhì)體在體溫下的穩(wěn)定性而又不影響其在相變溫度下的釋放，同時(shí)又能顯著降低熱敏脂質(zhì)體的成本的脂質(zhì)體磷脂。
但是，如果同時(shí)應(yīng)用兩種以上的磷脂材料組成制備脂質(zhì)體，在絕大多數(shù)情況下，不同磷脂在脂質(zhì)體膜中仍然保持各自特定的相變溫度，在當(dāng)溫度介于兩種磷脂的相變溫度之間時(shí)，脂質(zhì)體膜中同時(shí)存在不同的相，稱(chēng)為相分離(phase s印arations)，導(dǎo)致膜表面形成區(qū)塊結(jié)構(gòu)(domain structure)，反而會(huì)使脂質(zhì)膜的通透性增大，導(dǎo)致藥物泄漏。(陸彬主編，藥物新劑型與新技術(shù)(第2版)，人民衛(wèi)生出版社，2005: 127-128)0

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種可以調(diào)節(jié)相變溫度的脂質(zhì)體復(fù)合磷脂，該脂質(zhì)體復(fù)合磷脂與現(xiàn)有的DPPC熱敏脂質(zhì)體相比，能夠靈活調(diào)節(jié)相變溫度，提高脂質(zhì)體在體溫下的穩(wěn)定性，同時(shí)降低成本；本發(fā)明另一個(gè)目的是提供可以調(diào)節(jié)相變溫度的脂質(zhì)體復(fù)合磷脂在制備熱敏靶向脂質(zhì)體制劑中的應(yīng)用。技術(shù)方案為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為
一種可以調(diào)節(jié)相變溫度的脂質(zhì)體復(fù)合磷脂，它是由下列摩爾份數(shù)的原料制成 二棕櫚酰磷酸膽堿廣10份、氫化大豆磷脂廣10份。作為優(yōu)選方案，以上所述的可以調(diào)節(jié)相變溫度的脂質(zhì)體復(fù)合磷脂，它是由下列摩爾量比的原料制成
二棕櫚酰磷酸膽堿氫化大豆磷脂等于4 :1至1 :4。作為更優(yōu)選方案，以上所述的可以調(diào)節(jié)相變溫度的脂質(zhì)體復(fù)合磷脂，它是由下列摩爾量比的原料制成
二棕櫚酰磷酸膽堿氫化大豆磷脂等于2:8、4:6、5:5、6:4或8:2。本發(fā)明提供的一種用于設(shè)計(jì)不同相變溫度的復(fù)合磷脂材料脂質(zhì)體的數(shù)學(xué)函數(shù)，該數(shù)學(xué)函數(shù)方程為y X 1000=0. 1077X+3. 0638，R2=O. 9895，其中y軸為二棕櫚酰磷酸膽堿和氫化大豆磷脂脂質(zhì)體復(fù)合磷脂相變溫度的絕對(duì)溫度的倒數(shù)1/Τ，χ軸為二棕櫚酰磷酸膽堿在二棕櫚酰磷酸膽堿與氫化大豆磷脂總量中所占摩爾比例。利用該數(shù)學(xué)函數(shù)關(guān)系可以用于設(shè)計(jì)不同相變溫度的脂質(zhì)體，尤其是可以用于設(shè)計(jì)藥物對(duì)脂質(zhì)體相變溫度有影響的脂質(zhì)體的設(shè)計(jì)。本發(fā)明提供的可以調(diào)節(jié)相變溫度的脂質(zhì)體復(fù)合磷脂在制備熱敏靶向脂質(zhì)體制劑中的應(yīng)用。作為優(yōu)選方案，以上所述的可以調(diào)節(jié)相變溫度的脂質(zhì)體復(fù)合磷脂在制備熱敏靶向脂質(zhì)體制劑中的應(yīng)用，所述的熱敏靶向脂質(zhì)體制劑為粉針劑、注射劑、口服液、外用凝膠劑、 軟膏、噴霧劑或滴鼻劑劑型的藥物。在制備上述藥物制劑時(shí)還可加入其它輔料，如維生素E、 二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 (DSPE-PEG2000)、氯化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、水等。將本發(fā)明提供的復(fù)合磷脂組成制備得到的熱敏靶向脂質(zhì)體，除熱原之后，經(jīng)無(wú)菌過(guò)濾，冷凍干燥，得到注射用熱敏靶向脂質(zhì)體粉針劑。本發(fā)明提供的復(fù)合磷脂組成制備得到的熱敏靶向脂質(zhì)體制成注射劑時(shí)，取各原料加入生理鹽水溶解然后加入活性炭，攪拌均勻，過(guò)濾，調(diào)節(jié)pH值，用垂熔玻璃漏斗或其它濾器過(guò)濾至澄明，微孔濾膜無(wú)菌過(guò)濾，灌裝，制成注射液。
將本發(fā)明提供的復(fù)合磷脂組成制備得到的熱敏靶向脂質(zhì)體制成口服液時(shí)，將各原料加蒸餾水溶解，過(guò)濾，加入糖漿，調(diào)節(jié)PH值，制成口服液。作為優(yōu)選方案，以上所述的可以調(diào)節(jié)相變溫度的熱敏靶向脂質(zhì)體制劑的制備方法為薄膜分散法、逆向蒸發(fā)法、乙醇注入法、乙醚注入法、冷凍干燥法、硫酸銨梯度法、PH梯度法或前體脂質(zhì)體法；
最為更優(yōu)選的方案，制備方法為薄膜分散法，所述的薄膜分散法包括以下步驟(1)按摩爾比稱(chēng)取DPPC 1 10份、HSPC 1 10份以及脂溶性藥物、其他脂質(zhì)材料，溶解于無(wú)水乙醇或其它有機(jī)溶劑中，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成膜，真空條件下放置。(2 )加入水性介質(zhì)(水溶性的藥物溶解在水性介質(zhì)中)旋轉(zhuǎn)水合，制得脂質(zhì)體混懸液。(3)超聲處理或高壓均質(zhì)，即得。本發(fā)明提供的可以調(diào)節(jié)相變溫度的馬錢(qián)子堿復(fù)合磷脂隱形脂質(zhì)體凍干粉針劑，它是通過(guò)以下方法制備得到稱(chēng)取900mg二棕櫚酰磷酸膽堿、300mg氫化大豆磷脂、5mg二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000、IOOmg馬錢(qián)子堿共溶解于50ml無(wú)水乙醇中，在60°C的水浴溫度下，減壓旋轉(zhuǎn)成膜，真空放置過(guò)夜，加入50mL pH7. 4的磷酸鹽PBS緩沖液旋轉(zhuǎn)水合， 水合液用超高壓均質(zhì)機(jī)勻化，過(guò)0. 22 μ m微孔濾膜除菌，為對(duì)光澄明的乳白色混懸液，分裝于西林瓶中，先預(yù)凍，然后置冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥，即得相變溫度為44. 07°C的馬錢(qián)子堿復(fù)合磷脂隱形脂質(zhì)體凍干粉針劑。本發(fā)明經(jīng)大量實(shí)驗(yàn)研究篩選兩種不同相變溫度的磷脂材料二棕櫚酰磷酸膽堿和氫化大豆磷脂，經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)研究表明當(dāng)由廣10份摩爾份數(shù)的二棕櫚酰磷酸膽堿和廣10 份摩爾份數(shù)的氫化大豆磷脂組成的復(fù)合磷脂材料制備成脂質(zhì)體膜時(shí)形成新相，不存在相分離，尤其是具有單一的相變溫度，克服了現(xiàn)有技術(shù)兩種不同磷脂材料存在二種相變溫度的缺點(diǎn)。有益效果本發(fā)明提供的可以調(diào)節(jié)相變溫度的脂質(zhì)體復(fù)合磷脂和現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)
1、本發(fā)明通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)篩選不同的磷脂材料，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明當(dāng)廣10份摩爾份數(shù)的二棕櫚酰磷酸膽堿和廣10份摩爾份數(shù)的氫化大豆磷脂科學(xué)組合后可以得到能調(diào)節(jié)相變溫度的脂質(zhì)體復(fù)合磷脂，該復(fù)合磷脂制備成脂質(zhì)體膜時(shí)能夠形成新相，不存在相分離，具有單一的相變溫度，能夠克服現(xiàn)有技術(shù)兩種不同磷脂材料存在二種相變溫度的缺點(diǎn)；
2、本發(fā)明通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)研究，確定脂質(zhì)體復(fù)合磷脂的相變溫度與兩種磷脂比例之間的數(shù)學(xué)函數(shù)規(guī)律，根據(jù)該數(shù)學(xué)函數(shù)可根據(jù)不同治療的需要靈活地調(diào)節(jié)相變溫度，從而能夠?qū)⑤d藥后藥物對(duì)脂質(zhì)體相變溫度的影響消除，保證熱敏脂質(zhì)體的靶向釋藥效果；
3、本發(fā)明提供的可以調(diào)節(jié)相變溫度的脂質(zhì)體復(fù)合磷脂，與只采用單一磷脂材料的DPPC 脂質(zhì)體相比，脂質(zhì)體在37°C體溫下的穩(wěn)定性顯著增強(qiáng)，能夠顯著降低載藥脂質(zhì)體在37°C體溫下到達(dá)靶部位前的泄漏，從而增強(qiáng)脂質(zhì)體的靶向傳遞效果，且本發(fā)明提供的脂質(zhì)體復(fù)合磷脂的相變溫度低于單一組份HSPC的高相變溫度，人體可以良好耐受，并且由于HSPC的價(jià)格不足DPPC的10%，因此本發(fā)明提供的復(fù)合磷脂材料不僅能顯著提高脂質(zhì)體膜的穩(wěn)定性， 增加脂質(zhì)體靶向藥效，而且能降低脂質(zhì)體的制備成本，應(yīng)用范圍廣泛。4、本發(fā)明提供的可以調(diào)節(jié)相變溫度的馬錢(qián)子堿復(fù)合磷脂隱形脂質(zhì)體凍干粉針劑， 經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)篩選磷脂的復(fù)合材料、馬錢(qián)子堿及隱形修飾材料等的具體用量配比，可以得到穩(wěn)定性更好、靶向釋藥效果更好、載藥量更高的馬錢(qián)子脂質(zhì)體，且經(jīng)過(guò)制備得到凍干粉針劑可以方便注射給藥。


圖1為不同磷脂組成的鈣黃綠素脂質(zhì)體在不同溫度下的釋放曲線(xiàn)圖。圖2為不同磷脂組成的鈣黃綠素脂質(zhì)體在37°C下的釋放度比較曲線(xiàn)圖。圖3不同磷脂組成脂質(zhì)體的DSC圖譜。圖4為相變溫度與復(fù)合磷脂組成的數(shù)學(xué)關(guān)系圖。圖5為DPPC與HSPC的摩爾比應(yīng)為0. 4607 0. 5393的脂質(zhì)體復(fù)合磷脂的相變溫度
測(cè)定結(jié)果圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步闡明本發(fā)明，應(yīng)理解這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，在閱讀了本發(fā)明之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明的各種等價(jià)形式的修改均落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求所限定的范圍。實(shí)施例1鈣黃綠素復(fù)合磷脂脂質(zhì)體的制備與體外釋放行為測(cè)定實(shí)驗(yàn)
分別按DPPC和HSPC摩爾比2:8，4:6，5:5，6:4和8:2稱(chēng)取復(fù)合磷脂材料各120 mg分別溶于10 mL氯仿，置于50 mL茄形瓶?jī)?nèi)60 ！減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)形成薄膜，取出茄形瓶，于真空干燥箱中55 °C放置12h。然后向茄形瓶中分別加入含90 mM鈣黃綠素的pH7.4磷酸鹽緩沖液(PBS) 5 mL,60 ！旋轉(zhuǎn)水合40 min，所得脂質(zhì)體混懸液于60 °C水浴探頭超聲(400 W, 50次)，即得不同摩爾比DPPC和HSPC的鈣黃綠素復(fù)合磷脂脂質(zhì)體。同法分別制備僅含有 DPPC和HSPC —種磷脂材料的鈣黃綠素DPPC和HSPC脂質(zhì)體。將以上鈣黃綠素脂質(zhì)體用凝膠柱層析方法除去游離藥物，以小牛血清一pH7. 4PBS (1:1, ν/ν)為釋放介質(zhì)，將各脂質(zhì)體用釋放介質(zhì)稀釋后恒溫磁力攪拌，測(cè)定放置20min的釋放度。通過(guò)以上方法考察不同溫度下不同磷脂組成鈣黃綠素脂質(zhì)體的釋放度，具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示。由圖1的鈣黃綠素脂質(zhì)體的釋放度實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采用不同摩爾比DPPC與HSPC 制成的鈣黃綠素復(fù)合磷脂脂質(zhì)體的最高釋放度的溫度隨著HSPC比例的提高有規(guī)律性地提高，提示其相變溫度發(fā)生了相應(yīng)地提高，不同摩爾比DPPC與HSPC復(fù)合磷脂材料制成的鈣黃綠素脂質(zhì)體均具有單一的相變溫度，且相變溫度均高于單一 DPPC材料制成的鈣黃綠素脂質(zhì)體，且均小于單一 HSPC材料制成的鈣黃綠素脂質(zhì)體，不僅可以克服現(xiàn)有技術(shù)中二種磷脂在脂質(zhì)體膜中保持各自特定的相變溫度，在當(dāng)溫度介于兩種磷脂的相變溫度之間時(shí)，脂質(zhì)體膜中出現(xiàn)相分離的缺點(diǎn)，并且可以克服單一 DPPC材料脂質(zhì)體在體溫下不穩(wěn)定、泄漏率高造成靶向釋藥效果差的缺點(diǎn)，又能克服現(xiàn)有技術(shù)中單一 HSPC材料脂質(zhì)體相變溫度過(guò)高的缺點(diǎn)。實(shí)施例2 37°C下不同磷脂組成鈣黃綠素脂質(zhì)體的釋放行為比較
取實(shí)施例1制備得到的DPPC和HSPC摩爾比為2 8，4:6，5 5，6 4和8 2復(fù)合磷脂和單一 DPPC和HSPC材料制成的鈣黃綠素脂質(zhì)體，然后在37°C下比較以上鈣黃綠素脂質(zhì)體的釋放行為，具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖2所示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明加入一定比例HSPC后，所制備的鈣黃綠素復(fù)合磷脂脂質(zhì)體在37°C下的穩(wěn)定性顯著優(yōu)于單一 DPPC磷脂的鈣黃綠素脂質(zhì)體，并且呈現(xiàn)出明顯的相關(guān)性，HSPC的比例越高，復(fù)合磷脂脂質(zhì)體越穩(wěn)定，釋放度越低。因此該實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步表明本發(fā)明優(yōu)選的DPPC和HSPC復(fù)合磷脂材料制成的脂質(zhì)體在人體37°C正常體溫下均有比單一 DPPC磷脂材料制成脂質(zhì)體更好的穩(wěn)定性，可以有效防止藥物在到達(dá)靶向部位前出現(xiàn)泄漏，從而具有更好的靶向釋藥效果。實(shí)施例3差示掃描量熱分析法(DSC)測(cè)定脂質(zhì)體的相變溫度與磷脂組成的相關(guān)性研究
1、脂質(zhì)體的制備分別稱(chēng)取復(fù)合磷脂材料(DPPC和HSPC的摩爾比分別為2:8,4:6, 5:5,6:4,8:2) 120 mg分別溶于10 mL氯仿，然后置于50 mL茄形瓶?jī)?nèi)60 °C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)形成薄膜，取出茄形瓶，于真空干燥箱中陽(yáng)°C放置12h。向茄形瓶中加入pH7. 4磷酸鹽緩沖液(PBS) 5 mL,60 ！旋轉(zhuǎn)水合40 min，所得脂質(zhì)體混懸液于60 °C水浴探頭超聲(400 W, 50次)，即得不同摩爾比例DPPC和HSPC (分別為2 8，4 6，5 5，6 4，8 2)制成的復(fù)合磷脂脂質(zhì)體。同法分別制備僅含有DPPC和HSPC —種磷脂材料的DPPC、HSPC脂質(zhì)體。取以上不同比例的復(fù)合磷脂脂質(zhì)體和單一 DPPC或HSPC磷脂組成的脂質(zhì)體在液態(tài)下進(jìn)行差示掃描量熱分析，測(cè)定的DSC結(jié)果如圖3所示(圖中a為HSPC脂質(zhì)體、b為 HSPC:DPPC=8:2 脂質(zhì)體、c 為 HSPC:DPPC=6:4 脂質(zhì)體、d 為 HSPC:DPPC=5:5 脂質(zhì)體、e 為 HSPC:DPPC=4:6脂質(zhì)體、f為HSPC:DPPC=2:8脂質(zhì)體、g為DPPC脂質(zhì)體)。由圖3的測(cè)定結(jié)果表明復(fù)合磷脂脂質(zhì)體隨著HSPC比例的提高，復(fù)合磷脂脂質(zhì)體的相變溫度呈現(xiàn)規(guī)律性地提高，且DSC測(cè)定圖中未出現(xiàn)二個(gè)相變溫度，因此表明本發(fā)明提供的復(fù)合磷脂材料制成的脂質(zhì)體具有單一的相比溫度，不存在相分離，并且由測(cè)定結(jié)果表明復(fù)合磷脂脂質(zhì)體的相變溫度均高于單一 DPPC材料制成的脂質(zhì)體，且均小于單一 HSPC材料制成的脂質(zhì)體，因此具有穩(wěn)定性更好，靶向釋藥效果更好，相變溫度又不會(huì)太高的優(yōu)點(diǎn)。2、將DSC測(cè)得的脂質(zhì)體的相變溫度(以絕對(duì)溫度T的倒數(shù)表示)與 DPPC在(DPPC+HSPC)總量中所占摩爾比例進(jìn)行數(shù)學(xué)擬合，得到的數(shù)學(xué)函數(shù)為 y X 1000=0. 1077x+3. 0638，R2=O. 9895，結(jié)果如圖4所示，可見(jiàn)1/T與DPPC比例之間呈現(xiàn)明顯的規(guī)律性，相關(guān)系數(shù)達(dá)到0. 9947，具有良好的線(xiàn)性關(guān)系，利用該數(shù)學(xué)函數(shù)可以測(cè)定線(xiàn)性范圍內(nèi)任一相變溫度時(shí)，復(fù)合磷脂材料中DPPC與HSPC的摩爾比。如根據(jù)該數(shù)學(xué)函數(shù)測(cè)定如果要得到相變溫度為48.04°C的脂質(zhì)體復(fù)合磷脂， 則DPPC與HSPC的摩爾比應(yīng)為0. 4607 0. 5393。發(fā)明根據(jù)DPPC與HSPC的摩爾比應(yīng)為 0. 4607:0. 5393制備的脂質(zhì)體進(jìn)行相變溫度測(cè)定，具體相變溫度測(cè)定結(jié)果如圖5所示，測(cè)定的相變溫度為47. 77°C，實(shí)際測(cè)定值與理論預(yù)測(cè)值僅偏差-0. 56%，說(shuō)明本發(fā)明提供的數(shù)學(xué)函數(shù)的可靠性和適用性。利用該數(shù)學(xué)函數(shù)關(guān)系可以用于設(shè)計(jì)不同相變溫度的脂質(zhì)體。實(shí)施例4應(yīng)用復(fù)合磷脂調(diào)節(jié)載藥脂質(zhì)體的相變溫度
稱(chēng)取DPPC 120 mg和替莫泊芬IOmg溶于10 mL氯仿-甲醇(3:1，v/v)，置于50 mL茄形瓶?jī)?nèi)60 °C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)形成薄膜，取出茄形瓶，于真空干燥箱中55 °C放置12h。然后向茄形瓶中分別加入PH7. 4磷酸鹽緩沖液(PBS) 5 mL,60 ！旋轉(zhuǎn)水合40 min，所得脂質(zhì)體混懸液于60 °C水浴探頭超聲(400 W，50次)，即得替莫泊芬DPPC脂質(zhì)體。同法制得不含替莫伯芬的空白DPPC脂質(zhì)體。稱(chēng)取DPPC90mg和HSPC30mg作為脂質(zhì)體復(fù)合磷脂按上述方法制備替莫泊芬復(fù)合磷脂脂質(zhì)體。DSC測(cè)定空白DPPC脂質(zhì)體的相變溫度為41. 80°C，替莫泊芬DPPC脂質(zhì)體的相變溫度為36. 22°C，而替莫泊芬復(fù)合磷脂脂質(zhì)體的相變溫度為41. 86°C，可見(jiàn)采用復(fù)合磷脂調(diào)節(jié)合適的比例可以將藥物對(duì)脂質(zhì)體相變溫度的影響消除。實(shí)施例5馬錢(qián)子堿復(fù)合磷脂隱形脂質(zhì)體凍干粉針的制備
稱(chēng)取900mg DPPC、300mg HSPC、5mg 二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000、IOOmg馬錢(qián)子堿共溶解于50ml無(wú)水乙醇中，在60°C的水浴溫度下，減壓旋轉(zhuǎn)成膜，真空放置過(guò)夜，加入50mL pH7. 4的PBS旋轉(zhuǎn)水合，水合液用超高壓均質(zhì)機(jī)勻化，過(guò)0. 22 μ m微孔濾膜除菌，為對(duì)光澄明的乳白色混懸液，分裝于西林瓶中(2ml/瓶)，先預(yù)凍，然后置冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥，即得馬錢(qián)子堿復(fù)合磷脂隱形脂質(zhì)體凍干粉針，差示掃描量熱分析法(DSC)測(cè)定法其相變溫度為44. 070C，該馬錢(qián)子堿復(fù)合磷脂隱形脂質(zhì)體比單一磷脂材料如DPPC脂質(zhì)體具有更高的相變溫度，因此在正常人體提問(wèn)下具有更好的穩(wěn)定性，而且44°C對(duì)于人體來(lái)說(shuō)能夠耐受， 可以克服單一 HSPC或DSPC材料脂質(zhì)體的50°C以上的相比溫度的缺點(diǎn)。且經(jīng)檢測(cè)結(jié)果表明，本發(fā)明提供的馬錢(qián)子堿復(fù)合磷脂隱形脂質(zhì)體的包封率達(dá)95%，比現(xiàn)有技術(shù)制備得到的脂質(zhì)體具有更高的載藥量和包封率。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種可以調(diào)節(jié)相變溫度的脂質(zhì)體復(fù)合磷脂，其特征在于，它是由下列摩爾份數(shù)的原料制成二棕櫚酰磷酸膽堿廣10份、氫化大豆磷脂廣10份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可以調(diào)節(jié)相變溫度的脂質(zhì)體復(fù)合磷脂，其特征在于，它是由下列摩爾量比的原料制成二棕櫚酰磷酸膽堿氫化大豆磷脂等于4 :1至1 :4。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可以調(diào)節(jié)相變溫度的脂質(zhì)體復(fù)合磷脂，其特征在于，它是由下列摩爾量比的原料制成二棕櫚酰磷酸膽堿氫化大豆磷脂等于2:8、4:6、5:5、6:4或8:2。
4.權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的可以調(diào)節(jié)相變溫度的脂質(zhì)體復(fù)合磷脂在制備熱敏靶向脂質(zhì)體制劑中的應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的可以調(diào)節(jié)相變溫度的脂質(zhì)體復(fù)合磷脂在制備熱敏靶向脂質(zhì)體制劑中的應(yīng)用，其特征在于，所述的熱敏靶向脂質(zhì)體制劑為粉針劑、注射劑、口服液、外用凝膠劑、軟膏、噴霧劑或滴鼻劑劑型的藥物。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的可以調(diào)節(jié)相變溫度的脂質(zhì)體復(fù)合磷脂在制備熱敏靶向脂質(zhì)體制劑中的應(yīng)用，其特征在于，所述的熱敏靶向脂質(zhì)體制劑的制備方法為薄膜分散法、逆向蒸發(fā)法、乙醇注入法、乙醚注入法、冷凍干燥法、硫酸銨梯度法、pH梯度法或前體脂質(zhì)體法。
7.一種用于設(shè)計(jì)不同相變溫度的復(fù)合磷脂脂質(zhì)體的數(shù)學(xué)函數(shù)，其特征在于該數(shù)學(xué)函數(shù)方程為y X 1000=0. 1077X+3. 0638，R2=O. 9895，其中y軸為二棕櫚酰磷酸膽堿和氫化大豆磷脂脂質(zhì)體復(fù)合磷脂相變溫度的絕對(duì)溫度的倒數(shù)，χ軸為二棕櫚酰磷酸膽堿在二棕櫚酰磷酸膽堿與氫化大豆磷脂總量中所占摩爾比例。
8.一種可以調(diào)節(jié)相變溫度的馬錢(qián)子堿復(fù)合磷脂隱形脂質(zhì)體凍干粉針劑，其特征在于， 它是通過(guò)以下方法制備得到稱(chēng)取900mg二棕櫚酰磷酸膽堿、300mg氫化大豆磷脂、5mg二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000、IOOmg馬錢(qián)子堿共溶解于50ml無(wú)水乙醇中，在60°C的水浴溫度下，減壓旋轉(zhuǎn)成膜，真空放置過(guò)夜，加入50mL pH7. 4的PBS緩沖液旋轉(zhuǎn)水合，水合液用超高壓均質(zhì)機(jī)勻化，過(guò)0. 22 μ m微孔濾膜除菌，為對(duì)光澄明的乳白色混懸液，分裝于西林瓶中，先預(yù)凍，然后置冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥，即得。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種可以調(diào)節(jié)相變溫度的脂質(zhì)體復(fù)合磷脂及其應(yīng)用，該脂質(zhì)體復(fù)合磷脂由1~10份摩爾份數(shù)的二棕櫚酰磷酸膽堿和1~10份摩爾份數(shù)氫化大豆磷脂制成，該脂質(zhì)體復(fù)合磷脂可以用于制備熱敏靶向脂質(zhì)體制劑，本發(fā)明通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)篩選不同的磷脂材料，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明二棕櫚酰磷酸膽堿和氫化大豆磷脂科學(xué)組合后得到能靈活調(diào)節(jié)相變溫度的脂質(zhì)體復(fù)合磷脂，該復(fù)合磷脂制備成脂質(zhì)體膜時(shí)能夠形成新相，不存在相分離，具有單一的相變溫度，能夠克服現(xiàn)有技術(shù)兩種不同磷脂材料存在二種相變溫度的缺點(diǎn)；且與單一DPPC材料脂質(zhì)體相比具有更好的穩(wěn)定性和靶向釋藥效果，與單一HSPC材料脂質(zhì)體相比具有人體耐受性更好的相變溫度，應(yīng)用范圍廣泛。
文檔編號(hào)A61K9/19GK102210870SQ20111015314
公開(kāi)日2011年10月12日 申請(qǐng)日期2011年6月9日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月9日
發(fā)明者程冬, 蔡寶昌, 陳軍 申請(qǐng)人:南京中醫(yī)藥大學(xué)