專(zhuān)利名稱(chēng)：用于在對(duì)象中調(diào)節(jié)smn2剪接的組合物和方法
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背景技術(shù)：
新合成的真核mRNA分子，稱(chēng)為初級(jí)轉(zhuǎn)錄物或mRNA前體，在翻譯前被加工。mRNA前體的加工包括添加5’甲基化帽和在轉(zhuǎn)錄物的3’末端加上約200-250個(gè)堿基的poly (A)尾。從mRNA前體到mRNA的加工經(jīng)常還包括mRNA前體的剪接，其發(fā)生在90-95%哺乳動(dòng)物mRNA的成熟過(guò)程中。內(nèi)含子(或插入序列)是mRNA前體中的某些區(qū)域，其不包含在成熟mRNA的編碼序列中。外顯子是初級(jí)轉(zhuǎn)錄物的某些區(qū)域，其仍保留在成熟mRNA中。外顯子被剪接在一起，以形成成熟的mRNA序列。剪接結(jié)點(diǎn)也被稱(chēng)作剪接點(diǎn)，其中結(jié)點(diǎn)的Y端通常稱(chēng)作“5'剪接位點(diǎn)”或“剪接供體位點(diǎn)”，而3,端則稱(chēng)作“3'剪接位點(diǎn)”或“剪接受體位點(diǎn)”。在剪接過(guò)程中，上游外顯子的3’末端與下游外顯子的5’末端連接。這樣，未剪接的mRNA前體在內(nèi)含子的5’末端具有一個(gè)外顯子/內(nèi)含子結(jié)點(diǎn)，且在內(nèi)含子的3’末端具有一個(gè)內(nèi)含子/外顯子結(jié)點(diǎn)。將內(nèi)含子除去后，在成熟mRNA的有時(shí)被稱(chēng)作外顯子/外顯子結(jié)點(diǎn)或邊界的地方，外顯子是連續(xù)的。隱蔽剪接位點(diǎn)在通常情況下很少使用，但當(dāng)通常的剪接位點(diǎn)被阻斷或無(wú)法利用時(shí)可以使用?？勺兗艚颖欢x為將不同組合的外顯子剪接在一起，通?？梢詮膯蝹€(gè)基因得到多種mRNA轉(zhuǎn)錄物。點(diǎn)突變可導(dǎo)致mRNA前體加工異常，高達(dá)50 %的人類(lèi)遺傳病是由這樣的點(diǎn)突變導(dǎo)致的。此類(lèi)點(diǎn)突變可以破壞目前使用的剪接位點(diǎn)，或者可以創(chuàng)造出新的剪接位點(diǎn)，導(dǎo)致產(chǎn)生的mRNA轉(zhuǎn)錄物包含不同組合的外顯子或出現(xiàn)外顯子缺失。點(diǎn)突變還能導(dǎo)致隱蔽剪接位點(diǎn)的激活或破壞調(diào)控順式元件(即剪接增強(qiáng)子或沉默子)(Cartegni et al. , Nat. Rev.Genet. ,2002,3,285-298 ；Drawczak et al. , Hum. Genet. , 1992,90,41-54)。將反義寡核苷酸已被用于靶向作用于那些在某些遺傳病中導(dǎo)致異常剪接的突變，以重新剪接并獲得所需的剪接產(chǎn)物(Kole, Acta Biochimica Polonica，1997，44，231-238)。反義化合物還可用于改變天然存在的可變剪接變體的比率，如Bcl-x mRNA前體的長(zhǎng)型或短型(美國(guó)專(zhuān)利6，172，216 ;美國(guó)專(zhuān)利6，214，986 ；Taylor et al.，Nat.Biotechnol. 1999，17，1097-1100)，或用于強(qiáng)行跳過(guò)包含提前終止的密碼子的特定外顯子(Wilton et al.，Neuromuscul. Disord.，1999，9，330-338)。美國(guó)專(zhuān)利 5，627，274 和 WO94/26887公開(kāi)了組合物和方法，其使用不激活RNAse H的反義寡核苷酸，來(lái)對(duì)抗包含突變的mRNA前體分子的異常剪接。近端型脊髓性肌萎縮癥(SMA)是一種遺傳性的、神經(jīng)退行性病變，其特征為脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的喪失。SMA是一種發(fā)病較早的常染色體隱性遺傳病，是目前導(dǎo)致嬰兒死亡的首要原因。SMA在不同患者中的嚴(yán)重性不同，因此將其分成三類(lèi)。I型SMA是最嚴(yán)重的形式，患者在出生時(shí)或出生后6個(gè)月內(nèi)發(fā)病，一般在2歲以?xún)?nèi)死亡?；加蠭型SMA的兒童無(wú)法坐下或行走。II型SMA是中間形式，患者能夠坐下，但不能站立或行走?；颊呋加蠭II型SMA的，即該疾病的慢性形式，一般在出生后18個(gè)月后發(fā)展成SMA(Lefebvre et al. ,Hum. Mol.Genet. ，1998，7，1531-1536)。導(dǎo)致SMA的分子機(jī)制是運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活基因I (SMNl)的兩個(gè)拷貝均缺失，SMNl也稱(chēng)為SMN端粒，這種蛋白是一種多蛋白復(fù)合物的一部分，該多蛋白復(fù)合物被認(rèn)為參與小核糖核酸蛋白snRNP生物合成和循環(huán)。在染色體5ql3的復(fù)制區(qū)存在一個(gè)基本相同的基因SMN2，也稱(chēng)為SMN著絲粒，其調(diào)節(jié)疾病的嚴(yán)重程度。正常SMNl基因的表達(dá)僅導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活基因(SMN)蛋白的表達(dá)。盡管SMNl和SMN2都能夠編碼相同的蛋白，但SMN2在其外顯子7的+6位含有翻譯沉默突變，會(huì)導(dǎo)致在SMN2轉(zhuǎn)錄物中外顯子7的包含不足。這樣，SMN2主要形成為被截短的版本，缺乏外顯子7，其不穩(wěn)定且無(wú)活性(Cartegni and Krainer7Nat.Genet.，2002，30，377-384)。SMN2 基因表達(dá)產(chǎn)生約 10-20% 的 SMN 蛋白和 80-90%不穩(wěn)定 /非功能性的SMNA 7蛋白。SMN蛋白在剪接體裝配過(guò)程中的作用已被驗(yàn)證，且其還可以介導(dǎo)mRNA在神經(jīng)元的軸突和神經(jīng)末梢間的轉(zhuǎn)運(yùn)。反義技術(shù)可有效調(diào)節(jié)一種或多種特定基因產(chǎn)物，包括可變剪接產(chǎn)物的表達(dá)，且其在多種治療、診斷和研究應(yīng)用上具有獨(dú)特的作用。反義技術(shù)的原理為，反義化合物可與靶核酸雜交，通過(guò)多種反義機(jī)制之一調(diào)節(jié)基因表達(dá)的活性，例如轉(zhuǎn)錄、剪接或翻譯。反義化合物的序列特異性使其成為一種極具吸引力的工具，用于靶點(diǎn)驗(yàn)證和基因功能化，以及作為治療手段用于選擇性調(diào)節(jié)疾病相關(guān)基因的表達(dá)。本領(lǐng)域已知某些與SMN2互補(bǔ)的反義化合物，參見(jiàn)例如，WO 2007/002390 ；US61/168, 885 ；Hua et al. ,American J. of Human Genetics(April 2008)82，1-15 ;Singhet al.，RNA Bio. 6 3,1-10 (2009) 0與本領(lǐng)域已知的此類(lèi)化合物和方法相比，本文所公開(kāi)的某些反義化合物和方法具有所需的特性。已有專(zhuān)利描述了被設(shè)計(jì)用于調(diào)節(jié)SMN2剪接的嵌合妝核酸分子(W0 02/38738 ；Cartegni and Krainer, Nat. Struct. Biol. , 2003,10,120-125)。發(fā)明概述在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了方法，其包括向?qū)ο蠼o藥包含反義寡核苷酸的反義化合物，該反義化合物互補(bǔ)于人SMN2 mRNA前體的編碼核酸的內(nèi)含子7，其中反義化合物給藥至腦脊液(CSF)中。在某些實(shí)施方式中，所述給藥是至鞘內(nèi)空隙。在某些實(shí)施方式中，所述給藥是至腦內(nèi)的腦脊液。在某些實(shí)施方式中，所述給藥包含推注注射。在某些實(shí)施方式中，所述給藥包含利用遞送泵輸注。在某些實(shí)施方式中，所述反義化合物的給藥劑量為O. 01至10毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。在某些實(shí)施方式中，劑量為O. 01至10毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。在某些實(shí)施方式中，劑量為O. 01至5毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。在某些實(shí)施方式中，劑量為O. 05至I毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。在某些實(shí)施方式中，劑量為O. 01至O. 5毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。在某些實(shí)施方式中，劑量為O. 05至O. 5毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。 在某些實(shí)施方式中，每日給藥所述劑量。在某些實(shí)施方式中，每周給藥所述劑量。在某些實(shí)施方式中，連續(xù)給藥反義化合物，且所述劑量是每日給藥的劑量。在某些實(shí)施方式中，該方法包含在誘導(dǎo)期給藥至少一個(gè)誘導(dǎo)劑量以及在維持期給藥至少一個(gè)維持劑量。在某些實(shí)施方式中，誘導(dǎo)劑量為O. 05至5. O毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。在某些實(shí)施方式中，維持劑量為O. 01至I. O毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。在某些實(shí)施方式中，誘導(dǎo)期的持續(xù)時(shí)間為至少I(mǎi)周。在某些實(shí)施方式中，維持期的持續(xù)時(shí)間為至少I(mǎi)周。在某些實(shí)施方式中，各個(gè)誘導(dǎo)劑量和各個(gè)維持劑量均包含單次注射。在某些實(shí)施方式中，各個(gè)誘導(dǎo)劑量和各個(gè)維持劑量均獨(dú)立地包含兩次或更多注射。在某些實(shí)施方式中，在至少I(mǎi)周的治療期內(nèi)，給藥反義化合物至少兩次。在某些實(shí)施方式中，治療期為至少一個(gè)月。在某些實(shí)施方式中，治療期為至少2個(gè)月。在某些實(shí)施方式中，治療期為至少4個(gè)月。在某些實(shí)施方式中，通過(guò)一次或更多推注注射給藥誘導(dǎo)劑量，以及通過(guò)輸液泵給藥維持劑量。在某些實(shí)施方式中，該方法包含評(píng)估反義化合物的耐受性和/或有效性。在某些實(shí)施方式中，當(dāng)出現(xiàn)反義化合物給藥不耐受的指征時(shí)，降低反義化合物的給藥劑量或給藥頻率。在某些實(shí)施方式中，當(dāng)出現(xiàn)反義化合物給藥有效的指征后，維持或降低反義化合物的給藥劑量或給藥頻率。在某些實(shí)施方式中，當(dāng)出現(xiàn)反義化合物給藥無(wú)效的指征后，增加反義化合物的給藥劑量。在某些實(shí)施方式中，當(dāng)出現(xiàn)反義化合物給藥有效的指征后，降低反義化合物的給藥頻率。在某些實(shí)施方式中，當(dāng)出現(xiàn)反義化合物給藥無(wú)效的指征后，增加反義化合物的給藥頻率。在某些實(shí)施方式中，該方法包括將反義化合物與至少一種其他療法聯(lián)合給藥。在某些實(shí)施方式中，反義化合物與至少一種其他療法同時(shí)聯(lián)合給藥。在某些實(shí)施方式中，在至少一種其他療法給藥前，給藥反義化合物。在某些實(shí)施方式中，在至少一種其他療法給藥之后，給藥反義化合物。在某些實(shí)施方式中，所述至少一種其他療法包括，給藥丙戊酸、利魯唑、羥基脲和丁酸鹽中的一種或更多種。在某些實(shí)施方式中，所述至少一種其他療法包括給藥曲古霉素-A。在某些實(shí)施方式中，至少一種其他療法包括給藥干細(xì)胞。在某些實(shí)施方式中，至少一種其他療法為基因治療。在某些實(shí)施方式中，基因治療給藥至CSF以及反義化合物給藥至全身。在某些實(shí)施方式中，基因治療給藥至CSF，以及反義化合物給藥至全身和CSF0在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了治療方案，其中初始時(shí)給藥反義化合物至CSF和全身，隨后給藥基因治療至CSF，并將反義化合物給藥至全身。在某些此類(lèi)實(shí)施方式中，在初始治療時(shí)對(duì)象為嬰兒。在某些此類(lèi)實(shí)施方式中，對(duì)象為2歲以下。在某些實(shí)施方式中，在對(duì)象的年齡足以接受基因治療以前，將反義化合物給藥至對(duì)象的中樞神經(jīng)系統(tǒng)。在某些此類(lèi)實(shí)施方式中，反義化合物自始自終全身給藥。在某些實(shí)施方式中，反義化合物的給藥濃度為約O. 01mg/ml、約O. 05mg/ml、約O. lmg/ml、約 O. 5mg/ml、約 lmg/ml、約 5mg/ml、約 10mg/ml、約 50mg/ml 或約 100mg/ml。在某些實(shí)施方式中，在對(duì)象的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中，SMN2mRNA對(duì)外顯子7的包含增力卩。在某些實(shí)施方式中，在對(duì)象的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中，SMN2多肽對(duì)外顯子7氨基酸的包含增加。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供在對(duì)象的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中增加SMN2mRNA對(duì)外顯子7的包含的方法，包括向?qū)ο蠼o藥含有反義寡核苷酸的反義化合物，所述反義寡核苷酸互補(bǔ)于人SMN2編碼核酸的內(nèi)含子7，進(jìn)而在對(duì)象的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中增加SMN2mRNA對(duì)外顯子7的包含。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供在對(duì)象的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中增加SMN2多肽對(duì)外顯子7氨基酸的包含的方法，包括向?qū)ο蠼o藥含有反義寡核苷酸的反義化合物，所述反義寡核苷酸互補(bǔ)于人SMN2編碼核酸的內(nèi)含子7，進(jìn)而在對(duì)象的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中增加SMN2多肽對(duì)外顯子、7氨基酸的包含。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象患有SMA。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象患有I型SMA。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象患有II型SMA。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象患有III型SMA。在某些實(shí)施方式中，在子宮內(nèi)進(jìn)行第一次給藥。在某些實(shí)施方式中，在血腦屏障完全形成前進(jìn)行所述第一次給藥。在某些實(shí)施方式中，在對(duì)象出生I周內(nèi)進(jìn)行第一次給藥。在某些實(shí)施方式中，在對(duì)象出生I個(gè)月內(nèi)進(jìn)行第一次給藥。在某些實(shí)施方式中，在對(duì)象出生3個(gè)月內(nèi)進(jìn)行第一次給藥。在某些實(shí)施方式中，在對(duì)象出生6個(gè)月內(nèi)進(jìn)行第一次給藥。在某些實(shí)施方式中，在對(duì)象I至2歲時(shí)進(jìn)行第一次給藥。在某些實(shí)施方式中，在對(duì)象I至15歲時(shí)進(jìn)行第一次給藥。在某些實(shí)施方式中，在對(duì)象15歲以上時(shí)進(jìn)行第一次給藥。 在某些實(shí)施方式中，對(duì)象為哺乳動(dòng)物。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象為人。在某些實(shí)施方式中，該方法包括識(shí)別患有SMA的對(duì)象。在某些實(shí)施方式中，通過(guò)測(cè)定對(duì)象一塊或更多塊肌肉的電活性來(lái)識(shí)別所述對(duì)象。在某些實(shí)施方式中，通過(guò)遺傳檢測(cè)以確定對(duì)象的SMNl基因中是否具有突變來(lái)識(shí)別所述對(duì)象。在某些實(shí)施方式中，通過(guò)肌肉組織活檢來(lái)識(shí)別所述對(duì)象。在某些實(shí)施方式中，所述反義化合物的給藥使得含有外顯子7的SMN2mRNA的量增加至少10%。在某些實(shí)施方式中，含有外顯子7的SMN2mRNA的量增加至少20%。在某些實(shí)施方式中，含有外顯子7的SMN2mRNA的量增加至少50%。在某些實(shí)施方式中，含有外顯子7的SMN2mRNA的量增加至少70%。在某些實(shí)施方式中，所述反義化合物的給藥使得含有外顯子7氨基酸的SMN2多肽的量增加至少10%。在某些實(shí)施方式中，含有外顯子7氨基酸的SMN2多肽的量增加至少20%。在某些實(shí)施方式中，含有外顯子7氨基酸的SMN2多肽的量增加至少50%。在某些實(shí)施方式中，含有外顯子7氨基酸的SMN2多肽的量增加至少70%。在某些實(shí)施方式中，所述反義化合物的給藥能在所述對(duì)象中減輕SMA的至少一種癥狀。在某些實(shí)施方式中，所述反義化合物的給藥使得在所述對(duì)象中的運(yùn)動(dòng)功能改善。在某些實(shí)施方式中，所述反義化合物的給藥使得在所述對(duì)象的運(yùn)動(dòng)功能喪失被推遲或減少。在某些實(shí)施方式中，所述反義化合物的給藥使得呼吸功能改善。在某些實(shí)施方式中，所述反義化合物的給藥使得生存率改善。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸的至少一個(gè)核苷包含修飾的糖配基。在某些實(shí)施方式中，至少一種修飾的糖配基包含2’ -甲氧乙基糖配基。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸的各核苷基本上均包含修飾的糖配基。在某些實(shí)施方式中，包含修飾糖配基的核苷均包含相同的糖修飾。在某些實(shí)施方式中，其中各修飾的糖配基均包含2’ -甲氧乙基糖配基。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸的各核苷均包含修飾的糖配基。在某些實(shí)施方式中，核苷均包含相同的糖配基。在某些實(shí)施方式中，各修飾的糖配基均包含2’ -甲氧乙基糖配基。在某些實(shí)施方式中，至少一個(gè)核苷間連接為硫代磷酸酯核苷間連接。在某些實(shí)施方式中，各核苷間連接均為硫代磷酸酯核苷間連接。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸由10至25個(gè)連接的核苷組成。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸由12至22個(gè)連接的核苷組成。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸由15至20個(gè)連接的核苷組成。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸由18個(gè)連接的核苷組成。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸與人SMN2的編碼核酸具有至少90 %的互補(bǔ)性。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸與人SMN2的編碼核酸完全互補(bǔ)。在某些實(shí)施方式中，寡核苷酸具有核堿基序列，所述核堿基序列包含SEQ ID NO: I的核堿基序列中至少10個(gè)連續(xù)核堿基。在某些實(shí)施方式中，寡核苷酸具有核堿基序列，所述核堿基序列包含SEQ ID ΝΟ1的核堿基序列中至少15個(gè)連續(xù)核堿基。在某些實(shí)施方式中，寡核苷酸具有核堿基序列，所述核堿基序列包含SEQ ID NO: I的核堿基序列。在某些實(shí)施方式中，寡核苷酸具有核堿基序列，所述核堿基序列由SEQ ID NO : I的核堿基序列組成。在某些實(shí)施方式中，反義化合物包含綴合基團(tuán)或末端基團(tuán)。 在某些實(shí)施方式中，反義化合物由反義寡核苷酸組成。在某些實(shí)施方式中，反義化合物也可以全身給藥。在某些實(shí)施方式中，全身給藥是通過(guò)靜脈或腹腔注射。在某些實(shí)施方式中，全身給藥和給藥至中樞神經(jīng)系統(tǒng)同時(shí)進(jìn)行。在某些實(shí)施方式中，全身給藥和給藥至中樞神經(jīng)系統(tǒng)在不同時(shí)間進(jìn)行。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了將反義化合物全身給藥，可以單獨(dú)進(jìn)行，或者與遞送至CSF聯(lián)合進(jìn)行。在某些實(shí)施方式中，將藥物組合物全身給藥。在某些實(shí)施方式中，將藥物組合物皮下給藥。在某些實(shí)施方式中，將藥物組合物靜脈給藥。在某些實(shí)施方式中，將藥物組合物肌內(nèi)注射給藥。在某些實(shí)施方式中，將藥物組合物直接給藥至CSF(例如，IT和/或ICV注射和/或輸注)并且全身給藥。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了方法，包括向?qū)ο蠼o藥至少一劑量的反義化合物，所述對(duì)象具有與SMA相關(guān)的至少一種癥狀，所述反義化合物包含由15至20個(gè)連接的核苷組成的寡核苷酸，并且具有核堿基序列，所述核堿基序列的全長(zhǎng)與SEQ ID NO. 7的核堿基序列具有100%互補(bǔ)性，且其中各核苷均為2’ -MOE修飾的核苷；且其中至少一劑量在O. lmg/kg至5mg/kg之間且給藥至CSF。在某些此類(lèi)實(shí)施方式中，所述劑量在O. 5mg/kg至2mg/kg之間。在某些實(shí)施方式中，至少一劑量通過(guò)推注注射給藥。在某些此類(lèi)實(shí)施方式中，所述劑量通過(guò)鞘內(nèi)推注注射給藥。在某些實(shí)施方式中，至少再給藥一次。在某些此類(lèi)實(shí)施方式中，在第一次給藥至少2周后，進(jìn)行第二次給藥。在某些實(shí)施方式中，在第一次給藥至少4周后，進(jìn)行第二次給藥。在某些實(shí)施方式中，在第一次給藥至少8周后，進(jìn)行第二次給藥。在某些實(shí)施方式中，在第一次給藥至少12周后，進(jìn)行第二次給藥。在某些實(shí)施方式中，在第一次給藥至少16周后，進(jìn)行第二次給藥。在某些實(shí)施方式中，在第一次給藥至少20周后，進(jìn)行第二次給藥。在某些實(shí)施方式中，在第一次給藥時(shí)，對(duì)象在2歲以下。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象在2至15歲之間。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象在15至30歲之間。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象為30歲以上。在某些實(shí)施方式中，與SMA相關(guān)的至少一種癥狀減輕，其進(jìn)展減慢。在某些實(shí)施方式中，寡核苷酸為ISIS396443。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了方法，包括向?qū)ο蠼o藥至少一劑量的反義化合物，所述對(duì)象具有與SMA相關(guān)的至少一種癥狀，所述反義化合物包含由15至20個(gè)連接的核 苷組成的寡核苷酸，并且具有核堿基序列，所述核堿基序列的全長(zhǎng)與SEQ ID NO. 7的核堿基序列具有100%互補(bǔ)性，且其中各核苷均為2’ -MOE修飾的核苷；且其中至少一劑量為全身給藥。在某些此類(lèi)實(shí)施方式中，所述至少一劑量通過(guò)推注注射給藥。在某些此類(lèi)實(shí)施方式中，所述劑量通過(guò)皮下推注注射給藥。在某些實(shí)施方式中，給藥劑量為O. 5mg/kg至50mg/kg之間。在某些實(shí)施方式中，給藥劑量為lmg/kg至10mg/kg之間。在某些實(shí)施方式中,給藥劑量為lmg/kg至5mg/kg之間。在某些實(shí)施方式中，給藥劑量為0. 5mg/kg至lmg/kg之間。在某些實(shí)施方式中，至少再給藥一次。在某些此類(lèi)實(shí)施方式中，在第一次給藥至少2周后，進(jìn)行第二次給藥。在某些實(shí)施方式中，在第一次給藥至少4周后，進(jìn)行第二次給藥。在某些實(shí)施方式中，在第一次給藥至少8周后，進(jìn)行第二次給藥。在某些實(shí)施方式中，在第一次給藥至少12周后，進(jìn)行第二次給藥。在某些實(shí)施方式中，在第一次給藥至少16周后，進(jìn)行第二次給藥。在某些實(shí)施方式中，在第一次給藥至少20周后，進(jìn)行第二次給藥。在某些實(shí)施方式中，第一次給藥時(shí)對(duì)象在2歲以下。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象在2至15歲之間。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象在15至30歲之間。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象為30歲以上。在某些實(shí)施方式中，與SMA相關(guān)的至少一種癥狀減輕，其進(jìn)展減慢。在某些實(shí)施方式中，寡核苷酸為ISIS396443。 在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了方法，包括將至少一劑量的反義化合物向?qū)ο蠼o藥至CSF以及至少一劑量全身給藥，所述對(duì)象具有與SMA相關(guān)的至少一種癥狀，所述反義化合物包含由15至20個(gè)連接的核苷組成的寡核苷酸，并且具有核堿基序列，所述核堿基序列的全長(zhǎng)與SEQ ID NO. 7的核堿基序列具有100%互補(bǔ)性，且其中各核苷均為2’_M0E修飾的核苷。在某些此類(lèi)實(shí)施方式中，CSF給藥的劑量為0. lmg/kg至5mg/kg之間。在某些實(shí)施方式中，全身給藥的劑量為0. 5mg/kg至50mg/kg之間。在某些實(shí)施方式中，至少一次CSF給藥通過(guò)推注注射給藥。在某些此類(lèi)實(shí)施方式中，至少一次CSF給藥通過(guò)鞘內(nèi)推注注射給藥。在某些實(shí)施方式中，至少一次全身給藥通過(guò)推注注射給藥。在某些此類(lèi)實(shí)施方式中，至少一次全身給藥通過(guò)皮下注射給藥。在某些實(shí)施方式中，CSF給藥和全身給藥同時(shí)進(jìn)行。在某些實(shí)施方式中，CSF給藥和全身給藥在不同的時(shí)間進(jìn)行。在某些實(shí)施方式中，第一次給藥時(shí)對(duì)象在2歲以下。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象在2至15歲之間。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象在15至30歲之間。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象為30歲以上。在某些實(shí)施方式中，與SMA相關(guān)的至少一種癥狀減輕，其進(jìn)展減慢。在某些實(shí)施方式中，寡核苷酸為ISIS396443。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了方法，包括向?qū)ο蠼o藥至少一全身給藥劑量的反義化合物，所述對(duì)象具有與SMA相關(guān)的至少一種癥狀，所述反義化合物包含由15至20個(gè)連接的核苷組成的寡核苷酸，并且具有核堿基序列，所述核堿基序列的全長(zhǎng)與SEQ ID NO. 7的核堿基序列具有100%互補(bǔ)性，且其中各核苷均為2’ -MOE修飾的核苷；以及至少一劑量的基因治療劑。在某些實(shí)施方式中，全身給藥劑量為0. 5mg/kg至50mg/kg之間。在某些實(shí)施方式中，至少一次全身給藥通過(guò)推注注射給藥。在某些此類(lèi)實(shí)施方式中，至少一次全身給藥通過(guò)皮下注射給藥。在某些實(shí)施方式中，全身給藥和基因治療劑給藥在同時(shí)進(jìn)行。在某些實(shí)施方式中，全身給藥和基因治療劑給藥在不同的時(shí)間進(jìn)行。在某些實(shí)施方式中，基因治療劑給藥至CSF。在某些此類(lèi)實(shí)施方式中，基因治療劑通過(guò)鞘內(nèi)注射和/或輸注給藥。在某些此類(lèi)實(shí)施方式中，基因治療劑通過(guò)腦室內(nèi)注射和/或輸注給藥。在某些實(shí)施方式中，第一次給藥時(shí)對(duì)象在2歲以下。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象在2至15歲之間。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象在15至30歲之間。在某些實(shí)施方式中，對(duì)象為30歲以上。在某些實(shí)施方式中，與SMA相關(guān)的至少一種癥狀減輕，其進(jìn)展減慢。在某些實(shí)施方式中，寡核苷酸為ISIS396443。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供方法，包括選擇具有至少一種與SMA相關(guān)的癥狀的對(duì)象，并按照上文所述的任意方法給藥反義化合物。在某些此類(lèi)實(shí)施方式中，在給藥后評(píng)估SMA的至少一種癥狀。在某些此類(lèi)實(shí)施方式中，SMA的至少一種癥狀被改善。在某些此類(lèi)實(shí)施方式中，與未給藥反義化合物的對(duì)象相比，SMA的至少一種癥狀未出現(xiàn)進(jìn)展或進(jìn)展更為緩慢。在某些此類(lèi)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供包含反義寡核苷酸的反義化合物，所述反義寡核苷酸互補(bǔ)于人SMN2編碼核酸的內(nèi)含子7，所述反義化合物用于上文所述的任意方法。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種此類(lèi)化合物，用于治療與存活運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元I(SMNl)相關(guān)的疾病或病癥。 在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供包含反義寡核苷酸的反義化合物用于在藥物生產(chǎn)中的用途，所述反義寡核苷酸互補(bǔ)于人SMN2編碼核酸的內(nèi)含子7，所述藥物用于上文所述的任意方法。在某些實(shí)施方式中，該藥物用于治療與存活運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元I(SMNl)相關(guān)的疾病或病癥。附圖的簡(jiǎn)要說(shuō)明圖I顯示了實(shí)施例4所述研究中作用持續(xù)時(shí)間的結(jié)果，其中評(píng)估了在7天治療結(jié)束后0、2、4、6和8周時(shí)(X-軸)SMN2中外顯子7的百分率(y-軸)。第“0”周樣品收集自治療結(jié)束后I天。CON表示生理鹽水治療組小鼠。在0至6個(gè)月的不同時(shí)間點(diǎn)接受生理鹽水治療的對(duì)照小鼠之間的百分率不存在差異。圖2顯示了實(shí)施例4所述研究中作用持續(xù)時(shí)間的結(jié)果，其中評(píng)估了在7天治療結(jié)束后0、0. 5、1、2、5和6個(gè)月時(shí)SMN2中外顯子7的百分率。第“0”周樣品收集自治療結(jié)束后I天。CON表示生理鹽水治療組小鼠。在0至6個(gè)月的不同時(shí)間點(diǎn)接受生理鹽水治療的對(duì)照小鼠之間的百分率不存在差異。圖3顯示了實(shí)施例6所述實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，檢測(cè)ISIS396443胚胎給藥對(duì)臺(tái)灣品系SMA小鼠尾長(zhǎng)的影響。圖3A為首次實(shí)驗(yàn)和圖3B為重復(fù)實(shí)驗(yàn)，對(duì)不同濃度的反義化合物進(jìn)行檢測(cè)，其中還包括正常小鼠的數(shù)據(jù)作為對(duì)照。圖4顯示了實(shí)施例7所述Western印跡的結(jié)果。Y軸為包含外顯子7的不同樣品的SMN百分率。圖5和6顯示了實(shí)施例7所述實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。向SMA小鼠(臺(tái)灣品系)給藥反義化合物或?qū)φ展押塑账岷髮?duì)其進(jìn)行的若干項(xiàng)評(píng)估。圖7顯示了實(shí)施例7所述實(shí)驗(yàn)的生存曲線(xiàn)。圖8顯示了如實(shí)施例7所述，用反義化合物或?qū)φ展押塑账崽幚砗螅瑢?duì)脊髓不同部分運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)量進(jìn)行評(píng)估的結(jié)果。圖9顯示了如實(shí)施例7所述,經(jīng)反義處理的動(dòng)物中，對(duì)全長(zhǎng)SMN RNA(包括外顯子7)進(jìn)行評(píng)估的結(jié)果。

圖10顯示了實(shí)施例7所述實(shí)驗(yàn)的生存曲線(xiàn)，其中動(dòng)物為(I)未治療；(2)在出生時(shí)(第PO天)給藥單劑量反義化合物；或(3)在PO時(shí)第一次給藥和在第21天(P21)時(shí)第
二次給藥。圖11顯示了實(shí)施例7所述實(shí)驗(yàn)的生存曲線(xiàn)，對(duì)接受第二次給藥的動(dòng)物與僅接受第一次給藥的動(dòng)物進(jìn)行比較。圖12顯示了實(shí)施例9所述實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，對(duì)猴鞘內(nèi)輸注給藥反義化合物，并評(píng)估96小時(shí)后不同組織中化合物的濃度。圖13顯示了實(shí)施例12所述實(shí)驗(yàn)的生存曲線(xiàn)，向患有嚴(yán)重SMA的小鼠皮下注射給藥不同劑量的反義化合物。發(fā)明詳述應(yīng)當(dāng)理解，前述一般性說(shuō)明和下文的詳細(xì)說(shuō)明僅為示例和解釋性的，并非限制本發(fā)明所要求的權(quán)利。除非另外特別指明，本發(fā)明中單數(shù)的使用包括復(fù)數(shù)。如本發(fā)明中使用的，除非另有指明，使用的“或”是指“和/或”。另外，術(shù)語(yǔ)“包括”以及諸如“包含”和“含有”的使用為非限制性的。另外，除非另外特別指明，諸如“元件”或“組分”等術(shù)語(yǔ)涵蓋包括一個(gè)單元的元件和組分以及包括超過(guò)一個(gè)亞單元的元件和組分。本發(fā)明使用的章節(jié)標(biāo)題僅為了組織性目的，不應(yīng)解釋為限制所描述的主題。本申請(qǐng)中引用的所有文件或部分文件，包括但不限于專(zhuān)利、專(zhuān)利申請(qǐng)、論文、書(shū)籍以及專(zhuān)題論文 等，在此明確地通過(guò)參考全文并入，用于任何目的。I.定義除非提供特殊定義，本發(fā)明所使用的術(shù)語(yǔ)與分析化學(xué)、合成有機(jī)化學(xué)以及醫(yī)用化學(xué)和藥物化學(xué)相關(guān)的術(shù)語(yǔ)及程序和技術(shù)均為本領(lǐng)域熟知和通用。標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)可用于化學(xué)合成和化學(xué)分析。某些此類(lèi)的技術(shù)和程序可以在下列文獻(xiàn)中找到，例如“CarbohydrateModifications in Antisense ResearchEdited by Sangvi and Cook,American ChemicalSociety, Washington D. C. , 1994 ;“Remington ' s Pharmaceutical Sciences”，MackPublishing Co. , Easton, Pa. ,18th edition,1990 ；和“Antisense Drug Technology,Principles, Strategies, and Applications，，Edited by Stanley T. Crooke, CRC Press,Boca Raton, Florida ；以及 Sambrook et al. , “Molecular Cloning, A laboratoryManual,” 2nd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989,其出于任何目的通過(guò)引用全文并入。在允許的情況下，本文通篇公開(kāi)內(nèi)容中所引用的所有專(zhuān)利、申請(qǐng)、公開(kāi)的申請(qǐng)和其他出版物以及其他數(shù)據(jù)均通過(guò)引用全文并入本文。除非另有說(shuō)明，下列術(shù)語(yǔ)具有以下含義“核苷”指包含雜環(huán)堿基配基和糖配基的化合物。核苷包括，但不限于，天然存在的核苷、修飾核苷，以及具有模擬堿基和/或糖基的核苷。核苷可以被任意種類(lèi)的取代基所修飾?！疤桥浠敝柑烊换蛐揎椀奶腔蛱翘娲??！疤烊坏奶恰敝窪NA (2’ -H)或RNA (2’ -0H)的呋喃核糖配基?！靶揎椀奶恰敝高秽颂桥浠?，其包含天然糖取代基以外的至少一個(gè)取代基?！疤翘娲铩敝赋秽颂且酝狻⒛軌蛱娲塑罩械奶堑慕Y(jié)構(gòu)。糖替代物的例子包括，但不限于，開(kāi)環(huán)系統(tǒng)、6元環(huán)、氧被取代的糖，例如氧被硫或氮取代。例如，糖替代物包括，但不限于嗎啉基取代和含4’ -硫的糖?！昂藟A基”指核苷的雜環(huán)堿基部分。核堿基可以是天然存在的也可以是被修飾的。在某些實(shí)施方式中，核堿基可以包含能夠與另一個(gè)核酸的核堿基形成氫鍵的任意原子或基團(tuán)?！昂塑账帷敝赴姿狨ミB接基團(tuán)的核苷。在本申請(qǐng)中，核苷包括核苷酸?！靶揎椀暮塑铡敝敢环N核苷，與天然存在的RNA或DNA核苷相比，其含有至少一種修飾。此類(lèi)修飾可以位于糖配基中和/或位于核堿基中?！半p環(huán)核苷”或“BNA”指一種核苷，其中所述核苷的糖配基包含一種橋，連接糖環(huán)中的兩個(gè)碳原子，以形成雙環(huán)糖配基?！?’ -2’雙環(huán)核苷”指包含呋喃環(huán)的雙環(huán)核苷，所述呋喃環(huán)含有一種橋，連接呋喃環(huán)上的兩個(gè)碳原子，將糖環(huán)的2’位碳原子和4’位碳原子連接。“2’ -修飾”或“2’ -取代”指包含糖的核苷，所述糖在2’位含有除H或OH以外的
取代基?！?’ -OMe”或“2’ _0CH3”或“2’ _0_甲基”均指包含糖的核苷，所述糖在糖環(huán)的2’位具有-OCH3基團(tuán)?！癕OE ”或“ 2 ’ -MOE ”或“ 2 ’ -OCH2CH2OCH3 ”或“ 2 ’ _0_甲氧乙基”均指包含糖的核
苷，所述糖在糖環(huán)的2’位具有-OCH2CH2OCH3基團(tuán)?！肮押塑账帷敝赴鄠€(gè)連接的核苷的化合物。在某些實(shí)施方式中，多個(gè)核苷中的一個(gè)或更多個(gè)被修飾。在某些實(shí)施方式中，寡核苷酸包含一個(gè)或更多個(gè)核糖核苷酸(RNA)和/或脫氧核糖核苷酸(DNA)?！肮押塑铡敝负塑臻g連接均不含磷原子的寡核苷酸。在本申請(qǐng)中，寡核苷酸包括寡核苷?！靶揎椀墓押塑账帷敝敢环N寡核苷酸，其包含至少一個(gè)修飾的核苷和/或至少一個(gè)修飾的核苷間連接?！昂塑臻g連接”指寡核苷酸的相鄰核苷之間的共價(jià)連接?！疤烊淮嬖诘暮塑臻g連接”指3'至5'的磷酸二酯鍵?！靶揎椀暮塑臻g連接”指除天然存在的核苷間連接以外的任意核苷間連接?！肮丫刍衔铩敝赴押塑账岬幕衔铩Ｔ谀承?shí)施方式中，寡聚化合物由寡核苷酸組成。在某些實(shí)施方式中，寡聚化合物進(jìn)一步包含一個(gè)或多個(gè)綴合和/或末端基團(tuán)?！胺戳x化合物”指一種寡聚化合物，其至少有一部分是至少部分互補(bǔ)于其所雜交的靶核酸，其中此類(lèi)雜交產(chǎn)生至少一種反義活性。“反義寡核苷酸”指一種反義化合物，其中所述寡聚化合物由寡核苷酸組成?！胺戳x活性”指因反義化合物與其靶核酸雜交所獲得的任何可檢測(cè)和/或可測(cè)定的效應(yīng)。在某些實(shí)施方式中，這樣的反義活性是核酸或蛋白的量增加或減少。在某些實(shí)施方式中，這樣的反義活性是核酸或蛋白的剪接變體比率的改變。在某些實(shí)施方式中，這樣的反義活性是細(xì)胞和/或?qū)ο蟮谋硇透淖?。反義活性的“檢測(cè)”或“測(cè)定”可以是直接的或間接的。例如，在某些實(shí)施方式中，通過(guò)檢測(cè)和/或測(cè)定靶核酸或蛋白的量，或靶核酸或蛋白的剪接變體的相對(duì)量對(duì)反義活性進(jìn)行評(píng)估。在某些實(shí)施方式中，通過(guò)觀察細(xì)胞或動(dòng)物的表型改變情況對(duì)反義活性進(jìn)行檢測(cè)。術(shù)語(yǔ)“檢測(cè)”和“測(cè)定”與任何活性、應(yīng)答或效應(yīng)相關(guān)時(shí)，是指為檢測(cè)或測(cè)定進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。此類(lèi)檢測(cè)和/或測(cè)定可以包括零值。因此，即使為檢測(cè)或測(cè)定而進(jìn)行的試驗(yàn)得到的結(jié)果為無(wú)活性(零活性)，然而檢測(cè)或測(cè)定活性的步驟已經(jīng)進(jìn)行?！鞍泻怂帷敝溉我夂怂岱肿?，其表達(dá)、量或活性能夠被反義化合物所調(diào)節(jié)?！鞍衜RNA”指預(yù)先選定的編碼某蛋白的RNA分子?！鞍衜RNA前體”指預(yù)先選定的未被完全加工、成mRNA的RNA轉(zhuǎn)錄物。值得注意的是，mRNA前體包括一個(gè)或多個(gè)內(nèi)含子。“靶蛋白”指由靶核酸編碼的蛋白。
“調(diào)節(jié)”指對(duì)功能或活性的干擾。在某些實(shí)施方式中，調(diào)節(jié)指增加基因表達(dá)。在某些實(shí)施方式中，調(diào)節(jié)指降低基因表達(dá)?！氨磉_(dá)”指任意功能和步驟，通過(guò)這樣的功能和步驟將基因編碼的信息轉(zhuǎn)化成細(xì)胞內(nèi)存在或操控的結(jié)構(gòu)。 “核堿基序列”指連續(xù)核堿基從5’至3’方向的順序，其與任意糖、連接和/或核堿基修飾無(wú)關(guān)?！斑B續(xù)核堿基”指在核酸中彼此直接相鄰的核堿基?！昂藟A基的互補(bǔ)性”指兩個(gè)核堿基通過(guò)氫鍵形成非共價(jià)配對(duì)的能力?！盎パa(bǔ)的”是指第一核酸在嚴(yán)格的雜交條件下能夠與第二核酸雜交。例如，如果在嚴(yán)格的雜交條件下，反義化合物能夠與靶核酸雜交，則反義化合物與其靶核酸是互補(bǔ)的。“完全互補(bǔ)的”是指第一核酸的各個(gè)核堿基均能夠與第二核酸中各個(gè)相應(yīng)連續(xù)位點(diǎn)的核堿基配對(duì)。反義化合物的“互補(bǔ)性百分率”是指，反義化合物中與靶核酸的等長(zhǎng)部分互補(bǔ)的核堿基的百分率。互補(bǔ)性百分率的計(jì)算方法為，將反義寡核苷酸中與靶核酸相應(yīng)連續(xù)位點(diǎn)的核堿基互補(bǔ)的核堿基的數(shù)目除以反義化合物的總長(zhǎng)?！巴恍园俜致省笔侵傅谝缓怂嶂信c第二核酸相應(yīng)位點(diǎn)具有相同核堿基的核堿基數(shù)目除以第一核酸中的核堿基總數(shù)?！半s交”指通過(guò)核堿基互補(bǔ)性進(jìn)行的互補(bǔ)核酸的退火?！板e(cuò)配”指第一核酸的核堿基無(wú)法與第二核酸相應(yīng)位點(diǎn)的核堿基進(jìn)行配對(duì)。“同一的核堿基序列”指具有相同的核堿基序列，其與核苷的任何化學(xué)修飾無(wú)關(guān)。
“不同修飾”或“不同的修飾”指核苷或核苷間連接之間具有不同的核苷修飾或核苷間連接，包括無(wú)修飾。因此，例如，MOE核苷和未修飾的DNA核苷之間為“不同的修飾”，雖然DNA核苷是未修飾的。同樣的，DNA與RNA之間為“不同的修飾”，即使它們均為天然存在的未修飾核苷。除包含不同的核堿基以外其他都相同的核苷不屬于不同的修飾，除非另有說(shuō)明。例如，包含2’ -OMe修飾糖和腺嘌呤核堿基的核苷與包含2’ -OMe修飾糖和胸腺嘧啶堿基的核苷之間不屬于不同的修飾。“相同修飾”指相互之間相同的核苷和核苷間連接(包括未修飾的核苷和核苷間連接)。因此，例如，兩個(gè)未修飾的DNA核苷具有“相同修飾”，即使DNA核苷是未修飾的?！靶揎楊?lèi)型”或核苷的“類(lèi)型”是指核苷的修飾，包括修飾的和未修飾的核苷。相應(yīng)地，除另有說(shuō)明外，“具有第一修飾類(lèi)型的核苷”可以是未修飾核苷。寡核苷酸的“分離區(qū)域”是指寡核苷酸的一部分，其中該區(qū)域內(nèi)的核苷和核苷間連接均包含相同的修飾；并且與其相鄰的任意部分的核苷和/或核苷間連接包含至少一種不同的修飾?！盎颉敝腹押塑账嶂行揎椇?或未修飾核堿基、糖和/或核苷間連接的樣式?！巴耆揎椀墓押塑账帷敝父骱藟A基、各糖、和/或各核苷間連接均被修飾?！熬恍揎椀墓押塑账帷敝冈谛揎椀墓押塑账嶂懈骱藟A基、各糖、和/或各核苷間連接均具有相同修飾?！敖惶娴幕颉敝腹押塑账峄蚱湟徊糠?，具有至少四個(gè)修飾核苷的分離區(qū)域，其樣式為(AB)nAm，其中A表示具有第一種修飾類(lèi)型的核苷區(qū)域出表示具有不同修飾類(lèi)型的核苷區(qū)域；11為2-15 ;且111為O或I。因此，在某些實(shí)施方式中，交替的基序包括4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20或更多的交替區(qū)域。在某些實(shí)施方式中，各A區(qū)域和各B區(qū)域均獨(dú)立地包含1-4個(gè)核苷。“對(duì)象”指入選進(jìn)行處理或治療的人或非人動(dòng)物?！靶枨髮?duì)象”指經(jīng)鑒定需要治療或處理的對(duì)象。在某些此類(lèi)實(shí)施方式中，對(duì)象具有一種或多種指征，表明患有SMA或正處于SMA發(fā)展過(guò)程中。“給藥”指向?qū)ο筇峁┧幬锘蚪M合物，包括，但不限于，由專(zhuān)業(yè)醫(yī)師給藥和自我給藥。“腸道外給藥”指通過(guò)注射或輸注給藥。腸道外給藥包括，但不限于，皮下給藥、靜脈給藥或肌內(nèi)給藥。
“全身給藥”指對(duì)除目標(biāo)活性部位以外的區(qū)域給藥。全身給藥的例子為皮下給藥和靜脈給藥，以及腹腔給藥?！捌は陆o藥”指在皮膚之下給藥?！办o脈給藥”指給藥至靜脈。“腦脊液”或“CSF”指充滿(mǎn)腦和脊髓內(nèi)空間的液體?！敖o藥至腦脊液”指將物質(zhì)直接遞送至CSF的任意給藥方法?！澳X室內(nèi)”或“ICV”指給藥至大腦的腦室系統(tǒng)(ventricular)?！扒蕛?nèi)”或“IT”指給藥至蛛網(wǎng)膜下腔的CSF，蛛網(wǎng)膜覆蓋于腦和脊髓之上。通過(guò)脊髓的鞘進(jìn)入蛛網(wǎng)膜下腔進(jìn)行IT注射，將藥物試劑注射入脊髓周?chē)那??！罢T導(dǎo)期”指一段給藥期，在此期間開(kāi)始給藥，并且活性藥物在靶組織中達(dá)到穩(wěn)態(tài)濃度。例如，誘導(dǎo)期是指反義寡核苷酸在肝臟中達(dá)到穩(wěn)態(tài)濃度前的給藥期?！熬S持期”指藥物在靶組織中達(dá)到穩(wěn)態(tài)濃度以后的給藥期?！俺掷m(xù)時(shí)間”指活性或事件持續(xù)的時(shí)間。例如，誘導(dǎo)期的持續(xù)時(shí)間是指采用誘導(dǎo)劑量給藥的時(shí)間?！熬S持劑量”是指在維持期內(nèi)進(jìn)行單次給藥的劑量。在本申請(qǐng)中，“誘導(dǎo)劑量”指在誘導(dǎo)期內(nèi)進(jìn)行單次給藥的劑量。“聯(lián)合給藥”指向?qū)ο蠼o藥兩種或更多種藥物。兩種或更多種藥物可以在一個(gè)藥物組合物中，或可以在不同的藥物組合物中。所述兩種或多種藥物的每一種可以通過(guò)相同或不同的途徑給藥。聯(lián)合給藥包括平行或順序給藥?！疤幚怼敝讣膊〉闹委煼椒?。在某些實(shí)施方式中，處理包括，但不限于手術(shù)處理、化學(xué)處理、和物理干預(yù)，如輔助呼吸、插導(dǎo)管、以及出于增強(qiáng)體質(zhì)目的的物理處理?！爸委煛敝甘褂靡环N或多種特定的程序，用于治愈或改善疾病。在某些實(shí)施方式中，特定的程序?yàn)榻o藥一種或多種藥物?！案纳啤敝笢p輕疾病或狀態(tài)的至少一種指征的嚴(yán)重性。在某些實(shí)施方式中，改善包括延遲或減緩疾病或狀態(tài)的一種或更多種指征的進(jìn)程。指征的嚴(yán)重性可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員公認(rèn)的主觀或客觀檢測(cè)方法確定。“阻止發(fā)病”指阻止處于疾病或狀態(tài)的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)中的對(duì)象發(fā)展出疾病或狀態(tài)。在某些實(shí)施方式中，處于疾病或狀態(tài)風(fēng)險(xiǎn)中的對(duì)象接受的治療與已經(jīng)患有疾病或狀態(tài)的對(duì)象接受的治療類(lèi)似。
“延遲發(fā)病”指延遲處于疾病或狀態(tài)的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)中的對(duì)象發(fā)展出疾病或狀態(tài)?！皽p慢進(jìn)展”指與疾病或狀態(tài)相關(guān)的至少一種癥狀的嚴(yán)重性的惡化速度減慢?！巴怙@子7氨基酸”指與SMN RNA的外顯子7對(duì)應(yīng)的SMN蛋白部分。在剪接過(guò)程中外顯子7未被排除時(shí)，SMN RNA表達(dá)的SMN蛋白中存在有外顯子7氨基酸?！癝MN蛋白”指正常全長(zhǎng)的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元 存活蛋白。SMN可以由SMNl基因或SMN2基因表達(dá)，前提是成熟mRNA中存在外顯子7，且SMN蛋白中存在外顯子7氨基酸?！皠┝俊敝冈趩未谓o藥中或在一段特定時(shí)間內(nèi)提供的藥物的特定量。在某些實(shí)施方式中，可以通過(guò)兩次或更多推注注射、片劑或注射給藥劑量。例如，在某些實(shí)施方式中，在希望皮下或鞘內(nèi)或ICV給藥時(shí)，希望的劑量所需要的體積難以通過(guò)單次注射來(lái)調(diào)節(jié)。在此類(lèi)實(shí)施方式中，可以使用兩次或更多注射以達(dá)到希望的劑量。在連續(xù)輸注裝置中，可以將劑量表示為在單位時(shí)間內(nèi)遞送的藥物的量?！皠┝繂挝弧敝柑峁┧幬锏男问健Ｔ谀承?shí)施方式中，劑量單位為含有凍干寡核苷酸的小管。在某些實(shí)施方式中，劑量單位指含有復(fù)溶寡核苷酸的小管。“治療有效量”指向動(dòng)物提供治療效果的藥物的量?！八幬锝M合物”指適合給藥于個(gè)體的包含藥物的物質(zhì)混合物。例如，藥物組合物可以包含修飾寡核苷酸和無(wú)菌水溶液?！翱山邮艿陌踩浴敝父弊饔玫臉邮皆谂R床可以接受的限度內(nèi)?！案弊饔谩敝钢委煂?dǎo)致的除所需效應(yīng)以外的生理應(yīng)答。I.某些修飾的寡核苷酸在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了包括包含反義寡核苷酸的方法和組合物，與由天然存在的寡聚體形成的寡核苷酸相比，如DNA或RNA，所述反義寡核苷酸具有一種或多種修飾。此類(lèi)修飾的反義寡核苷酸可以具有一種或多種優(yōu)選的性質(zhì)。某些此類(lèi)修飾改變反義寡核苷酸的反義活性，例如增加反義寡核苷酸與其靶核酸的親和性、增強(qiáng)其對(duì)一種或多種核酸酶的抗性、和/或改變寡核苷酸的藥代動(dòng)力學(xué)或組織分布性質(zhì)。在某些實(shí)施方式中，此類(lèi)修飾的反義寡核苷酸包含一種或多種修飾的核苷和/或一種或多種修飾的核苷連接和/或一種或多種綴合基團(tuán)。 a.某#修飾的核苷在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸包含一種或多種修飾的核苷。此類(lèi)修飾的核苷可以包括修飾的糖和/或修飾的核堿基。在某些實(shí)施方式中，在寡核苷酸中摻入此類(lèi)修飾核苷可以使得修飾的寡核苷酸對(duì)靶核酸具有更高的親和性和/或更強(qiáng)的穩(wěn)定性，包括但不限于，對(duì)核酸酶降解具有更高的抗性、和/或具有改進(jìn)的毒性和/或攝取特性。i.某@核堿基核苷中天然存在的堿基部分為雜環(huán)堿基，一般為嘌呤和嘧啶。除“未修飾”的或“天然”的核堿基如嘌呤核堿基腺嘌呤(A)和鳥(niǎo)嘌呤(G)，以及嘧啶核堿基胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)和尿嘧啶⑶以外，在本發(fā)明所述的化合物中還可以摻入本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的多種修飾的核堿基或核堿基模擬物。在某些實(shí)施方式中，修飾的核堿基為結(jié)構(gòu)與母體核堿基非常類(lèi)似的核堿基，例如7-脫氮雜嘌呤、5-甲基胞嘧啶、或G-夾鉗。在某些實(shí)施方式中，核堿基模擬物包括更加復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，例如三環(huán)吩噁嗪核堿基模擬物。上文所述的修飾核堿基的制備方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。
ii.某些修飾的糖和糖替代物本發(fā)明的反義寡核苷酸可以任選地含有一種或更多種核苷，其與天然糖相比，其中的糖配基被修飾。包含此類(lèi)糖修飾核苷的寡核苷酸可以具有增強(qiáng)的核酸酶穩(wěn)定性、具有增強(qiáng)的結(jié)合親和性或某些其他有益的生物學(xué)性質(zhì)。此類(lèi)修飾包括但不限于，添加其他取代基團(tuán)、將非成對(duì)環(huán)原子橋接以形成雙環(huán)核酸(BNA)、將核糖環(huán)中的氧原子用S、N(R)或C(R1)(R) 2(R = H、C1-C12烷基或保護(hù)基團(tuán))以及這些組合取代，例如2' -F-5/ -甲基取代核苷(其他公開(kāi)的5'，2'-雙取代核苷參見(jiàn)公開(kāi)于8/21/08的PCT國(guó)際申請(qǐng)WO 2008/101157)，或者將核糖環(huán)中的氧原子用S取代并進(jìn)一步在2'-位進(jìn)行取代(參見(jiàn)公開(kāi)的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)US2005-0130923，
公開(kāi)日2005年6月16日)，或者在BNA的Y -取代(參見(jiàn)PCT國(guó)際申請(qǐng)W02007/134181，
公開(kāi)日11/22/07，其中LNA被例如5'-甲基或5'-乙烯基基團(tuán)取代)。具有修飾糖配基的核苷的例子包括但不限于包含5'-乙烯基、5'-甲基(R或S)、4' -S、2' -F、2' _0013和2' -O(CH2)20CH3取代基團(tuán)的核苷。2’位的取代基還可以選自烯丙基、氨基、疊氮基、硫代、0-烯丙基、0-C「C1Q烷基、0CF3、0 (CH2) 2SCH3、0 (CH2) 2_0_N(Rm)(Rn)、和O-CH2-C ( = 0)-N(Rm) (Rn)，其中各Rn^P Rn獨(dú)立地為H或取代或非取代的C1-Cltl烷基。雙環(huán)核酸(BNA)的例子包括但不限于在4'和2'核糖環(huán)原子之間具有橋接的核苷。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明所述的反義化合物包括一種或多種BNA核苷，其中橋接包括下式之一 4 ' -D-(CH2)-0-2 ' ( ^ -D-LNA) ；4 ' - (CH2)-S-2 '；4，_ ct _L_ (CH2) _0_2，( a -L-LNA) ;4，_ (CH2) 2_0_2，(ENA) ;4，_C (CH3) 2_0_2，(參見(jiàn)PCT/US2008/068922) ;4，-CH(CH3)-0-2，和 4，-C-H(CH2OCH3)-0-2，(參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利7，399，845，2008 年 7 月 15 日授權(quán))；4’ -CH2-N (OCH3)-2’ (參見(jiàn) PCT/US2008/064591)；4’-CH2-O-N(CH3)-2’ (參見(jiàn)公開(kāi)的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)US2004-0171570，2004年9月2日公開(kāi))；4’-CH2-N (R)-0-2’ (參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利 7，427，672，2008 年 9 月 23 日授權(quán));4，-CH2-C (CH3)-2，和 4，-CH2-C ( = CH2)-2，(參見(jiàn) PCT/US2008/066154);以及其中 R 獨(dú)立地為 HX1-C12 烷基、或保護(hù)基團(tuán)。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了包含修飾糖配基的修飾核苷，其中所述修飾糖配基不是雙環(huán)糖配基。某些此類(lèi)修飾的核苷是已知的。在某些實(shí)施方式中，核苷的糖環(huán)可以在任意位置被修飾?？梢栽诒景l(fā)明中使用的糖修飾的例子包括，但不限于，含有選自下述糖取代基團(tuán)的化合物0H、F、0-烷基、S-烷基、N-烷基或0-烷基-0-烷基，其中的烷基、烯基和炔基可以是取代或非取代的C1至Cltl烷基或C2至Cltl烯基和炔基。在某些此類(lèi)實(shí)施方式中，此類(lèi)取代基在糖的2’位。在某些實(shí)施方式中，修飾核苷在糖的2’位具有取代基。在某些實(shí)施方式中，這樣的取代基選自鹵素(包括，但不限于F)、烯丙基、氨基、疊氮基、硫代、0-烯丙基、O-C1-Cltl烷基、-0CF3、O-(CH2)2-0-CH3、2' -O(CH2)2SCH3、0-(CH2)2-O-N(R111) (Rn)、或0_CH2_C( = 0)-N(Rm)(Rn)，其中各Rm和Rn獨(dú)立地為H或取代或非取代的C1-Cltl烷基。在某些實(shí)施方式中，適用于本發(fā)明的修飾核苷為2-甲氧乙氧基、2’ -0-甲基(2，-O-CH3)、2’ -氟代(2，-F)。 在某些實(shí)施方式中，修飾核苷在2'-位具有的取代基選自0[ (CH2) n0]mCH3、O(CH2) nNH2、O (CH2) nCH3、O (CH2) nONH2、OCH2C ( = 0) N (H) CH3、和 0 (CH2) n0N [ (CH2) nCH3] 2，其中 n 和m為I至約10。其他2'-糖取代基團(tuán)包括=C1至Cltl烷基、取代烷基、烯基、炔基、烷芳基、芳烷基、0-烷芳基或 0-芳烷基、SH、SCH3> 0CN、Cl、Br、CN、CF3> OCF3> SOCH3> S02CH3> ONO2, NO2,N3、NH2、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷芳基、氨烷基氨基、聚烷氨基、取代甲硅烷基、RNA剪切基團(tuán)、報(bào)告基團(tuán)、插入劑、用于改善藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)的基團(tuán)或用于改善寡聚化合物藥效學(xué)性質(zhì)的基團(tuán)、以及具有類(lèi)似性質(zhì)的其他取代基。在某些實(shí)施方式中，修飾核苷包含2，-MOE側(cè)鏈(Baker et al.，J. Biol. Chem.，1997，272，11944-12000 )。已有報(bào)道，此類(lèi)2' -MOE取代比未修飾的核苷和其他修飾核苷，如2’ -0-甲基、0-丙基、和0-氨基丙基具有更好的結(jié)合親和性。具有2' -MOE取代的寡核苷酸還可以作為基因表達(dá)的反義抑制劑，其特性有望在體內(nèi)使用(Martin，P.，Helv. Chim. Acta,1995,78,486-504 ；Altmann et al. , Chimia，1996，50，168-176 ;Altmannet al. , Biochem. Soc. Trans. ,1996,24,630-637 ；以及 Altmann et al. , NucleosidesNucleotides,1997，16,917-926)。在某些實(shí)施方式中，2'-糖取代基團(tuán)可以位于阿拉伯糖(上)位或核糖(下)位。在某些此類(lèi)實(shí)施方式中，2'-阿拉伯糖修飾為2' -F阿拉伯糖(FANA)。類(lèi)似的修飾還可以位于糖的其他位置，特別是在3'末端核苷或2' -5'連接的寡核苷酸的糖的3'位，以及在5'末端核苷酸的5'位。在某些實(shí)施方式中，適用于本發(fā)明的核苷具有糖替代物如環(huán)丁基，以替代呋喃核糖基糖。教導(dǎo)制備此類(lèi)修飾糖結(jié)構(gòu)的美國(guó)專(zhuān)利的例子包括，但不限于，美國(guó)專(zhuān)利4，981,957 ；5，118，800 ;5，319，080 ;5，359，044 ;5，393，878 ;5，446，137 ;5，466，786 ;5，514，785 ；5，519，134 ;5，567，811 ;5，576，427 ;5，591，722 ;5，597，909 ;5，610，300 ;5，627，053 ；5，639，873 ;5，646，265 ;5，658，873 ;5，670，633 ;5，792，747 ;和 5，700，920，每一篇都通過(guò)引用全文參考并入。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供在糖的2’ -位具有修飾的核苷。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供在糖的5’ -位具有修飾的核苷。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了在糖的2’ -位和5’ -位都具有修飾的核苷。在某些實(shí)施方式中，修飾的核苷可以用于摻入寡核苷酸。在某些實(shí)施方式中，修飾的核苷摻入到位于寡核苷酸5’ -末端的寡核苷。b.某些核苷間連接本發(fā)明的反義寡核苷酸可以任選地含有一種或更多種修飾的核苷間連接。根據(jù)存在或不存在磷原子，將連接基團(tuán)定義為兩個(gè)主要的分類(lèi)。具有代表性的含磷連接包括，但不限于，磷酸二酯(P = 0)、磷酸三酯、甲基膦酸酯、氨基磷酸酯、和硫代磷酸酯(P = S)。具有代表性的不含磷的連接基團(tuán)包括，但不限于，亞甲基甲基亞胺基(-CH2-N (CH3) -0-CH2-)、硫代二酯(_0_C(0)-S-)、硫擬氨基甲酸酯(-O-C(O) (NH)-S-);娃氧燒(-O-Si (H) 2_0_);以及N,N/ - 二甲肼(-CH2-N(CH3)-N(CH3)-)。將具有非磷連接基團(tuán)的寡核苷酸稱(chēng)為寡核苷。與天然磷酸二酯鍵相比，修飾的連接可以改變，通常為增加，寡核苷酸對(duì)核酸酶的抗性。在某些實(shí)施方式中，具有手性原子的連接可以被制備為外消旋混合物，或制備為單獨(dú)的對(duì)映異構(gòu)體。具有代表性的手性連接包括，但不限于，烷基膦酸酯和硫代磷酸酯。含磷和非含磷連接的制備方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。本文所述的反義寡核苷酸含有一個(gè)或更多個(gè)不對(duì)稱(chēng)的中心，因此產(chǎn)生了對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體和依據(jù)絕對(duì)立體化學(xué)可以被定義為(R)或(S)的其他立體異構(gòu)構(gòu)型，如糖端基異構(gòu)體，或可以被定義為(D)或(L)的其他立體異構(gòu)構(gòu)型，如氨基酸等。本文的反義化合物中可包括所有此類(lèi)可能的異構(gòu)體，及其外消旋體以及光學(xué)純形式。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸具有至少一個(gè)修飾的核苷間連接。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸具有至少兩個(gè)修飾的核苷間連接。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸具有至少3個(gè)修飾的核苷間連接。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸具有至少10個(gè)修飾的核苷間連接。在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸的各核苷間連接均為修飾的核苷間連接。在某些實(shí)施方式中，此類(lèi)修飾的核苷間連接為硫代磷酸酯連接。c.長(zhǎng)度在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供的反義寡核苷酸具有任意多種范圍的長(zhǎng)度。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供的反義化合物或反義寡核苷酸包含X-Y連接的核苷或者由X-Y連接的核苷組成，其中X和Y均獨(dú)立地選自8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、 22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、和50 ;其中X < Y。例如，在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供的反義化合物或反義寡核苷酸包含下述核苷或由下述核苷組成8-9、8-10、8-11、8-12、8-13、8-14、8-15、8-16、
8-17、8-18、8-19、8-20、8-21、8-22、8-23、8-24、8-25、8-26、8-27、8-28、8-29、8-30、9-10、
9-11、9-12、9-13、9-14、9-15、9-16、9-17、9-18、9-19、9-20、9-21、9-22、9-23、9-24、9-25、
9-26、9-27、9-28、9-29、9-30、10-11、10-12、10-13、10-14、10-15、10-16、10-17、10-18、
10-19、10-20、10-21、10-22、10-23、10-24、10-25、10-26、10-27、10-28、10-29、10-30、
I卜12、I 卜13、I 卜14、I 卜15、I 卜16、I 卜17、I 卜18、I 卜19、I 卜20、I 卜21、I 卜22、I 卜23、I卜24、I卜25、I卜26、I卜27、I卜28、I卜29、I卜30、12-13、12-14、12-15、12-16、12-17、12-18、12-19、12-20、12-21、12-22、12-23、12-24、12-25、12-26、12-27、12-28、12-29、
12-30、13-14、13-15、13-16、13-17、13-18、13-19、13-20、13-21、13-22、13-23、13-24、
13-25、13-26、13-27、13-28、13-29、13-30、14-15、14-16、14-17、14-18、14-19、14-20、
14-21、14-22、14-23、14-24、14-25、14-26、14-27、14-28、14-29、14-30、15-16、15-17、
15-18、15-19、15-20、15-21、15-22、15-23、15-24、15-25、15-26、15-27、15-28、15-29、
15-30、16-17、16-18、16-19、16-20、16-21、16-22、16-23、16-24、16-25、16-26、16-27、
16-28、16-29、16-30、17-18、17-19、17-20、17-21、17-22、17-23、17-24、17-25、17-26、
17-27、17-28、17-29、17-30、18-19、18-20、18-21、18-22、18-23、18-24、18-25、18-26、
18-27、18-28、18-29、18-30、19-20、19-21、19-22、19-23、19-24、19-25、19-26、19-29、 19-28、19-29、19-30、20-21、20-22、20-23、20-24、20-25、20-26、20-27、20-28、20-29、
20-30、2卜22、2卜23、2卜24、2卜25、2卜26、2卜27、2卜28、2卜29、2卜30、22-23、22-24、
22-25、22-26、22-27、22-28、22-29、22-30、23-24、23-25、23-26、23-27、23-28、23-29、
23-30,24-25,24-26,24-27,24-28,24-29,24-30,25-26,25-27,25-28,25-29,25-30,26-27、26-28、26-29、26-30、27-28、27-29、27-30、28-29、28-30、或 29-30 個(gè)連接的核苷。在某些實(shí)施方式中,本發(fā)明的反義化合物或反義寡核苷酸的長(zhǎng)度為15個(gè)核苷。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的反義化合物或反義寡核苷酸的長(zhǎng)度為16個(gè)核苷。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的反義化合物或反義寡核苷酸的長(zhǎng)度為17個(gè)核苷。在某些實(shí)施方式中，本發(fā) 明的反義化合物或反義寡核苷酸的長(zhǎng)度為18個(gè)核苷。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的反義化合物或反義寡核苷酸的長(zhǎng)度為19個(gè)核苷。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的反義化合物或反義寡核苷酸的長(zhǎng)度為20個(gè)核苷。d.某些寡核苷酸基序在某些實(shí)施方式中，反義寡核苷酸具有的化學(xué)修飾的亞基沿著其長(zhǎng)度以特定方向排列。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的反義寡核苷酸是完全修飾的。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的反義化合物是均一修飾的。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的反義化合物是均一修飾的且各核苷包含2’-MOE糖配基。在某些實(shí)施方式中,本發(fā)明的反義寡核苷酸是均一修飾的且各、核苷包含2’-OMe糖配基。在某些實(shí)施方式中,本發(fā)明的反義寡核苷酸是均一修飾的且各核苷包含嗎啉取代糖配基。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的寡核苷酸包含交替的基序。在某些此類(lèi)實(shí)施方式中，交替的修飾類(lèi)型選自2’ -M0E、2’ -F、雙環(huán)糖修飾核苷、和DNA(未修飾的2’ -脫氧)。在某些此類(lèi)實(shí)施方式中，各交替的區(qū)域包含單一核苷。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的寡核苷酸包含一個(gè)或更多個(gè)第一類(lèi)型核苷區(qū)和一個(gè)或更多個(gè)第二類(lèi)型核苷區(qū)。在某些實(shí)施方式中，在交替的基序中，一個(gè)或多個(gè)交替的區(qū)域包括某類(lèi)型的多于一個(gè)的核苷。例如，本發(fā)明的寡聚化合物可以包含下述核苷基序中任一種的一個(gè)或更多個(gè)區(qū)域Nu1 Nu1 Nu2 Nu2 Nu1 Nu1 ；Nu1 Nu2 Nu2 Nu1 Nu2 Nu2 ；Nu1 Nu1 Nu2 Nu1 Nu1 Nu2 ；Nu1 Nu2 Nu2 Nu1 Nu2 Nu1 Nu1 Nu2 Nu2 ；Nu1 Nu2 Nu1 Nu2 Nu1 Nu1 ；Nu1 Nu1 Nu2 學(xué)習(xí) Nu1 Nu2 Nu1 Nu2 ；Nu1 Nu2 Nu1 Nu2 Nu1 Nu1 ；Nu1 Nu2 Nu2 Nu1 Nu1 Nu2 Nu2 Nu1 Nu2 Nu1 Nu2 Nu1 Nu1 ；Nu2 Nu1 Nu2 Nu2 Nu1 Nu1 Nu2 Nu2 Nu1 Nu2 Nu1 Nu2 Nu1 Nu1 ;或Nu1 Nu2 Nu1 Nu2 Nu2 Nu1 Nu1 Nu2 Nu2 Nu1 Nu2 Nu1 Nu2 Nu1 Nu1 ；其中Nu1為第一類(lèi)型的核苷且Nu2為第二類(lèi)型的核苷。在某些實(shí)施方式中，Nu1和Nu2中的一個(gè)為2’ -MOE核苷且Nu1和Nu2中的另一個(gè)選自2’ -OMe修飾的核苷、BNA和未修飾的DNA或RNA核苷。2.寡聚化合物在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供寡聚化合物。在某些實(shí)施方式中，寡聚化合物僅包含寡核苷酸。在某些實(shí)施方式中，寡聚化合物包含寡核苷酸和一種或更多種綴合和/或末端基團(tuán)。在上文所討論的具有任意化學(xué)基序的寡核苷酸中可以插入此類(lèi)綴合和/或末端基團(tuán)。因此，例如，包含具有交替核苷區(qū)域的寡核苷酸的寡聚化合物可以包含末端基團(tuán)。a.某@綴合基團(tuán)在某些實(shí)施方式中，通過(guò)連接一個(gè)或更多個(gè)綴合基團(tuán)對(duì)本發(fā)明的寡核苷酸進(jìn)行修飾。一般而言，綴合基團(tuán)可修飾與之連接的寡聚化合物的一種或多種性質(zhì)，包括但不限于，藥效學(xué)、藥代動(dòng)力學(xué)、穩(wěn)定性、結(jié)合、吸收、細(xì)胞分布、細(xì)胞攝取、電荷和清除率。綴合基團(tuán)在化學(xué)領(lǐng)域被常規(guī)使用，且與母體化合物直接連接，或通過(guò)任選的綴合連接配基或綴合連接基團(tuán)相連接，母體化合物例如寡聚化合物，如寡核苷酸。綴合基團(tuán)包括但不限于，插入齊U、報(bào)告分子、聚胺、聚酰胺、聚乙二醇、硫醚、聚醚、膽固醇、硫代膽固醇、膽酸配基、葉酸酯、脂質(zhì)、磷脂、生物素、吩嗪、菲啶、蒽醌、金剛烷胺、吖啶、熒光素、羅丹明、香豆素和染料。某些綴合基團(tuán)此前已被描述，例如膽固醇配基(Letsinger et al.，Proc. Natl. Acad. Sci.USA,1989,86,6553-6556)、膽酸(Manoharan et al. , Bioorg. Med. Chem. Let. ,1994,4,1053-1060)、硫醚，例如，己基-S-三硫醇(Manoharan et al.，Ann. N. Y. Acad. Sci.，1992,660,306-309 ；Manoharan et al. , Bioorg. Med. Chem. Let. , 1993, 3, 2765-2770)、硫代膽固醇(Oberhauser et al. , Nucl. Acids Res. , 1992, 20, 533-538)、脂肪鏈，例如，十二燒基二醇或十一燒基殘基(Saison-Behmoaras et al. ,EMBO J. , 1991,10,1111-1118 ；Kabanov etal. ,FEBS Lett. ,1990,259,327-330 ；Svinarchuk et al. , Biochimie,1993, 75,49-54)、憐月旨，例如，雙十六烷基-rac-甘油或三乙基-銨1，2-雙-0-十六烷基-rac-甘油-3-H-膦酸酯(Manoharan et al. , Tetrahedron Lett. , 1995, 36, 3651-3654 ；Shea et al. , Nucl.Acids Res. , 1990,18, 3777-3783)、聚胺或聚乙二醇鏈(Manoharan et al. ,Nucleosides &Nucleotides, 1995,14,969-973)、金剛燒胺乙酸(Manoharan et al. ,Tetrahedron Lett.,1995，36，3651-3654)、棕櫚酰配基(Mishra et al. , Biochim. Biophys. Acta, 1995,1264,229-237)、或十八胺或己基氨基-羰基-輕膽固醇配基(Crooke et al. , J. Pharmacol. Exp.Ther.，1996，277，923-937)。在某些實(shí)施方式中，綴合基團(tuán)包含活性藥物，例如，阿司匹林、華法林、保泰松、布洛芬、舒洛芬、芬布芬、酮洛芬、(S)-⑴-吡喃洛芬、卡洛芬、丹肌氨酸、2，3，5_三碘苯甲酸、氟芬那酸、亞葉酸、苯并噻二嗪、氯噻嗪、二氮雜卓、吲哚美辛、巴比妥酸鹽、頭孢菌素、磺胺類(lèi)藥物、抗糖尿病藥、抗菌劑或抗生素。寡核苷酸-藥物綴合物及其制備方法參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng) 09/334，130。教導(dǎo)寡核苷酸綴合物制備方法的具有代表性的美國(guó)專(zhuān)利包括，但不限于，美國(guó)專(zhuān)利4，828，979 ;4，948，882 ;5，218，105 ;5，525，465 ;5，541，313 ;5，545，730 ;5，552，538 ；5，578，717,5, 580, 731 ;5，580, 731 ;5，591，584 ;5，109, 124 ;5，118，802 ;5，138，045 ；5，414，077 ;5，486，603 ;5，512，439 ;5，578，718 ;5，608，046 ;4，587，044 ;4，605，735 ；4，667，025 ;4，762，779 ;4，789，737 ;4，824，941 ;4，835，263 ;4，876，335 ;4，904，582 ；4，958，013 ;5，082，830 ;5，112，963 ； 5, 214，136 ;5，082，830 ;5，112，963 ;5，214，136 ；5，245，022 ;5，254，469 ;5，258，506 ;5，262，536 ;5，272，250 ;5，292，873 ;5，317，098 ；5，371，241，5，391，723 ;5，416，203，5，451，463 ;5，510，475 ;5，512，667 ;5，514，785 ；5，565，552 ;5，567，810 ;5，574，142 ;5，585，481 ;5，587，371 ;5，595，726 ;5，597，696 ；5，599，923 ;5，599，928 和 5，688，941。綴合基團(tuán)可以連接于寡核苷酸的任一個(gè)或兩個(gè)末端(末端綴合基團(tuán))和/或任意內(nèi)部位點(diǎn)。b.末端基團(tuán)在某些實(shí)施方式中，寡聚化合物的一個(gè)或兩個(gè)末端包含末端基團(tuán)。在某些實(shí)施方式中，末端基團(tuán)可以包含上文所述的任意綴合基團(tuán)。在某些實(shí)施方式中，末端基團(tuán)可以包含附加的核苷和/或反向無(wú)堿基核苷。在某些實(shí)施方式中，末端基團(tuán)為穩(wěn)定基團(tuán)。
在某些實(shí)施方式中，寡聚化合物包含一種或更多種末端穩(wěn)定基團(tuán)，其能夠增強(qiáng)諸如核酸酶穩(wěn)定性等特性。穩(wěn)定基團(tuán)包括帽結(jié)構(gòu)。本文使用的術(shù)語(yǔ)“帽結(jié)構(gòu)”或“末端帽配基”是指可以連接到寡聚化合物的一個(gè)或兩個(gè)末端的化學(xué)修飾。某些此類(lèi)末端修飾可以保護(hù)具有末端核酸配基的寡聚化合物不受外切核酸酶的降解，且可以幫助其在細(xì)胞內(nèi)的遞送和/或定位。帽可以存在于5'-末端(5'-帽)或3'-末端(3'-帽)或可以存在于兩個(gè)末端(更詳細(xì)的內(nèi)容參見(jiàn)Wincott et al.，國(guó)際PCT公開(kāi)號(hào)WO 97/26270 ；Beaucageand Tyer，1993，Tetrahedron 49，1925 ;美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào) US 2005/0020525 ;以及 WO03/004602)。在某些實(shí)施方式中，將一個(gè)或更多個(gè)附加的核苷加入寡聚化合物的寡核苷酸的一個(gè)或兩個(gè)末端。此類(lèi)附加的末端核苷在本文中稱(chēng)為末端基團(tuán)核苷。在雙鏈化合物中，此類(lèi)末端基團(tuán)核苷是末端(3’和/或5’)突出。在雙鏈反義化合物中，此類(lèi)末端基團(tuán)核苷可以與靶核酸互補(bǔ)或不互補(bǔ)。在某些實(shí)施方式中，末端基團(tuán)為非核苷末端基團(tuán)。此類(lèi)非末端基團(tuán)可以為除核苷以外的任意末端基團(tuán)。
c.寡聚化合物基序在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的寡聚化合物包含基序Tf(Nu1)nl-(Nu2)也-(Nu1)n3-(Nu2)Jl4-(Nu1)n5-T2,其中Nu1，為第一類(lèi)型的核苷；Nu2，為第二類(lèi)型的核苷；每一個(gè)nl和n5均獨(dú)立地為0至3 ;n2與n4之和在10至25之間;n3為0至5;以及每一個(gè)T1和T2均獨(dú)立地為H、羥基保護(hù)基團(tuán)，任選地連接的綴合基團(tuán)或加帽基團(tuán)。在此類(lèi)實(shí)施方式中，n2和n4之和為13或14 ;nl為2 ;n3為2或3 ;以及n5為2。在某些此類(lèi)實(shí)施方式中，本發(fā)明的寡聚化合物包含選自表A的基序。
權(quán)利要求
1.ー種方法，包括向?qū)ο蠼o藥包含反義寡核苷酸的反義化合物，該反義寡核苷酸互補(bǔ) 于人SMN2mRNA前體的編碼核酸的內(nèi)含子7，其中所述反義化合物給藥至腦脊液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述給藥是至鞘內(nèi)空隙。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述給藥是至腦內(nèi)的腦脊液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述給藥包含推注注射。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-3任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述給藥包含利用遞送泵輸注。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述反義化合物給藥的劑量為0.01至 10毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中所述給藥劑量為0.01至10毫克反義化合物每千 克對(duì)象體重。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中所述給藥劑量為0.01至5毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中所述給藥劑量為0.05至1毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中所述給藥劑量為0.01至0. 5毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。
11.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中所述給藥劑量為0.05至0. 5毫克反義化合物每千克對(duì)象體重。
12.根據(jù)權(quán)利要求6-11任意一項(xiàng)所述的方法，其中毎日給藥所述劑量。
13.根據(jù)權(quán)利要求6-11任意一項(xiàng)所述的方法，其中每周給藥所述劑量。
14.根據(jù)權(quán)利要求6-11任意一項(xiàng)所述的方法，其中連續(xù)給藥所述反義化合物，且其中 所述劑量是每日給藥的劑量。
15.根據(jù)權(quán)利要求1-13任意一項(xiàng)所述的方法，包括在誘導(dǎo)期給藥至少ー個(gè)誘導(dǎo)劑量， 且在維持期給藥至少ー個(gè)維持劑量。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述誘導(dǎo)劑量為0.05至5. 0毫克反義化合物每 千克對(duì)象體重。
17.根據(jù)權(quán)利要求15或16所述的方法，其中所述維持劑量為0.01至1.0毫克反義化 合物每千克對(duì)象體重。
18.根據(jù)權(quán)利要求15-17任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述誘導(dǎo)期的持續(xù)時(shí)間為至少1周。
19.根據(jù)權(quán)利要求15-18任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述維持期的持續(xù)時(shí)間為至少1周。
20.根據(jù)權(quán)利要求15-19任意一項(xiàng)所述的方法，其中各誘導(dǎo)劑量和各維持劑量均包含單次注射。
21.根據(jù)權(quán)利要求15-19任意一項(xiàng)所述的方法，其中各誘導(dǎo)劑量和各維持劑量均獨(dú)立 地包含兩次或更多注射。
22.根據(jù)權(quán)利要求1-21任意一項(xiàng)所述的方法，其中在至少1周的治療期內(nèi)，給藥所述反 義化合物至少2次。
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中所述治療期為至少ー個(gè)月。
24.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中所述治療期為至少2個(gè)月。
25.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中所述治療期為至少4個(gè)月。
26.根據(jù)權(quán)利要求15-25任意一項(xiàng)所述的方法，其中通過(guò)一次或更多推注注射給藥所 述誘導(dǎo)劑量，和通過(guò)輸注泵給藥所述維持劑量。
27.根據(jù)權(quán)利要求1-26任意一項(xiàng)所述的方法，包括評(píng)估反義化合物的所述耐受性和/ 或有效性。
28.根據(jù)權(quán)利要求1-27任意一項(xiàng)所述的方法，其中當(dāng)出現(xiàn)所述反義化合物給藥不耐受 的指征時(shí)，降低反義化合物的給藥劑量或頻率。
29.根據(jù)權(quán)利要求1-28任意一項(xiàng)所述的方法，其中當(dāng)出現(xiàn)所述反義化合物給藥有效的 指征時(shí)，維持或降低反義化合物的給藥劑量或頻率。
30.根據(jù)權(quán)利要求1-29任意一項(xiàng)所述的方法，其中當(dāng)出現(xiàn)所述反義化合物給藥無(wú)效的 指征時(shí)，增加反義化合物的劑量。
31.根據(jù)權(quán)利要求1-30任意一項(xiàng)所述的方法，其中當(dāng)出現(xiàn)所述反義化合物給藥有效的 指征時(shí)，降低反義化合物的給藥頻率。
32.根據(jù)權(quán)利要求1-31任意一項(xiàng)所述的方法，其中當(dāng)出現(xiàn)所述反義化合物給藥無(wú)效的 指征時(shí)，增加反義化合物的給藥頻率。
33.根據(jù)上述權(quán)利要求任意一項(xiàng)所述的方法，包括將所述反義化合物與至少一種其他 療法聯(lián)合給藥。
34.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中將所述反義化合物與至少一種其他療法同時(shí)聯(lián)合給藥。
35.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中在至少一種其他治療給藥前，給藥所述反義化 合物。
36.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中在至少一種其他治療給藥后，給藥所述反義化 合物。
37.根據(jù)權(quán)利要求33-36任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述至少一種其他治療包括，給藥 丙戊酸、利魯唑、羥基脲和丁酸鹽中的一種或更多種。
38.根據(jù)權(quán)利要求33-37任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述至少一種其他治療包括給藥曲古霉素-A。
39.根據(jù)權(quán)利要求33-38任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述至少一種其他治療包括給藥 干細(xì)胞。
40.根據(jù)權(quán)利要求33-39任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述至少一種其他治療為基因治療。
41.根據(jù)上述權(quán)利要求任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述反義化合物的給藥濃度為約 0. 01mg/ml、約 0. 05mg/ml、約 0. lmg/ml、約 0. 5mg/ml、約 lmg/ml、約 5mg/ml、約 10mg/ml、約 50mg/ml、或約 100mg/ml。
42.根據(jù)權(quán)利要求1-41任意一項(xiàng)所述的方法，其中在對(duì)象的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中，SMN2mRNA 對(duì)外顯子7的包含增加。
43.根據(jù)權(quán)利要求1-42任意一項(xiàng)所述的方法，其中在對(duì)象的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中，SMN2多肽 對(duì)外顯子7的氨基酸的包含增加。
44.一種在對(duì)象的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中增加SMN2mRNA對(duì)外顯子7的包含的方法，包括向?qū)ο?給藥含有反義寡核苷酸的反義化合物，所述反義寡核苷酸互補(bǔ)于人SMN2編碼核酸的內(nèi)含 子7，進(jìn)而在對(duì)象的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中增加SMN2mRNA對(duì)外顯子7的包含。
45.一種在對(duì)象的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中増加SMN2多肽對(duì)外顯子7氨基酸的包含的方法，包括 向?qū)ο蠼o藥含有反義寡核苷酸的反義化合物，所述反義寡核苷酸互補(bǔ)于人SMN2編碼核酸 的內(nèi)含子7，進(jìn)而在對(duì)象的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中増加SMN2多肽對(duì)外顯子7氨基酸的包含。
46.根據(jù)權(quán)利要求1-45任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述對(duì)象患有SMA。
47.根據(jù)權(quán)利要求1-45任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述對(duì)象患有I型SMA。
48.根據(jù)權(quán)利要求1-45任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述對(duì)象患有II型SMA。
49.根據(jù)權(quán)利要求1-45任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述對(duì)象患有III型SMA。
50.根據(jù)權(quán)利要求1-49任意一項(xiàng)所述的方法，其中在子宮內(nèi)進(jìn)行第一次給藥。
51.根據(jù)權(quán)利要求50所述的方法，其中在血腦屏障完全形成前進(jìn)行所述第一次給藥。
52.根據(jù)權(quán)利要求1-49任意一項(xiàng)所述的方法，其中在對(duì)象出生1周內(nèi)進(jìn)行第一次給藥。
53.根據(jù)權(quán)利要求1-49任意一項(xiàng)所述的方法，其中在對(duì)象出生1個(gè)月內(nèi)進(jìn)行第一次給藥。
54.根據(jù)權(quán)利要求1-49任意一項(xiàng)所述的方法，其中在對(duì)象出生3個(gè)月內(nèi)進(jìn)行第一次給藥。
55.根據(jù)權(quán)利要求1-49任意一項(xiàng)所述的方法，其中在對(duì)象出生6個(gè)月內(nèi)進(jìn)行第一次給藥。
56.根據(jù)權(quán)利要求1-49任意一項(xiàng)所述的方法，其中在對(duì)象1至2歲時(shí)進(jìn)行第一次給藥。
57.根據(jù)權(quán)利要求1-49任意一項(xiàng)所述的方法，其中在對(duì)象1至15歲時(shí)進(jìn)行第一次給藥。
58.根據(jù)權(quán)利要求1-49任意一項(xiàng)所述的方法，其中在對(duì)象15歲以上時(shí)進(jìn)行第一次給藥。
59.根據(jù)權(quán)利要求1-58任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述對(duì)象是哺乳動(dòng)物。
60.根據(jù)權(quán)利要求59所述的方法，其中所述對(duì)象是人。
61.根據(jù)權(quán)利要求1-60任意一項(xiàng)所述的方法，包括識(shí)別患有SMA的對(duì)象。
62.根據(jù)權(quán)利要求61所述的方法，其中通過(guò)測(cè)定對(duì)象ー塊或更多塊肌肉的電活性來(lái)識(shí) 別所述對(duì)象。
63.根據(jù)權(quán)利要求61所述的方法，其中通過(guò)遺傳檢測(cè)以確定對(duì)象的SMm基因中是否具 有突變來(lái)識(shí)別所述對(duì)象。
64.根據(jù)權(quán)利要求61所述的方法，其中通過(guò)肌肉組織活檢來(lái)識(shí)別所述對(duì)象。
65.根據(jù)權(quán)利要求42所述的方法，其中所述反義化合物的給藥使得含有外顯子7的 SMN2mRNA的量增加至少10%。
66.根據(jù)權(quán)利要求65所述的方法，其中含有外顯子7的SMN2mRNA的量増加至少20%。
67.根據(jù)權(quán)利要求65所述的方法，其中含有外顯子7的SMN2mRNA的量増加至少50%。
68.根據(jù)權(quán)利要求65所述的方法，其中含有外顯子7的SMN2mRNA的量増加至少70%。
69.根據(jù)權(quán)利要求43所述的方法，其中所述反義化合物的給藥使得含有外顯子7氨基 酸的SMN2多肽的量増加至少10%。
70.根據(jù)權(quán)利要求69所述的方法，其中含有外顯子7氨基酸的SMN2多肽的量增加至少 20%。
71.根據(jù)權(quán)利要求69所述的方法，其中含有外顯子7氨基酸的SMN2多肽的量增加至少 50%。
72.根據(jù)權(quán)利要求69所述的方法，其中含有外顯子7氨基酸的SMN2多肽的量增加至少 70%。
73.根據(jù)權(quán)利要求1-72任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述反義化合物的給藥能在所述對(duì) 象中減輕SMA的至少一種癥狀。
74.根據(jù)權(quán)利要求73所述的方法，其中所述反義化合物的給藥使得在所述對(duì)象中的運(yùn) 動(dòng)功能改善。
75.根據(jù)權(quán)利要求73所述的方法，其中所述反義化合物的給藥使得在所述對(duì)象中運(yùn)動(dòng) 功能喪失被推遲或減少。
76.根據(jù)權(quán)利要求73所述的方法，其中所述反義化合物的給藥使得呼吸功能改善。
77.根據(jù)權(quán)利要求73所述的方法，其中所述反義化合物的給藥使得生存期改善。
78.根據(jù)權(quán)利要求1-77任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述反義寡核苷酸的至少一個(gè)核苷 包含修飾的糖配基。
79.根據(jù)權(quán)利要求78所述的方法，其中所述至少一個(gè)修飾的糖配基包含2’-甲氧乙基糖配基。
80.根據(jù)權(quán)利要求1-79任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述反義寡核苷酸的各核苷基本上 均包含修飾的糖配基。
81.根據(jù)權(quán)利要求80所述的方法，其中所述包含修飾糖配基的核苷均包含相同的糖修飾。
82.根據(jù)權(quán)利要求81所述的方法，其中各修飾的糖配基均包含2’-甲氧乙基糖配基。
83.根據(jù)權(quán)利要求1-79任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述反義寡核苷酸的各核苷均包含 修飾的糖配基。
84.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述核苷均包含相同的糖修飾。
85.根據(jù)權(quán)利要求84所述的方法，其中各修飾的糖配基均包含2’-甲氧乙基糖配基。
86.根據(jù)權(quán)利要求1-85任意一項(xiàng)所述的方法，其中至少一個(gè)核苷間連接是硫代磷酸酯 核苷間連接。
87.根據(jù)權(quán)利要求86所述的方法，其中各核苷間連接均為硫代磷酸酯核苷間連接。
88.根據(jù)權(quán)利要求1-87任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述反義寡核苷酸由10至25個(gè)連 接的核苷組成。
89.根據(jù)權(quán)利要求1-87任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述反義寡核苷酸由12至22個(gè)連 接的核苷組成。
90.根據(jù)權(quán)利要求1-87任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述反義寡核苷酸由15至20個(gè)連 接的核苷組成。
91.根據(jù)權(quán)利要求1-87任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述反義寡核苷酸由18個(gè)連接的核 苷組成。
92.根據(jù)權(quán)利要求1-91任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述反義寡核苷酸與人SMN2的編碼核酸具有至少90 %的互補(bǔ)性。
93.根據(jù)權(quán)利要求92所述的方法，其中所述反義寡核苷酸與人SMN2的編碼核酸具有完 全的互補(bǔ)性。
94.根據(jù)權(quán)利要求1-93任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述寡核苷酸具有核堿基序列，所 述核堿基序列包含SEQ ID NO 1的核堿基序列中的至少10個(gè)連續(xù)核堿基。
95.根據(jù)權(quán)利要求94所述的方法，其中所述寡核苷酸具有核堿基序列，所述核堿基序 列包含SEQ ID NO 1的核堿基序列中至少15個(gè)連續(xù)核堿基。
96.根據(jù)權(quán)利要求94所述的方法，其中所述寡核苷酸具有核堿基序列，所述核堿基序 列包含SEQ ID NO 1的核堿基序列。
97.根據(jù)權(quán)利要求94所述的方法，其中所述寡核苷酸具有核堿基序列，所述核堿基序 列由SEQ ID NO 1的核堿基序列組成。
98.根據(jù)權(quán)利要求1-97任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述反義化合物包含綴合基團(tuán)或末 端基團(tuán)。
99.根據(jù)權(quán)利要求1-97任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述反義化合物由反義寡核苷酸組成。
100.根據(jù)權(quán)利要求1-99任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述反義化合物還可以全身給藥。
101.根據(jù)權(quán)利要求100所述的方法，其中所述全身給藥是通過(guò)靜脈或腹腔注射。
102.根據(jù)權(quán)利要求100或101所述的方法，其中所述全身給藥和給藥至中樞神經(jīng)系統(tǒng) 同時(shí)進(jìn)行。
103.根據(jù)權(quán)利要求100或101所述的方法，其中所述全身給藥和給藥至中樞神經(jīng)系統(tǒng) 在不同時(shí)間進(jìn)行。
104.一種包含反義寡核苷酸的反義化合物，所述反義寡核苷酸互補(bǔ)于人SMN2編碼核 酸的內(nèi)含子7，所述反義化合物用于權(quán)利要求1-103任意一項(xiàng)所述的方法。
105.根據(jù)權(quán)利要求104所述的反義化合物，所述反義化合物用于治療與運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存 活基因1(SMN1)有關(guān)的疾病或狀態(tài)。
106.一種包含反義寡核苷酸的反義化合物用于生產(chǎn)藥物的用途，所述反義寡核苷酸互 補(bǔ)于人SMN2編碼核酸的內(nèi)含子7，所述藥物用于前述任意權(quán)利要求所述的方法。
107.根據(jù)權(quán)利要求106所述的用途，其中該藥物用于治療與運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活基因 1 (SMN1)有關(guān)的疾病或狀態(tài)。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了用于調(diào)節(jié)對(duì)象中的SMN2mRNA剪接的化合物、組合物和方法。還提供了所公開(kāi)的化合物和組合物用于生產(chǎn)藥物的用途，所述藥物用于治療疾病和病癥，包括脊髓性肌萎縮癥。
文檔編號(hào)A61K31/7088GK102665731SQ201080036807
公開(kāi)日2012年9月12日 申請(qǐng)日期2010年6月17日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月17日
發(fā)明者A·R·克萊納, C·F·班尼特, F·里戈, G·洪, K·W·克令格, L·史哈布丁, M·A·帕西尼, S·H·程, Y·華 申請(qǐng)人:Isis制藥公司, 冷泉港實(shí)驗(yàn)室