專利名稱：一種降香有效組分的制備方法與用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬中藥提取物領(lǐng)域，涉及一種治療心血管疾病的中藥提取物，具體地說涉 及從降香中提取的有效組分的制備方法與用途，該有效組分主要含有異甘草素、美迪紫檀 素、黃檀素和3’ -甲氧基紫黃檀素等幾種化合物。
背景技術(shù)：
心血管疾病是危害人類健康的第一殺手，近年來，隨著我國人口老年化以及人們 工作、生活、飲食結(jié)構(gòu)及環(huán)境等的變化，冠心病等心腦血管疾病的發(fā)生率也逐年增多，嚴(yán)重 威脅著人民的身心健康。天然產(chǎn)物中許多活性物質(zhì)具有抗心肌缺血、缺氧作用，其中一些已 開發(fā)成治療冠心病和心絞痛的新藥。因而從天然產(chǎn)物中尋找具有抗心肌缺血、缺氧生理活 性的有效物質(zhì)，是發(fā)現(xiàn)、開發(fā)新藥的有效途徑之一。我國藥用生物資源十分豐富，其生理活 性物質(zhì)是研究和發(fā)現(xiàn)新藥先導(dǎo)化學(xué)物，開發(fā)新藥的天然寶庫。目前，我國從天然產(chǎn)物中提取 活性物質(zhì)，用于開發(fā)成治療冠心病、安全性好、毒性低的新藥還很少，從天然產(chǎn)物中提取活 性物質(zhì)，開發(fā)成具有抗心肌缺血，用于治療冠心病和心絞痛的新藥，具有重要應(yīng)用價(jià)值和廣 闊發(fā)展前景。降香為豆科植物降香檀Dalbergia odorifera T. Chen樹干和根的干燥心材。 辛，溫，歸肝、脾經(jīng)。具有行氣活血，止痛，止血的功效，含多種黃酮類成分，屬異黃酮的有 刺芒柄花素，鮑迪木醌，3’-甲氧基大豆素；屬黃烷酮的有甘草甙元；屬查耳酮的有異甘 草甙元，2’ -0-甲基異甘草甙元；屬異黃烷的有(3R)-驢食草酚，5’ -甲氧基驢食草酚，3’， 8-二羥基驢食草酚，消旋的微凸劍葉莎酚，右旋的劍葉莎屬異黃烷，消旋的異劍葉莎屬異黃 烷，降香異黃烯；屬異黃烷酮的有(3R)-2'，3’ -7-三羥基-4’ -甲氧基異黃烷酮。還含雙異 黃烷類成分(3R, 4R)-反式-2’，3’，7-三羥基-4’ -申氧基_4 [ (3R) -2’，7- 二羥基-4’ -甲 氧基異黃烷_5’ -基]異黃烷，(3R，4R)-反式2’，7- 二羥基-4’ -甲氧基_4_ [ (3R) -2’，7- 二 羥基-4’-甲氧基異黃烷-5’-基]異黃烷，(3R，4R)_反式-3’下，7-二羥基-2’，4’ - 二甲 氧基-4 [ (3R) 2’，7- 二羥基-4’ -甲氧基異黃烷-5’ -基]異黃烷，7-羥基-4’ -甲氧基-2’， 5’ - 二氧-4- [ (3R) -2，，7- 二羥基-4’ -甲氧基異黃烷_5’ -基〕異黃烷，(3R，4R)-反式-3’， 7- 二羥基-2’，4’ - 二甲氧基-4-[ (2S) -4’，5，7-三羥基黃烷酮_6_基]異黃烷，2，3- 二去 氧-2’，7- 二羥基-4’ -甲氧基-3- [2’，7- 二羥基-4’ -甲氧基異黃烷_6_基]黃烷，2，3- 二 去氧-2’，7- 二羥基-4’ -甲氧基-3-[2’，7- 二羥基-4’ -甲氧基異黃烷_5’基]黃烷，2， 3- 二去氧-2’，7- 二羥基-4’ -甲氧基-3- (2’，7- 二羥基-4’ -甲氧基異黃烷_5’基)黃酮。 又含紫檀烷類成分美迪紫檀素，左旋的9-0-甲基尼森香豌豆紫檀酚，左旋的白香草木犀 紫檀酚C及D，左旋的季香紫檀素。還含肉桂基苯酚類成分鈍葉黃檀蘇合香烯，異微凸劍 葉莎蘇合香烯。又含2-羥基-3，4- 二甲氧基苯甲酸甲酯，2’，6- 二羥基-4’ -甲氧基-2-芳 基苯并呋喃。降香為活血散瘀中藥，實(shí)驗(yàn)表明其對(duì)高分子右旋糖酐注射所形成的高粘滯血癥之 血瘀證動(dòng)物能使全血粘度顯著降低，尤以降低高切速下全血粘度效果為著，還可降低血漿粘度，但對(duì)紅細(xì)胞聚集性無顯著影響，降香還有降低血脂作用，其降低血瘀證動(dòng)物血液粘度 可能與其降脂作用有關(guān)，而其降血脂作用的機(jī)制則與能抑制HMG輔酶A還原酶有關(guān)。2-羥 基-3，4-二甲氧基苯甲酸甲酯、羥基鈍葉黃檀蘇合香烯、異微凸劍葉莎蘇合香烯另有試驗(yàn) 表明所含某些成分還能顯著抑制血小板聚集。另外，降香為冠心II號(hào)方組成藥物之一，現(xiàn)代 藥理實(shí)驗(yàn)表明單味降香可顯著促進(jìn)小鼠腸系膜實(shí)驗(yàn)性微循環(huán)障礙血流的恢復(fù)、以及微動(dòng)脈 收縮后的恢復(fù)及局部微循環(huán)的恢復(fù)，其抗腎上腺素所致微動(dòng)脈的收縮作用較強(qiáng)，對(duì)推遲血 液停流的作用較弱。冠心II號(hào)具的顯著降壓作用，其中降香因抑制血管緊張素II的受體而 發(fā)揮作用。降香具有以上對(duì)心血管系統(tǒng)的明顯藥理作用，因此，從降香中分離出有效組分， 開發(fā)出治療心血管疾病的現(xiàn)代中藥具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種降香有效組分的制備方法，通過以下步驟實(shí)現(xiàn)將降 香藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加熱提取，藥渣加乙醇水溶液提取，將提取液濃縮成浸 膏，用反相硅膠柱對(duì)其進(jìn)行分離，首先用低濃度甲醇作為流動(dòng)相，得洗脫液I，棄之，然后改 用高濃度甲醇作為流動(dòng)相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品；用制備液相色譜 繼續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱為制備柱，流動(dòng)相為水和乙腈，梯度洗 脫。優(yōu)選的，本發(fā)明的降香有效組分制備方法，包括下列步驟取降香藥材，將其粉碎 后加入體積比為1:1的乙酸乙酯和乙醇，加熱回流1小時(shí)，提取2次，濾液合并得提取液I。 藥渣加入70%乙醇，加熱回流1小時(shí)，提取2次，濾液合并得提取液II，將提取液II濃縮 成浸膏，用50%甲醇溶解浸膏，采用ODS-C18柱對(duì)其進(jìn)行分離，首先用5%甲醇作為流動(dòng)相， 得洗脫液I，然后改用70%甲醇作為流動(dòng)相，得洗脫液II，濃縮干燥后得樣品；用制備液相 色譜繼續(xù)分離得到的樣品制備色譜的分離條件色譜柱為制備柱(ZORBAX Sb-C18; 21. 2mm χ 250mm, 7 μω ),流動(dòng)相為水A和乙腈B，梯度洗脫程序如下0min時(shí)，流動(dòng)相A為85%的 水，流動(dòng)相B為15%的乙腈溶液；60min時(shí)，流動(dòng)相A為40%的水，流動(dòng)相B為60%的乙腈溶 液；流速為lOml/min，柱溫為室溫；樣品經(jīng)制備液相色譜分離，在48. 2-53. Smin時(shí)間段收集 溶液，溶液經(jīng)濃縮干燥后得到有效組分，主要含有異甘草素、Sativanone、黃檀素和3’ -甲 氧基紫黃檀素。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述制備獲得的降香有效組分在制備治療、預(yù)防心血 管疾病的藥物中的應(yīng)用。經(jīng)藥理實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明提供的降香有效組分對(duì)心肌細(xì)胞有一定 的保護(hù)作用。本發(fā)明的降香有效組分可以作為活性成分，加入藥劑學(xué)上接受的輔料，按照藥劑 學(xué)上記載的制劑的制備方法制成制劑。所述的制劑包括注射液、滴注液、粉針劑、顆粒劑、片劑、沖劑、散劑、口服液、糖衣 片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口含劑、顆粒劑、丸劑、膏劑、 丹劑、噴霧劑、滴丸劑、崩解劑、口崩片、微丸等。本發(fā)明的降香有效組分及其制劑可在制備治療、預(yù)防心血管疾病藥物中應(yīng)用。本 發(fā)明提供的制備方法設(shè)計(jì)合理，能快速準(zhǔn)確地得到有效成分，在生產(chǎn)中更易于藥物的質(zhì)量 控制。


圖1是降香有效組分的HPLC色譜圖，1為異甘草素，2為Sativanone，3為黃檀 素，4為3-甲氧基紫黃檀素。
具體實(shí)施例方式下面將結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)內(nèi)容和有益效果，該實(shí)施例僅用 于說明本發(fā)明而非對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例一降香有效組分的制備
將降香藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加熱提取得提取液I，棄之。藥渣加入乙醇水 溶液，加熱提取得提取液11，將提取液11濃縮成浸膏，用50%甲醇溶解浸膏，采用ODS-C18柱 對(duì)其進(jìn)行分離，首先用低濃度甲醇作為流動(dòng)相，得洗脫液I，然后改用高濃度甲醇作為流動(dòng) 相，得洗脫液II，濃縮干燥后得樣品；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品，經(jīng)制備液相色 譜分離，在時(shí)間段48. 2-53. Smin收集溶液，濃縮干燥后得到有效組分。實(shí)施例二降香有效組分的制備
取降香藥材250g，將其粉碎后加入體積比為1:1的乙酸乙酯和乙醇，加熱回流1小時(shí)， 提取2次，濾液合并得提取液I。藥渣加入70%乙醇溶液，加熱回流1小時(shí)，提取2次，濾液 合并得提取液II，將提取液II濃縮成浸膏，用50%甲醇溶液溶解浸膏，采用ODS-Cw柱對(duì) 其進(jìn)行分離，首先用5%甲醇溶液作為流動(dòng)相，得洗脫液I，然后改用70%甲醇溶液作為流動(dòng) 相，得洗脫液II，濃縮干燥后得樣品；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品制備色譜的分 離條件色譜柱為制備柱(ZORBAX Sb-C18; 21. 2mm χ 250mm, 7 μιη )，流動(dòng)相為水A和乙腈 B，梯度洗脫程序如下0min時(shí)，流動(dòng)相A為85%的水，流動(dòng)相B為15%的乙腈溶液；60min 時(shí)，流動(dòng)相A為40%的水，流動(dòng)相B為60%的乙腈溶液；流速為lOml/min，柱溫為室溫；樣 品經(jīng)制備液相色譜分離，在時(shí)間段48. 2-53. Smin收集溶液，溶液經(jīng)濃縮干燥后得到有效組 分。主要含有異甘草素、Sativanone、黃檀素和3’ -甲氧基紫黃檀素。實(shí)施例三降香有效組分的分析
色譜條件色譜柱Agilent Zorbax6廁X 150 mm,^ Pm)；采用梯度洗
脫，流動(dòng)相A相為0. 2%冰醋酸水溶液，流動(dòng)相B相為含0. 2%冰醋酸的乙腈溶液；梯度洗脫 程序如下0分鐘時(shí)，流動(dòng)相A為90%的0. 2%冰醋酸水溶液、流動(dòng)相B為10%的0. 2%冰醋 酸的乙腈溶液；20分鐘時(shí)，流動(dòng)相A為70%的0. 2%冰醋酸水溶液、流動(dòng)相B為30%的0. 2% 冰醋酸的乙腈溶液；30分鐘時(shí)，流動(dòng)相A為50%的0. 2%冰醋酸水溶液、流動(dòng)相B為50%的 0.2%冰醋酸的乙腈溶液；35分鐘時(shí)，流動(dòng)相A為50%的0. 2%冰醋酸水溶液、流動(dòng)相B為50% 的0. 2%冰醋酸的乙腈溶液；流速0. 5mL/min ；檢測波長2 nm ；柱溫30°C ；進(jìn)樣量5 μ L。 色譜圖見圖1，主要含有異甘草素、Sativanone、黃檀素和3’-甲氧基紫黃檀素。供試品溶液的制備稱取本品，用甲醇溶液溶解在容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻， 即得。測定方法精密吸取供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，即得。實(shí)施例四滴丸制劑的制備
取降香有效組分0. 5g與10. 5g聚乙二醇-20000混合均勻，加熱熔融，化料后移至滴丸滴灌中，藥液滴至6、V液體石蠟中，除油，制得滴丸400粒。實(shí)施例五凍干粉針劑的制備
取降香有效組分0. 5g、葡萄糖4. 5g、硫代硫酸鈉0. 9g和蒸餾水1000ml，上述組分混合 均勻后，分裝400支，冷凍干燥，即得。實(shí)施例六降香有效組分的活性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn) 1.降香組分對(duì)H》2損傷心肌細(xì)胞的保護(hù)作用
體外培養(yǎng)H9C2心肌細(xì)胞，培養(yǎng)液為DMEM(高糖)+10%FBS (G) +1%非必需氨基酸+0. 1%雙 抗。取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞置于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上，恒溫培養(yǎng)M h后，加入200 μ mol/mL H2O2 損傷心肌細(xì)胞30 min,再加入終濃度為50 μ g/mL的降香組分孵育M h，采用MTT法測定細(xì) 胞活力。結(jié)果表明，該組分對(duì)H2O2損傷心肌細(xì)胞的保護(hù)率為18.5 %。2.降香組分對(duì)缺氧復(fù)氧損傷心肌細(xì)胞的保護(hù)作用
體外培養(yǎng)H9C2心肌細(xì)胞，培養(yǎng)液為DMEM(高糖)+10%FBS (G) +1%非必需氨基酸+0. 1%雙 抗。取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞置于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上，恒溫培養(yǎng)M h后，在缺氧小室中培養(yǎng)6 h。 缺氧結(jié)束后，取出細(xì)胞培養(yǎng)板加入經(jīng)無糖Hank’ s稀釋的終濃度為50 μ g/mL的降香組分，在 正常培養(yǎng)條件下孵育6 h，取細(xì)胞培養(yǎng)上清液測定乳酸脫氫酶(LDH)含量。結(jié)果表明，該組 分對(duì)缺氧復(fù)氧損傷的心肌細(xì)胞保護(hù)率為21. 6 %。
權(quán)利要求
1.一種降香有效組分，其特征在于，通過以下步驟獲得將降香藥材粉碎后加入乙 酸乙酯和乙醇，加熱提取，藥渣加乙醇水溶液提取，將提取液濃縮成浸膏，用反相硅膠柱對(duì) 其進(jìn)行分離，首先用低濃度甲醇作為流動(dòng)相，得洗脫液I，棄之，然后改用高濃度甲醇作為流 動(dòng)相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品； 制備色譜的分離條件色譜柱為制備柱，流動(dòng)相為水和乙腈，梯度洗脫；收集溶液，溶液經(jīng) 濃縮干燥后得到有效組分，該有效組分中主要含有異甘草素、Sativanone、黃檀素和3’ -甲 氧基紫黃檀素。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降香有效組分，其特征在于，低濃度甲醇為5%的甲醇 溶液，高濃度甲醇70 %的甲醇溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降香有效組分，其特征在于，通過以下步驟獲得取降 香藥材，將其粉碎后加入體積比為1:1的乙酸乙酯和乙醇，加熱回流1小時(shí)，提取2次，濾液 合并得提取液I ；藥渣加入70%乙醇，加熱回流1小時(shí)，提取2次，濾液合并得提取液II，將 提取液II濃縮成浸膏，用50%甲醇溶解浸膏，采用ODS-C18柱對(duì)其進(jìn)行分離，首先用5%甲醇 作為流動(dòng)相，得洗脫液I，然后改用70%甲醇作為流動(dòng)相，得洗脫液II，濃縮干燥后得樣品； 用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品制備色譜的分離條件色譜柱為制備柱(Z0RBAX Sb -C18; 21. 2mm250mm, 7 μηι )，流 動(dòng)相為水A和乙腈B，梯度洗脫程序如下0min，15%B ；60min,60%B ；流速為10ml/min，柱溫 為室溫；樣品經(jīng)制備液相色譜分離，在48. 2-53. Smin時(shí)間段收集溶液，溶液經(jīng)濃縮干燥后 得到有效組分；根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的一種降香有效組分在制備治療心血管疾病的藥物中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物由降香有效組分加入藥劑學(xué)上 可接受的輔料，按照藥劑學(xué)上記載的制劑制備方法制成。
5.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的制劑包括液體制劑或固體制劑。
全文摘要
本發(fā)明提供一種降香有效組分，該有效組分主要含有異甘草素、美迪紫檀素、黃檀素和3'-甲氧基紫黃檀素。藥材通過加熱提取，濃縮，硅膠柱分離，洗脫，洗脫液濃縮干燥，再用液相色譜繼續(xù)分離，收集溶液，溶液經(jīng)濃縮干燥后得到有效組分。本發(fā)明提供的降香有效組分可在制備治療、預(yù)防心血管疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明方法設(shè)計(jì)合理，能快速準(zhǔn)確地得到有效成分，在生產(chǎn)中更易于藥物的質(zhì)量控制。
文檔編號(hào)A61P9/00GK102119957SQ20111005897
公開日2011年7月13日 申請(qǐng)日期2011年3月11日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月11日
發(fā)明者李云飛, 王毅, 程翼宇, 葛志偉 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)