專利名稱：具酪氨酸酶抑制活性的化合物及制備方法與用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，具體地說(shuō)涉及從中藥桑葉中提取的具有酪氨酸酶抑制活性的化合物及其制備方法和制藥用途。
背景技術(shù)：
桑葉，又名“鐵扇子”，屬于?？粕僦参锷Morus alba L.)。桑葉作為藥用始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，其味苦、性寒，具有補(bǔ)血、疏風(fēng)、散熱、益肝通氣、降壓利尿等功效?，F(xiàn)代大量的藥理學(xué)研究證明了桑葉具有降血糖、降血壓、降血脂、清除自由基、抗衰老、抗炎、抗菌、 抗病毒和抗癌等諸多藥理作用。桑葉化學(xué)成分有黃酮、留體、香豆素、揮發(fā)油、生物堿、氨基酸、有機(jī)酸、維生素和多糖等。酪氨酸酶作為黑色素合成的關(guān)鍵酶，其異常過(guò)量表達(dá)可導(dǎo)致人體的色素沉著性疾病及黑色素瘤等。因此，酪氨酸酶抑制劑可作為黑色素抑制劑應(yīng)用于醫(yī)藥等領(lǐng)域。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一類具有酪氨酸酶抑制活性的化合物，是從桑葉中提取的具有酪氨酸酶抑制活性的六種多酚類化合物，包括(2S)-Euchrenone a7，桑辛素 M-6- β -D-吡喃葡萄糖苷[Moracin M 6-(β -D-glucopyranoside) ]，(2S) -7-羥基-8-羥乙基-4，-甲氧基黃烷_(kāi)2，-0- β -D-吡喃葡萄糖苷[(2S) -7-hydroxyl-8-hydroxyethyl-4'-methoxylflavane-2' _0_ β -D-glucopyranoside]，(2S) 甲氧基 _8_ 羥乙基-4，-羥基黃烷-2，-0- β -D-吡喃葡萄糖苷[(2S) -7-methoxyl-8-hydroxyethyl-4' -hydroxylf Iavane-2，-0- β -D-glucopyranoside]，(2S) -8-羥乙基-7，4，- 二甲氧基黃烷 _2，-0- β -D-吡喃葡萄糖昔[(2S) -8-hydroxyethyl-7, 4' -dimethoxylf lavane-2' -0- β -D-glucopyranosid
e]，桑辛素D (Moracin D)，其結(jié)構(gòu)如下:
權(quán)利要求
1.一類具有酪氨酸酶抑制活性的化合物，其特征在于，所述化合物包括 (2S)-Euchrenone a7，桑辛素D，桑辛素M-6-β-D-吡喃葡萄糖苷，(2S)-7-羥基-8-羥乙基-4’ -甲氧基黃烷_(kāi)2’ -O- β -D-吡喃葡萄糖苷，0 -7-甲氧基-8-羥乙基-4’ -羥基黃烷-2’-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和(2S)-8-羥乙基-7，4’-二甲氧基黃烷-2’-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一類具有酪氨酸酶抑制活性的化合物的制備方法，其特征在于，通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn)(1)將桑葉用70%乙醇溶液回流提取，提取物減壓濃縮至浸膏； (2)將浸膏混懸于適量水中，用石油醚脫脂，乙酸乙酯萃取；(3)將乙酸乙酯萃取部分用正相硅膠分離，洗脫劑為體積比為100:(Γ 90:10的石油醚和乙酸乙酯，體積比為82:18的石油醚和乙 酸乙酯，體積比為78 22飛5 35的石油醚和乙酸乙酯，體積比為60 40的石油醚和乙酸乙酯及乙酸乙酯；(4)分別收集體積比為82:18的石油醚和乙酸乙酯洗脫液、體積比為 60:40的石油醚和乙酸乙酯洗脫液及乙酸乙酯洗脫液，濃縮干燥后得樣品，用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的化合物；制備色譜的分離條件色譜柱為制備柱，流動(dòng)相為水和甲醇，梯度洗脫。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一類具有酪氨酸酶抑制活性的化合物的制備方法，其特征在于，(2S)-Euchrenone a7化合物通過(guò)以下步驟獲得步驟(4)收集體積比為60:40的石油醚和乙酸乙酯洗脫液，濃縮干燥后得樣品，用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品，制備色譜的分離條件色譜柱為制備柱Agilent Zorbax SB-Cw柱250X21.2 mm, 7 μ m，流動(dòng)相為水 A 和甲醇 B，梯度洗脫程序如下0 min,30%B ；20 min,50%B ；27 min,50%B ；28 min,60%B ；35 min，60%B ；36 min，70%B ；50 min，70%B ；60 min，80%B ；流速10ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)210nm，收集48. 5 min的色譜峰，減壓回收溶劑，即得。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一類具有酪氨酸酶抑制活性的化合物的制備方法，其特征在于，桑辛素D化合物通過(guò)以下步驟獲得步驟(4)收集體積比為82:18的石油醚和乙酸乙酯洗脫液，濃縮干燥后得樣品，用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件 色譜柱Agilent Zorbax SB-C18柱250X21.2 mm, 7 μ m，流動(dòng)相為水A和甲醇B，梯度洗脫程序如下0 min，5%B;5 min,30%B ；27 min,30%B ；40 min,35%B ；41 min,67%B ；65 min, 67%B ；80 min,80%B ；流速10ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)210nm，收集72. 5min的色譜峰，減壓回收溶劑，即得。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一類具有酪氨酸酶抑制活性的化合物的制備方法，其特征在于，桑辛素M-6-i3-D-吡喃葡萄糖苷化合物通過(guò)以下步驟獲得步驟(4)收集乙酸乙酯洗脫液，濃縮干燥后得樣品，用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱Agilent Zorbax SB-C18柱250X21.2 mm, 7 μ m，流動(dòng)相為水A和甲醇B，梯度洗脫程序如下0 min,25%B ；32 min,44%B ；47 min,44%B ；48 min,55%B ；71 min,60%B ；75 min, 100%B ；流速10ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)210nm，收集31. 9min的色譜峰，減壓回收溶劑，即得。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一類具有酪氨酸酶抑制活性的化合物的制備方法，其特征在于，(2S)-7-羥基-8-羥乙基-4’ -甲氧基黃烷_(kāi)2，-O-β-D-吡喃葡萄糖苷化合物通過(guò)以下步驟獲得步驟(4)收集乙酸乙酯洗脫液，濃縮干燥后得樣品，用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱=Agilent Zorbax SB-C18柱250X21.2 mm, 7 μ m，流動(dòng)相為水A和甲醇B，梯度洗脫程序如下0 min,25%B ；32 min,44%B ；47 min,44%B ；-48 min,55%B ；71 min,60%B ；75 min，100%B，流速10ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)210nm ；收集 58. 0 min的色譜峰，減壓回收溶劑，即得。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一類具有酪氨酸酶抑制活性的化合物的制備方法，其特征在于，甲氧基-8-羥乙基-4’ -羥基黃烷-2，-O-β-D-吡喃葡萄糖苷化合物通過(guò)以下步驟獲得步驟(4)收集乙酸乙酯洗脫液，濃縮干燥后得樣品，用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱Agilent Zorbax 38-(^8柱250X21.2 mm, 7 μ m，流動(dòng)相為水A和甲醇B，梯度洗脫程序如下0 min,25%B ；32 min,44%B ；47 min,44%B ； 48 min，55%B ；71 min，60%B ；75 min, 100%B ；流速:10ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng):210nm，收集 64. 7 min的色譜峰，減壓回收溶劑，即得。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一類具有酪氨酸酶抑制活性的化合物的制備方法，其特征在于，(2S)-8-羥乙基-7，4’-二甲氧基黃烷-2’-O-β-D-吡喃葡萄糖苷化合物通過(guò)以下步驟獲得步驟(4)收集乙酸乙酯洗脫液，濃縮干燥后得樣品，用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱Agilent Zorbax SB-C18柱250X21.2 mm, 7 μ m，流動(dòng)相為水A和甲醇B，梯度洗脫程序如下0 min,25%B ；32 min,44%B ；47 min,44%B ； 48 min，55%B ；71 min，60%B ；75 min, 100%B ；流速:10ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng):210nm，收集 76. 6 min的色譜峰，減壓回收溶劑，即得。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一類具有酪氨酸酶抑制活性的化合物在制備預(yù)防和治療黑色素合成異常導(dǎo)致的人體色素沉著性疾病、黑色素瘤以及其它需要抑制酪氨酸酶活性的病癥藥物中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物由OS)-Euchrenonea7、 桑辛素D、桑辛素M-6-i3-D-卩比喃葡萄糖苷、(2S)-7-羥基-8-羥乙基-4’-甲氧基黃烷-2’ -O-β-D-吡喃葡萄糖苷、(2S)-7-甲氧基-8-羥乙基-4’ -羥基黃烷_(kāi)2’ -O-β-D-吡喃葡萄糖苷、(2S)-8-羥乙基-7，4’-二甲氧基黃烷-2’-O-β-D-吡喃葡萄糖苷中的一種加入藥劑學(xué)上可接受的輔料，按照藥劑學(xué)上記載的制劑制備方法制成。
全文摘要
本發(fā)明提供一類具有酪氨酸酶抑制活性的化合物，包括六種從桑葉中提取的具有酪氨酸酶抑制活性的多酚類化合物。將藥材經(jīng)乙醇水溶液加熱提取，濃縮，硅膠柱分離，洗脫，洗脫液濃縮干燥，再用制備液相色譜繼續(xù)分離，收集溶液，溶液濃縮干燥后得到樣品并進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。本發(fā)明還提供了從桑葉中分離上述多酚類化合物的方法。本發(fā)明提供的六種多酚類化合物具有較強(qiáng)的酪氨酸酶抑制活性，能夠有效預(yù)防和治療黑色素合成異常導(dǎo)致的人體色素沉著性疾病、黑色素瘤以及其它需要抑制酪氨酸酶活性的病癥，可用于制備治療此類疾病的藥物。
文檔編號(hào)A61K31/352GK102153534SQ20111005906
公開(kāi)日2011年8月17日 申請(qǐng)日期2011年3月13日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月13日
發(fā)明者張玉峰, 程翼宇, 范驍輝, 邵青 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)