專利名稱：具有多階段生物活性劑遞送的多糖凝膠制劑的制作方法
具有多階段生物活性劑遞送的多糖凝膠制劑相關(guān)申請的交叉引用本申請要求2009年11月10日提交的美國專利申請序列第12/616，020號的權(quán)益和優(yōu)先權(quán)，其為2008年11月21日提交的部分繼續(xù)申請序列第12/276，167號，其要求2007年11月30日提交的美國臨時專利申請第60/991，473號的權(quán)益，所述申請的公開內(nèi)容以引用的方式并入本文。背景多糖是相對復(fù)雜的碳水化合物。它們是由通過糖苷鍵連接在一起的許多單糖構(gòu)成
的聚合物。因此多糖是大的、通常分支的大分子。多糖，尤其是透明質(zhì)酸(HA)，已用于美容和醫(yī)學(xué)應(yīng)用中。這些聚合物已經(jīng)用作例如軟組織擴充(soft tissue augmentation)的填充物。多糖例如HA天然存在于身體的許多組織中，例如，但不限于，皮膚、軟骨和玻璃體。因此，它非常適合于針對這些組織的生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用。HA可用于眼外科手術(shù)(B卩，角膜移植、白內(nèi)障外科手術(shù)、青光眼外科手術(shù)和修復(fù)視網(wǎng)膜脫離的外科手術(shù))中。HA還用于治療膝骨關(guān)節(jié)炎。將這些稱為粘性補充法的治療作為注射療程向膝關(guān)節(jié)施用并且認(rèn)為補充關(guān)節(jié)液的粘度，由此潤滑關(guān)節(jié)、緩沖關(guān)節(jié)以及產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用。還表明HA對軟骨細(xì)胞具有積極的生化效應(yīng)。最近建議口服使用HA，盡管它的效果還需證實。目前，一些初步的臨床研究表明口服施用HA對骨關(guān)節(jié)炎具有積極效果。由于HA的高度生物相容性以及它通常存在于組織的胞外基質(zhì)中，HA可在組織工程研究中用作生物材料支架。在一些癌癥中，HA水平與惡性腫瘤和不良預(yù)后密切相關(guān)。因此HA經(jīng)常用作前列腺癌和乳腺癌的腫瘤標(biāo)記物。它還可用于檢測疾病的進展。HA還可用于手術(shù)后誘導(dǎo)組織愈合，尤其是白內(nèi)障外科手術(shù)后。目前傷口愈合的模式提出HA的較大聚合物出現(xiàn)于愈合的早期階段為介導(dǎo)免疫反應(yīng)的白細(xì)胞騰出物理空間。存在于胞外空間的HA發(fā)揮填充空間、穩(wěn)定結(jié)構(gòu)以及具有獨特的物理延展性和良好生物相容性的細(xì)胞保護分子的作用。HA基質(zhì)具有非常好的粘彈性同時保持高水平的水合。皮膚中的水含量和皮膚組織中的HA水平之間存在密切相關(guān)性。隨著人皮膚老化，在HA含量和代謝作用中存在已知的改變。隨著這些改變，皮膚的力學(xué)性能發(fā)生顯著惡化。年輕的皮膚和細(xì)胞間基質(zhì)中強HA網(wǎng)絡(luò)的存在之間似乎有關(guān)聯(lián)。非交聯(lián)以及交聯(lián)多糖鏈，例如HA，通過不同途徑(例如酶、自由基)經(jīng)受降解；因此限制聚合物在體內(nèi)的壽命。因此，重要的是研發(fā)降低體內(nèi)自然分解的速率和提高產(chǎn)物的持久性的方法和組合物。仍存在對通過抗降解而延長壽命的多糖制劑的需求，該需求未得到滿足。此外，在本領(lǐng)域?qū)Χ嗵侵苿┖茉缇痛嬖谶@樣需求，在移植后延長的時期提供生物活性劑向外圍組織的控釋。這些生物學(xué)活性劑可用于治療多糖制劑自身的一些副作用。本領(lǐng)域存在HA的許多公開，包括防止降解和遞送HA制劑的方法，包括但不限于美國公開第 2009/0036403 號(cross-linked HAcompositions including polyethyleneglycol);美國公開第 2009/0030367 號(needle-free injection device for deliveringHA formulations);以及美國公開第 2009/0022808 號(coated HA particles for softtissue augmentation)。概述本文描述的是軟組織擴充系統(tǒng)，一般地是具有延長的壽命、增加的降解時間和/或至少一種生物學(xué)活性劑在體內(nèi)緩釋的基于多糖的聚合物系統(tǒng)。一般地，所述系統(tǒng)包括在一個或多個階段、水平、時間范圍和/或側(cè)面遞送一種或多種生物學(xué)活性劑的能力。本文所述的軟組織擴充系統(tǒng)包含多糖基質(zhì)，所述多糖基質(zhì)具有分散于其中的多糖粒子，其中所述基質(zhì)和/或所述 粒子進一步包含至少一種生物學(xué)活性劑，并且其中所述基質(zhì)和/或所述粒子控制至少一種生物學(xué)活性劑從所述基質(zhì)和/或所述粒子中的釋放并進入軟組織。所述系統(tǒng)可以第一速率釋放生物學(xué)活性劑，且所述粒子以第二速率釋放生物學(xué)活性劑。在一個實施方案中，第一速率比第二速率快。在另一實施方案中，所述粒子包括不同粒子的群體，其中每個群體具有與其它粒子群體不同的釋放速率。在又一實施方案中，所述基質(zhì)和所述粒子釋放相同的生物學(xué)活性劑或釋放不同的生物學(xué)活性劑。在一些實施方案中，所述生物學(xué)活性劑選自酶抑制劑、麻醉劑、藥用神經(jīng)毒素、抗氧化劑、抗感染劑、抗炎劑、紫外(UV)光阻斷劑、染料、激素、免疫抑制劑及其組合。在其它實施方案中，抑制劑為鞣酸或硫酸軟骨素A (CSA)并且麻醉劑為利多卡因。在另一實施方案中，所述基質(zhì)包含選自透明質(zhì)酸(HA)、o-硫酸化HA、右旋糖酐、硫酸右旋糖酐、纖維素、硫酸軟骨素、肝素、硫酸肝素、藻酸鹽、硫酸角蛋白、殼聚糖和纖維素的多糖。此外，所述基質(zhì)可以是化學(xué)交聯(lián)、物理交聯(lián)或非交聯(lián)的。在一個實施方案中，所述粒子包含與三聚磷酸酯物理交聯(lián)并用藻酸鹽包被的殼聚糖。在另一實施方案中，所述粒子包含與鈣物理交聯(lián)并用殼聚糖穩(wěn)定的藻酸鹽。在其它實施方案中，所述粒子的直徑為約10 μ m至約100 μ m。本文進一步描述的是軟組織擴充系統(tǒng)，所述軟組織擴充系統(tǒng)包含分散于交聯(lián)HA基質(zhì)中的含CSA、藻酸鹽包被的殼聚糖粒子，其中CSA的終濃度是約lmg/mL至約10mg/mL。本文更進一步描述的是軟組織擴充系統(tǒng)，所述軟組織擴充系統(tǒng)包含分散于交聯(lián)HA基質(zhì)中的含CSA、藻酸鹽包被的殼聚糖粒子，其中CSA的終濃度是約lmg/mL至約10mg/mL，且其中HA基質(zhì)進一步含有約lmg/mL至約10mg/mL的鞋酸。本文還描述的是軟組織擴充系統(tǒng)，所述軟組織擴充系統(tǒng)包含分散于交聯(lián)HA基質(zhì)中的含鞣酸、藻酸鹽包被的殼聚糖粒子，其中鞣酸的終濃度是約0. lmg/mL至約2mg/mL。在一些實施方案中，所述軟組織擴充系統(tǒng)進一步包含HA基質(zhì)中的利多卡因。附圖簡述圖I繪示性說明了使用比色測定包括硫酸軟骨素A (CSA)的多糖凝膠的酶促降解的程度。圖2繪示性說明了使用比色測定包括鞣酸(TA)的多糖凝膠的酶促降解的程度。圖3繪示性說明了使用可溶性HA測定具有和不具有CSA的多糖凝膠的酶促降解程度。圖4繪示性說明了使用可溶性HA測定具有和不具有TA的多糖凝膠的酶促降解程度。
圖5繪示性說明了 CSA對多糖凝膠的擠壓力的影響。圖6說明了荷載CSA的殼聚糖/藻酸鹽粒子(左)與沒有荷載的殼聚糖/藻酸鹽粒子(右)的對比。圖7 繪示性說明了從JU ν .ΟΕΗΜ 30 和JU\^DERM 24HV 體外釋放 CSA。圖8繪示性說明了從.Rjν ΟΕΚΛ,Ι 30體外釋放TA。圖9繪示性說明了從殼聚糖/藻酸鹽粒子體外釋放TA。

圖10繪示性說明了隨著時間的過去補充以兒jVt.DERM 30的CSA或TA粒子中HA降解的抑制。術(shù)語的定義本文所使用的“約”是指大約或近似且在本文所列的數(shù)值或范圍的上下文中是指列舉或要求保護的數(shù)值或范圍的+/-10%。本文所使用的“載體”、“惰性載體”和“可接受的載體”可互換使用并且是指可與本公開的系統(tǒng)組合以提供所需組合物的載體。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)了解已知許多載體用于制備特定治療性藥物和/或美容組合物。本文所使用的“美容的”是形容詞，是指改善表面的外觀或覆蓋缺陷。通常，美容組合物可用于改善表面的美感而不是功能性方面。最常見地，配制美容組合物應(yīng)用于健康和美容治療或影響個人身體的外觀，例如，角質(zhì)表面例如皮膚、毛發(fā)、指甲等。本文所使用的“美容上可接受的載體”是指適合應(yīng)用于角質(zhì)表面或身體的其它區(qū)域的材料。一經(jīng)應(yīng)用，美容上可接受的載體對皮膚和其它角質(zhì)表面大致上沒有有害反應(yīng)。例如，美容載體可采用脂肪或非脂肪乳膏劑、乳狀懸浮液或油包乳或水包油類型、洗液、凝膠或膠凍劑、膠體或非膠體的水性或油性溶液、膏劑、氣溶膠、可溶片劑或貼片的形式。本文所使用的“制劑”和“組合物”可互換使用并且是指為了給定的目的而提供到一起的組分的組合。此類術(shù)語是本領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知的。本文所使用的“分子量(Mw) ”是指分子中原子的原子量的總和。例如，甲烷(CH4)的分子量是16. 043g/mol,碳的原子量=12. Ollg/mol,氫=1. 008g/mol。道爾頓(Da)為質(zhì)量的單位，等于12O質(zhì)量的1/12，且I, 000，OOODa可表示為IMDa0發(fā)明詳述本文描述的是具有延長的壽命、增加的降解時間和/或至少一種生物學(xué)活性劑在體內(nèi)緩釋的軟組織擴充系統(tǒng)和組合物?？赏ㄟ^并入作為降解抑制劑而發(fā)揮作用的分子提供這種降解時間的增加。系統(tǒng)自身一般是基于多糖的。一般而言，系統(tǒng)包括在一個或多個階段、水平、時間范圍和/或側(cè)面遞送一種或多種生物學(xué)活性劑的能力。本文所述的軟組織擴充系統(tǒng)包含多糖基質(zhì)，所述多糖基質(zhì)具有分散于其中的多糖粒子，其中所述基質(zhì)和/或所述粒子進一步包含至少一種生物學(xué)活性劑，且其中所述基質(zhì)和/或所述粒子控制至少一種生物試劑從所述基質(zhì)和/或所述粒子中的釋放并進入軟組織。本文所述的軟組織擴充系統(tǒng)一般涉及新的多種作用的聚合物系統(tǒng)，所述聚合物系 統(tǒng)提供軟組織擴充(例如面部提升和除皺等)、抗各種體內(nèi)降解途徑(例如酶、自由基等)以及提供受控的藥物遞送(例如減輕注射疼痛、挫傷和出血等)。本文所述的系統(tǒng)的這些特征與目前市售的填充物不同，目前市售的填充物通常被它們的低降解抗性、淋巴切除的高易感性和注射期間及注射后前幾周一般患者的不適感所限制。本公開的一個方面涉及包含至少一種多糖或多糖基質(zhì)的軟組織擴充系統(tǒng)。本文所使用的“多糖”是指多于兩個單糖分子的聚合物，其單糖可以是相同的或不同的。構(gòu)成本文所述的基質(zhì)的多糖是化學(xué)交聯(lián)、物理交聯(lián)或非交聯(lián)的。本文使用的多糖可以是，但不限于，HA、纖維素、殼聚糖、a-硫酸化HA、右旋糖酐、硫酸右旋糖酐、硫酸軟骨素、硫酸皮膚素、硫酸角蛋白、肝素、硫酸肝素和藻酸鹽。所述系統(tǒng)進一步包括可物理或化學(xué)交聯(lián)并且分散于和/或包埋在聚合物基質(zhì)內(nèi)的多糖粒子.本文所述的多糖可使用已知適合于通過它們的羥基交聯(lián)多糖及其衍生物的交聯(lián)劑來交聯(lián)。合適的交聯(lián)劑包括但不限于，例如，1，4-丁二醇二縮水甘油醚(或1，4_雙(2，3-環(huán)氧丙氧基)丁烷或1，4-雙縮水甘油基氧基丁烷，所有這些通常稱為BDDE)、1，2-雙(2，3-環(huán)氧丙氧基)乙烯及1-(2，3_環(huán)氧丙基)-2，3_環(huán)氧基環(huán)己烷。不將多于一種交聯(lián)劑或不同交聯(lián)劑的使用排除在本公開的范圍外。在一個實施方案中，交聯(lián)劑包含BDDE或由BDDE組成。
—般地設(shè)計聚合物系統(tǒng)以提供體積校正、生物學(xué)活性劑或生物活性劑的控釋，并且能夠使多糖粒子保持在基質(zhì)內(nèi)。設(shè)計多糖粒子以提供結(jié)構(gòu)、軟組織的更持久的校正及活性劑的緩控釋。因此，所述的系統(tǒng)在一些情況下可提供至少兩個水平的生物學(xué)活性劑釋放。釋放的第一水平可來自聚合物網(wǎng)絡(luò)自身。此釋放通常來自陷入聚合物網(wǎng)絡(luò)內(nèi)的生物學(xué)活性劑。釋放的第二水平可來自與聚合物網(wǎng)絡(luò)有關(guān)的聚合物粒子。具有來自本文所述的聚合物系統(tǒng)的多水平釋放的一個優(yōu)點是更好地控制生物活性劑的釋放時間。例如，新移植的材料經(jīng)受免疫系統(tǒng)初始攻擊激增，這可通過降解抑制劑和抗氧化劑的快速釋放機制而有效避免。隨著時間的過去，然而，移植材料經(jīng)受緩和但持久的免疫攻擊時，可通過緩釋機制來更好地對抗。因此本文所述的系統(tǒng)包括經(jīng)設(shè)計以提供聚合物粒子的快速初始釋放的聚合物基質(zhì)，所述聚合物粒子提供更持久的第二緩釋。后者通過聚合物粒子的高度穩(wěn)定性和緩慢生物降解特征來實現(xiàn)。在一個實施方案中，生物學(xué)活性劑例如酶抑制劑或降解抑制劑(例如硫酸軟骨素、鞣酸等)與聚合物網(wǎng)絡(luò)混合并且同樣并入聚合物粒子或包被到聚合物粒子上。粒子內(nèi)部和/或外部抑制劑的存在建立了確保系統(tǒng)長保存期限的擴散平衡。那么，一經(jīng)移植，來自聚合物網(wǎng)絡(luò)的生物活性劑的快速釋放可提供初始保護使免受例如炎性反應(yīng)。這種快速釋放通過沿著粒子表面創(chuàng)建濃度梯度而激活了來自聚合物粒子的第二階段的釋放。隨著聚合物粒子在體內(nèi)降解，釋放進一步擴展。較慢的第二階段釋放為聚合物網(wǎng)絡(luò)提供了更長久的生物活性劑的供應(yīng)。如果生物活性劑是降解抑制劑，由此組合物將確保持久的降解保護。在另一實施方案中，用抗氧化劑(例如抗壞血酸等)或藥物分子(例如利多卡因、腎上腺素等)補充或替代酶抑制劑。在另一實施方案中，聚合物粒子由連接殼聚糖與三聚磷酸酯(TPP)的物理交聯(lián)方法制備且進一步用藻酸鹽包被。在又一實施方案中，聚合物粒子由連接藻酸鹽與鈣的物理交聯(lián)方法制備且進一步用殼聚糖穩(wěn)定。所得的粒子具有使它們包括于皮膚填充物組合物中的理想性質(zhì)。例如，粒子是生物相容的/生物可降解的、柔韌的(例如便于擠壓通過細(xì)針)、無有毒交聯(lián)劑、質(zhì)感光滑(例如用于增強生物相容性)、尺寸可調(diào)節(jié)(例如用于處理淋巴切除和遷移)、小的和較大活性分子(例如鞣酸、利多卡因、硫酸軟骨素、腎上腺素等)的有效載體、在體內(nèi)非常穩(wěn)定具有良好的保持特征并且活性分子保持時間可調(diào)節(jié)(例如通過調(diào)整殼聚糖TPP :藻酸鹽比例)。粒子自身可以是適合于并入本文所述的聚合物基質(zhì)的尺寸且在本文所述的系統(tǒng)中有用。例如,粒子的直徑為約Iym至約ΙΟΟΟμ 。在其它實施方案中，粒子的直徑為約IOym至約100 μ m或約25 μ m至約75 μ m。并入系統(tǒng)的生物活性劑可選自抑制劑、麻醉劑、藥用神經(jīng)毒素、抗氧化劑、抗感染齊[J、抗炎劑、紫外(UV)光阻斷劑、染料、激素、免疫抑制劑及其組合。在一個實施方案中，所述粒子或聚合物基質(zhì)進一步包含至少一種抑制劑，例如降解抑制劑。抑制劑是通過靶向及中和特定降解機制例如酶促降解和自由基降解而起作用的分子。表現(xiàn)出抑制活性的分子包括但不限于糖胺聚糖(GAG)(例如肝素、硫酸乙酰肝素、硫酸皮膚素、硫酸軟骨素、硫酸軟骨素A(CSA)、a-硫酸化HA、亞麻苦苷和苦杏仁苷)、抗氧化劑(例如抗壞血酸、褪黑激素、維生素C和維生素E)、蛋白質(zhì)(例如血清透明質(zhì)酸酶抑制劑)和脂肪酸(例如飽和的C1至C22脂肪酸)。
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通常抑制劑的分子數(shù)量級小于交聯(lián)的多糖聚合物。由于它們的小尺寸和較高擴散性，它們傾向于快速體內(nèi)吸收，這可能潛在地限制了它們的性能。一種增加此類分子的體內(nèi)局部半衰期的方法是將它們化學(xué)接枝到多糖聚合物網(wǎng)絡(luò)并且將它們同時遞送。這種方法的一個缺點是結(jié)合的分子比未結(jié)合的分子可表現(xiàn)出活性顯著降低。在一個實施方案中，粒子或聚合物基質(zhì)進一步包含至少一種麻醉劑。至少一種局部麻醉劑可選自氨布卡因、阿莫拉酮、阿米卡因、奧布卡因、苯佐卡因、貝托卡因、苯柳胺酯、布比卡因、布他卡因、氨苯丁酯、布坦卡因、丁胺卡因、丁托西卡因、卡鐵卡因、氯普魯卡因、高古柯喊、可卡因、環(huán)美卡因、二丁卡因、dimethysoquin、二甲卡因、地哌冬、dycyclonine、去水芽子堿、芽子堿、氯乙烷、依替卡因、優(yōu)卡因、尤普羅辛、非那可明、formocaine、海克卡因、羥基丁卡因、對氨基苯甲酸異丁酯、甲磺酸亮氨卡因、左旋二苯哌啶二惡烷、利多卡因、馬比佛卡因、美普卡因、美布卡因、氯甲烷、麥替卡因、納依卡因、奧他卡因、俄妥卡因、奧昔卡因、對乙氧卡因、非那卡因、苯酚、皮珀羅卡因、匹多卡因、聚多卡醇、普莫卡因、丙胺卡因、普魯卡因、丙泮卡因、丙美卡因、丙哌卡因、丙氧卡因、偽可卡因、批咯卡因、羅哌卡因、水楊醇、丁卡因、托利卡因、三甲卡因、佐拉敏及其鹽。在一個實施方案中，至少一種麻醉劑是利多卡因，例如以鹽酸利多卡因的形式。本文所述的系統(tǒng)和組合物可具有約0. 1%至約5%(按組合物重量計)利多卡因濃度，例如約0. 2%至約I. 0%(按組合物重量計)。在一個實施方案中，組合物具有約0.3%的利多卡因濃度，按組合物的重量計(w/w%)。本文所述的組合物中利多卡因的濃度可以是治療有效的，意指所述濃度足以提供治療益處而沒有對患者造成傷害。生物學(xué)活性劑的其它實例包括但不限于，止癢劑、消脂劑、抗疤痕形成劑和消炎齊U。止癢劑可包括甲基磺酰甲烷、碳酸氫鈉、爐甘石、尿囊素、高嶺土、薄荷、茶樹油及其組合。消脂劑可包括毛喉素、黃嘌呤化合物，例如但不限于，咖啡因、茶堿、可可堿及氨茶堿及其組合?？拱毯坌纬蓜┛砂↖FN-y、氟尿嘧啶、聚(乳酸-乙醇酸)共聚物、甲基化的聚乙二醇、聚乳酸、聚乙二醇及其組合。抗炎劑可包括地塞米松、潑尼松龍、皮質(zhì)酮、布地奈德、雌激素、柳氮磺吡啶、美沙拉秦及其組合。在一個實施方案中，系統(tǒng)包括鞣酸酶抑制劑或硫酸軟骨素A(CSA)酶抑制劑和利多卡因。利多卡因或替代性麻醉劑可用于給定的制劑以緩解一些或大致上所有與粘性皮膚填充物的注射有關(guān)的疼痛。麻醉劑的緩慢釋放可用于使來自注射的制劑的殘留疼痛得到緩解。生物學(xué)活性劑可存在于粒子或基質(zhì)或兩者中，以約O. 0001%至約99%(按重量計)、約O. 001%至約75%(按重量計)、約O. 01%至約60%(按重量計)、約1%至約50%(按重量計)、約1%至約40% (按重量計)、約1%至約30% (按重量計)、約1%至約20% (按重量計)、約10%至約20% (按重量計)、約20%至約30% (按重量計)、0· 0001%至約O. 01%(按重量計)、約O. 0001%至約O. 1%(按重量計)、約O. 0001%至約1%(按重量計)、約O. 001%至約1%(按重量計)、約O. 01%至約1%(按重量計)或約1%至約10%(按重量計)濃度范圍。在其它實施方案中，存在于粒子或基質(zhì)或兩者中的生物學(xué)活性劑的濃度范圍是約O. 001mg/mL 至約 100mg/mL、約 O. 01mg/mL 至約 10mg/mL、約 lmg/mL 至約 10mg/mL、約 2mg/mL至約 5mg/mL 或約 O. lmg/mL 至約 2mg/mL。
在一個實施方案中，所述系統(tǒng)以不同的速率釋放一種或多種生物活性劑。例如，所述基質(zhì)以第一速率釋放生物學(xué)活性劑且粒子以第二速率釋放生物學(xué)活性劑。在一個實例性實施方案中，第一速率比第二速率快。在另一實施方案中，所述粒子包含不同粒子的群體，其中每個群體具有與其它粒子群體不同的釋放速率。例如，不同尺寸或形狀的粒子可具有不同的釋放速率。在一些實施方案中，聚合物基質(zhì)和相關(guān)的粒子釋放相同的生物學(xué)活性劑。在其它實施方案中，基質(zhì)和粒子中的生物學(xué)活性劑不同。本公開的另一方面涉及制備多糖制劑的方法，所述多糖制劑具有提供遞送至少一種水平的生物活性劑的能力。這些方法提供多糖且使生物活性劑與多糖相關(guān)。非交聯(lián)以及交聯(lián)多糖鏈通過不同的途徑(例如酶、自由基)經(jīng)受降解，這經(jīng)常限制聚合物在體內(nèi)的壽命。因此，重要的是開發(fā)降低這種自然分解過程的速率和增加產(chǎn)品在組織中的持久性的方法。用于實現(xiàn)聚合物(例如多糖)持久性增加的一種方法是將生物學(xué)活性劑(例如抑制劑分子)封裝到多糖聚合物基質(zhì)自身內(nèi)或進入基質(zhì)內(nèi)相關(guān)的粒子，這可以使抑制劑能夠局部釋放(注射部位)、緩釋及控釋。這還可允許避免自然降解機制。本封裝方法為多糖聚合物基質(zhì)在數(shù)周期間內(nèi)提供了生物學(xué)活性劑(例如降解抑制劑)的恒定供應(yīng)。在其它實施方案中，在數(shù)月期間內(nèi)提供生物活性劑的恒定供應(yīng)。一種封裝方法是通過吸附或通過封裝過程將生物活性劑合并到多糖聚合物基質(zhì)內(nèi)。在后一種情況下，允許生物活性劑在高度水合狀態(tài)下與多糖基質(zhì)混合，接著是基質(zhì)脫水以控制釋放動力學(xué)(例如聚合物的終溶脹比)。高度水合狀態(tài)對應(yīng)于少于約20mg/mL的HA濃度。本公開的另一方面涉及多糖制劑，所述多糖制劑包含多糖基質(zhì)和分散于基質(zhì)內(nèi)的多糖粒子以及至少一種生物活性劑，且進一步包含生物相容的或生物可降解的載體(vessel)，其中所述抑制劑在載體內(nèi)或為載體的一部分。此類載體可由非共價或共價連接的自組裝分子例如脂質(zhì)體、膠束和聚合的囊泡構(gòu)成。脂質(zhì)體是由一種或多種雙層膜構(gòu)成的囊泡，所述雙層膜由具有混合脂鏈的天然衍生的磷脂(例如卵磷脂酰乙醇胺)或純的表面活性組分如二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)形成。脂質(zhì)體，通常但并非定義，含有水溶液的核心；不含有水性材料的脂質(zhì)結(jié)構(gòu)稱為膠束。膠束是分散于液體膠質(zhì)中的表面活性劑分子的聚集物。水溶液中典型的膠束形成聚集物，其具有與周圍溶劑接觸的親水性的“頭部”區(qū)域，在膠束中心封存著疏水性的巢穴區(qū)域。這種類型的膠束稱為正常相膠束(水包油型膠束)。反膠束在中心具有頭基，而尾部伸出(油包水型膠束)。膠束的形狀通常為近似球形，然而，其它形式包括的形狀例如橢圓體、圓柱體，且雙層形狀也是可能的。膠束的形狀和尺寸是其表面活性劑分子的分子幾何形狀以及溶液條件(例如表面活性劑濃度、溫度、PH和離子強度)的函數(shù)。形成膠束的過程稱為膠粒形成并且根據(jù)它們多形性形成許多 脂質(zhì)的相態(tài)特征的一部分。本公開的另一方面涉及用于制備具有降低的降解和生物活性劑釋放的多糖制劑的方法，所述方法包括以下步驟1)提供多糖，2)將抑制劑和至少一種生物活性劑并入生物相容的或生物可降解的粒子或載體中以及3)將所述多糖和粒子與制劑組合。因此這種封裝方法將抑制劑和生物活性劑并入可與多糖同時遞送的生物相容的和生物可降解的粒子。當(dāng)粒子是載體的情況下，它們可由非共價或共價連接的自組裝分子(例如膠束、脂質(zhì)體和聚合囊泡)構(gòu)成。自組裝是本文用于描述過程的術(shù)語，其中由于組分自身特異性、局部性相互作用的結(jié)果先存組分的混亂系統(tǒng)形成組織化的結(jié)構(gòu)或模式。提出的制劑的其它優(yōu)點是增強終產(chǎn)品的流變性能的調(diào)節(jié)能力。交聯(lián)多糖制劑通常具有高粘度并且需要相當(dāng)大的力來擠壓它通過細(xì)針。非交聯(lián)多糖通常用作潤滑劑以促進這個擠壓過程。然而，特別是在HA皮膚填充物中，非交聯(lián)HA對終產(chǎn)品在體內(nèi)的持久性沒有貢獻。事實上，越多的交聯(lián)HA被非交聯(lián)HA所替代以調(diào)節(jié)皮膚填充物的流變性能(對于固定的總HA濃度)，產(chǎn)品的降解抗性將越低。因此，非交聯(lián)GAG也是降解抑制劑(例如硫酸軟骨素、ο-硫酸化透明質(zhì)酸)，可用于延長壽命和改善終產(chǎn)品的流變性能。在一個實施方案中，本文所述的系統(tǒng)是皮膚填充物，其可用于治療中度和重度面部皺紋及皺褶例如鼻唇褶(這些紋從鼻子延伸到嘴角)。皮膚填充物可以是凝膠移植物，包括HA，一種支撐皮膚彈性、提供光滑和柔順外觀的天然復(fù)合糖。它是生物相容的并且可補充可隨著老化而耗盡的身體天然HA。皮膚填充物(dermal filler)或皮膚填充物(dermafiller)可用注射器注射到面部的中層或深層真皮中。真皮是表面下的皮膚層，含有結(jié)締組織、神經(jīng)末梢、汗腺和脂腺以及血管。皮膚填充物可通過提升和增加治療區(qū)域中的皺紋和皺褶的體積而改善皮膚外觀。本公開的另一方面涉及包含本系統(tǒng)、美容載體和另外的活性成分的美容組合物。美容活性成分可包括但不限于抗氧化劑、維生素和濕潤劑。本發(fā)明所述的系統(tǒng)可配制為藥物組合物的一部分，任選地包括一種或多種試劑，例如不限于，乳化劑、濕潤劑、甜味劑或調(diào)味劑、滲漲度調(diào)節(jié)劑、防腐劑、緩沖液、抗氧化劑和類黃酮。用于本公開的藥物組合物的滲漲度調(diào)節(jié)劑包括但不限于鹽，例如醋酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、甘露醇或甘油及其它藥學(xué)上可接受的滲漲度調(diào)節(jié)劑。用于本文所述的藥物組合物的防腐劑包括但不限于氯化苯甲烴銨、氯丁醇、硫柳汞、苯乙酸汞和苯基硝酸汞。各種用于調(diào)整PH的緩沖液和方法可用于制備藥物組合物，包括但不限于醋酸鹽緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液、磷酸鹽緩沖液和硼酸鹽緩沖液。類似地，用于藥物組合物的抗氧化劑是本領(lǐng)域所熟知的且包括例如焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉、乙酰半胱氨酸、丁基羥基苯甲醚和丁基羥基甲苯。類黃酮是植物中發(fā)現(xiàn)的化合物，已知其具有多種有益的生化和抗氧化劑作用。類黃酮的亞類包括黃酮類、黃酮醇類、黃烷酮類(flavanonse)和二氫黃酮醇類。類黃酮的實例包括木犀草素、芹菜素、柑桔黃酮、槲皮素、山奈酚、楊梅黃酮、非瑟酮、異鼠李亭、藿香黃酮醇、鼠李金、橙皮素、柚皮素、圣草素、高圣草素、黃杉素、二氫槲皮素、二氫山萘酚、鞣酸、鞣質(zhì)、濃縮鞣質(zhì)、和可水解鞣質(zhì)。應(yīng)了解這些及藥理學(xué)領(lǐng)域已知的其它物質(zhì)可包括于本發(fā)明的藥物組合物中。本系統(tǒng)的一些優(yōu)點在以下闡述，使用根據(jù)本文所述的方法制備HA皮膚填充物制齊U、根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)及其比較方法制備HA皮膚填充物制劑的實施例。實施例I根據(jù)本公開制備HA填充凝膠將I至5g多糖填充物與1000 μ L磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)溶液(ρΗ 7)混合，所述多糖填充物的HA濃度為24mg/mL、交聯(lián)程度為約6%以及G’為約180 (υΥ θΕΙΙΜ 24HV，(Allergan Inc. , Irvine, California)),所述磷酸鹽緩沖鹽水溶液補充有10_200mg硫酸軟骨素A (CSA-Mw = 5，000-120, OOODa)。將混合物機械均化。 實施例2通過現(xiàn)有技術(shù)的方法制備HA填充凝膠 將I至5g多糖填充物與1000 μ L PBS混合使得終HA濃度與實施例I的相同，所述多糖填充物的HA濃度為24mg/mL、交聯(lián)程度為約6%以及G’為約180Pa (JU VEDERM 24HV)。將混合物機械均化。 實施例3
_3] 根據(jù)本公開替代性制備透明質(zhì)酸填充凝膠將I至5g基于HA的多糖填充物與50 μ L PBS溶液(ρΗ 7)混合，所述多糖填充物的HA濃度為24mg/mL、交聯(lián)程度為約6%以及G’為約170Pa (JUY^DERM 30)，所述PBS溶液補充有l(wèi)_20mg鞣酸(TA-Mw=800-4，OOODa)。將混合物機械均化。實施例4通過現(xiàn)有技術(shù)的方法替代性制備透明質(zhì)酸填充凝膠將I至5g基于HA的多糖填充物與50yL PBS混合使得終HA濃度與實施例3的相同，所述多糖填充物的HA濃度為24mg/mL、交聯(lián)程度為約6%以及G’為約170Pa(兒!V$DE.RM 30)。將混合物機械均化。實施例5根據(jù)本公開制備透明質(zhì)酸填充凝膠將Ig透明質(zhì)酸鈉纖維(NaHA，Mw = O. 3_3MDa)與5_10g 1%氫氧化鈉溶液混合，并且使混合物水合1-5小時。 將50至200mg I, 4_ 丁二醇二縮水甘油醚(BDDE)添加到NaHA凝膠，并且將混合物機械均化。然后將混合物置于40_70°C烘箱中1-4小時。所得的交聯(lián)水凝膠用等摩爾量的鹽酸(HCI)中和并且在PBS(p!T7)中溶脹。加入10至200mg CSA(MW=5, 000-120，OOODa)并且將水凝膠機械均化。實施例6通過現(xiàn)有技術(shù)的方法制備透明質(zhì)酸(HA)填充凝膠將Ig NaHA (Mw=0. 3_3MDa)與5_10g 1%氫氧化鈉溶液混合，并且使混合物水合1_5小時。將50至200mg BDDE (與實施例5具有相同的HA/交聯(lián)劑摩爾比)添加到NaHA凝膠,將混合物機械均化。然后將混合物置于40_70°C烘箱中1-4小時。所得的交聯(lián)水凝膠用等摩爾量的鹽酸(HCI)中和并且在PBS(p!T7)中溶脹使得終HA濃度與實施例5的相同。將獲得的水凝膠機械均化。實施例7酶促降解研究(比色試驗) 使用Morgan-Elson比色測定評估在實施例I和2中制備的HA填充凝膠對酶促降解的抗性。應(yīng)用該測定通過測量HA鏈的分子量的改變來評價酶促降解的程度。將透明質(zhì)酸酶(O. I-IOmg)添加到每種HA制劑，在37°C孵育10-250分鐘，接著加Λ O. ImL O. 8Μ四硼酸鉀溶液并且在100°C加熱10分鐘。給樣品補充3mL醋酸中的10%(wt)對二甲氨基苯甲醛溶液并且在37°C孵育10-120分鐘。對每種HA制劑重復(fù)該方法，省略酶添加步驟以制備對照樣品。酶促降解樣品和對照樣品在585nm光密度(OD)的改變用于對每種制劑的降解程度定量。對根據(jù)本公開的方法和根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)(圖I)制備的填充凝膠測量的結(jié)果表明通過本公開的方法(實施例I :0. 774-25. 184mg/mL CSA)制備的凝膠的OD值比通過現(xiàn)有技術(shù)的方法制備的凝膠的低(實施例2:0mg/ml CSA)。因為OD值表示降解程度，結(jié)果表明根據(jù)本方法制備的凝膠表現(xiàn)出對酶促降解的抗性比根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)制備的凝膠高3-75%。而且，發(fā)現(xiàn)酶促降解的抗性取決于CSA的濃度。與補充CSA的凝膠的情況類似，通過本公開的方法制備的補充TA的凝膠的OD值，如圖2所示(實施例3 :0. 063-1. 000mg/mL TA)，比通過現(xiàn)有技術(shù)的方法制備的凝膠(實施例4:0mg/mL TA)的低。因為OD值表示降解程度，結(jié)果表明根據(jù)本發(fā)明制備的凝膠表現(xiàn)出對酶促降解的抗性比根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)制備的凝膠高15-90%。而且，發(fā)現(xiàn)酶促降解的抗性取決于TA的濃度?？蛇M一步觀察到TA比CSA具有更高的抑制活性，因為它通常采用比TA小的數(shù)量級以獲得與CSA相同的抑制性。實施例8酶促降解研究(可溶件HA測定)通過使用基于SEC-MALS (尺寸排阻多角度光散射)的可溶性HA測定進一步評價實施例I和2中制備的HA填充凝膠對酶促降解的抗性。應(yīng)用該測定通過評價每種樣品的可溶性HA含量(定義為可通過O. 2-1. O μ m過濾器的凝膠的一部分)來定量降解。酶促降解樣品和對照樣品之間可溶性HA含量的差異可用于定量每種HA制劑的降解程度。使用配備有Wyatt光散射和折射率裝置的Agilent尺寸排阻色譜系統(tǒng)進行SEC-MALS試驗。向每種HA制劑中添加透明質(zhì)酸酶(O. I-IOmg)，并在37°C孵育10-250分鐘，接著加入O. Iml O. 8M四硼酸鉀溶液并在100°C加熱10分鐘。將樣品在PBS中稀釋，過濾通過O. 2-1. O μ m過濾器并注入SEC-MALS系統(tǒng)。對每種HA制劑重復(fù)該方法，省略酶添加步驟以制備對照樣品。酶促降解的樣品、對照樣品的可溶性HA含量以及兩者之間的差異概括于圖3中。圖3中所示的結(jié)果(酶促降解試驗結(jié)果表明在不存在CSA的情況下酶促降解后可溶性HA含量的增加更加顯著。這與使用比色降解測定獲得的結(jié)果一致(圖I)并且表明根據(jù)本公開的方法制備的凝膠顯示出比根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)制備的凝膠對酶促降解更高的抗性。與補充CSA的凝膠類似，通過本發(fā)明的方法(實施例3 0. 063-1. 000mg/mL TA)制備的補充TA的凝膠的可溶性HA含量的增加比通過現(xiàn)有技術(shù)的方法(實施例4 :0mg/mL TA)制備的凝膠的低。這些結(jié)果與使用比色降解測定獲得的結(jié)果一致(圖4)。而且，這再次確認(rèn)了 TA的抑制活性比CSA的顯著的高。實施例9持續(xù)擠壓力試驗 使用持續(xù)擠壓力試驗評價實施例5和6中制備的透明質(zhì)酸填充凝膠的流變性能。擠壓力試驗用于確定HA制劑中添加的CSA是否可通過作為潤滑劑起作用而促進擠壓過程。使用具有30G針的5mL注射器在Instron裝置上進行擠壓力試驗。以50mm/min的恒定速率擠壓O. 5mL每種樣品。記錄的峰值力定量擠壓的容易程度。壓縮力作為兩種樣品的壓縮擴展的函數(shù)，示于圖5。圖5中的結(jié)果表明對通過本文所述的方法制備的凝膠記錄的擠壓力比通過現(xiàn)有技術(shù)的方法制備的凝膠的低。這種擠壓力的差異是流動下凝膠硬度差異的特征并且表明通過本文所述的方法制備的凝膠中含有的CSA作為促進流動的潤滑劑起作用。實施例10根據(jù)本公開制備荷載CSA的粒子通過以下方法制備尺寸一致的荷載CSA的粒子通過將10_900mg殼聚糖、I-IOmLIN HCI和l-800mg CSA與20mL MilliQ H2O混合來制備殼聚糖/CSA溶液(溶液A)。通過將O. 1-10%三聚磷酸酯(TPP)與O. 1-10%藻酸鹽混合來制備滴液(溶液B)。將溶液A荷載到一次性3-5mL注射器中并以O(shè). 1-lOmL/min流速擠壓通過27G x1//’針，氣流以l_50mL/min的速率通過針尖。在攪拌下將I-IOmL溶液A噴射到5_100mL溶液B中。所得的粒子在溶液B中孵育1-3天，用MilliQ H2O洗滌3次并且貯存于PBS (pH=7. 4)中直至使用。實施例11根據(jù)本發(fā)明制備荷載CSA粒子的HA填充凝膠使用通過內(nèi)螺旋-內(nèi)螺旋洛克鎖(female-to-female luer-lock)連接的兩個注射器將根據(jù)實施例10制備的荷載CSA的粒子和.RjVtDERM 30充分混合至5mg/mL CSA的終濃度。實施例12根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)制備荷載CSA的HA填充凝膠使用通過內(nèi)螺旋-內(nèi)螺旋洛克鎖連接的兩個注射器將CSA和JUVEDERM 24HV充分混合至10mg/mL CSA的終濃度。實施例13根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)替代性制備荷載CSA的HA填充凝膠使用通過內(nèi)螺旋-內(nèi)螺旋洛克鎖連接的兩個注射器將CSA和JU\4DERVi 30充分混合至10mg/mL CSA的終濃度。實施例14
根據(jù)本公開制備荷載鞣酸(TA)的粒子通過以下方法制備尺寸一致的荷載CSA的粒子通過將10_900mg殼聚糖、I-IOmLIN HCI和l-800mg鞣酸與20mL MilliQ H2O混合來制備殼聚糖/TA溶液(溶液C)。通過將0.1-10%三聚磷酸酯(TPP)與O. 1-10%藻酸鹽混合來制備滴液(溶液D)。將溶液C荷載到一次性3-5mL注射器中并以O(shè). 1-lOmL/min流速擠壓通過27G xV2”針，氣流以l_50mL/min的速率通過針尖。在攪拌下將I-IOmL溶液C噴射到5-100mL溶液D中。所得的粒子在溶液D中孵育1-3天，用MilliQH2O洗滌3次并且貯存于PBS (pH=7. 4)中直至使用。實施例15、
根據(jù)本發(fā)明制備荷載TA粒子的HA填充凝膠使用通過內(nèi)螺旋-內(nèi)螺旋洛克鎖連接的兩個注射器將根據(jù)實施例14制備的荷載TA的粒子和兒j\.$DERM 30充分混合至lmg/mL TA的終濃度。實施例16根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)制備荷載鞣酸(TA)的HA填充凝膠使用通過內(nèi)螺旋-內(nèi)螺旋洛克鎖連接的兩個注射器將TA和幾丨VfDERM 30充分混合至10mg/mL TA的終濃度。實施例17在存在和不存在CSA的情況下進行粒子的視覺比較根據(jù)實施例10制備荷載CSA的粒子。為比較，也根據(jù)相同的一般程序制備沒有CSA的對照粒子并且使用Nikon倒置顯微鏡成像(圖6)。由CSA和殼聚糖之間的靜電相互作用引起的荷載CSA的粒子(圖6，左)的較高不透明性提供了與對照粒子(圖6，右)的視覺對比。而且，通過控制氣流和泵速改變粒子的尺寸分布。使用該技術(shù)成功地制備出直徑范圍為10至1000 μ m之間的粒子。實施例18由HA填充凝膠體外釋放CSA/TACSA是已知的透明質(zhì)酸酶抑制劑，可顯著降低透明質(zhì)酸的降解速率。一種利用這種抑制潛力的方法是將CSA和HA混合。為此目的，根據(jù)實施例12制備樣品并進行體外CSA釋放測定。將CSA/.mvf,DERM 30 和CSA/.KJ\#DERM 24HV 樣品置于 50k 滲析袋
中，每個滲析袋均浸入攪拌的PBS溶液(pH=7.4)中。偶爾從PBS溶液中取出小樣品并且使用SEC-MALS分析以測定釋放的CSA的量。結(jié)果概括于圖7中。CSA/.ilJ\4DERM 30 和CSA/.m\4DERM 24HV 樣品在一周內(nèi)釋放大約
50%CSA。這種快速釋放歸因于許多原因CSA的小尺寸C20kDa)，CSA和HA之間的靜電排斥以及輕微交聯(lián)的HA網(wǎng)絡(luò)，所有均導(dǎo)致弱保留強度。CSA與HA的簡單混合不能提供持續(xù)保護使之免受酶促降解所需的CSA的控釋。鞣酸(TA)是替代性的和非常有潛力的透明質(zhì)酸酶抑制劑。一種利用這種抑制潛力的簡單的方法是將TA與HA混合。為此目的，根據(jù)實施例16將TA與JU\.4DERM 30混合，置于IOOk滲析袋中并浸入PBS緩沖液。偶爾從PBS溶液中取出小樣品并且使用吸光度測量來定量TA含量。結(jié)果概括于圖8中。如在CSA/JUYiDERM 30 的情況，觀察到 TA 從TA/JUV^DERM 30 混合物中的快速釋放，再次確認(rèn)小分子和透明質(zhì)酸填充物凝膠之間簡單混合不能提供控釋和緩釋特征。實施例19由殼聚糖粒子體外釋放CSA/TA根據(jù)實施例10制備荷載CSA的殼聚糖/藻酸鹽粒子，使得封裝的CSA的濃度為5mg/mL。在試驗期間將樣品置于定軌振蕩器上。定期取出樣品，通過O. 45 μ m過濾器過濾并注入SEC-MALS系統(tǒng)。2個月后檢測到無CSA釋放。在此期間粒子保持它們的形狀、尺寸和不透明性以及緩沖液的澄清度。類似地根據(jù)實施例14制備荷載TA的殼聚糖/藻酸鹽粒子，使得封裝的TA的濃度為lmg/mL。在試驗期間將樣品置于定軌振蕩器上。定期從PBS溶液中取出樣品，并用吸光度測量來分析。發(fā)現(xiàn)314nm時的吸光度與TA的量成比例地相關(guān)。結(jié)果概括于圖9中。
與荷載CSA的殼聚糖/藻酸鹽粒子的情況類似，TA從殼聚糖/藻酸鹽粒子中的釋放非常緩慢。這再次確認(rèn)本文所述的封裝系統(tǒng)可提供小分子的慢釋和緩釋特征。此系統(tǒng)可用于體內(nèi)遞送抑制劑、抗氧化劑及其它活性小分子，同時保持良好的穩(wěn)定的保質(zhì)期。實施例20由與HA填充凝膠混合的殼聚糖粒子體外釋放CSA/TA根據(jù)實施例11將荷載CSA的殼聚糖/藻酸鹽粒子與幾jVfDERM 30混合。使用通過內(nèi)螺旋-內(nèi)螺旋洛克鎖連接的兩個注射器每天充分混合制劑并且使用酶促降解測定定期地測試。簡言之，將透明質(zhì)酸酶(O. I-IOmg)添加到制劑，在37°C孵育10-250分鐘，接著添加O. ImL O. 8M四硼酸鉀溶液并在100°C加熱10分鐘。給樣品補充以3mL醋酸中的10%(wt)對二甲氨基苯甲醛溶液，并在37°C孵育10-120分鐘。重復(fù)該方法，省略酶添加步驟以制備對照樣品。酶促降解的樣品和對照樣品之間在585nm處的光密度(OD)改變可用于定量降解程度。將結(jié)果進一步與無抑制劑的制劑(JJUV&.DERM 30)的酶性能進行歸一化并且概括于圖10中。根據(jù)實施例15將荷載TA的殼聚糖/藻酸鹽粒子與幾j\$DERM 30混合。使用通過內(nèi)螺旋-內(nèi)螺旋洛克鎖連接的兩個注射器每天充分混合樣品并且使用上述的酶促降解測定定期地測試。結(jié)果概括于圖10中。上述制劑的抑制活性與從JU Vt.DERM 30粒子系統(tǒng)中釋放的CSA/TA的量直接相關(guān)，并且可用于估計制劑的保質(zhì)期。得出貯存I個月后抑制的增加可忽略不計的結(jié)論，表明從殼聚糖/藻酸鹽粒子30系統(tǒng)中微量釋放CSA/TA。這與實施例19中的結(jié)果一致并且進一步表明提議的封裝系統(tǒng)具有優(yōu)異的保質(zhì)期穩(wěn)定性。除非另外說明，在說明書和權(quán)利要求中用于表示成分的數(shù)量、性質(zhì)(例如分子量)、反應(yīng)條件等的所有數(shù)字應(yīng)理解為在所有情況下由術(shù)語“約”修改。因此，除非顯示相反，說明書和所附的權(quán)利要求中所列的數(shù)值參數(shù)為近似值，可根據(jù)本發(fā)明試圖獲得的期望特征而改變。至少且并不企圖限制與權(quán)利要求的范圍等價的教義的應(yīng)用，每個數(shù)值參數(shù)應(yīng)至少根據(jù)報道的有效數(shù)字的數(shù)字和通過應(yīng)用通常的四舍五入技術(shù)來解釋。盡管闡述本發(fā)明廣泛范圍的數(shù)值范圍和數(shù)值參數(shù)為近似值，但是盡可能精確地報道特定實例中所列的數(shù)值。然而，任何數(shù)值固有地包含由發(fā)現(xiàn)于它們各自的測試測量中的標(biāo)準(zhǔn)偏差必然導(dǎo)致的某些誤差。
描述本發(fā)明上下文(尤其是以下權(quán)利要求的上下文)中使用的術(shù)語“一個”、“一種”、“所述”及類似對象解釋為涵蓋單數(shù)和復(fù)數(shù)，除非本文另外說明或上下文中明顯矛盾。本文數(shù)值的范圍的列舉僅旨在用作分別提及屬于范圍內(nèi)的每個單獨數(shù)值的速記方法。除非本文另外說明，否則將每個單獨的數(shù)值并入說明書如同其在本文單獨列舉。可按任何合適的順序進行本文所述的所有方法，除非本文另外說明或除非上下文中明顯矛盾。任何和所有實例的使用或本文所提供的示例性語言(例如，“例如”)僅旨在更好地闡明本發(fā)明而并不是對本發(fā)明的范圍構(gòu)成限制，除非聲明。不應(yīng)將本說明書中的語言解釋為表明任何未要求保護的組分對實施本發(fā)明是必要的。不應(yīng)將本文公開的發(fā)明的替代性組分或?qū)嵤┓桨傅姆纸M解釋為限制。每個組的成員可以單獨提及和要求保護或者與本文發(fā)現(xiàn)的組的其它成員或其它組分組合提及和要求保護。為方便性和/或?qū)＠栽?，組的一個或多個成員可預(yù)期包括于組中或從組中刪除。當(dāng)發(fā)生任何這種包括或刪除時，說明書被視為包含改變的組，因而符合所附權(quán)利要求中使用的馬什庫組的書面描述。此發(fā)明的某些實施方案在本文中描述，包括發(fā)明人已知的實施該發(fā)明的最佳模式。當(dāng)然，對本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說閱讀上述說明后這些所述的實施方案中的改變應(yīng)該是顯而易見的。發(fā)明人期望熟練的技術(shù)人員酌情利用這些改變，并且發(fā)明人旨在以不同于本文具體描述的方式實施該發(fā)明。因此，此發(fā)明包括如適用法律所許可的所附的權(quán)利要求所列舉的對象的所有修改和等價物。此外，在其所有可能的改變中上述組分的任何組合涵蓋于本發(fā)明中，除非本文另外說明或上下文中明顯矛盾。而且，貫穿本說明書參考了大量的專利和印刷的出版物。每個上述引用的參考文獻和印刷的出版物各自以引用的方式整體并入本文。最后，應(yīng)了解本文公開的本發(fā)明的實施方案闡明了本發(fā)明的原則?？衫玫钠渌鼘嵤┓桨冈诒景l(fā)明的范圍內(nèi)。因此，例如但不限于，可根據(jù)本文的教導(dǎo)使用本發(fā)明的替代性構(gòu)造。因此，本發(fā)明不限于本文所精確顯示和描述的。在權(quán)利要求中使用語言“由組成”或和“大致上由組成”可進一步限定本文公開的特定實施方案。當(dāng)在權(quán)利要求中使用時，當(dāng)提交或每次修正添加時，過渡性術(shù)語“由組成”不包括權(quán)利要求中沒有具體說明的任何組分、步驟或成分。過渡性術(shù)語“大致上由組成”將權(quán) 利要求的范圍限制為特定材料或步驟以及沒有實質(zhì)性影響基本特征和新特征的那些。要求保護的本發(fā)明的實施方案是本文固有的或清楚描述的和能夠?qū)崿F(xiàn)的。
權(quán)利要求
1.一種多糖凝膠制劑，其包含 (a)至少一種多糖，其選自透明質(zhì)酸、纖維素、殼聚糖、0-硫酸化HA、右旋糖酐、硫酸右旋糖酐、硫酸軟骨素、硫酸皮膚素、硫酸角蛋白、肝素、硫酸肝素和藻酸鹽； (b)至少一種多糖降解抑制劑，其選自糖胺聚糖、抗氧化劑、類黃酮、蛋白質(zhì)、脂肪酸及其組合，以及； (C)甘露醇。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的制劑，其中所述多糖是交聯(lián)的透明質(zhì)酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的制劑，其中所述至少一種抑制劑是糖胺聚糖。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的制劑，其中所述糖胺聚糖是硫酸軟骨素。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的制劑，其中所述至少一種抑制劑是鞣酸。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的制劑，其進一步包含生物相容的或生物可降解的載體，其中所述抑制劑在所述載體內(nèi)或為所述載體的一部分，其中所述載體是脂質(zhì)體、膠束或聚合囊泡。
7.一種多糖凝膠制劑，其包含 (a)透明質(zhì)酸； (b)至少一種多糖降解抑制劑，其選自糖胺聚糖、抗氧化劑、類黃酮、蛋白質(zhì)、脂肪酸及其組合，以及； (C)甘露醇。
8.一種制備多糖凝膠制劑的方法，其包括使降解時間增加，包括以下步驟 提供至少一種多糖，其選自透明質(zhì)酸、纖維素、殼聚糖、0-硫酸化HA、右旋糖酐、硫酸右旋糖酐、硫酸軟骨素、硫酸皮膚素、硫酸角蛋白、肝素、硫酸肝素和藻酸鹽以及在所述多糖中并入至少一種多糖降解抑制劑，其選自糖胺聚糖、抗氧化劑、類黃酮、蛋白質(zhì)和脂肪酸及甘露醇。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述并入步驟包括I)在高度水合狀態(tài)下將所述至少一種抑制劑與所述至少一種多糖混合，由此將所述至少一種抑制劑封裝到多糖網(wǎng)絡(luò)中，以及2)使所述多糖網(wǎng)絡(luò)脫水，由此控制釋放動力學(xué)或終溶脹比。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述并入步驟包括I)將所述至少一種抑制劑封裝到生物相容的或生物可降解的載體里以及2)將所述至少一種多糖和所述載體組合到凝膠制劑里。
11.一種軟組織擴充系統(tǒng)，其包含具有分散于其中的多糖粒子的多糖基質(zhì)，其中所述基質(zhì)和/或所述粒子進一步包含至少一種生物學(xué)活性劑，且其中所述基質(zhì)和/或所述粒子控制所述至少一種生物學(xué)活性劑從所述基質(zhì)和/或所述粒子中的釋放并進入所述軟組織。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的軟組織擴充系統(tǒng)，其中所述基質(zhì)以第一速率釋放生物學(xué)活性劑和所述粒子以第二速率釋放生物學(xué)活性劑。
13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的軟組織擴充系統(tǒng)，其中所述基質(zhì)和所述粒子釋放不同的生物學(xué)活性劑。
14.根據(jù)權(quán)利要求11所述的軟組織擴充系統(tǒng)，其中所述粒子包含與三聚磷酸酯物理交聯(lián)并用藻酸鹽包被的殼聚糖。
15.根據(jù)權(quán)利要求11所述的軟組織擴充系統(tǒng)，其中所述粒子包含與鈣物理交聯(lián)并用殼聚糖穩(wěn) 定的藻酸鹽。
全文摘要
本文描述了包括至少一種多糖降解抑制劑的多糖凝膠制劑及其制備方法。本文所述的方法包括提供至少一種多糖和將至少一種降解抑制劑并入多糖的步驟。
文檔編號A61K47/10GK102711722SQ201080061072
公開日2012年10月3日 申請日期2010年11月8日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月10日
發(fā)明者A·泰澤爾, C·S·馬德, D·B·萊斯利, D·斯特姆普利斯 申請人:阿勒根公司