專利名稱：修飾抗體組合物及其制備和使用方法
修飾抗體組合物及其制備和使用方法交叉引用本申請(qǐng)要求享有于2009年1月12日提交的第61/144110號(hào)美國臨時(shí)申請(qǐng)，2009 年1月12日提交的第61/1441105號(hào)美國臨時(shí)申請(qǐng)，2009年10月7日提交的第61/249441 號(hào)美國臨時(shí)申請(qǐng)以及2009年10月7日提交的第61/M9416號(hào)美國臨時(shí)申請(qǐng)的權(quán)益，這些臨時(shí)申請(qǐng)通過引用全部并入本文中。
背景技術(shù)：
以蛋白質(zhì)為基礎(chǔ)的療法改變了用藥的面貌，在各種不同的疾病間發(fā)現(xiàn)了各種應(yīng)用。尤其是以抗體為基礎(chǔ)的療法，已經(jīng)證明對(duì)一些疾病能有效治療，但是在某些情況下，由于對(duì)廣泛的靶點(diǎn)表達(dá)的毒性限制了其治療的有效性。然而，對(duì)于任何藥物，改善其靶點(diǎn)特異性和選擇性對(duì)藥物的需要和需求有極大興趣，特別是對(duì)開發(fā)以抗體為基礎(chǔ)的結(jié)合具有已知靶點(diǎn)的第二代藥物。提高抗體對(duì)病變的部位靶向性可以減少全身的機(jī)制為基礎(chǔ)的毒性，并導(dǎo)致更廣泛的治療應(yīng)用。在小分子藥物領(lǐng)域，戰(zhàn)略已經(jīng)發(fā)展到提供一個(gè)活性化學(xué)實(shí)體的前體藥物。這些前體藥物是在一中相對(duì)不活潑的(或顯著減少活性)的形式供給。一旦供給，前體藥物在體內(nèi)代謝成為活性的化合物。這種藥物前體的策略，可以對(duì)其預(yù)期靶點(diǎn)提供增加的藥物選擇性并減少不利影響。用于特異性缺氧的腫瘤細(xì)胞的藥物，通過氧化還原激活的使用，利用存在于缺氧細(xì)胞中的大量還原酶將藥物轉(zhuǎn)化成其細(xì)胞毒素的狀態(tài)，實(shí)質(zhì)上是使其激活。由于在這種激活之前，前提藥物是低毒性的，這顯著降低了損害非癌變細(xì)胞的風(fēng)險(xiǎn)，從而降低與藥物相關(guān)的副作用。本領(lǐng)域需要一種為以抗體為基礎(chǔ)的療法提供一種前體藥物特性的戰(zhàn)略需求。發(fā)明簡述目前披露的規(guī)定修改和激活的抗體治療和診斷的有用成分。激活的抗體成分，表現(xiàn)出更高的生物利用度和生物分布，相比傳統(tǒng)的抗體療法與藥物前體的功能。此外，還提供使用在診斷和治療，以及篩選和建設(shè)等組成的方法。在一方面，本發(fā)明提供了一種修飾過的抗體，包括一種抗體或一種抗體片段(AB)， 能專門與其靶點(diǎn)結(jié)合，能夠與以中掩蔽基團(tuán)耦合(MM)，其中匪對(duì)AB的耦合降低AB與其靶點(diǎn)的結(jié)合能力以便使耦合了匪的AB對(duì)靶點(diǎn)的裂解常數(shù)比沒有耦合匪的AB對(duì)靶點(diǎn)的裂解常數(shù)至少大100倍、至少大1000倍、或者至少大10000倍。在另一方面，本發(fā)明提供了一種修飾抗體，包括一種抗體或一種抗體片段(AB)，能專門與其靶點(diǎn)結(jié)合，能夠與以中掩蔽基團(tuán)耦合(MM)，其中當(dāng)使用靶點(diǎn)的替代物在體外進(jìn)行測(cè)試時(shí)，對(duì)比沒有耦合匪的AB與其靶點(diǎn)的結(jié)合能力，耦合了匪的AB與其靶點(diǎn)的結(jié)合能力至少降低90%。這種匪與AB的耦合降低AB與靶點(diǎn)結(jié)合能力的時(shí)間至少為12小時(shí)或至少為M小時(shí)或至少為72小時(shí)。在另一方面，修飾抗體進(jìn)一步耦合到一種雷杰基團(tuán)(CM)。該CM能被酶裂解，或該 CM能被一種降低藥劑減少，或該CM能被光溶解。該CM能具體地至少在IxIOVS4、或至少在^10 ,或至少在IOxlO4M4S的速率下被裂解、減少或光溶解。在一個(gè)實(shí)施例中，修飾抗體的CM在MM內(nèi)。在本發(fā)明提供的抗體中匪對(duì)AB的離解常數(shù)(Kd)通常比AB對(duì)靶點(diǎn)的Kd至少大 100倍。一般地，匪對(duì)AB的Kd低于ΙΟηΜ，或低于5nM，或低于InM。在一些實(shí)施例中，修飾抗體的MM通過與AB的抗原結(jié)合域特異性結(jié)合降低AB與其靶點(diǎn)結(jié)合的能力。這種結(jié)合可以是非供價(jià)的。修飾抗體的MM能在allosterically或空間上降低AB與其靶點(diǎn)的結(jié)合能力。在具體的實(shí)施例中，修飾抗體的匪不能含有多于50%的與AB的天然結(jié)合配體相似的氨基酸序列。在具體的實(shí)施例中，修飾抗體的AB是選自由Fab'片段、F (ab' ) 2、scFv、scAB、 dAb、單域重鏈抗體和單域輕鏈抗體構(gòu)成的組中的抗體片段。在相關(guān)的實(shí)施例中，修飾抗體的AB選自表2或AB的來源是西妥昔單抗、帕木單抗、英利昔單抗、阿達(dá)木單抗、依法珠單抗、伊匹單抗、tremelimumab(CTLA-4單抗)、阿德木單抗、Hu5c8、阿倫單抗、雷珠單抗、托西莫單抗、替伊莫單抗、利妥昔單抗、英利昔單抗、貝伐珠單抗或f igitumumab (IGFR-1抑制劑)。在一個(gè)具體的實(shí)施例中，修飾抗體不是阿倫單抗。在相關(guān)的實(shí)施例中，AB的靶點(diǎn)是選自表1中的靶點(diǎn)多構(gòu)成的組。在典型的實(shí)施例中，靶點(diǎn)是 EGFR、TNFa、CDlIa、CSFR、CTLA-4、EpCAM、VEGF、CD40、CD20、Notch UNotch 2、 Notch 3,Notch 4,Jagged UJagged 2、CD52、MUC1、IGF1R、轉(zhuǎn)鐵蛋白、gpl30、VCAM_I、CD44、 DLL4、或 IL4。在一個(gè)具體的實(shí)施例中，修飾抗體進(jìn)一步包括一個(gè)第二 AB，其中該第二 AB的靶點(diǎn)是選自表1中的靶點(diǎn)所構(gòu)成的組。在一個(gè)相關(guān)的實(shí)施例中，CM是一種用于選自表3中的酶所構(gòu)成的組中酶的底物。 在具體的實(shí)施例中，CM是一種用于半胱氨酸蛋白酶、纖溶酶、TMPRSS-3/4、MMP-9、MTl-MMP、 組織蛋白酶、半胱天冬蛋白酶、人中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶、β-分泌酶、uPA或PSA的底物。在這樣的實(shí)施例中，其中修飾過的AB包含一種CM，AB是選自表2中的抗體所構(gòu)成的組，具體地，選自西妥昔單抗、帕木單抗、英利昔單抗、阿達(dá)木單抗、依法珠單抗、伊匹單抗、 tremelimumab(CTLA-4單抗)、阿德木單抗、Hu5c8、阿倫單抗、雷珠單抗、托西莫單抗、替伊莫單抗、利妥昔單抗、英利昔單抗、貝伐珠單抗或figitUmUmab(IGFR-l抑制劑)所構(gòu)成的組。在一個(gè)典型的實(shí)施例中，AB不是阿倫單抗。在一個(gè)實(shí)施例中，其中修飾過的抗體包括一個(gè)AB，并與一個(gè)CM和一個(gè)匪連接。 在一個(gè)實(shí)施例中，靶點(diǎn)是選自表1的靶點(diǎn)所構(gòu)成的組，或靶點(diǎn)是EGFR、TNFa、⑶11a、CSFR、 CTLA-4、EpCAM、VEGF、CD40、CD20、Notch 1、Notch 2、Notch 3、Notch 4、Jagged 1、Jagged 2、CD52、MUC1、IGF1R、轉(zhuǎn)鐵蛋白、gpl30、VCAM-I、CD44、DLL4 或 IL4。靶點(diǎn)不是 CD52。修飾蛋白可進(jìn)一步于一個(gè)第二裂解基團(tuán)連接，能夠?qū)ｉT被一種酶修飾。在該實(shí)施例中，該第二裂解蛋白是一種天冬酰胺內(nèi)肽酶、纖溶酶、TMPRSS-3/4、MMP-9, MT1-MMP、組織蛋白酶、半胱天冬蛋白酶、人類中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶、β -分泌酶、uPA、或PSA的底物。在另一個(gè)具體的實(shí)施例中，修飾抗體進(jìn)一步包括一種連接肽，其中該連接肽位于 AB和MM之間?；蛘咴撔揎椷^的抗體進(jìn)一步包括一種連接肽，其中該連接肽位于MM和CM之間?；蛘咴撔揎椷^的抗體進(jìn)一步包括一種連接肽，其中該連接肽位于AB和CM之間。或者該修飾過的抗體進(jìn)一步包括兩種連接肽，其中第一種連接肽位于AB和CM之間以及第二種連接肽位于MM和CM之間。連接肽是選自一種裂解連接肽、一種非裂解連接肽、一種分支連接肽所構(gòu)成的組。在某些實(shí)施例中，修飾過的抗體進(jìn)一步包含一種檢測(cè)基團(tuán)。在一個(gè)具體的實(shí)施例中，該檢測(cè)基團(tuán)是一種診斷試劑。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，本發(fā)明所述的修飾過的抗體進(jìn)一步包含一種與AB結(jié)合的試劑，在一方面，該試劑是一種治療藥物，例如一種抗腫瘤藥。在這中實(shí)施例中試劑與AB 的以個(gè)碳水化合物基團(tuán)結(jié)合，其中碳水化合物基團(tuán)位于AB的抗原結(jié)合地區(qū)的外部。或者試劑與AB的巰基結(jié)合。本發(fā)明提供的修飾過的抗體供給一個(gè)有機(jī)體時(shí)，表現(xiàn)出了至少有5天的血清半衰期。本發(fā)明提供的一些修飾過的抗體的匪的共有序列是=CISPRGC1C (NZP) H(HVF) (YZT) (FZffZTZL) (YZGZTZS) (TZSZYZH)CGCISPRGCG、xCxxYQCLxxxxxx， XXQPxPPRVXX, PxPGFPYCxxxx, xxxxQxxPWPP、GxGxCYTILExxCxxxR, GxxxCYxIxExxCxxxx, GxxxCYxIxExffCxxxx,xxxCCxxYxIxxCCxxx 或 xxxxxYxILExxxxx0 在一個(gè)具體的實(shí)施例中，該共有序列專門以一個(gè)抗-VEGF抗體、一個(gè)抗-ETOR或一個(gè)抗-CTLA-4抗體結(jié)合。在一個(gè)相關(guān)的方面，本發(fā)明提供了一種激活的抗體(AA)包括一種能夠特異性與其靶點(diǎn)結(jié)合抗體或一種抗體片段(AB)，一種與AB耦合能夠抑制AB與其靶點(diǎn)特異性結(jié)合的掩蔽基團(tuán)(MM)，一種與AB耦合能夠被酶專門裂解的裂解基團(tuán)(CM)。其中，對(duì)比AA處在裂解CM的足夠酶活和匪不抑制AB與其靶點(diǎn)的特異性結(jié)合的情況，當(dāng)AA不處于裂解CM的足夠酶活下，MM至少降低AB與其靶點(diǎn)特異性結(jié)合程度的90%。在具體的實(shí)施例中，降低AB 與其靶點(diǎn)特異性結(jié)合的時(shí)間至少為12小時(shí)，或至少為M小時(shí)，或至少為72小時(shí)。在一個(gè)實(shí)施例中，在AA中，與耦合了匪的AB對(duì)其靶點(diǎn)的離解系數(shù)(Kd)比沒有耦合MM的AB對(duì)其靶點(diǎn)的離解系數(shù)至少大100倍。在一個(gè)相關(guān)的實(shí)施例中，MM對(duì)AB的離解系數(shù)(Kd)比AB對(duì)其靶點(diǎn)的離解系數(shù)至少大100倍。一般地，匪對(duì)AB的離解系數(shù)低于ΙΟηΜ， 或低于5nM，或低于InM。在一些AA的實(shí)施例中，匪能與AB的抗原結(jié)合域特異性結(jié)合。在一些AA的實(shí)施例中，CM能大約至少在IxlO4M1S4,或至少hl04M4S、或至少 IOxlO4M4S的速率下被酶特異性裂解。在某些實(shí)施例中，AA中的AB是一種抗體片段，該抗體片段選自Fab'片段、一種 F(ab' ) 2片段、一種scFv、一種scAB adAb、一種單域重鏈抗體和一種單域輕鏈抗體所構(gòu)成的組中。在某些實(shí)施例中，AA中的AB選自表2中的抗體所構(gòu)成的組。在具體的實(shí)施例中，AB是西妥昔單抗、帕木單抗、英利昔單抗、阿達(dá)木單抗、依法珠單抗、伊匹單抗、 tremelimumab (CTLA-4單抗)、阿德木單抗、Hu5c8、阿倫單抗、雷珠單抗、托西莫單抗、替伊莫單抗、利妥昔單抗、英利昔單抗、貝伐珠單抗或figitUmUmab(IGFR-l抑制劑)。在某些實(shí)施例中，AA的靶點(diǎn)選自表1中的靶點(diǎn)所構(gòu)成的組。在具體的實(shí)施例中，靶點(diǎn)是 Notch 2,Notch 3,Notch 4,Jagged UJagged 2、CD52、MUC1、IGF1R、轉(zhuǎn)鐵蛋白、gpl30、 VCAM-I、CD44、DLL4 或 IL4
在一個(gè)具體的實(shí)施例中，AB不是阿倫單抗并且靶點(diǎn)不是⑶52。在某些實(shí)施例中，AA的CM是一種用于胱氨酸蛋白酶、纖溶酶、TMPRSS-3/4，MMP_9， MT1-MMP、組織蛋白酶、半胱天冬蛋白酶、人類中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶、β-分泌酶、uPA或 PSA的底物。再具體的實(shí)施例中，AA進(jìn)一步與能夠被一種酶特異性修飾的一種第二裂解基團(tuán)(CM)耦合。在該實(shí)施例中，第二 CM是一種用于胱氨酸蛋白酶、纖溶酶、TMPRSS-3/4， MMP-9, MT1-MMP、組織蛋白酶、半胱天冬蛋白酶、人類中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶、β -分泌酶、 uPA或PSA的底物。在本發(fā)明的一些AA的實(shí)施例中，CM包含在匪中。在本發(fā)明的一些AA的實(shí)施例中，MM不能包含多于50%的與AB的一個(gè)天然的結(jié)合配體相似的氨基酸序列。在本發(fā)明的一些AA的實(shí)施例中，AA進(jìn)一步包含一個(gè)連接肽，其特征在于連接肽位于匪和CM之間。在具體的實(shí)施例中，連接肽位于匪和CM之間。在某些實(shí)施例中，本發(fā)明提供的AA進(jìn)一步包含一種檢測(cè)基團(tuán)或一種結(jié)合到AB的試齊LU在另一方面，本發(fā)明提供了一種激活抗體的組合物(AAC)包括兩種抗體或抗體片段(ABl和AB^，每一種都能與其靶點(diǎn)特異性結(jié)合，至少一種能與ABl和ΑΒ2耦合能抑制 ABl和ΑΒ2與其靶點(diǎn)特異性結(jié)合的掩蔽基團(tuán)(MM)，以及至少一種能與ABl和AB2耦合，通過激活A(yù)AC的成分能被一種酶特異性裂解的裂解基團(tuán)(CM)。其中當(dāng)AAC處于未裂解狀態(tài)時(shí)， 匪抑制ABl和AB2與其靶點(diǎn)特異性結(jié)合，以及當(dāng)AAC處于裂解狀態(tài)時(shí)，MM不抑制ABl和AB2 與其靶點(diǎn)特異性結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施例中，AAC是雙特異性的，其中ABl和AB2連接位于相同靶點(diǎn)的同一抗原表位；或者ABl和AB2連接位于相同靶點(diǎn)的不同抗原表位；ABl和AB2連接位于不同靶點(diǎn)的不同抗原表位。在一個(gè)AAC的實(shí)施例中，CM至少以IxlO4M" 1S4速率能構(gòu)被酶特異性裂解。在一個(gè)實(shí)施例中，其中AAC的ABl或AB2是一種抗體片段，該抗體片段選自一種 Fab'片段、一種F(ab' ) 2片段、一種scFv、一種scAB a dAb、一種單域重鏈抗體和一種單域輕鏈抗體所構(gòu)成的組。在一個(gè)AAC的實(shí)施例中，ABl和/或AB2選自表2中的抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施例中，ABl和/或AB2是西妥昔單抗、帕木單抗、英利昔單抗、阿達(dá)木單抗、依法珠單抗、伊匹單抗、tremelimumab (CTLA-4單抗)、阿德木單抗、Hu5c8、阿倫單抗、雷珠單抗、托西莫單抗、 替伊莫單抗、利妥昔單抗、英利昔單抗、貝伐珠單抗或figitUmUmab(IGFR-l抑制劑)。在一個(gè)AAC的實(shí)施例中，ABl和或AB2的靶點(diǎn)選自表1中的靶點(diǎn)所構(gòu)成的組。在相關(guān)的實(shí)施例中，ABl 和或 AB2 的靶點(diǎn)是 EGFR、TNF α、CDlla、CSFR、CTLA-4, EpCAM、VEGF, CD40、CD20、Notch 1、Notch 2、Notch 3、Notch 4、Jagged 1、Jagged 2、CD52、MUC1、IGF1R、 轉(zhuǎn)鐵蛋白、gp 130、VCAM-I、CD44、DLL4 或 IL4。在一個(gè)相關(guān)AAC的抗體中，CM是用于選自表3中的酶所構(gòu)成的組中酶的一種底物。 在一個(gè)具體的實(shí)施例中，CM是用于半胱氨酸蛋白酶、纖溶酶、TMPRSS-3/4、MMP-9、MTl-MMP、 組織蛋白酶、半胱天冬蛋白酶、人類中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶、β -分泌酶、uPA或PSA的一種底物。在又一個(gè)具體的實(shí)施例中，AAC進(jìn)一步與一個(gè)能被一種酶特異性裂解的第二裂解基團(tuán)耦合并且該第二裂解基團(tuán)是用于半胱氨酸蛋白酶、纖溶酶、TMPRSS-3/4、MMP-9、MTl-MMP、 組織蛋白酶、半胱天冬蛋白酶、人類中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶、β -分泌酶、uPA或PSA的一種底物。在AAC的具體實(shí)施例中，MM不包含多余50%的氨基酸片段在另一個(gè)有關(guān)AAC的實(shí)施例中，AAC進(jìn)一步包括一個(gè)測(cè)試基團(tuán)或進(jìn)一步與一種試劑共軛。本發(fā)明提供了一種治療和診斷主體一種疾病的方法，包括供給主體一種組合成分，包括能構(gòu)專門與其靶點(diǎn)結(jié)合的一種抗體或一種抗體片段(AB)、能抑制特定的AB與其靶點(diǎn)的結(jié)合的耦合到AB的掩蔽基團(tuán)(MM)、以及能夠?qū)ｉT被酶裂解的一種耦合到AB裂解基團(tuán)(CM)。其中，根據(jù)對(duì)主體的供給，對(duì)比AA處在裂解CM的足夠酶活和匪不抑制AB與其靶點(diǎn)的特異性結(jié)合的情況，當(dāng)AA不處于裂解CM的足夠酶活下，MM至少降低AB與其靶點(diǎn)特異性結(jié)合程度的90%。在該方法中，AB選自一個(gè)Fab片段，一個(gè)F (ab) 2片段，一個(gè)scFv，一個(gè)scAB —個(gè) dAb，一個(gè)單域重鏈抗體和異構(gòu)單域輕鏈抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施例中，癥狀是癌。在另一個(gè)具體的實(shí)施例中，MM不是天然的AB的結(jié)合配體。在本方法的各種實(shí)施例中，AB是選自表2中的抗體所構(gòu)成的組。具體地，在一些實(shí)施例中，AB是西妥昔單抗、帕木單抗、英利昔單抗、阿達(dá)木單抗、依法珠單抗、伊匹單抗、 tremelimumab (CTLA-4單抗)、阿德木單抗、Hu5c8、阿倫單抗、雷珠單抗、托西莫單抗、替伊莫單抗、利妥昔單抗、英利昔單抗、貝伐珠單抗或figitUmUmab(IGFR-l抑制劑)。在本方法的各種實(shí)施例中，靶點(diǎn)選自表1中的靶點(diǎn)所構(gòu)成的組中。在具體的實(shí)施例中，靶點(diǎn)是 EGFR、TNF α、CDlIa、CSFR、CTLA-4, EpCAM、VEGF, CD40、CD20、Notch 1、Notch
2、Notch3、Notch 4、Jagged 1、Jagged 2、CD52、MUC1、IGF1R、轉(zhuǎn)鐵蛋白、gpl30、VCAM-I、 CD44、DLL4 或 IL4在本方法的一個(gè)非常具體的實(shí)施例中，AB不是阿侖單抗，并且靶點(diǎn)不是⑶52。在本方法的各種實(shí)施例中，CM是選自表3中的酶所構(gòu)成的組中酶的一種底物。在具體的實(shí)施例中，CM是半胱氨酸蛋白酶、纖溶酶、TMPRSS-3/4，MMP-9，MTl-MMP、組織蛋白酶、 半胱天冬蛋白酶、人類中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶、β-分泌酶、uPA或PSA的一種底物。本發(fā)明提供了在哺乳動(dòng)物主體中抑制血管生成的方法。該方法包括在治療上供給主體所需的足量的藥物成分，包括一種修飾的ΑΒ、一種ΑΑ、一種AAC或一種AACJ，其中靶點(diǎn)是 EGFR、TNF α、CDlIa、CSFR、CTLA-4, EpCAM、VEGF, CD40、CD20、Notch 1、Notch 2、Notch
3、Notch4、Jagged 1、Jagged 2、CD52、MUC1、IGF1R、轉(zhuǎn)鐵蛋白、gpl30、VCAM-I、CD44、DLL4、 或IL4。在一個(gè)具體的實(shí)施例中，AB是西妥昔單抗(cetuximab)、帕尼單抗(panitumumab)、 英利昔單抗(infliximab)、阿達(dá)木單抗(adalimumab)、依法利珠單抗(efalizumab)、伊匹單抗(ipilimumab)、tremelimumab、阿德木單抗(adecatumumab)、Hu5c8、阿倉珠單抗(alemtuzumab)、雷珠單抗(ranibizumab)、托西莫單抗(tositumomab)、替伊莫單抗 (ibritumomab tiuxetan)、利要昔單抗(rituximab)、英利昔單抗(infliximab)、貝伐珠單抗(bevacizumab)、或 figitumumab。CM 是半胱氨酸蛋白酶、纖溶酶、TMPRSS-3/4，MMP-9, MT1-MMP、組織蛋白酶、半胱天冬蛋白酶、人類中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶、β-分泌酶、uPA或PSA的一種底物。本發(fā)明提供了在一種制備激活抗體(AA)的組合物成分的方法包括提供一種能夠與其靶點(diǎn)特異性結(jié)合的抗體或抗體片段(AB)，一種與AB耦合能抑制AB與其靶點(diǎn)特異性結(jié)合的掩蔽基團(tuán)(MM)，一種與AB耦合能由酶特異性裂解的裂解基團(tuán)(CM)。其中與匪耦合的AB對(duì)其靶點(diǎn)的離解常數(shù)(Kd)比沒有與匪耦合的AB對(duì)其靶點(diǎn)的離解常數(shù)(Kd)至少大 100 倍。在一個(gè)本方法的實(shí)施例中，AB選自或衍生自表2中的抗體所構(gòu)成的組中的抗體。 在一個(gè)具體的實(shí)施例中，AB是或衍生自西妥昔單抗、帕木單抗、英利昔單抗、阿達(dá)木單抗、依法珠單抗、伊匹單抗、tremelimumab (CTLA-4單抗)、阿德木單抗、Hu5c8、阿倫單抗、雷珠單抗、托西莫單抗、替伊莫單抗、利妥昔單抗、英利昔單抗、貝伐珠單抗或figitumumab(IGFR-l 抑制劑)。在一個(gè)非常具體的實(shí)施例中，AB不是alemtuzumab并且靶點(diǎn)不是⑶52。在本方法的另一個(gè)實(shí)施例中，CM是選自表3中的酶構(gòu)成的組中的酶的一種底物。 在一個(gè)具體的實(shí)施例中，CM是半胱氨酸蛋白酶、纖溶酶、TMPRSS-3/4，MMP-9, MT1-MMP、組織蛋白酶、半胱天冬蛋白酶、人類中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶、β-分泌酶、uPA或PSA的一種底物。本發(fā)明提也供了一種篩選能確定一種能與抗體或抗體片段結(jié)合的掩蔽基團(tuán)(MM) 肽的候選肽的方法，包括提供一種肽支架庫，其中每一種肽支架包括一種跨膜蛋白，以及一種候選肽，將一種AB與庫接觸，確定至少一種能與AB結(jié)合的候選肽，并確定候選肽與AB 的離解系數(shù)(Kd)是否在I-IOnM之間。在本方法的各種實(shí)施例中，該庫包括病毒胞或孢子。具體地在一個(gè)實(shí)施例中，該庫中包括大腸桿菌，在另一個(gè)實(shí)施例中，肽支架進(jìn)一步包括一種檢測(cè)基團(tuán)。本發(fā)明也提供了另一種篩選方法，該方法能確定具有最優(yōu)的掩蔽效能的掩蔽抗體或抗體片段的掩蔽基團(tuán)(MM)肽。包括提供一種包括都中AB的庫，每一種都與一種候選肽結(jié)合，其中AB能與其靶點(diǎn)特異性結(jié)合；對(duì)每一個(gè)庫成員與其靶點(diǎn)進(jìn)行培養(yǎng)；對(duì)比每一個(gè)庫成員與靶點(diǎn)結(jié)合和每一個(gè)庫成員沒有耦合候選肽時(shí)與靶點(diǎn)的親和力。在一個(gè)具體的實(shí)施例中，最優(yōu)掩蔽效能是當(dāng)庫成員與其靶點(diǎn)結(jié)合的親和力是與沒有經(jīng)過修飾的AB與其靶點(diǎn)結(jié)合親和力的10%時(shí)。在一方面，本發(fā)明提供的也是一種提高了生物利用度的抗體療法，其中，當(dāng)對(duì)比治療抗體在第二組織中與其靶點(diǎn)的結(jié)合時(shí)，治療抗體在一種第一組織中與其靶點(diǎn)結(jié)合的親和力較低。在一個(gè)相關(guān)的方面，本發(fā)明提供的也是一種藥物成分包括一種能與其靶點(diǎn)結(jié)合的抗體或抗體片段(AB)，一種藥學(xué)上可接受的賦形劑。其中，抗體或抗體片段在第一組織中與其靶點(diǎn)的親和力低于抗體或抗體片段在第二組織中與其靶點(diǎn)的親和力。在一個(gè)具體的實(shí)施例中，AB與掩蔽基團(tuán)(MM)耦合能將低AB與其靶點(diǎn)的結(jié)合，并且AB與裂解基團(tuán)(耦合)能被一種酶特異性裂解。在相關(guān)的實(shí)施例中，靶點(diǎn)是EGFR、TNFa、CD lla、CSFR、CTLA_4、EpCAM、VEGF、CD40、 CD20、Notch 1、Notch 2、Notch 3、Notch 4、Jagged 1、Jagged 2、CD52、MUC1、IGF1R、轉(zhuǎn)鐵蛋白、gpl30、VCAM-I、⑶44、DLL4或IL4。在相關(guān)的實(shí)施例中，CM是用于半胱氨酸蛋白酶、 纖溶酶、TMPRSS-3/4、MMP-9、MT1-MMP、組織蛋白酶、半胱天冬蛋白酶、人類中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶、β-分泌酶、uPA或PSA—種底物。在相關(guān)的實(shí)施例中，抗體或抗體片段是西妥昔單抗、帕木單抗、英利昔單抗、阿達(dá)木單抗、依法珠單抗、伊匹單抗、tremelimUmab(CTLA-4單抗)、阿德木單抗、Hu5c8、阿倫單抗、雷珠單抗、托西莫單抗、替伊莫單抗、利妥昔單抗、英利昔單抗、貝伐珠單抗或figitumumab (IGFR-1抑制劑)。在一個(gè)具體的實(shí)施例中，第一組織是一種正常組織，第二組織是一種病變組織?；蛘叩谝唤M織是一種早期腫瘤，第二種組織是一種晚期腫瘤。第一種組織是一種良性腫瘤，第二種組織是一種惡性腫瘤?；蛘叩谝环N組織和第二種組織是空間上分開的。或第一種組織是上皮組織，第二種組織是乳腺、頭、頸、肺、胰腺、神經(jīng)系統(tǒng)、肝、前列腺、泌尿生殖道或?qū)m頸組織。在一個(gè)實(shí)施例中，在一個(gè)具體的實(shí)施例中，藥劑是一種抗腫瘤藥。本發(fā)明提供的也是一種用于診斷和治療的具體的組合物成分。本發(fā)明提供的組合物包含一種半胱氨酸蛋白酶激活的與掩蔽基團(tuán)(MM)耦合的抗體或抗體片段(AB)；—種組合物包含一種纖溶酶激活的與掩蔽基團(tuán)(MM)耦合的抗體或抗體片段(AB)；—種組合物包含一種半胱天冬蛋白酶激活的與掩蔽基團(tuán)(MM)耦合的抗體或抗體片段(AB)；—種組合物包含一種TMPRSS-3/4激活的與掩蔽基團(tuán)(MM)耦合的抗體或抗體片段(AB)；—種組合物包含一種PSA激活的與掩蔽基團(tuán)(MM)耦合的抗體或抗體片段(AB)；—種組合物包含一種組織蛋白酶激活的與掩蔽基團(tuán)(MM)耦合的抗體或抗體片段(AB)；—種組合物包含一種人類中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶激活的與掩蔽基團(tuán)(MM)耦合的抗體或抗體片段(AB)；—種組合物包含一種分泌酶激活的與掩蔽基團(tuán)(MM)耦合的抗體或抗體片段(AB)；—種組合物包含一種uPA激活的與掩蔽基團(tuán)(MM)耦合的抗體或抗體片段(AB)；—種組合物包含一種TMPRSS-3/4激活的與掩蔽基團(tuán)(MM)耦合的抗體或抗體片段(AB)；—種組合物包含一種 MTl-MMP激活的與掩蔽基團(tuán)(MM)耦合的抗體或抗體片段(AB)；—種組合物包含一種激活的與掩蔽基團(tuán)(MM)耦合的EGFR抗體或抗體片段(AB)；—種組合物包含一種激活的與掩蔽基團(tuán)(MM)耦合的TNF α抗體或抗體片段(AB)；—種組合物包含一種激活的與掩蔽基團(tuán)(MM) 耦合的CDlIa抗體或抗體片段(AB)；—種組合物包含一種激活的與掩蔽基團(tuán)(MM)耦合的 CSFR抗體或抗體片段(AB)；—種組合物包含一種激活的與掩蔽基團(tuán)(MM)耦合的CTLA-4抗體或抗體片段(AB)；—種組合物包含一種激活的與掩蔽基團(tuán)(MM)耦合的EpCAM抗體或抗體片段(AB)；—種組合物包含一種激活的與掩蔽基團(tuán)(MM)耦合的⑶40L抗體或抗體片段 (AB)；—種組合物包含一種激活的與掩蔽基團(tuán)(MM)耦合的Notchl抗體或抗體片段(AB)； 一種組合物包含一種激活的與掩蔽基團(tuán)(MM)耦合的Notch3抗體或抗體片段(AB)；—種組合物包含一種激活的與掩蔽基團(tuán)(MM)耦合的Jaggedl抗體或抗體片段(AB)；—種組合物包含一種激活的與掩蔽基團(tuán)(MM)耦合的Jagged2抗體或抗體片段(AB)；—種組合物包含一種激活的與掩蔽基團(tuán)(MM)耦合的cetuximab抗體或抗體片段(AB)；—種組合物包含一種激活的與掩蔽基團(tuán)(MM)耦合的vectibix抗體或抗體片段(AB)；—種組合物包含一種激活的與掩蔽基團(tuán)(MM)耦合的infliximab抗體或抗體片段(AB)；—種組合物包含一種激活的與掩蔽基團(tuán)(MM)耦合的adalimumab抗體或抗體片段(AB)；—種組合物包含一種激活的與掩蔽基團(tuán)(MM)耦合的efalizumab抗體或抗體片段(AB)；—種組合物包含一種激活的與掩蔽基團(tuán)(MM)耦合的ipilimumab抗體或抗體片段(AB)；—種組合物包含一種激活的與掩蔽基團(tuán)(MM)耦合的tremelimumab (CTLA-4單抗)抗體或抗體片段(AB)；—種組合物包含一種激活的與掩蔽基團(tuán)(MM)耦合的adecatumumab抗體或抗體片段(AB)；
參考文獻(xiàn)就像每一個(gè)單獨(dú)的出版物、專利或?qū)＠暾?qǐng)被專門及單獨(dú)指出作為文獻(xiàn)納入本發(fā)明一樣，本發(fā)明提到的所有出版物、專利和專利申請(qǐng)以相同的范圍作為文獻(xiàn)納入本發(fā)明。


本發(fā)明的新特點(diǎn)在專門所附的權(quán)利要求中闡明。參考如下說明性實(shí)例提出的詳細(xì)的描述將對(duì)本發(fā)明的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)獲得更好的理解。在實(shí)例中使用了本發(fā)明的原理，并有配圖。圖1顯示了含有一種抗體(一種AB)、一種掩蔽基團(tuán)(MM)、和一種裂解基團(tuán)(CM) 的一種蛋白酶激活的AA。圖2顯示了一種典型的AA在體外的活性。圖A顯示了 AA不能結(jié)合、副作用可以忽略的正常組織；圖B顯示了病變組織，其中AA被一種特定疾病蛋白/降低允許AA結(jié)合到靶點(diǎn)的試劑激活并起作用。圖3顯示了一種生成蛋白激活的AA的過程，包括匪的篩選；CM的篩選；匪、CM和一種AB的組裝；表達(dá)和純化組裝的結(jié)構(gòu)；已經(jīng)分析組裝的結(jié)構(gòu)獲得在體外和體內(nèi)的活性和毒性。圖4提供了一種典型MMP-9裂解掩蔽抗EGF scFv的氨基酸序列。圖 5 提供了 ELISA 數(shù)據(jù)，顯示 MMP-9 對(duì) MBP 激活抗-VEGFscFv AA 與 MM 306 禾口 314。樣品用TEV處理以出去MBP融合的配體隨后被MMP-9消化激活。圖6提供了 ELISA數(shù)據(jù)，顯示了依賴MMP-9的VEGF與抗VEGFscFv His結(jié)合的結(jié)構(gòu)與306MM。圖7提供了 ELISA數(shù)據(jù)，顯示了依賴MMP-9的VEGF與抗VEGFscFv-Fc AA結(jié)合與來自HEK細(xì)胞上清液的MM306和314。圖8提供了 ELISA數(shù)據(jù)，顯示了依賴MMP-9的VEGF與抗VEGFscFv-Fc AA結(jié)合的結(jié)構(gòu)及用蛋白A柱純化的匪306和314。圖9顯示了與抗VEGF抗體結(jié)合、具有> 600nM親和力的306匪沒有有效地排除與 VEGF的結(jié)合。圖10顯示了抗CTLA4的輕鏈和重鏈通過SOE-PCR連接，在乂！^和VJh兩個(gè)方向產(chǎn)生scFv結(jié)構(gòu)。圖11顯示了用PCR增加匪克隆、CM裂解片段、GGS2連接體在抗CTLA4 scFv VhVl and VJh結(jié)構(gòu)的N-末端的位點(diǎn)數(shù)。圖12顯示了一種被MMP-9激活的AA。圖13顯示了當(dāng)CM被裂解移除匪，AB的連接被恢復(fù)。圖14 一節(jié)AA激活一種蛋白酶，導(dǎo)致抗體結(jié)合未修改抗體難以區(qū)別。圖15顯示了一種包含一種具有與VEG特異性結(jié)合親和力AB的AA被抑制，激活的 AA與具有皮摩爾親和力的VEGF結(jié)合。圖16描繪了一種包含一種具有與VEG特異性結(jié)合親和力AB的AA抑制HUVEC增殖。圖17顯示了培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞表現(xiàn)出原位穩(wěn)健地激活包含一種具有與VEG特異性結(jié)合親和力AB的AA。圖18顯示一種在正常和癌患者血漿中沒有活性的AA。圖19顯示了抗CTU^scFv與小鼠和人CTLA4的結(jié)合。圖20顯示了一種蛋白激活的包含一種抗體(含有一種AB)的AACJ，一種掩蔽基團(tuán)(MM)，一種裂解基團(tuán)(CM)，以及一種共軛試劑?；贑M的裂解和解掩蔽，共軛的AB被釋放。圖21顯示了在標(biāo)有抗VEGF的3種不同的濃度熒光團(tuán)。所有三個(gè)具親合性成熟的肽顯示至少有比JS306高倍10的親合性。圖22顯示了一些EGFR的親和力成熟的過程。圖23顯示了 C225Fab與MM3690、MM3%4和MM3957結(jié)合的細(xì)胞親和力測(cè)量的結(jié)合曲線。MM39M和MM3957顯示了至少比MM3690高100倍親和力。圖M顯示了靶點(diǎn)替代物分析和以親代抗體結(jié)合程度百分比表示的平衡結(jié)合程度。圖25顯示了不同于uPA對(duì)照，底物SM16、KK 1203、204和1214表現(xiàn)出了經(jīng)KLK5、 KLK7和纖溶酶裂解的阻力。圖沈顯示了不同于一種非優(yōu)化的底物，優(yōu)化的底物Plasl237、Plasl29和 Plasl254表現(xiàn)了經(jīng)KLK5、KLK7裂解的阻力。圖27圖A顯示了 kFv AA的活化，包括天冬酰胺內(nèi)肽酶的底物AANL和PTNL隨后經(jīng)5mg/mL天冬酰胺內(nèi)肽酶處理。圖B顯示了抗VEGF IgG AA的活化，包括天冬酰胺內(nèi)肽酶的底物PTNL。圖28顯示了天冬酰胺內(nèi)肽酶活化的AA中被活化的AA在每一個(gè)時(shí)間點(diǎn)占總AA的比例。當(dāng)活化7天被纖維酶活化的AA接近活化完全時(shí)，兩種被天冬酰胺內(nèi)肽酶活化的AA 僅有最低限度的活化。被天冬酰胺內(nèi)肽酶活化的AA長達(dá)7天是從血清中分離出來，隨后注射保持掩蔽。(η = 4)。圖四顯示了掩蔽的單鏈Fv-Fc融合原抗體表現(xiàn)出提高了的血清半衰期。圖30顯示了在健康小鼠體內(nèi)超過10天的scFv-Fc血藥濃度。AA的濃度7天后的劑量仍維持穩(wěn)定，而親代scFv-Fc的濃度3天后降低，10天后幾乎檢測(cè)不到。圖31顯示了與親代scFv-Fc在荷瘤小鼠體內(nèi)相比，AAscFv-Fc在血清中的濃度提高并維持時(shí)間較長。在3天及3-7天和7天在血清中檢測(cè)到占初始劑量較高百分比的AA。圖32顯示了在對(duì)荷瘤小鼠進(jìn)行的多次劑量的研究中，AAscFv-Fcs維持在高濃度。 在研究過程中，AA比其親代保持顯著的高血藥濃度。圖33顯示了與沒有經(jīng)匪修飾的抗體相比，AA在正常小鼠血清中維持在高水平。圖34顯示，由蛋白酶活化的激活抗體復(fù)合物(AAC)，包一種或多種抗體或抗體片段(在該圖中，AB被稱為ABD)、一種掩蔽基團(tuán)(MM)和一種裂解基團(tuán)(CM)，其中ABD 1和 ABD2被任意指定給第一和第二 AB。在該實(shí)施例中，MM 1和MM2分別與含有ABD 1和ABD2 域結(jié)合，作為掩蔽基團(tuán)干擾靶點(diǎn)與一種未裂解的能進(jìn)行雙靶點(diǎn)結(jié)合的AAC結(jié)合。結(jié)合AB的靶點(diǎn)可以相同或不同，或相同靶點(diǎn)的不同結(jié)合點(diǎn)。在一些實(shí)施例中(圖IA、ID、IF)，匪1在相反的分子上與含有ABD2的域結(jié)合，形成能夠作為ABDl和ABD2的掩蔽基團(tuán)的復(fù)合物。圖35顯示，在未裂解狀態(tài)下發(fā)生交叉掩蔽的AAC，這樣與兩個(gè)AB結(jié)合的靶點(diǎn)被減弱，并且在一種裂解CM(使復(fù)合物分解)的試劑存在時(shí)，靶點(diǎn)的結(jié)合提高了。在該圖中，ABl 禾口 AB2分別被稱為ABDl禾口 ABD2。圖36顯示，在未裂解狀態(tài)下，一種通過匪1和ABDl (ABl)共價(jià)鍵形成的AAC，這樣， 由ABD2(AB》連接的靶點(diǎn)被減弱，并且在一種裂解CM(使復(fù)合物分解)的試劑存在時(shí)，靶點(diǎn)的結(jié)合提高了。在該圖中，ABl和AB2分別被稱為ABDl和ABD2。發(fā)明詳述本發(fā)明提供修飾抗體組成及對(duì)治療和診斷有用的修飾抗體組成。本發(fā)明所述的組成顧及更好的生物分布和提高了生物利用度。修飾的和激活的抗體本發(fā)明所述的修飾抗體組成包含至少一種抗體或及其抗體片段(在整個(gè)本發(fā)明中統(tǒng)稱為AB)，能夠特異性與一種靶點(diǎn)結(jié)合，其中AB是由一種掩蔽基團(tuán)(MM)修飾的。當(dāng)AB用匪修飾并在靶點(diǎn)存在時(shí)，對(duì)比沒有用MM修飾的AB與其靶點(diǎn)的結(jié)合或親代AB與其靶點(diǎn)的結(jié)合，AB與其靶點(diǎn)的特異性結(jié)合被降低或被抑制。用匪修飾的AB對(duì)其靶點(diǎn)的離解常數(shù)可以至少是5、10、25、50、100、250、 500,1000,2500,5000,10000,50000,100000,500000,1000000,5000000,10000000, 50000000 或大于、或在 5-10、10-100、10-1000、10-10000、10-100000、10-1000000、 10-10000000、100-1000、100-10000、100-100000、100-1000000、100-10000000、 1000-10000、1000-100000、1000-1000000、1000-10000000、10000-100000、10000-1000000、 10000-10000000、100000-1000000之間，或比沒有用MM修飾的AB對(duì)其靶點(diǎn)或親代AB 對(duì)其靶點(diǎn)的Kd大100000-10000000倍。相反，用匪修飾的AB對(duì)其靶點(diǎn)的親和力可以至少是 5、10、25、50、100、250、500、1000、2500、5000、10000、50000、100000、500000、 1000000、5000000、10000000、50000000 或大于、或在 5-10、10-100、10-1000、10-10000、 10-100000、10-1000000、10-10000000、100-1000、100-10000、100-100000、100-1000000、 100-10000000、1000-10000、1000-100000、1000-1000000、1000-10000000、10000-100000、 10000-1000000、10000-10000000、100000-1000000 之間，或比沒有用 MM 修飾的 AB 對(duì)其靴點(diǎn)或親代AB對(duì)其靶點(diǎn)的親和力低100000-10000000倍。匪對(duì)AB的離解常數(shù)(Kd) —般大于AB對(duì)其靶點(diǎn)的離解常數(shù)。匪對(duì)AB的離解常數(shù)可以至少是 5、10、25、50、100、250、500、1000、2500、5000、10000、100000、1000000 或甚至比AB對(duì)其靶點(diǎn)的離解常數(shù)大10000000倍。相反，匪對(duì)AB的親和力可以至少是5、10、25、 50、100、250、500、1000、2500、5000、10000、100000、1000000 或甚至比 AB 對(duì)其靴點(diǎn)的親和力低 10000000 倍。如本發(fā)明所述，當(dāng)AB用匪修飾并在靶點(diǎn)存在時(shí)，對(duì)比沒有用匪修飾的AB與其靶點(diǎn)的特異性結(jié)合或親代AB與其靶點(diǎn)的特異性結(jié)合，AB與其靶點(diǎn)的特異性結(jié)合被降低或被抑制。當(dāng)對(duì)比沒有用匪修飾的AB與其靶點(diǎn)的結(jié)合或親代AB與其靶點(diǎn)的結(jié)合，當(dāng)用匪修飾時(shí)，在體內(nèi)或在體外用靶點(diǎn)替代物進(jìn)行免疫吸附劑分析，AB與其靶點(diǎn)的結(jié)合能力可以被降低至少 50%、60%、70%、80%、90%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 以及甚至 100% 至少 2,4,6,8,12，28，24，30，36，48，60，72，84，96，小時(shí)，或 5，10，15，30，45，60， 90，120，150，180 天，或 1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12 月或更長。匪能抑制AB與其靶點(diǎn)的結(jié)合。匪能與AB的抗原結(jié)合域結(jié)合從而抑制AB與其靶點(diǎn)的結(jié)合。MM能sterically抑制AB與其靶點(diǎn)的結(jié)合。MM能allosterically抑制AB與其靶點(diǎn)的結(jié)合。在這些實(shí)施例中，當(dāng)AB被修飾即被匪耦合并在靶點(diǎn)存在時(shí)，AB與其靶點(diǎn)沒有結(jié)合或基本沒有結(jié)合，或當(dāng)與沒有經(jīng)匪修飾的AB、親代AB、或沒有耦合匪的AB與其靶點(diǎn)的結(jié)合對(duì)比時(shí)，AB與其靶點(diǎn)的結(jié)合不大于0. 001%,0.01%,0. 1%U%>2%,3%,4%, 5%、6%、7%、8%、9%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%或 50%，，如本發(fā)明所述，當(dāng)在體內(nèi)或在體外用靶點(diǎn)替代物進(jìn)行免疫吸附劑分析，至少為2、4、6、8、12、28、對(duì)、30、36、48、 60、72、84、96 小時(shí)，或 5、10、15、30、45、60、90、120、150、180 天，或 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、 11、12月或更長。當(dāng)一種AB被匪耦合即由匪修飾時(shí)，匪能“掩蔽”或降低、或抑制AB與其靶點(diǎn)的特異性結(jié)合。當(dāng)一種AB被MM耦合即由MM修飾時(shí)，這種耦合或修飾能影響一種降低或抑制 AB與其靶點(diǎn)特異性結(jié)合能力的結(jié)構(gòu)的變化。一種AB與MM耦合或用MM修飾可以用如下式子表示，按順序從一個(gè)氨基(N)端區(qū)域到羰基(C)端區(qū)域(MM) - (AB) (AB) - (MM)(MM) -L- (AB)(AB) -L- (MM)其中MM是一種掩蔽基團(tuán)，AB是一種抗體或抗體片段，L是一種連接體。在許多實(shí)施例中，可能需要插入一個(gè)或多個(gè)連接體。例如，柔性連接體，插入相應(yīng)位置以便提供柔軟性。在某些實(shí)施例中，匪不是一種AA的天然結(jié)合配體。匪可以是AB的一種修飾的結(jié)合配體，其中AA含有至少輕微間給親和力和或?qū)B的結(jié)合親和力的氨基酸變化。在一些實(shí)施例中，MM不包含或基本不包含同源的AB的天然結(jié)合配體。在一些實(shí)施例中，類似于 AB 的天然配體，MM 不大于 5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、 60%、65%、70%、75% 或 80%。本發(fā)明也提供了激活的抗體(AAs)其中被匪修飾的AB進(jìn)一步包括一個(gè)或多個(gè)裂解基團(tuán)(CM)。這中AA是表現(xiàn)出與AB的靶點(diǎn)的可激活/可轉(zhuǎn)換的結(jié)合。AAs—般包括一種抗體或抗體片段(AB)、被修飾或耦合到一種掩蔽基團(tuán)(MM)以及一種有修飾能力的或裂解的基團(tuán)(CM)。在一些實(shí)施例中，CM包含一種作為目標(biāo)蛋白酶底物的氨基酸或氨基酸序列。 在其他實(shí)施例中，CM提供一種通過還原可裂解的半胱氨酸-半胱氨酸雙硫鍵。在又一個(gè)實(shí)施例中，CM提供一種通過光解作用激活的光解底物。在圖1中是典型AA的一個(gè)原理圖。如圖所示，AA的部件這樣排列使CM定位在一種裂解狀態(tài)(或相對(duì)激活狀態(tài))并在一個(gè)靶點(diǎn)存在的情況，AB與辦學(xué)目標(biāo)結(jié)合，而在一種未裂解的狀態(tài)(或相對(duì)未激活的狀態(tài))并在一個(gè)靶點(diǎn)存在的情況，由于AB與其靶點(diǎn)的結(jié)合能力由MM抑制或掩蔽，AB與其靶點(diǎn)的特異性結(jié)合被降低或被抑制。經(jīng)一種MM和一種CM修飾的AB對(duì)靶點(diǎn)的離解常數(shù)Kd可以至少是5、10、25、50、100、 250,500,1,000,2,500,5000,10000,50000,100000,500, 000、1000000、5000000、10000000、 50000000 或大于、或在 5-10、10-100、10-1000、10-10000、10-100000、10-1000000、 10-10000000、100-1000、100-10000、100-100000、100-1000000、100-10000000、 1000-10000、1000-100000、1000-1000000、1000-10000000、10000-100000、10000-1000000、10000-10000000、100000-1000000之間，或比沒有經(jīng)MM和CM修飾的AB對(duì)靶點(diǎn)的Kd 大100000-10000000倍。相反，經(jīng)一種匪和一種CM修飾的AB對(duì)靶點(diǎn)結(jié)合的親和力可以至少是 5、10、25、50、100、250、500、1000、2500、5000、10000、50000、100000、500000、 1000000、5000000、10000000、50000000 或大于，或在 5-10、10-100、10-1、000、10-10000、 10-100000、10-1000000、10-10000000、100-1000、100-10000、100-100000、100-1000000、 100-10000000、1000-10000、1000-100000、1000-1000000、1000-10000000、10000-100000、 10000-1000000、10000-10000000、100000-1000000 之間，或比沒有經(jīng) MM 和 CM 修飾的 AB 對(duì)靶點(diǎn)結(jié)合的親和力低100000-10000000倍。如本發(fā)明所述，對(duì)比沒有被匪和CM修飾的AB與其靶點(diǎn)的結(jié)合，當(dāng)AB被匪和CM 修飾并在靶點(diǎn)存在而修飾試劑(如一種酶、蛋白酶、減活劑、光)不存在時(shí)，AB與其靶點(diǎn)的特異性結(jié)合可被降低或抑制。當(dāng)對(duì)比親代AB或沒有被匪和CM修飾的AB與其靶點(diǎn)的結(jié)合， 在體內(nèi)或在體外用靶點(diǎn)替代物進(jìn)行免疫吸附劑分析，被MM和CM修飾的AB結(jié)合其靶點(diǎn)的能力被降低至少 50%、60%、70%、80%、90%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 以及甚至 100%至少 2、4、6、8、12、28、M、30、36、48、60、72、84、96 小時(shí)，或 5、10、15、30、45、 60、90、120、150、180天，或 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12 月或更長。如本發(fā)明所使用的，術(shù)語裂解狀態(tài)是指AA伴隨通過蛋白質(zhì)，和/或一種半胱氨酸-半胱氨酸雙硫鍵、CM鍵、和/或光激活修飾CM的狀態(tài)。如本發(fā)明所使用的，術(shù)語未裂解狀態(tài)，是指AA不在蛋白質(zhì)裂解CM的狀態(tài)，和/或不在CM的胱氨酸-半胱氨酸雙硫鍵降低的狀態(tài)、和/或不在光存在的狀態(tài)。如上所述，本發(fā)明所用的術(shù)語AA是指一種AA在未裂解(原始)狀態(tài)及其裂解狀態(tài)的兩種狀態(tài)。這對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員是明確的，在一些實(shí)施例中，由于通過蛋白質(zhì)對(duì)一種CM的裂解，AA可能缺少一種匪，至少導(dǎo)致匪的釋出(其中匪沒有與通過共價(jià)鍵(如在半胱氨酸殘基之間的雙硫鍵)結(jié)合)?？杉せ畹幕蚩赊D(zhuǎn)換的意思是當(dāng)在一種被抑制、被掩蔽或未裂解狀態(tài)(即，一種第一結(jié)構(gòu))時(shí)，AA表現(xiàn)出一種與其靶點(diǎn)結(jié)合的第一水平，以及在未被抑制、未被掩蔽和/或裂解狀態(tài)(即，一種第二結(jié)構(gòu))時(shí)AA表現(xiàn)出一種與其靶點(diǎn)結(jié)合的第二水平，其中與其靶點(diǎn)結(jié)合的第二水平大于與其靶點(diǎn)結(jié)合的第一水平。一般地，在能夠裂解CM的裂解劑存在時(shí)靶點(diǎn)到達(dá)AA的AB程度比在裂解劑不存在時(shí)是大。這樣，當(dāng)AA處在未裂解狀態(tài)時(shí)，AB與靶點(diǎn)的結(jié)合被抑制并且其與靶點(diǎn)的結(jié)合被掩蔽(即，地域結(jié)構(gòu)是這樣，AB不能與靶點(diǎn)結(jié)合)，而在裂解狀態(tài)AB未被抑制或未被掩蔽其與靶點(diǎn)的結(jié)合。AA的CM和AB可以選擇成AB代表一種相關(guān)靶點(diǎn)的結(jié)合基團(tuán)，CM代表在一個(gè)主體內(nèi)的治療位置能與靶點(diǎn)共存的蛋白酶的一種底物。此外，CM是一個(gè)半胱氨酸-半胱氨酸雙硫鍵是可裂解的，作為雙硫健減少的結(jié)果。AA另外或?qū)⑦M(jìn)一步包括一種不耐光的底物，可通過一種光源激活。這里所說的AA有特別的用途，其中，例如，能夠裂解CM中的位點(diǎn)的蛋白酶在一個(gè)治療位點(diǎn)(如病變組織，如治療處理或診斷處理的例子)的靶點(diǎn)含有的組織中比未經(jīng)治療位點(diǎn)(如在正常組織中)的組織中處于相對(duì)高的水平，如圖2的示例。這里所說的AA也有特別的用途，其中，例如，一種能夠降低CM中的位點(diǎn)降低劑在中比在未經(jīng)治療和診斷位點(diǎn)的組織中處于相對(duì)較高的水平。這里所說的AA也有特別的用途，例如，像一種治療或診斷位點(diǎn)的靶點(diǎn)含有的組織引入一種能夠光解CM中的一種位點(diǎn)的光源，例如激光。
在一些實(shí)施例中，AA可提供降低毒性和/或不良的副作用，否則，如果AB沒有被掩蔽或抑制與靶點(diǎn)的結(jié)合，將導(dǎo)致AB在未治療位點(diǎn)的結(jié)合。其中，AA包含被一種易于減少雙硫鍵的降低劑裂解的CM，AA的這種AB可以選擇以利用AB的活化，其中有關(guān)的靶點(diǎn)出現(xiàn)在需要治療的以提高了一種降低劑的水平為特征的位點(diǎn)，這樣的環(huán)境中具有比，例如，未治療位點(diǎn)的環(huán)境中更高的降低潛力。一般地，當(dāng)在構(gòu)象約束下，一種AA可以通過選擇一種目標(biāo)AB和構(gòu)建AA的剩余部分進(jìn)行設(shè)計(jì)以便匪為AB提供掩蔽或降低AB與其靶點(diǎn)測(cè)定結(jié)合。結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)準(zhǔn)則的采用須考慮提供這種結(jié)構(gòu)特性。在某些實(shí)施例中，本發(fā)明提供了結(jié)合雙靶點(diǎn)的AA。這種結(jié)合雙靶點(diǎn)的AA包含兩個(gè)可以結(jié)合相同或不同靶點(diǎn)的AB，在具體的實(shí)施例中，雙靶點(diǎn)AA包含兩個(gè)具體的抗體或抗體片段。在一個(gè)具體的實(shí)施例中，AA包含一種IL17 AB和一種IL23 AB0在其他具體的實(shí)施例中，AA 包含一種 IL 12 AB 和一種 IL23 AB,或一種 EGFR AB 和一種 VEGF AB,或一種 IGFlR AB 和一種 EGFR AB,或一種 cMET AB 和一種 IGF1RAB，或一種 EGFR AB 和一種 VEGF AB,或一種Notch受體AB和一種EGFR AB,或一種Jagged配體AB和一種EGFR AB,或一種cMET AB 和一種 VEGF AB0雙靶點(diǎn)結(jié)合的AA可以設(shè)計(jì)成具有被一種在一個(gè)靶點(diǎn)組織中與一個(gè)或兩個(gè)能夠結(jié)合AA中的AB的靶點(diǎn)共存的裂解劑裂解的CM。具有多于一個(gè)對(duì)相同或不同靶點(diǎn)的雙靶點(diǎn) AB可以設(shè)計(jì)成具有多于一個(gè)CM，其中第一 CM是在一個(gè)第一靶點(diǎn)的組織中被一種裂解劑可裂解的。而其中的第二 CM是在一個(gè)第二靶點(diǎn)的組織中被一種裂解劑可裂解的，具有能夠與 AA中的AB結(jié)合的一個(gè)或多個(gè)靶點(diǎn)。第一和第二靶點(diǎn)的組織在空間上可以是分開的，例如， 在有機(jī)體中的不同位點(diǎn)。第一和第二靶點(diǎn)的組織可以是暫時(shí)分開的相同組織，例如，在兩個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)相同的組織。例如，第一時(shí)間點(diǎn)是當(dāng)組織是一種健康的腫瘤時(shí)，第二時(shí)間點(diǎn)是當(dāng)組織是一種壞死的腫瘤時(shí)。為在一種被抑制的結(jié)構(gòu)或未被抑制的結(jié)構(gòu)中的靶點(diǎn)的結(jié)合提供了在一個(gè)所需的動(dòng)態(tài)范圍表現(xiàn)出可轉(zhuǎn)換表形的AA。動(dòng)態(tài)范圍一般是指一種比例，具有從(a)在第一套條件下的參數(shù)的最大可檢測(cè)水平到(b)在第二套條件下的參數(shù)的最小可檢測(cè)值。例如，在關(guān)于 AA的描述中，動(dòng)態(tài)范圍是是指從(a)在能裂解AA的CM的蛋白酶存在下靶點(diǎn)與AA結(jié)合的最大可檢測(cè)水平到(b)在該蛋白酶不存在時(shí)靶點(diǎn)與AA結(jié)合的最小可檢測(cè)水平。AA的動(dòng)態(tài)范圍可以以AA裂解劑治療(例如，酶)的平衡裂解常數(shù)與AA裂解劑治療(例如，酶)的平衡裂解常數(shù)的比例進(jìn)行計(jì)算。AA的動(dòng)態(tài)分為越大，其可轉(zhuǎn)換表形越好。動(dòng)態(tài)范圍數(shù)值相對(duì)較高的AA(例如，大于1)表現(xiàn)出更好的轉(zhuǎn)換表型，以便在裂解AA的CM的裂解劑(例如，酶) 存在時(shí)比裂解劑不存在時(shí)使靶點(diǎn)蛋白與AA的結(jié)合在更大的范圍發(fā)生(例如，顯著地發(fā)生)。AA可以多種結(jié)構(gòu)形式提供。有關(guān)AA的典型的結(jié)構(gòu)式在下文提供。專門設(shè)想在AA 中的AB、匪和CM從N到C端的順序被占據(jù)。也專門設(shè)想CM和匪可能在氨基酸序列中重疊，例如，CM包含在MM中。例如，可以下面的式子代表AA，按順序從一個(gè)氨基(N)端區(qū)域到羰基(C)端區(qū)域(MM) - (CM) - (AB)(AB) - (CM) - (MM)其中MM是一種掩蔽基團(tuán)，CM是一種裂解基團(tuán)，以及AB是一種抗體及其片段。應(yīng)該指出，盡管MM和CA在上面的結(jié)構(gòu)式中是不同的組件顯示的，在本發(fā)明所有典型的實(shí)施例中(包括結(jié)構(gòu)式)設(shè)想匪和CM中的氨基酸序列可以重疊，例如，這樣CM可以被全部或部分地包含在MM中。此外，上述結(jié)構(gòu)式為位于AA部件的N端或C端提供了額外的氨基酸序列。在許多實(shí)施例中，可能希望插入一個(gè)或多個(gè)連接體，如柔性連接體，到AA的結(jié)構(gòu)中以便在一個(gè)或多個(gè)MM-CM結(jié)點(diǎn)、CM-AB結(jié)點(diǎn)或其兩者提供柔性。例如，AB、匪和/或CM可能不含足夠數(shù)量的殘基(如617、％1~、4印、4811，特別是617和^^，尤其是617)以提供所需的柔性。因此，這種AA結(jié)構(gòu)的可轉(zhuǎn)換表型可以從一個(gè)或多個(gè)氨基酸的引入受益以便提供一種柔性的連接體。此外，如下文所示，其中AA作為一種構(gòu)象約束結(jié)構(gòu)而提供，一種柔性連接體可以被切實(shí)可行地插入以便在為未裂解的AA中易于形成并維持一個(gè)環(huán)狀結(jié)構(gòu)。例如，在某些實(shí)施例中，一種AA包括下面的結(jié)構(gòu)式中的一種(其中，在N到C端方向或C到N端方向，下式代表一種氨基酸序列)(MM) -L1- (CM) - (AB)(MM) - (CM) -L1- (AB)(MM) -L1- (CM) -L2- (AB)CyCIo [L1- (MM) -L2- (CM) -L3- (AB)]其中匪、CM及AB如上文所定義；其中LpLdPL3各自獨(dú)立及可選則存在或不存在、 是相同或不同的連接體，包括至少一種柔性氨基酸(如GIy)，其中出現(xiàn)cyclo位置，由于在 AA中一對(duì)半胱氨酸之間存在雙硫健AA是一種環(huán)狀結(jié)構(gòu)的形式。此外，上式可能在AA基元的 N端或C端提供了額外的氨基酸序列。應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，在式CyCIo [L1- (MM) -L2- (CM) -L3- (AB)] 中，負(fù)責(zé)提供硫鍵的半胱氨酸可能置于AA中兼顧一個(gè)或兩個(gè)尾端，從而當(dāng)AA處于一個(gè)雙硫健結(jié)構(gòu)中時(shí)產(chǎn)生一個(gè)套索或歐米茄結(jié)構(gòu)(這樣處于構(gòu)象約束狀態(tài))。尾端的氨基酸序列為 AA提供了額外的特性，如與靶點(diǎn)的受體結(jié)合使AA易于定位、提高AA的血清半衰期，等等。 靶向基團(tuán)(例如，出現(xiàn)在靶點(diǎn)組織中的一個(gè)細(xì)胞受體的配體)和血清半衰期延長基團(tuán)(如， 多呆與血清蛋白結(jié)合的多態(tài)，如免疫球蛋白(例如IgG))或血清白蛋白(如人血清白蛋白 HSA)。經(jīng)過修飾并激活的抗體的基元。(a)抗體或抗體片段(統(tǒng)稱為AB)根據(jù)本發(fā)明，AB針對(duì)任何可能使用的抗原或半抗原。本發(fā)明中使用的AB針對(duì)任何行列式，例如，腫瘤、細(xì)菌、真菌、病毒、寄生蟲、支原體、組織相容性，差異化和其他細(xì)胞膜抗原、病原體表面抗原、毒素、酶、過敏原、藥物、細(xì)胞內(nèi)靶點(diǎn)、任何生物活性分子。此外，可能使用相對(duì)于不同抗原行列式的AB結(jié)合體。如本發(fā)明所使用的，AB是能結(jié)合特別是特異性與相關(guān)的靶點(diǎn)，特別是相關(guān)蛋白質(zhì)靶點(diǎn)結(jié)合的全尺寸的抗體或包含一種抗原結(jié)合域的抗體片段。在圖1中提供了 AA的一種原理圖。在這樣的實(shí)施例中，AB可以是但不限于一種可變或高度可變的抗體的輕鏈和/或重鏈(Uh)的區(qū)域、可變片段(Fv)、Fab'片段、F(ab' ) 2片段、Fab片段、單鏈抗體(scAb)、 單鏈可變域(scFv)、互補(bǔ)決定域(⑶R)、域抗體(dAbs)、BHH或BNAR類型的單域重鏈免疫球蛋白、單域輕鏈免疫球蛋白、或其他本領(lǐng)域已知的含有一種能與靶點(diǎn)蛋白或在靶點(diǎn)蛋白上的抗原表位結(jié)合的AB的多態(tài)。在進(jìn)一步的實(shí)施例中，AB可以是含有多于一種AB的嵌合體或雜交組合體，例如一種第一 AB和一種第二 AB，這樣，每一個(gè)AB能與相同或不同的靶點(diǎn)結(jié)合。在一些實(shí)施例中，AB是雙特異性的抗體或其片段。設(shè)計(jì)成與兩種不同的抗原結(jié)合。在一些實(shí)施例中，存在一種在激活形式的第一匪和CM和/或第二匪和CM分別與第一 AB和第~■ AB 耦合。AB的起源可以是一種天然存在的抗體或抗體片段、一種非天然存在的抗體或抗體片段、一種合成的抗體或抗體片段、一種混合抗體或抗體片段、或一種工程抗體或抗體片段。該抗體可以是一種人源化抗體或抗體片段。在某些實(shí)施例中，AA含有不止一種AB。在一些實(shí)施例中，AB可以衍生自雙特異性抗體或抗體片段。在其他抗體中，AA可以是工程合成的以便納入到衍生在兩種不同抗體或抗體片段的AB中。在這種實(shí)施例中，AB可以設(shè)計(jì)成與兩種不同的靶點(diǎn)、兩種不同的抗體、 或兩種同一靶點(diǎn)上的不同抗原表位結(jié)合。一種含有多個(gè)AB且能與多于一種靶點(diǎn)位點(diǎn)結(jié)合的AB通常設(shè)計(jì)成與一種靶點(diǎn)或多個(gè)目標(biāo)靶點(diǎn)上的不同的結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合，這樣，一種AA的第一 AB的結(jié)合基本不干擾該AA的第二 AB與靶點(diǎn)的結(jié)合。含有多個(gè)AB的AA可以進(jìn)一步包括多個(gè)AB-MM單元，它們可以選擇性地被額外的CM分開，這樣，由于暴露于一種修飾劑，AB 與其靶點(diǎn)的特異性結(jié)合不再受到抑制，或是“解掩蔽的”。在一些實(shí)施例中，把抗體片段用于源允許靶點(diǎn)位點(diǎn)在一種提高的速率下滲透。IgG 免疫球蛋白的Fab'片段由抗體與胃蛋白酶[導(dǎo)致一種二價(jià)片段(Fab1U]或木瓜蛋白酶 [導(dǎo)致 2 個(gè)一價(jià)片段(2Fab)]裂解獲得。Parham, 1983, J. Immunol. 131 :2895-2902 ；Lamoyi and Nisonoff，1983，J. Immunol. Meth. 56 :235-243。二價(jià)(Fab1) 2 片段可以分裂通過一種或幾種雙硫鍵的緩和減少產(chǎn)生單價(jià)Fab'片段。Fab和(Fab1) 2片段比一個(gè)完整抗體小，但仍含有一個(gè)AB，所以當(dāng)用作AB時(shí)可以更容易地滲透到靶點(diǎn)的位點(diǎn)或組織。在某些實(shí)施例中，因?yàn)樵S多這樣的片段不能跨過胎盤屏障，這可提供在體內(nèi)傳遞的一種優(yōu)勢(shì)。結(jié)果，使用本發(fā)明的這種實(shí)施例，AA可以在孕婦體內(nèi)位點(diǎn)(如腫瘤)傳遞而避免胎兒的暴露。為一種給定的靶點(diǎn)生成一種抗體(或其片段)的方法為本專業(yè)所熟知。抗體和抗體片段的結(jié)構(gòu)、一種抗體的輕鏈和重鏈(VHand Vl)的可變域、Fv、F(ab' )2、Fab片段、單鏈抗體(scAb)、單鏈可變域(scFv)、互補(bǔ)決定域(CDR)和域抗體(dAb)都是所熟知的。生成具有所需的靶點(diǎn)抗原的一種抗原結(jié)合域的多肽的方法為本專業(yè)所熟知。修飾抗體或抗體片段與額外的多態(tài)耦合的方法為本專業(yè)所熟知。例如，肽如MM、CM 或連接體可以經(jīng)過耦合以修飾抗體形成本發(fā)明中的修飾AB和AA。如在圖3的原理圖中描述的，使用標(biāo)準(zhǔn)方法可以開發(fā)并生產(chǎn)含有蛋白酶激活的AB的AA。該抗體或抗體片段(統(tǒng)稱為AB)能與一種蛋白質(zhì)靶點(diǎn)特異性結(jié)合。本發(fā)明中的一種 AB 與其靶點(diǎn)在裂解系數(shù)不大于 1000nM、100nM、50nM、10nM、5nM、lnM、500pM、400pM、 350ρΜ、300ρΜ、250ρΜ、200ρΜ、150ρΜ、100ρΜ、50ρΜ、25ρΜ、10ρΜ、5ρΜ、1ρΜ、0· 5ρΜ 或 0.IpM 時(shí)特
異性結(jié)合。有關(guān)AB的靶點(diǎn)的典型類型包括，但不一定限于，細(xì)胞表面受體和分泌的集合蛋白 (例如、生長因子)、水溶性酶、結(jié)構(gòu)蛋白(例如，膠原蛋白、纖維連接蛋白)等。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明預(yù)期的AA是那些具有能連接一種胞外靶點(diǎn)、通常是一種胞外蛋白靶點(diǎn)。在其他實(shí)施例中，AA可以設(shè)計(jì)成細(xì)胞吸收以及設(shè)計(jì)成在細(xì)胞內(nèi)可轉(zhuǎn)換的在典型的實(shí)施例中，沒有任何方式的限制，AB是用于表一中的任何靶點(diǎn)的一種結(jié)合配體。在具體的典型實(shí)施例中，AB是一種用于EGFR、TNFa、CD lla、CSFR、CTLA_4、EpCAM、VEGF、CD40、CD20、Notch 1、Notch 2、Notch 3、Notch 4、Jaggedl、Jagged 2、CD52、MUC1、 IGF1R、鐵傳遞蛋白、gpl30、VCAM-I、⑶44、DLL4或L4的結(jié)合配體。在一個(gè)具體的實(shí)施例中， AB不是CD52的結(jié)合配體。在典型的實(shí)施例中，沒有任何方式的限制，AB的典型來源列于表2中。在具體的典型實(shí)施例中，本發(fā)明中AB的來源是西妥昔單抗、帕木單抗、英利昔單抗、阿達(dá)木單抗、依法珠單抗、伊匹單抗、tremelimumab (CTLA-4單抗)、阿德木單抗、Hu5c8、阿倫單抗、雷珠單抗、 托西莫單抗、替伊莫單抗、利妥昔單抗、英利昔單抗、貝伐珠單抗或figitUmUmab(IGFR-l抑制劑)。在一個(gè)具體的實(shí)施例中，AB的來源不是阿侖單抗或不是Campath 。表1:典型靶點(diǎn)
權(quán)利要求
1.一種修飾抗體包括一種抗體或一種抗體片段(AB)，能夠特異性的結(jié)合其靶點(diǎn)，與一種掩蔽基團(tuán)(MM)耦合，其中，匪的耦合降低了 AB與其靶點(diǎn)結(jié)合的能力，這樣，耦合了匪的AB對(duì)其靶點(diǎn)的離解常數(shù)(Kd)比沒有耦合匪的AB對(duì)其靶點(diǎn)的Kd至少大100倍。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的修飾抗體，其特征在于所述耦合了匪的AB對(duì)其靶點(diǎn)的Kd 比沒有耦合匪的AB對(duì)其靶點(diǎn)的Kd至少大1000倍。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的修飾抗體，其特征在于所述耦合了匪的AB對(duì)其靶點(diǎn)的Kd 比沒有耦合匪的AB對(duì)其靶點(diǎn)的Kd至少大10000倍。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的修飾抗體，其特征在于在靶點(diǎn)存在情況下，當(dāng)使用靶點(diǎn)置換分析法進(jìn)行體外測(cè)試時(shí)，對(duì)比沒有耦合匪的AB與其靶點(diǎn)的結(jié)合能力，耦合了匪的AB與其靶點(diǎn)的結(jié)合能力至少降低90%。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的修飾抗體，其特征在于所述匪與AB耦合降低AB與其靶點(diǎn)結(jié)合的能力至少12小時(shí)。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的修飾抗體，其特征在于所述匪與AB耦合降低AB與其靶點(diǎn)結(jié)合的能力至少M(fèi)小時(shí)。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的修飾抗體，其特征在于所述匪與AB耦合降低AB與其靶點(diǎn)結(jié)合的能力至少72小時(shí)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的修飾抗體，其特征在于所述MM對(duì)AB的離解常數(shù)(Kd)至少比AB對(duì)其靶點(diǎn)的Kd大100倍。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的修飾抗體，其特征在于所述匪對(duì)AB的Kd低于ΙΟηΜ。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的修飾抗體，其特征在于所述匪對(duì)AB的Kd低于5nM。
11.根據(jù)權(quán)利要求8所述的修飾抗體，其特征在于所述匪對(duì)AB的Kd低于InM。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的修飾抗體，還與一種可裂解基團(tuán)(CM)耦合。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的修飾抗體，其特征在于所述CM可以被一種酶裂解。
14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的修飾抗體，其特征在于所述CM可以被一種還原劑還原。
15.根據(jù)權(quán)利要求12所述的修飾抗體，其特征在于所述CM可以被光溶解。
16.根據(jù)權(quán)利要求12所述的修飾抗體，其特征在于所述匪可以特異性結(jié)合到AB的抗原結(jié)合域。
17.根據(jù)權(quán)利要求12所述的修飾抗體，其特征在于所述MM與抗原結(jié)合域的結(jié)合是非共價(jià)的。
18.根據(jù)權(quán)利要求1所述的修飾抗體，其特征在于所述MM從同分異構(gòu)空間位阻上減低AB與其靶點(diǎn)結(jié)合的能力。
19.根據(jù)權(quán)利要求1所述的修飾抗體，其特征在于所述MM從空間位阻上減低AB與其靶點(diǎn)結(jié)合的能力。
20.根據(jù)權(quán)利要求12所述的修飾抗體，其特征在于所述CM可以在至少約IxIO4M1S''1 的速率下被一種酶特異性裂解。
21.根據(jù)權(quán)利要求12所述的AB，其特征在于所述CM可以在至少^clO4M4S的速率下被一種酶特異性裂解。
22.根據(jù)權(quán)利要求20所述的修飾抗體，其特征在于所述CM可以在至少IOxlO4M4S的速率下被一種酶特異性裂解。
23.根據(jù)權(quán)利要求1所述的修飾抗體，其特征在于所述抗體片段選自一種Fab'片段、 一種F(ab' ) 2片段、一種scFv、一種scAB a dAb、一種單域重鏈抗體和一種單域輕鏈抗體所構(gòu)成的組。
24.根據(jù)權(quán)利要求1所述的修飾抗體，其特征在于所述AB選自表2中的抗體所構(gòu)成的組。
25.根據(jù)權(quán)利要求M所述的修飾抗體，其特征在于所述AB不是阿倫單抗。
26.根據(jù)權(quán)利要求M所述的修飾抗體，其特征在于所述AB是西妥昔單抗、帕木單抗、 英利昔單抗、阿達(dá)木單抗、依法珠單抗、伊匹單抗、tremelimumab(CTLA-4單抗)、阿德木單抗、Hu5c8、阿倫單抗、雷珠單抗、托西莫單抗、替伊莫單抗、利妥昔單抗、英利昔單抗、貝伐珠單抗或 f igitumumab (IGFR-1 抑制劑)。
27.根據(jù)權(quán)利要求1所述的修飾抗體，其特征在于所述靶點(diǎn)選自表1中的靶點(diǎn)所構(gòu)成的組。
28.根據(jù)權(quán)利要求1所述的修飾抗體，其特征在于所述靶點(diǎn)不是CD52。
29.根據(jù)權(quán)利要求27所述的修飾抗體，其特征在于所述靶點(diǎn)是EGFR、TNFα、⑶1 la、 CSFR、CTLA-4、EpCAM、VEGF、CD40、CD20、Notch 1、Notch 2、Notch 3、Notch 4、Jagged 1、 Jagged 2、CD52、MUC1、IGF1R、轉(zhuǎn)鐵蛋白、gpl30、VCAM-I、CD44、DLL4 或 IL4。
30.根據(jù)權(quán)利要求1所述的修飾抗體，還包括一種第二AB，其特征在于所述第二 AB的靶點(diǎn)選自表1中靶點(diǎn)所構(gòu)成的組。
31.根據(jù)權(quán)利要求12所述的修飾抗體，其特征在于所述CM位于MM內(nèi)。
32.根據(jù)權(quán)利要求12所述的修飾抗體，其特征在于所述CM是用于選自由表3中的酶所構(gòu)成的組中的酶的一種底物。
33.根據(jù)權(quán)利要求32所述的修飾抗體，其特征在于所述CM是用于天冬酰胺內(nèi)肽酶、 纖溶酶、TMPRSS-3/4、MMP-9, MT1-MMP、組織蛋白酶、半胱天冬蛋白酶、人類中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶、β -分泌酶、uPA或PSA的一種底物。
34.根據(jù)權(quán)利要求32所述的修飾抗體，其特征在于所述AB選自表2中的抗體所構(gòu)成的組。
35.根據(jù)權(quán)利要求32所述的修飾抗體，其特征在于所述AB不是阿倫單抗。
36.根據(jù)權(quán)利要求34所述的修飾抗體，其特征在于所述AB是西妥昔單抗、帕木單抗、 英利昔單抗、阿達(dá)木單抗、依法珠單抗、伊匹單抗、tremelimumab(CTLA-4單抗)、阿德木單抗、Hu5c8、阿倫單抗、雷珠單抗、托西莫單抗、替伊莫單抗、利妥昔單抗、英利昔單抗、貝伐珠單抗或 f igitumumab (IGFR-1 抑制劑)。
37.根據(jù)權(quán)利要求32所述的修飾抗體，其特征在于所述靶點(diǎn)選自表1中的靶點(diǎn)所構(gòu)成的組。
38.根據(jù)權(quán)利要求37所述的修飾抗體，其特征在于所述靶點(diǎn)不是CD52。
39.根據(jù)權(quán)利要求37所述的修飾抗體，其特征在于所述靶點(diǎn)是EGFR、TNFa、⑶11a、 CSFR、CTLA-4、EpCAM、VEGF, CD40、CD20、Notch 1、Notch 2、Notch 3、Notch 4、Jaggedl、 Jagged 2、CD52、MUC1、IGF1R、轉(zhuǎn)鐵蛋白、gpl30、VCAM-I、CD44、DLL4 或 IL4。
40.根據(jù)權(quán)利要求12所述的修飾抗體，進(jìn)一步耦合到第二裂解基團(tuán)(CM)，能夠被一種酶特異性修飾。
41.根據(jù)權(quán)利要求40所述的修飾抗體，其特征在于所述第二CM是一種用于天冬酰胺內(nèi)肽酶、纖溶酶、TMPRSS-3/4、MMP-9，MT1-MMP、組織蛋白酶、半胱天冬蛋白酶、人類中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶、β -分泌酶、uPA或PSA的底物。
42.根據(jù)權(quán)利要求1所述的修飾抗體，其特征在于相對(duì)于AB的天然結(jié)合配體，所述MM 不含有多于50%的氨基酸序列的相似性。
43.根據(jù)權(quán)利要求1所述的修飾抗體，還包含一種連接肽，其特征在于所述連接肽位于AB和MM之間。
44.根據(jù)權(quán)利要求1所述的修飾抗體，還包含一種連接肽，其特征在于所述連接肽位于匪和CM之間。
45.根據(jù)權(quán)利要求12所述的修飾抗體，還包含一種連接肽，其特征在于所述連接肽位于AB和CM之間。
46.根據(jù)權(quán)利要求12所述的修飾抗體，還包含兩種連接肽，其特征在于所述第一連接肽在AB和CM之間，而第二連接肽位于匪和CM之間。
47.根據(jù)權(quán)利要求43所述的修飾抗體，其特征在于所述鏈接體選自一種可裂解鏈接體、一種非可裂解鏈接體和一種分支鏈接體所構(gòu)成的組。
48.根據(jù)權(quán)利要求44所述的修飾抗體，其特征在于所述鏈接體選自一種可裂解鏈接體、一種非可裂解鏈接體和一種分支鏈接體所構(gòu)成的組。
49.根據(jù)權(quán)利要求45所述的修飾抗體，其特征在于所述鏈接體選自一種可裂解鏈接體、一種非可裂解鏈接體和一種分支鏈接體所構(gòu)成的組。
50.根據(jù)權(quán)利要求46所述的修飾抗體，其特征在于所述鏈接體選自一種可裂解鏈接體、一種非可裂解鏈接體和一種分支鏈接體所構(gòu)成的組。
51.根據(jù)權(quán)利要求1所述的修飾抗體，還包含一種可檢測(cè)基團(tuán)。
52.根據(jù)權(quán)利要求47所述的修飾抗體，還包含一種能夠與AB耦合、能夠被一種酶特異性修飾的可裂解基團(tuán)(CM)。
53.根據(jù)權(quán)利要求47所述的修飾抗體，其特征在于所述可檢測(cè)基團(tuán)是一種診斷試劑。
54.根據(jù)權(quán)利要求1所述的修飾抗體，還包含一種與AB共軛的試劑。
55.根據(jù)權(quán)利要求M所述的修飾抗體，其特征在于所述試劑是一種治療劑。
56.根據(jù)權(quán)利要求M所述的修飾抗體，還包含一種能夠與AB耦合、能夠被特異性裂解的可裂解基團(tuán)(CM)
57.根據(jù)權(quán)利要求56所述的修飾抗體，其特征在于所述試劑是一種抗腫瘤藥劑。
58.根據(jù)權(quán)利要求56所述的修飾抗體，其特征在于所述抗體或抗體片段選自表2中的抗體所構(gòu)成的組。
59.根據(jù)權(quán)利要求56所述的修飾抗體，其特征在于所述AB不是阿侖單抗。
60.根據(jù)權(quán)利要求56所述的修飾抗體，其特征在于所述抗體或抗體片段是西妥昔單抗、帕木單抗、英利昔單抗、阿達(dá)木單抗、依法珠單抗、伊匹單抗、tremelimumab (CTLA-4單抗)、阿德木單抗、Hu5c8、阿倫單抗、雷珠單抗、托西莫單抗、替伊莫單抗、利妥昔單抗、英利昔單抗、貝伐珠單抗或f igitumumab (IGFR-1抑制劑)。
61.根據(jù)權(quán)利要求56所述的修飾抗體，其特征在于所述靶點(diǎn)選自表中的靶點(diǎn)所構(gòu)成的組。
62.根據(jù)權(quán)利要求56所述的修飾抗體，其特征在于所述靶點(diǎn)不是CD52。
63.根據(jù)權(quán)利要求61所述的修飾抗體，其特征在于所述靶點(diǎn)是EGFR、TNFa、⑶11a、 CSFR、CTLA-4、EpCAM、VEGF, CD40、CD20、Notch 1、Notch 2、Notch 3、Notch 4、Jaggedl、 Jagged 2、CD52、MUC1、IGF1R、轉(zhuǎn)鐵蛋白、gpl30、VCAM-I、CD44、DLL4 或 IL4。
64.根據(jù)權(quán)利要求56所述的修飾抗體，其特征在于所述CM是選自表3中的酶所構(gòu)成的組中的酶的一種底物。
65.根據(jù)權(quán)利要求64所述的修飾抗體，其特征在于所述CM是選自天冬酰胺內(nèi)肽酶、 纖溶酶、TMPRSS-3/4、MMP-9, MT1-MMP、組織蛋白酶、半胱天冬蛋白酶、人類中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶、β -分泌酶、uPA、或PSA的底物。
66.根據(jù)權(quán)利要求56所述的修飾抗體，其特征在于所述CM是可以通過光解作用裂解的。
67.根據(jù)權(quán)利要求M所述的修飾抗體，其特征在于所述試劑是與一個(gè)AB的碳水化合物基團(tuán)共軛的。
68.根據(jù)權(quán)利要求67所述的修飾抗體，其特征在于所述碳水化合物基團(tuán)位于AB的抗原結(jié)合域外。
69.根據(jù)權(quán)利要求M所述的修飾抗體，其特征在于所述試劑與AB的巰基共軛。
70.根據(jù)權(quán)利要求12所述的修飾抗體，其特征在于為一種有機(jī)體給藥時(shí)，所述組合物的血清半衰期至少在5天。
71.根據(jù)權(quán)利要求1所述的修飾抗體，其特征在于所述匪的共有序列是CISPRGC、 C(N/P)H(HVF) (Y/T) (F/ff/T/L) (Y/G/T/S) (T/S/Y/H)CGCISPRGCG、xCxxYQCLxxxxxx, XXQPxPPRVXX、PxPGFPYCxxxx, xxxxQxxPWPP、GxGxCYTILExxCxxxR、GxxxCYxIxExxCxxxx, GxxxCYxIxExffCxxxx >xxxCCxxYxIxxCCxxx 或 xxxxxYxILExxxxx。
72.根據(jù)權(quán)利要求57所述的修飾抗體，其特征在于所述共有序列是用于特異性連接到一種抗VEGF抗體、一種抗ETOR抗體、或一種抗CTLA-4抗體。
73.—種修飾抗體包括一種抗體或抗體片段(AB)，能夠與其靶點(diǎn)特異性結(jié)合，與一種掩蔽基團(tuán)(MM))耦合，其特征在于當(dāng)使用靶點(diǎn)的替代物在體外進(jìn)行測(cè)試時(shí)，對(duì)比沒有耦合匪的AB與其靶點(diǎn)的結(jié)合能力，耦合了匪的AB與其靶點(diǎn)的結(jié)合能力至少降低90%。
74.根據(jù)權(quán)利要求73所述的修飾抗體，其特征在于所述AB與其靶點(diǎn)的結(jié)合時(shí)間至少降低12小時(shí)。
75.根據(jù)權(quán)利要求73所述的修飾抗體，其特征在于所述AB與其靶點(diǎn)的結(jié)合時(shí)間至少降低24小時(shí)。
76.根據(jù)權(quán)利要求73所述的修飾抗體，其特征在于所述AB與其靶點(diǎn)結(jié)合的時(shí)間至少降低72小時(shí)。
77.根據(jù)權(quán)利要求73所述的修飾抗體，其特征在于所述耦合了匪的AB對(duì)其靶點(diǎn)的離解常數(shù)(Kd)比沒有耦合匪的AB對(duì)其靶點(diǎn)的Kd至少大100倍。
78.根據(jù)權(quán)利要求73所述的修飾抗體，其特征在于所述MM對(duì)AB的離解常數(shù)(Kd)比 AB對(duì)其靶點(diǎn)的Kd至少大100倍。
79.根據(jù)權(quán)利要求78所述的修飾抗體，其特征在于所述匪對(duì)AB的Kd低于ΙΟηΜ。
80.根據(jù)權(quán)利要求78所述的修飾抗體，其特征在于所述匪對(duì)AB的Kd低于5nM。
81.根據(jù)權(quán)利要求78所述的修飾抗體，其特征在于所述匪對(duì)AB的Kd約為InM。
82.根據(jù)權(quán)利要求78所述的修飾抗體，還包含在AA與MM之間一種鏈接體。
83.根據(jù)權(quán)利要求82所述的修飾抗體，其特征在于所述鏈接體包含一種可裂解基團(tuán) (CM) ο
84.根據(jù)權(quán)利要求78所述的修飾抗體，其特征在于所述匪可以特異性連接到AB的抗原結(jié)合域。
85.根據(jù)權(quán)利要求83所述的修飾抗體，其特征在于所述CM可以在至少IXIO4M1S''1的速率下被一種酶特異性裂解。
86.根據(jù)權(quán)利要求83所述的修飾抗體，其特征在于所述CM可以在至少^10 的速率下被一種酶特異性裂解。
87.根據(jù)權(quán)利要求83所述的修飾抗體，其特征在于所述CM可以在至少的速率下被一種酶特異性裂解。
88.根據(jù)權(quán)利要求83所述的修飾抗體，其特征在于所述CM可以被一種還原劑裂解。
89.根據(jù)權(quán)利要求83所述的修飾抗體，其特征在于所述CM可以被光解作用裂解。
90.根據(jù)權(quán)利要求73所述的修飾抗體，其特征在于所述抗體片段選自一種Fab'片段、一種F(ab' )2片段、一種scFv、一種scAB a dAb、一種單域重鏈抗體和一種單域輕鏈抗體所構(gòu)成的組。
91.根據(jù)權(quán)利要求73所述的修飾抗體，其特征在于所述AB選自表2中的抗體所構(gòu)成的組。
92.根據(jù)權(quán)利要求91所述的修飾抗體，其特征在于所述AB是西妥昔單抗、帕木單抗、 英利昔單抗、阿達(dá)木單抗、依法珠單抗、伊匹單抗、tremelimumab(CTLA-4單抗)、阿德木單抗、Hu5c8、阿倫單抗、雷珠單抗、托西莫單抗、替伊莫單抗、利妥昔單抗、英利昔單抗、貝伐珠單抗或 f igitumumab (IGFR-1 抑制劑)。
93.根據(jù)權(quán)利要求73所述的修飾抗體，其特征在于所述靶點(diǎn)選自表1中的靶點(diǎn)所構(gòu)成的組。
94.根據(jù)權(quán)利要求93所述的修飾抗體，其特征在于所述靶點(diǎn)是EGFR、TNFa、⑶11a、 CSFR、CTLA-4、EpCAM、VEGF, CD40、CD20、Notch 1、Notch 2、Notch 3、Notch 4、Jaggedl、 Jagged 2、CD52、MUC1、IGF1R、轉(zhuǎn)鐵蛋白、gpl30、VCAM-I、CD44、DLL4 或 IL4。
95.根據(jù)權(quán)利要求73所述的修飾抗體，其特征在于所述AB不是阿倫單抗。
96.根據(jù)權(quán)利要求73所述的修飾抗體，其特征在于所述靶點(diǎn)不是CD52。
97.根據(jù)權(quán)利要求83所述的修飾抗體，其特征在于所述CM是用于選自表3的酶所構(gòu)成的組中的酶的一種底物。
98.根據(jù)權(quán)利要求97所述的修飾抗體，其特征在于所述CM是用于天冬酰胺內(nèi)肽酶、 纖溶酶、TMPRSS-3/4、MMP-9, MT1-MMP、組織蛋白酶、半胱天冬蛋白酶、人類中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶、β -分泌酶、uPA或PSA的一種底物。
99.根據(jù)權(quán)利要求83所述的修飾抗體，進(jìn)一步耦合到一種第二裂解基團(tuán)(CM)，可以被一種酶特異性修飾。
100.根據(jù)權(quán)利要求99所述的修飾抗體，其特征在于所述第二CM是用于天冬酰胺內(nèi)肽酶、纖溶酶、TMPRSS-3/4、MMP-9，MT1-MMP、組織蛋白酶、半胱天冬蛋白酶、人類中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶、β -分泌酶、uPA或PSA的一種底物。
101.根據(jù)權(quán)利要求73所述的修飾抗體，其特征在于相對(duì)于AB的天然結(jié)合受體，MM不含有多于50%的氨基酸序列的相似性。
102.根據(jù)權(quán)利要求73所述的修飾抗體，還包含一種可檢測(cè)基團(tuán)。
103.根據(jù)權(quán)利要求73所述的修飾抗體，還包含一種與AB共軛的試劑。
104.一種可激活抗體(AA)包括(a)一種抗體或抗體片段(AB)，可以特異性結(jié)合其靶點(diǎn)；(b)一種能耦合到AB的掩蔽基團(tuán)(MM)，能夠抑制AB特異性結(jié)合其靶點(diǎn)；以及，(c)一種耦合到AB的可裂解基團(tuán)(CM)，能夠被一種酶特異性裂解；其特征在于與AA 處在裂解CM的足夠酶活和匪不抑制AB特異性結(jié)合其靶點(diǎn)的的情況相比，當(dāng)AA不處于裂解CM的足夠酶活下，MM至少降低AB與其靶點(diǎn)特異性結(jié)合程度的90%。
105.根據(jù)權(quán)利要求104所述的AA，其特征在于所述AB與其靶點(diǎn)結(jié)合的時(shí)間降低至少 12小時(shí)。
106.根據(jù)權(quán)利要求104所述的AA，其特征在于所述AB與其靶點(diǎn)結(jié)合的時(shí)間降低至少 24小時(shí)。
107.根據(jù)權(quán)利要求104所述的AA，其特征在于所述AB與其靶點(diǎn)結(jié)合的時(shí)間降低至少 72小時(shí)。
108.根據(jù)權(quán)利要求104所述的AA，其特征在于所述耦合了匪和CM的AB對(duì)其靶點(diǎn)的離解系數(shù)(Kd)比沒有耦合匪和CM的AB對(duì)其靶點(diǎn)的離解系數(shù)至少大100倍。
109.根據(jù)權(quán)利要求104所述的AA，其特征在于所述匪對(duì)AB的離解常數(shù)(Kd)約為InM。
110.根據(jù)權(quán)利要求109所述的修飾抗體，其特征在于所述匪對(duì)AB的Kd低于ΙΟηΜ。
111.根據(jù)權(quán)利要求109所述的修飾抗體，其特征在于所述匪對(duì)AB的Kd低于5nM。
112.根據(jù)權(quán)利要求109所述的修飾抗體，其特征在于所述匪對(duì)AB的Kd約為InM。
113.根據(jù)權(quán)利要求104所述的AA，其特征在于所述匪可以特異性的結(jié)合到AB的抗原結(jié)合域上。
114.根據(jù)權(quán)利要求104所述的AA，其特征在于所述CM可以在至少IXIO4M1S''1的速率下被一種酶特異性裂解。
115.根據(jù)權(quán)利要求104所述的AA，其特征在于所述CM可以在至少&104Μ''1S的速率下被一種酶特異性還原。
116.根據(jù)權(quán)利要求104所述的ΑΑ，其特征在于所述CM可以在至少IOXIO4M1S的速率下被一種酶特異性還原。
117.根據(jù)權(quán)利要求104所述的ΑΑ，其特征在于所述抗體片段選自一種Fab'片段、一種F(ab' ) 2片段、一種scFv、一種scAB a dAb、一種單域重鏈抗體和一種單域輕鏈抗體所構(gòu)成的組。
118.根據(jù)權(quán)利要求104所述的AA，其特征在于所述AB選自表2中的抗體所構(gòu)成的組。
119.根據(jù)權(quán)利要求118所述的AA，其特征在于所述AB是西妥昔單抗、帕木單抗、英利昔單抗、阿達(dá)木單抗、依法珠單抗、伊匹單抗、tremelimumab(CTLA-4單抗)、阿德木單抗、Hu5c8、阿倫單抗、雷珠單抗、托西莫單抗、替伊莫單抗、利妥昔單抗、英利昔單抗、貝伐珠單抗或 f igitumumab (IGFR-1 抑制劑)。
120.根據(jù)權(quán)利要求104所述的AA，其特征在于所述靶點(diǎn)選自表1中的靶點(diǎn)所構(gòu)成的組。
121.根據(jù)權(quán)利要求120所述的AA，其特征在于所述靶點(diǎn)是EGFR、TNFa、⑶lla、CSFR、 CTLA-4、EpCAM、VEGF、CD40、CD20、Notch 1、Notch 2、Notch 3、Notch 4、Jaggedl、Jagged 2、CD52、MUC1、IGF1R、轉(zhuǎn)鐵蛋白、gpl30、VCAM-I、CD44、DLL4 或 IL4。
122.根據(jù)權(quán)利要求104所述的AA，其特征在于所述AB不是阿倫單抗。
123.根據(jù)權(quán)利要求104所述的AA，其特征在于所述靶點(diǎn)不是CD52。
124.根據(jù)權(quán)利要求104所述的AA，其特征在于所述CM是用于選自表3的酶所構(gòu)成的組中的酶的一種底物。
125.根據(jù)權(quán)利要求IM所述的AA，其特征在于所述CM是用于天冬酰胺內(nèi)肽酶、纖溶酶、TMPRSS-3/4、MMP-9，MT1-MMP、組織蛋白酶、半胱天冬蛋白酶、人類中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶、β -分泌酶、uPA或PSA的一種底物。
126.根據(jù)權(quán)利要求104所述的ΑΑ，進(jìn)一步耦合到一種第二裂解基團(tuán)(CM)，能夠被一種酶特異性裂解。
127.根據(jù)權(quán)利要求1 所述的AA，其特征在于所述第二CM是用于天冬酰胺內(nèi)肽酶、 纖溶酶、TMPRSS-3/4、MMP-9, MT1-MMP、組織蛋白酶、半胱天冬蛋白酶、人類中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶、β -分泌酶、uPA或PSA的一種底物。
128.根據(jù)權(quán)利要求104所述的ΑΑ，其特征在于所述CM位于匪內(nèi)。
129.根據(jù)權(quán)利要求104所述的ΑΑ，其特征在于相對(duì)于AB的天然結(jié)合配體，所述匪不含有多于50%的氨基酸序列的相似性。
130.根據(jù)權(quán)利要求104所述的ΑΑ，還包含一種連接肽，其特征在于所述連接肽位于 MM和CM之間。
131.根據(jù)權(quán)利要求104所述的ΑΑ，還包含一種連接肽，其特征在于所述該連接肽位于 AB禾口 CM之間。
132.根據(jù)權(quán)利要求104所述的AA還包含一種可檢測(cè)基團(tuán)。
133.根據(jù)權(quán)利要求104所述的ΑΑ，還包含一種與AB共軛的試劑。
134.一種可激活的抗體復(fù)合物(AAC)包括(a)兩種抗體或抗體片段(ABl和AB2)，每一種都能與其靶點(diǎn)特異性結(jié)合；(b)至少一種能與ABl或AB2耦合的掩蔽基團(tuán)(MM)，能抑制ABl和AB2與其靶點(diǎn)的特異性結(jié)合；以及(c)至少一種能與ABl或AB2耦合的裂解基團(tuán)，可以被一種酶通過激活A(yù)AC的組合物而特異性裂解。其特征在于，當(dāng)AAC處于未裂解狀態(tài)時(shí)，匪抑制ABl和AB2與其靶點(diǎn)的特異性結(jié)合，而當(dāng)AAC處于裂解狀態(tài)時(shí)，匪不抑制ABl和AB2與其靶點(diǎn)的特異性結(jié)合。
135.根據(jù)權(quán)利要求134所述的組合物，其特征在于所述復(fù)合物是雙特異性抗體。
136.根據(jù)權(quán)利要求134所述的組合物，其特征在于所述ABl和AB2連接在同一靶點(diǎn)的相同抗原表位。
137.根據(jù)權(quán)利要求134所述的組合物，其特征在于所述ABl和AB2連接在不同靶點(diǎn)的相同抗原表位。
138.根據(jù)權(quán)利要求134所述的組合物，其特征在于所述ABl和AB2連接在不同靶點(diǎn)的不同抗原表位。
139.根據(jù)權(quán)利要求134所述的組合物，其特征在于所述CM可以在約至少IxlO4M4S"1 速率被一種酶特異性裂解。
140.根據(jù)權(quán)利要求134所述的組合物，其特征在于所述抗體片段選自一種Fab'片段、一種F(ab' )2片段、一種scFv、一種scAB a dAb、一種單域重鏈抗體和一種單域輕鏈抗體所構(gòu)成的組。
141.根據(jù)權(quán)利要求134所述的組合物，其特征在于所述ABl和/或AB2選自表2中的抗體所構(gòu)成的組。
142.根據(jù)權(quán)利要求134所述的組合物，其特征在于所述ABl和/或AB2是西妥昔單抗、帕木單抗、英利昔單抗、阿達(dá)木單抗、依法珠單抗、伊匹單抗、tremelimumab (CTLA-4單抗)、阿德木單抗、Hu5c8、阿倫單抗、雷珠單抗、托西莫單抗、替伊莫單抗、利妥昔單抗、英利昔單抗、貝伐珠單抗或f igitumumab (IGFR-1抑制劑)。
143.根據(jù)權(quán)利要求134所述的組合物，其特征在于所述靶點(diǎn)選自表1中的靶點(diǎn)所構(gòu)成的組。
144.根據(jù)權(quán)利要求134所述的組合物，其特征在于所述ABl和/或AB2是EGFR、 TNFa、CDlla、CSFR、CTLA-4、EpCAM、VEGF、CD40、CD20、Notch UNotch 2, Notch 3, Notch 4、Jagged 1、Jagged 2、CD52、MUC1、IGF1R、轉(zhuǎn)鐵蛋白、gpl30、VCAM-I、CD44、DLL4 或 IL4。
145.根據(jù)權(quán)利要求134所述的組合物，其特征在于所述ABl和AB2能夠分別與EGFR 和VEGF、一種Notch受體和EGFR、一種Jagged配體和EGFR或cMET和VEGF結(jié)合。
146.根據(jù)權(quán)利要求134所述的組合物，其特征在于所述CM是用于選自表3中的酶所構(gòu)成的組中的酶的一種底物。
147.根據(jù)權(quán)利要求134所述的組合物，其特征在于所述CM是用于天冬酰胺內(nèi)肽酶、 纖溶酶、TMPRSS-3/4、MMP-9, MT1-MMP、組織蛋白酶、半胱天冬蛋白酶、人類中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶、β -分泌酶、uPA或PSA的一種底物。
148.根據(jù)權(quán)利要求134所述的組合物，進(jìn)一步耦合到第二裂解基團(tuán)(ΜΜ)，能夠被一種酶特異性裂解。
149.根據(jù)權(quán)利要求148所述的組合物，其特征在于所述第二CM是用于天冬酰胺內(nèi)肽酶、纖溶酶、TMPRSS-3/4、ΜΜΡ-9，MT1-MMP、組織蛋白酶、半胱天冬蛋白酶、人類中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶、β -分泌酶、uPA或PSA的一種底物。
150.根據(jù)權(quán)利要求134所述的組成，其特征在于相對(duì)于AB的天然結(jié)合受體，所述MM 不含有多于50%的氨基酸序列的相似性。
151.根據(jù)權(quán)利要求134所述的組成，還包含一種可檢測(cè)基團(tuán)。
152.根據(jù)權(quán)利要求134所述的組合物，還包含一種與AB共軛的試劑。
153.—種主體病癥的治療或診斷方法包括供給該主體的一種組合物成分包括(a)一種抗體或抗體片段(AB)，能夠與其靶點(diǎn)特異性結(jié)合。(b)一種與AB耦合的掩蔽基團(tuán)(MM)，能夠抑制AB與其靶點(diǎn)的特異性結(jié)合，以及(c)一種與AB耦合的可裂解基團(tuán)(CM)能夠被一種酶特異性裂解；其特征在于基于對(duì)主體的給藥，對(duì)比AA處在裂解CM的足夠酶活和匪不抑制AB與其靶點(diǎn)的特異性結(jié)合的情況，當(dāng)AA不處于裂解CM的足夠酶活下，匪至少降低AB與其靶點(diǎn)特異性結(jié)合程度的90%。
154.根據(jù)權(quán)利要求153所述的方法，其特征在于所述AB選自一種Fab'片段、一種 F(ab' ) 2片段、一種scFv、一種scABa dAb、一種單域重鏈抗體和一種單域輕鏈抗體所構(gòu)成的組。
155.根據(jù)權(quán)利要求153所述的方法，其特征在于所述疾病是癌。
156.根據(jù)權(quán)利要求153所述的方法，其特征在于所述MM不是天然的AB結(jié)合配體。
157.根據(jù)權(quán)利要求153所述的方法，其特征在于所述AB選自表2中的抗體所構(gòu)成的組。
158.根據(jù)權(quán)利要求157所述的方法，其特征在于所述AB是西妥昔單抗、帕木單抗、英利昔單抗、阿達(dá)木單抗、依法珠單抗、伊匹單抗、tremelimumab(CTLA-4單抗)、阿德木單抗、 Hu5c8、阿倫單抗、雷珠單抗、托西莫單抗、替伊莫單抗、利妥昔單抗、英利昔單抗、貝伐珠單抗或 f igitumumab (IGFR-1 抑制劑)。
159.根據(jù)權(quán)利要求153所述的方法，其特征在于所述靶點(diǎn)選自表1中的靶點(diǎn)所構(gòu)成的組。
160.根據(jù)權(quán)利要求159所述的方法，其特征在于所述靶點(diǎn)是EGFR、TNFa、⑶11a、 CSFR、CTLA-4、EpCAM、VEGF, CD40、CD20、Notch 1、Notch 2、Notch 3、Notch 4、Jaggedl、 Jagged 2、CD52、MUC1、IGF1R、轉(zhuǎn)鐵蛋白、gpl30、VCAM-I、CD44、DLL4 或 IL4。
161.根據(jù)權(quán)利要求153所述的方法，其特征在于所述AB不是阿侖單抗。
162.根據(jù)權(quán)利要求153所述的方法，其特征在于所述靶點(diǎn)不是CD52。
163.據(jù)權(quán)利要求153所述的方法，其特征在于所述CM是用于選自表3中的酶所構(gòu)成的組中的酶的一種底物。
164.根據(jù)權(quán)利要求163所述的方法，其特征在于所述CM是用于天冬酰胺內(nèi)肽酶、纖溶酶、TMPRSS-3/4、MMP-9, MT1-MMP、組織蛋白酶、半胱天冬蛋白酶、人類中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶、β -分泌酶、uPA、或PSA的一種底物。
165.—種在哺乳動(dòng)物主體中抑制血管生成的方法，所述方法包括供給主體治療所需足夠量的權(quán)利要求12所述的一種藥劑組合物。
166.根據(jù)權(quán)利要求165所述的方法，其特征在于所述靶點(diǎn)是EGFR、TNFa、⑶11a、 CSFR、CTLA-4、EpCAM、VEGF, CD40、CD20、Notch 1、Notch 2、Notch 3、Notch 4、Jaggedl、 Jagged 2、CD52、MUCl、IGF1R、轉(zhuǎn)鐵蛋白、gp 130、VCAM-I、CD44、DLL4 或 IL4。
167.根據(jù)權(quán)利要求153所述的方法，其特征在于所述AB是西妥昔單抗、帕木單抗、英利昔單抗、阿達(dá)木單抗、依法珠單抗、伊匹單抗、tremelimumab(CTLA-4單抗)、阿德木單抗、 Hu5c8、阿倫單抗、雷珠單抗、托西莫單抗、替伊莫單抗、利妥昔單抗、英利昔單抗、貝伐珠單抗或 f igitumumab (IGFR-1 抑制劑)。
168.根據(jù)權(quán)利要求153所述的方法，其特征在于所述CM是天冬酰胺內(nèi)肽酶、纖溶酶、 TMPRSS-3/4、MMP-9, MT1-MMP、組織蛋白酶、半胱天冬蛋白酶、人類中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶、 β -分泌酶、uPA、或PSA的一種底物。
169.—種制備可激活的抗體(AA)組合物的方法包括(a)提供一種能夠與靶點(diǎn)特異性結(jié)合的抗體或抗體片段(AB)。(b)將一種掩蔽基團(tuán)(MM)與AB耦合，能夠抑制AB與其靶點(diǎn)的特異性結(jié)合。以及，(c)將一種可裂解基團(tuán)(CM)與AB耦合，能夠被一種酶特異性裂解，其特征在于所述耦合了匪的AB對(duì)其靶點(diǎn)的離解常數(shù)(Kd)比沒有耦合匪的AB對(duì)其靶點(diǎn)的Kd 倍。
170.根據(jù)權(quán)利要求166所述的方法，其特征在于所述AB是或是衍生于選自表2中的抗體所構(gòu)成的組中的抗體。
171.根據(jù)權(quán)利要求166所述的方法，其特征在于所述AB是或是衍生于西妥昔單抗、 帕木單抗、英利昔單抗、阿達(dá)木單抗、依法珠單抗、伊匹單抗、tremelimumab(CTLA-4單抗)、 阿德木單抗、Hu5c8、阿倫單抗、雷珠單抗、托西莫單抗、替伊莫單抗、利妥昔單抗、英利昔單抗、貝伐珠單抗或f igitumumab (IGFR-1抑制劑)。
172.根據(jù)權(quán)利要求166所述的方法，其特征在于所述AB不是阿侖單抗。
173.根據(jù)權(quán)利要求166所述的方法，其特征在于所述靶點(diǎn)不是CD52。
174.根據(jù)權(quán)利要求166所述的方法，其特征在于所述CM是用于選自表3中的酶所構(gòu)成的組中的酶的一種底物。
175.根據(jù)權(quán)利要求166所述的方法，其特征在于所述CM是天冬酰胺內(nèi)肽酶、纖溶酶、 TMPRSS-3/4、MMP-9, MT1-MMP、組織蛋白酶、半胱天冬蛋白酶、人類中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶、 β -分泌酶、uPA或PSA的一種底物。
176.—種篩選候選肽以便識(shí)別一種能夠與抗體或抗體片段結(jié)合的掩蔽基團(tuán)的方法包括(a)提供一種肽支架庫，其特征在于所述每一種肽支架包括 (i) 一種跨膜蛋白(TM)；以及(ii) 一種候選肽；(b)將AB與所述庫接觸；(c)確定至少一種能夠與AB結(jié)合的候選肽；以及，(d)確定候選蛋白對(duì)AB的離解常數(shù)(Kd)是否在I-IOnM之間。
177.根據(jù)權(quán)利要求176所述的方法，其特征在于所述庫中包含病毒、細(xì)胞或孢子
178.根據(jù)權(quán)利要求176所述的方法，其特征在于所述庫中包括大腸桿菌。
179.根據(jù)權(quán)利要求176所述的方法，其特征在于所述肽支架進(jìn)一步包含一種檢測(cè)基團(tuán)。
180.一種篩選候選肽以便確定一種能夠掩蔽一種抗體或抗體片段(AB)具有最優(yōu)的掩蔽效能的掩蔽基團(tuán)(MM)肽的方法包括(a)提供一種包含多種AB的庫，每一種都耦合到一種候選肽，其特征在于所述AB能與靶點(diǎn)特異性結(jié)合。(b)借助靶點(diǎn)孵化每一種庫成員。并且，(c)對(duì)每種庫成員對(duì)靶點(diǎn)結(jié)合的親和力和沒有耦合候選肽的AB對(duì)其靶點(diǎn)結(jié)合的親和力進(jìn)行對(duì)比。
181.根據(jù)權(quán)利要求180所述的方法中的步驟c，其特征在于對(duì)比未修飾AB對(duì)其靶點(diǎn)的結(jié)合親和力，最優(yōu)的結(jié)合效能是當(dāng)庫成員對(duì)其靶點(diǎn)的結(jié)合親和力是10%。
182.根據(jù)權(quán)利要求180所述的方法，其特征在于所述的AB是相同的。
183.一種提高生物利用率的抗體療法，其特征在于所述在第一組織中抗體療法對(duì)其靶點(diǎn)結(jié)合的親和力低于在第而組織中抗體療法對(duì)其靶點(diǎn)結(jié)合的親和力。
184.根據(jù)權(quán)利要求183所述的療法，其特征在于所述靶點(diǎn)是EGFR、TNFa、⑶11a、 CSFR、CTLA-4、EpCAM、VEGF, CD40、CD20、Notch 1、Notch 2、Notch 3、Notch 4、Jaggedl、 Jagged 2、CD52、MUCl、IGF1R、轉(zhuǎn)鐵蛋白、gp 130、VCAM-I、CD44、DLL4 或 IL4。
185.根據(jù)權(quán)利要求183所述的療法，其特征在于所述第一組織是正常組織，而第二組織病變組織。
186.根據(jù)權(quán)利要求183所述的療法，其特征在于所述第一組織是早期腫瘤，而第二組織是晚期腫瘤。
187.根據(jù)權(quán)利要求183所述的療法，其特征在于所述第一組織是良性腫瘤而第二組織是惡性腫瘤。
188.根據(jù)權(quán)利要求183所述的療法，其特征在于所述第一組織和第二組織在空間上是分開的。
189.根據(jù)權(quán)利要求183所述的方法，其特征在于所述第一組織是上皮組織而第二組織是乳腺、頭、頸、肺、胰腺、神經(jīng)系統(tǒng)、肝、前列腺、泌尿生殖道或?qū)m頸組織。
190.根據(jù)權(quán)利要求183所述的療法進(jìn)一步與一種藥劑耦合。
191.根據(jù)權(quán)利要求183所述的療法，其特征在于所述藥劑是一種抗腫瘤藥劑。
192.一種藥物組合物包括(a)一種抗體或抗體片段(AB)，能夠與其靶點(diǎn)特異性結(jié)合；并且，(b)一種藥學(xué)上可接受的賦形劑；其特征在于所述第一組織中抗體或抗體片段對(duì)靶點(diǎn)的親和力低于第二組織中抗體或抗體片段對(duì)靶點(diǎn)的親和力。
193.根據(jù)權(quán)利要求192所述的組合物，其特征在于所述第一組織中的親和力比第二組織中的親和力低10 1000倍。
194.根據(jù)權(quán)利要求192所述的組合物，其特征在于所述AB耦合到一種能降低AB與其靶點(diǎn)的結(jié)合的掩蔽基團(tuán)(CM)，并耦合到一種可以被酶特異性裂解的可裂解基團(tuán)(CM)。
195.根據(jù)權(quán)利要求192所述的組合物，其特征在于所述靶點(diǎn)是EGFR、TNFa、⑶11a、 CSFR、CTLA-4、EpCAM、VEGF, CD40、CD20、Notch 1、Notch 2、Notch 3、Notch 4、Jaggedl、 Jagged 2、CD52、MUC1、IGF1R、轉(zhuǎn)鐵蛋白、gpl30、VCAM-I、CD44、DLL4、或 IL4。
196.根據(jù)權(quán)利要求192所述的組合物，其特征在于所述第一組織是正常組織而第二組織是病變組織。
197.根據(jù)權(quán)利要求192所述的組合物，其特征在于所述第一組織是早期腫瘤而第二組織是晚期腫瘤。
198.根據(jù)權(quán)利要求192所述的組合物，其特征在于所述第一組織是良性腫瘤而第二組織是惡性腫瘤。
199.根據(jù)權(quán)利要求192所述的組合物，其特征在于所述第一組織和第二組織在空間上是分開的。
200.根據(jù)權(quán)利要求192所述的組合物，其特征在于所述第一組織是上皮組織而第二組織是乳腺、頭、頸、肺、胰腺、神經(jīng)系統(tǒng)、肝、前列腺、泌尿生殖道或?qū)m頸組織。
201.根據(jù)權(quán)利要求194所述的組合物，其特征在于所述CM是天冬酰胺內(nèi)肽酶、纖溶酶、TMPRSS-3/4、MMP-9, MT1-MMP、組織蛋白酶、半胱天冬蛋白酶、人類中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶、β -分泌酶、uPA、或PSA的一種底物。
202.根據(jù)權(quán)利要求192所述的組合物，其特征在于所述抗體或抗體片段是西妥昔單抗、帕木單抗、英利昔單抗、阿達(dá)木單抗、依法珠單抗、伊匹單抗、tremelimumab(CTLA-4單抗)、阿德木單抗、Hu5c8、阿倫單抗、雷珠單抗、托西莫單抗、替伊莫單抗、利妥昔單抗、英利昔單抗、貝伐珠單抗或figitumumab(IGFR-l抑制劑)。
203.根據(jù)權(quán)利要求192所述的組合物，還包括一種連接到AB的試劑。
204.根據(jù)權(quán)利要求203所述的組合物，其特征在于所述試劑是一種抗腫瘤藥劑。
205.一種包括一種天冬酰胺肽鏈內(nèi)切酶激活的抗體或連接到一種掩蔽基團(tuán)(MM)的抗體片段(AB)的組合物。
206.一種包括一種纖溶酶激活的抗體或連接到一種掩蔽基團(tuán)(MM)的抗體片段(AB)的組合物。
207.一種包括一種半胱天冬蛋白酶激活的抗體或連接到一種掩蔽基團(tuán)(MM)的抗體片段(AB)的組合物。
208.一種包括一種TMPRS S-3/4激活抗體或連接到一種掩蔽基團(tuán)(MM)的抗體片段 (AB)的組合物。
209.一種包括一種PSA激活的抗體或連接到一種掩蔽基團(tuán)(MM)的抗體片段(AB)的組合物。
210.一種包括一種組織蛋白酶激活的抗體或連接到一種掩蔽基團(tuán)(MM)的抗體片段 (AB)的組合物。
211.—種包括一種人類中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶激活的抗體或連接到一種掩蔽基團(tuán) (MM)的抗體片段(AB)的組合物。
212.—種包括一種分泌酶激活的抗體或連接到一種掩蔽基團(tuán)(MM)的抗體片段 (AB)的組合物。
213.—種包括一種uPA激活的抗體或連接到一種掩蔽基團(tuán)(MM)的抗體片段(AB)的組合物。
214.—種包括一種TMPRSS-3/4激活的抗體或連接到一種掩蔽基團(tuán)(MM)的抗體片段 (AB)的組合物。
215.—種包括一種MTl-MMP激活的抗體或連接到一種掩蔽基團(tuán)(MM)的抗體片段(AB) 的組合物。
216.—種包括一種可激活的EGFR抗體或連接到一種掩蔽基團(tuán)(MM)的抗體片段(AB) 的組合物。
217.—種包括一種可激活的TNF α抗體或連接到一種掩蔽基團(tuán)(MM)的抗體片段(AB) 的組合物。
218.—種包括一種激活的⑶Ila抗體或連接到一種掩蔽基團(tuán)(MM)的抗體片段(AB)的組合物。
219.—種包括一個(gè)可激活的CSFR抗體或連接到一種掩蔽基團(tuán)(MM)的抗體片段(AB) 的組合物。
220.一種包括一個(gè)可激活的CTLA-4抗體或連接到一種掩蔽基團(tuán)(MM)的抗體片段 (AB)的組合物。
221.—種包括一個(gè)可激活的EpCAM抗體或連接到掩蔽基團(tuán)(MM)的抗體片段(AB)的組合物。
222.—種包括一個(gè)可激活的⑶40L抗體或連接到掩蔽基團(tuán)(MM)的抗體片段(AB)的組合物。
223.—種包括一個(gè)可激活的Notchl抗體或連接到掩蔽基團(tuán)(MM)的抗體片段(AB)的組合物。
224.—種包括一個(gè)可激活的Notch3抗體或連接到掩蔽基團(tuán)(MM)的抗體片段(AB)的組合物。
225.—種包括一個(gè)可激活的Jaggedl抗體或連接到掩蔽基團(tuán)(MM)的抗體片段(AB)的組合物。
226.—種包括一個(gè)可激活的Jagged2抗體或連接到掩蔽基團(tuán)(MM)的抗體片段(AB)的組合物。
227.—種包括一個(gè)可激活的西妥昔單抗抗體或連接到掩蔽基團(tuán)(MM)的抗體片段(AB) 的組合物。
228.—種包括一個(gè)可激活的帕尼單抗抗體或連接到掩蔽基團(tuán)(MM)的抗體片段(AB)的組合物。
229.—種包括一個(gè)可激活的英夫利昔單抗抗體或連接到掩蔽基團(tuán)(MM)的抗體片段 (AB)的組合物。
230.一種包括一個(gè)可激活的阿達(dá)木單抗抗體或連接到掩蔽基團(tuán)(MM)的抗體片段(AB) 的組合物。
231.—種包括一個(gè)可激活的依法珠單抗抗體或連接到掩蔽基團(tuán)(MM)的抗體片段(AB) 的組合物。
232.—種包括一個(gè)可激活的伊匹單抗的抗體或連接到掩蔽基團(tuán)(MM)的抗體片段(AB) 的組合物。
233.—種包括一個(gè)可激活的tremelimumab的抗體或連接到掩蔽基團(tuán)(MM)的抗體片段 (AB)的組合物。
234.—種包括一個(gè)可激活的阿德木單抗的抗體或連接到掩蔽基團(tuán)(MM)的抗體片段 (AB)的組合物。
全文摘要
本發(fā)明提供了含有由掩蔽基團(tuán)(MM)修飾的抗體或抗體片段(AB)的抗體的修飾抗體。這些修飾抗體可以進(jìn)一步耦合到一個(gè)可裂解基團(tuán)(CM)，產(chǎn)生激活的抗體(AAS)，其中CM是能夠被裂解、還原、光解，或以其他方式修飾。AAs可以表現(xiàn)出激活狀態(tài)，使AB更易于到達(dá)靶點(diǎn)，例如，在能夠裂解、還原或光解CM的藥劑存在條件下，通過CM的裂解、還原或光解去除MM。本發(fā)明還提供了這種修飾抗體和激活抗體的制備和應(yīng)用方法。
文檔編號(hào)A61K39/395GK102482347SQ201080011779
公開日2012年5月30日 申請(qǐng)日期2010年1月12日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月12日
發(fā)明者F·格魯克, J·W·威斯特, J·薩格特, K·卡姆斯, N·E·斯坦格莉安奧, P·H·貝塞特, P·道格爾迪 申請(qǐng)人:希托馬克斯醫(yī)療有限責(zé)任公司