專利名稱：一種胃部靶向藥物載體及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物載體制備領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及一種胃部靶向藥物載體及其制備方法。
背景技術(shù)：
殼聚糖是由葡糖胺和N-乙?；咸前饭簿畚锝M成的多糖，是甲殼素脫乙?；漠a(chǎn)物，殼聚糖由于分子鏈上具有游離氨基而可以溶于稀酸溶液，因此比甲殼素具有更為廣泛的用途。殼聚糖作為一種陽離子的生物高聚物，具有生物粘附性、生物相容性和生物降解性，而且其降解產(chǎn)物無毒、無免疫原性、無致癌性，殼聚糖的這些獨特性使其成為應(yīng)用前景廣闊的生物醫(yī)藥載體，在文獻Chitosan-cellulose compositemembranefor affinity purification of biopolymers and immunoadsorption, JournalofMembrane Science,2002,197 :185-197.L. Yang, ff.ff. Hsiao, P. Chen. ；Preparationofchitosan ethylcellulose complex microcapsule and its application incontrolled release ofVitamin D2, Biomaterials, 2002,23 :4469-4473, Xin-Yuan Shi,Tian-ffei Tan, ；Evaluationof the biological properties of soluble chitosanand chitosan microspheres, InternationalJournal of Pharmaceutics,1997,148 231-240. Begona Carreno-Gomez5Ruth Duncan,中均有報道。以殼聚糖及殼聚糖衍生物為材料進行修飾改造制備的殼聚糖季銨鹽，是一種帶正電荷的天然多糖，作為藥物載體很容易粘附到細胞的表面。與殼聚糖相比，殼聚糖季銨鹽不僅具有良好的親水性和水溶性，而且季銨基團的引入大大增加了殼聚糖季銨鹽的促黏膜滲透吸收性([4]Kotze A F，De Leeuw B J, Lueben H L, DeBoer A G, Verhoef J C, Junginger HE. Chitosans forenhanced delivery of therapeuticpeptides across intestinal epithelia In vitroevaluation in Caco-2 cell monolayers. Int. J. Pharm, 1997,159 :243-263) oMurata等在1995年將殼聚糖季銨鹽用于基因載體實驗，可以有效地轉(zhuǎn)染H印G2細胞(Murata JI, OhyaY, Ouchi T. Design of quaternary chitosanconjugate having antennary galactoseresidues as a gene delivery tool. Carbohydr. Polym, 1997, 32 (2) : 105-109)。此外作為一種新型基因載體，Kean對殼聚糖季銨鹽載體的細胞毒性和轉(zhuǎn)染率都進行了研究。結(jié)果表明，與常用的陽離子載體聚賴氨酸相比，在所測試的所有濃度范圍內(nèi)，所有被測的殼聚糖季銨鹽都沒有表現(xiàn)出明顯的細胞毒性。因此，殼聚糖和殼聚糖季銨鹽混合材料的微球是一種帶有正電荷的凝膠性微球，具有很好的PH敏感性、粘附性，而這些特性是胃部靶向載體所具備的特征，所以此類微球有望成為一種應(yīng)用前景廣闊的胃部靶向藥物傳輸載體。殼聚糖微球具有優(yōu)良的生物相容性、生物粘附性和藥物控釋性能。殼聚糖微球由于含有較多的氨基，具有聚陽離子的性質(zhì)，因此它可以和細胞表面帶負電的基團相互作用，與細胞發(fā)生非特異性吸附，從而有利于細胞在殼聚糖微球材料表面的黏附，具有良好的細胞相容性；另外，殼聚糖有較高的親水性，研究表明(Sarah Nsereko, Mansoor Amiji,Loacallized delivery of paglitaxel in solid tumors from biodegradablechitinmicroparticle formulations, Biomaterials, 23 (2002) 2733-2731.)，在稀釋血清中，親水材料比疏水材料更能促進細胞在材料表面的吸附和鋪展，親水材料上的細胞其細胞骨架也更有組織，而且殼聚糖材料有良好的吸水特性，吸水20min后即達飽和，殼聚糖的這種親水凝膠的水膨脹性和多孔性與細胞基質(zhì)極為相似，具有良好的組織相容性。殼聚糖的正電荷與帶負電的粘膜表面通過靜電作用形成分子間引力使其具有粘附特性。殼聚糖的另一個重要特性是可以作為藥物載體，對藥物釋放起到緩釋作用，降低藥物毒性，延長藥物療效(Radi Hejazi, Mansoor Amiji, Chitosan-basedgastrointestinal delivery systems,Journal of Controlled Release, 89 (2003) 151-165.)。如米用殼聚糖對胰島素進行包埋，但是當(dāng)殼聚糖經(jīng)交聯(lián)劑發(fā)生反應(yīng)后，由于其表面的基團和醛基發(fā)生反應(yīng)，就失去這種與細胞之間的非特異性吸附。多肽藥物在陽離子聚合物三維網(wǎng)絡(luò)中的滯留主要是通過簡單的水化和擴散過程或聚合物與藥物離子之間的離子作用完成的。殼聚糖季銨鹽水凝膠微球雖然具有較好的生物粘附性，但其作為胃部給藥載體在胃部酸性環(huán)境中迅速崩解，在酸性釋放介質(zhì)中(pH = 5. O)，由于殼聚糖季銨鹽微球的解離溶解，其中所包埋的藥物也被迅速釋放入周圍介質(zhì)，Ih內(nèi)所包埋的藥物被全部釋放，起不到良好的藥物緩釋性能，而殼聚糖雖然具有良好的PH敏感性，但是其和交聯(lián)劑發(fā)生反應(yīng)后失去靶向作用，因此單獨的使用殼聚糖和殼聚糖季銨鹽無法滿足胃部靶向給藥載體的要求
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種胃部靶向藥物載體。本發(fā)明的再一目的在于提供一種制備胃部靶向藥物載體的方法。根據(jù)本發(fā)明的胃部靶向藥物載體，所述藥物載體原料包括含有殼聚糖、殼聚糖季銨鹽、甘油磷酸鈉的含藥乳液；以及將上述乳液交聯(lián)成微球的交聯(lián)劑。根據(jù)本發(fā)明的胃部靶向藥物載體，所述殼聚糖與殼聚糖季銨鹽的質(zhì)量比為I 0. I 10，殼聚糖和殼聚糖季銨鹽的總質(zhì)量與甘油磷酸鈉的質(zhì)量比為I : I 10，優(yōu)選為I : 0.5 2，其中殼聚糖季銨鹽的季銨化取代度為10% 80%。根據(jù)本發(fā)明的胃部靶向藥物載體，所述交聯(lián)劑為戊二醛、京尼平或環(huán)氧氯，其中交聯(lián)劑與殼聚糖和殼聚糖季銨鹽氨基的摩爾比為I : I 10。本發(fā)明還提供了一種制備胃部靶向藥物載體的方法，所述方法包括以下步驟I)含藥乳液的制備將水溶性藥物溶解在殼聚糖季銨鹽、殼聚糖和甘油磷酸鈉的醋酸水溶液作為水相W，以溶解有乳化劑的的油性物質(zhì)作為油相0，經(jīng)乳化得到W/0型含藥乳液；或者將脂溶性藥物溶于有機溶劑作為內(nèi)油相O1,以溶解有殼聚糖季銨鹽、殼聚糖和甘油磷酸鈉的醋酸水溶液作為水相W，乳化制成Oi/W型初乳液，再以溶解有乳化劑的油性物質(zhì)作為外油相O2，將外油相O2和Oi/W型初乳液乳化得到O1TiWzO2型含藥乳液；2)將步驟I)中W/0型或O1TiWzO2型含藥乳液升溫，使其含有的殼聚糖季銨鹽和甘油磷酸鈉發(fā)生初步交聯(lián)，得到凝膠微球懸浮液，繼續(xù)升溫并加入交聯(lián)劑，發(fā)生第二次交聯(lián)，使凝膠微球固化，并洗滌干燥得到胃部靶向藥物載體。根據(jù)本發(fā)明制備胃部靶向藥物載體的方法，其特征在于，所述步驟I)中殼聚糖、殼聚糖季銨鹽的質(zhì)量比為I : O. I 10，優(yōu)選為I : O. 5 2 ;所述殼聚糖和殼聚糖季銨鹽的總質(zhì)量與甘油磷酸鈉的質(zhì)量比為I : I 10;其中殼聚糖季銨鹽的季銨化取代度為10% 80%。根據(jù)本發(fā)明的一實施例，具體的制備胃部靶向藥物載體的方法包括以下步驟I)先制備含藥乳液當(dāng)該藥物是親水性藥物時，以溶解有親水性藥物、殼聚糖季銨鹽、殼聚糖和甘油磷酸鈉的醋酸水溶液作為水相(W)，以溶解有乳化劑的的油性物質(zhì)作為油相0，經(jīng)乳化制備W/0型含藥乳液；當(dāng)該藥物是親脂性藥物時，先以溶解有親脂性藥物的有機溶劑作為內(nèi)油相(O1),以溶解有殼聚糖季銨鹽、殼聚糖和甘油磷酸鈉的醋酸水溶液作為水相(W)，經(jīng)乳化，制成Oi/W型初乳液，再將該0/W型初乳液加入至溶解有乳化劑的油性物質(zhì)，經(jīng)乳化制備O1TiWzO2型含藥乳液；2)將該含藥乳液經(jīng)分步固化法制成藥物載體先將該乳液初步升溫，使其含有的 殼聚糖季銨鹽和甘油磷酸鈉交聯(lián)，制成凝膠微球懸浮液，再次升溫，并向該凝膠微球懸浮液中加入交聯(lián)劑，經(jīng)交聯(lián)反應(yīng)，使該微球徹底固化；3)將上述微球經(jīng)過洗滌、收集和干燥，制成藥物載體。根據(jù)本發(fā)明制備胃部靶向藥物載體的方法，在第一步固化時，甘油磷酸鈉(GP)用作交聯(lián)劑，該交聯(lián)劑的用量范圍為殼聚糖和殼聚糖季銨鹽的總質(zhì)量與甘油磷酸鈉的質(zhì)量比為I : I 10 ;交聯(lián)時間為O. 5 2h，交聯(lián)的溫度為18 40°C，優(yōu)選是30°C 40°C，最優(yōu)選是36°C 38°C，交聯(lián)時油相轉(zhuǎn)數(shù)為150 700rpm。第二步交聯(lián)劑和用量如下交聯(lián)劑可以是戊二醛、京尼平、環(huán)氧氯丙烷等，優(yōu)選使用戊二醛，可以是含戊二醛的飽和的甲苯溶液(GST)或含戊二醛的水溶液，交聯(lián)劑的用量范圍為醛基或環(huán)氧基與殼聚糖的氨基的摩爾比為I : I 10 ;交聯(lián)時間為0.5 5h，交聯(lián)的溫度為18 60°C，優(yōu)選的交聯(lián)溫度是45°C 60°C，最優(yōu)選是48°C 50°C，采用程序升溫，升溫速率為2V /min，交聯(lián)時油相轉(zhuǎn)數(shù)為 150 700rpm。根據(jù)本發(fā)明制備胃部靶向藥物載體的方法，油性物質(zhì)和水互不相溶，其中油相選用蓖麻油、橄欖油、大豆油或液體石蠟和石油醚的混合物，優(yōu)選是液體石蠟和石油醚的混合物，兩者的體積比優(yōu)選為I : 2。油性乳化劑必須溶解于所使用的油性物質(zhì)，可使用失水山梨醇倍半油酸酯(Arlacel83)、甘油醚的聚合物(如P0-500、P0-310)、聚氧乙烯氫化蓖麻油、失水山梨醇三油酸酯(司班85)、失水山梨醇單油酸酯(司班80)、失水山梨醇三硬脂酸酯(司班65)、親油-親水嵌段共聚物等。油相中乳化劑的濃度為O. 5 IOwt%。根據(jù)本發(fā)明制備胃部靶向藥物載體的方法，上述的W/0型乳液的制備方法是，先制備W/0型預(yù)乳液，然后將該預(yù)乳液在較高壓力下壓過微孔膜，以制備粒徑均一的W/0型乳液，該微孔膜優(yōu)選是疏水性的SPG膜，在優(yōu)化條件下，微球的直徑分布系數(shù)控制在20%以內(nèi)，直徑可在O. I 10微米內(nèi)自由控制。根據(jù)本發(fā)明制備胃部靶向藥物載體的方法，所述親脂性藥物可選擇泰胃美、雷尼替丁、雷帕霉素等，本發(fā)明在制備親脂性藥物時，其內(nèi)油相O1是可溶解該藥物的有機溶劑，其和水不互溶，優(yōu)選的是DMSO或三氯甲燒，在制備0/W型初乳液可在該內(nèi)油相中加入乳化齊U，以提高包埋率。親水性藥物可以是西米替丁、丙谷胺、阿莫西林或硫酸慶大霉素，雷帕霉素在全身給藥時，在大量的臨床試驗中發(fā)現(xiàn)其副作用有腎毒性、肝毒性、膽固醇、高血脂癥、血小板減少等癥狀，通過本發(fā)明制備的藥物載體，可胃部靶向給藥，減少副作用。
根據(jù)本發(fā)明制備胃部靶向藥物載體的方法，上述制備中，在藥物載體徹底固化后，將其依次用石油醚、甲醇、蒸餾水等洗滌，并將其超臨界萃取干燥后，低溫保存；或直接將納微球在常溫或低溫下保存于蒸餾水或細胞培養(yǎng)液中。根據(jù)本發(fā)明制備胃部靶向藥物載體的方法，由于殼聚糖、殼聚糖季銨鹽和甘油磷酸鈉的混合，使得復(fù)合微球既有殼聚糖微球和殼聚糖季銨鹽微球各自的優(yōu)勢，比如季銨鹽微球的由于甘油磷酸鈉的存在而有的溫敏性和凝膠性，殼聚糖微球的自發(fā)穩(wěn)定熒光的性質(zhì)等，又賦予復(fù)合微球新的特征。具體表現(xiàn)在(I)殼聚糖季銨鹽微球在單獨作為藥物載體時，由于其具有多孔性，且微球表面的孔徑較大，使得小分子藥物在包埋時很容易從孔徑流出，大大降低了藥物的包埋率，而如果加入殼聚糖，在一定溫度下再加入戊二醛交聯(lián)劑，戊二醛的醛基和殼聚糖上的氨基以及殼聚糖季銨鹽上未季銨化的氨基發(fā)生羥醛縮合反應(yīng)，在先形成的凝膠微球的表面形成一定的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，使得凝膠微球的孔徑大大縮小，提高了藥物的包埋率。(2)同時，由于戊二醛的醛基和殼聚糖上的氨基以及殼聚糖季銨鹽上未季銨化的氨基發(fā)生羥醛縮合反應(yīng)，形成了大的共軛雙鍵(-C = N-C = C-)，能顯示較強的、穩(wěn)定的自發(fā)熒光；同時，利用殼聚糖制備的納微球不僅具有良好的生物兼容性，而表面有豐富的功能基團(羥基和氨基)，可用于表面修飾和改性；因此，利用殼聚糖納微球這種穩(wěn)定熒光的性質(zhì)以及殼聚糖獨特的優(yōu)勢，可進行細胞水平和動物水平的生物學(xué)實驗，并易于準(zhǔn)確定量，解決了以往因標(biāo)記不穩(wěn)定或難以標(biāo)記或包埋的熒光物質(zhì)容易泄漏而無法進行準(zhǔn)確定量的問題。根據(jù)本發(fā)明的胃部靶向藥物載體及其制備方法，通過將殼聚糖和殼聚糖季銨鹽材料的混合，并且嚴(yán)格控制兩者之間的比例以及所選用的殼聚糖季銨鹽的季銨程度，實現(xiàn)了制備得復(fù)合微球是一種帶正電的微球，將制備的殼聚糖和殼聚糖季銨鹽復(fù)合微球分散在PBS(pH = 7.4)中，測定出其Zeta電勢為20 28mV，因此它可以和細胞表面帶負電的基團相互作用，與細胞發(fā)生非特異性吸附，從而有利于藥物載體在細胞表面的黏附，由于藥物載體的黏附性，延長了藥物在胃黏膜組織的停留時間，進而延長了藥物的吸收時間，從而大大提高藥物在體內(nèi)的生物利用度。同時由于殼聚糖和殼聚糖季銨鹽材料的混合，在一定溫度下再加入戊二醛等交聯(lián)劑，并通過控制交聯(lián)反應(yīng)的時間和溫度，實現(xiàn)了適當(dāng)程度的交聯(lián)，使形成的凝膠微球的表面形成一定的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，使得凝膠微球的孔徑大大縮小，提高了藥物的包埋率，從而使復(fù)合微球在(PH= I. 2)極酸的胃部生理環(huán)境下，有良好的敏感性，復(fù)合微球在胃部能保留24h而不被降解(見圖7)，復(fù)合微球的pH敏感性使其可以作為酸性部位的靶向給藥載體應(yīng)用，比如作為胃部藥物的靶向給藥載體。上述方法制備的藥物載體，具有PH敏感性、胃部粘附性、藥物緩釋特性。在pH = I 3環(huán)境中，能保持良好的形貌，而不被酸性環(huán)境降解。在胃部有很好的粘附性，載體在胃部粘附的量占口服載體總量的40% 90%，載藥后能實現(xiàn)藥物在胃部的緩釋效果，24小時內(nèi)緩釋藥物，藥物在胃部的釋放速率為O. 06mg/h O. 12mg/h。本發(fā)明還解決了現(xiàn)有攪拌乳化法制備的殼聚糖和殼聚糖季銨鹽藥物載體粒徑不均一和不可控、包埋率低、分散性差，同時，所制備的凝膠微球滿足胃部靶向藥物傳輸載體的要求，即粘附性、一定的PH敏感性和藥物緩釋功能?？赏昧降木恍?、pH敏感性、 粘附性等特性，達到穩(wěn)定的胃部靶向釋放藥物、提高藥物在胃部局部作用濃度和避免全身副作用等關(guān)鍵問題。


圖I為機械攪拌法制備殼聚糖和殼聚糖季銨鹽混合材料的藥物載體的流程示意圖；圖2為本發(fā)明快速膜乳化法制備殼聚糖和殼聚糖季銨鹽混合材料的藥物載體的流程示意圖；圖3為實施例I制備殼聚糖和殼聚糖季銨鹽混合材料的藥物載體的光學(xué)顯微圖；圖4為實施例I制備殼聚糖和殼聚糖季銨鹽混合材料的藥物載體的電子顯鏡圖；圖5為實施例2制備殼聚糖和殼聚糖季銨鹽混合材料的藥物載體的光學(xué)顯微圖；圖6為實施例2制備殼聚糖和殼聚糖季銨鹽混合材料的藥物載體的電子顯微鏡圖；圖7為實施例3制備殼聚糖和殼聚糖季銨鹽混合材料的藥物載體的電子顯微鏡圖； 圖8為實施例4制備殼聚糖和殼聚糖季銨鹽混合材料的藥物載體的電子顯微鏡圖；圖9為實施例4制備殼聚糖和殼聚糖季銨鹽混合材料的藥物載體的粒徑分布；圖10為實施例4膜乳化方法制備的殼聚糖和殼聚糖季銨鹽混合材料的藥物載體中雷帕霉素的體外釋放曲線；圖11為實施例5制備殼聚糖和殼聚糖季銨鹽混合材料的藥物載體的電子顯微鏡圖；圖12為實施例6制備殼聚糖和殼聚糖季銨鹽混合材料的藥物載體的電子顯微鏡圖；圖13為實施例7制備殼聚糖和殼聚糖季銨鹽混合材料的藥物載體的電子顯微鏡圖；圖14為實施例8制備殼聚糖和殼聚糖季銨鹽混合材料的藥物載體的電子顯微鏡圖；圖15為實施例9制備殼聚糖和殼聚糖季銨鹽混合材料的藥物載體的電子顯微鏡圖；圖16為實施例10制備殼聚糖和殼聚糖季銨鹽混合材料的藥物載體的電子顯微鏡圖；圖17為實施例11制備殼聚糖和殼聚糖季銨鹽混合材料的藥物載體的電子顯微鏡圖；圖18為實施例12制備殼聚糖和殼聚糖季銨鹽混合材料的藥物載體的電子顯微鏡圖；圖19為實施例13制備殼聚糖和殼聚糖季銨鹽混合材料的藥物載體的電子顯微鏡圖；圖20為實施例14制備殼聚糖和殼聚糖季銨鹽混合材料的藥物載體的電子顯微鏡圖；圖21為實施例15制備殼聚糖和殼聚糖季銨鹽混合材料的藥物載體的電子顯微鏡圖；圖22為實施例16制備殼聚糖和殼聚糖季銨鹽混合材料的藥物載體的電子顯微鏡圖；圖23為實施例17制備殼聚糖和殼聚糖季銨鹽混合材料的藥物載體的電子顯微鏡 圖24為實施例18制備殼聚糖和殼聚糖季銨鹽混合材料的藥物載體的電子顯微鏡圖；圖25為實施例19制備殼聚糖和殼聚糖季銨鹽混合材料的藥物載體的電子顯微鏡圖；圖26為實施例20制備殼聚糖和殼聚糖季銨鹽混合材料的藥物載體的電子顯微鏡圖；圖27為實施例4制備殼聚糖和殼聚糖季銨鹽混合材料的藥物載體不同時間內(nèi)在胃部的粘附率；圖28為實施例4制備殼聚糖和殼聚糖季銨鹽混合材料的藥物載體在胃部的粘附時間分布圖。
具體實施例方式實施例I準(zhǔn)確稱取殼聚糖(分子量5萬)、殼聚糖季銨鹽(季銨取代度50 %，分子量5萬)、甘油磷酸鈉溶于I %醋酸水溶液中，磁力攪拌下使其充分溶解得到殼聚糖、殼聚糖季銨鹽、甘油磷酸鈉的醋酸水溶液，其總濃度為2. 5wt%，其中殼聚糖、殼聚糖季銨鹽的濃度分別為O. 5wt%，甘油磷酸鈉的濃度為I. 5wt%，其中殼聚糖與殼聚糖季銨鹽的質(zhì)量比為I : 1，以及殼聚糖與殼聚糖季銨鹽總質(zhì)量與甘油磷酸鈉的質(zhì)量比2 3。將此溶液在8000rpm下離心除去不溶性雜質(zhì)，保留上清液作為水相備用。取400 μ L10mg/mL雷帕霉素溶液O1 (雷帕霉素溶于三氯甲烷中，乳化劑P0-500濃度為Iwt % )，加入水相中，室溫機械攪拌均勻，攪拌條件lOOOrpm，IOmin,形成0/W初乳；然后將初乳緩慢滴加入液體石蠟和石油醚的混合外油相O2中(體積比為I : 2，乳化劑P0-500濃度為4wt% )。用機械攪拌器快速攪拌，攪拌條件lOOOrpm，IOmin,即得O1TiWzO2復(fù)乳，37°C下固化I小時；1小時過后向乳液中加入一定量戊二醛飽和的甲苯溶液，其中戊二醛的用量依據(jù)如下比例計算得到，即戊二醛上的醛基與殼聚糖上氨基的摩爾比為I : 1，程序升溫，升溫速度約為2°C/min，至50°C交聯(lián)反應(yīng)5小
時，交聯(lián)反應(yīng)的攪拌速率為700rpm。交聯(lián)反應(yīng)結(jié)束后，在5000rpm下離心，傾去上清夜將殼聚糖和殼聚糖季銨鹽納微球從油相中分離出來，依次用石油醚、甲醇、蒸餾水洗滌，并將其保存在蒸餾水中。經(jīng)酶標(biāo)儀檢測藥物載體的包埋率為80%，在模擬胃液中24h內(nèi)釋放完全，釋放速率約為0. llmg/h，微球的表面電位為+24. 18mV，表明微球載體在胃部有很好的粘附性。載體微球的平均粒徑和粒徑分布采用Zeta電位及粒度分析儀ZetaPlus測量，在水中微球的平均直徑為1000. O納米，C. V.值為38. 07%，顯微鏡圖如圖3所示，電鏡圖如圖4所
/Jn ο實施例2準(zhǔn)確稱取殼聚糖(分子量5萬)、殼聚糖季銨鹽(季銨取代度50 %，分子量5萬)、甘油磷酸鈉溶于I %醋酸水溶液中，磁力攪拌下使其充分溶解得到殼聚糖、殼聚糖季銨鹽、甘油磷酸鈉的醋酸水溶液，其總濃度為2. 5wt%，其中殼聚糖、殼聚糖季銨鹽的濃度分別為
0.5wt%，甘油磷酸鈉的濃度為1.5Wt%，其中殼聚糖與殼聚糖季銨鹽的質(zhì)量比為I : 1，以及殼聚糖與殼聚糖季銨鹽總質(zhì)量與甘油磷酸鈉的質(zhì)量比2 3。將此溶液在8000rpm下離心除去不溶性雜質(zhì)，然后加入殼聚糖和殼聚糖季銨鹽總干重的20wt%的硫酸慶大霉素(胃部藥物)并充分溶解備用。將油溶性乳化劑P0-500加入到60mL的液體石蠟和石油醚的混合油相(體積比為I : 2)中,其濃度為4wt%,攪拌至完全溶解作為油相；取6. Og的水相與油相混合，機械攪拌lOOOrpm, 30min,得到W/0型乳液；37°C下固化I小時，1小時過后向乳液中加入一定量戊二醛飽和的甲苯溶液，其中戊二醛的用量依據(jù)如下比例計算得到，即戊二醛上的醛基與殼聚糖上氨基的摩爾比為I : 1，程序升溫至50°C交聯(lián)反應(yīng)5小時，交聯(lián)反應(yīng)的攪拌速率為700rpm。交聯(lián)反應(yīng)結(jié)束后，在5000rpm下離心，傾去上清夜將殼聚糖和殼聚糖季銨鹽納微球從油相中分離出來，依次用石油醚、甲醇、蒸餾水洗滌，并將其保存在蒸餾水中。經(jīng)酶標(biāo)儀檢測藥物載體的包埋率為83%，在模擬胃液中28h內(nèi)釋放完全，釋放速率約為0. 09mg/h，微球的表面電位為23. 29，胃部靶向效果良好。微球的平均粒徑和粒徑分布采用Zeta電位及粒度分析儀ZetaPlus測量，在水中微球的平均直徑為1300. O納米，C. V.值為35. 12%。顯微鏡圖如圖5所示，電鏡圖如圖6所示。實施例3準(zhǔn)確稱取殼聚糖(分子量5萬)、殼聚糖季銨鹽(季銨取代度70%,分子量10萬)、甘油磷酸鈉溶于1%醋酸水溶液中，機械攪拌下使其充分溶解得到殼聚糖、殼聚糖季銨鹽、甘油磷酸鈉的醋酸水溶液，其總濃度為2. 5wt%，其中殼聚糖、殼聚糖季銨鹽的濃度分別為O.5wt%，甘油磷酸鈉的濃度為I. 5wt%，其中殼聚糖與殼聚糖季銨鹽的質(zhì)量比為I : 1，以及殼聚糖與殼聚糖季銨鹽總質(zhì)量與甘油磷酸鈉的質(zhì)量比2 3。將此溶液在8000rpm下離心除去不溶性雜質(zhì)，保留上清液作為水相備用。取400μ L10mg/mL雷帕霉素溶液O1 (雷帕霉素溶于三氯甲烷中，乳化劑P0-500濃度為lwt%)，加入水相中，室溫機械攪拌均勻，攪拌條件lOOOrpm，IOmin,形成01/W初乳。將油溶性乳化劑P0-500加入到60mL的液體石蠟和石油醚的混合油相(體積比為I : 2)中，其濃度為4wt%，攪拌至完全溶解作為外油相02，然后將初乳緩慢滴加入液體石蠟和石油醚的混合外油相中。均質(zhì)乳化60s，3擋(14000rpm/min)，即得(ViWA)2復(fù)乳，37°C下固化I小時。I小時過后向乳液中加入一定量戊二醛飽和的甲苯溶液，其中戊二醛的用量依據(jù)如下比例計算得到，即戊二醛上的醛基與殼聚糖上氨基的摩爾比為I : 1，程序升溫，升溫速度約為2°C/min，至50°C交聯(lián)反應(yīng)5小時，交聯(lián)反應(yīng)的攪拌速率為700rpm。交聯(lián)反應(yīng)結(jié)束后，在5000rpm下離心，傾去上清夜將殼聚糖和殼聚糖季銨鹽納微球從油相中分離出來，依次用石油醚、甲醇、蒸餾水洗滌，并將其保存在蒸餾水中。經(jīng)酶標(biāo)儀檢測藥物載體的包埋率為85%，在模擬胃液中24h內(nèi)釋放完全，釋放速率 約為O. llmg/h,微球的表面電位為+30mV,胃部祀向效果良好,和實施例I中的結(jié)果相吻合。微球的平均粒徑和粒徑分布采用Zeta電位及粒度分析儀ZetaPlus測量，在水中微球的平均直徑為1500. O納米，C. V.值為34. 28%，掃描電鏡照片如圖7所示。實施例4將孔徑為2. 8微米的親水性SPG玻璃膜置于液體石蠟與石油醚的混合油相中(體積比I : 2)，浸泡過夜或超聲半小時使膜孔充分被油相浸潤。準(zhǔn)確稱取殼聚糖(分子量5萬)、殼聚糖季銨鹽(季銨取代度70%，分子量5萬)、甘油磷酸鈉、溶于I %醋酸水溶液中，磁力攪拌下使其充分溶解得到殼聚糖、殼聚糖季銨鹽、甘油磷酸鈉的醋酸水溶液，作為內(nèi)水相，其總濃度為2. 5wt%，其中殼聚糖、殼聚糖季銨鹽的濃度分別為O. 5wt%，甘油磷酸鈉的濃度為I. 5wt%，其中殼聚糖與殼聚糖季銨鹽的質(zhì)量比為I : 1，以及殼聚糖與殼聚糖季銨鹽總質(zhì)量與甘油磷酸鈉的質(zhì)量比2 3將此溶液在8000rpm下離心除去不溶性雜質(zhì)，保留上清液作為水相備用。取400 μ L 10mg/mL雷帕霉素溶液O1 (雷帕霉素溶于三氯甲烷中，乳化劑P0-500濃度為lwt% ),加入水相中用均質(zhì)乳化器在三檔(6000rpm)下乳化Imin,形成O1ZW型初乳。將油溶性乳化劑P0-500加入到60mL的液體石蠟和石油醚的混合油相(體積比為I : 2)中，其濃度為4wt%，攪拌至完全溶解作為外油相O2，然后將所得(VW型初乳與外油相混合，用均質(zhì)乳化器在三檔(6000rpm)下乳化Imin,形成預(yù)乳液迅速倒入膜乳化裝置中，在O. 4MPa的氮氣壓力下，將其快速壓過孔徑均一的SPG微孔膜，得到粒徑比較均一的O1ZWzO2型乳液，將所得乳液作為預(yù)乳液在O. 4MPa的氮氣壓力下再次壓過微孔膜，反復(fù)乳化五次，最終得到粒徑均一的(ViWA)2型乳液；乳化完畢，37°C下固化I小時；1小時過后向乳液中加入一定量戊二醛飽和的甲苯溶液，其中戊二醛的用量依據(jù)如下比例計算得至IJ，即戊二醛上的醛基與殼聚糖上氨基的摩爾比為I : I，程序升溫，程序升溫，升溫速度約為2V /min，至50°C交聯(lián)反應(yīng)5小時，交聯(lián)反應(yīng)的攪拌速率為700rpm。交聯(lián)反應(yīng)結(jié)束后，在5000rpm下離心，傾去上清液將殼聚糖和殼聚糖季銨鹽納微球從油相中分離出來，依次用石油醚、甲醇、蒸餾水洗滌，并將其保存在蒸餾水中。微球的平均粒徑和粒徑分布采用Zeta電位及粒度分析儀ZetaPlus測量，在水中微球的平均直徑為1500. O納米，C. V.值為13. 8%，掃描電鏡照片如圖8所示，粒徑分布如圖9所示結(jié)果表明所制備的殼聚糖和殼聚糖季銨鹽納微球粒徑均一。其中雷帕霉素藥物的包埋達到90%以上，藥物的釋放在24h內(nèi)接近100%，釋放效果如圖10所示，降低體系中的殼聚糖季銨鹽的取代度會增加微球在在胃黏膜上的粘附，得到正電荷更多的微球，同時微球中的孔洞變少、變小，因此一定取代度的殼聚糖季銨鹽有助于提高藥物的包埋率，同時降低藥物的釋放速率。實施例5制備方法同4，只是殼聚糖與殼聚糖季銨鹽的質(zhì)量比為I : 0.1，其Zeta電位為+9. 2mV，其電鏡照片如圖11所示。實施例6制備方法同4，只是殼聚糖與殼聚糖季銨鹽的質(zhì)量比為I : 10，其Zeta電位為+26. 17mV，其電鏡照片如圖12所示。 實施例7制備方法同4，只是殼聚糖與殼聚糖季銨鹽總質(zhì)量與甘油磷酸鈉的質(zhì)量比I : 1，其Zeta電位為+21. 32mV，其電鏡照片如圖13所示。實施例8制備方法同4，只是殼聚糖與殼聚糖季銨鹽總質(zhì)量與甘油磷酸鈉的質(zhì)量比為I 10，其Zeta電位為+19. 18mV，其電鏡照片如圖14所示。實施例9制備方法同4，只是殼聚糖季銨鹽的季銨取代度為10%，所制備的微球的Zeta電位為+9. 23mV，其電鏡照片如圖15所示。實施例10制備方法同4，只是殼聚糖季銨鹽的季銨取代度為80%，所制備的微球的Zeta電位為+28. 24mV，其電鏡照片如圖16所示。實施例11制備方法同4，只是交聯(lián)劑與殼聚糖和殼聚糖季銨鹽氨基摩爾比為I : 10，其Zeta電位為+24. 32mV，其電鏡照片如圖17所示。實施例12制備方法同4，只是第一步交聯(lián)溫度為18°C，交聯(lián)時間為O. 5h，所制備的微球的Zeta電位為+23. 21mV，其電鏡照片如圖18所示。實施例13制備方法同4，只是第一步交聯(lián)溫度為30°C，交聯(lián)時間為O. 5h，所制備的微球的Zeta電位為+24. 33mV，其電鏡照片如圖19所示。實施例14制備方法同4，只是第一步交聯(lián)溫度為36°C，交聯(lián)時間為O. 5h，所制備的微球的Zeta電位為+26. 22mV，其電鏡照片如圖20所示。實施例15制備方法同4，只是殼聚糖與殼聚糖季銨鹽的質(zhì)量比為I : O. 5，第一步交聯(lián)溫度為40°C，交聯(lián)時間為O. 5h，所制備的微球的Zeta電位為+20. 34mV，其電鏡照片如圖21所
/Jn ο
實施例16制備方法同9，只是殼聚糖與殼聚糖季銨鹽的質(zhì)量比為I : 2，第一步交聯(lián)中交聯(lián)溫度為38°C，第一步交聯(lián)時間為2h，所制備的微球的Zeta電位為+20. 10mV，其電鏡照片如圖22所示。實施例17制備方法同4，只是第二步交聯(lián)溫度為18°C，且第二步交聯(lián)時間為O. 5h，所制備的微球的Zeta電位為+18. 31mV，其電鏡照片如圖23所示。實施例18制備方法同4，只是第二步交聯(lián)溫度為45°C，且第二步交聯(lián)時間為O. 5h，所制備的 微球的Zeta電位為+24. 13mV，其電鏡照片如圖24所示。實施例19制備方法同4，只是第二步交聯(lián)溫度為48°C，且第二步交聯(lián)時間為O. 5h，所制備的微球的Zeta電位為+26. 64mV，其電鏡照片如圖25所示。實施例20制備方法同4，只是第二步交聯(lián)溫度為60°C，且第二步交聯(lián)時間為O. 5h，所制備的微球的Zeta電位為+24. 53mV，其電鏡照片如圖26所示。效果實施例I將制備實施例4中制備的藥物載體，進行小鼠灌胃實驗進一步考察載體在胃部的粘附特性。實驗前小鼠分成8組，每組8只小鼠，提前禁食12小時，不禁水。每只小鼠灌胃量為400 μ L(3. 611^/1^)，分別在時間段011、111、311、411、611、811、1211、2411取出每組小鼠的胃部，用PBS = 7.4(0. Imol/mL)沖洗干凈，且每組中有2只小鼠的胃組織經(jīng)固化、脫糖等步驟后做組織切片，對藥物載體在胃部的粘附性進行定性觀察，對其直觀觀察載體在胃部的粘附情況，通過熒光檢測發(fā)現(xiàn)載體能夠在胃黏膜處有很好粘附效果，在胃黏膜處有一條明顯的粘附帶，這將有利于胃部靶向藥物的釋放。每組其余的6只小鼠的胃組織，沖洗干凈，經(jīng)相應(yīng)的酶消化后，3000rpm離心,PBS = 7. 4(0. Imol/mL)重新懸浮后用酶標(biāo)儀對載體的胃部粘附性進行定性檢測，結(jié)果如圖28所示，經(jīng)小鼠灌胃實驗后載體在進入胃部后在20小時內(nèi)能保持一定的粘附率，結(jié)果如圖27所示，說明所制備的微球載體能夠長時間實現(xiàn)胃部藥物的靶向緩釋和控釋的效果。將其余19組制備實施例所得的微球載體同樣進行胃部粘附效果實驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其粘附效果和藥物在胃部的釋放速率與實施例4所得結(jié)果相似，都能夠長時間實現(xiàn)胃部藥物的靶向緩釋和控釋的效果，說明按本專利制備微球載體的方法可行，且微球的粘附特性及藥物的緩釋效果重復(fù)性良好。
權(quán)利要求
1.一種胃部靶向藥物載體，其特征在于，所述藥物載體原料包括 含有殼聚糖、殼聚糖季銨鹽、甘油磷酸鈉的含藥乳液；以及 將上述乳液交聯(lián)成微球的交聯(lián)劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的胃部靶向藥物載體，其特征在于，所述殼聚糖與殼聚糖季銨鹽的質(zhì)量比為I : O. I 10，殼聚糖和殼聚糖季銨鹽的總質(zhì)量與甘油磷酸鈉的質(zhì)量比為I I 10，其中殼聚糖季銨鹽的季銨化取代度為10% 80%。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的胃部靶向藥物載體，其特征在于，所述殼聚糖與殼聚糖季銨鹽的質(zhì)量比為I : O. 5 2。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的胃部靶向藥物載體，其特征在于，所述交聯(lián)劑為戊二醛、京尼平或環(huán)氧氯，其中交聯(lián)劑的醛基或環(huán)氧基與殼聚糖和殼聚糖季銨鹽的氨基的摩爾比為I I 10。
5.一種制備胃部靶向藥物載體的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟 .1)含藥乳液的制備以殼聚糖、殼聚糖季銨鹽和甘油磷酸鈉的水溶液作為水相W，與藥物、以及含乳化劑的油相制成含藥乳液； .2)將步驟I)中含藥乳液升溫，攪拌，使其含有的殼聚糖季銨鹽和甘油磷酸鈉發(fā)生初步交聯(lián)，得到凝膠微球懸浮液，升溫并加入交聯(lián)劑，發(fā)生第二次交聯(lián)，使凝膠微球固化，洗滌干燥得到胃部靶向藥物載體。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述制備胃部靶向藥物載體的方法，其特征在于，所述步驟I)中殼聚糖、殼聚糖季銨鹽的質(zhì)量比為I : O. I 10，；所述殼聚糖和殼聚糖季銨鹽的總質(zhì)量與甘油磷酸鈉的質(zhì)量比為I : I 10 ;其中殼聚糖季銨鹽的季銨化取代度為10% 80%。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述制備胃部靶向藥物載體的方法，其特征在于，所述步驟2)中初步交聯(lián)的交聯(lián)溫度為18 60°C、交聯(lián)時間為O. 5 5h，升溫后第二次交聯(lián)的交聯(lián)劑為戊二醛、京尼平或環(huán)氧氯，其中交聯(lián)劑與殼聚糖和殼聚糖季銨鹽氨基的摩爾比為I : I 10，交聯(lián)的溫度為18 60°C，交聯(lián)時間為O. 5 5h，交聯(lián)時攪拌速率數(shù)為150 700rpm。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述所述制備胃部靶向藥物載體的方法，其特征在于，所述步驟2)初步交聯(lián)的交聯(lián)溫度為30°C 40°C，第二次交聯(lián)溫度為45°C 60°C。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述所述制備胃部靶向藥物載體的方法，其特征在于，所述步驟2)初步交聯(lián)的交聯(lián)溫度為36°C 38°C，第二次交聯(lián)溫度為48°C 50°C。
10.根據(jù)權(quán)利要求5所述制備胃部靶向藥物載體的方法，其特征在于，所述步驟I)中乳化劑包括失水山梨醇倍半油酸酯、甘油醚的聚合物、聚氧乙烯氫化蓖麻油、失水山梨醇三油酸酯、失水山梨醇單油酸酯、失水山梨醇三硬脂酸酯或親油-親水嵌段共聚物，油相中乳化劑的濃度為O. 5 IOwt % O
全文摘要
本發(fā)明涉及藥物載體制備領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及一種胃部靶向藥物載體及其制備方法。本發(fā)明的胃部靶向藥物載體原料包括含有殼聚糖、殼聚糖季銨鹽、甘油磷酸鈉的含藥乳液；以及將上述乳液交聯(lián)成微球的交聯(lián)劑；其制備方法包括以下步驟1)含藥乳液的制備以殼聚糖、殼聚糖季銨鹽和甘油磷酸鈉的水溶液作為水相W，與藥物、以及含乳化劑的油相制成含藥乳液；2)將步驟1)中含藥乳液升溫，攪拌，使其含有的殼聚糖季銨鹽和甘油磷酸鈉交聯(lián)，得到凝膠微球懸浮液，升溫并加入交聯(lián)劑，發(fā)生第二次交聯(lián)，使凝膠微球固化。本發(fā)明的藥物載體粒徑均一和可控、包埋率高、分散性好，同時，滿足胃部靶向藥物傳輸載體的要求。
文檔編號A61K47/36GK102652833SQ20111005043
公開日2012年9月5日 申請日期2011年3月2日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月2日
發(fā)明者宋春艷, 王連艷, 馬光輝 申請人:中國科學(xué)院過程工程研究所