專利名稱：新蛋白的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新蛋白、編碼這些蛋白的核酸以及包含它們的組合物、特異識別所述蛋白的抗體、以及它們在治療和診斷方法中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
本部分中的討論不限于描述為針對本發(fā)明的“現(xiàn)有技術(shù)”的主題。因此，在該討論中，不允許由于具體主題的包括而包含或推斷這樣的現(xiàn)有技術(shù)情形，也不允許由于這樣的包括而包含針對本發(fā)明目的的聲明。本申請中提及的所有出版物、包括它們所引用的參考文件通過引用的方式全文并入本文中。組織特異蛋白和它們的表達(dá)水平是生物體健康狀態(tài)極好的指示物以及在患病狀態(tài)下用于治療的潛在目標(biāo)?？梢愿鶕?jù)引起疾病的機(jī)制對影響人類的疾病進(jìn)行分類。例如，具有免疫成分或病因的疾病包括傳染病、急性和慢性炎性疾病、癌癥、移植病和自體免疫性疾病。術(shù)語炎性腸道疾病(IBD)涵蓋了一組疾病，其中腸子發(fā)炎(變紅并腫脹)，可能是身體抵抗其自身的腸組織的免疫反應(yīng)的結(jié)果，并因此被認(rèn)為是自體免疫性疾病。炎性疾病包括敗血病、內(nèi)毒素血癥、胰腺炎、葡萄膜炎、肝炎、腹膜炎、角膜炎、 SIRS和受傷誘導(dǎo)炎癥。與生育相關(guān)的疾病包括男性不育和女性不育。男性不育可以由多種問題引起。一些更通常的疾病列出如下-缺乏精子生成90%的男性不育是由不能產(chǎn)生足夠的精子而引起。當(dāng)無精子產(chǎn)生時發(fā)生無精癥(Azzospermia),當(dāng)產(chǎn)生很少量的精子時被診斷為精子減少；-精索靜脈曲張；-其它疾病包括睪丸的發(fā)育異?；驌p傷(由內(nèi)分泌紊亂或炎癥引起)、附腺疾病、 性能力問題、暴露于乙烯雌酚(DES)(—種在20世紀(jì)50和60年代使用的合成雌激素，能夠引起男性生殖管囊腫)、睪丸未降和如染色體異常的罕見情況中的遺傳疾病。改善睪酮不足的起作用因素包括-藥物治療，特別是用于治療萎靡不振或精神疾病的那些；-酒精中毒；-靶定或傷害睪丸的用于癌癥的化學(xué)療法或放射療法；-慢性疾??；-腦下垂體(腦中產(chǎn)生從腦到睪丸的調(diào)節(jié)激素產(chǎn)生的物質(zhì)的腺體)的功能障礙；-血色沉著病(血中太多鐵)；-性腺機(jī)能減退(此時睪丸不能產(chǎn)生大量的睪酮(亦稱雄激素缺乏)或精子(亦稱精子發(fā)生));-炎性疾病，如肉狀瘤病(一種能夠引起睪丸損傷或感染的情況)；
-危及免疫系統(tǒng)的疾病，如AIDS;-使腎上腺系統(tǒng)負(fù)重的過度壓力。女性不育同樣可以由多種問題引起。一些更通常的疾病是多囊卵巢病、盆腔炎、排卵功能障礙、子宮纖維瘤、子宮內(nèi)膜異位和免疫性不育。碳水化合物代謝紊亂以多種形式出現(xiàn)。最常見的紊亂是后天的。碳水化合物代謝中后天性或次生紊亂(secondary derangement),如糖尿病酮癥酸中毒、高滲性昏迷和低血糖癥均影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)。在糖尿病中同樣可以看到許多形式和變異的周圍神經(jīng)疾病。碳水化合物代謝的剩余疾病是罕見的代謝的先天性障礙(如，遺傳缺陷)。碳水化合物代謝的后天性紊亂在美國和全世界都是常見的。在酗酒者和采用胰島素進(jìn)行治療的患有糖尿病的病患中，低血糖癥是引起神經(jīng)性疾病，特別是急性精神衰退、記憶力下降、迷失方向、意識不清和昏迷的常見原因。源自其它原因的血胰島素過多是罕見的，但是胰腺癌可能是原因。糖尿病及其多種神經(jīng)學(xué)并發(fā)癥是在成年病患中治療的最常見疾病之一。糖尿病是最常見的內(nèi)分泌疾病，它的特征是葡萄糖代謝的異常。與該疾病相關(guān)的異常葡萄糖代謝導(dǎo)致了高血糖癥(高血糖水平)并最終引起多器官系統(tǒng)，包括眼、腎、神經(jīng)和血管的并發(fā)癥。盡管最通常地，病患起初表現(xiàn)出過多排尿(多尿癥)以及由于極度口渴而頻繁喝水(煩渴)，患有持續(xù)高血糖癥或具有異常葡萄糖耐受性的病患通常被診斷患有該疾病。這些典型的最初癥狀由高血糖癥的滲透作用產(chǎn)生。糖尿病的發(fā)病機(jī)理代表性地與胰腺，特別是胰腺胰島的β細(xì)胞的功能障礙有關(guān)。 該功能障礙可能導(dǎo)致?lián)p壞產(chǎn)生胰島素的胰島β細(xì)胞，所述胰島素是調(diào)節(jié)葡萄糖的肽激素。 糖尿病通常被分為胰島素依賴型(或I型)和非胰島素依賴型(或II型)。主要的三種形式或糖尿病是- I型由身體不能產(chǎn)生胰島素而產(chǎn)生。治療通常涉及施用胰島素。- II型由身體不能適當(dāng)?shù)厥褂靡葝u素并結(jié)合相對胰島素缺乏的情形產(chǎn)生。許多預(yù)定發(fā)展成II型糖尿病的人在糖尿病前期狀態(tài)度過很多年，這種情況是因?yàn)槿说难撬礁哂谡Ｋ?，但不足以診斷為II型糖尿病。-妊娠糖尿病懷孕之前從來沒有得過糖尿病但在懷孕期間具有高的血糖(葡萄糖)水平的孕婦被認(rèn)為是患有妊娠糖尿病。妊娠糖尿病在大約4%的孕婦中發(fā)作。它可以繼續(xù)發(fā)展成II型(或罕見地發(fā)展成I型)。-許多其它形式的糖尿病與這些分開分類。例子包括由于胰島素分泌的遺傳缺陷導(dǎo)致的先天糖尿病、囊腫性纖維化相關(guān)的糖尿病、由高劑量的糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的類固醇糖尿病和幾種形式的單基因糖尿病。但是，隨著該疾病已經(jīng)得到更好的理解，該術(shù)語已得到發(fā)展。例如，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在一些患有非胰島素依賴型糖尿病的患者中，所述疾病發(fā)展成胰島素依賴型形式，而在其它病患中，胰島素依賴不發(fā)展。因此，經(jīng)常按照胰島損壞的發(fā)病機(jī)理的基質(zhì)對病患分類，現(xiàn)在名稱I型用于表示自體免疫的胰島發(fā)病機(jī)理，即，表示由胰島特異的自體免疫疾病發(fā)作引起的糖尿病，且在本文中也如此使用。術(shù)語胰島素依賴型糖尿病(IDDM)指已經(jīng)發(fā)展至出現(xiàn)很多胰腺β細(xì)胞的自體免疫損壞并產(chǎn)生明顯癥狀的階段的I型糖尿病。術(shù)語前IDDM指可以通過活組織檢查或通過自體免疫反應(yīng)分析而檢測的自體免疫狀況，其中胰腺胰島β細(xì)胞受到特異的自體免疫侵襲，以至于一些細(xì)胞受到損壞。但是，在前IDDM中，所述損壞(如有)并沒有發(fā)展到足以需要施用胰島素的程度。既然在I型糖尿病的早期階段存在一個點(diǎn)，此時可以觀察到明顯的癥狀，但是一些胰島功能仍然保留(被認(rèn)為是“蜜月期”)，并不是所有I型糖尿病都被分類為IDDM，且不是所有前IDDM都不表現(xiàn)明顯癥狀。與由胰島素缺乏引起的異常代謝相關(guān)的代謝并發(fā)癥能夠影響多種器官系統(tǒng)。最常見的急性代謝并發(fā)癥是糖尿病酮癥酸中毒，它的特征是嚴(yán)重的高血糖癥(并導(dǎo)致由滲透性利尿引起的血容量減少)以及由過量的游離脂肪酸釋放和酮體的產(chǎn)生所誘導(dǎo)的代謝性酸中毒。除了酮酸中毒的急性代謝并發(fā)癥外，糖尿病病患容易感染一系列的后期并發(fā)癥， 這些并發(fā)癥引起了相當(dāng)大的發(fā)病率和過早的死亡率。由于葡萄糖和脂質(zhì)代謝均異常，糖尿病人比普通人更廣泛和更早地發(fā)生動脈硬化。該血管病理學(xué)可以導(dǎo)致，尤其是冠心病、中風(fēng)和伴有壞疽的周圍血管病。視網(wǎng)膜病是糖尿病的另一個血管并發(fā)癥。糖尿病視網(wǎng)膜病是導(dǎo)致失明的主要原因，它由增加的視網(wǎng)膜毛細(xì)血管滲透性引起，可以發(fā)展成梗塞、出血、動脈瘤形成和新血管生成，被認(rèn)為是增殖性視網(wǎng)膜病。如上所述，血糖的精細(xì)控制與I型糖尿病的后期并發(fā)癥的改善相關(guān)，說明β細(xì)胞功能的保護(hù)和恢復(fù)可以減少或去除該疾病大多數(shù)的病理并發(fā)癥。碳水化合物代謝的遺傳性疾病是罕見的。在非常少的(2-6個)病患中報導(dǎo)有丙酮酸脫氫酶(I3DH)復(fù)合物和被稱為戊糖尿的良性化合物異常的嚴(yán)重缺陷。低血糖癥、糖尿病酮酸中毒和高滲性昏迷都是潛在致命的但潛在可治愈的情況。本研究中，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)了新的分泌蛋白，命名為PRT5、PRT6、PRT7和PRT8，它們是本發(fā)明的目的。本發(fā)明同樣提供包含所述蛋白的組合物，以及它們在治療中的應(yīng)用。能夠特異識別本文描述的新蛋白的抗體以及它們在診斷和治療中的應(yīng)用同樣是本發(fā)明的一個目的。這些和其它應(yīng)用以及本發(fā)明的目的將隨著描述的進(jìn)行逐漸清晰。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的是提供一種包含由SEQ ID NO. USEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 3或 SEQ ID NO. 4中任意一項表示的氨基酸序列的分離多肽和其任何片段、衍生物或類似物。所述多肽是趨化因子樣分泌蛋白，在本文中分別被指定為PRT5、PRT6、PRT7或PRT8。相似地，本發(fā)明的一個目的是提供一種包含PRT5、PRT6、PRT7或PRT8中任意一種分離多肽的分離蛋白，和其任何片段、衍生物或類似物。本發(fā)明的另一個目的是提供一種分離核酸分子，所述分離核酸分子包含編碼 PRT5、PRT6、PRT7或PRT8中任意一種分離多肽和其任何片段、衍生物和類似物的序列。本發(fā)明的另一個目的是提供一種包含編碼PRT5、PRT6、PRT7或PRT8中任意一種分離多肽的分離核酸分子的載體，其中所述核酸分子可操作地與啟動子連接且所述載體是表達(dá)載體。此外，本發(fā)明同樣提供包含所述載體的細(xì)胞。本發(fā)明的另一個目的是提供包含PRT5、PRT6、PRT7或PRT8中任意一種分離多肽和其任何片段、衍生物或類似物或含有所述分離多肽和其任何片段、衍生物或類似物的蛋白
8的組合物。所述組合物可以進(jìn)一步包含制藥學(xué)可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。當(dāng)包含PRT5或PRT8或其生物學(xué)活性片段或衍生物時，本發(fā)明提供的所述組合物可以具有特殊的治療應(yīng)用，如增強(qiáng)葡萄糖代謝、誘導(dǎo)胰島素受體表達(dá)、誘導(dǎo)Glut-4轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白移位至質(zhì)膜、誘導(dǎo)葡萄糖流入和/或糖原合成、以及誘導(dǎo)糖酵解和脂肪酸合成，或所述組合物可以用于治療以下疾病葡萄糖代謝相關(guān)疾病、糖尿病、代謝綜合征、肥胖、內(nèi)分泌疾病和肌肉疾病。當(dāng)包含PRT6或其生物學(xué)活性片段或衍生物時，本發(fā)明提供的所述組合物可以具有特殊的治療應(yīng)用，如提聞辜麗生成，或可以用于治療辜麗缺乏或低辜麗相關(guān)疾病?？蛇x擇地，當(dāng)包含PRT7或其生物學(xué)活性片段或衍生物時，本發(fā)明提供的所述組合物可以具有特殊的效果，如誘導(dǎo)P53表達(dá)、細(xì)胞凋亡或細(xì)胞死亡，或它在癌癥治療中具有治療用途。本發(fā)明的另一個目的是提供本發(fā)明中描述的PRT5、PRT6、PRT7或PRT8中任意一種分離多肽在制備治療疾病或紊亂的藥物中的應(yīng)用，所述疾病或紊亂選自具有免疫學(xué)因素或病因的疾病、傳染病、急性和慢性炎性疾病、癌癥、移植病和自體免疫性疾病、與生育相關(guān)的疾病和碳水化合物代謝紊亂、糖尿病、代謝綜合征、肥胖、內(nèi)分泌疾病和肌肉疾病。本發(fā)明的另一個目的是提供一種在需要的個體中治療疾病或紊亂的方法，包括對所述個體施用治療有效量的分離多肽PRT5、PRT6、PRT7或PRT8、或包含所述分離多肽的蛋白、或包含其的組合物，所述疾病或紊亂選自具有免疫學(xué)因素或病因的疾病、傳染病、急性和慢性炎性疾病、癌癥、移植病和自體免疫性疾病、與生育相關(guān)的疾病、碳水化合物代謝紊亂、糖尿病、代謝綜合征、肥胖、內(nèi)分泌疾病和肌肉疾病。本發(fā)明的另一個目的是提供一種抗體或其任何片段或衍生物，所述抗體能夠特異識別分離多肽PRT5、PRT6、PRT7或PRT8之一或其片段或衍生物、或包含其的蛋白。本發(fā)明同樣提供包含抗PRT5抗體、抗PRT6抗體、抗PRT7抗體或抗PRT8抗體的組合物，以及它們的治療和診斷應(yīng)用。最后，本發(fā)明提供一種用于診斷和/或監(jiān)測疾病或紊亂的治療功效和/或用于評估疾病或紊亂的預(yù)后的診斷試劑盒，所述疾病或紊亂選自具有免疫學(xué)因素或病因的疾病、 傳染病、急性和慢性炎性疾病、癌癥、移植病和自體免疫性疾病、與生育相關(guān)的疾病和碳水化合物代謝紊亂；所述試劑盒包括至少一種抗PRT5抗體、抗PRT6抗體、抗PRT7抗體或抗 PRT8抗體或包含其的組合物，以及用于實(shí)現(xiàn)檢測樣品中的抗原存在的說明書，其中所述抗原能夠被所述抗體特異識別。所述試劑盒可以進(jìn)一步包括至少一種以下成分至少一種用于收集被測樣品的工具、至少一種用于檢測所述抗原被所述抗體識別的必需試劑和至少一種對照樣品。


圖1A-1D PRT5對葡萄糖水平的作用圖1A:該圖顯示了注射2mg/kg葡萄糖的C57B1小鼠，在注射PRT5后I天、在時間點(diǎn)O. 5、I. 5、2、2. 5和4小時測量的血液中的葡萄糖濃度(mg/dL)。圖IB :該圖顯示了注射2mg/kg葡萄糖的C57B1小鼠，在注射PRT5后2天、在時間點(diǎn)O. 5、1和2小時測量的血液中的葡萄糖濃度(mg/dL)。
圖1C:該圖顯示了注射2mg/kg葡萄糖的C57B1小鼠，在注射PRT5后3天、在時間點(diǎn)O. 5、1和2小時測量的血液中的葡萄糖濃度(mg/dL)。圖ID :該圖顯示了注射2mg/kg葡萄糖的C57B1小鼠，在注射PRT5后4天、在時間點(diǎn)O. 5、1和2小時測量的血液中的葡萄糖濃度(mg/dL)。圖例O-鹽水；_ ■ -I μ g/kg PRT5 ▲ -5 μ g/kg PRT5 ；Sal.=鹽水；Gluc. =葡萄糖；T. inj.=注射葡萄糖后的時間。圖2A-2B :健康個體和糖尿病病患的人血清中的PRT5水平圖2A :該柱狀圖顯示了 8位健康個體和9位II型糖尿病病患的PRT5水平(pg/ ml)。以I : 3稀釋樣品并以I : 250稀釋抗PRT5抗體。圖2B :該柱狀圖顯示了健康個體對II型糖尿病病患(每一種平均10個樣品)的 PRT5水平(pg/ml)。以I : 3稀釋樣品并以I : 250稀釋抗PRT5抗體。圖例H.=健康個體；T. II Diab. = II型糖尿病病患。圖3Α-3Β PRT6對睪酮水平的作用圖3A:睪酮校準(zhǔn)曲線。圖3B:該柱狀圖顯示了用4% DMSO水溶液、O. 5 μ g/kg的PRT6或5 μ g/kg的 PRT6(每組6只小鼠)處理4天的小鼠血清(以I : 10稀釋血液)中睪酮的水平(ng/ml)。圖例Test.conc.=睪酮濃度；Test.=睪酮；Treat.=處理；w. ο.=周齡。圖4A-4F :胰腺癌和肺癌病患中的PRT7水平圖4A :該柱狀圖顯示了胰腺癌病患(10位病患，癌癥階段顯示在每個柱的下方) 與健康個體(9個樣品)相比較的PRT7的水平(pg/ml)。圖4B :該柱狀圖顯示了分別在男性和女性的胰腺癌病患與健康個體中的PRT7平均水平(pg/ml) ο圖4C:該柱狀圖顯示了僅來自男性的樣品中，胰腺癌病患(5位病患，癌癥階段顯示在每個柱的下方)與健康個體(5個樣品)相比較的PRT7的水平(pg/ml)。圖4D :該柱狀圖顯示了僅在男性中，胰腺癌病患與健康個體中的PRT7平均水平 (pg/ml)。圖4E :該柱狀圖顯示了肺癌病患(9個樣品)和健康個體(9個樣品)相比較的 PRT7 的水平(pg/ml)。圖4F :該柱狀圖顯示了分別在男性和女性中，肺癌病患與健康個體中的PRT7平均水平(pg/ml) ο圖例H.=健康個體；PC =胰腺癌病患；C. st.=癌癥階段；LC =肺癌；m.=男性；f.=女性。圖5A-5B PRT8對葡萄糖水平的作用圖5A:該圖顯示了注射2mg/kg葡萄糖的C57B1小鼠，在注射PRT8后2天、在時間點(diǎn)30、60和120分鐘測量的葡萄糖水平。圖5B :該圖顯示了注射2mg/kg葡萄糖的C57B1小鼠，在注射PRT8后3天、在時間點(diǎn)30、60和120分鐘測量的葡萄糖水平。圖例- -鹽水；-■-I μ g/kg PRT8 ▲ -10 μ g/kg PRT8 ；Sal.=鹽水；Gluc.
=葡萄糖；T.=注射葡萄糖后的時間。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明人已經(jīng)分離了新的蛋白，它們?nèi)及辽僖粋€信號肽域，表示它們是分泌蛋白或趨化因子樣蛋白。多肽序列分析顯示新的分離蛋白具有類似于趨化因子的結(jié)構(gòu)特性，表示它們是配體類蛋白或趨化因子類蛋白。這些被命名為PRT5、PRT6、PRT7和PRT8的新的分離蛋白是本發(fā)明的目的。本文涉及的所有多肽具有由免費(fèi)的domain軟件(來自CBS的SignalP，生物序列分析中心，丹麥科技大學(xué))和內(nèi)部開發(fā)的軟件檢測的突出的信號肽序列(數(shù)據(jù)未顯示)。不同蛋白的表達(dá)模式在下文的實(shí)施例中描述。簡要地，PRT5顯著發(fā)現(xiàn)于胰腺和睪丸中，同樣也發(fā)現(xiàn)于脾、卵巢和小腸中(實(shí)施例I)。PRT6顯著發(fā)現(xiàn)于睪丸中(實(shí)施例4)。 PRT7顯著發(fā)現(xiàn)于胎兒腦中，同樣發(fā)現(xiàn)于肝臟、骨骼肌和成人腦中(實(shí)施例6)。最后，PRT8顯著發(fā)現(xiàn)于胰腺和睪丸中，也發(fā)現(xiàn)于肝臟中(實(shí)施例8)。序列比較顯示新鑒定的蛋白和到此為止記述的任何其它蛋白沒有同源性。因此，在第一個方面，本發(fā)明提供一種表現(xiàn)為趨化因子樣分泌蛋白的分離多肽及其任何片段、類似物和衍生物，所述多肽包含由SEQ ID NO. USEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 3和 SEQ ID NO. 4任意一項表不的氨基酸序列。本文中使用的術(shù)語“多肽”表示一種多肽或一種蛋白。所述多肽可以通過基因工程方法(在宿主細(xì)胞中表達(dá))或通過任何其它合適方式合成獲得。在本文中，術(shù)語“蛋白”通常用于表示處于穩(wěn)定構(gòu)象的完整的生物學(xué)分子以及它的變異體。多肽可以表示任何線性單鏈氨基酸，通常不考慮長度，但是通常意味著沒有規(guī)定的構(gòu)象。因此，本發(fā)明既涉及多肽，也涉及包含由SEQ ID NO. USEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 3 和SEQ ID NO. 4表示的氨基酸序列的蛋白，以及它們的片段、類似物和衍生物。除非另有說明，多肽通常由天然存在的L-氨基酸組成。關(guān)于多肽分子，術(shù)語“生物學(xué)特性”指多肽發(fā)揮至少一種體外或體內(nèi)作用的能力， 所述能力可以由全長PRT5、PRT6、PRT7或PRT8多肽發(fā)揮，包括但不限于說明書中記載的生物學(xué)活性。例如，生物學(xué)特性包括治療癌癥、免疫系統(tǒng)相關(guān)疾病、病毒病和炎性疾病的能力。術(shù)語“與未修飾的分子相比，沒有明顯影響修飾的分子的生物學(xué)特性”表示修飾的分子保持了與未修飾的分子的生物學(xué)活性性質(zhì)上相似的生物學(xué)活性。關(guān)于與本發(fā)明相關(guān)的修飾的多肽，應(yīng)當(dāng)理解為它保持了具有選自SEQ ID NO. I、 SEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 4的氨基酸序列的蛋白的至少一種生物學(xué)特性。 為了檢測一種多肽是否保持了與未修飾的分子的生物學(xué)活性性質(zhì)上相似的生物學(xué)活性，可以使用一種或多種檢測，如體外、體內(nèi)或臨床試驗(yàn)，其中修飾的多肽與對應(yīng)的未修飾的多肽 (即PRT5、PRT6、PRT7或PRT8多肽，或其片段)進(jìn)行比較，所述未修飾的多肽平行檢測或在分開操作的實(shí)驗(yàn)中檢測。修飾的多肽可以是包括至少8、12、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60或至少65個氨基酸殘基、與PRT5、PRT6、PRT7或PRT8多肽中包括的至少8、12、15、20、25、30、35、40、45、
50、55、60或至少65個氨基酸殘基的對應(yīng)序列具有一定程度的一致性的連續(xù)序列的多肽，所述一定程度的一致性是至少70%、優(yōu)選地至少80%、更優(yōu)選地至少90%以及特別地至少 95%。本發(fā)明同樣提供源自PRT5、PRT6、PRT7或PRT8的多肽，如其中一個或多個氨基酸被另一個氨基酸保守取代的修飾的多肽。如在本文中所使用的，“保守取代”指一類中的某一氨基酸由同一類的另一氨基酸取代，其中一類是通過共同的物理化學(xué)氨基酸側(cè)鏈性質(zhì)和在天然發(fā)現(xiàn)的同源蛋白中的高取代頻率定義。已經(jīng)分類了 6種一般種類的氨基酸側(cè)鏈，包括類 I (Cys);類 II (Ser、Thr、P;ro、Ala、Gly);類 III (Asn、Asp、Gln、Glu);類 IV(His、Arg、 Lys);類 V(Ile、Leu、Val、Met);和類 VI (Phe、Tyr、Trp)。例如，Asp 取代為類 III 的另一種殘基，如Asn、Gln或Glu的取代是保守取代。在一個實(shí)施方式中,所述氨基酸序列中僅有一個取代。在另一個實(shí)施方式中，有兩個取代。在另一個實(shí)施方式中，有三個取代。取代的最大數(shù)量應(yīng)當(dāng)不超過在未取代的序列中保留至少70%、期望地至少80%、優(yōu)選地至少90%、 最優(yōu)選地至少95%的氨基酸的氨基酸數(shù)量。在一個具體的實(shí)施方式中，包括高達(dá)3個、有時高達(dá)6個被其它氨基酸取代的氨基酸殘基的取代是保守取代。在另一種實(shí)施方式中，一個或多個氨基酸可以是由D-氨基酸、優(yōu)選地對應(yīng)的D-氨基酸替換。在一種具體的實(shí)施方式中，所有的氨基酸都是D-氨基酸。因此，應(yīng)當(dāng)理解為本發(fā)明涉及包含與本文公開的序列同源的序列并具有基本相等或更高活性的蛋白或多肽。同源序列指缺失、添加或取代不超過總氨基酸數(shù)量的25%、優(yōu)選地不超過10%的序列。優(yōu)選的取代是期望不改變所述蛋白或多肽的二級結(jié)構(gòu)的變化，即保守變化。下表顯示了可以與原始氨基酸(左側(cè))替換的氨基酸(右側(cè))。原始?xì)埢镜娜〈?br> AlaGly; Ser
ArgLys
AsnGin; His
AspGlu
CysSer
GlnAsn
GluAsp
GlyAla; Pro
HisAsn; Gln
HeLeu; Val
LeuHe; Val
LysArg; Gin; Glu
MetLeu; Tyr; Ile
PheMet; Leu; Tyr
SerThr
ThrSer
TrpTyr
TyrTrp; Phe
ValHe; Leu同樣可以根據(jù)它們的基本特征，如電荷、側(cè)鏈大小等等對氨基酸進(jìn)行分組。下表顯示了相似氨基酸的組。優(yōu)選的取代是一個組中的氨基酸與相同組中的氨基酸替換，如下I、小的脂肪族,非極性Ala> Ser> Thr> Pro> Gly ；2、極性的負(fù)電荷殘基和它們的氨基化合物Asp、Asn、Glu、Gln ；3、極性的正電荷殘基HiS、Arg、LyS ；4、大的脂肪族非極性殘基Met、Leu、Ile、Val、Cys ；5、大的芳香族殘基Phe、Tyr、Trp。更多關(guān)于氨基酸取代和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的內(nèi)容可以在Schulz等，Principles of Protein Structure,Springer-Verlag, New York,NY,1979 和 Creighton, T. E. , Proteins Structure and Molecular Properties, ff. H. Freeman&Co. , San Francisco, CA 1983 中找到。如在下文詳細(xì)描述的，上文詳述的優(yōu)選的保守氨基酸取代期望基本上保留或增加本發(fā)明蛋白的功能或活性。當(dāng)然，任何氨基酸取代、添加或缺失被認(rèn)為是在本發(fā)明的范圍內(nèi)，其中得到的蛋白或多肽保持了原始功能。例如，保守取代是本發(fā)明的多肽仍然可以被識別野生型多肽的抗體所識別的取代。
本發(fā)明的蛋白或多肽可以通過常規(guī)化學(xué)方法，如固相合成(使用如FMOC和BOC技術(shù))和溶液相合成而產(chǎn)生。如在下文提到的Current Protocols in Molecular Biology第 16章中詳細(xì)描述的，這些蛋白或多肽同樣可以在細(xì)菌或昆蟲細(xì)胞或其它體內(nèi)真核轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)中產(chǎn)生。產(chǎn)生之后，從產(chǎn)生它們的細(xì)胞純化所述蛋白或多肽。多肽的純化和分離方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的并在如 Ausubel 等(eds. ) Current Protocols in Molecular Biology, 第 16 章，John Wiley和 Sons,2006和 Coligan等(eds.) · Current Protocols in Protein Science，第5和第6章，John Wiley和Sons，2006中詳細(xì)描述。有利地，所述蛋白或多肽可以作為與第二種蛋白(如谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(GST))等、或序列標(biāo)簽(如組氨酸標(biāo)簽(His 標(biāo)簽)序列)的融合物產(chǎn)生。如在上文提及的Current Protocols in Molecular Biology 第16章和在His標(biāo)簽蛋白表達(dá)和純化試劑盒(購自如Qiagen GmbH,德國)的說明書中所詳細(xì)描述的，融合物或標(biāo)簽蛋白的應(yīng)用簡化了純化程序。本發(fā)明的蛋白或多肽同樣可以在無細(xì)胞系統(tǒng)中使用如細(xì)胞提取物或核糖體合成?？梢赃M(jìn)一步修飾本發(fā)明的多肽或蛋白以提高它們的功能、親和力或穩(wěn)定性。例如，可以使用環(huán)化作用以賦予多肽更高的穩(wěn)定性和/或全面提高的性能。已經(jīng)開發(fā)了許多不同的環(huán)化方法，包括側(cè)鏈環(huán)化和骨架環(huán)化。這些方法在現(xiàn)有技術(shù)中充分記載[如， Yu 等，Bioorg. Med. Chem. 7，161-75，1999，Patel 等，J. Pept. Res. 53，68-74，1999，Valero 等，J. Pept. Res. 53, 56-67,1999, Romanovskis 等，J. Pept. Res. 52, 356-74,1998, Crozet 等.Mol. Divers. 3, 261-76,1998, Rivier 等，J. Med. Chem. 41, 5012-9,1998，Panzone 等， J. Antibiot. (Tokyo)，51，872-9，1998，Giblin 等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95，12814-8， 1998，Limal 等，J. Pept. Res. 52 :121-9,1998，和 US 5，444，150]。一種具體的環(huán)化方法涉及通過使用苯環(huán)的對位取代的氨基酸衍生物的兩性分子的α -螺旋的穩(wěn)定作用[Yu等(1999) id ibid]。另一種具體環(huán)化方法是骨架環(huán)化，如在 Reissmann等，Biomed. Pept. Proteins Nucleic Acids I :51-6,1994-95和其參考文獻(xiàn)中所公開的。同樣可以使用另一種涉及骨架與側(cè)鏈連接的環(huán)化方法[Reissmann等(1994-95) id ibid]。但是，根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的蛋白或多肽可以在其N末端和/或C末端用多種相同或不同的有機(jī)基團(tuán)擴(kuò)展，所述有機(jī)基團(tuán)不是天然存在的或合成的氨基酸。作為這樣擴(kuò)展的一個例子，所述蛋白或多肽可以用N-乙酰基在N末端和/或C末端擴(kuò)展。為了改進(jìn)多肽的結(jié)構(gòu)，本發(fā)明的蛋白或多肽可以通過它們的N末端與十二烷基半胱氨酸(LC)殘基連接和/或通過它們的C末端與半胱氨酸(C)殘基連接，或與適于將多肽與用于免疫的佐劑連接的其它殘基連接。在另一方面，本發(fā)明提供一種分離核酸分子，所述分離核酸分子包含編碼由SEQ ID NO. I、SEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 3或SEQ ID NO. 4任意一項表示的多肽和其任何片段、 衍生物和類似物的序列或其全長互補(bǔ)序列。此外，本發(fā)明提供一種分離核酸分子，所述分離核酸分子僅由于遺傳密碼簡并性而在密碼子序列上與包含編碼由SEQ ID NO. USEQ ID NO. 2,SEQ ID NO. 3或SEQ ID NO. 4 任意一項表示的多肽的序列的核酸分子不同。如在本文中所使用的，術(shù)語“核酸分子”意思是包括DNA分子(如cDNA)和RNA分子(如mRNA)和使用核苷酸類似物產(chǎn)生的DNA或RNA類似物。所述核酸分子可以是單鏈或雙鏈，但優(yōu)選地，它是雙鏈DNA。術(shù)語“分離核酸分子”意思是包括分離自其它核酸分子的核酸分子，并且當(dāng)通過重組技術(shù)產(chǎn)生時，基本沒有其它細(xì)胞物質(zhì)或培養(yǎng)基，或當(dāng)化學(xué)合成時，基本沒有化學(xué)前體或其它化學(xué)品。本發(fā)明范圍內(nèi)的衍生物同樣包括多核苷酸衍生物。多核苷酸衍生物或核酸衍生物不同于在核苷酸序列中記載的或已知的序列。例如，一種多核苷酸衍生物的特征可以是一個或多個核苷酸的取代、插入或缺失。本發(fā)明的一個方面涉及足以用作雜交探針以鑒定編碼PRT5、PRT6、PRT7或PRT8蛋白的核酸分子(如，編碼PRT5、PRT6、PRT7或PRT8的mRNA)的核酸片段以及用于擴(kuò)增或突變PRT5、PRT6、PRT7或PRT8的編碼核酸分子的用作PCR引物的片段。在另一種實(shí)施方式中，所述包含編碼由SEQ ID NO. I表示的多肽的序列的分離核酸分子包含由SEQ ID NO. 5表示的序列。在另一種實(shí)施方式中，所述包含編碼由SEQ ID NO. 2表示的多肽的序列的分離核酸分子包含由SEQ ID NO. 6表不的序列。在另一種實(shí)施方式中，所述包含編碼由SEQ ID NO. 3表示的多肽的序列的分離核酸分子包含由SEQ ID NO. 7表示的序列。在另一種實(shí)施方式中，所述包含編碼由SEQ ID NO. 4表示的多肽的序列的分離核酸分子包含由SEQ ID NO. 8表示的序列。可以使用標(biāo)準(zhǔn)的分子生物學(xué)技術(shù)和本文提供的序列信息產(chǎn)生本發(fā)明的核酸分子， 如具有SEQ ID NO. 5,SEQ ID NO. 6、SEQ ID NO. 7或SEQ ID NO. 8中任何一項的核苷酸序列的核酸分子，或其一部分。在一種具體實(shí)施方式
中，一種本發(fā)明的分離核酸分子包含SEQ ID NO. 5、SEQ ID NO. 6、SEQ ID NO. 7或SEQ ID NO. 8任何一項所示的核苷酸序列。在另一種具體實(shí)施方式
中，一種本發(fā)明的分離核酸分子包含核苷酸序列，所述核苷酸序列與SEQ ID NO. 5、SEQ ID NO. 6、SEQ ID NO. 7和SEQ ID NO. 8任何一項所示的全長核苷酸序列有至少大約80 %、85 %、90 %、95 %、98 %或更多的同源性。此外，本發(fā)明的核酸分子可以包含SEQ ID NO. 5、SEQ ID NO. 6、SEQ ID NO. 7和SEQ ID NO. 8任何一項的核酸序列的僅一部分，例如，可以用作引物(如由SEQ ID NO. 9、SEQ ID NO. 10、SEQ ID NO. 11、SEQ ID NO. 12、SEQ ID NO. 13、SEQ ID NO. 14、SEQ ID NO. 15 或 SEQ ID NO. 16中任何一項所表示的序列)的片段，或編碼PRT5、PRT6、PRT7或PRT8蛋白中任何一種的一部分(如PRT5、PRT6、PRT7或PRT8蛋白中任何一種的生物學(xué)活性部分)的片段。 在一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，核酸分子包含含有SEQ ID NO. 5、SEQ ID NO. 6、SEQ ID NO. 7或 SEQ ID NO. 8中任何一項的核酸的至少100個連續(xù)的核苷酸。基于PRT5、PRT6、PRT7或PRT8核苷酸序列中任意一種的探針可以用于檢測編碼相同或同源蛋白的轉(zhuǎn)錄本。這樣的探針可以用作診斷檢測試劑盒的一部分，所述診斷檢測試劑盒用于鑒定表達(dá)本發(fā)明的PRT5、PRT6、PRT7或PRT8蛋白中任意一種的細(xì)胞或組織，例如通過測量個體細(xì)胞樣品中PRT5、PRT6、PRT7或PRT8的編碼核酸的水平，如檢測PRT5、PRT6、 PRT7 或 PRT8 的 mRNA 水平。可以通過分離SEQ ID NO. 5,SEQ ID NO. 6,SEQ ID NO. 7 和 SEQ ID NO. 8 中任意一項的核苷酸序列的一部分分別制備編碼PRT5、PRT6、PRT7或PRT8蛋白中任意一種的“生物學(xué)活性部分”的核酸片段，所述核酸片段編碼具有PRT5、PRT6、PRT7或PRT8蛋白的生物學(xué)活性、表達(dá)所述蛋白的編碼部分(如通過體外重組表達(dá))和評估所述蛋白的編碼部分的活性的多肽。在一種具體實(shí)施方式
中，本發(fā)明的多核苷酸編碼包含SEQ ID NO. USEQ ID NO. 2、 SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 4中任意一項的氨基酸序列的至少30個連續(xù)氨基酸殘基的片段。本發(fā)明進(jìn)一步包括核酸分子，基于遺傳密碼簡并性，所述核酸分子與SEQ ID NO. 5,SEQ ID NO. 6,SEQ ID NO. 7和SEQ ID NO. 8中任意一項所示的核苷酸序列不同，但編碼分別與SEQ ID NO. 5,SEQ ID NO. 6、SEQ ID NO. 7和SEQ ID NO. 8中任意一項所示的核苷酸序列編碼的那些蛋白相同的PRT5、PRT6、PRT7或PRT8蛋白。在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明的分離核酸分子具有編碼具有SEQ ID NO. I、SEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 4中任意一項所示的氨基酸序列的蛋白的核苷酸序列或其片段。在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明的分離核酸分子具有編碼與SEQ ID NO. K SEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 3 和 SEQ ID NO. 4 中任意一項有至少大約 80%、85%、90%、95%、98%或更多一致性的蛋白的核苷酸序列或其片段。除了分別在 SEQ ID NO. 5、SEQ ID NO. 6、SEQ ID NO. 7 和 SEQ ID NO. 8 中所示的 PRT5、PRT6、PRT7或PRT8核苷酸序列之外，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)意識到，導(dǎo)致PRT5、PRT6、 PRT7或PRT8蛋白的多肽組成的氨基酸序列變化的DNA序列多態(tài)性可以在種群中存在?；谔烊坏牡任换蜃儺?，PRT5、PRT6、PRT7或PRT8基因的多肽中的這樣的遺傳多態(tài)性可以在種群中存在。功能性等位基因變異將典型地包含SEQ ID NO. I、SEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 3和 SEQ ID NO. 4中任意一項的一個或多個氨基酸的保守取代，或在所述蛋白的非關(guān)鍵區(qū)中非關(guān)鍵殘基的取代、缺失或插入。非功能性等位基因變異將典型地包含非保守取代、缺失或插入、或SEQ ID NO. I、 SEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 4中任意一項的氨基酸序列的未成熟截短 (premature truncation),或在所述蛋白的關(guān)鍵殘基或關(guān)鍵區(qū)的取代、插入或缺失?？梢酝ㄟ^分別向SEQ ID NO. 5、SEQ ID NO. 6、SEQ ID NO. 7 和 SEQ ID NO. 8 的核苷酸序列引入一個或多個核苷酸取代、添加或缺失，從而向編碼的蛋白中引入一個或多個氨基酸取代、添加或缺失而產(chǎn)生編碼與SEQ ID NO. USEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 4中任意一種蛋白分別同源的PRT5、PRT6、PRT7或PRT8蛋白的分離核酸分子?？梢酝ㄟ^標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，如定點(diǎn)突變和PCR介導(dǎo)的突變引入突變。優(yōu)選地，在一個或多個預(yù)測的非必需氨基酸殘基處進(jìn)行保守氨基酸取代。因此，在PRT5、PRT6、PRT7或PRT8蛋白的任意一種中的預(yù)測的非必需氨基酸殘基優(yōu)先地由來自同一側(cè)鏈家族的另一種氨基酸殘基替換?？蛇x地，在另一種實(shí)施方式中，隨機(jī)地沿著PRT5、PRT6、PRT7或PRT8任意一種的全長或部分DNA編碼序列引入突變，例如通過飽和誘變，且可以篩選得到的突變體的PRT5、PRT6、PRT7或PRT8蛋白的生物學(xué)活性以鑒定保持 PRT5、PRT6、PRT7 或 PRT8 活性的突變體。在 SEQ ID NO. 5,SEQ ID NO. 6,SEQ ID NO. 7 和SEQ ID NO. 8中任意一項發(fā)生突變之后，可以重組表達(dá)所述編碼蛋白并檢測所述蛋白的活性。
為檢測兩條氨基酸序列或兩條核酸序列之間的百分比一致性，出于最佳比較目的 (如，可以在兩條氨基酸序列或之一或在兩條核酸序列或之一中弓I入缺口用于最佳比對，且出于比較目的可以忽視非同源序列)將序列進(jìn)行比對。在一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，出于比較目的的比對的參考序列的長度是所述參考序列長度的至少30%、優(yōu)選地至少40%、更優(yōu)選地至少50 %、更優(yōu)選地至少60 %、以及更優(yōu)選地至少70 %、80 %、90 %或95 %。然后比較相應(yīng)氨基酸位置的氨基酸殘基或相應(yīng)核苷酸位置的核苷酸。當(dāng)?shù)谝粭l序列的某一位置的氨基酸殘基或核苷酸與第二條序列的相應(yīng)位置的氨基酸殘基或核苷酸相同時，這兩個分子在這個位置處是一致的(如在本文中所使用的，氨基酸或核酸“一致性”與氨基酸或核酸“同源性”是相等的)?？紤]到缺口(其需要被引入以用于兩條序列的最佳比對)的數(shù)量以及每一個缺口的長度，兩條序列之間的百分比一致性是由兩條序列共享的一致位置的數(shù)量函數(shù)?？梢允褂脭?shù)學(xué)運(yùn)算法則完成兩條序列之間的序列比較和百分比一致性的測定。在一種實(shí)施方式中，使用 Needleman 和 Wunsch (J. Mol. Biol. (48) :444-453 (1970))運(yùn)算法則測定兩條氨基酸序列之間的百分比一致性，所述運(yùn)算法則已經(jīng)合并至GCG軟件包的GAP程序(通過Accelrys Inc.站點(diǎn)(原來的Genetics Computer Group)在線使用，圣地亞哥， 加利福尼亞)中，使用Blossom62矩陣或PAM250矩陣，且缺口加權(quán)是16、14、12、10、8、6或 4，長度加權(quán)是1、2、3、4、5或6。在另一種實(shí)施方式中，使用GCG軟件包的GAP程序(通過 Accelrys Inc.站點(diǎn)(原來的Genetics Computer Group)在線使用，圣地亞哥,加利福尼亞)測定兩條核苷酸序列之間的百分比一致性，使用NWSgapdna. CMP矩陣，且缺口加權(quán)是
40、50、60、70或80，長度加權(quán)是1、2、3、4、5或6。在另一種實(shí)施方式中，使用E. Meyers和 ff. Miller的運(yùn)算法則(Comput. Appl. Biosci. ,4 :11-17(1988))測定兩條氨基酸序列或核苷酸序列之間的百分比一致性，所述法則已經(jīng)合并至ALIGN程序(2. O版本)中，使用加權(quán)剩余表，缺口長度罰值是12，缺口罰值是4。核酸和蛋白序列可以進(jìn)一步用作“詢問序列”以針對公開數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，從而例如鑒定家族其它成員或相關(guān)序列?？梢允褂肗BLAST和XBLAST程序(2. O版本)(Altschul 等(1990) J. Mol. Biol. 215 :403-10)進(jìn)行這樣的檢索?？梢允褂肗BLAST程序進(jìn)行BLAST 核苷酸檢索，其中分值(score) = 100,詞長(wordlength) = 12,以獲得同源核苷酸序列。 可以使用XBLAST程序進(jìn)行BLAST蛋白檢索，其中分值=50，詞長=3，以獲得同源氨基酸序列。為獲得出于比較目的的缺口比對，可以使用如在Altschul等(1997)Nucleic Acids Res. 25(17) :3389-3402 中描述的 Gapped BLAST。當(dāng)使用 BLAST 和 Gapped BLAST 程序時， 可以使用各自程序默認(rèn)(如XBLAST和NBLAST)參數(shù)。(見，如美國國家生物技術(shù)信息中心的在線數(shù)據(jù)庫)。此外，可以使用“Clustal” 方法(Higgins 和 Sharp，Gene, 73 :237-44,1988)和 “Megalign”程序(Clewley 和 Arnold,Methods Mol. Biol, 70 :119-29,1997)比對序列并測定相似性、一致性或同源性。在另一方面，本發(fā)明提供一種載體，所述載體包含編碼如由SEQ ID NO. I、SEQ ID NO. 2,SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 4任意一項表示的多肽的分離核酸分子和其任何片段、衍生物或類似物。因此，所述載體包含分別由SEQ ID NO. 5,SEQ ID NO. 6、SEQ ID NO. 7和SEQ ID NO. 8表示的分離核酸序列，或僅由于遺傳密碼簡并性而與其不同的任何變異體。
在所述載體的一種實(shí)施方式中，所述核酸分子與啟動子可操作地連接。在另一種實(shí)施方式中，所述載體是一種表達(dá)載體。如本文中所使用的，術(shù)語“載體”意思是包括一種核酸分子，所述核酸分子能夠?qū)⒘硪环N核酸轉(zhuǎn)運(yùn)至該核酸分子已經(jīng)連接的位置。載體可以由一個或少量多個限制性核酸內(nèi)切酶位點(diǎn)表征，在位點(diǎn)處的這些DNA序列可以以預(yù)定的方式切開而不喪失所述載體的主要生物學(xué)功能，且在此處可以連接入DNA片段使其得以復(fù)制和克隆。載體可以進(jìn)一步包含適于用于鑒定轉(zhuǎn)化有所述載體的細(xì)胞的標(biāo)記物。一種類型的載體是“質(zhì)?！?，它是指額外的DNA 片段可以連接至其中的圓形雙鏈DNA環(huán)。另一種類型的載體是病毒載體，其中額外的DNA片段可以連接至病毒基因組中。一些載體能夠在它們被引入的宿主細(xì)胞中自主復(fù)制(如，具有細(xì)菌復(fù)制起點(diǎn)的細(xì)菌載體和游離型哺乳動物載體)。其它載體(如，非游離型哺乳動物載體)通過引入至宿主細(xì)胞而結(jié)合至宿主細(xì)胞的基因組，并因此隨著宿主基因組而復(fù)制。此外，一些載體能夠引導(dǎo)與它們有效連接的基因的表達(dá)。在本文中指定這樣的載體為“表達(dá)載體”。通常，在重組DNA技術(shù)中使用的表達(dá)載體通常是以質(zhì)粒的形式。在本申請說明書中， 由于質(zhì)粒是最通常使用的載體形式，“質(zhì)?！焙汀拜d體”可以交互替換使用。但是，本發(fā)明計劃包括提供相等功能的其它形式的表達(dá)載體，如病毒載體(如復(fù)制缺陷型逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒和腺相關(guān)病毒)。術(shù)語“有效連接”或“可操作地連接”意思是指分子之間彼此功能性連結(jié)，因?yàn)橐环N分子的活性或狀態(tài)可以影響另一種分子的活性或狀態(tài)的變化。當(dāng)調(diào)節(jié)序列與編碼目標(biāo)多肽或蛋白的DNA序列功能性相關(guān)聯(lián)時，核苷酸序列是“可操作地連接”。例如，如果啟動子核苷酸序列控制編碼目標(biāo)蛋白的DNA序列轉(zhuǎn)錄，所述啟動子核苷酸序列與所述編碼目標(biāo)蛋白或多肽的DNA序列可操作地連接。典型地，兩條有效連接的多肽通過肽鍵共價連接。在另一方面，本發(fā)明提供一種包含上述載體的細(xì)胞，所述載體包含編碼如由SEQ ID NO. K SEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 4任意一項表示的多肽分離核酸分子和其任何片段、衍生物或類似物，所述載體包含分別由SEQ ID NO. 5、SEQ ID NO. 6、SEQ ID NO. 7和SEQ ID NO. 8表示的分離核酸序列，或僅由于遺傳密碼簡并性而與其不同的任何變異體。在一個實(shí)施方式中，所述細(xì)胞是選自植物細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞、真菌細(xì)胞、細(xì)菌細(xì)胞或哺乳動物細(xì)胞的宿主細(xì)胞。在本文中，術(shù)語“宿主細(xì)胞”和“重組宿主細(xì)胞”可以交互替換使用?！八拗骷?xì)胞” 包括能夠通過引入外源DNA而修飾的任何可培養(yǎng)的細(xì)胞。優(yōu)選地，宿主細(xì)胞是，在其中，轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白可以穩(wěn)定表達(dá)、轉(zhuǎn)錄后修飾、定位至合適的亞細(xì)胞室并參與合適的轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)的細(xì)胞。檢測信號的選擇同樣可以影響合適的宿主細(xì)胞的選擇。例如，如上所述，報告子構(gòu)建體能夠基于應(yīng)答轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白的基因轉(zhuǎn)錄的激活或抑制而提供可選擇的或可篩選的特性； 為了達(dá)到最佳的選擇或篩選，將考慮宿主細(xì)胞的表現(xiàn)型。應(yīng)該理解，這樣的術(shù)語并不僅僅指具體的個體細(xì)胞，也包括這樣細(xì)胞的后代或可能的后代。因?yàn)橛捎谕蛔兓颦h(huán)境影響，在隨后的后代中可能發(fā)生一些變化，這樣的后代可能事實(shí)上與親本細(xì)胞并不相同，但是它們?nèi)匀话ㄔ诒疚氖褂玫男g(shù)語的范圍內(nèi)。本發(fā)明的宿主細(xì)胞包括原核細(xì)胞和真核細(xì)胞。原核生物包括革蘭氏陰性或革蘭氏陽性生物，例如，大腸桿菌(E.coli)或桿菌(Bacilli)。適于用于轉(zhuǎn)化的原核宿主細(xì)胞包括，例如大腸桿菌、枯草桿菌(Bacillus subtilis)、鼠傷寒沙門桿菌(Salmonella typhimurium)和假單胞菌屬(Pseudomonas)、鏈霉菌屬(Streptomyces)和葡萄球菌屬 (Staphylococcus)內(nèi)的多個其它種。真核細(xì)胞包括但不限于，酵母細(xì)胞、植物細(xì)胞、真菌細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞(如桿狀病毒)、哺乳動物細(xì)胞和寄生物(如錐體蟲)的細(xì)胞。如在本文中所使用的，術(shù)語“酵母”不僅包括嚴(yán)格分類意義上的酵母，即單細(xì)胞生物，也包括酵母樣多細(xì)胞真菌或絲狀真菌。示例性的種包括乳酸克魯維酵母(Kluyverei lactis)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)和 Ustilaqo maydis,其中釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)是優(yōu)選的。在本發(fā)明實(shí)踐中可以使用的其它酵母是粗糖脈胞菌(Neurospora crassa)、黑曲霉(Aspergillus niger)、構(gòu)巢曲霉(Aspergillus nidulans)、畢赤酵母(Pichia pastoris)、熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)和多形漢遜酵母(Hansenula po Iymorpha)。哺乳動物宿主細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)包括已建立的細(xì)胞系，如HeLa細(xì)胞、COS細(xì)胞、L細(xì)胞、 3T3細(xì)胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞等。在另一方面，本發(fā)明提供一種包含如上所定義的一種選自PRT5、PRT6、PRT7和 PRT8的分離多肽或蛋白或其任何片段、類似物或衍生物的組合物，其中所述蛋白或多肽分別包含選自 SEQ ID NO. I、SEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 3 或 SEQ ID NO. 4 的序列。本發(fā)明人在下面的實(shí)施例2和實(shí)施例8 (分別是圖1A-1D和5A-5B)中已經(jīng)令人驚訝地顯示出多肽PRT5和PRT8對葡萄糖水平和葡萄糖轉(zhuǎn)變有顯著作用。在饑餓、注射葡萄糖之后測量中，PRT5和PRT8均誘導(dǎo)了葡萄糖水平的降低。在注射PRT5后2、3和4天以及在注射PRT8后2和3天，這些結(jié)果最顯著。這些結(jié)果表示PRT5和PRT8是葡萄糖的調(diào)節(jié)物，并且可能是糖尿病治療或葡萄糖代謝相關(guān)疾病治療中的重要治療劑。在實(shí)施例3中顯示的結(jié)果(圖2A-2B)進(jìn)一步支持了 PRT5作為葡萄糖代謝的調(diào)節(jié)物和作為糖尿病狀況中的影響因素的作用。糖尿病病患中降低的PRT5水平強(qiáng)烈地指向了 PRT5在糖尿病中的重要作用。因此可以推斷，PRT5以及PRT8可以用作調(diào)節(jié)葡萄糖代謝、葡萄糖轉(zhuǎn)變甚至誘導(dǎo)胰島素表達(dá)的治療劑。本發(fā)明人進(jìn)一步令人驚訝地發(fā)現(xiàn)PRT5能夠增加用PRT5處理的小鼠的骨骼肌中胰島素受體的水平(數(shù)據(jù)未顯示)。胰島素與它的受體結(jié)合并依次啟動很多蛋白激活級聯(lián)。所述胰島素受體(CD220) 是一種跨膜受體，由胰島素激活并屬于酪氨酸激酶受體大類。它由兩個α亞單位和兩個β 亞單位組成，構(gòu)成所述胰島素受體。所述β亞單位穿過細(xì)胞膜并通過二硫鍵連接。所述α 亞單位和β亞單位由單一基因(INSR)編碼?；谝葝u素和它的受體結(jié)合，啟動了復(fù)雜的級聯(lián)事件，包括Glut_4轉(zhuǎn)運(yùn)子轉(zhuǎn)移至質(zhì)膜及葡萄糖的流入、糖原合成、糖酵解和脂肪酸合成。這些過程主要發(fā)生在胰島素反應(yīng)性組織(包括肌肉細(xì)胞和脂肪組織)的外部膜上，并導(dǎo)致葡萄糖從血液到這些組織的吸收的增加。因此，可以推斷的是，通過誘導(dǎo)胰島素受體的表達(dá)，PRT5也誘導(dǎo)所述級聯(lián)事件。因此，PRT5直接或間接地誘導(dǎo)了 Glut-4轉(zhuǎn)運(yùn)子轉(zhuǎn)移至脂膜及葡萄糖流入、糖原合成、糖酵解和脂肪酸合成。
糖原合成同樣由胰島素受體通過IRS-I刺激。在這種情況下，PI-3激酶(PI-3K) 的SH2域與IRS-I的P-Tyr結(jié)合。在激活時，PI-3K可以將膜脂質(zhì)磷脂酰肌醇4，5- 二磷酸 (PIP2)轉(zhuǎn)變?yōu)榱字＜〈?，4，5-三磷酸(PIP3)。這通過磷酸化作用間接激活了蛋白激酶 PKB (Akt)。PKB然后磷酸化幾種靶蛋白，包括糖原合酶激酶3 (GSK-3)。GSK-3磷酸化糖原合酶(并因此使糖原合酶失活)。當(dāng)GSK-3被磷酸化時，它是失活的，并被阻止失活糖原合酶。以這樣迂回的方式，胰島素增加了糖原合成。因此，在一種具體方面，本發(fā)明提供一種包含分離多肽PRT5或PRT8中任何一種、 特別是PRT5的組合物，或包含含有所述分離多肽的蛋白或編碼所述多肽的核酸的組合物， 用于誘導(dǎo)胰島素受體的表達(dá)、誘導(dǎo)Glut-4轉(zhuǎn)運(yùn)子轉(zhuǎn)移至質(zhì)膜及葡萄糖的流入、誘導(dǎo)糖原合成和/或誘導(dǎo)糖酵解和脂肪酸合成。在另一具體方面，本發(fā)明提供一種包含分離多肽PRT5或PRT8中任何一種或含有所述分離多肽的蛋白或編碼所述分離多肽的核酸的組合物，用于治療葡萄糖代謝相關(guān)疾病。胰島素抵抗是一種常見且廣泛流行的代謝疾病，它與糖尿病、代謝綜合征和肥胖的病理生理學(xué)密切相關(guān)。它也是多種內(nèi)分泌疾病，包括多囊卵巢綜合征(PCOS)、甲狀腺和腎上腺疾病以及它們的并發(fā)癥的表現(xiàn)形式。本發(fā)明人的意想不到的結(jié)果表示PRT5可以用作征服這些疾病的旁路機(jī)制。因此， PRT5可以用作治療與胰島素抵抗相關(guān)的任何病理狀況，如糖尿病、代謝綜合征、肥胖和內(nèi)分泌疾病以及肌肉疾病的治療劑。肌肉系統(tǒng)的一些最常見的疾病和紊亂包括肌病、慢性疲勞綜合征、纖維肌痛、肌肉萎縮癥和間隔綜合征。涉及缺陷型骨骼肌葡萄糖和/或糖原代謝的具體疾病是肌磷酸化酶和磷酸果糖激酶缺乏，更簡單的描述是在鍛煉之后疼痛的肌肉抽筋。在另一具體方面，本發(fā)明提供一種包含分離多肽PRT5或PRT8中任何一種或含有所述分離多肽的蛋白或編碼所述分離多肽的核酸的組合物，用于治療選自糖尿病、代謝綜合征、肥胖、內(nèi)分泌疾病以及肌肉疾病的疾病。在另一具體方面，本發(fā)明提供一種包含分離多肽PRT5或PRT8中任何一種或含有所述分離多肽的蛋白或編碼所述分離多肽的核酸的組合物，用于增加葡萄糖代謝。此外，在下面的實(shí)施例5 (以及圖3A-3B)中，本發(fā)明人令人驚奇地顯示了多肽PRT6 具有顯著的增加睪酮水平的作用。這些結(jié)果強(qiáng)烈地顯示了 PRT6是一種用于誘導(dǎo)和/或增加睪酮產(chǎn)生的有效試劑，并因此可以用于治療睪酮缺乏相關(guān)的疾病，或甚至在健康狀況下用于誘導(dǎo)睪酮產(chǎn)生。睪酮是在5億個睪丸間質(zhì)細(xì)胞中通過酶順序步驟從膽固醇合成，所述睪丸間質(zhì)細(xì)胞位于生精小管之間的睪丸的組織間隙室中，它構(gòu)成了大約5%的成熟睪丸體積。此外，已經(jīng)描述了在特定組織中從循環(huán)的功能差的腎上腺雄激素前體DHEA性腺外生物合成睪酮和二氫睪酮，盡管腎上腺雄激素對循環(huán)的睪酮的純粹貢獻(xiàn)很小。睪丸的睪酮分泌主要由促黃體激素(LH)通過它對睪丸間質(zhì)細(xì)胞線粒體中的膽固醇轉(zhuǎn)化成孕烯醇酮的速率限制的調(diào)節(jié)而控制，所述膽固醇轉(zhuǎn)化成孕烯醇酮通過定位在線粒體膜內(nèi)部的細(xì)胞色素P-450膽固醇側(cè)鏈分裂酶復(fù)合物完成。臨床上，睪酮以生理劑量使用以用于雄激素替代治療，以及代表性地更高劑量的睪酮或基于它的結(jié)構(gòu)的合成雄激素同樣用于藥理性雄激素治療。雄激素替代治療的主要目標(biāo)是恢復(fù)生理性模式的雄激素暴露于所有的身體組織。這種治療的目標(biāo)是復(fù)制生理學(xué)循環(huán)的睪酮水平和全部范圍(包括前受體雄激素活化作用)的天然雄激素對組織的作用。藥理性雄激素治療開發(fā)了睪酮或合成雄激素作為激素藥物對肌肉、骨骼和其它組織的合成代謝或其它作用，如同其它治療劑一樣判斷了它們的功效、安全性和相關(guān)的成本效率。可以將睪酮的生理作用分類成前青春期(pre-peripubertal)作用、青春期作用和成年作用。所述前青春期作用是最先觀察到的作用，表現(xiàn)出在孩童期的末期出現(xiàn)上升的雄激素水平，這在男孩和女孩中均發(fā)生，并通常辨別為成年類型的體臭；皮膚和頭發(fā)油質(zhì)增加；痤瘡；出現(xiàn)陰毛；腋毛；突發(fā)生長，加速的骨骼成熟；以及上嘴唇和鬢腳的毛發(fā)。當(dāng)雄激素已經(jīng)比正常成年女性水平高數(shù)月或數(shù)年時開始發(fā)生青春期作用。在男性中，這通常是晚期的青春期作用，而在女性中，在血液中提高水平的游離睪酮的延長周期之后發(fā)生。這些作用可以被觀察為-皮脂腺放大，這可能引起痤瘡；-陰莖增大或陰蒂增大；_性欲和勃起或陰蒂充血頻率增加；-陰毛擴(kuò)展至大腿和向上至臍；-面部毛發(fā)(鬢腳、胡須、小胡子)；-頭發(fā)的減少(雄激素性脫發(fā))；-胸毛、乳暈(periareolar)毛、肛周毛；-腿毛；-腦毛；-臉上的皮下脂肪減少；-肌肉強(qiáng)度和質(zhì)量增加；-聲音加深；-喉結(jié)發(fā)育；-睪丸中精子發(fā)生組織的發(fā)育，雄性生殖；-顎、額、下巴、鼻子的發(fā)育以及面部骨輪廓的改變；-肩變得更寬，胸腔擴(kuò)張；-骨成熟完成及生長終止。這間接地通過雌二醇代謝發(fā)生并因此在男性中比在女性中更逐漸發(fā)生。成年睪酮作用在男性中比在女性中更明顯可論證，但是可能對男性和女性都很重要。由于睪酮水平在成人生命的后幾十年會降低，這些作用中的一些可能下降。這些作用通常被認(rèn)為是-性欲和陰蒂充血/陰莖勃起頻率；-在重要挑戰(zhàn)中調(diào)節(jié)快速HPA(下丘腦-垂體-腎上腺軸)反應(yīng)；-精神和身體能量；-肌肉營養(yǎng)性的保持。在老年男性中維持正常的睪酮水平已經(jīng)顯示出改善許多因素，這些因素被認(rèn)為是減少心血管疾病、如增加的瘦體重、減少內(nèi)臟脂肪量、減少總膽固醇以及甘油調(diào)節(jié)風(fēng)險。在重要挑戰(zhàn)下，睪酮可能在戰(zhàn)-或-逃反應(yīng)的調(diào)節(jié)中起作用。此外，睪酮調(diào)節(jié)了巨核細(xì)胞和血小板上凝血噁烷A2受體的數(shù)量并因此調(diào)節(jié)在人中血小板的聚合。低睪酮水平的征兆，特別是在衰老的男性中，的列表包括-勃起功能障礙(勃起問題)；-性欲降低(低的性沖動)；-情緒騷亂，包括消沉、易怒和感覺疲勞；-肌肉尺寸和力量降低；-骨質(zhì)疏松癥(骨密度變稀);-體脂肪增加；-難以集中精神和記憶力下降；以及-睡眠困難。因此，在另一具體方面，本發(fā)明提供一種包含分離多肽PRT6或含有所述分離多肽的蛋白或編碼所述分離多肽的核酸的組合物，用于提高睪酮產(chǎn)生。在另一具體方面，一種包含分離多肽PRT6或含有所述分離多肽的蛋白或編碼所述分離多肽的核酸的組合物，用于治療睪酮缺乏或低睪酮相關(guān)的疾病。本發(fā)明人已經(jīng)進(jìn)一步令人驚奇地顯示在癌癥中PRT7增加。該現(xiàn)象的一種非限定性例子在本文的實(shí)施例7中顯示，其中在患有肺癌或胰腺癌的病患的樣品中發(fā)現(xiàn)高水平的 PRT7。此外，本發(fā)明人觀察到PRT7能夠誘導(dǎo)p53(數(shù)據(jù)未顯示)。所述癌癥抑制子蛋白p53已知是穩(wěn)定的并由不同的細(xì)胞脅迫如熱休克、組織缺氧、滲壓休克和DNA損害所激活，導(dǎo)致細(xì)胞生長的抑制和細(xì)胞凋亡(Ko和Prives， Genes Dev. 10 :1054-1072,1996 ；Levine, Cell 88 :323-331,1997 ；0ren, Cancer Biol. 5 221-227,1994)。同樣已知的是細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期停滯是p53的主要的腫瘤抑制作用 (Levine, Cell 88 :323_331，1997)。除癌癥外，細(xì)胞凋亡相關(guān)疾病的例子包括動脈硬化、阿耳茨海默氏病、肌萎縮性側(cè)索硬化、移植物抗宿主病、自體免疫淋巴球增多綜合征和病毒傳染。PRT7可以誘導(dǎo)p53的這個發(fā)現(xiàn)強(qiáng)烈表明PRT7可以用于癌癥治療。因此，在另一具體方面，本發(fā)明提供一種包含分離多肽PRT7或含有所述分離多肽的蛋白或編碼所述多肽的核酸的組合物，用于治療癌癥和/或誘導(dǎo)P53表達(dá)和/或誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供的任何組合物可以進(jìn)一步包含制藥學(xué)可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。所述組合物的制備是本領(lǐng)域公知的并且已經(jīng)在許多文獻(xiàn)和教科書中有描述，見如 Remington, s Pharmaceutical Sciences, Gennaro A. R. ed. , Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990，特別是其中的 1521-1712 頁。本發(fā)明的組合物可以進(jìn)一步包含至少一種制藥學(xué)可接受的佐劑、載體、稀釋劑或賦形劑。術(shù)語“制藥學(xué)可接受的載體”意思是惰性的、無毒材料的任一種，它們與所述活性組分不反應(yīng)。有時基于期望形式的制劑選擇所述載體。有時載體也可以具有促進(jìn)將活性組分遞送或滲透至目標(biāo)組織的效果，用于促進(jìn)藥物的穩(wěn)定性、減緩清除速率、給予慢釋放性質(zhì)、減少不期望的副反應(yīng)效果等。所述載體也可以是穩(wěn)定制劑的物質(zhì)(如，防腐劑)，用于為制劑提供可食用的滋味等。所述載體可以是通常使用的那些的任何一種，并僅由化學(xué)-物理因素，如溶解度和缺乏與本發(fā)明抗體的反應(yīng)性，以及給藥途徑限定。所述載體可以包括添加齊 、著色齊 、稀釋齊 、緩沖液、崩解劑、潤濕劑、防腐劑、增味劑和藥理學(xué)相容的載體。此外，所述載體可以是佐劑，佐劑定義為以可預(yù)測方式影響所述活性組分作用的物質(zhì)。載體的典型例子包括(a)液體溶液，其中有效量的活性物質(zhì)溶解在稀釋液，如水、鹽水、原汁、醇、 糖漿等中；(b)膠囊(如包含如表面活性劑、滑潤劑和惰性裝填物的普通硬殼或軟殼凝膠類型)、片劑、糖錠(其中活性物質(zhì)在調(diào)味料中，如蔗糖和阿拉伯樹膠或黃芪膠中，或者所述活性物質(zhì)在惰性基質(zhì)中，如凝膠和甘油中)和錠劑，每一種都包含預(yù)定量的活性試劑作為固體或顆粒；(C)粉末；(d)在合適液體中的懸浮液；(e)合適的乳狀液；(f)脂質(zhì)體制劑；以及其它。在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明的組合物同樣可選地進(jìn)一步包括其它活性試劑，例如但不限于抗生素、細(xì)胞因子、淋巴因子、生長因子、激素、抗氧化劑、維生素等。在另一方面，本發(fā)明提供選自如上所定義的PRT5、PRT6、PRT7或PRT8的多肽或蛋白的應(yīng)用，用于制備治療疾病或紊亂的藥物，所述疾病或紊亂選自具有免疫學(xué)因素或病因的疾病、傳染病、急性和慢性炎性疾病、癌癥、移植病和自體免疫性疾病、與生育相關(guān)的疾病和碳水化合物代謝紊亂。在另一具體方面，本發(fā)明提供分離多肽PRT5或PRT8中任何一種或包含所述分離多肽的蛋白或編碼所述多肽的核酸在制備治療葡萄糖代謝相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用。更具體地，本發(fā)明提供分離多肽PRT5或PRT8中任何一種或包含所述分離多肽的蛋白或編碼所述多肽的核酸在制備治療選自以下疾病的藥物中的應(yīng)用糖尿病、代謝綜合征、肥胖、內(nèi)分泌疾病和肌肉疾病。在另一具體方面，本發(fā)明提供分離多肽PRT6或包含所述分離多肽的蛋白或編碼所述多肽的核酸在制備用于治療睪酮缺乏或睪酮缺乏相關(guān)的疾病的藥物中的應(yīng)用。在另一具體方面，本發(fā)明提供分離多肽PRT7或包含所述分離多肽的蛋白或編碼所述多肽的核酸在制備用于治療癌癥的藥物中的應(yīng)用。在另一方面，本發(fā)明提供一種在需要的個體中治療疾病或紊亂的方法，所述方法包括對所述個體施用治療有效量的選自如上定義的PRT5、PRT6、PRT7和PRT8的多肽或蛋白或包含所述多肽或蛋白的組合物，所述疾病或紊亂選自具有免疫學(xué)因素或病因的疾病、傳染病、急性和慢性炎性疾病、癌癥、移植病和自體免疫性疾病、與生育相關(guān)的疾病、碳水化合物代謝紊亂、糖尿病、代謝綜合征、肥胖、內(nèi)分泌疾病和肌肉疾病。在另一具體方面，本發(fā)明提供一種用于治療選自葡萄糖代謝相關(guān)疾病、糖尿病、代謝綜合征、肥胖、內(nèi)分泌疾病和肌肉疾病的疾病的方法，所述方法包括對需要的個體施用治療有效量的分離多肽PRT5或PRT8或包含所述分離多肽的蛋白或編碼所述分離多肽的核酸或包含所述分離多肽的組合物。在另一具體方面，本發(fā)明提供一種用于提高葡萄糖代謝的方法，所述方法包括對需要的個體施用治療有效量的分離多肽PRT5或PRT8或包含所述分離多肽的蛋白或編碼所述分離多肽的核酸或包含所述分離多肽的組合物。在另一具體方面，本發(fā)明提供一種用于誘導(dǎo)胰島素受體表達(dá)的方法，所述方法包括對需要的個體施用治療有效量的分離多肽PRT5或PRT8，特別是PRT5，或包含所述分離多肽的蛋白或編碼所述分離多肽的核酸或包含所述分離多肽的組合物。相似地，本發(fā)明提供一種用于誘導(dǎo)細(xì)胞中胰島素受體表達(dá)的方法，所述方法包括用有效量的PRT5或其生物學(xué)活性片段或衍生物或包含其的組合物接觸細(xì)胞。所述方法可以是體外或離體方法。所述細(xì)胞將通常是肌肉細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、它們的起源細(xì)胞或可以期望胰島素受體在其中表達(dá)的任何細(xì)胞。在另一具體方面，本發(fā)明提供一種用于治療睪酮缺乏相關(guān)的疾病或用于提高睪酮產(chǎn)生的方法，所述方法包括對需要的個體施用治療有效量的分離多肽PRT6或包含其的蛋白或編碼其的核酸或包含其的組合物。在另一方面，本發(fā)明提供一種用于治療癌癥的方法，所述方法包括對需要的個體施用治療有效量的分離多肽PRT7或包含其的蛋白或編碼其的核酸或包含其的組合物。此外，本發(fā)明提供一種用于誘導(dǎo)細(xì)胞中p53、細(xì)胞凋亡或細(xì)胞死亡中任意一種的方法，所述方法包括用有效量的PRT7或其生物學(xué)活性片段或衍生物或包含其的組合物接觸細(xì)胞。所述方法可以是體外或離體方法。所述細(xì)胞可以是期望誘導(dǎo)P53或誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡或細(xì)胞死亡的任何細(xì)胞，如癌細(xì)胞。如在本文中所使用的，術(shù)語“有效量”意思是實(shí)現(xiàn)所挑選的結(jié)果所必需的量，其目前涉及用于治療疾病所必需的PRT5、PRT6、PRT7或PRT8、或其生物學(xué)活性衍生物的量。所述治療有效量或劑量依賴于需要治療的疾病狀態(tài)的嚴(yán)重程度和反應(yīng)性，其療程持續(xù)一小時至幾個小時，一天至幾天，或直到痊愈或疾病狀態(tài)已經(jīng)減少。普通技術(shù)人員可以容易地確定最適宜的劑量、定量給藥方法和重復(fù)率。最適宜的劑量可以依據(jù)本發(fā)明的每一種多肽或蛋白或包含其的組合物的相對潛力變化，并通常基于EC5tl估計，發(fā)現(xiàn)在動物模型的體外以及體內(nèi)均有效。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以容易地基于使用的多肽或蛋白的標(biāo)準(zhǔn)的殘留時間、濃度和修正估計給藥重復(fù)率。本文中使用的術(shù)語“治療”或“處理”意思是改善患有疾病或紊亂的病患中的疾病活性的一種或多種臨床指示?！疤幚怼敝钢委熜蕴幚?。“病患”或“需要的個體”意思是期望對其治療紊亂或疾病以克服所述紊亂或疾病的任何哺乳動物，特別是人個體。通常，“治療有效量”同樣通過與預(yù)防性或治療性目的相關(guān)聯(lián)的疾病的嚴(yán)重程度、 給藥途徑和病患的綜合情形(年齡、性別、體重和主治醫(yī)生知道的其它考慮因素)確定。多種給藥方法可以用于將本發(fā)明描述的多肽PRT5、PRT6、PRT7或PRT8遞送至需要的個體?？梢酝ㄟ^靜脈內(nèi)(i.v.)、肌肉的(i.m.)、腹膜內(nèi)(i. p.)或局部注射或通過本領(lǐng)域技術(shù)人員發(fā)現(xiàn)的其它合適的途徑遞送所述多肽或包含其的組合物。為了有效治療，本發(fā)明的多肽或蛋白應(yīng)當(dāng)以使得它們在施用之后在所述系統(tǒng)中能夠穩(wěn)定的方式制備。如在本文中所使用的，術(shù)語“紊舌L”指正常功能被擾亂的狀況?！凹膊　敝敢鹗芮忠u的人或與這個人接觸的其它人不適、功能障礙或悲痛的身體或精神的任何異常狀況。有時該術(shù)語被廣泛使用，包括傷害、先天性畸形、殘疾、綜合征、癥狀、不正常行為和結(jié)構(gòu)和功能的非典型變化、由疾病產(chǎn)生的慢性或永久性健康問題。術(shù)語“疾病”、“紊亂”、“狀況”和“病”在本文中相等使用。在另一方面，本發(fā)明提供一種特異識別選自PRT5、PRT6、PRT7和PRT8的多肽或其任何片段或衍生物的抗體。具體地，所述PRT5、PRT6、PRT7 或 PRT8 多肽分別由 SEQ ID NO. USEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 3或SEQ ID NO. 4表示。被本發(fā)明的抗體識別的片段的非限定性例子是用作產(chǎn)生所述抗體的抗原的肽。因此，在一種具體實(shí)施例中，所述抗PRT5抗體識別由SEQ ID NO. 17表示的肽，所述抗PRT6抗體識別由SEQ ID NO. 18表示的肽，所述抗PRT7抗體識別由SEQ ID NO. 19表示的肽，以及所述抗PRT8抗體識別由SEQ ID NO. 20表示的肽。如在本文中定義的，本發(fā)明的抗體通常天然得到或天然產(chǎn)生。因此，所述抗體是多克隆抗體或單克隆抗體。可選擇地，本發(fā)明的抗體可以是合成產(chǎn)生(如通過化學(xué)合成)，或通過從各自的抗體產(chǎn)生細(xì)胞或細(xì)胞系分離特定mRNA而重組產(chǎn)生。所述特定mRNA然后應(yīng)當(dāng)經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)分子生物學(xué)操作(獲得cDNA、將所述cDNA引入至表達(dá)載體中等)以產(chǎn)生重組產(chǎn)生的抗體。所述技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。如在下面實(shí)施例中是描述的，使用產(chǎn)生多克隆抗體領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)在兔子中產(chǎn)生本發(fā)明的抗體。 產(chǎn)生抗蛋白的多克隆抗體是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的技術(shù)，并在Current Protocols in Immunology, John E. Coligan 等(eds.)，Wiley 和 Sons Inc 的第 2 章中有描述。根據(jù)本發(fā)明，識別PRT5、PRT6、PRT7或PRT8抗原的任意一種的多克隆抗體指分別對應(yīng)于PRT5、PRT6、PRT7或PRT8抗原的多克隆抗體的主要識別位點(diǎn)。通常，PRT5、PRT6、 PRT7或PRT8或其片段用作用于免疫動物的免疫原以產(chǎn)生本發(fā)明描述的一種抗體，所述動物如兔子、豚鼠、山羊、小鼠、大鼠、綿羊、猴子。通過已知的方法從得到的抗PRT5、抗PRT6、 抗PRT7或抗PRT8抗血清純化抗體片段。所述得到的抗體用作多克隆抗體。關(guān)于多克隆抗體的特異性，分別識別PRT5、PRT6、PRT7或PRT8。所述多克隆抗體的主要識別位點(diǎn)保留在 PRT5、PRT6、PRT7或PRT8蛋白的C-末端區(qū)。在C-末端區(qū)具有主要識別位點(diǎn)的多克隆抗體是識別例如分別由SEQ ID NO. 17表示的肽、或由SEQ ID NO. 18表示的肽、或由SEQ ID NO. 19表示的肽或由SEQ ID NO. 20表示的肽的抗體。通常，從用免疫原免疫的動物血清純化的免疫球蛋白制備多克隆抗體。來自不同批次的多克隆抗體同樣可以混合在一起以避免來自不同動物的個體差異和抗血清中的批次差異。由于多克隆抗體是抗體的集合，多克隆抗體具有多個識別位點(diǎn)。可以從免疫的動物(特別是大鼠或小鼠)的脾或淋巴結(jié)獲取B細(xì)胞，然后在促進(jìn)雜交細(xì)胞生長的條件下通過與永生化B細(xì)胞融合而制備單克隆抗體。產(chǎn)生單克隆抗體的技術(shù)在許多文獻(xiàn)和教科書中有描述，如上面提到的Current Protocols in Immunology的第2 章。如在那篇文章的第2章所述，可以以與蛋白免疫的動物的脾或淋巴結(jié)細(xì)胞相同的方式， 將這些動物的脾或淋巴結(jié)細(xì)胞用于產(chǎn)生單克隆抗體。用于產(chǎn)生單克隆抗體的技術(shù)進(jìn)一步由 Kohler 和 Milstein[Kohler 和 Milstein (1975)Nature 256 ;495_497]，和在 US 4，376，110 中描述。術(shù)語“抗體”同樣意味著包括完整分子及其片段，如能夠結(jié)合抗原的抗體的scFv、 Fv、Fab’、Fab、雙特異性抗體、線性抗體、F(ab，)2抗原結(jié)合片段[Wahl等(1983) J. Nucl. Med. 24,316-325]。根據(jù)本文公開的適用于完整抗體分子的方法，以及適用于本發(fā)明公開的抗體的其它應(yīng)用，抗體的Fab和F(ab’)2和其它片段可用于檢測生物樣品中的蛋白，所述蛋白作為生產(chǎn)本發(fā)明抗體的抗原。這樣的片段例如可以通過使用酶如木瓜蛋白酶(以產(chǎn)生Fab片段) 或胃蛋白酶(以產(chǎn)生F(ab’)2片段)經(jīng)過蛋白裂解而產(chǎn)生。因此，根據(jù)計劃的應(yīng)用，用于本發(fā)明的抗體的Fab和F(ab’)2和其它片段可以用多種標(biāo)簽標(biāo)記。這些標(biāo)簽可以是便于檢測的可檢測標(biāo)簽，或能夠殺死腫瘤細(xì)胞的毒性標(biāo)簽，或可以誘導(dǎo)其它細(xì)胞或物質(zhì)殺死腫瘤細(xì)胞的“誘導(dǎo)”標(biāo)簽。如果抗體能夠與分子(抗原)特異反應(yīng)，且因此所述抗體與所述分子結(jié)合，則所述抗體被稱為是“能夠結(jié)合”或“識別”所述分子。術(shù)語“表位”意思是指能夠被抗體結(jié)合，且同樣能夠由所述抗體或產(chǎn)生所述抗體的細(xì)胞識別的任何分子的部分。表位或“抗原決定簇” 通常由分子如氨基酸或糖側(cè)鏈的化學(xué)活性表面基團(tuán)組成，并具有特異的三維結(jié)構(gòu)特性以及特異的電荷特性?！翱乖笔悄軌虮豢贵w識別和結(jié)合的分子或分子一部分?？乖梢杂幸粋€或多于一個的表位。上述的特異反應(yīng)意思是表示所述抗原將以高度選擇性和特異性的方式與它對應(yīng)的抗體反應(yīng)，而不與大量由其它抗原引起的其它抗體反應(yīng)。在本發(fā)明中，由SEQ ID NO. 17、SEQ ID NO. 18、SEQ ID NO. 19 和 SEQ ID NO. 20 表示的多肽用作抗原以產(chǎn)生本發(fā)明的多克隆抗體，并因此被本發(fā)明的抗體識別。相似地，本文描述的全長蛋白同樣可以作為每一種根據(jù)它自身的特異性(即，PRT5與抗PRT5、PRT6與抗 PRT6、PRT7與抗PRT7、PRT8與抗PRT8)被本發(fā)明抗體識別并能夠與本發(fā)明抗體結(jié)合的抗原。本發(fā)明提供的抗體可以是任何同種型，IgG, IgM, IgE, IgA或IgD。關(guān)于所述抗體，“生物學(xué)特性”或“生物學(xué)活性”通常指抗體特異識別表位并因此與表位結(jié)合的能力。所述表位可以是全長蛋白的一部分或者包含在所述蛋白的片段或多肽中。在另一方面，本發(fā)明提供一種包含本發(fā)明描述的抗體作為活性成分的組合物。因此，包含的作為本發(fā)明組合物的活性試劑的所述抗體是識別并結(jié)合選自PRT5、PRT6、PRT7 或PRT8的多肽或其任何片段、類似物或衍生物的抗體或其片段。所述組合物可以用在診斷和/或治療方法中。所述抗體或包含其的組合物可以用于診斷影響PRT5、PRT6、PRT7或PRT8中任意一種的表達(dá)和/或功能的疾病或紊亂?？蛇x地，所述抗體或包含其的組合物可以用于治療影響PRT5、PRT6、PRT7或PRT8中任意一種的表達(dá)和/或功能的疾病或紊亂。在另一種實(shí)施方式中，所述包含本發(fā)明描述的所述抗體的組合物可以用于癌癥治療。在下面的實(shí)施例7中，本發(fā)明人已經(jīng)令人驚奇地顯示了在來自患有胰腺癌或肺癌的男性病患的樣品中提高水平的循環(huán)的PRT7。PRT7因此可以用作檢測癌癥(其中，胰腺癌或肺癌是具體非限定的例子)的標(biāo)記物。因此，抗PRT7特異抗體可以用作癌癥的診斷工具。因此，在一種具體的實(shí)施方式中，所述組合物包含識別多肽PRT7或其片段或衍生物的抗體。在另一種實(shí)施方式中，包含本發(fā)明描述的抗體的組合物可以用于例如癌癥預(yù)后。 在經(jīng)歷癌癥治療的病患中存在預(yù)后的特別需要，其中具有治療功效的指示物是必要的。因此，包含本發(fā)明描述的至少一種抗體的組合物應(yīng)當(dāng)能夠通過檢測或測定PRT5、PRT6、PRT7或PRT8蛋白中任意一種的水平而測定治療的結(jié)果。本發(fā)明同樣提供產(chǎn)生抗體的細(xì)胞系，所述細(xì)胞系產(chǎn)生本發(fā)明的抗體。因此，本發(fā)明提供產(chǎn)生抗蛋白的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞系，所述蛋白選自PRT5、PRT6、PRT7和PRT8的蛋白。在一種實(shí)施方式中，所述產(chǎn)生抗體的細(xì)胞是克隆分離的并永生的以產(chǎn)生產(chǎn)生抗體的細(xì)胞系，這同樣是本發(fā)明的目的?？梢愿鶕?jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法和如 Lanzavecchia 等，2007 [Lanzavecchia A, Corti D, Sallusto F. (2007) Human monoclonal antibodies by immortalization of B cells.Curr Opin Biotechnology ;18 (6) :523-8] 描述的方法完成細(xì)胞永生化。在另一方面，本發(fā)明提供本發(fā)明描述的抗體在制備診斷組合物中的應(yīng)用，所述抗體識別選自PRT5、PRT6、PRT7和PRT8的蛋白。具體地，所述組合物用于診斷疾病或紊亂，所述疾病或紊亂選自具有免疫學(xué)因素或病因的疾病、傳染病、急性和慢性炎性疾病、癌癥、移植病和自體免疫性疾病、與生育相關(guān)的疾病和碳水化合物代謝紊亂。如在本文所涉及的，自體免疫性疾病包括炎性腸道疾病(IBD)、克羅恩病、多發(fā)性硬化(MS)、自體免疫性葡萄膜炎、自體免疫性葡萄膜視網(wǎng)膜炎、自體免疫性甲狀腺炎、橋本氏病、胰島炎、干燥綜合征、自然流產(chǎn)、實(shí)驗(yàn)性自體免疫性心肌炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、狼瘡 (SLE)、牛皮癬和糖尿病，特別是I型糖尿病。自體免疫疾病的其它例子包括急性壞死性出血性腦炎、阿狄森氏病、血中丙球蛋白缺乏、過敏性哮喘、過敏性鼻炎、斑禿、淀粉樣變性病、 強(qiáng)直性脊柱炎、抗GBM/抗TBM腎炎、抗磷脂綜合征(APS)、自體免疫性再生障礙性貧血、自體免疫性家族性自主神經(jīng)異常、自體免疫性肝炎、自體免疫性高血脂、自體免疫性免疫缺陷、自身免疫性內(nèi)耳疾病(AIED)、自體免疫性心肌炎、自體免疫血小板減少性紫癜(ATP)、 軸突和神經(jīng)元神經(jīng)病、Bal氏病、Behnet氏病、大皰性類天皰瘡、心肌癥、巨大淋巴結(jié)增生癥、口炎性腹瀉(非熱帶性)、查加斯病、慢性疲勞綜合征、慢性炎性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病 (CIDP)、許爾-斯特勞斯綜合征、瘢痕性類天皰瘡/良性黏膜性類天皰瘡、科干綜合征、冷凝集素病、先天性心傳導(dǎo)阻滯、薩科奇病毒性心肌炎、CREST病、原發(fā)性混合型冷球蛋白血癥、 脫髓鞘性神經(jīng)病、皮肌炎、德維克氏病、盤狀紅斑狼瘡、Dressier綜合征、子宮內(nèi)膜異位、嗜酸性筋膜炎、結(jié)節(jié)性紅斑、實(shí)驗(yàn)性過敏性腦脊髓炎、Evan綜合征、纖維性肌痛、纖維性肺泡炎、巨細(xì)胞動脈炎(顳動脈炎)、古德帕斯丘綜合征、格雷夫氏病、格林巴利綜合征、溶血性貧血、過敏性紫癜腎炎、妊娠皰疹、低丙種球蛋白血癥、特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)、IgA 腎病、免疫調(diào)節(jié)性脂蛋白、包涵體性肌炎、胰島素依賴型糖尿病(I型)、間質(zhì)性膀胱炎、青少年關(guān)節(jié)炎、青年糖尿病、川崎病、朗-伊二氏綜合征、白細(xì)胞破裂性脈管炎、扁平苔蘚、硬化性苔癬、木樣結(jié)膜炎、線性IgA病(LAD)、萊姆病、梅尼艾氏病、顯微鏡下多動脈炎、混合結(jié)締組織病(MCTD)、蠶食性角膜潰瘍、穆-哈二氏病、重癥肌無力、肌炎、嗜睡癥、嗜中性白血球減少癥、目艮瘢痕性類天皰瘡、骨關(guān)節(jié)炎、復(fù)發(fā)性風(fēng)濕病、副腫瘤性小腦變性、陣發(fā)性夜間血紅蛋白尿(PNH)、Parsonnage-特納綜合征、扁平部睫狀體炎(外周葡萄膜炎)、天皰瘡、外周神經(jīng)病、靜脈周圍性腦脊髓炎、惡性貧血、POEMS綜合征、結(jié)節(jié)性動脈周圍炎、I型、II型和 III型自體免疫性多腺體綜合征、風(fēng)濕性多肌痛、多肌炎、心肌梗死后綜合征、心包切開后綜合征、孕酮皮炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化、牛皮癬性關(guān)節(jié)炎、特發(fā)性肺纖維化、壞疽性膿皮病、 單純性紅細(xì)胞再生障礙性貧血、雷諾現(xiàn)象、反射性交感神經(jīng)性營養(yǎng)不良、賴特綜合征、復(fù)發(fā)性多軟骨炎、多動腿綜合征、風(fēng)濕熱、肉樣瘤病、施密特綜合征、鞏膜炎、硬皮病、精子和睪丸自體免疫性、僵人綜合征、亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎(SBE)、交感性眼炎、大動脈炎、顳動脈炎 /巨細(xì)胞性動脈炎、血小板減少性紫癜(TTP)、自體免疫性甲狀腺病、Tolosa-Hunt綜合征、 橫貫性脊髓炎和壞死性脊髓病、潰瘍性結(jié)腸炎、未分化結(jié)締組織病(UCTD)、脈管炎、水泡性皮膚病、白癜風(fēng)和韋格納肉芽腫。在另一方面，本發(fā)明提供本發(fā)明描述的抗體在制備治療組合物中的應(yīng)用，所述抗體能夠特異識別選自PRT5、PRT6、PRT7和PRT8的多肽或其片段或衍生物。本發(fā)明提供的抗PRT5抗體、抗PRT6抗體、抗PRT7抗體和抗PRT8抗體或其片段可以用于定量或定性檢測樣品中用作產(chǎn)生本發(fā)明抗體的抗原的蛋白或它們的片段。這可以通過給出視覺可檢測的信號的技術(shù)完成，它可以是熒光(免疫熒光)、酶反應(yīng)的發(fā)色產(chǎn)物、沉淀產(chǎn)生、化學(xué)發(fā)光或生物發(fā)光中任意一種。使用與如下描述的光顯微方法、流式細(xì)胞術(shù)或熒光檢測法聯(lián)合的熒光標(biāo)記或顏色標(biāo)記的抗體?？梢杂糜跈z測所述抗體的其它技術(shù)和標(biāo)記物包括但不限于膠體金、放射性標(biāo)簽、GFP(綠色熒光蛋白)等等，抗生物素蛋白/鏈霉親和素-生物素、磁珠以及對實(shí)際結(jié)合敏感的物理系統(tǒng)，如納米技術(shù)系統(tǒng)。本發(fā)明提供的抗體及其片段可以用于組織學(xué)染色，如免疫組織化學(xué)、免疫熒光檢測或免疫電子顯微術(shù)，以及用于蛋白的原位檢測。可以通過從個體獲取組織學(xué)標(biāo)本，并用所述標(biāo)記的本發(fā)明抗體接觸所述標(biāo)本來完成原位檢測。通過對生物學(xué)樣品(所述標(biāo)本)涂覆或覆蓋所述標(biāo)記的抗體(或片段)接觸所述抗體(或片段)。通過使用這樣的方法，不僅可以測定所述抗原的存在，也可以測定其在被測組織上的分布。使用本發(fā)明，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將容易地意識到可以修改任意多種組織學(xué)方法，如染色方法，以實(shí)現(xiàn)這樣的原位檢測。可以標(biāo)記和直接檢測本發(fā)明抗體的一種方式是將其與酶連接并用于酶免疫測定 (EIA)。當(dāng)之后與合適的底物接觸時，這種酶與所述底物反應(yīng)以產(chǎn)生化學(xué)基團(tuán)，所述化學(xué)基團(tuán)可以通過例如分光光度計、熒光方式或視覺方式檢測?？梢杂糜诳蓹z測地標(biāo)記所述抗體的酶包括但不限于蘋果酸脫氫酶、葡萄球菌核酸酶、S-5-類固醇異構(gòu)酶、酵母醇脫氫酶、 α -甘油磷酸脫氫酶、磷酸丙糖異構(gòu)酶、辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、天冬酰胺酶、葡糖氧化酶、β -半乳糖苷酶、核糖核酸酶、脲酶、過氧化氫酶、葡萄糖6-磷酸脫氫酶、葡糖淀粉酶和乙酰膽堿-酯酶。所述檢測可以通過使用酶的發(fā)色底物的比色方法完成。所述檢測也可以通過底物與相似制備的標(biāo)準(zhǔn)物的酶反應(yīng)程度的視覺比較來完成(該方法適于可溶的有色產(chǎn)物和不可溶的有色產(chǎn)物，如在硝化纖維或塑料支撐物上)。在本發(fā)明中，在合適的例子中，通過使用與所述配體或反應(yīng)抗體反應(yīng)的二抗或其它配體可以進(jìn)一步幫助檢測所述抗體與抗原的反應(yīng)，所述二抗或其它配體與不同表位特異或非特異反應(yīng)。酶免疫測定，如免疫熒光測定(IFA)、光度測定、酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)、 ELISP0T測定以及免疫印跡可以容易地適于完成具體抗體的檢測。同樣可以使用的其它檢測系統(tǒng)包括基于使用源自金黃色葡萄球菌Cowan株I的蛋白Α、來自C群鏈球菌(26RP66株)的蛋白G的那些，或者使用生物素-抗生物素蛋白結(jié)合反應(yīng)的系統(tǒng)。本發(fā)明抗體可以在其中使用的免疫酶檢測的其它方法是蛋白質(zhì)印跡和點(diǎn)印跡。所述樣品通過電泳分離并轉(zhuǎn)移至硝化纖維膜或其它合適的支撐物上。然后將需要被檢測的樣品(如，培養(yǎng)物上清液，組織樣品)與所述膜接觸并通過已經(jīng)描述的方法檢測形成的免疫復(fù)合物的存在。在本方法的一種變化形式中，在膜上以線或斑點(diǎn)涂覆純化的抗體并使之結(jié)合。 隨后將所述膜與被測樣品在培養(yǎng)之前和之后接觸，并使用本文描述的技術(shù)檢測形成的免疫復(fù)合物。同樣可以通過凝集檢測抗體-抗原復(fù)合物的存在。例如，根據(jù)本發(fā)明的抗體可以用于包覆形成均質(zhì)懸浮液的乳膠微粒。當(dāng)與樣品，如含有所述抗體所識別的特異抗原的血清混合時，引起所述乳膠微粒凝集并從視覺上可以檢測大凝集物的存在?？捎糜谕ㄟ^免疫測定技術(shù)測定抗體的免疫學(xué)和免疫測定方法的綜述，見Basic and Clinical Immunology[D. Stites等· (eds.)(1994)Basic and Clinical Immunology, 第8版]。通過使用通過本領(lǐng)域已知方法標(biāo)記有可檢測基團(tuán)的抗體或配體，可以促進(jìn)檢測抗體和抗原的反應(yīng)。這樣的可檢測基團(tuán)允許沉淀或顏色變化的視覺檢測、通過顯微鏡方法的視覺檢測、或通過光譜測定或輻射測量的自動檢測等等。可檢測的基團(tuán)的例子包括熒光素和若丹明(用于熒光顯微鏡法)，辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶(用于光學(xué)顯微鏡法或電子顯微鏡法和生物化學(xué)檢測以及用于通過顏色變化的生物化學(xué)檢測)，和生物素-鏈霉親和素(用于光學(xué)或電子顯微鏡法)。所述檢測方法和使用的基團(tuán)可以選自例如上表或通過應(yīng)用于如此選擇的標(biāo)準(zhǔn)的其它合適例子[Harlow和Lane(1988)抗體實(shí)驗(yàn)室手冊，冷泉港實(shí)驗(yàn)室，冷泉港，NY]。可以通過使用任意多種其它免疫測定完成檢測。例如，通過放射性標(biāo)記的抗體或抗體片段，通過使用放射性免疫測定(RIA)可能檢測抗原。RIA的詳細(xì)描述可以在 Laboratory Techniques and Biochemistry in Molecular Biology, Work, T. S.等， North Holland Publishing Company, NY(1978)中發(fā)現(xiàn)，具體參考 Chard, T 的題目為 “An Introduction to Radioimmune Assay and Related Techniques”章節(jié),所述內(nèi)容通過引用的方式并入本文中。通過使用Υ/β計數(shù)器或閃爍計數(shù)器的方法或通過自動射線照相術(shù)可以檢測放射性同位素。同樣可以用熒光化合物標(biāo)記本發(fā)明的抗體。當(dāng)所述熒光標(biāo)記的抗體暴露于合適波長的光時，然后由于熒光可以檢測它的存在。最常使用的熒光標(biāo)記化合物是異硫氰酸熒光素、若丹明、藻紅蛋白、藻藍(lán)蛋白、別藻藍(lán)蛋白、鄰苯二甲醛和熒光胺。同樣可以使用發(fā)出熒光金屬如152E或其它稀土元素可檢測地標(biāo)記所述抗體?？梢允褂眠@樣的金屬螯合基團(tuán)如二亞乙基三胺五乙酸(ETPA)將這些金屬與所述抗體連接。同樣可以通過將抗體與化學(xué)發(fā)光化合物連接來可檢測地標(biāo)記所述抗體。然后通過檢測在化學(xué)反應(yīng)過程中產(chǎn)生的發(fā)光的存在來檢測所述化學(xué)發(fā)光標(biāo)記的抗體的存在。具體有用的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記化合物的例子是魯米諾、異魯米諾、theromat i c吖唳酯、咪唑、吖唳鹽和草酸酯。同樣，生物發(fā)光化合物也可以用于標(biāo)記本發(fā)明的抗體。生物發(fā)光是一類在生物系統(tǒng)中發(fā)現(xiàn)的化學(xué)發(fā)光，其中催化蛋白增加了化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的功效。通過檢測發(fā)光的存在測定生物發(fā)光蛋白的存在。用于標(biāo)記目的的重要生物發(fā)光化合物是螢光素、螢光素酶和水母蛋白。本發(fā)明的抗體分子可以適于在免疫測定(也被認(rèn)為是“雙位點(diǎn)”或“夾心法”測定)中使用。在典型的免疫測定中，將一定量未標(biāo)記的抗體(或抗體的片段)結(jié)合在固體支撐物或載體并加入一定量可檢測標(biāo)記的可溶抗體以使得檢測和/或量化固相抗體、抗原和標(biāo)記的抗體形成的三元復(fù)合物?？梢苑派湫詷?biāo)記本發(fā)明抗體以用于成像許多不同的癌癥。放射性同位素如In111和 Tc99用于標(biāo)記抗體并通過成像技術(shù)使之可見。放免液閃法(RIS)是能夠使得腫瘤體內(nèi)成像的有用檢測。這使用放射性標(biāo)記的抗體和標(biāo)準(zhǔn)的Y-閃爍照相機(jī)完成。每一位病患接受一次全身檢查。以全長的前部和后部全身探測實(shí)施全身檢查。在每一種情況中，獲取已知或疑似疾病的區(qū)域的選擇性平面圖(包括傾斜的和側(cè)面視圖)以增加損傷大小和位置的精確性。本發(fā)明的抗體同樣可以用在多元免疫測定中，以用于高通量篩選涉及人和鼠免疫系統(tǒng)中的不同基本身體狀況和疾病的化合物。多元免疫測定是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的并已經(jīng)由 Anderson 和 Davison 描述[Anderson 和 Davison (1999) Am. J. Pathol. 154 1017-1022]。因此，如上所述，本發(fā)明可用于作為檢測或指示個體中腫瘤或癌癥的存在的篩選方法。當(dāng)與本文所描述的可檢測標(biāo)記物直接連接時，通過將抗體或其片段注射入需要診斷的個體中并通過成像檢測，所述抗體或其片段可用于體內(nèi)檢測抗原(或其片段)，并借助于成像技術(shù)使之可見，指示癌細(xì)胞的存在。此外，本發(fā)明提供的抗體可以與細(xì)胞毒素藥物聯(lián)合，其本身或作為組合物的一部分用于癌癥的治療。因此，如上所提及的，本發(fā)明提供的抗體適于作為毒性藥物的遞送系統(tǒng)以殺死癌細(xì)胞或前癌細(xì)胞。在另一方面，本發(fā)明提供一種在需要的個體中治療疾病或紊亂的方法，所述方法包括對所述個體施用治療有效劑量的抗體或包含其的組合物，所述抗體識別選自PRT5、 PRT6、PRT7和PRT8的蛋白或其片段或其衍生物，所述疾病或紊亂選自具有免疫學(xué)因素或病因的疾病、傳染病、急性和慢性炎性疾病、癌癥、移植病和自體免疫性疾病、與生育相關(guān)的疾病、碳水化合物代謝紊亂、糖尿病、代謝綜合征、肥胖、內(nèi)分泌疾病和肌肉疾病。此外，本文提出的抗體可以用作藥物的活性試劑，或可以用于毒性藥物或治療藥物的遞送系統(tǒng)以達(dá)到需要被治療的細(xì)胞。細(xì)胞毒素藥物的一個例子是抗增殖藥物分子，其可以共價地與本發(fā)明的任意一種抗體(即抗PRT5抗體、抗PRT6抗體、抗PRT7抗體或抗PRT8抗體)直接連接或通過連接物與所述抗體連接，且其中所述抗體可選地由癌細(xì)胞中富含的或由癌細(xì)胞分泌的蛋白酶特異切割，因此通過蛋白酶的作用優(yōu)選地在癌細(xì)胞內(nèi)、附近或在癌細(xì)胞上釋放抗增殖藥物。抗增殖藥物的例子是環(huán)磷酰胺、苯丁酸氮芥、馬利蘭、美法侖、噻替哌、異環(huán)磷酰胺、氮芥、甲氨蝶呤、5_氟脲嘧唳阿糖胞苷、6-硫鳥嘌呤、6-巰基嘌呤、阿霉素、道諾霉素、伊達(dá)比星、更生霉素、博萊霉素、絲裂霉素、普卡霉素、鬼白毒素類、長春新堿、長春堿、 vinclestin、依托泊苷、替尼泊苷、卡莫司汀、洛莫司汀、司莫司汀、鏈脲菌素、腎上腺類皮質(zhì)激素、雌激素、抗雌激素、孕激素、芳香酶抑制劑、雄激素、抗雄激素、達(dá)卡巴嗪、六甲嘧胺、羥基脲、米托坦、丙卡巴肼、順鉬、卡鉬、美法侖、甲氨蝶呤和苯丁酸氮芥?？蛇x地，所述抗PRT5抗體、抗PRT6抗體、抗PRT7抗體或抗PRT8抗體可以將特定物質(zhì)如金屬離子(鐵或鋅或其它)攜帶進(jìn)腫瘤，并因此作為將毒性物質(zhì)(如本文之前所述的放射性或細(xì)胞毒性化學(xué)物質(zhì)，即，如蓖麻毒素或細(xì)胞毒素?zé)瘎┗蚣?xì)胞毒素前藥的毒素) 遞送至腫瘤的工具或載體。所述抗體和所述毒素或放射性同位素的連接可以是化學(xué)連接。 直接連接的毒素的例子是阿霉素、苯丁酸氮芥、蓖麻毒素、假單胞菌外毒素等?？梢援a(chǎn)生具有針對抗原和針對毒素的雙特異性的雜交毒素。這樣的二價分子可用于結(jié)合腫瘤或?qū)⒓?xì)胞毒性藥物遞送至腫瘤或結(jié)合并活化細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞，如結(jié)合T3-Ti受體復(fù)合物。本發(fā)明同樣提供一種用于評估已經(jīng)被診斷的癌癥預(yù)后的方法。具體地，重要的是在治療前、治療中和治療后持續(xù)進(jìn)行?？蛇x地，所述方法同樣適用于癌癥篩選，特別適用于當(dāng)所述被測樣品是血液樣品的時候，所述血液樣品是從病患取得的“患者最容易接受”類型的樣品之一。因此，在另一方面，本發(fā)明提供一種用于診斷個體的疾病或紊亂的方法，所述疾病或紊亂選自具有免疫學(xué)因素或病因的疾病、傳染病、急性和慢性炎性疾病、癌癥、移植病和自體免疫性疾病、與生育相關(guān)的疾病、碳水化合物代謝紊亂、糖尿病、代謝綜合征、肥胖、內(nèi)分泌疾病和肌肉疾病，所述方法包括步驟a、提供來自所述個體的樣品；b、用本發(fā)明的抗體或包含其的組合物接觸所述樣品，所述抗體選自抗PRT5抗體、 抗PRT6抗體、抗PRT7抗體和抗PRT8抗體；C、通過檢測方法檢測所述至少一種抗體和它的特異抗原的復(fù)合物的形成；從而檢測到復(fù)合物表示所述個體患有癌癥。因此，在另一方面，本發(fā)明同樣提供一種用于在樣品中診斷癌癥的方法，所述方法包括檢測來自個體的樣本中PRT7多肽或包含其的蛋白的存在；從而存在的PRT7的水平高于對照的樣品指示癌癥的存在。在一種具體的實(shí)施方式中，所述癌癥是肺癌或胰腺癌。當(dāng)本文涉及個體時，所述個體可以是哺乳動物、人或非人類。非人哺乳動物包括但不限于母牛、馬、狗、貓、小鼠、大鼠、豚鼠等。通常，所述個體是人，特別是病患或健康個體。在本發(fā)明的診斷方法的一種實(shí)施方式中，所述樣品是血液樣品。在本發(fā)明的診斷方法的另一種實(shí)施方式中，所述樣品是所述癌癥的活組織切片。因此，本發(fā)明同樣提供一種監(jiān)測癌癥治療功效的方法。監(jiān)測治療功效對于評估癌癥治療的預(yù)后是必要的。因此，本文描述的診斷方法可以在癌癥治療之前、之中或之后在個體中實(shí)現(xiàn)，且將從每一個時間點(diǎn)獲得的結(jié)果(至少兩個抗原-抗體復(fù)合物之間的關(guān)系模式) 與同樣復(fù)合物在正常人群中的模式進(jìn)行比較分析。與正常人群的模式最接近的個體模式表示治療成功。本文涉及的癌癥治療表示根除疾病的任何治療，包括放射療法、化學(xué)療法等。如在本文中所使用的以描述本發(fā)明，“腫瘤”、“癌癥”、“惡性增殖性疾病”和“惡性腫瘤”均相當(dāng)?shù)厣婕敖M織或器官的增生。如果所述組織是淋巴或免疫系統(tǒng)的一部分，惡性細(xì)胞可以包括循環(huán)細(xì)胞的非實(shí)體瘤。其它組織或器官的惡性腫瘤可以產(chǎn)生實(shí)體瘤。通常，非實(shí)體瘤和實(shí)體瘤例如是癌癥、黑色素瘤、白血病和淋巴瘤。癌癥和腫瘤種類的非限定性例子包括腎上腺皮質(zhì)癌，膀胱癌，結(jié)腸癌，結(jié)腸直腸癌，直腸癌，神經(jīng)外胚層和松果體癌，兒童腦干神經(jīng)膠質(zhì)瘤，兒童小腦星形細(xì)胞瘤，兒童腦星形細(xì)胞瘤，兒童成神經(jīng)管細(xì)胞瘤，兒童視路神經(jīng)膠質(zhì)瘤，腦膜瘤，混合性神經(jīng)膠質(zhì)瘤，少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤，星形細(xì)胞瘤，室鼓膜瘤，垂體腺瘤，聽神經(jīng)瘤，椎旁惡性畸胎瘤，乳腺癌，男性乳腺癌，乳腺瘤形成，卵巢癌，類癌瘤，宮頸癌，子宮癌，子宮內(nèi)膜癌，陰道癌，外陰癌，妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞癌，輸卵管癌，白血病如骨髓白血病、慢性骨髓性白血病、伴有化膿的急性骨髓性白血病、 急性前髓細(xì)胞性白血病、伴有嗜堿性粒細(xì)胞增加的急性非淋巴細(xì)胞性白血病、急性淋巴性白血病，急性骨髓性白血病，急性單核細(xì)胞性白血病，伴有嗜酸性粒細(xì)胞增多的急性骨髓單核細(xì)胞性白血病，淋巴細(xì)胞性白血病如急性成淋巴細(xì)胞性白血病、慢性淋巴細(xì)胞性白血病， 淋巴瘤(霍奇金病和非霍奇金病)，惡性淋巴瘤、皮膚T細(xì)胞淋巴瘤，Burkitt淋巴瘤，骨髓及外骨髓增殖性疾病，良性腦膜瘤，唾液腺混合腫瘤，嘴唇和口腔、咽、喉、鼻旁竇內(nèi)腫瘤，結(jié)腸腺瘤，導(dǎo)管癌，眼瞼癌，眼球結(jié)膜癌，淚腺癌，腎細(xì)胞癌，移層腺癌，腺癌如小細(xì)胞肺癌、腎癌、子宮癌、前列腺癌，鱗狀上皮細(xì)胞癌，絨毛膜癌，成神經(jīng)細(xì)胞瘤，成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤，肉瘤， 橫紋肌肉瘤，軟組織肉瘤，卡波濟(jì)肉瘤，尤文氏肉瘤，骨肉瘤，骨外黏液樣軟骨肉瘤，子宮肉瘤，眼眶肉瘤，腦瘤，脊髓瘤，血管系統(tǒng)瘤，血管肉瘤，威爾姆斯瘤，范可尼貧血癥，朗格罕細(xì)胞組織細(xì)胞增生癥，惡性腎橫紋肌樣瘤，肝癌，內(nèi)分泌癌，子宮內(nèi)膜癌，食道癌，眼癌，胃癌， 胃腸癌，泌尿生殖系統(tǒng)癌癥，神經(jīng)膠質(zhì)瘤，婦科癌癥，頭頸癌，肝細(xì)胞癌，下咽癌，胰島細(xì)胞癌，腎癌，喉癌，肺癌，皮膚癌，非黑色素瘤皮膚癌，黑色素瘤，惡性黑色素瘤，結(jié)膜的惡性黑色素瘤，葡萄膜的惡性黑色素瘤，間皮瘤，多發(fā)性骨髓瘤，鼻咽癌，食道癌，胰腺癌，垂體癌， 前列腺癌，胃癌，睪丸癌，胸腺癌，甲狀腺癌，移行細(xì)胞癌，滋養(yǎng)層癌，睪丸無性細(xì)胞瘤和卵巢無性細(xì)胞瘤。如在本文中所定義的，“樣品”指從個體、通常是哺乳動物個體獲得的任何樣品。生物學(xué)樣品的例子包括體液和組織標(biāo)本。所述樣品的來源可以源自這樣的生理學(xué)介質(zhì)，如血液、血清、血漿、母乳、膿、腦脊髓液、拭樣、組織刮屑、洗滌物、尿液、糞便、從體腔清洗獲得的漂洗流體、痰、從身體區(qū)域(咽喉、陰道、耳、眼、皮膚、傷口組織如淋巴結(jié)等)取得的拭子。組織標(biāo)本包括脾、淋巴結(jié)和任何包含淋巴細(xì)胞的組織的活組織切片。本說明書和權(quán)利要求書中的術(shù)語“樣品”在本文中使用它最寬的范圍。代表性地，初始而非流體的拭子和樣品與液體介質(zhì)接觸，液體介質(zhì)然后與檢測試劑接觸。在本發(fā)明的一種具體實(shí)施方式
中，在本發(fā)明方法中使用的所述樣品是任何一種體液或源自培養(yǎng)物的樣品。源自培養(yǎng)物的樣品可以是細(xì)胞提取物、介質(zhì)樣品或來自體液的培養(yǎng)物，如來自血液樣品的培養(yǎng)物。“全血”意思是從動物或人收集的血液。全血可以用肝素、EDTA、檸檬酸鹽和其它防止凝固和凝結(jié)的任意物質(zhì)收集?？梢杂霉滔嘀挝锘蜉d體如硝化纖維，或能夠固定細(xì)胞、細(xì)胞微?；蚩扇艿鞍椎钠渌腆w支撐物或載體處理生物學(xué)樣品。然后可以用合適的緩沖液清洗所述支撐物或載體，隨后用如上所述的本發(fā)明的可檢測標(biāo)記的抗體處理。然后可以用緩沖液第二次清洗所述固相支撐物或載體以移除未結(jié)合抗體。然后通過常規(guī)方法檢測所述固體支撐物或載體上的結(jié)合抗原或標(biāo)記物的量。“固相支撐物”、“固相載體”、“固體支撐物”、“固體載體”、“支撐物”或“載體”指能夠結(jié)合抗原或抗體的任何支撐物或載體。公知的支撐物或載體包括玻璃、聚苯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、葡聚糖、尼龍淀粉酶、天然和改性纖維素、聚丙烯酰胺和磁鐵礦。出于本發(fā)明的目的，所述載體的性質(zhì)可以是一定程度可溶或不可溶。所述支撐物材料實(shí)際上可能具有任何可能的結(jié)構(gòu)構(gòu)造，只要連接的分子能夠結(jié)合抗原或抗體。因此，所述支撐物或載體構(gòu)造可以是球形，如在珠子內(nèi)；圓柱形，如在測試管的內(nèi)表面，或在桿的外表面。在同一管內(nèi)，對于不同抗原可以使用不同載體。可選地，所述表面可以是平的，如薄片、測試條等。特定支撐物或載體包括聚苯乙烯珠。本領(lǐng)域技術(shù)人員將知道用于結(jié)合抗體或抗原的許多其它合適載體，或?qū)⒛軌蛲ㄟ^例行試驗(yàn)確定這些載體。當(dāng)對于具體環(huán)境是慣例的或必須的時，其它步驟如清洗、攪動、搖動、過濾等可以加入至所述測定中。如在本文中所定義的，“培養(yǎng)基”指可以用于維持樣品以實(shí)踐本發(fā)明的任何培養(yǎng)基，包括但不限于含有或不含有胎牛(牛)血清的RPMI 1640，優(yōu)選地補(bǔ)充有合適的抗生素和谷氨酸鹽，以及可選地補(bǔ)充有其它添加劑如抗真菌劑、非必需氨基酸、DTT、丙酮酸鈉等?？梢杂糜趯?shí)踐本發(fā)明的其它培養(yǎng)基包括但不限于Eagles培養(yǎng)基、Dulbecco培養(yǎng)基、 McCoy培養(yǎng)基、199培養(yǎng)基、Waymouth培養(yǎng)基和含有或不含有補(bǔ)充物的無血清培養(yǎng)基。在另一種實(shí)施方式中，所述刺激物是沒有培養(yǎng)基。本發(fā)明同樣提供一種在需要的個體中治療疾病或紊亂的方法，所述疾病或紊亂選自具有免疫學(xué)因素或病因的疾病、傳染病、急性和慢性炎性疾病、癌癥、移植病和自體免疫性疾病、與生育相關(guān)的疾病以及碳水化合物代謝紊亂，所述方法包括對所述個體施用治療有效劑量的本發(fā)明的多肽或抗體。具體地，當(dāng)用于治療時，所述多肽或抗體與細(xì)胞毒素藥物連接，或作為用于將毒性物質(zhì)遞送至靶細(xì)胞或組織的載體。在本文中，靶細(xì)胞是與所述疾病或紊亂相關(guān)的細(xì)胞。在下文的實(shí)施例中，本發(fā)明人已經(jīng)顯示了在一些類型的癌癥中PRT7水平變高。具體地，本發(fā)明人證明了在患有胰腺癌或肺癌的男性病患中，PRT7顯著變高。因此，本發(fā)明提供一種診斷樣品中癌癥的方法，所述方法包括檢測來自個體的樣本中PRT7多肽或包含其的蛋白的存在，從而，PRT7水平比對照高的樣品表示存在癌癥。在另一方面，本發(fā)明提供一種用于診斷疾病或紊亂和/或監(jiān)測疾病或紊亂的治療功效和/或評估疾病或紊亂的預(yù)后的診斷試劑盒，所述疾病或紊亂選自具有免疫學(xué)因素或病因的疾病、傳染病、急性和慢性炎性疾病、癌癥、移植病和自體免疫性疾病、與生育相關(guān)的疾病以及碳水化合物代謝紊亂，所述試劑盒包括以下成分a、本文中描述的本發(fā)明抗體或包含其的組合物；b、用于完成檢測樣品中抗原存在的說明書，其中所述抗原被所述抗體特異識別。所述試劑盒進(jìn)一步包括至少一種以下成分a、至少一種用于收集被測樣品的工具；b、至少一種用于檢測所述抗原被所述抗體識別所必需的試劑；和c、至少一種對照樣品。本發(fā)明提供的試劑盒的一個具體實(shí)施例是包含特異識別PRT7多肽、其片段或衍生物、或包含其的蛋白的抗體的試劑盒，所述試劑盒可以有效診斷癌癥。所述個體可以是哺乳動物、人或非人。通常，所述個體是人病患或健康個體。
在一種實(shí)施方式中，任何這樣的試劑盒是抗體(或識別試劑)捕捉測定試劑盒，如 ELISA試劑盒，其包括固體支撐物、至少一種如在本發(fā)明中定義的抗體，以及適當(dāng)時可選地二抗。所述試劑盒可以進(jìn)一步可選地包括任何其它必要的試劑，如如上所述的可檢測的基團(tuán)、酶底物和顯色劑。所述抗體捕捉診斷試劑盒可選地是免疫印跡試劑盒，其通常包括上文所述的成分和試劑。本發(fā)明的診斷試劑盒包括的具體試劑和其它成分可以根據(jù)所述試劑盒中實(shí)踐的具體診斷方法選自本領(lǐng)域可用的那些。這樣的試劑盒可以用于檢測生物學(xué)樣品中的抗體，所述生物學(xué)樣品如從個體獲得的組織或體液，特別是全血、在培養(yǎng)前和/或培養(yǎng)后 PBMC或白細(xì)胞。當(dāng)在本發(fā)明的診斷方法中提及合適方法時，所述合適方法可以是免疫親和方法、 酶測定或用于檢測結(jié)構(gòu)特征的方法等。當(dāng)所述合適方法是免疫親和方法時，所述方法是酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)、蛋白質(zhì)印跡、免疫沉淀、FACS或任何其它使用本發(fā)明描述的抗體的免疫親和方法中的任意一種。在一種具體的實(shí)施方式中，通過捕捉ELISA實(shí)現(xiàn)檢測。捕捉ELISA(也被認(rèn)為是“三明治”ELISA)是一種量化皮克至微克量物質(zhì)(如激素、細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)化學(xué)物質(zhì)、傳染病抗原和細(xì)胞因子)的靈敏測定。當(dāng)需要被分析的物質(zhì)太稀而不能結(jié)合聚苯乙烯微孔板(如在細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的蛋白)或不能與塑料(如小的有機(jī)分子)很好結(jié)合時，特別追求這類ELISA。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定對于捕捉抗體、樣品、對照和檢測抗體的最佳稀釋以及孵育時間并需要廣泛的滴定。理想地，實(shí)驗(yàn)者可以使用酶標(biāo)記的檢測抗體。但是，如果檢測抗體是未標(biāo)記的，所述二抗將不能與包覆抗體或樣品交叉反應(yīng)。應(yīng)當(dāng)包括合適的陰性和陽性對照物。應(yīng)當(dāng)在碳酸鹽-重碳酸鹽緩沖液或PBS中稀釋所使用的捕捉或包覆抗體。代表性地，以O(shè). 2 10 μ g/ml放置捕捉抗體。優(yōu)選地，使用親和純化的抗體或最低程度使用IgG 片段。通常，樣品在PBS中稀釋至IOng IOyg/孔的范圍(越敏感的測定，需要越少量的樣品)。如在本文說明書中所使用的，術(shù)語“可檢測的基團(tuán)”表示任何原子、分子或其一部分，可以直接或間接地監(jiān)測它們的存在、缺乏或水平。一個實(shí)施例包括放射性同位素。其它實(shí)施例包括(i)可以催化顯色或光發(fā)射(發(fā)光)反應(yīng)的酶和(ii)熒光團(tuán)。假如可檢測的基團(tuán)本身是可檢測的，例如，在熒光團(tuán)的情況下，可以直接檢測可檢測的基團(tuán)。可選地，可以間接檢測可檢測的基團(tuán)。在后一種情況下，優(yōu)先使用與可檢測基團(tuán)反應(yīng)的其本身可以直接檢測的第二種基團(tuán)。所述可檢測基團(tuán)可以是抗體固有的。例如，抗體的恒定區(qū)可以作為間接可檢測的基團(tuán)，具有直接可檢測的基團(tuán)的二抗可以與其特異結(jié)合。因此，二抗是在本發(fā)明方法中檢測所述抗體的特別合適的方法。所述二抗可以是其本身與可檢測的基團(tuán)連接。本發(fā)明抗體可以被可檢測標(biāo)記的一種方式是通過將所述抗體與酶連接。當(dāng)之后與合適的底物接觸時，這種酶將與所述底物反應(yīng)以產(chǎn)生化學(xué)基團(tuán)，所述化學(xué)基團(tuán)可以通過例如分光光度計、熒光方式或視覺方式檢測。可以用于可檢測地標(biāo)記所述抗體的酶包括但不限于辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、蘋果酸脫氫酶、葡萄球菌核酸酶、 δ -5-類固醇異構(gòu)酶、酵母醇脫氫酶、α -甘油磷酸脫氫酶、磷酸丙糖異構(gòu)酶、天冬酰胺酶、 葡糖氧化酶、β -半乳糖苷酶、核糖核酸酶、脲酶、過氧化氫酶、葡萄糖6-磷酸脫氫酶、葡糖淀粉酶和乙酰膽堿酯酶。
所述檢測可以通過比色方法實(shí)現(xiàn)，所述方法使用酶的發(fā)色底物。所述檢測也可以通過底物的酶反應(yīng)程度與相似制備的標(biāo)準(zhǔn)物的酶反應(yīng)程度的視覺比較來完成。所述一抗結(jié)合的固體支撐物可以是任何不溶于水、不懸浮于水的固體支撐物。合適的固體支撐物的例子包括如聚苯乙烯的大珠子、濾紙、試管和微孔板。所述一抗可以通過共價結(jié)合或吸附的方式與固體支撐物結(jié)合。使用固體支撐物的優(yōu)勢是對于固相和液相的分離不需要離心步驟。上述固體支撐物可以包括聚合物如聚苯乙烯、瓊脂糖、瓊脂糖凝膠、纖維素、玻璃珠和纖維素或其它聚合物的磁性微粒。所述固體支撐物可以是大的或小的珠子或微粒、管子、板的形式或其它形式。作為固體支撐物，優(yōu)選使用試管或微孔板，它們的內(nèi)壁覆蓋有一抗，如本發(fā)明人制備的抗PRT5抗體、抗PRT6抗體、抗PRT7抗體或抗PRT8抗體或其任何片段或衍生物。本發(fā)明診斷方法中使用的“測量”包括估計、定量、計算或引申出在特定樣品中存在的生物標(biāo)記物的量。這可以通過測量終點(diǎn)指示完成，所述終點(diǎn)指示例如可以是可檢測產(chǎn)物的出現(xiàn)、例如底物水平的任何可檢測的變化或產(chǎn)物出現(xiàn)速率的變化或底物的消失；或者通過測量與本發(fā)明描述的生物標(biāo)記物結(jié)合的抗體的量完成。在所有所述檢測試劑盒中，用于收集被測樣品的工具可以是拭子、吸液管或相似的收集工具，且所述孵育方式可以是置于板、試管、玻璃或塑料表面、孔或吸水紙一條帶上的液體或半固體培養(yǎng)基，或相似方式。應(yīng)當(dāng)意識到，已經(jīng)設(shè)計了任何版式的試劑盒以使得所述測試在掃描儀上進(jìn)行并將結(jié)果實(shí)時輸入至計算機(jī)中。這將保證可以將全部信息通過郵件直接發(fā)送至所有相關(guān)人員并且可以完整保存這些信息以用于未來參考。在所述試劑盒的另一種實(shí)施方式中，所述樣品是體液和源自培養(yǎng)物的樣品的任一種。與本發(fā)明抗體接觸的樣品可以安排在陣列中。本發(fā)明的方法和試劑盒中使用的術(shù)語“陣列”表示識別試劑(即，至少一種本發(fā)明的抗體)的“編址”空間排列。所述陣列的每一個“地址”都是包含識別試劑的預(yù)定的特異空間區(qū)。例如，一個陣列可以是多個容器(試管)、板、每一個都包含了不同抗體的微板中的微孔。陣列也可以是在不同區(qū)域(點(diǎn)、線、列)中容納不同和已知識別試劑(例如，抗體) 的任何固體支撐物。所述陣列優(yōu)選地包括內(nèi)置的合適對照物，如不含有樣品的區(qū)域，不含有抗體的區(qū)域，不含有二者的區(qū)域(即，僅含有溶劑和試劑的區(qū)域)和含有被所述抗體識別的合成或分離蛋白或肽的區(qū)域(陽性對照)。將在下文更詳細(xì)地描述用于與本發(fā)明提供的試劑盒有關(guān)的本發(fā)明陣列的固體支撐物。適用于本發(fā)明試劑盒的固體支撐物代表性地基本上不溶于液相。本發(fā)明的固體支撐物是但不限于特定類型的支撐物。更確切地，大量的支撐物可以使用且是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的。因此，有用的固體支撐物包括固體和半固體基質(zhì)，如氣凝膠和水凝膠、樹脂、 珠子、生物芯片(包括薄膜覆蓋的生物芯片)、微流控芯片、硅芯片、多孔板(也稱為微孔板或微板)、膜、過濾器、導(dǎo)電和不導(dǎo)電的金屬、玻璃(包括顯微鏡載物片)和磁性支撐物。有用的固體支撐物的更具體例子包括硅膠、高分子膜、微粒、衍生的塑料薄膜、玻璃珠、棉花、 塑料珠、氧化鋁凝膠、多糖如瓊脂糖凝膠、尼龍、乳膠珠、磁珠、順磁性珠、超順磁性珠、淀粉等。應(yīng)當(dāng)進(jìn)一步注意，本發(fā)明任何方法和試劑盒中包括的任何試劑應(yīng)當(dāng)以包埋、連結(jié)、 連接、粘合放置或融合至任何上述固體支撐物材料的試劑提供。應(yīng)當(dāng)注意，本發(fā)明的方法和試劑盒使用的任何抗體同樣可以是多克隆抗體、單克隆抗體、重組抗體，如嵌合抗體或源自本發(fā)明抗體的單鏈抗體(ScFv)。本發(fā)明由權(quán)利要求書限定，權(quán)利要求書的內(nèi)容應(yīng)當(dāng)被認(rèn)為是包括在說明書公開的內(nèi)容中。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明公開和描述的內(nèi)容不限于本文公開的具體實(shí)施例、過程步驟和材料，因?yàn)檫@些過程步驟和材料可以稍微變化。同樣應(yīng)當(dāng)理解，本文使用的術(shù)語僅出于描述具體實(shí)施方式
的目的而使用，并不意味著限制本發(fā)明，因?yàn)楸景l(fā)明的范圍將僅由所附的權(quán)利要求書和其等價形式限制。必須應(yīng)當(dāng)注意的是，除非另有其它明確的表述，在本說明書和所附的權(quán)利要求書中使用的單數(shù)形式“一個”、“一種”和“所述”包括復(fù)數(shù)指示物。除非內(nèi)容有其它需要，在貫穿本說明書和隨后的權(quán)利要求書中，詞語“包含”和變化形式如“包括”、“含有”應(yīng)當(dāng)被理解為暗示包括指定的整體或步驟或整體或步驟的集合， 但不是排除任何其它整體或步驟或整體或步驟的集合。以下的實(shí)施例代表了本發(fā)明人在實(shí)現(xiàn)本發(fā)明方面中使用的技術(shù)。應(yīng)當(dāng)意識到，雖然這些技術(shù)例示了用于實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明公開的內(nèi)容，將意識到可以做出多種修正而不背離本發(fā)明計劃的范圍。除非另有說明，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所通常理解的相同含義。實(shí)施例普通分子生物學(xué)方法一些分子生物學(xué)方法并沒有在本文中詳細(xì)描述，因?yàn)樗鼈兪潜绢I(lǐng)域技術(shù)人員公知的。這樣的方法包括PCR、cDNA的表達(dá)、人細(xì)胞轉(zhuǎn)染等。描述這些方法的教科書如Sambrook 等(1989)分子克隆，實(shí)驗(yàn)室手冊，冷泉港實(shí)驗(yàn)室，ISBN :0879693096 ；F. M. Ausubel (1988) Current Protocols in Molecular Biology, ISBN 047150338X,John Wiley&Sons,Inc。此外，一些免疫學(xué)技術(shù)并沒有在本文公開的每一個實(shí)施例中詳細(xì)描述，例如蛋白質(zhì)印跡，因?yàn)樗鼈兪潜绢I(lǐng)域技術(shù)人員公知的。見，如Harlow和Lane (1988)抗體實(shí)驗(yàn)室手冊，冷泉港實(shí)驗(yàn)室。ELISA常規(guī)方案通過使用與容易測定的酶連接的抗體或抗原，酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)結(jié)合了抗體的特異性和簡單酶測定的靈敏度。ELISA可以提供一種實(shí)用的測量抗原或抗體濃度的方法。ELISA是一種五步過程I)用經(jīng)過PBS稀釋的抗原包被微孔板的孔，在4°C下孵育并清洗；2)用含有BSA/FCS的PBS封閉所有未結(jié)合的位點(diǎn)以防止假陽性結(jié)果，孵育I小時并清洗；3)向孔中加入抗體，孵育I小時并清洗；4)加入與酶連接的抗人IgG，孵育I小時并清洗；5)底物與酶的反應(yīng)產(chǎn)生了有色產(chǎn)物，指示陽性反應(yīng)。FACS 方案I、收獲、清洗細(xì)胞并用冰冷PBS、10% FCS、1 %疊氮化鈉將細(xì)胞懸浮液調(diào)整至1-5 X IO6細(xì)胞/ml的濃度。2、加入O. 1-10 μ g/ml的初級標(biāo)記的抗體。如果需要，用3% BSA/PBS稀釋所述抗體。3、在室溫或4°C下孵育至少30分鐘。4、通過在400g下離心5分鐘并用500 μ Ι-lml的冰冷PBS、10% FCS、1%疊氮化鈉
重懸浮以清洗細(xì)胞三次。5、用流式細(xì)胞儀分析所述細(xì)胞。ELISA 方案I、校準(zhǔn)曲線在 PBS(Biological Industries,目錄號 02-023-5A)中制備梯度稀釋的蛋白，從 2000pg/:ml 至 3 lpg/ml。2、將樣品在37°C浴中快速解凍。3、樣品加樣將70 μ I的每一種血液樣品(未稀釋)一式兩份和70 μ I的標(biāo)準(zhǔn)樣品一式三份放置于Maxisorp96孔板(NUNC，F(xiàn)96 Maxisorp,目錄號442404)中，并在4°C下?lián)u動孵育過夜。4、清洗移除液體并使用多通道移液管用300 μ I的含有O. 05% Tff-20 (Amresco, 目錄號0777-1L)的PBS清洗板4次。5 :封閉用PBS稀釋5% BSA (MP biomedicals,目錄號160069)。向每個孔中加入 300 μ I的封閉緩沖液。并在室溫下?lián)u動孵育I小時。6、清洗重復(fù)步驟4。7、檢測用稀釋液(含有O. 05% TW_20、0. 1% BSA的PBS)以I : 250比例稀釋特異抗體(親和純化的)。向每個孔中加入100 μ I的檢測抗體。在室溫下?lián)u動孵育2小時。8、清洗重復(fù)上述步驟4。9、HRP偶聯(lián)用稀釋液以I : 200比例稀釋山羊抗兔HRP偶聯(lián)抗體(Cell signaling,目錄號7074)。向每個孔中加入100 μ I的HRP偶聯(lián)物。在室溫下?lián)u動孵育30 分鐘。10、清洗重復(fù)上述步驟4，但清洗5次而非4次。11、顯色向每個孔中加入100μ I的ΤΜΒ(3，3'，5，5' _四甲基聯(lián)苯胺，辣根過氧化物酶底物，Millipore,目錄號ES001-500ML)，等待顯現(xiàn)出藍(lán)色，然后加入50 μ I的2Ν H2SO4 (Frutarom,目錄號 5552540)。12、讀板用酶標(biāo)儀在450nm處檢測孔的吸光率。多克隆抗體的制備使用制備多克隆抗體的標(biāo)準(zhǔn)方法在兔子中制備多克隆抗體。使用PRT5的C-末端片段(包含所述多肽的最后14個氨基酸)作為抗原，在兔子中生產(chǎn)抗PRT5多克隆抗體。該片段在本文中由SEQ ID NO. 17表示。使用PRT6的C-末端片段(包含所述多肽的最后14個氨基酸)作為抗原，在兔子中生產(chǎn)抗PRT6多克隆抗體。該片段在本文中由SEQ ID NO. 18表示。使用PRT7的C-末端片段(包含所述多肽的最后14個氨基酸)作為抗原，在兔子中生產(chǎn)抗PRT7多克隆抗體。該片段在本文中由SEQ ID NO. 19表示。使用PRT8的C-末端片段(包含所述多肽的最后14個氨基酸)作為抗原，在兔子中生產(chǎn)抗PRT8多克隆抗體。該片段在本文中由SEQ ID NO. 20表示。一些免疫學(xué)技術(shù)并沒有在本文公開的每一個實(shí)施例中詳細(xì)描述，因?yàn)樗鼈兪潜绢I(lǐng)域技術(shù)人員公知的，并在如Harlow和Lane (1988)抗體實(shí)驗(yàn)室手冊，冷泉港實(shí)驗(yàn)室中詳細(xì)描述。逆轉(zhuǎn)錄酶PCR (RT-PCR)在多種組織中進(jìn)行RT-PCR分析以確定新分離蛋白的表達(dá)模式。使用的PCR條件是95°C進(jìn)行2分鐘，接著40個循環(huán)的95°C進(jìn)行45秒、59°C進(jìn)行45秒以及72°C進(jìn)行5分鐘，最后以72°C進(jìn)行5分鐘結(jié)束。序列本文中所涉及的所有序列呈現(xiàn)在下面的表1中。表1 本發(fā)明中提供的序列
權(quán)利要求
1.一種分離多肽，和其任何片段、衍生物或類似物，其中所述分離多肽包含由SEQ ID NO. I、SEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 3或SEQ ID NO. 4中任意一項所表示的氨基酸序列。
2.一種根據(jù)權(quán)利要求I所述的分離多肽，包含由SEQ ID NO. I表示的氨基酸序列。
3.一種根據(jù)權(quán)利要求I所述的分離多肽，包含由SEQ ID NO. 2表示的氨基酸序列。
4.一種根據(jù)權(quán)利要求I所述的分離多肽，包含由SEQ ID NO. 3表示的氨基酸序列。
5.—種根據(jù)權(quán)利要求I所述的分離多肽，包含由SEQ ID NO. 4表不的氨基酸序列。
6.一種根據(jù)權(quán)利要求I所述的多肽，是趨化因子樣分泌蛋白。
7.一種包含根據(jù)權(quán)利要求I所述的分離多肽的分離蛋白和其任何片段、衍生物或類似物。
8.一種分離核酸分子，包含編碼根據(jù)權(quán)利要求2所述多肽和其任何片段、衍生物和類似物的序列。
9.一種分離核酸分子，所述分子僅由于遺傳密碼簡并性而在密碼子序列上與根據(jù)權(quán)利要求8所述的核酸分子不同。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的分離核酸分子，包含由SEQID NO. 5表示的序列。
11.一種分離核酸分子，包含編碼根據(jù)權(quán)利要求3所述多肽和其任何片段、衍生物和類似物的序列。
12.—種分離核酸分子，所述分子僅由于遺傳密碼簡并性而在密碼子序列上與根據(jù)權(quán)利要求11所述的核酸分子不同。
13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的分尚核酸分子，包含由SEQID NO. 6表不的序列。
14.一種分離核酸分子，包含編碼根據(jù)權(quán)利要求4所述多肽和其任何片段、衍生物和類似物的序列。
15.一種分離核酸分子，所述分子僅由于遺傳密碼簡并性而在密碼子序列上與根據(jù)權(quán)利要求14所述的核酸分子不同。
16.根據(jù)權(quán)利要求14所述的分離核酸分子，包含由SEQID NO. 7表示的序列。
17.一種分離核酸分子，包含編碼根據(jù)權(quán)利要求5所述多肽和其任何片段、衍生物和類似物的序列。
18.一種分離核酸分子，所述分子僅由于遺傳密碼簡并性而在密碼子序列上與根據(jù)權(quán)利要求17所述的核酸分子不同。
19.根據(jù)權(quán)利要求17所述的分離核酸分子，包含由SEQID NO. 8表示的序列。
20.一種載體，包含根據(jù)權(quán)利要求8-19任意一項所述的分離核酸分子。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的載體，其特征在于，所述核酸分子可操作地與啟動子連接。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的載體，所述載體是表達(dá)載體。
23.—種包含根據(jù)權(quán)利要求20-22任意一項所述的載體的細(xì)胞。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的細(xì)胞，是選自植物細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞、真菌細(xì)胞、細(xì)菌細(xì)胞或哺乳動物細(xì)胞的宿主細(xì)胞。
25.一種包含由權(quán)利要求I所定義的多肽或由權(quán)利要求7所定義的蛋白的組合物。
26.一種包含根據(jù)權(quán)利要求2或5任意一項所述的分離多肽、或含有所述分離多肽的蛋白或編碼所述分離多肽的核酸的組合物，用于治療葡萄糖代謝相關(guān)疾病。
27.一種包含根據(jù)權(quán)利要求2或5任意一項所述的分離多肽、或含有所述分離多肽的蛋白或編碼所述分離多肽的核酸的組合物，其特征在于，所述組合物用于至少一種以下情況: 增加葡萄糖代謝、誘導(dǎo)胰島素受體表達(dá)、誘導(dǎo)Glut-4轉(zhuǎn)運(yùn)子轉(zhuǎn)移至質(zhì)膜、誘導(dǎo)葡萄糖流入、 誘導(dǎo)糖原合成以及誘導(dǎo)糖酵解和脂肪酸合成。
28.一種包含根據(jù)權(quán)利要求2或5任意一項所述的分離多肽、或含有所述分離多肽的蛋白或編碼所述分離多肽的核酸的組合物，用于治療選自以下的疾病糖尿病、代謝綜合征、 肥胖、內(nèi)分泌疾病和肌肉疾病。
29.一種包含根據(jù)權(quán)利要求3所述的分離多肽、或含有所述分離多肽的蛋白或編碼所述分離多肽的核酸的組合物，用于增加睪酮產(chǎn)生。
30.一種包含根據(jù)權(quán)利要求3所述的分離多肽、或含有所述分離多肽的蛋白或編碼所述分離多肽的核酸的組合物，用于治療睪酮缺乏或睪酮缺乏相關(guān)疾病。
31.一種包含根據(jù)權(quán)利要求4所述的分離多肽、或含有所述分離多肽的蛋白或編碼所述分離多肽的核酸的組合物，用于治療癌癥。
32.一種包含根據(jù)權(quán)利要求4所述的分離多肽、或含有所述分離多肽的蛋白或編碼所述分離多肽的核酸的組合物，用于誘導(dǎo)P53表達(dá)。
33.根據(jù)權(quán)利要求25-30任意一項所述的組合物，進(jìn)一步包含一種制藥學(xué)可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。
34.根據(jù)權(quán)利要求I所述的多肽或根據(jù)權(quán)利要求7所述的蛋白或編碼所述多肽或蛋白的核酸在制備治療疾病或紊亂的藥物中的應(yīng)用，所述疾病或紊亂選自具有免疫學(xué)因素或病因的疾病、傳染病、急性和慢性炎性疾病、癌癥、移植病和自體免疫性疾病、與生育相關(guān)的疾病和碳水化合物代謝紊亂、糖尿病、代謝綜合征、肥胖、內(nèi)分泌疾病和肌肉疾病。
35.根據(jù)權(quán)利要求2或5任意一項所述的多肽或蛋白或包含所述多肽或蛋白的蛋白或編碼所述多肽或蛋白的核酸在制備用于治療葡萄糖代謝相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用。
36.根據(jù)權(quán)利要求2或5任意一項所述的多肽或蛋白或包含所述多肽或蛋白的蛋白或編碼所述多肽或蛋白的核酸在制備用于治療選自糖尿病、代謝綜合征、肥胖、內(nèi)分泌疾病和肌肉疾病的疾病的藥物中的應(yīng)用。
37.根據(jù)權(quán)利要求3所述的多肽或蛋白或包含所述多肽或蛋白的蛋白或編碼所述多肽或蛋白的核酸在制備用于治療睪酮缺乏或睪酮缺乏相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用。
38.根據(jù)權(quán)利要求4所述的多肽或蛋白或包含所述多肽或蛋白的蛋白或編碼所述多肽或蛋白的核酸在制備用于治療癌癥的藥物中的應(yīng)用。
39.一種用于在需要的個體中治療疾病或紊亂的方法，包括對所述個體施用治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求I所述的多肽或權(quán)利要求7所述的蛋白或包含所述多肽或蛋白的組合物，所述疾病或紊亂選自具有免疫學(xué)因素或病因的疾病、傳染病、急性和慢性炎性疾病、癌癥、移植病和自體免疫性疾病、與生育相關(guān)的疾病和碳水化合物代謝紊亂。
40.一種用于治療葡萄糖代謝相關(guān)疾病的方法，所述方法包括對需要的個體施用治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求2或5所述的多肽或包含所述多肽的組合物。
41.一種用于治療選自糖尿病、代謝綜合征、肥胖、內(nèi)分泌疾病和肌肉疾病的疾病的方法，所述方法包括對需要的個體施用治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求2或5所述的多肽或包含所述多肽的組合物。
42.一種用于增加葡萄糖代謝的方法，所述方法包括對需要的個體施用治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求2或5所述的多肽或包含所述多肽的組合物。
43.一種用于誘導(dǎo)胰島素受體表達(dá)的方法，所述方法包括對需要的個體施用治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求2所述的多肽或包含所述多肽的組合物。
44.一種用于誘導(dǎo)胰島素受體表達(dá)的方法，所述方法包括用有效量的PRT5、它的生物學(xué)活性片段或衍生物或包含它的組合物接觸細(xì)胞。
45.一種用于治療睪酮缺乏相關(guān)疾病的方法，所述方法包括對需要的個體施用治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求3所述的多肽或包含所述多肽的組合物。
46.一種用于增加睪酮產(chǎn)生的方法，所述方法包括對需要的個體施用治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求3所述的多肽或包含所述多肽的組合物。
47.一種用于治療癌癥的方法，所述方法包括對需要的個體施用治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求4所述的多肽或包含所述多肽的組合物。
48.一種誘導(dǎo)p53表達(dá)的方法，所述方法包括用有效量的PRT7或其生物學(xué)活性片段或衍生物或包含其的組合物接觸細(xì)胞。
49.一種特異識別權(quán)利要求I所述的分離多肽或權(quán)利要求7所述的蛋白，或其任何片段或衍生物的抗體。
50.一種特異識別PRT5多肽或其任何片段或衍生物的抗體。
51.根據(jù)權(quán)利要求50所述的抗體，其特征在于，所述PRT5多肽由SEQID NO. I表示。
52.一種特異識別PRT6多肽或其任何片段或衍生物的抗體。
53.根據(jù)權(quán)利要求52所述的抗體，其特征在于，所述PRT6多肽由SEQID NO. 2表示。
54.一種特異識別PRT7多肽或其任何片段或衍生物的抗體。
55.根據(jù)權(quán)利要求54所述的抗體，其特征在于，所述PRT7多肽由SEQID NO. 3表示。
56.一種特異識別PRT8多肽或其任何片段或衍生物的抗體。
57.根據(jù)權(quán)利要求56所述的抗體，其特征在于，所述PRT8多肽由SEQID NO. 4表示。
58.一種包含根據(jù)權(quán)利要求49-57任意一項所述的抗體作為活性組分的組合物。
59.根據(jù)權(quán)利要求58所述的組合物，進(jìn)一步包含制藥學(xué)可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。
60.根據(jù)權(quán)利要求58或59任意一項所述的組合物，用于診斷方法或治療方法中。
61.一種根據(jù)權(quán)利要求58-63任意一項所述的組合物，其特征在于，所述抗體特異識別 PRT7或其任何片段或衍生物。
62.一種根據(jù)權(quán)利要求61所述的組合物，其特征在于，所述組合物用于癌癥的診斷。
63.一種產(chǎn)生抗體的細(xì)胞系，其特征在于，所述細(xì)胞系產(chǎn)生根據(jù)權(quán)利要求49-57任意一項所述的抗體。
64.一種由權(quán)利要求63的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體。
65.根據(jù)權(quán)利要求49所述的抗體在制備用于診斷疾病或紊亂的診斷組合物中的應(yīng)用， 所述疾病或紊亂選自具有免疫學(xué)因素或病因的疾病、傳染病、急性和慢性炎性疾病、癌癥、 移植病和自體免疫性疾病、與生育相關(guān)的疾病和碳水化合物代謝紊亂。
66.根據(jù)權(quán)利要求54-55任意一項所述的抗體在制備用于癌癥診斷的診斷組合物中的應(yīng)用。
67.根據(jù)權(quán)利要求66所述的應(yīng)用，其特征在于，所述癌癥是肺癌或胰腺癌中的一種。
68.根據(jù)權(quán)利要求49所述的抗體在制備用于治療疾病或紊亂的治療組合物中的應(yīng)用， 所述疾病或紊亂選自具有免疫學(xué)因素或病因的疾病、傳染病、急性和慢性炎性疾病、癌癥、 移植病和自體免疫性疾病、與生育相關(guān)的疾病和碳水化合物代謝紊亂。
69.一種用于在需要的個體中治療疾病或紊亂的方法，包括對所述個體施用治療有效劑量的根據(jù)權(quán)利要求49的抗體或包含所述抗體的組合物,所述疾病或紊亂選自具有免疫學(xué)因素或病因的疾病、傳染病、急性和慢性炎性疾病、癌癥、移植病和自體免疫性疾病、與生育相關(guān)的疾病和碳水化合物代謝紊亂。
70.一種用于診斷個體中的疾病或紊亂的方法，所述疾病或紊亂選自具有免疫學(xué)因素或病因的疾病、傳染病、急性和慢性炎性疾病、癌癥、移植病和自體免疫性疾病、與生育相關(guān)的疾病和碳水化合物代謝紊亂，所述方法包括步驟a、提供來自所述個體的樣品；b、用根據(jù)權(quán)利要求49所述的抗體或包含所述抗體的組合物接觸所述樣品；C、通過檢測方法檢測所述抗體和它的特異抗原之間的復(fù)合物的形成；從而檢測到復(fù)合物表示所述個體患有所述疾病或紊亂。
71.一種用于診斷個體中的癌癥的方法，所述方法包括步驟a、提供來自所述個體的樣品；b、用根據(jù)權(quán)利要求54-55任意一項所述的抗體或包含所述抗體的組合物接觸所述樣品;C、通過檢測方法檢測所述抗體和它的特異抗原之間的復(fù)合物的形成；從而檢測到復(fù)合物表示所述個體患有癌癥。
72.一種用于診斷樣品中的癌癥的方法，所述方法包括檢測取自個體的樣品中PRT7多肽或包含所述多肽的蛋白的存在，從而存在的PRT7的水平高于對照的樣品指示癌癥的存在。
73.根據(jù)權(quán)利要求70或71任意一項所述的方法，其特征在于，所述癌癥是肺癌或胰腺癌。
74.一種用于診斷疾病或紊亂和/或監(jiān)測疾病或紊亂的治療功效和/或評估疾病或紊亂的預(yù)后的診斷試劑盒，所述疾病或紊亂選自具有免疫學(xué)因素或病因的疾病、傳染病、急性和慢性炎性疾病、癌癥、移植病和自體免疫性疾病、與生育相關(guān)的疾病以及碳水化合物代謝紊亂，所述試劑盒包括以下成分a、根據(jù)權(quán)利要求49所述的抗體或包含所述抗體的組合物；b、用于完成檢測樣品中抗原存在的說明書，其中所述抗原被所述抗體特異識別。
75.根據(jù)權(quán)利要求74所述的試劑盒，進(jìn)一步包括至少一種以下成分a、至少一種用于收集被測樣品的工具；b、至少一種用于檢測所述抗原被所述抗體識別所必需的試劑；和 C、至少一種對照樣品。
全文摘要
本發(fā)明提供四種命名為PRT5、PRT6、PRT7和PRT8的多肽、編碼所述多肽的核酸、包含所述蛋白的組合物以及它們在治療方法和診斷方法中的應(yīng)用。本發(fā)明同樣提供特異識別所述多肽的抗體以及它們的應(yīng)用。每一種蛋白的表征顯示，PRT5和PRT8涉及葡萄糖代謝，PRT6涉及雄激素調(diào)節(jié)，而PRT7與癌癥相關(guān)。
文檔編號A61K39/395GK102596247SQ201080044688
公開日2012年7月18日 申請日期2010年8月2日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月2日
發(fā)明者塔瑪拉·桑德勒, 奧利·德瓦瑞 申請人:兩合生物科技公司