專利名稱：一種用于治療阿爾茨海默病動(dòng)物模型的shRNA試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種shRNA基因試劑，特別是一種抑制caspase-3基因表達(dá)的shRNA， 該shRNA基因試劑為一種以慢病毒為載體的抑制caspase-3基因表達(dá)的shRNA及相關(guān)輔助試劑，用于治療阿爾茨海默病動(dòng)物模型。
背景技術(shù)：
RNA干擾(RNA interference，RNAi)現(xiàn)象是一種在進(jìn)化上保守的抵御轉(zhuǎn)基因或外來(lái)病毒侵犯的防御機(jī)制，是一種序列特異性的轉(zhuǎn)錄后基因沉默(post-transcriptional gene silencing, PTGS)。它已在許多不同種屬的生物體中被發(fā)現(xiàn)，并在生物體細(xì)胞之間進(jìn)行傳遞，具有抵抗病毒入侵和維持基因組穩(wěn)定的作用。RNAi技術(shù)不僅能大大推進(jìn)人類后基因組計(jì)劃的發(fā)展，還能高通量地篩選藥物靶基因，促進(jìn)基因治療、新藥開(kāi)發(fā)等，為治療癌癥、 遺傳病等疾病開(kāi)辟新的途徑。RNAi的研究與應(yīng)用具有極其重要的理論和實(shí)際意義，將對(duì)醫(yī)學(xué)生物學(xué)的發(fā)展產(chǎn)生深遠(yuǎn)的影響。雖然RNA干擾技術(shù)的研究歷程較短，但其發(fā)展速度卻超乎人們的想象。在過(guò)去的幾年時(shí)間里，RNAi作為一種新基因療法，被廣泛的應(yīng)用于病毒感染、癌癥、顯性遺傳病等醫(yī)學(xué)研究中，開(kāi)辟了“基因治療(gene-specific therapeutics) ”的新理念，小發(fā)卡RNA (short hairpin RNA, shRNA)甚至被稱為“治病藥物”。目前，人們已經(jīng)開(kāi)始利用RNAi技術(shù)從基因組水平分析哺乳動(dòng)物體內(nèi)基因的功能，可以更迅速地鑒定出許多與疾病相關(guān)的基因，使我們可以更好地研究生物體內(nèi)基因調(diào)控的網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)?，F(xiàn)在RNAi技術(shù)已經(jīng)能夠成功治愈哺乳動(dòng)物細(xì)胞、器官及活體的病變，預(yù)示著不久的將來(lái)，RNAi會(huì)成功用于人類疾病的治療，使得shRNA的“治病藥物”稱號(hào)名副其實(shí)。公知人體內(nèi)的細(xì)胞注定是要死亡的，有些死亡是生理性的，有些死亡則是病理性的，有關(guān)細(xì)胞死亡過(guò)程的研究，近年來(lái)已成為生物學(xué)、醫(yī)學(xué)研究的一個(gè)熱點(diǎn)，到目前為此，人們已經(jīng)知道細(xì)胞的死亡起碼有兩種方式，即細(xì)胞壞死與細(xì)胞凋亡。目前的研究認(rèn)為，細(xì)胞壞死是細(xì)胞接受刺激后的一種被動(dòng)的細(xì)胞死亡方式，而細(xì)胞凋亡則是一種主動(dòng)的程序性的細(xì)胞死亡方式，它是細(xì)胞的一種基本生物學(xué)現(xiàn)象，細(xì)胞凋亡是多基因嚴(yán)格控制的過(guò)程，這些基因在種屬之間非常保守，如Bcl-2基因家族、caspase基因家族、癌基因等，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，對(duì)多種細(xì)胞凋亡的過(guò)程有了相當(dāng)?shù)恼J(rèn)識(shí)，但是迄今為止凋亡過(guò)程確切機(jī)制尚不完全清楚，而凋亡過(guò)程的紊亂可能與許多疾病的發(fā)生有直接或間接的關(guān)系，如神經(jīng)退行性疾病、腫瘤、自身免疫性疾病等。如果能應(yīng)用RNA干擾技術(shù)特異性地阻抑凋亡相關(guān)基因的表達(dá)及其蛋白質(zhì)水平，將可以有效沉默凋亡相關(guān)基因，幫助細(xì)胞減少凋亡，增進(jìn)細(xì)胞活力。 因此，對(duì)凋亡相關(guān)基因的RNA干擾研究與應(yīng)用具有極其重要的理論和實(shí)際意義，能有效地篩選藥物靶基因，促進(jìn)基因治療、新藥開(kāi)發(fā)等，為治療神經(jīng)退行性疾病等與細(xì)胞凋亡相關(guān)的疾病開(kāi)辟新的途徑。目前RNAi技術(shù)作為一種主要的分子生物學(xué)研究手段，被廣泛應(yīng)用于特異性抑制基因的表達(dá)研究。RNAi的作用機(jī)制表明雙鏈RNA分子首先被細(xì)胞內(nèi)RNA酶Dicer降解成 21 23個(gè)堿基大小的小分子干擾RNA (small interfering RNA, si RNA), si RNA結(jié)合一個(gè)核酶復(fù)合物形成RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合物(RNA — induced silencing complex，RISC)，RISC通過(guò)堿基配對(duì)定位到有同源序列的mRNA上，并在特定位置切割該mRNA，從而抑制該同源基因的表達(dá)。siRNA被認(rèn)為是RNAi的主要效應(yīng)物。雖然直接轉(zhuǎn)染合成的siRNA能特異性抑制哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)同源基因的表達(dá)，但是細(xì)胞內(nèi)siRNA很容易被降解，不能實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定的RNAi。 屬于RAN聚合酶III類的TO啟動(dòng)子可轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生小發(fā)卡RNA，即轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生一段含有RNA正義鏈、 環(huán)(loop)和反義鏈的小發(fā)卡RNA。若向細(xì)胞中導(dǎo)入TO干擾質(zhì)粒(由TO啟動(dòng)子與被干擾基因的發(fā)卡樣短片段摸板組成)，則由此介導(dǎo)的RNA干擾可較好地克服以上缺點(diǎn)，質(zhì)粒載體或病毒載體就能在細(xì)胞內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間、穩(wěn)定地生成siRNA。但質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞的效率不如病毒載體，尤其是無(wú)法轉(zhuǎn)染非分裂相細(xì)胞。病毒載體克服了質(zhì)粒載體不能轉(zhuǎn)染非分裂相細(xì)胞的缺點(diǎn)和不足，并能在哺乳動(dòng)物各類細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)siRNA，長(zhǎng)期抑制基因表達(dá)?？梢哉f(shuō)，病毒載體的出現(xiàn)使RNAi技術(shù)經(jīng)歷了一次歷史性的跨越。常用的病毒載體包括單純皰疹病毒載體，腺病毒載體，腺相關(guān)病毒載體 (adeno-associated virus, AAV)和慢病毒載體。腺病毒是一種無(wú)包膜DNA缺陷病毒，屬細(xì)小病毒科，是目前世界上動(dòng)物病毒中最小的病毒，病毒顆粒直徑只有20nm，呈二十面體，正負(fù)鏈各半?；蚪MDNA約有36kb，可編碼14種蛋白，具有2個(gè)開(kāi)放性閱讀框架和反向末端重復(fù)序列，在病毒復(fù)制中有重要作用，是病毒的重要順式順序。慢病毒是一類反 轉(zhuǎn)錄病毒的總稱，包括多種靈長(zhǎng)類慢病毒和非靈長(zhǎng)類慢病毒。慢病毒載體則是一類重組反轉(zhuǎn)錄病毒載體，由慢病毒經(jīng)過(guò)改造而成，具有更高的生物安全性和外源基因的表達(dá)效率。各種慢病毒載體的結(jié)構(gòu)和作用機(jī)制基本相同，主要由三種包含不同結(jié)構(gòu)的質(zhì)粒構(gòu)成，分別是轉(zhuǎn)移質(zhì)粒、輔助質(zhì)粒、包膜糖蛋白表達(dá)質(zhì)粒。其中，轉(zhuǎn)移質(zhì)粒除包含我們感興趣的外源基因外，同時(shí)還保留了病毒的LTR區(qū)和其他對(duì)病毒的整合復(fù)制起重要作用的元件。其中LTR區(qū)包含了慢病毒的啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、包裝信號(hào)、整合位點(diǎn)(attachment site, Att)等結(jié)構(gòu)。包裝序列能夠使識(shí)別病毒RNA將其衣殼化并裝配到病毒顆粒中，Att位點(diǎn)使病毒基因可以整合入宿主基因。 同時(shí)轉(zhuǎn)移質(zhì)粒中還加入了內(nèi)部啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)外源基因轉(zhuǎn)錄。輔助質(zhì)粒整合進(jìn)入包裝細(xì)胞后表達(dá)蛋白多聚體gag，編碼病毒的衣殼蛋白及病毒的其他模序結(jié)構(gòu)(matrix structure)，同時(shí)表達(dá)蛋白pol，pol蛋白具有反轉(zhuǎn)錄酶及整合酶的活性，負(fù)責(zé)對(duì)病毒載體基因的結(jié)構(gòu)元件進(jìn)行切割，促使載體基因整合入宿主細(xì)胞基因組中。AAV和慢病毒載體的特點(diǎn)是能作用于非分裂相細(xì)胞，而且能與宿主細(xì)胞基因組發(fā)生整合。但當(dāng)應(yīng)用于整體動(dòng)物時(shí)，AAV會(huì)被機(jī)體內(nèi)本身存在的AAV抗體識(shí)別并發(fā)生免疫反應(yīng)，從而削弱了 AAV轉(zhuǎn)導(dǎo)基因的效率。慢病毒載體則不存在這樣的問(wèn)題，與其他反轉(zhuǎn)錄病毒載體相比，主要具有如下優(yōu)點(diǎn)首先，慢病毒載體既可以感染分裂相細(xì)胞，又可以感染分裂緩慢或非分裂期的細(xì)胞，包括造血干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞、肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞等等；其次，由慢病毒載體攜帶整合入宿主基因組的目的基因具有較強(qiáng)的轉(zhuǎn)錄后基因沉默作用，在體外細(xì)胞培養(yǎng)和體內(nèi)移植實(shí)驗(yàn)中，由慢病毒載體攜帶導(dǎo)人的目的基因可以在宿主細(xì)胞中得到長(zhǎng)期穩(wěn)定的表達(dá)，免疫反應(yīng)很小；再次，慢病毒載體可以兼容多個(gè)轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子，包括細(xì)胞特異性啟動(dòng)子和基因組中普遍存在的管家基因的啟動(dòng)子，應(yīng)用組織特異性啟動(dòng)子和增強(qiáng)子來(lái)驅(qū)動(dòng)慢病毒載體中的外源基因能夠使其在特定的組織細(xì)胞中表達(dá)，為慢病毒載體介導(dǎo)的基因靶向治療提供理論基礎(chǔ)；最后，慢病毒載體經(jīng)過(guò)改建后可以容納約IOkb左右的大片段外源基因，因此大多數(shù)的cDNA都能被克隆入慢病毒載體。慢病毒載體的上述優(yōu)點(diǎn)使其成為體內(nèi)和體外基因轉(zhuǎn)移的一 種有效工具。使用RNAi治療疾病的思路是根據(jù)病原體的致病基因序列以及生物體內(nèi)與疾病發(fā)生相關(guān)的基因序列，設(shè)計(jì)和制備與這些基因序列具有同源性的siRNA，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生一段含有 RNA正義鏈、環(huán)(loop)和反義鏈的shRNA。向細(xì)胞中導(dǎo)入U(xiǎn)6干擾質(zhì)粒形成shRNA，然后通過(guò)某種方式將shRNA轉(zhuǎn)移到動(dòng)物體內(nèi)使有關(guān)疾病基因發(fā)生沉默，從而達(dá)到治療的目的。其優(yōu)勢(shì)在于只抑制疾病相關(guān)蛋白的表達(dá)，而不損傷正常細(xì)胞功能，其序列特異性及基因抑制作用的強(qiáng)大性是其他藥物難以匹敵的。shRNA可用于治療任何由于基因發(fā)生突變或過(guò)度表達(dá)所引起的疾病，只要確定了與疾病相關(guān)的靶點(diǎn)，即靶基因，就可以通過(guò)shRNA特異性地使靶基因保持沉默。所以，尋找最適宜的shRNA，對(duì)于RNA干擾的廣泛應(yīng)用至關(guān)重要。caspase基因家族是一類基因結(jié)構(gòu)相似并參與細(xì)胞凋亡的基因。根據(jù)它們對(duì)細(xì)胞凋亡結(jié)果的不同分為兩類，一類是抑制細(xì)胞凋亡的基因，另一類是促進(jìn)細(xì)胞凋亡基因，其中 caspase-3基因是促進(jìn)細(xì)胞凋亡的基因，其過(guò)度表達(dá)能夠加速與該凋亡基因相關(guān)的疾病細(xì)胞凋亡，因此對(duì)caspase-3 RNAi的研究與應(yīng)用具有極其重要的理論和實(shí)際意義。進(jìn)一步研究表明，caspase-3不僅是起著凋亡的效應(yīng)器作用，還能直接與阿爾茨海默病、帕金森氏癥、亨廷頓舞蹈病、脊椎小腦失調(diào)等疾病的致病蛋白質(zhì)分子相互作用，參與致病機(jī)制。因此， 高效、高選擇性的caspase-3抑制劑可以為神經(jīng)退行性疾病的治療提供新途徑。由于阿爾茨海默病的發(fā)病機(jī)制尚不完全明確，治療上也缺乏主動(dòng)有效的干預(yù)手段，因此基因治療已成為治療包括阿爾茨海默病在內(nèi)的神經(jīng)退行性疾病的研究靶點(diǎn)。基因治療的關(guān)鍵技術(shù)之一是有效的siRNA序列設(shè)計(jì)和篩選。靶基因不同位點(diǎn)的siRNA作用效果差異很大，可能與siRNA的堿基分布、兩端自由能大小等有關(guān)。關(guān)鍵技術(shù)之二是怎樣將目的基因轉(zhuǎn)入靶細(xì)胞并持續(xù)表達(dá)，這就需要選擇有效安全的基因轉(zhuǎn)染載體。目前基因轉(zhuǎn)染載體主要分為非病毒載體和病毒載體，在眾多的轉(zhuǎn)染載體中，只有慢病毒載體能高效感染分裂期和非分裂期細(xì)胞，并把基因整合到靶細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)基因的長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)。多數(shù)實(shí)驗(yàn)證明，慢病毒載體在體內(nèi)應(yīng)用免疫反應(yīng)小，安全性較好，因此慢病毒載體是當(dāng)前基因治療載體研究的熱點(diǎn)。用慢病毒載體介導(dǎo)caspase-3基因RNAi的體內(nèi)外研究，顯示了該技術(shù)策略在內(nèi)源性基因功能研究和基因治療前沿領(lǐng)域的重大意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)中還沒(méi)有適宜的治療阿爾茨海默病的shRNA 基因試劑的問(wèn)題，提供一種用于治療阿爾茨海默病動(dòng)物模型的shRNA試劑盒。本發(fā)明提供的用于治療阿爾茨海默病動(dòng)物模型的shRNA試劑盒是一種以慢病毒為載體的能有效抑制神經(jīng)細(xì)胞caspase-3基因表達(dá)的shRNA藥物。本發(fā)明所提供的試劑盒中包括有特異性抑制caspase-3基因的shRNA慢病毒表達(dá)質(zhì)粒載體濃縮液200μ ，陰性對(duì)照的shRNA慢病毒表達(dá)質(zhì)粒載體濃縮液200μ 。其中，所述的特異性抑制caspase-3基因的shRNA慢病毒表達(dá)質(zhì)粒載體由抑制 caspase-3基因表達(dá)的siRNA構(gòu)建，抑制caspase-3基因表達(dá)的siRNA由21個(gè)核苷酸組成， 其序列為5’-GAGTCTGACTGGAAAGCCGAA-3’。該基因序列的方向從左至右為5’端至3’端， 自5’端的第1至第19位核苷酸為核糖核苷酸，第20至第21位核苷酸為脫氧核糖核苷酸。所述特異性抑制caspase-3基因的shRNA慢病毒表達(dá)質(zhì)粒載體的構(gòu)建方法是設(shè)計(jì)上述特異性抑制caspase-3 siRNA序列，合成針對(duì)caspase-3基因的shRNA序列，其序列為
正義鏈5' -TGAGTCTGACTGGAAAGCCGAATTCAAGAGATTCGGCTTTCCAGTCAGAC TCTTTTTTC-3，；
反義鏈5' -TCGAGAAAAAAGAGTCTGACTGGAAAGCCGAATCTCTTGAATTCGGCTTT CCAGTCAGACTCA-3'；
退火形成兩端含酶切位點(diǎn)粘端的雙鏈DNA，與經(jīng)I和損ο I雙酶切回收的 pFU-GW-RNAi載體連接，以連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5 α感受態(tài)細(xì)胞，培養(yǎng)，對(duì)克隆產(chǎn)物進(jìn)行PCR鑒定、DNA測(cè)序，鑒定陽(yáng)性克隆即為構(gòu)建成功的特異性抑制caspase-3基因的shRNA 慢病毒表達(dá)質(zhì)粒載體，用包裝質(zhì)粒PGC-LV載體、pHelper 1. O載體和pHelper 2. O載體共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，收集富含慢病毒顆粒的細(xì)胞上清液，濃縮后得到高滴度的慢病毒濃縮液。本發(fā)明所提供的以慢病毒為載體的caspase-3 shRNA試劑盒可用于阿爾茨海默病動(dòng)物模型的基因治療。該shRNA序列或由此得到的試劑通過(guò)某種方式進(jìn)入到動(dòng)物模型體內(nèi)時(shí)，可以比以往任何手段更高效、特異、方便的抑制疾病相關(guān)蛋白的表達(dá)，使有關(guān)疾病基因發(fā)生沉默，從而達(dá)到治療的目的，其優(yōu)勢(shì)在于不損傷正常細(xì)胞功能，其序列特異性及基因抑制作用的強(qiáng)大性是其他藥物難以匹敵的。本發(fā)明針對(duì)caspase-3基因序列設(shè)計(jì)合成出的shRNA，經(jīng)QRT-PCR及免疫組織化學(xué)法檢測(cè)，可以有效抑制caspase-3基因表達(dá)，從而顯著降低神經(jīng)細(xì)胞的凋亡和壞死，并在原代培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞上驗(yàn)證了設(shè)計(jì)合成并篩選出的以病毒為載體的caspase-3 shRNA對(duì)神經(jīng)細(xì)胞凋亡的抑制作用。本發(fā)明所提供的caspase-3 shRNA試劑盒不但可以用于阿爾茨海默病動(dòng)物模型的基因治療，也可以用于體外培養(yǎng)細(xì)胞的RNAi實(shí)驗(yàn)，或者用于體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。對(duì)動(dòng)物腦神經(jīng)細(xì)胞損傷和原代培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞損傷的抑制作用，可以降低損傷神經(jīng)細(xì)胞的凋亡、壞死率、改善動(dòng)物腦神經(jīng)細(xì)胞的學(xué)習(xí)記憶功能損傷和降低阿爾茨海默相關(guān)標(biāo)志蛋白的表達(dá)。


圖1為pGCsiL-GFP質(zhì)粒載體圖譜。圖2為pFU-GW-RNAi質(zhì)粒載體圖譜。圖3為酶切電泳圖譜。圖4為瓊脂糖凝膠電泳圖片。圖5為pGC-LV載體圖譜。圖6為pHelper 1. 0載體圖譜。圖7為pHelper 2. 0載體圖譜。圖8為各組c-caspase-3蛋白表達(dá)情況。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 特異性shRNA序列的設(shè)計(jì)合成。根據(jù)caspase-3基因序列(NM_009810)，應(yīng)用Ambion公司的RNA干擾設(shè)計(jì)軟件，設(shè)計(jì)caspase-3基因特異性siRNA序列為正義鏈5，-GAGTCTGACTGGAAAGCCGAA-3， 反義鏈5，-TTCGGCTTTCCAGGAAGACTC-3，。并通過(guò)BLAST同源性分析，排除了非特異性抑制其他基因序列的可能。caspase-3 siRNA及其陰性對(duì)照的序列為
權(quán)利要求
1.一種用于治療阿爾茨海默病動(dòng)物模型的ShRNA試劑盒，其特征是所述的試劑盒中包括有特異性抑制caspase-3基因的shRNA慢病毒表達(dá)質(zhì)粒載體濃縮液和陰性對(duì)照的shRNA 慢病毒表達(dá)質(zhì)粒載體濃縮液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于治療阿爾茨海默病動(dòng)物模型的shRNA試劑盒，其特征是所述的特異性抑制caspase-3基因的shRNA慢病毒表達(dá)質(zhì)粒載體中，shRNA的序列為正義鏈5' -TGAGTCTGACTGGAAAGCCGAATTCAAGAGATTCGGCTTTCCAGTCAGAC TCTTTTTTC-3，；反義鏈5' -TCGAGAAAAAAGAGTCTGACTGGAAAGCCGAATCTCTTGAATTCGGCTTT CCAGTCAGACTCA-3’。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于治療阿爾茨海默病動(dòng)物模型的shRNA試劑盒，其特征是所述的特異性抑制caspase-3基因的shRNA慢病毒表達(dá)質(zhì)粒載體由抑制caspase-3基因表達(dá)的siRNA構(gòu)建，該抑制caspase-3基因表達(dá)的siRNA的序列為5’ -GAGTCTGACTGGAAAGC CGAA-3，。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于治療阿爾茨海默病動(dòng)物模型的shRNA試劑盒，其特征是所述的特異性抑制caspase-3基因的shRNA慢病毒表達(dá)質(zhì)粒載體采用以下方法構(gòu)建設(shè)計(jì)序列為5，-GAGTCTGACTGGAAAGCCGAA-3，的siRNA序列，合成所述針對(duì)caspase-3基因的 shRNA序列，退火形成兩端含酶切位點(diǎn)粘端的雙鏈DNA，與黽Hpa I和損ο I雙酶切回收的 pFU-GW-RNAi載體連接，以連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5 α感受態(tài)細(xì)胞，培養(yǎng)，對(duì)克隆產(chǎn)物進(jìn)行PCR鑒定、DNA測(cè)序，鑒定陽(yáng)性克隆即為構(gòu)建成功的特異性抑制caspase-3基因的shRNA 慢病毒表達(dá)質(zhì)粒載體，用包裝質(zhì)粒PGC-LV載體、pHelper 1. O載體和pHelper 2. O載體共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，收集富含慢病毒顆粒的細(xì)胞上清液，濃縮后得到高滴度的慢病毒濃縮液。
全文摘要
一種用于治療阿爾茨海默病動(dòng)物模型的shRNA試劑盒，試劑盒中包括有特異性抑制caspase-3基因的shRNA慢病毒表達(dá)質(zhì)粒載體濃縮液和陰性對(duì)照的shRNA慢病毒表達(dá)質(zhì)粒載體濃縮液，其中的shRNA具有序列表中SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2的序列。該shRNA序列或由此得到的試劑通過(guò)某種方式進(jìn)入到動(dòng)物模型體內(nèi)時(shí)，可以比以往任何手段更高效、特異、方便的抑制疾病相關(guān)蛋白的表達(dá)，使有關(guān)疾病基因發(fā)生沉默，從而達(dá)到治療的目的，因此，本發(fā)明的試劑盒可用于阿爾茨海默病動(dòng)物模型的基因治療。
文檔編號(hào)A61K49/00GK102218146SQ201110107038
公開(kāi)日2011年10月19日 申請(qǐng)日期2011年4月27日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月27日
發(fā)明者張勤麗, 教霞, 李娜, 李美琴, 牛僑 申請(qǐng)人:山西醫(yī)科大學(xué)