專利名稱：用于預(yù)防流感感染的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及包含丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物的組合物。或者，本發(fā)明涉及用于預(yù)防流感感染的組合物或針對(duì)流感感染的預(yù)防方法。
背景技術(shù)：
流感是一種高傳染性的感染，其中流感病毒為病原體。流感病毒是屬于正粘病毒科(Orthomyxoviridae family)的負(fù)鏈單鏈RNA病毒。正粘病毒科由單獨(dú)一個(gè)流感病毒屬組成(一屬一科)。根據(jù)其核內(nèi)蛋白抗原性上的差異，存在甲型至丙型流感病毒三個(gè)亞型。與作為宿主只感染人的乙型和丙型相對(duì)，甲型流感病毒能夠感染廣泛多樣的生物，如哺乳動(dòng)物和禽類。因此，其通過在禽類和哺乳動(dòng)物體內(nèi)經(jīng)歷基因雜交能夠容易地形成具有不同、病原性和抗原性的突變體病毒。例如，豬流感是近年來(lái)的全球性流行病，其是由甲型流感病毒亞型HlNl感染發(fā)展出的流感。認(rèn)為豬流感病毒會(huì)感染人，導(dǎo)致大流行病。另外，預(yù)計(jì)會(huì)成為大流行病的高毒力禽流感當(dāng)該高毒力禽流感病毒獲得對(duì)人的感染性時(shí)可導(dǎo)致大流行病(Sugawara，T.等，WHO)。用于抑制流感病毒的治療劑現(xiàn)在已有市售。據(jù)稱，當(dāng)在感染后的早期恰當(dāng)施用市售的流感治療劑時(shí)，能夠期望充分的治療效果。然而，流感仍然是一種危險(xiǎn)的感染，尤其是在高風(fēng)險(xiǎn)群體包括老人、兒童、和患有慢性病的人中。另外，已經(jīng)報(bào)道對(duì)治療劑有抗性的病毒的出現(xiàn)。即使在有發(fā)達(dá)的治療劑的現(xiàn)今，接種流感疫苗來(lái)防止流感加重也是重要的。使用流感疫苗免疫可誘導(dǎo)出針對(duì)流感病毒的中和抗體，后者能夠防止感染之后的病毒生長(zhǎng)并防止感染的擴(kuò)散(C，Avendan0等和Zhu Q等)。當(dāng)所述病毒與作為疫苗給予的病毒具有相似的抗原性時(shí)，據(jù)稱防止加重的作用會(huì)很高。據(jù)報(bào)道當(dāng)與在健康成人中通過疫苗接種誘導(dǎo)出中和抗體的比例(70%至90% )相比,在老人中誘導(dǎo)的比例較低(17%至53% ) (GoodwinK，等)。老人中的免疫系統(tǒng)減弱，并且可能在感染發(fā)生時(shí)導(dǎo)致加重和死亡。鑒于此，提高老人當(dāng)中的中和抗體的誘導(dǎo)率是尤為重要的。現(xiàn)有技術(shù)文件[專利文獻(xiàn)][專利文獻(xiàn)1]W0 2001/028547[專利文獻(xiàn)2]TO 2004/085364[專利文獻(xiàn)3]TO 2007/023935[專利文獻(xiàn)4] WO 2005/094850[非專利文獻(xiàn) I] Sugawara T.等，Kansensho-shi (The Journal of Infection),2008,82 427-433[非專利文獻(xiàn) 2] World Health Organization !Department of CommunicableDisease Surveillance and Response Global Influenza Programmed,2005.
[非專利文獻(xiàn) 3]C, Avendano 等，J Parenter Enteral Nutr. 2004 ；28 :348_54.[非專利文獻(xiàn) 4]Zhu Q,等，Biochem Biophys Res Commun. 2005 ;329 :87_94·[非專利文獻(xiàn) 5]Goodwin K，等，Vaccine. 2006Feb 20 ；24(8) : 1159-69.

發(fā)明內(nèi)容
[本發(fā)明解決的技術(shù)問題]本發(fā)明的目的是提供包含丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物的組合物。具體而言，本發(fā)明的目的是提供針對(duì)流感病毒感染具有預(yù)防效果的組合物。本發(fā)明的另一目的是提供具有腸功能調(diào)節(jié) 作用的組合物。[解決技術(shù)問題的手段]針對(duì)病毒感染的流感疫苗的預(yù)防效果主要依賴于對(duì)病毒中和抗體的誘導(dǎo)。因此，在疫苗接種之后刺激中和抗體的誘導(dǎo)被認(rèn)為有效增強(qiáng)疫苗的預(yù)防效果?；蛘哒f，在病毒感染過程中，在患者體內(nèi)作為正常免疫應(yīng)答而誘導(dǎo)的病毒中和抗體是患者重要的生物防御機(jī)制。本發(fā)明人對(duì)于能夠增強(qiáng)因流感疫苗和病毒感染引起的對(duì)病毒中和抗體的誘導(dǎo)的組分進(jìn)行了大量研究。結(jié)果是，本發(fā)明人揭示出在流感疫苗接種時(shí)的病毒中和抗體誘導(dǎo)在施用特定微生物培養(yǎng)物的動(dòng)物中增強(qiáng),并由此完成了本發(fā)明。具體而言,本發(fā)明涉及以下組合物及其用途[I], 一種用于流感感染的預(yù)防組合物，其包含丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物。[2], [I]的組合物，其中所述丙酸細(xì)菌是費(fèi)氏丙酸桿菌。[3], [I]的組合物，其附加地還包含乳發(fā)酵組分以及/或寡糖。[4], [3]的組合物，其中所述乳發(fā)酵組分是通過使用屬于乳桿菌屬(genusLactobacillus)的乳酸細(xì)菌和屬于鏈球菌屬(genus Streptococcus)的乳酸細(xì)菌之任一或二者將乳發(fā)酵而產(chǎn)生的乳或其混合物。[5], [3]的組合物，其中所述乳發(fā)酵組分是非成熟乳酪。[6], [3]的組合物，其中構(gòu)成前述寡糖的糖中的至少一種是半乳糖。[7], [3]的組合物，其中所述組合物包含丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物和乳發(fā)酵組分，并且二者均已經(jīng)過滅菌。[8], [I]的組合物，所述組合物用于經(jīng)腸施用給接受流感疫苗接種的動(dòng)物。[9], [3]的組合物，其包含以下營(yíng)養(yǎng)素丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物；乳發(fā)酵組分；寡糖；蛋白質(zhì)；糖類；脂質(zhì)；和膳食纖維。[10]· [9]的組合物，其附加地還包含至少一種選自下組的營(yíng)養(yǎng)素維生素、礦物質(zhì)、有機(jī)酸和有機(jī)堿。[11]. 一種用于在接種有流感疫苗的動(dòng)物中促進(jìn)流感病毒中和抗體的誘導(dǎo)的作用齊U，其包含丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物。[12]. —種流感感染的預(yù)防方法，其包括以下步驟(I)向動(dòng)物施用丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物；和(2)向動(dòng)物接種流感疫苗。[13]. [12]中所述的流感感染的預(yù)防方法，其中步驟(I)在步驟(2)之前、在步驟(2)之后或與步驟(2)同時(shí)進(jìn)行至少一次。[14]. [12]中所述的流感感染的預(yù)防方法，其中在步驟(I)中將所述丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物與乳發(fā)酵組分以及/或寡糖一起施用。 [15]· —種包含以下組分的組合物(a)寡糖；(b)乳發(fā)酵組分；和(C)丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物。[16]. [15]的組合物，其中構(gòu)成前述寡糖的糖中的至少一種是半乳糖。[17]. [15]的組合物，所述組合物是用于調(diào)節(jié)腸功能的組合物。[發(fā)明效果]本發(fā)明的組合物增強(qiáng)流感疫苗在誘導(dǎo)中和抗體方面的效果。本發(fā)明的組合物可以通過混合現(xiàn)已作為流食施用給人體的組分等來(lái)制備。因此，本發(fā)明的組合物的高安全性已得保障。相應(yīng)地，本發(fā)明的組合物不僅可以在接種時(shí)同時(shí)施用，還可以在接種的時(shí)間前后連續(xù)施用。就本發(fā)明組合物的連續(xù)施用而言，能夠期待促進(jìn)中和抗體誘導(dǎo)的持續(xù)作用。通常將佐劑混入疫苗來(lái)增強(qiáng)針對(duì)病毒疫苗如流感病毒的免疫應(yīng)答。無(wú)需贅言，對(duì)混入疫苗的佐劑要求有高水平的安全性。因此，開發(fā)新佐劑需要謹(jǐn)慎的安全性檢查。與之相對(duì)，由于所有構(gòu)成本發(fā)明組合物的各組分都是已經(jīng)作為食品消費(fèi)的，證明即使在將它們連續(xù)經(jīng)腸施用給人體時(shí)也沒有風(fēng)險(xiǎn)。另外，本發(fā)明的組合物可以與已知佐劑組合進(jìn)行經(jīng)腸施用。即，本發(fā)明不僅在安全性方面，在提供作為增強(qiáng)針對(duì)疫苗的免疫應(yīng)答的手段的新選擇方面亦有重大意義。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物與已經(jīng)廣泛作為流食或食品消費(fèi)的組分組合起來(lái)提供。因此，連續(xù)消費(fèi)作為流食的本發(fā)明組合物能夠產(chǎn)生針對(duì)流感病毒誘導(dǎo)中和抗體的能力持續(xù)升高的狀態(tài)。流感病毒感染對(duì)于流感重癥化的風(fēng)險(xiǎn)高的人群(如老人或住院患者)是嚴(yán)重的問題。然而，如果作為流食預(yù)防性地施用本發(fā)明的組合物，能夠提高整個(gè)群體預(yù)防感染的能力。附圖
簡(jiǎn)述圖I顯示實(shí)驗(yàn)方案(每種流食的施用期間，疫苗接種和抗體測(cè)量的時(shí)間點(diǎn)，和經(jīng)腸菌群分析的時(shí)間點(diǎn))。圖2呈現(xiàn)顯示施用乳發(fā)酵組分和丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物對(duì)疫苗接種之后中和抗體效價(jià)的作用的圖表。在該圖中，縱軸顯示抗體效價(jià)的對(duì)數(shù)值(IoglO)，而橫軸顯示疫苗接種之后的經(jīng)過時(shí)間(周)。對(duì)照組和試驗(yàn)組這兩組之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性通過Mann-Whitney U檢驗(yàn)來(lái)分析，而疫苗接種后第2周和第6周之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性通過Wilcoxon符號(hào)秩和檢驗(yàn)來(lái)分析。記號(hào)*指示第6周和第2周之間在與感染相關(guān)的中和抗體效價(jià)方面的顯著差異(P< O. 05)。A :針對(duì)HlNl的中和抗體效價(jià)；B :針對(duì)H3N2的中和抗體效價(jià)；和C :針對(duì)BI抗原的中和抗體效價(jià)。圖3呈現(xiàn)顯示檢查過程中糞便得分的變化的圖表。在該圖中，縱軸顯示Bristol糞便分級(jí)(1-7)，而橫軸顯示每種流食的施用期間(周)。對(duì)照組和試驗(yàn)組這兩組之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性通過Mann-Whitney U檢驗(yàn)來(lái)分析。對(duì)于每周檢查前和檢查后之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異通過Wilcoxon符號(hào)秩和檢驗(yàn)來(lái)分析。另外，記號(hào)*指示對(duì)照組和試驗(yàn)組之間的顯著差異(P < O. 05)，而記號(hào)“a”指示與分組時(shí)(-4周)相比存在顯著差異(P < O. 05)。圖4呈現(xiàn)顯示乳發(fā)酵組分和丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物對(duì)流感疫苗接種時(shí)血液細(xì)胞因子濃度的作用。在該圖的縱軸上，A、B和C分別指示IL-7濃度(pg/mL)、IL-17濃度(pg/mL)和TGF-β I濃度(ng/mL)。橫軸顯示當(dāng)定義分組的時(shí)間為_4周時(shí)在采血時(shí)所經(jīng)過的時(shí)間(周)。對(duì)照組和試驗(yàn)組這兩組之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性通過Student’ s t檢驗(yàn)(均勻分布)或Welch檢驗(yàn)(不均勻分布)來(lái)分析。對(duì)于每周在檢查之前和檢查過程中的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性通過相應(yīng)的t檢驗(yàn)來(lái)分析。
發(fā)明的實(shí)施方式本發(fā)明提供用于預(yù)防流感感染的組合物或用于流感感染的預(yù)防劑，其包含丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物。本發(fā)明的預(yù)防劑或預(yù)防組合物包含丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物?！氨峒?xì)菌”指屬于丙酸桿菌屬(genus Propionibacterium)的革蘭氏陽(yáng)性厭氧細(xì)菌,其是以無(wú)氧方式從糖類產(chǎn)生丙酸的微生物。具體而言，以下微生物的培養(yǎng)物可以添加至本發(fā)明的組合物。弗氏丙酸桿菌(Propionibacteriumfreudenreichii)；特氏丙酸桿菌(Propionibacteriumthoenii (P. thoenii))；產(chǎn)丙酸丙酸桿菌(Propionibacteriumacidipropionici (P.acidipropionici))；詹氏丙酸桿菌(Propionibacteriumjensenii (P. jensenii));等。這些丙酸細(xì)菌是用于乳酪生產(chǎn)的微生物。此外，以下微生物也稱作丙酸細(xì)菌。貪婪丙酸桿菌(Propionibacteriumavidum(P. avidum))；瘡皰丙酸桿菌(Propionibacteriumacnes (P. acnes))；嗜淋巴丙酸桿菌(PropionibacteriumlymphophiIum(P. Iymphophilum));或顆粒丙酸桿菌(Propionibacterium granulosam(P. granulosam))。用于從自然界或發(fā)酵乳分離這些微生物的方法是已知的?？梢允褂迷谌鹗咳槔?Swiss cheese)生產(chǎn)中使用的丙酸細(xì)菌等。本發(fā)明中的丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物指其中在合適培養(yǎng)條件下培養(yǎng)丙酸細(xì)菌如上述那些的材料。用于培養(yǎng)丙酸細(xì)菌的方法是已知的。在培養(yǎng)丙酸細(xì)菌時(shí)，可以采用WO 03/016544 Al等文中描述的條件。例如，作為用于培養(yǎng)丙酸細(xì)菌的培養(yǎng)基，向粉狀脫脂乳添加啤酒酵母提取物等而得到的組合物或通過蛋白水解處理粉狀脫脂乳而產(chǎn)生的物質(zhì)是已知的。丙酸細(xì)菌的培養(yǎng)物能夠通過將弗氏丙酸桿菌接種至合適的培養(yǎng)基中，并在容許丙酸細(xì)菌增殖的條件下培養(yǎng)它們來(lái)獲得?；蛘?，作為將丙酸細(xì)菌培養(yǎng)至高濃度的方法，有在通過將礦物質(zhì)和單糖添加至乳清蛋白質(zhì)濃縮物(WPC)或其酶降解產(chǎn)物而制造的培養(yǎng)基中培養(yǎng)丙酸細(xì)菌的方法(日本專利申請(qǐng)公開號(hào)(JP-A)H10-304871(未經(jīng)審查的、公開的日本專利申請(qǐng)))。例如，可以通過在含有乳清蛋白質(zhì)濃縮物的培養(yǎng)基中培養(yǎng)弗氏丙酸桿菌而獲得的培養(yǎng)物是本發(fā)明中優(yōu)選的丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物?；蛘?，作為培養(yǎng)丙酸細(xì)菌的高效培養(yǎng)方法，有在循環(huán)培養(yǎng)溶液的同時(shí)在不同發(fā)酵罐中培養(yǎng)雙歧桿菌和丙酸細(xì)菌的方法(JP-A (Kokai) H08-66178)。能夠通過這些培養(yǎng)方法獲得的丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物可以混合入本發(fā)明的組合物。例如，通過添加經(jīng)加工乳清作為培養(yǎng)基的主要成分，能夠以高密度培養(yǎng)丙酸細(xì)菌。以下成分可以作為經(jīng)加工乳清的實(shí)例展示乳清粉；和
乳清或乳清粉經(jīng)蛋白酶處理的產(chǎn)物。除了乳清蛋白質(zhì)之外，可向所述培養(yǎng)基添加礦物質(zhì)和單糖的混合物。為了降低培養(yǎng)基中的糖濃度，可以添加乳清蛋白質(zhì)濃縮物(下文可能將其稱作“WPC”)作為乳清蛋白質(zhì)源。WPC可通過透析處理乳清降低乳糖含量而獲得。乳清蛋白質(zhì)濃縮物通過進(jìn)一步以高純度分離蛋白質(zhì)組分可以制成乳清蛋白質(zhì)分離物(下文可能將其稱作“WPI”)。通過向培養(yǎng)基中添加這些組分和單獨(dú)添加適量的糖和缺乏的礦物質(zhì)，培養(yǎng)基組合物可以用于培養(yǎng)丙酸細(xì)菌。乳清是在從牛乳去除了例如脂肪、酪蛋白、脂溶性微生素等后剩余的水溶性組分。乳清通常指乳酪乳清和凝乳乳清(rennet whey)(或者也稱作甜乳清)，其可以作為產(chǎn)生天然乳酪或凝乳酶凝乳酪時(shí)的副產(chǎn)品獲得；或指酪蛋白乳清或夸克乳清(quark whey)(或者也稱作酸乳清)，其在從脫脂乳產(chǎn)生酸性酪蛋白或夸克(quark)時(shí)獲得。乳清的主要成分是蛋白質(zhì)(β -乳球蛋白、α -乳白蛋白等)、乳糖、水溶性維生素和鹽類(礦物質(zhì)組分)，并且其各自的特征已經(jīng)在作為牛乳組分而非作為乳清組分的研究中得到了闡釋?！叭榍逑嚓P(guān)產(chǎn)品”的實(shí)例包括通過濃縮乳清產(chǎn)生的濃縮乳清；通過干燥乳清產(chǎn)生的乳清粉；通過使用超濾(UF)法等濃縮乳清的主要蛋白、然后進(jìn)行干燥處理而產(chǎn)生的乳清蛋白質(zhì)濃縮物(下文也稱作“WPC”)；通過使用微濾(MF)法或離心法從乳清去除脂肪、繼之以使用UF法濃縮和干燥處理而產(chǎn)生的脫脂WPC (低脂、高蛋白)；通過對(duì)乳清的主要蛋白質(zhì)通過離子交換樹脂法或凝膠過濾法進(jìn)行選擇性分級(jí)處理、繼之以干燥處理而產(chǎn)生的蛋白質(zhì)分離物(下文中也稱作“WPI”)；通過使用納濾(nanofiltration ；NF)法和電透析法進(jìn)行脫鹽處理、繼之以干燥處理而產(chǎn)生的脫鹽乳清；和通過對(duì)源自乳清的礦物質(zhì)組分進(jìn)行沉淀處理、然后進(jìn)行通過離心法等的濃縮處理而產(chǎn)生的礦物質(zhì)濃縮乳清。其中，將含有干重15%至80% (按固形物含量)乳蛋白的WPC定義為蛋白濃縮乳清粉并在1998年3月30日根據(jù)關(guān)于乳的省令的部分修訂版(partial revision of the ministerial ordinance on milk)歸類為乳制品(濃縮乳清、乳清粉、WPC和乳清蛋白質(zhì)濃縮粉，只要其經(jīng)歷了在關(guān)于乳的省令中指明的生產(chǎn)步驟，而與是否存在脫鹽步驟無(wú)關(guān))。乳清蛋白質(zhì)濃縮物(WPC)是通過使用超濾(UF)法等濃縮乳清的主要蛋白、然后進(jìn)行干燥處理而獲得的材料。一般來(lái)說，其是固形物含量的約25%或更多為乳清蛋白質(zhì)的材料的通稱。其能夠通過減少乳清中的乳糖和鹽類以使相對(duì)乳清蛋白質(zhì)含量提高至固形物含量的約25%至80%來(lái)獲得。具體而言，將以干重的15%至80%含有乳蛋白的WPC根據(jù)關(guān)于乳的省令定義為蛋白濃縮乳清粉。用于產(chǎn)生乳清蛋白質(zhì)濃縮物(WPC)的標(biāo)準(zhǔn)方法如下所述(I)對(duì)乳清進(jìn)行膜分離然后進(jìn)行濃縮的步驟；或(2)對(duì)乳清進(jìn)行膜分離、然后進(jìn)行濃縮和干燥的步驟。
常用設(shè)備和方法可用于所述濃縮處理，例如，可以使用在減壓下加熱的方法，使用真空蒸發(fā)器、真空釜、升膜管式濃縮器、降膜管式濃縮器、板型濃縮器等。另外，常用設(shè)備和方法也可用于所述干燥處理，例如，可以使用噴霧干燥法、轉(zhuǎn)鼓干燥法、冷凍干燥法、真空(降壓)干燥法。乳清蛋白質(zhì)分離物(WPI)是能夠通過用離子交換樹脂法或電透析法來(lái)濃縮乳清的主要蛋白、然后進(jìn)行干燥而獲得的材料。一般來(lái)說，WPI是其中固形物含量的約85%至95%為乳清蛋白質(zhì)的材料的通稱。其可以通過減少乳清中的乳糖、鹽類等以使相對(duì)乳清蛋白質(zhì)含量提高至固形物含量的約90% (85%至95% )來(lái)獲得。用于生產(chǎn)乳清蛋白質(zhì)分離物(WPI)的標(biāo)準(zhǔn)方法如下所述(I)對(duì)乳清進(jìn)行膜分離、離子交換樹脂處理或電透析處理、然后進(jìn)行濃縮的步驟；或、
(2)對(duì)乳清進(jìn)行膜分離、離子交換樹脂處理或電透析處理、然后進(jìn)行濃縮和干燥的步驟。常用的設(shè)備和方法可用于所述濃縮處理，例如，可以使用在減壓下加熱的方法，使用真空蒸發(fā)器、真空釜、升膜管式濃縮器、降膜管式濃縮器、板型濃縮器等。另外，常用設(shè)備和方法也可用于所述干燥處理，例如，可以使用噴霧干燥法、轉(zhuǎn)鼓干燥法、冷凍干燥法、真空(減壓)干燥法。在本發(fā)明中，以下組合物可以例示為用于培養(yǎng)丙酸細(xì)菌的優(yōu)選培養(yǎng)基組合物。下文所示的數(shù)值均為重量比(w/w%)。在下文中，當(dāng)所述組合物以百分比表示時(shí)，將使用重量比(w/w%)，除非另行說明。蛋白質(zhì)含量1%至5%，優(yōu)選1.5%至4.0%糖類含量1%至4%，優(yōu)選1.5%至3.0%為了獲得這種含量，調(diào)整添加的乳清粉、乳清蛋白質(zhì)或其經(jīng)蛋白酶處理的產(chǎn)物的量。此外，通過對(duì)乳糖進(jìn)行乳糖酶處理獲得的單糖或葡萄糖，而非乳糖，是優(yōu)選的糖類。為了降低培養(yǎng)基的成本和獲得適合于作為食物消費(fèi)的培養(yǎng)物，經(jīng)乳糖酶處理的乳清礦物質(zhì)溶液可以用作糖類和礦物質(zhì)的來(lái)源。具體而言，WPC可用作蛋白質(zhì)源，而乳清礦物質(zhì)可以用作糖類和礦物質(zhì)的來(lái)源。與使用乳清粉作為培養(yǎng)基中的成分時(shí)相比，通過使用WPC和乳清礦物質(zhì)的最優(yōu)比例混合物作為培養(yǎng)基的成分，可以以更高的濃度培養(yǎng)丙酸細(xì)菌。制備用于培養(yǎng)丙酸細(xì)菌的培養(yǎng)基的詳細(xì)方法會(huì)在下文描述。WPC (牛)在被還原后，用蛋白酶處理以降解蛋白質(zhì)。所述蛋白酶是源自酒曲霉(曲霉(aspergillus))的內(nèi)切型和外切型蛋白酶,并且使用的量是待降解蛋白質(zhì)的量的3 %。所述反應(yīng)在50°C和pH 7. O進(jìn)行，并且持續(xù)攪拌三至五個(gè)小時(shí)直至觀察不到pH的降低。將乳清礦物質(zhì)用乳糖酶處理以降解乳糖。使用的乳糖酶的量是待降解的糖類的量的2%至8%，所述反應(yīng)在50°C至60°C (55°C為優(yōu)選)和pH 5至6進(jìn)行，并且持續(xù)攪拌直至所述蛋白質(zhì)完全降解。接下來(lái)，將所述兩種溶液混合，優(yōu)選使得作為最終培養(yǎng)物濃度，所述蛋白濃度變?yōu)镮 %至5% (優(yōu)選I. 5%至4.0%)且所述糖類濃度變?yōu)镮 %至4% (優(yōu)選I. 5%至3.0%)。最后，將在培養(yǎng)丙酸細(xì)菌時(shí)常規(guī)使用的組分如酵母提取物、硫酸鈉、天冬酰胺等添加至所述培養(yǎng)基，然后將pH調(diào)節(jié)至5至8(優(yōu)選5. 5至7. 5)以完成培養(yǎng)基制備。培養(yǎng)丙酸細(xì)菌的步驟將如下所述相應(yīng)地進(jìn)行。具體而言，培養(yǎng)基溫度設(shè)定在20°C至40°C，并且接種起子(starter)使得培養(yǎng)開始后即刻的活細(xì)胞數(shù)為107-108cfu/mL。然后將細(xì)胞培養(yǎng)3至4天。使用碳酸鉀水溶液將pH保持在5. 5至7. 5。在培養(yǎng)過程中可以額外補(bǔ)充葡萄糖。這種方式獲得的培養(yǎng)物中丙酸細(xì)菌的量達(dá)到常規(guī)培養(yǎng)物中的量的約五倍。如上所述的培養(yǎng)條件是優(yōu)選的，尤其對(duì)于培養(yǎng)用于乳酪的丙酸細(xì)菌。除了弗氏丙酸桿菌，產(chǎn)丙酸丙酸桿菌、詹氏丙酸桿菌、特氏丙酸桿菌等可以用作用于乳酪的丙酸細(xì)菌。更具體而言，能夠作為丙酸細(xì)菌產(chǎn)生以下細(xì)菌菌株的培養(yǎng)物可以用于本發(fā)明中。弗氏丙酸桿菌ATCC 6207弗氏丙酸桿菌ATCC 8262弗氏丙酸桿菌IFO 12424弗氏丙酸桿菌IFO 12426弗氏丙酸桿菌IFO 12391弗氏丙酸桿菌ET_3(FERM BP-8115)這些丙酸細(xì)菌可以單獨(dú)培養(yǎng)或通過混合多種細(xì)菌菌株來(lái)培養(yǎng)。或者，所述多種微生物可以獨(dú)立培養(yǎng)，然后可以混合獲得的培養(yǎng)物。這種方式獲得的培養(yǎng)物可以照原樣直接提供用于進(jìn)食和飲用。此外，可以將其粉末化或進(jìn)行液化處理以產(chǎn)生功能性成分，然后加工成容易操作的形式。即，通過培養(yǎng)上述丙酸細(xì)菌獲得的培養(yǎng)物可以直接或在加工后混入本發(fā)明的組合物。此外，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠恰當(dāng)?shù)卣{(diào)節(jié)培養(yǎng)基組成和培養(yǎng)條件以進(jìn)一步優(yōu)化這些已知方法。例如，除了酪蛋白、WPC等，可以添加多種氨基酸及其鹽作為氮源，可以提高丙酸細(xì)菌的增殖能力和它們針對(duì)流感感染的預(yù)防效果。不僅是培養(yǎng)基組分，也可以調(diào)節(jié)培養(yǎng)條件以供優(yōu)化。培養(yǎng)條件包括培養(yǎng)氣氛的氧濃度、溫度、壓力等。只要本發(fā)明的丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物的級(jí)分保持其針對(duì)流感病毒感染的預(yù)防效果，就可以使用。因此，丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物包括，例如，丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物本身、培養(yǎng)物上清液、細(xì)菌細(xì)胞、其提取物、其干粉或其稀釋物。此處，“丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物本身”意指所述丙酸細(xì)菌和培養(yǎng)基組分處于混合狀態(tài)。丙酸細(xì)菌在培養(yǎng)基組分中的分散狀態(tài)可以是任何狀況。即，丙酸細(xì)菌在所述培養(yǎng)基組分中可以是分散的或沉淀的。另一方面，“培養(yǎng)物上清液”通常指從所述“丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物本身”通過過濾、離心等去除丙酸細(xì)菌的細(xì)菌細(xì)胞的狀況。此外，“細(xì)菌細(xì)胞”指從所述“丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物本身”分離的丙酸細(xì)菌。培養(yǎng)基組分和丙酸細(xì)菌細(xì)胞的不完全分離通常是可以接受的。因此，例如，培養(yǎng)基組分對(duì)從所述培養(yǎng)物分離的丙酸細(xì)菌細(xì)胞的污染是可以接受的。例如，當(dāng)所述丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物的某個(gè)級(jí)分的促進(jìn)流感疫苗接種之后的中和抗體誘導(dǎo)的效果與同一丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物相比(分級(jí)之前)例如是30%或更高，優(yōu)選50%或更高，或更優(yōu)選70%或更高時(shí)，則可以說保持了所述培養(yǎng)物針對(duì)流感病毒感染的預(yù)防效果。丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物可以在培養(yǎng)之后滅菌并與本發(fā)明的組合物混合?；蛘?，可以將已經(jīng)與乳發(fā)酵組分混合的組合物滅菌。例如，如關(guān)于牛乳的省令所規(guī)定的，通常對(duì)牛乳進(jìn)行以下加熱滅菌低溫保持巴氏消毒；
高溫保持巴氏消毒；高溫短時(shí)間巴氏消毒；或超高溫瞬時(shí)巴氏消毒(ultrahigh-temperatureflash pasteurization)。這些殺菌方法或滅菌方法可以應(yīng)用于本發(fā)明的丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物或應(yīng)用于包含它們的組合物。殺菌處理可以分批次單位進(jìn)行，或者可以連續(xù)進(jìn)行。處理溫度和處理時(shí)間可能依賴于殺菌方法而不同，但是優(yōu)選地，其依賴于上述巴氏消毒法選自50°C至200°C和O. I秒至I小時(shí)的范圍。在對(duì)所述丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物進(jìn)行巴氏消毒時(shí)，期望的是將溶液中溶解氧量保持在降低的狀態(tài)。相應(yīng)地，優(yōu)選在加熱滅菌過程中保持連續(xù)的惰性氣體氣氛。惰性氣體的實(shí)例包括氮?dú)?、氬氣和二氧化碳?xì)怏w。在它們之中，氮?dú)馐莾?yōu)選的惰性氣體，因?yàn)槠浯罅看嬖谟诳諝庵?。它的成本相?duì)較低且其安全性是確定的。另外，它不影響食品和飲料的味道和質(zhì)量。本發(fā)明人確認(rèn)了丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物在滅菌之后 保有其對(duì)于流感的預(yù)防效果。在本發(fā)明中，所述丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物針對(duì)流感感染的預(yù)防效果在滅菌之后得到保持。概括而言，乳酸細(xì)菌對(duì)于宿主的作用依賴于活細(xì)菌的功能。因此，在滅菌后培養(yǎng)物中鑒定出有用的功能是出乎意料的發(fā)現(xiàn)。有許多報(bào)道稱益生菌(probiotics)和益生元(prebiotics)改善經(jīng)腸環(huán)境并激活免疫系統(tǒng)。一般來(lái)說，益生菌指在活狀態(tài)下引入宿主腸內(nèi)時(shí)可為宿主帶來(lái)有益作用的微生物。與益生菌相對(duì)，益生元指通過作用于原本生長(zhǎng)在經(jīng)腸的微生物而為宿主提供有益作用的物質(zhì)。例如，尤其是在用人體進(jìn)行的試驗(yàn)中，數(shù)種類型的乳酸細(xì)菌菌株被報(bào)道為針對(duì)流感疫苗具有促進(jìn)中和抗體誘導(dǎo)的效果。然而，由于這些乳酸細(xì)菌是作為活細(xì)菌發(fā)揮作用的益生菌，生產(chǎn)和質(zhì)量控制并不容易。此外，活細(xì)菌制劑通常儲(chǔ)藏穩(wěn)定性有限。例如，即使將活細(xì)菌制劑在生產(chǎn)之后保存在低溫下，其通常經(jīng)不住長(zhǎng)期保存。與乳酸細(xì)菌相對(duì),本發(fā)明的丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物是益生元。在滅菌的培養(yǎng)物(益生元)中，沒有由于微生物的活性而導(dǎo)致的質(zhì)量改變。因此，針對(duì)流感感染的預(yù)防效果能夠在益生元中穩(wěn)定保持。即，本發(fā)明的組合物的生產(chǎn)和質(zhì)量控制是容易的。此外，作為益生元的本發(fā)明組合物能夠在常溫下長(zhǎng)時(shí)間保存。另外，一般而言，在期待來(lái)自活乳酸細(xì)菌的口服施用的效果時(shí)，必須考慮胃酸的影響。這是因?yàn)槿樗峒?xì)菌因胃酸而減少，無(wú)法將足量的活細(xì)菌遞送至腸內(nèi)。另一方面，在本發(fā)明中，丙酸細(xì)菌針對(duì)流感感染的預(yù)防效果不依賴于活細(xì)菌的活性。因此，針對(duì)流感的充分的預(yù)防效果也能夠通過口服施用達(dá)成。所述丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物在滅菌后可以加工成粉末形式或液體形式。例如，在向培養(yǎng)物溶液添加合適的賦形劑從而使得培養(yǎng)物的固形物含量變成30-40重量％之后，可以將其干燥，然后粉末化。粉末化的脫脂乳、乳清粉、生淀粉、糊精等可以用于賦形劑。除了上述賦形劑之外，必要時(shí)也可使用WPC、乳清蛋白質(zhì)分離物(WPI)和改性淀粉作為賦形劑。用于干燥培養(yǎng)物的方法也是已知的。例如，培養(yǎng)物溶液可以直接進(jìn)行噴霧干燥。具體而言，對(duì)于改性淀粉，除了糊精之外，可以使用可溶性淀粉、英國(guó)糊精(British gum)、氧化淀粉、淀粉酯、淀粉醚等?；蛘?，可以將所述培養(yǎng)物溶液與賦形劑的還原溶液混合，并且可以在濃縮直至其固形物含量達(dá)到30-40重量％之后噴霧干燥。通過在填充時(shí)進(jìn)行脫氧處理(氮封、添加脫氧劑等)，干燥的培養(yǎng)物可以長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定保存。此外，可將其加工成倍散制劑(O. 2%倍散物)以供在食品中的方便使用。丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物已知具有促進(jìn)乳酸細(xì)菌增殖的作用。具有這種作用的丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物，或其加工產(chǎn)物，稱為“雙歧生長(zhǎng)刺激劑(bifidogenic growth stimulator ;BGS)'BGS可以作為本發(fā)明的丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物使用，只要其具有在接種流感疫苗的動(dòng)物中促進(jìn)針對(duì)流感病毒的中和抗體產(chǎn)生的作用。作為本發(fā)明的丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物，通過丙酸細(xì)菌產(chǎn)生的乳清發(fā)酵產(chǎn)物是優(yōu)選的。例如，通過在10%乳清粉還原液中發(fā)酵產(chǎn)生雙歧生長(zhǎng)刺激劑的弗氏丙酸桿菌ET-3菌株獲得的丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物可以作為活性成分包括在本發(fā)明的組合物中。例如，含有BGS的丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物稱作“Profec”，并且其被批準(zhǔn)作為用于特定保健用途的食品的有效成分。作為含有“Profec”的組合物，B. G. S.粉末(商品名；由Mei ji Dairies Corporation制造)，和 Onaka Katsuryoku 片劑(由 Meiji Dairies Corporation 制造；商品名^Onaka Katsuryoku”是 Mei ji Dairies Corporation 的注冊(cè)商標(biāo))是可商購(gòu)的。因此,“B. G. S.粉末”或“Onaka Katsuryoku片劑”可以用作本發(fā)明的組合物。具體而言，Profec中包括的BGS是1，4-二羥基-2-萘甲酸(DHNA)和2_氨基_3_羧基-1，4-萘醌(ACNQ)。在它們之中，DHNA是微生物中維生素K2(甲基萘醌類)的生物合成中間體。這些物質(zhì)通過高效再氧化雙歧桿菌能量代謝過程中產(chǎn)生的NADH來(lái)促進(jìn)增殖。因此，作為丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物，可以使用以下組分(i)和(ii)之一或二者。具體而言，本發(fā)明提供對(duì)于流感感染的預(yù)防劑，所述預(yù)防劑包含以下之一或二者⑴1，4_ 二羥基-2-萘甲酸(DHNA);和(ii)2-氨基-羧基-1,4-萘醌(ACNQ)。當(dāng)將丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物中所含的DHNA的量作為指標(biāo)時(shí)，通常對(duì)于成人，在本發(fā)明中包含上述成分(i)和/或(ii)的用于流感感染的預(yù)防劑的劑量范圍通常是在丙酸細(xì)菌中含有O. 01 μ g/kg至100mg/kg DHNA。在一些情況下，更小的劑量就是足夠的，但是另一方面，更大的劑量可能是必要的。此外，施用可以分成一日2至4次施用。所述劑量可以通過考慮患者的狀態(tài)如年齡和體重、施用途徑、期待的預(yù)防效果的程度等來(lái)設(shè)定。由于Profec特異性增加人的經(jīng)腸雙歧桿菌，其被批準(zhǔn)作為用于特定保健用途的食品的有效成分(N. Yoda =ILSI, No. 80，5-13 (2004))。目前，作為包含Profec的組合物，“B.G.S.粉末”和“Onaka Katsuryoku片劑”是可商購(gòu)的。因此，其不是難以獲得的。然而，向接種流感疫苗的動(dòng)物給予Profec可增強(qiáng)對(duì)中和抗體的誘導(dǎo)是未知的。具體而言，本發(fā)明提供在接種流感疫苗的動(dòng)物中促進(jìn)中和抗體誘導(dǎo)的作用劑，所述作用劑包含以下二者或之⑴1，4_ 二羥基-2-萘甲酸(DHNA);和(ii) 2-氨基-羧基-I，4-萘醌(ACNQ)?；蛘撸景l(fā)明涉及用于在接種流感疫苗的動(dòng)物中促進(jìn)中和抗體誘導(dǎo)的藥物組合物，所述組合物包含上述組分Q)和Qi)之一或二者。當(dāng)將1，4_ 二羥基-2-萘甲酸(DHNA)混入本發(fā)明的組合物時(shí)，期望將所述組合物中的溶解氧保持在低水平。這是因?yàn)槿芙庋蹩煞纸釪HNA，從而DHNA濃度在儲(chǔ)藏過程中降低。用于降低包含DHNA的組合物中溶解氧水平的方法是已知的(W0 2004/85364)。具體而言，當(dāng)所述組合物處于液態(tài)時(shí)，可以通過將不含氧氣體鼓泡到所述液體組合物中來(lái)用氧氣之外的氣體置換溶解氧。優(yōu)選的不含氧氣體是氮?dú)狻４送?，可以通過與DHNA—同添加具有抗氧化性的化合物來(lái)將溶解氧保持在低水平。對(duì)于具有抗氧化性的化合物，可以使用已知的抗氧化劑。具體而言，作為氧化劑已知連二硫酸(hyposulfurous acid)、抗壞血酸(維生素C)、異抗壞血酸、胡蘿卜素、生育酚和具有抗氧化功能的多酚類?？梢允褂迷醋蕴烊划a(chǎn)物的多酚類和源自合成產(chǎn)物的多酚類。例如，源自茶、葡萄、檸檬、咖啡、紫薯、大豆等的多酚類是已知的。含有大量這些多酚類的水果和蔬菜、種子、植物的葉片等的提取汁液、或其提取物可以作為多酚類混入本發(fā)明的組合物。例如，使用水或有機(jī)溶劑的提取可以生成多酚提取物。此外，這些天然含多酚的產(chǎn)物的濃縮物、純化物和干燥物也可以作為多酚類使用。根據(jù)抗氧化劑的類型，可以通過添加與用于常規(guī)抗氧化用途添加的量相比相同或更大量的抗氧化劑來(lái)降低溶解氧的水平。例如，當(dāng)期望通過單獨(dú)向組合物添加抗壞血酸而不鼓泡惰性氣體可得到DHNA穩(wěn)定性時(shí)，可以以溶液總重量的O. 01重量％或更多添加抗壞血酸?？梢詫⑺隹寡趸瘎┰谙蚪M合物添加DHNA之前加入所述組合物?；蛘?，其可以與DHNA—同添加至組合物以防止其降解。例如，當(dāng)添加抗壞血酸作為抗氧化劑時(shí)，添加的量可以設(shè)定在每IOOkcal (或每IOOg組合物)I μ g至2g,通常為150 μ g至I. 5g,并且優(yōu)選Img 至500mg左右。所述丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物可以以總組合物的O. 001 %至20 %，通常為O. 01 %至15 %，并且優(yōu)選為O. 01%至10%的比例混合?；蛘?，當(dāng)添加夸克作為乳發(fā)酵組分時(shí)，可以設(shè)定本發(fā)明的總組合物中所含的乳發(fā)酵組合物使得所述夸克蛋白部分的濃度為所述總組合物的大約0.01%至大約30 %，優(yōu)選大約O. I %至大約20 %，并且更優(yōu)選大約0.5%至大約10 %。本發(fā)明的組合物可以制成任何劑量形式，如液體形式、糊劑形式或干燥固體材料。本發(fā)明的組合物可以通過將適合于經(jīng)腸施用的載體或藥學(xué)上可接受的載體混入丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物而制成組合物。更具體而言，其可以配制成片劑、膠囊、顆粒、粉末、糖漿等?；蛘?，其可以作為丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物分散在乳發(fā)酵組分中的形式提供。這些多種多樣的制劑可以根據(jù)常規(guī)方法使用通常用于醫(yī)藥制劑技術(shù)領(lǐng)域的已知佐劑作為主要試劑來(lái)配制，所述佐劑如賦形劑、粘合劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、矯味劑、增溶劑、懸浮劑、包衣劑、溶劑和等滲劑。此外，可以包括適當(dāng)量的礦物質(zhì)如鈣。此外，可以添加適當(dāng)量的維生素、礦物質(zhì)、有機(jī)酸、糖類、氨基酸、肽等。有機(jī)酸包括脂肪酸如短鏈脂肪酸。丙酸細(xì)菌的乳清發(fā)酵產(chǎn)物可望有卓越的腸調(diào)節(jié)作用是已知的。然而，丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物顯示出針對(duì)流感感染的預(yù)防效果，這是未知的?？梢韵虮景l(fā)明的組合物額外添加乳發(fā)酵組分和寡糖。具體而言，本發(fā)明涉及包含以下組分的組合物(a)寡糖；(b)乳發(fā)酵組分；和(C)丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物。通常，寡糖也稱作低聚糖，指由2至20個(gè)糖形成糖苷連結(jié)的化合物。例如，在本發(fā)明中，可以使用以下糖作為寡糖低聚乳果糖(Iactosucrose)；異麥芽寡糖；果糖寡糖；半乳寡糖；
木糖寡糖；大豆寡糖；黑曲霉寡糖；龍膽寡糖；乳糖；蔗糖；麥芽糖；等等。在寡糖之中，存在在酸性條件下容易降解的化合物。因此，當(dāng)本發(fā)明的組合物或含、有該組合物的食品是酸性時(shí)，優(yōu)選使用在酸性條件下穩(wěn)定的寡糖。例如，包含半乳糖作為構(gòu)成糖的寡糖作為要在酸性條件下混入的寡糖是優(yōu)選的。在本發(fā)明中，包含半乳糖作為構(gòu)成糖的寡糖是2至20個(gè)糖形成糖苷連結(jié)的化合物，并且包括其中構(gòu)成所述化合物的糖含有一個(gè)或多個(gè)半乳糖分子者。更具體而言，棉子糖家族寡糖(大豆寡糖)、半乳寡糖等可以標(biāo)示為優(yōu)選的寡糖。它們之中，半乳寡糖在本發(fā)明中是優(yōu)選的寡糖。在本發(fā)明中，半乳寡糖指其中半乳糖是主要構(gòu)成糖的寡糖。乳糖(Gal (β 1-4)Glc)是基本結(jié)構(gòu)，而具有其中一至數(shù)個(gè)半乳糖殘基連接在一起的結(jié)構(gòu)的寡糖，其中半乳糖與葡萄糖 β -I，3 連接等的二糖(轉(zhuǎn)移的二糖)，Gal-(Gal)η-Glc (η = I 18),和 Gal-(Gal)n-Gal (η = I 18)也可以包括在半乳寡糖的實(shí)例中。在本發(fā)明中，構(gòu)成半乳寡糖的半乳糖殘基數(shù)通?？梢詾镮至20，優(yōu)選I至10，并且更優(yōu)選I至8。此外，構(gòu)成半乳寡糖的半乳糖的比例可以表示為，例如，構(gòu)成所述半乳寡糖的單糖總數(shù)的10%或更多，優(yōu)選30%或更多，并且更優(yōu)選50%或更多。用于產(chǎn)生半乳寡糖的方法的實(shí)例是使用半乳糖苷酶作用于乳糖的方法，這種酶具有高的半乳糖轉(zhuǎn)移能力(Sawairi, Y. , “Function ofGalacto-oligosaccharides and Application to Foods(garakutoorigo-to no kino tosyokuhin e no oyo)”F00D STYLE 21,2, pp. 76-78 (1998))。對(duì)于 β-半乳糖苷酶，例如，可以使用源自微生物等者，所述微生物如勞倫梯隱球菌(Cryptococcus laurentii)和環(huán)狀芽抱桿菌(Bacillus circulans).此外，在用于特定保健用途的(標(biāo)準(zhǔn)化)食品(FOSHU)的法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)系統(tǒng)中，將通過β -半乳糖苷酶(β -D-半乳糖苷半乳糖水解酶，Ε. C. 3. 2. I. 23,源自隱球菌屬酵母)的作用自乳糖產(chǎn)生的寡糖定義為半乳寡糖。以這種方式產(chǎn)生的半乳寡糖是其中一個(gè)或多個(gè)半乳糖與乳糖的半乳糖殘基形成糖苷連結(jié)，且據(jù)稱4’ -半乳糖基-乳糖(Gal ( β 1-4)Gal (β 1-4) Glc)是其主要組分(Director of the Department of Food Safety,Pharmaceutical and Food Safety Bureau,Ministry of Health,Labour and Welfare 的No. 0701007通告，日期 2005年 7 月 I 日，“Regarding the setting of codes and standardsaccompanying the establishment of the (standardized) food for specified healthuse system and such，，)。半乳糖寡糖包含于母乳中。已知其在經(jīng)腸具有適當(dāng)增加雙歧桿菌的效果，并且是難以消化和吸收的糖。此外，已知半乳糖寡糖可用于在胃切除手術(shù)后補(bǔ)充礦物質(zhì)(國(guó)際公開WO 98/15196)。此外,盡管果糖寡糖在強(qiáng)酸條件下水解(Nakamura A. ,“Changes inSugars in Sweet-and-Sour-Pork and Cooked Food Using Fructo-oligosacchrides(Furukuto-origoto wo mochiita subuta yanimono tyu deno to no henka),Annals of TokyoKasei Gakuin University, 43, pp. 49-53 (2003)),乳糖寡糖具有在酸性條件下或加熱條件下不易因降解等而衰減的性質(zhì)(Sawairi,Y. ,“Function of Galacto-oligosacchrides andApplication to Foods (garakutoorigo-to no kino to syokuhin e no oyo)，TO0D STYLE21, 2,pp. 76-78(1998)。通過向本發(fā)明的組合物添加寡糖，該組合物的腸功能調(diào)節(jié)作用能夠進(jìn)一步增強(qiáng)。即，本發(fā)明的組合物可以用作用于腸道調(diào)節(jié)的組合物。胃腸癥狀如腹瀉是因流感病毒感染的代表性癥狀之一。因此，兼具腸功能調(diào)節(jié)作用的組合物可以說具有作為用于在預(yù)防流感感染中使用的組合物的理想特性。本發(fā)明的組合物中包含的寡糖的濃度為總組合物含量的大約O. 001%至20. 0%,優(yōu)選大約0. 05%至11%，并且更優(yōu)選大約0. I %至6%?；旌系墓烟橇靠筛鶕?jù)劑量形式、癥狀、體重等來(lái)調(diào)節(jié)。本發(fā)明的組合物在丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物之外，還可以包含寡糖和乳發(fā)酵組分之一或二者。在本發(fā)明中，乳發(fā)酵組分指通過以微生物或 酶的活性發(fā)酵動(dòng)物乳而獲得的加工產(chǎn)品。在本發(fā)明中，動(dòng)物乳包括牛乳、水牛乳、山羊乳、綿羊乳、馬乳等。在它們之中，牛的乳(牛乳)具有經(jīng)濟(jì)學(xué)優(yōu)勢(shì)，因?yàn)槟軌蛉菀椎孬@得大量的原料乳。乳發(fā)酵組分不僅可以從采集自活生物體的乳產(chǎn)生，也可以自其級(jí)分或加工產(chǎn)品產(chǎn)生。乳的級(jí)分或加工產(chǎn)品包括半脫脂乳、脫脂乳、復(fù)原全乳、復(fù)原脫脂乳、復(fù)原半脫脂乳、乳清、酪蛋白、粉狀脫脂乳、乳清蛋白質(zhì)濃縮物(WPC)、乳清蛋白質(zhì)分離物(WPI)、黃油(butter)、酪乳(butter milk)、奶油(cream)等。這些乳衍生加工產(chǎn)品有時(shí)稱作原料乳。可以使用原料乳本身，或者在與不同的原料乳混合之后使用，以作為乳發(fā)酵組分的來(lái)源。在本發(fā)明中，所述乳發(fā)酵組分可以作為通過添加用于乳發(fā)酵的微生物而產(chǎn)生的培養(yǎng)物來(lái)獲得。微生物培養(yǎng)物的級(jí)分可以用作本發(fā)明中的乳發(fā)酵組分，只要當(dāng)它們與丙酸細(xì)菌混合時(shí)有針對(duì)流感感染的預(yù)防效果。為了發(fā)酵目的向乳添加的微生物通常稱作起子(starter)。要在乳發(fā)酵中使用的微生物優(yōu)選是乳酸細(xì)菌和雙歧桿菌。具體而言，例如，乳發(fā)酵組分可以通過使用屬于以下各屬的乳酸細(xì)菌或雙歧桿菌作為起子來(lái)獲得乳桿菌屬；鏈球菌屬；乳球菌屬(genus Lactococcus)；明串珠菌屬(genusLeuconostoc)；片球菌屬(genusPediococcus);等等。更具體而言，通過以下微生物產(chǎn)生乳發(fā)酵組分是已知的。使用這些微生物獲得的乳發(fā)酵組分作為本發(fā)明中的乳發(fā)酵組分是優(yōu)選的。乳桿菌乳酸鏈球菌(Streptococcuslactis)，酪鏈球菌(Streptococcuscremoris)，雙乙酉先乳鏈球菌(Streptococcusdiacetylactis)，屎腸球菌(Enterococcusfaecium)，類腸球菌(Enterococcusfaecalis)，嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus)，短乳桿菌(Lactobacillusbrevis),乳酷乳桿菌(Lactobacilluscasei)，
瑞士乳桿菌(Lactobacillushelveticus),德氏乳桿菌保加利亞亞種(Lactobacillusdelbrueckii subsp. bulgaricus),德氏乳桿菌乳亞種(Lactobacillusdelbrueckii subsp. lactis),加氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri),粘膜乳桿菌(Lactobacillusmucosae),鼠乳桿菌(Lactobacillusmurinus),植物乳桿菌(Lactobacilluspi ant arum), 口乳桿菌(Lactobacillus oris),路氏乳桿菌(Lactobacillusreuteri),和鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)雙歧桿菌長(zhǎng)雙歧桿菌(Bifidobacteriumlongum),雙歧雙歧桿菌(Bifidobacteriumbifidum),和短雙歧桿菌(Bifidobacteriumbreve)用于從自然界或發(fā)酵乳分離這些微生物的方法是已知的。或者，已經(jīng)分離的微生物可以通過從細(xì)胞庫(kù)等分讓(subdivision)獲得。此外，用于獲得乳發(fā)酵組分的乳酸細(xì)菌起子是可商購(gòu)的。通過可商購(gòu)的乳酸細(xì)菌起子產(chǎn)生的乳發(fā)酵組分也可以用于本發(fā)明的組合物。根據(jù)產(chǎn)生的發(fā)酵乳在PH和物理性質(zhì)上的差異有多種產(chǎn)品在售。發(fā)酵乳的物理性質(zhì)指硬度(stiffness)和順滑度(smoothness)?？缮藤?gòu)的乳酸細(xì)菌起子可以用作用于獲得本發(fā)明的乳發(fā)酵組分的乳酸細(xì)菌起子，只要其在與丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物一起使用時(shí)可促進(jìn)流感疫苗的中和抗體誘導(dǎo)。為了獲得本發(fā)明的乳發(fā)酵組分，可以將以下微生物接種至原料乳中作為乳酸細(xì)菌起子保加利亞乳桿菌(Lactobacillusbulgaricus) (L. bulgaricus)；嗜熱鏈球菌(Streptococcusthermophilus) (S. thermophilus);和乳酸乳桿菌(Lactobacilluslactis) (L. lactis)。在發(fā)酵乳的通常生產(chǎn)中，可以向原料乳加入這些乳酸細(xì)菌之外的一種、兩種或更多種選自酵母和乳酸細(xì)菌的菌種。然而，在本發(fā)明中，在任何情況下，使用含有保加利亞乳桿菌(L. bulgaricus)和嗜熱鏈球菌(S. thermophiles)的混合起子是優(yōu)選的，這種起子是根據(jù)Codex標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)化酸乳起子。此外，當(dāng)添加額外的微生物時(shí)，所述額外的微生物可以通過考慮用于目標(biāo)發(fā)酵乳的發(fā)酵溫度和發(fā)酵條件而添加至此種混合起子。要額外混入所述混合起子的微生物包括其他乳酸細(xì)菌，如加氏乳桿菌(L. gasseri)和雙歧桿菌(Bifidobacterium)。在本發(fā)明中，要作為混合起子向原料乳添加的微生物可以選自保藏在細(xì)胞庫(kù)中的微生物。能夠用于所述混合起子的理想的細(xì)菌菌株的實(shí)例如下所示包含以下微生物的混合培養(yǎng)物的乳酸細(xì)菌起子保加利亞乳桿菌(L.bulgaricus JCM 1002T)嗜熱鏈球菌(S.thermophilus ATCC 19258)包含以下微生物的混合培養(yǎng)物的乳酸細(xì)菌起子嗜熱鏈球菌OLS 3059 (FERM BP-10740)
嗜熱鏈球菌0LS3294(NITE P-77)德氏乳桿菌保加利亞亞種OLL 1073R-1 (FERM BP-10741)德氏乳桿菌保加利亞亞種OLL 1255 (NITE BP-76)能夠經(jīng)由通過這些微生物進(jìn)行的發(fā)酵獲得的乳酪、天然乳酪、酸乳、發(fā)酵乳、乳清發(fā)酵產(chǎn)品、乳清乳酪等包括在本發(fā)明的乳發(fā)酵組分中。例如，要混入本發(fā)明的組合物的乳發(fā)酵組分是通過從發(fā)酵乳(酸乳)減少水分(乳清)獲得的(例如，日本專利No. 3，179，555)。源自發(fā)酵乳(酸乳)的蛋白質(zhì)具有高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，因?yàn)檫@些蛋白質(zhì)具有100的氨基酸得分，并且這些蛋白質(zhì)的消化和吸收性質(zhì)因發(fā)酵而提高。例如，在這些乳發(fā)酵組分中，乳酪是本發(fā)明中優(yōu)選的乳發(fā)酵組分。例如，通過組合一種、兩種或更多種類型的液體形式的原料乳制備的液體形式的乳可以通過在用乳酸細(xì)菌發(fā)酵之后添加酶或酸制成凝乳(curd)。乳酪是通過從凝乳去除乳清產(chǎn)生的材料。與固化、或熟化無(wú)關(guān)，通過從凝乳去除乳清產(chǎn)生的物質(zhì)均稱為乳酪。乳酪大致分為在生產(chǎn)之后經(jīng)歷了熟化過程的成熟乳酪，和非成熟乳酪。通常，在乳酪的成熟過程中，乳酸細(xì)菌或霉菌進(jìn)行增殖(發(fā)酵)，而每種乳酪形成某種特征性的味道。與成熟乳酪相對(duì)，非成熟乳酪保持乳清從凝乳去除時(shí)產(chǎn)生的狀態(tài)。非成熟乳酪(新鮮乳酪)作為本發(fā)明中的乳發(fā)酵組分是優(yōu)選的。存在許多類型的非成熟乳酪(新鮮乳酪)，包括酪農(nóng)乳酪(cottage cheese)、夸克(quark cheese)、條狀乳釀(string cheese)、紐沙特爾乳釀(neufchatel cheese)、乳脂乳釀(cream cheese)、莫扎里拉乳釀(mozzarella cheese)、乳清乳釀(ricotta cheese)和馬斯卡朋乳酪(mascarpone cheese)。在這些新鮮乳酪中，優(yōu)選將夸克用于本發(fā)明中。用于產(chǎn)生夸克的方法是已知的(例如，JP-A(Kokai)H06-228013 ;Cheese and Fermented MilkFoods,Volume I Origins and Principles,Frank V. Kosikowski and Vikram V. Misstry,F. V. Kosikowski, L.L.C.，1999，第147至161頁(yè))?？淇耸侨槔业囊环N類型(通稱)，且其營(yíng)養(yǎng)組成等已經(jīng)得到了闡明(Milk and Dairy Product Technology, Edgar Spreer ；AxelMixa, Marcel Dekker Inc. , 1998，pages 245-249)。用于非成熟乳酪的通用生產(chǎn)方法如下所述。首先，從原料乳產(chǎn)生凝乳。將起子接種至原料乳中，并在培養(yǎng)后，進(jìn)一步加入粗制凝乳酶(rennet)以產(chǎn)生凝乳。在產(chǎn)生凝乳之前，必要時(shí)可以預(yù)處理原料乳。例如，為了減少生產(chǎn)批次之間質(zhì)量上的差異，可以通過混合多種類型的乳源來(lái)調(diào)節(jié)質(zhì)量。這種處理稱作標(biāo)準(zhǔn)化。此外，可以應(yīng)用勻質(zhì)化(homogenization)以機(jī)械破壞乳中的脂肪小球。或者，可以進(jìn)行通過離心和加熱處理滅菌來(lái)去除混入乳源的微生物。能夠通過從獲得的凝乳分離乳清而獲得的固體組分是非成熟乳酪(新鮮乳酪)。用于通過離心分離和膜分離從凝乳分離乳清的方法是已知的。例如，離心分離器如夸克分離器用于乳清分離?；蛘?，可以通過在需要時(shí)事先切割或加熱凝乳使所述分離過程變得高效。更具體而言，能夠從以下來(lái)源和步驟獲得的新鮮乳酪優(yōu)選作為本發(fā)明的乳發(fā)酵組分。在以下步驟中，主要可以使用保加利亞乳桿菌和/或嗜熱鏈球菌用于發(fā)酵加熱滅菌牛的脫脂乳；通過以O(shè). 5%至5%接種乳酸細(xì)菌起子來(lái)起始發(fā)酵；當(dāng)pH達(dá)到4. 6時(shí)從形成的凝乳分離乳清；和
冷卻通過分離乳清獲得的凝乳而獲得非成熟乳酪。概括而言，能夠如此產(chǎn)生的非成熟乳酪也可稱為夸克。非成熟乳酪的組成的實(shí)例如下17%至19%總固形物含量 ，11%至 13%蛋白質(zhì)；1%或更少的脂肪(即，0%至1% )，2%至8%糖類，和2%或更少的乳糖(即，0%至2% )。能夠混入的乳發(fā)酵組分的量為例如總組合物中源自乳發(fā)酵組分的蛋白質(zhì)占大約O. 01 %至30%，通常為大約O. I %至20%，優(yōu)選地大約O. 5 %至10 %的比例?；蛘?，可以將O. Olg至33g, O. Ig至22g, O. 5g至Hg,優(yōu)選2g至6g,且更優(yōu)選2. 5g至4. 5g混入IOOmL組合物?；蛘?，可以將本發(fā)明的總組合物中所含的源自乳發(fā)酵組分的蛋白質(zhì)設(shè)定為總組合物中蛋白質(zhì)量的大約O. I %至100%，優(yōu)選大約I %至100%，且更優(yōu)選大約30%至100%。此外，通過向加熱滅菌的脫脂乳添加屬于乳球菌屬的乳酸細(xì)菌作為乳酸細(xì)菌起子而發(fā)酵的乳發(fā)酵組分可以是本發(fā)明的非成熟乳酪。更具體而言，可以使用混入以下微生物的乳酸細(xì)菌起子乳酸乳球菌，釀乳球菌(Lactococcuscremoris),和和屬于明串珠菌屬的微生物。凝乳可以通過向加熱滅菌的脫脂乳添加通過混合微生物如上述那些而產(chǎn)生的乳酸細(xì)菌起子，然后進(jìn)行培養(yǎng)來(lái)獲得。非成熟乳酪也可以通過從乳發(fā)酵組分去除乳清來(lái)獲得。本發(fā)明中的乳發(fā)酵組分還包括可以通過使用切割工具(cutter)事先切割凝乳并在加熱的同時(shí)分離乳清而獲得的非成熟乳酪。此外，本發(fā)明的非成熟乳酪還包括通過向原料乳添加粗制凝乳酶，而后固化而產(chǎn)生的材料。粗制凝乳酶是用于產(chǎn)生乳酪等的、含有凝乳酶(EC3. 4. 23. 4)作為主要成分的原料(source)。本發(fā)明的組合物可以經(jīng)腸施用。經(jīng)腸施用指將本發(fā)明的組合物遞送至腸道。因此，經(jīng)腸施用不僅包括口服施用，還包括通過灌腸(intestinal infusion)施用，以及多種類型的使用管飼施用的方法。管飼是向膳食經(jīng)口攝入不佳的患者直接將流食等通過管施用至消化道的方法。依賴于管的放置方法上的差異，存在以下施用途徑通過鼻腔(鼻飼)外部瘺管經(jīng)皮胃鏡下胃造瘺術(shù)(PEG)空腸造口術(shù)外部瘺管指從腹壁外部將管送入消化道，包括經(jīng)皮胃鏡下胃造瘺術(shù)和空腸造口術(shù)。此外，將組合物從肛門灌注至直腸的灌腸劑施用也包括在經(jīng)腸施用中。在口服施用的情況下，所述組合物可以是任何劑量形式。然而，對(duì)于通過管或灌腸劑施用的施用，有利的是將本發(fā)明的組合物制成糊劑、半固體或液體形式。本發(fā)明的組合物對(duì)于在動(dòng)物中預(yù)防流感病毒感染是有用的。在本發(fā)明中，“動(dòng)物”指是作為流感病毒宿主的哺乳動(dòng)物和禽類。除了人之外，流感病毒感染的病例已知還存在于哺乳動(dòng)物如豬等之中。除豬以外其可適用于牛、山羊、綿羊、馬、水牛、駱駝等，以及寵物、動(dòng)物園中飼養(yǎng)的動(dòng)物和家畜。包括家禽如雞在內(nèi)的禽類和許多野生禽類也顯示流感病毒感染。對(duì)于所有這些動(dòng)物物種，可以期待通過施用本發(fā)明組合物的針對(duì)流感感染的預(yù)防效果。當(dāng)向動(dòng)物施用本發(fā)明的組合物時(shí)，本發(fā)明的組合物可以通過混入飼料來(lái)施用。當(dāng)將乳發(fā)酵組分混入本發(fā)明的組合物時(shí)，乳發(fā)酵組分的劑量(攝入量)(固形物含量)是例如大約每千克體重每日Img至20g,優(yōu)選大約IOmg至15g,且更優(yōu)選大約50mg至IOgo所述劑量可以依賴于劑量形式、癥狀、性別、年齡、體重等調(diào)節(jié)。例如，當(dāng)將乳發(fā)酵組分混入本發(fā)明的組合物并施用于人時(shí)，所述劑量通常為大約O. 05g至1，500g，優(yōu)選大約O. 05g至1，000g，且更優(yōu)選大約2. 5g至800g(固形物含量)每日。這可以適當(dāng)?shù)叵蛐枰ㄟ^本發(fā)明的組合物促進(jìn)中和抗體誘導(dǎo)的那些對(duì)象一次施用，或分開并在餐前、餐后或餐間，和/或就寢時(shí)施用。所述劑量可以依賴于要施用的受試者的年齡和體重以及施用目的單獨(dú)地適當(dāng)調(diào)節(jié)。此外，本發(fā)明的組合物可以用作膳食的替代品或者可以將其用作膳食補(bǔ)充劑。 構(gòu)成本發(fā)明組合物的丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物，以及額外添加的乳發(fā)酵組分或寡糖均已用作營(yíng)養(yǎng)素和流食的組分。因此，本發(fā)明的組合物可以通過混合含有這些組分的營(yíng)養(yǎng)劑或流食來(lái)生產(chǎn)。例如，含有BGS的丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物稱作“Profec”，并且被批準(zhǔn)作為用于特定保健用途的食品的有效成分。名為“B. G. S.粉”和“Onaka Katsuryoku片”的產(chǎn)品包括“Profec”，其為通過丙酸細(xì)菌發(fā)酵產(chǎn)生的乳清發(fā)酵產(chǎn)品。此外，名為“Fibren YH”的產(chǎn)品(Meiji Dairies Corporation)是含有乳發(fā)酵組分的流食。因此,本發(fā)明的組合物可以通過根據(jù)上述混合比例混合這些產(chǎn)品獲得。此外，可以通過將包含丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物的組合物與包含乳發(fā)酵組分的組合物組合來(lái)構(gòu)建用于預(yù)防流感感染的試劑盒。更具體而言，本發(fā)明涉及用于預(yù)防流感感染的試劑盒，其包含(is composed of)(a)包含丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物的組合物；和(b)包含乳發(fā)酵組分的組合物?；蛘撸景l(fā)明提供用于在接種流感疫苗的動(dòng)物中促進(jìn)流感病毒中和抗體誘導(dǎo)的試劑盒，其中所述試劑盒包括上述組合物(a)和(b)。例如，本發(fā)明的試劑盒可以通過組合包含丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物的營(yíng)養(yǎng)組合物和包含乳發(fā)酵組分的營(yíng)養(yǎng)組合物來(lái)構(gòu)成。這些營(yíng)養(yǎng)組分作為流食或營(yíng)養(yǎng)劑流通(distribute)。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，在攝取丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物的人中，緣于流感疫苗接種的中和抗體誘導(dǎo)得到增強(qiáng)。更具體而言，本發(fā)明提供要通過經(jīng)腸施用用于接種流感疫苗的動(dòng)物的包含丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物的組合物。或者，本發(fā)明提供用于在接種流感疫苗的動(dòng)物中促進(jìn)流感病毒中和抗體誘導(dǎo)的作用劑，其中所述作用劑含有丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物。此外，在優(yōu)選的實(shí)施方案中，用于促進(jìn)中和抗體誘導(dǎo)的本發(fā)明的組合物或作用劑可以額外包含乳發(fā)酵組分和寡糖之一或二者。此外，本發(fā)明涉及丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物在制備用于在接種流感疫苗的動(dòng)物中促進(jìn)流感病毒中和抗體的誘導(dǎo)的作用劑方面的用途?；蛘撸景l(fā)明涉及用于在接種流感疫苗的動(dòng)物中促進(jìn)中和抗體誘導(dǎo)的丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物。另外，本發(fā)明涉及用于產(chǎn)生在接種流感疫苗的動(dòng)物中促進(jìn)中和抗體誘導(dǎo)的試劑的方法，所述方法包括將丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物與藥學(xué)上可接受的載體混合的步驟。本發(fā)明還涉及丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物在制備針對(duì)流感感染的預(yù)防劑中的用途?；蛘?，本發(fā)明涉及用于預(yù)防流感感染的丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物?；蛘?，本發(fā)明提供用于在接種流感疫苗的動(dòng)物中促進(jìn)流感病毒中和抗體誘導(dǎo)的藥物組合物，其中所述組合物含有丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物。此外，本發(fā)明涉及丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物在制備藥物組合物中的用途，所述藥物組合物用于在以流感病毒疫苗接種的動(dòng)物中促進(jìn)針對(duì)流感病毒的中和抗體的誘導(dǎo)。本發(fā)明的藥物組合物包含藥學(xué)有效量的丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物?？梢詫⑦m用于口服施用或經(jīng)腸施用的載體混入本發(fā)明的藥物組合物。本發(fā)明的藥物組合物也可以出于在接種流感疫苗的動(dòng)物中誘導(dǎo)中和抗體的目的作為流食提供和施用。在本發(fā)明中，流感疫苗包括為了 預(yù)防流感病毒感染和感染后加重的目的而施用的疫苗。目前在日本投入實(shí)際應(yīng)用的滅活疫苗，和在其他國(guó)家投入實(shí)際應(yīng)用的經(jīng)鼻疫苗包括在本發(fā)明的流感疫苗中。滅活疫苗通常皮下、皮內(nèi)、或肌肉內(nèi)施用。另一方面，經(jīng)鼻疫苗是活病毒疫苗。噴霧經(jīng)鼻疫苗至鼻腔中的目的是誘導(dǎo)呼吸道粘膜中的IgA抗體，其對(duì)病毒感染具有高預(yù)防作用?；蛘?，本發(fā)明提供用于預(yù)防流感感染的方法，所述方法包括以下步驟(I)向動(dòng)物施用丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物；和(2)用流感疫苗接種動(dòng)物。在本發(fā)明中，流感感染的預(yù)防具體包括預(yù)防流感病毒感染和防止流感病毒感染之后的加重之一或二者。流感感染是伴隨著多種由病原體流感病毒的感染而引起的癥狀的傳染病。在本發(fā)明中，流感感染有時(shí)可簡(jiǎn)稱為“流感”。流感感染的加重包括以下狀況感染癥狀變得嚴(yán)重；感染癥狀的類型增加；病毒感染的組織或感染的細(xì)胞增加；和體內(nèi)病毒增殖。因此，抑制這些狀況中的至少一種意味著本發(fā)明中的流感感染的預(yù)防。在本發(fā)明中，流感感染的預(yù)防包括流感病毒感染的預(yù)防。更具體而言，增強(qiáng)病毒中和抗體的誘導(dǎo)包括在流感病毒感染的預(yù)防中。通過流感疫苗接種體內(nèi)誘導(dǎo)的中和抗體的產(chǎn)生水平可能隨著時(shí)間減少。防止中和抗體的減少有助于預(yù)防流感感染。因此，防止中和抗體產(chǎn)生水平的減少也包括在促進(jìn)病毒中和抗體的誘導(dǎo)中。中和抗體有助于防止流感病毒感染的組織或流感病毒感染的細(xì)胞在體內(nèi)擴(kuò)散。對(duì)其而言能夠期待本發(fā)明的組合物或本發(fā)明的方法針對(duì)流感感染的預(yù)防效果的動(dòng)物物種是流感病毒的宿主動(dòng)物。更具體而言，實(shí)例包括人、包括人在內(nèi)的動(dòng)物，和除人之外的動(dòng)物。此外，本發(fā)明的組合物產(chǎn)生的針對(duì)流感感染的預(yù)防效果不依賴于流感病毒的抗原性。因此，其可有效預(yù)防多種類型的流感病毒的感染。具體而言，屬于甲型及其亞型的流感病毒是優(yōu)選的，本發(fā)明應(yīng)該能預(yù)防其感染的流感病毒。更具體而言，宿主為人、豬、禽類等的甲型流感病毒是本發(fā)明中的預(yù)防優(yōu)選的靶標(biāo)。例如，中和抗體誘導(dǎo)的增強(qiáng)可以如下確認(rèn)。即，向施用了本發(fā)明組合物的組以及向未施用本發(fā)明組合物的組施用相同的流感疫苗。然后，可以比較兩組中病毒中和抗體誘導(dǎo)的狀態(tài)。此時(shí)，各個(gè)組的構(gòu)成的分配使得除了組合物的施用外的條件相同。換言之，理想的是，分配如健康狀況、年齡、體格和性別比等條件，使得兩組之后沒有偏差。同樣理想的是使遺傳特征盡可能均勻。因此，當(dāng)人作為受試者時(shí)，相同種族的組是理想的。當(dāng)在非人動(dòng)物中確認(rèn)預(yù)防效果時(shí)，試圖使用遺傳上相同的組。在這些條件下，對(duì)于兩個(gè)組的組合物施用和疫苗接種根據(jù)相同的時(shí)間表實(shí)施。此夕卜，當(dāng)中和抗體的誘導(dǎo)在使用了本發(fā)明組合物的組中顯著增強(qiáng)時(shí)，可以確認(rèn)所述組合物針對(duì)流感感染的預(yù)防效果。此處，中和抗體誘導(dǎo)的增強(qiáng)是指，例如，以下任一能夠得到確認(rèn)。在如下所示的指標(biāo)中，可以評(píng)估中和抗體效價(jià)，例如，通過比較兩組之間超過感染抑制抗體效價(jià)的個(gè)體的比例(發(fā)病率)。當(dāng)中和抗體的抗體效價(jià)增加迅速時(shí)，當(dāng)中和抗體的產(chǎn)生長(zhǎng)時(shí)間持續(xù)時(shí)，或當(dāng)高中和抗體效價(jià)達(dá)成時(shí)。、因此，若其中確認(rèn)了上述任一效果的個(gè)體數(shù)因施用本發(fā)明的組合物而顯著增加，則能夠確認(rèn)所述組合物針對(duì)流感感染的預(yù)防效果。用于定量評(píng)估中和抗體效價(jià)的方法是已知的。例如，通過施用感染性流感病毒和培養(yǎng)的細(xì)胞，能夠確認(rèn)抗體的感染抑制效果?？贵w的系列稀釋容許定量比較感染抑制作用。在本發(fā)明中，在疫苗接種的時(shí)間前后或與疫苗接種同時(shí)施用丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物。從疫苗接種之前到之后連續(xù)施用丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物是優(yōu)選的。更具體而言，本發(fā)明提供用于如此使用的包含丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物的組合物在向?qū)?huì)接種流感疫苗的動(dòng)物進(jìn)行疫苗接種的時(shí)間前后連續(xù)經(jīng)腸施用。例如，疫苗接種的時(shí)間前后指當(dāng)將疫苗接種之日設(shè)定為第O日時(shí)，-150日至+150日，通常為-60日至+60日，或_8周至+8周。在此期間，至少每日施用一次藥學(xué)有效量的本發(fā)明的組合物。每日劑量可以分開并以多個(gè)批次施用?；蛘?，其可以隔日施用。此外，在本發(fā)明中，可以將有效量的丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物與多種類型的組合物以不同混合比例組合施用。事實(shí)上，本發(fā)明人確認(rèn)了在流感疫苗接種的時(shí)間前后攝取了丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物的人中，疫苗的中和抗體誘導(dǎo)得到了促進(jìn)。因此，本發(fā)明提供用于在施用流感疫苗的動(dòng)物中促進(jìn)或增強(qiáng)中和抗體誘導(dǎo)的方法，其中所述方法包括以下步驟(I)向動(dòng)物施用丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物；和(2)向動(dòng)物接種流感疫苗?？梢云诖景l(fā)明的組合物不僅促進(jìn)疫苗接種的中和抗體誘導(dǎo)，甚至在病毒感染時(shí)也可發(fā)揮增強(qiáng)中和抗體誘導(dǎo)的作用。即，甚至在感染流感病毒的患者中，本發(fā)明的組合物能夠通過增加患者本身產(chǎn)生病毒中和抗體的能力來(lái)遏制患者體內(nèi)病毒感染的擴(kuò)散并減輕癥狀。具體而言，當(dāng)高毒力病毒感染時(shí)，不僅預(yù)期有誘導(dǎo)氣道感染的危險(xiǎn)，還預(yù)期有誘導(dǎo)系統(tǒng)性癥狀的危險(xiǎn)。通過患者連續(xù)攝入本發(fā)明的組合物，預(yù)期誘導(dǎo)針對(duì)感染病毒的中和抗體的能力能夠增加，并且能夠防止加重。本發(fā)明的組合物可以以任何藥物或食品和飲料的形式使用。例如，通過流感疫苗的中和抗體的誘導(dǎo)能夠通過直接作為藥物施用所述組合物來(lái)增強(qiáng)?；蛘?，伴隨著對(duì)流感疫苗的預(yù)防效果增強(qiáng)的預(yù)期，可將其作為用于特殊用途的食品，如用于特定保健用途的食品，或具有營(yíng)養(yǎng)機(jī)能食品來(lái)攝取。此外，與形式如液體形式、糊劑形式、固體形式和粉末形式無(wú)關(guān)，可以通過將所述組合物添加至多種類型的食品和飲料中來(lái)將該組合物作為食品攝入。食品和飲料的實(shí)例包括牛乳、軟飲、發(fā)酵乳、酸乳、乳酪、面包、餅干、薄脆餅干(cracker)、比薩餅皮、調(diào)制乳粉(modified powdered milk)、流食、病人用食品、營(yíng)養(yǎng)食品、冷凍食品、食品組合物、加工食品和其他可商購(gòu)食品。當(dāng)將本發(fā)明的組合物制成酸性藥物或食品和飲料的形式時(shí)，其pH可以設(shè)在pH 2. O至pH 6.0，并優(yōu)選pH 3. O至pH 5.0。當(dāng)向動(dòng)物連續(xù)施用本發(fā)明的組合物時(shí)，可將其作為營(yíng)養(yǎng)劑、食品、飲料或膳食施用。當(dāng)將本發(fā)明的組合物作為營(yíng)養(yǎng)劑、食品、飲料或膳食施用時(shí)，其營(yíng)養(yǎng)組分可以通過在乳發(fā)酵組分和丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物之外混入額外的營(yíng)養(yǎng)素來(lái)調(diào)節(jié)。水、蛋白質(zhì)、糖類、脂肪、維生素、礦物質(zhì)、有機(jī)酸、短鏈脂肪酸、有機(jī)堿、果汁、矯味劑等可以用作本發(fā)明中的額外營(yíng)養(yǎng)素。對(duì)于這些營(yíng)養(yǎng)素，可以使用如下組分蛋白質(zhì)(動(dòng)物蛋白和植物蛋白，或其降解產(chǎn)物)全脂乳粉、粉狀脫脂乳、粉狀半脫脂乳、酪蛋白、乳清、乳清粉、乳清蛋白質(zhì)、乳清蛋白質(zhì)濃縮物、乳清蛋白質(zhì)分離物、α-酪蛋白、β-酪蛋白、K-酪蛋白、β-乳球蛋白、乳鐵蛋白、大 蛋白、雞卵蛋白、肉蛋白等； 自乳衍生的脂肪和糖類黃油、乳清礦物質(zhì)、奶油、非蛋白氮、唾液酸、磷脂、多種類型的乳衍生組分如乳糖等。肽和氨基酸肽和多種類型的氨基酸如酪氨酸磷酸肽、精氨酸和賴氨酸。糖類改性淀粉(糊精(麥芽糊精、難消化性糊精等)、可溶性淀粉、英國(guó)淀粉(British starch)、氧化淀粉、淀粉酯、淀粉醚等)、膳食纖維等；油和脂肪動(dòng)物油和脂肪如豬油、魚油等，以及其分離的油、氫化油、轉(zhuǎn)酯化的油(transesterified oil);和植物油如棕櫚油、紅花油、玉米油、菜籽油和棕櫚油，以及分離的油、氫化油和轉(zhuǎn)酯化的油；維生素維生素A、胡蘿卜素、維生素B族、維生素C、維生素D族、維生素E、維生素K組、維生素P、維生素Q、尼克酸(niacin)、煙酸(nicotinic acid)、泛酸、生物素、肌醇、膽堿、葉酸等；礦物質(zhì)|丐、磷、鉀、氯、鎂、鈉、銅、鐵、猛、鋅、硒、鉻、鑰等；有機(jī)酸蘋果酸、檸檬酸、乳酸、酒石酸等；和短鏈脂肪酸乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸等。任何化學(xué)合成的物質(zhì)或天然產(chǎn)物衍生的組分可以用作這些額外營(yíng)養(yǎng)素?；蛘?，可以將含有目的組分的食品作為原料混入。這些組分可以通過根據(jù)目的營(yíng)養(yǎng)劑的組成組合至少一種、兩種、或更多種類型來(lái)混入。所述組合物的形式可以是固體或液體。此外，其可以制成凝膠或半固體形式。因此，營(yíng)養(yǎng)劑可以作為流食施用。事實(shí)上，如下文所述實(shí)施例中所指明的，本發(fā)明的組合物通過將其作為包含丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物的流食攝入而在以流感疫苗接種的宿主動(dòng)物中促進(jìn)了流感病毒中和抗體的誘導(dǎo)。因此，其中混入了丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物的、具有流食構(gòu)成的組合物是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案。即，本發(fā)明涉及用于產(chǎn)生流食的方法，所述流食在已經(jīng)以流感疫苗接種的受試者中促進(jìn)針對(duì)流感病毒的中和抗體的誘導(dǎo)，其中所述方法包括將丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物混入流食的步驟?；蛘?，本發(fā)明提供用于提供具有在以流感疫苗接種的受試者中促進(jìn)流感病毒中和抗體誘導(dǎo)的能力的流食的方法，所述方法包括將丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物混入流食的步驟。此外，本發(fā)明提供對(duì)于流感感染的預(yù)防性組合物，所述組合物包含以下營(yíng)養(yǎng)素
丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物；乳發(fā)酵組分；寡糖；蛋白質(zhì)；糖類；脂肪；和膳食纖維。在上述組合物中，丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物可以是例如以下之一 或二者(i)l，4_ 二羥基-2-萘甲酸(DHNA)，和(ii) 2-氨基-3-羧基-1，4-萘醌(ACNQ)。此外，當(dāng)上述組合物中的乳發(fā)酵組分含有蛋白質(zhì)時(shí)，不同來(lái)源的蛋白質(zhì)可以額外地作為蛋白質(zhì)混入。例如，除了乳發(fā)酵組分，可以混入乳組分，類似地，可以混入除了寡糖之外的糖類作為上述組合物中的糖類。構(gòu)成本發(fā)明組合物的各種組分可以根據(jù)不同的條件適當(dāng)調(diào)整，所述條件如將所述組合物作為流食向其施用的受試者的體格、年齡和性別。更具體而言，組合物如以下組合物可以作為常用組合物(每IOOmL)顯示丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物lmg至22g,通常IOmg至17g,且優(yōu)選IOmg至Ilg ;或O. 01 μ g至15mg,通常O. 5 μ g至IOmg,且優(yōu)選O. 5 μ g至O. Img,以DHNA的量計(jì)；乳發(fā)酵組分就蛋白量而言，O. Olg至33g,通常O. Ig至22g,優(yōu)選O. 5g至Ilg ；寡糖Img至20g,通常50mg至I Ig,且優(yōu)選O. Ig至6g ;蛋白質(zhì)0. Olg至50g,通常O. Ig至30g,且優(yōu)選O. 5g至15g ；糖類0.Ig 至 40g,通常 O. 5g 至 30g,優(yōu)選 Ig 至 25g ；脂肪0.Ig 至 20g,通常 O. 3g 至 15g,優(yōu)選 O. 6g 至 IOg ;和膳食纖維0g至15g,通常Og至IOg,且優(yōu)選Og至8g。在上述組成中，當(dāng)混合含有DHNA的丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物時(shí)，可將所述培養(yǎng)物以DHNA當(dāng)量混合而成為上述組成。類似地，混入上述組合物的寡糖可以作為糖類的部分混入。即，所述寡糖構(gòu)成上述組合物中的糖類的一部分。此外，在本發(fā)明的組合物中，可以額外地混合至少一種選自下組的營(yíng)養(yǎng)素維生素、礦物質(zhì)、有機(jī)酸或短鏈脂肪酸，和有機(jī)堿。當(dāng)混入這些組分時(shí)，所述組合物可以根據(jù)各種條件如施用所述流食的受試者的體格、年齡和性別來(lái)適當(dāng)調(diào)整。更具體而言，下述組成可示為一般組成(每IOOmL)維生素0g至2g,通常Og至I. 5g,優(yōu)選Omg至500mg ；礦物質(zhì)0g至5g,通常Og至3g,優(yōu)選Og至2g ;和有機(jī)酸或短鏈脂肪酸0g至5g,通常Og至3g,優(yōu)選Og至2g。更具體而言，本發(fā)明提供用于產(chǎn)生流食的方法，所述流食用于增強(qiáng)通過流感疫苗的中和抗體誘導(dǎo)，其中所述方法包括將上述營(yíng)養(yǎng)素根據(jù)上述組合物混合的步驟。通過本發(fā)明產(chǎn)生的流食可以標(biāo)示為通過向以流感疫苗接種的受試者在流感疫苗接種時(shí)間前后施用流食來(lái)在受試者中促進(jìn)針對(duì)流感病毒的中和抗體誘導(dǎo)的流食。本發(fā)明的組合物可以通過將丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物與藥學(xué)上可接受的載體混合來(lái)制備。當(dāng)進(jìn)一步混合額外的組分時(shí)，將上述糖類、蛋白質(zhì)、脂肪等作為載體或流食混合，通過均勻混合制備所述組合物。一般而言，所述組合物可以制備成使得源自細(xì)菌培養(yǎng)物和乳發(fā)酵組分的蛋白質(zhì)達(dá)到所述組合物中蛋白質(zhì)的大約I重量％或更高，例如，大約30重量％或更高，優(yōu)選70重量％或更高，且更優(yōu)選大約100重量％的比例。當(dāng)將本發(fā)明的組合物制備為流食時(shí)，希望的是制備成每ImL O. Ikcal至3kcal,或優(yōu)選O. 7kcal至2kcal。此外，當(dāng)混合時(shí)，可添加至少一種或多種由維生素、礦物質(zhì)和膳食纖維組成的額外組分。膳食纖維可分成水溶性膳食纖維和不溶性膳食纖維，且二者之任一均可使用。具體而言，以下組分可以作為水溶性膳食纖維的實(shí)例果膠(原果膠、果膠酯酸和果膠酸)；瓜爾膠水解物；葡甘露聚糖；半乳甘露聚糖；歐車前；玉米纖維；藻酸；藻酸水解物；角叉膠(carrageenin);和難消化性糊精。不溶性膳食纖維的實(shí)例包括結(jié)晶纖維素、甜菜纖維、和麥麩。優(yōu)選地，可以使用果膠、瓜爾膠水解物或難消化性糊精。此外，在一些情況下，可以添加矯味劑和其他制劑?？梢詫⑸鲜龈鞣N類型的組分混合，然后填充入容器，并且在需要時(shí)進(jìn)行加熱滅菌處理以產(chǎn)生流食或經(jīng)腸營(yíng)養(yǎng)劑。當(dāng)所述組合物的pH為酸性時(shí)，加熱處理可以在比通常更溫和的條件下進(jìn)行。例如，盡管中性流食的加熱滅菌處理使用120°C至130°C進(jìn)行20分鐘至40分鐘的爸式滅菌(retort sterilization)條件或140°C至145°C進(jìn)行4秒至10秒的間接滅菌條件，可以對(duì)本發(fā)明的組合物進(jìn)行80°C至90°C的釜式滅菌15分鐘至30分鐘或95°C至110°C的間接滅菌20秒至60秒。通過使用溫和滅菌條件可以改善味道且可以混合熱不穩(wěn)定性組分。此外，本發(fā)明的組合物可使用瓊脂或明膠制成凝膠，可通過噴霧干燥等制成粒狀食品和藥物，還可制成固體食品和藥物?？梢酝ㄟ^流食和經(jīng)腸營(yíng)養(yǎng)劑領(lǐng)域已知的方法產(chǎn)生本發(fā)明的組合物。例如，可以使用事先熱滅菌液體形式組合物然后將其無(wú)菌填充入容器的方法(例如，組合UHT滅菌法和無(wú)菌包裝法的方法)，和將液體組合物填充入容器然后與容器一起進(jìn)行熱滅菌的方法(例如，釜式滅菌法和高壓蒸汽滅菌法)。更具體而言，當(dāng)以液體形式使用組合物時(shí)，如有必要，將基于所述組合物的勻質(zhì)化物(勻質(zhì)化液)再次在大約120°C至145°C加熱滅菌I秒至10秒并冷卻，然后將其無(wú)菌填充，或無(wú)菌填充入罐或軟包并釜式滅菌。此外，當(dāng)以粉末形式使用所述組合物時(shí)，例如，將勻質(zhì)化物噴霧干燥或冷凍干燥。在下文中，會(huì)更詳細(xì)地描述本發(fā)明，但是不應(yīng)理解為其限于下述個(gè)別的實(shí)施方案。在本發(fā)明中，當(dāng)調(diào)和(添加/混合)原料時(shí)，在加熱的同時(shí)調(diào)和它們。當(dāng)調(diào)和溫度設(shè)在高溫如90°C時(shí)，蛋白質(zhì)固化(凝固)，而當(dāng)調(diào)和溫度設(shè)定在低溫如2°C時(shí)，所述蛋白質(zhì)幾乎不在水等中溶解或分散。因此，為了調(diào)和步驟，溫度優(yōu)選為5°C至85°C，更優(yōu)選15°C至75°C，甚至更優(yōu)選25°C至55°C，并且尤其優(yōu)選35°C至50°C。此時(shí)，優(yōu)選考慮調(diào)和液中細(xì)菌(污染細(xì)菌等)的增殖而采用合適的調(diào)和時(shí)間。此外，在本發(fā)明中，將調(diào)和液在高溫滅菌之后勻質(zhì)化。理由是用高溫滅菌(加熱)，蛋白質(zhì)可能變性且粘度可能增加(變稠)，而通過在高溫滅菌之后勻質(zhì)化，能夠降低變稠程度。此處，高溫滅菌之后勻質(zhì)化，是指高溫滅菌之后、填充入容器等成為產(chǎn)品之前的勻質(zhì)化，并且進(jìn)行勻質(zhì)化的次數(shù)不限于一次，可為多次如兩次或更多次。例如，當(dāng)滅菌混合溶液并且照原樣(as it is)第二次滅菌時(shí)，勻質(zhì)化會(huì)在第二次滅菌之后再次進(jìn)行。此外，可在滅菌之后將調(diào)和液勻質(zhì)化，并且當(dāng)?shù)诙螠缇鷷r(shí)，勻質(zhì)化會(huì)在第二次滅菌之后在第二輪中再次進(jìn)行。此外，可將調(diào)和液在滅菌之后勻質(zhì)化，而可以在不進(jìn)行滅菌的情況下再次進(jìn)行第二次勻質(zhì)化。更具體而言，在本發(fā)明中，在高溫滅菌調(diào)和液之后，在填充入容器等成為產(chǎn)品之前進(jìn)行至少一次勻質(zhì)化是重要的。另一方面，甚至在將進(jìn)行了高溫滅菌(滅菌液)的調(diào)和液勻質(zhì)化之后，可以將其再次滅菌至不引起滅菌液的程度。例如，滅菌混合溶液之后可以接著是勻質(zhì)化，然后在不進(jìn)行高溫滅菌的情況下，可將其再次進(jìn)行第二次滅菌。此時(shí)，作為高溫滅菌步驟，例如，加熱歷史、(thermal history)對(duì)應(yīng)于100°C至150°C的溫度和I秒至30秒的保持時(shí)間；優(yōu)選115°C至145°C進(jìn)行I秒至20秒；更優(yōu)選120°C至145°C進(jìn)行I秒至10秒；并且甚至更優(yōu)選125°C至145°C進(jìn)行I秒至5秒。當(dāng)實(shí)施高溫滅菌時(shí)，蛋白質(zhì)變性并且滅菌溶液容易稠化。換言之，如果不進(jìn)行高溫滅菌，那么混合溶液在滅菌之后難以變稠。因此，通過勻質(zhì)化降低變稠程度的作用在進(jìn)行高溫滅菌時(shí)是特別有效的。此外，當(dāng)進(jìn)行高溫滅菌時(shí)，可以調(diào)節(jié)對(duì)調(diào)和液的壓力(加壓或減壓)。此時(shí)，正常情況下，出于防止調(diào)和液沸騰等目的，例如，將滅菌壓力設(shè)定在約lkg/cm2至10kg/cm2。即，在本發(fā)明的高溫滅菌中，除了施加溫度(加熱)之外，還可以施加這種壓力。用于高溫滅菌的設(shè)備包括板型熱交換器、管型熱交換器、蒸汽注入型滅菌器、蒸汽灌入型滅菌器和焦耳加熱型滅菌器。另一方面，在勻質(zhì)化時(shí)，如果使用勻質(zhì)化器，那么例如將溫度設(shè)定在約10°C至60°C，且流速設(shè)定為約100L/h至10，000L/h，壓力設(shè)定為IOMPa至lOOMPa，優(yōu)選20MPa至80MPa，更優(yōu)選30MPa至70MPa，且更優(yōu)選20MPa至50MPa。此外，如有需要，如高溫滅菌和勻質(zhì)化等操作的條件可以改變，并通過多種處理來(lái)進(jìn)行。在下文中，會(huì)參考更具體的實(shí)施例來(lái)描述本發(fā)明，但本發(fā)明不限于此。在調(diào)和步驟中，將前述溫度下的溫水在槽中攪拌，并且考慮到混合和分散的容易性，將除了維生素混合物(混合的維生素組分)之外的原料加入、混合并攪拌以產(chǎn)生調(diào)和液。為了促進(jìn)混合和分散而添加原料的順序因原料的量和性質(zhì)而不同。因此，取決于組成，各種類型的混合組分可以一次(at once)添加或以多種順序分開來(lái)添加。具體而言，例如，一種方法是以糖、蛋白質(zhì)、油和脂肪、然后是礦物質(zhì)的順序添加它們。另一實(shí)例是以一部分糖、蛋白質(zhì)其他糖、礦物質(zhì)、然后是油和脂肪的順序添加它們的方法。此外，另一實(shí)例是以油和脂肪、蛋白質(zhì)、糖、然后是礦物質(zhì)的順序添加它們的方法。向該滅菌液中加入維生素混合物(混合的維生素組分)，矯味劑(香料)等并混合，以產(chǎn)生最終的滅菌液。對(duì)該最終的滅菌液進(jìn)行蒸汽注入型加熱滅菌，然后使用勻質(zhì)化器勻質(zhì)化(通過兩階段加壓的勻質(zhì)化)以生成組合物。本發(fā)明的組合物可以用作針對(duì)流感感染具有預(yù)防效果的經(jīng)腸營(yíng)養(yǎng)劑。即，當(dāng)將本發(fā)明的組合物混入流食或經(jīng)腸營(yíng)養(yǎng)劑時(shí)，由于所述流食或經(jīng)腸營(yíng)養(yǎng)劑本身具有針對(duì)流感感染的預(yù)防效果，其不僅可以用作食品，而且還可以用于預(yù)防流感感染的目的。其可以用作制成擁有至少以下功能之一的食品，例如特定保健用食品和營(yíng)養(yǎng)機(jī)能食品等保健機(jī)能食品針對(duì)流感感染的預(yù)防作用；增強(qiáng)中和抗體誘導(dǎo)的作用；或在疫苗接種之后防止中和抗體效價(jià)降低的作用。在有許多老年人和住院患者的設(shè)施中，其可成為增強(qiáng)流感疫苗的感染預(yù)防效果的預(yù)防手段?；蛘撸淇捎米鞴雰河玫牧鞲蓄A(yù)防用嬰兒食品、或通用的流感感染預(yù)防用營(yíng)養(yǎng)食品。此外，在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物可以制成具有腸調(diào)節(jié)作用的組合物。因此，它還可以作為兼具腸功能調(diào)節(jié)作用的營(yíng)養(yǎng)輔助醫(yī)藥品或流感感染預(yù)防食品來(lái)加以利 用。將此處引用的所有現(xiàn)有技術(shù)參考文獻(xiàn)通過提述并入本說明書中。在下文中，會(huì)參考實(shí)施例進(jìn)一步具體描述本發(fā)明。
實(shí)施例[實(shí)施例I]向管飼患者接種流感疫苗之后的抗體效價(jià)測(cè)量[方法]將接受管飼的患者分成兩組，即試驗(yàn)組和對(duì)照組，并評(píng)估丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物對(duì)流感疫苗的中和抗體誘導(dǎo)的作用。對(duì)照組和試驗(yàn)組的患者背景歸納于表I。當(dāng)通過Student氏t檢驗(yàn)(均勻分布)或Welch檢驗(yàn)(不均勻分布)分析時(shí)，各組之間未顯示患者背景中的顯
著差異。對(duì)照組和試驗(yàn)組的患者背景[表 I]
_對(duì)照組_試驗(yàn)組_
__女性
性別_O_Π_2_9
_平均值士 SD_平均值士 SD_
年齡(周歲)_84.5 ±7.5_78.7 ±9.6_
身高(cm)_145.0 ±6.6_145.1 ±9.6_
體重(kg)_36.6+2.9_37.7 + 7.3_
BMI_17.4 + 1.1_17.8 + 2.5_通過Student氏t檢驗(yàn)(均勻分布)或Welch檢驗(yàn)(不均勻分布)分析統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。向各組施用的流食如下對(duì)照組(11人)常規(guī)組成流食；試驗(yàn)組(11人；但對(duì)12人進(jìn)行了糞便得分和菌群分析)同時(shí)施用試驗(yàn)流食和丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物。
“常規(guī)組成流食”是含有乳蛋白作為蛋白質(zhì)，但是不含乳發(fā)酵組分或丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物的流食。另一方面，試驗(yàn)流食是含 有乳發(fā)酵組分(3. 8g/100kcal)作為蛋白質(zhì)的流食。包括在試驗(yàn)流食中的乳發(fā)酵組分如下產(chǎn)生使用保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌發(fā)酵脫脂乳，濃縮；向其添加蜂蜜、維生素、礦物質(zhì)、食用油脂、膳食纖維和糊精，然后滅菌。此外，丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物是弗氏丙酸桿菌(一種丙酸細(xì)菌)培養(yǎng)物。此外，丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物含有DHNA (1，4- 二羥基-2-萘甲酸)，其是來(lái)源于丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物的組分。將同時(shí)施用試驗(yàn)流食和丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物視為施用含有乳發(fā)酵組分和丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物的新營(yíng)養(yǎng)組合物。此外，施用半乳寡糖作為寡糖。除了所述試驗(yàn)流食含有乳發(fā)酵組分之外，所述常規(guī)組成流食和所述試驗(yàn)流食之間沒有實(shí)質(zhì)區(qū)別。在實(shí)施例最后，顯示了這些流食的組成(平均)(表6)。將每種組分施用于對(duì)照組(常規(guī)組成流食施用組)和試驗(yàn)組(試驗(yàn)流食施用組)二者使得不存在基于熱量的顯著差異。結(jié)果，向試驗(yàn)組中的患者分別添加如下量的乳發(fā)酵組分和丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物乳發(fā)酵組分平均33g/天；和丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物平均Ig/天(大約13 μ g/天，當(dāng)換算成DHNA量時(shí)，或I. 6 μ gDHNA每IOOkcal熱量攝入)。在各組中開始施用上述流食的日期定義為第-4周(分組時(shí)間)，并在四周之后(設(shè)為第O周)向上臂皮下接種O. 5mL流感疫苗(H1N1型、H3N2型或B型疫苗)(Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute)(圖 I)。在疫苗接種之前 4 周和之后 4周，計(jì)算糞便中的雙歧桿菌數(shù)，并比較腸道菌群。從各組中的所有受試者根據(jù)以下時(shí)間表采集血液，并測(cè)定針對(duì)疫苗的抗體效價(jià)和血液中的細(xì)胞因子濃度。為了測(cè)定血液中的細(xì)胞因子濃度，根據(jù)以下時(shí)間表收集血液在分組之日(第_4周)；在流感疫苗接種之時(shí)(第O周)；和疫苗接種之后2周(第2周)和6周(第6周)。通過血凝抑制試驗(yàn)(HI法)測(cè)量了中和抗體，通過ELISA法測(cè)定了血液細(xì)胞因子，并通過實(shí)時(shí)PCR方法測(cè)定了糞便中的雙歧桿菌數(shù)。比較兩組在分組時(shí)間前后、以及在疫苗接種之后第2周和第5周的所述測(cè)量結(jié)果。此時(shí)，將少于10的抗體效價(jià)定義為5。此外，關(guān)于糞便得分的值，對(duì)于每個(gè)患者從分組之時(shí)起(第_4周)根據(jù)Bristol糞便分級(jí)每天記錄該得分(表2)，并分析該周的平均得分。Bristol糞便分級(jí)具有從I至7的七個(gè)等級(jí)，將I定義為最硬的糞便，7定義為水樣的糞便，3和4定義為正常糞便。如下進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。通過chi方檢驗(yàn)分析抑制感染的抗體的表達(dá)率的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。關(guān)于中和抗體效價(jià)，計(jì)算IoglO (抗體效價(jià)),然后通過Mann-Whitney U檢驗(yàn)分析兩組之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性，并且在疫苗接種之后通過Wilcoxon符號(hào)秩和檢驗(yàn)進(jìn)行分析。關(guān)于血液中的細(xì)胞因子濃度和腸道菌群，通過Student氏t檢驗(yàn)(均勻分布)或Welch檢驗(yàn)(不均勻分布)來(lái)分析兩組之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性，通過相應(yīng)的t檢驗(yàn)分析每周試驗(yàn)之前和過程中的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。兩組之間的糞便得分的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性通過Mann-Whitney U檢驗(yàn)來(lái)分析，并通過Wilconxon符號(hào)秩和檢驗(yàn)來(lái)分析試驗(yàn)之前和過程中的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。[表2]Bristol 糞便表
I型分散的硬塊，像堅(jiān)果(難以排泄)。2型香腸型，但為塊狀。3型像香腸，但其表面帶有裂紋。4型像香腸或蛇，光滑且柔軟5型柔軟的無(wú)定形物塊狀物(softblob),帶有輪廓鮮明的邊緣(容易排泄)6型帶有粗糙邊緣的松軟塊，糊狀糞便。7型水樣的，無(wú)固體塊。完全為液體。[結(jié)果]將感染抑制抗體效價(jià)設(shè)為40或更高(Kojimahara N,等，Vaccine. 2006 ;24 :5966-9.，Scharpe J，等，Am J Kidney Dis. 2009 ；54 :77_85)，并且測(cè)定在分組之時(shí)(第-4周)和疫苗接種之時(shí)(第O周)平均抗體效價(jià)低于40的受試者在疫苗接種之后第2周和 第6周的感染抑制抗體的表達(dá)率。通過chi方檢驗(yàn)分析獲得的結(jié)果。關(guān)于HlNl和H3N2抗原，對(duì)于第2周和第6周兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)，試驗(yàn)組中達(dá)到感染抑制抗體效價(jià)的受試者的表達(dá)率均高于對(duì)照組中。關(guān)于B-I抗原，在第6周兩組中的表達(dá)率均為9%，但試驗(yàn)組在第2周具有比對(duì)照組高的表達(dá)率。此外，當(dāng)在兩組之間進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)時(shí)，在第6周在試驗(yàn)組中對(duì)于H3N2抗原的感染抑制抗體效價(jià)表達(dá)率顯著更高(表3)。因此，通過比較實(shí)驗(yàn)，揭示了通過同時(shí)攝入乳發(fā)酵組分和丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物增強(qiáng)了流感疫苗的中和抗體誘導(dǎo)。感染抑制抗體的表達(dá)率[表3]
HlNlH3N2B-I
η第2周~第6周 η第2周~第6周 η第2周~第6周 對(duì)照組 10 30% (3) 10% (I) 10 50% (5) 10% (I) 11 18% (2) 9% (I)
試驗(yàn)組 9 44% (4) 44% (4) 11 64% (7) 64% (7) 11 27% (3) 9% (I)
PfI086 024085 004 ()表示患者數(shù)比較在流感疫苗接種之后第2周和第6周的中和抗體效價(jià)，對(duì)照組中針對(duì)HlNl和Η3Ν2抗原的抗體效價(jià)在第6周與第2周相比顯著降低。而另一方面，在試驗(yàn)組中，所述中和抗體效價(jià)在第2周和第6周之間沒有改變(圖2Α和圖2Β)。接下來(lái)，當(dāng)分析流感疫苗接種時(shí)間前后的腸道菌群時(shí)，試驗(yàn)組中的腸道雙歧桿菌(Bifidobacterium)數(shù)(loglO (細(xì)菌數(shù) /g 糞便))從 6. 39±1· 91 增加至 7. 37±2· 4,但對(duì)照組中為從6. 65±2. 97至6. 18±2. 80，沒有任何改變(表4)。腸道雙歧桿菌數(shù)的變化(單位細(xì)菌數(shù)/Ig糞便的對(duì)數(shù)值)[表 4]
權(quán)利要求
1.一種用于預(yù)防流感感染的組合物，其包含丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物。
2.權(quán)利要求I的組合物，其中所述丙酸細(xì)菌是費(fèi)氏丙酸桿菌(Propionibacteriumfreudenreichii)。
3.權(quán)利要求I的組合物，其附加地還包含乳發(fā)酵組分以及/或寡糖。
4.權(quán)利要求3的組合物，其中所述乳發(fā)酵組分是通過使用屬于乳桿菌屬(genusLactobacillus)的乳酸細(xì)菌以及/或?qū)儆阪溓蚓鷮?genus Streptococcus)的乳酸細(xì)菌將乳發(fā)酵而產(chǎn)生的乳或其混合物。
5.權(quán)利要求3的組合物，其中所述乳發(fā)酵組分是非成熟乳酪。
6.權(quán)利要求3的組合物，其中構(gòu)成前述寡糖的糖中的至少一種是半乳糖。
7.權(quán)利要求3的組合物，其中所述組合物包含丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物和乳發(fā)酵組分，并且二者均已經(jīng)過滅菌。
8.權(quán)利要求I的組合物，所述組合物用于經(jīng)腸施用給接受流感疫苗接種的動(dòng)物。
9.權(quán)利要求3的組合物，其包含以下營(yíng)養(yǎng)物 丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物； 乳發(fā)酵組分； 寡糖； 蛋白質(zhì)； 糖類； 脂質(zhì)；和 膳食纖維。
10.權(quán)利要求9的組合物，其附加地還包含至少一種選自下組的營(yíng)養(yǎng)素維生素、礦物質(zhì)、有機(jī)酸和有機(jī)堿。
11.一種用于在接種有流感疫苗的動(dòng)物中促進(jìn)流感病毒中和抗體的誘導(dǎo)的作用劑，其包含丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物。
12.一種流感感染的預(yù)防方法，其包括以下步驟 (1)向動(dòng)物施用丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物；和 (2)向動(dòng)物接種流感疫苗。
13.權(quán)利要求12中所述的流感感染的預(yù)防方法，其中步驟(I)在步驟(2)之前、在步驟(2)之后或與步驟(2)同時(shí)進(jìn)行至少一次。
14.權(quán)利要求12中所述的流感感染的預(yù)防方法，其中在步驟(I)中將所述丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物與乳發(fā)酵組分以及/或寡糖一起施用。
15.一種包含以下組分的組合物 (a)寡糖； (b)乳發(fā)酵組分；和 (C)丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物。
16.權(quán)利要求15的組合物，其中構(gòu)成前述寡糖的糖中的至少一種是半乳糖。
17.權(quán)利要求15的組合物，所述組合物是用于調(diào)節(jié)腸功能的組合物。
全文摘要
本發(fā)明闡明了針對(duì)流感感染的預(yù)防效果能夠獲得自丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物。本發(fā)明的組合物包含丙酸細(xì)菌培養(yǎng)物，并且增強(qiáng)在接種流感疫苗的動(dòng)物中中和抗體的誘導(dǎo)。構(gòu)成本發(fā)明組合物的組分容許長(zhǎng)期攝入，并且由于其作為飲食的悠久歷史而具有良好的安全性和味道特性。此外，本發(fā)明的組合物還可包含乳發(fā)酵組分和寡糖。還可期待由施用該組合物帶來(lái)的腸功能調(diào)節(jié)作用。
文檔編號(hào)A61K31/702GK102665738SQ201080048758
公開日2012年9月12日 申請(qǐng)日期2010年12月10日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月10日
發(fā)明者永渕真也, 赤津裕康, 高杉諭, 高見正雄 申請(qǐng)人:株式會(huì)社明治