專利名稱：雙功能螯合劑與甘露糖基人血清白蛋白的復(fù)合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的放射性藥物，其用于免疫細(xì)胞或由免疫細(xì)胞構(gòu)成的組織例如巨噬細(xì)胞、肝巨噬細(xì)胞(Kupffer cell)、網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES)和淋巴系統(tǒng)的顯像。
背景技術(shù)：
在核醫(yī)學(xué)中，淋巴系統(tǒng)的顯像對(duì)于淋巴結(jié)的診斷是重要的。在乳腺癌和黑素瘤的情況下，如果能夠通過將放射性膠體注入腫瘤來檢測(cè)哨兵淋巴結(jié)(離腫瘤組織最近的淋巴結(jié))，則在手術(shù)過程中能夠避免過度切除。將被檢測(cè)的哨兵淋巴結(jié)進(jìn)行活組織檢查以檢測(cè)轉(zhuǎn)移灶(metastases)，轉(zhuǎn)移灶的存在會(huì)影響切除決定的作出。這對(duì)手術(shù)后的不良反應(yīng)和美觀是非常重要的° (G. Mariani, L. Moresco, G. Viale, G. Villa, Μ. Bagnasco, G. Canavese, J. Buscombe, H. W. Strauss, G. Paganelli. " Radioguided sentinel lymph node biopsy in breast cancer surgery. " J. Nucl. Med. 2001；42 :1198-1215 ；G. Mariani, Μ. Gipponi, L. Moresco, G. Villa, M. Bartolomei, G. Mazzarol, M. C. Bagnara, A. Romanini, F. Cafiero, G. Paganelli,H. W. Strauss. " Radioguided sentinel lymph node biopsy in malignant cutaneous melanoma" J. Nucl. Med. 2002 ；43 :811-827)?？梢允褂眠m當(dāng)?shù)姆派湫阅z體使淋巴結(jié)顯像，所述放射性膠體被注射到組織中， 隨后移動(dòng)并捕集到淋巴結(jié)中?？梢酝ㄟ^Y探針來檢測(cè)放射性蓄積于其中的淋巴結(jié)。用于顯像和檢測(cè)淋巴結(jié)的大多數(shù)放射性藥物是99mTc標(biāo)記的膠體，例如銻硫膠體(antimony sulfur colloid) (10-20nm)、白蛋白納米膠體(albumin nano colloid) (50nm)和硫膠體 (100-200nm)。由于快速的淋巴結(jié)吸收，粒徑較小的膠體是更理想的。由于銻硫膠體的粒徑最小，因此其在目前使用的膠體中是最好的。然而，它的粒徑還是過大，并且需要2小時(shí)的沸騰時(shí)間進(jìn)行標(biāo)記，因此它不適合應(yīng)在清晨接受手術(shù)的患者。另外，在強(qiáng)酸介質(zhì)中制備的銻硫膠體可能在中和后變得不穩(wěn)定。為了解決這些問題，人們已使用了粒徑為6-8nm的99mTc-人血清白蛋白(HSA)。 99mTc-HSA能夠被快速標(biāo)記，并表現(xiàn)出向淋巴結(jié)的快速移動(dòng)。然而，其顯示出低對(duì)比度的淋巴結(jié)影像，并且不僅在哨兵淋巴結(jié)中吸收，還在其他淋巴結(jié)中吸收，因?yàn)樗辉诹馨徒Y(jié)中蓄積而是繞過淋巴結(jié)。(W. T. Phillips, Τ. Andrews, H. -L. Liu, R. Klipper, A. J. Landry Jr, R. Blumhardt, B. Goins. " Evaluation of [99mTc] liposomes as lymphoscintigraphic agents comparison with[99mTc] sulfur colloid and[99mTc]human serum albumin" Nucl. Med. Biol. 2001 ；28 :435-444)。為了解決這個(gè)問題，開發(fā)了被稱為二硫還原甘露糖化人血清白蛋白(disulfide reduced mannosylated human serum albumin) (MSA)的新型放射性藥物,其能夠與存在于免疫細(xì)胞上的甘露糖受體牢固結(jié)合、易于用"mTc標(biāo)記、具有適當(dāng)?shù)姆肿哟笮∫员晃盏搅馨兔?xì)管中，并對(duì)人體沒有不良反應(yīng)。(Korean Patent 10-0557008，Disulfide reduced mannosylated serum albumin for lymphoscintigraphy and radiolabeled compounds comprising it. Feb 23rd 2006 ；Jeong JM, Hong MK, Kim YJ, Lee J, Kang JH, Lee DS,Chung JK, Lee MC. Development of 99mTc-ηeomannosy 1 human serum albumin (99mTc-MSA) as a novel receptor binding agent for sentinel lymph node imaging. Nucl Med Commun. 2004 25(12) :1211-7)。已知MSA能夠牢固結(jié)合甘露糖受體(P. Mahl.等人，Cell 1980;19:207-215)。因此在上述專利中，如果MSA被適當(dāng)?shù)挠糜陲@像的放射性核素(例如99mTc)標(biāo)記，則假定能夠?qū)⒘馨徒Y(jié)顯像。此外，由于MSA的6-8nm的小粒徑，其會(huì)表現(xiàn)出較快的淋巴結(jié)吸收。然而，在不修飾的情況下，MSA本身并不能用99mTc標(biāo)記。因此，通過用適當(dāng)?shù)倪€原劑(例如β-巰基乙醇和二硫蘇糖醇)處理來制備二硫還原MSA。有報(bào)道在通過用還原劑處理以還原二硫鍵后，用99mTc標(biāo)記二硫還原半乳糖基化或乳糖基化人血清白蛋白。(Korean Patent 0464917. New disulfide reduced galactosylated serum albumin thereof ；a liver function imaging composition ；and a radiolabeled compound comprising it. Dec 24th 2004)。然而，這些99mTc標(biāo)記的藥物不能通過正電子發(fā)射斷層攝影(PET)顯像。最近，對(duì)用于免疫細(xì)胞顯像的正電子標(biāo)記的放射性藥物的需求增加，原因是由于 PET優(yōu)于傳統(tǒng)γ顯像而得以廣泛使用，此外，開發(fā)出了用于檢測(cè)轉(zhuǎn)移灶的正電子探針或β 探針。一般而言，正電子發(fā)射體(例如^、"(^、巧和15。)是由回旋加速器產(chǎn)生的。在這些發(fā)射體中，由于18F較其他放射性核素而言有相對(duì)長(zhǎng)的半衰期(110分鐘)，因此僅18F可應(yīng)用于淋巴結(jié)顯像。然而，它的標(biāo)記操作需要在高溫下蒸發(fā)和加熱，這些太過復(fù)雜并且導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性。此外，18F的產(chǎn)生還需要昂貴的回旋加速器系統(tǒng)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是開發(fā)雙功能螯合劑(BCA)與MSA的結(jié)合物、其放射性標(biāo)記的化合物以及用于放射性標(biāo)記的藥盒的制備。因此預(yù)期效果是便于用正電子發(fā)射體6Ma標(biāo)記、標(biāo)記的化合物具有更高穩(wěn)定性，以及由于在淋巴結(jié)、肝和脾中高度蓄積而導(dǎo)致的優(yōu)異的免疫系統(tǒng)(包括淋巴結(jié))顯像。與fi8Ga形成穩(wěn)定復(fù)合物的候選BCA是1，4，7-三氮雜環(huán)壬烷-1，4，7-三乙酸(NOTA) 和1，4，7，10-四氮雜環(huán)十二烷-1，4，7，10-四乙酸(DOTA)，兩者之中更優(yōu)選Ν0ΤΑ。所選擇的用于標(biāo)記MSA與BCA結(jié)合物以檢測(cè)和顯像免疫細(xì)胞的放射性核素是68Ga。本發(fā)明的另一目的是提供藥盒，其能夠容易地制備用于檢測(cè)和顯像免疫細(xì)胞的放射性藥物制劑。具體而言，本發(fā)明的目的是提供藥學(xué)相容的用于顯像免疫細(xì)胞的藥盒，其在無菌瓶中包含BCA-MSA和緩沖液，并且可以容易地用金屬放射性核素標(biāo)記。本發(fā)明涉及(1)由下式1表示的雙功能螯合劑(BCA)與甘露糖基人血清白蛋白(MSA)的結(jié)合物(Man-L1)n-A- (L2-BCA)m[式1]其中，Man是甘露糖基；L1和L2獨(dú)立地是一個(gè)或多個(gè)連接基(linker)或直接結(jié)合(direction conjugation)；A是人血清白蛋白；
BCA是選自1，4，7-三氮雜環(huán)壬烷-1，4，7-三乙酸(NOTA)或1，4，7，10-四氮雜環(huán)十二烷-1，4，7，10-四乙酸(DOTA)的雙功能螯合劑；并且m和η獨(dú)立地是1至58的整數(shù)；(2)第(1)項(xiàng)的結(jié)合物，其中L1和L2獨(dú)立地是直接結(jié)合或一個(gè)或多個(gè)連接基，所述連接基包含一個(gè)或多個(gè)選自C1-Cltl烷基、C4-C10芳基、硫脲、三唑、單肽、二肽、三肽、C4-C10 環(huán)烷基、芐基、硫醚、胺、酰胺、酯、硫酯、醚、胼、酰胼、戊糖基和己糖基的殘基；(3)第⑴項(xiàng)的結(jié)合物，其中L1和L2獨(dú)立地選自下式
權(quán)利要求
1.由下式1表示的雙功能螯合劑(BCA)與甘露糖基人血清白蛋白(MSA)的結(jié)合物 (Man-L1)n-A- (L2-BCA)m
2.權(quán)利要求1的結(jié)合物，其中L1和L2獨(dú)立地是直接結(jié)合或一個(gè)或多個(gè)連接基，所述連接基包含一個(gè)或多個(gè)選自C1-Cltl烷基、C4-Cltl芳基、硫脲、三唑、單肽、二肽、三肽、C4-Cltl環(huán)烷基、芐基、硫醚、胺、酰胺、酯、硫酯、醚、胼、酰胼、戊糖基和己糖基的殘基。
3.權(quán)利要求1的結(jié)合物，其中L1和L2獨(dú)立地選自下式其中，Man是甘露糖基；并且HSA是人血清白蛋白。
4.權(quán)利要求1的結(jié)合物，其中甘露糖的C1碳與白蛋白或連接基結(jié)合。
5.組合物，其包含權(quán)利要求1或2的雙功能螯合劑(BCA)與甘露糖基人血清白蛋白 (MSA)的結(jié)合物，所述結(jié)合物用用于免疫系統(tǒng)顯像的金屬放射性同位素標(biāo)記。
6.權(quán)利要求5的組合物，其中免疫系統(tǒng)是淋巴系統(tǒng)或網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)。
7.權(quán)利要求5的組合物，其中金屬放射性同位素選自Wa^Ga、111〗!!、99"^、186!^、6^、 61Ciu62Ciu64Ciu67Ciu212HK212Bi 或 109PcL
8.權(quán)利要求5的組合物，其中金屬放射性同位素是68fe。
9.用于制備用金屬放射性同位素標(biāo)記的藥物組合物的液體狀態(tài)、冷凍狀態(tài)或凍干狀態(tài)的無菌且無熱原的藥盒，其包含IOng-IOOmg的權(quán)利要求1的結(jié)合物。
10.權(quán)利要求9的藥盒，其還包含0.OlmL-IOmL的1 μ Μ-10Μ的緩沖液(ρΗ 1-9)。
11.權(quán)利要求10的藥盒，其中所述緩沖液是選自乙酸、磷酸、檸檬酸、富馬酸、乳酸、琥珀酸、酒石酸、碳酸、葡庚糖酸、葡糖酸、葡糖醛酸、葡糖二酸和硼酸的酸及其鈉鹽或鉀鹽的 合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及與雙功能螯合劑(BCA)結(jié)合的甘露糖基人血清白蛋白(MSA)及其放射性同位素標(biāo)記的化合物，所述化合物用于免疫系統(tǒng)例如巨噬細(xì)胞、肝巨噬細(xì)胞、網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES)和淋巴系統(tǒng)的顯像。本發(fā)明包括BCA-MSA結(jié)合物、其放射性標(biāo)記的化合物和用于放射性標(biāo)記的藥盒。本發(fā)明改良了放射性標(biāo)記操作、表現(xiàn)出較高的淋巴系統(tǒng)吸收，并使得能夠通過正電子發(fā)射斷層攝影(PET)顯像。
文檔編號(hào)A61K51/08GK102300590SQ201080005965
公開日2011年12月28日 申請(qǐng)日期2010年1月27日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月28日
發(fā)明者李東洙, 李明哲, 鄭俊基, 鄭載民 申請(qǐng)人:首爾大學(xué)校產(chǎn)學(xué)協(xié)力團(tuán)