專利名稱：含有齒裂黃鵪菜提取物，其級分或由其分離的化合物作為有效成分的肝功能改善用藥物 ...的制作方法
含有齒裂黃鵪菜提取物，其級分或由其分離的化合物作為有效成分的肝功能改善用藥物組合物及肝功能改善用健康功能食品組合物
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有齒裂黃鵪菜(Yoimgia denticulate)提取物，其級分或由其分離的化合物作為有效成分的癌預(yù)防或肝功能改善用組合物，而更詳細，則涉及示優(yōu)秀的解毒酶活性，且不示細胞毒性的含有齒裂黃鵪菜的提取物，其級分或選自氯原酸，3，5- 二 -0-咖啡?？崴幔S鵪菜苷A，黃鵪菜苷B及黃鵪菜苷C的一種以上的化合物作為有效成分的癌預(yù)防或肝功能改善用藥物組合物，健康功能食品組合物。
背景技術(shù)：
在對于癌的研究有深度地進行30年以上的當(dāng)今也由于環(huán)境污染，錯誤的飲食生活習(xí)慣等而癌發(fā)生率繼續(xù)增加而全世界性地每年發(fā)生1，000萬人左右，且世界衛(wèi)生組織 (WHO)稱作為死亡的主要原因之一數(shù)癌。癌作為中年人的疾病，新的臨床例的70%以上是在60歲以上被診斷，而隨著世界人口高齡化而癌發(fā)生率增加是不可避免的現(xiàn)象。在韓國國內(nèi)，也根據(jù)保健福祉部，稱每年發(fā)生10萬人左右的癌患者。作為一般的癌的治療法，則有手術(shù)，放射線治療，抗癌劑治療等。為癌的確實的治療，則有必要在早期診斷癌而手術(shù)，且并行放射線或抗癌劑治療。但是，癌的診斷變遲， 或癌轉(zhuǎn)移時，治療方法變復(fù)雜，且治療中消耗的精神上，經(jīng)濟上的負擔(dān)顯著增大。從而，使用安全的化學(xué)物質(zhì)而在事先防止使正常細胞不能轉(zhuǎn)變至癌細胞的化學(xué)的癌預(yù)防(cancer chemoprevention)與為在初期發(fā)現(xiàn)癌的診斷方法開發(fā)是最近癌研究的重要領(lǐng)域?？拱╊I(lǐng)域可分為使既發(fā)生的癌細胞死滅而治療癌的領(lǐng)域與致癌物質(zhì)與細胞內(nèi)標(biāo)的物反應(yīng)，或抑制到達靶標(biāo)物，或使致癌物質(zhì)釋放到體外，從而抑制癌發(fā)生自身而預(yù)防癌的領(lǐng)域。被知為可被用作癌治療用途的物質(zhì)的情況中，有不可被用作癌預(yù)防用途的情況，且相反也有能被用作癌預(yù)防用途，但不可被用作癌治療用途的物質(zhì)而，最近則是將各自具體地分而接近的趨勢。以往的抗癌劑被用作了癌治療用途，然而這不僅是對癌細胞，而對正常細胞也帶給損傷而有示嚴重的毒性及副作用的缺點。與此相反，癌預(yù)防用途的組合物利用比較無毒性的安全的化學(xué)物質(zhì)而使致癌過程人為地抑制，或延遲或逆轉(zhuǎn)，從而是為預(yù)防正常細胞轉(zhuǎn)變?yōu)榘┘毎陌┭芯康男碌牟呗浴槌苫瘜W(xué)的癌預(yù)防物質(zhì)的候補組，則由于應(yīng)無毒性，或微弱，且用到可使至給多數(shù)人廣泛地普及而從天然物質(zhì)分離或合成容易的化學(xué)物質(zhì)，所以除幾種維生素代謝物質(zhì)外，而主要用到植物性化合物(Surh YJ, Nature Rev Cancer，3，768-780，2003)。癌由如開始階段(initiation)，促進階段(promotion)，進行階段 (progression)，轉(zhuǎn)移階段(metastasis)的多階段組成，然而化學(xué)的癌預(yù)防以主要在開始階段與促進階段抑制癌發(fā)生作為目標(biāo)，且根據(jù)其機理而大地被區(qū)分為兩種。即是，從源頭上封鎖致癌物質(zhì)到達標(biāo)的細胞，或抑制經(jīng)代謝活性化(metabolic activation)而攻擊標(biāo)的細胞的DNA而誘發(fā)結(jié)構(gòu)性的損傷與突變的阻斷劑(blocking agent)與抑制暴露于致癌物質(zhì)而已經(jīng)被起始的細胞經(jīng)促進及進行階段而各自發(fā)展成為良性癌與惡性癌的過程的抑制劑 (suppressing agent) (Surh YJ, Nature Rev Cancer,3,768 780,2003)。作為阻斷劑，則已知是細胞色素P-450 (cytochrome P-450)酶的抑制物質(zhì)的二烯丙基硫化物(diallyl sulfide)，異硫氰酸鹽(isothiocyanate)，鞣花酸(ellagic acid)等，且已知是2相解毒酶系的誘導(dǎo)劑的苯基乙基異硫氰酸鹽(phenylethyl isothiocyanate)，萊藤硫燒(sulforaphane)，奧替普拉(oltipraz)等。作為抑制劑，則已知作為聚胺(polyamine)代謝抑制物質(zhì)的DFM0，作為細胞分化促進劑的類視黃醇(retinoid)系列，作為蛋白激酶C (protein kinase C)抑制物質(zhì)的染料木素(genistein)，作為氧化性DNA損傷抑制物質(zhì)的EGCG等。2相解毒酶被知為示對于各種癌細胞的特異性的細胞毒性而具有抗癌功能的等的具有從由致癌物質(zhì)，變異原性物質(zhì)，活性氧的DNA損傷的保護作用。在2相解毒酶中， 醌還原酶(Quinone reductase, QR)作為主要在肝細胞中生成的第2相酶系的一種，而使醌還原而使無毒，而阻止在細胞內(nèi)被誘導(dǎo)而由多種突變物質(zhì)而發(fā)生的突變與腫瘤化，而發(fā)揮使致癌物質(zhì)無毒的作用。更具體地，醌還原酶是阻斷由突變或致癌物質(zhì)等的與DNA的相互作用的酶，且是利用NADP(H)而催化醌類的還原的酶。分子量是54，OOODa,而作為相同的結(jié)構(gòu)結(jié)合2個的同型二聚體(homodimer)，而其各自由273個氨基酸構(gòu)成，且在活性部位中含有黃素腺嘌呤二核苷酸(flavin adenine dinucleotide，F(xiàn)AD)，且被叫作甲萘醌 iSJ^BI (menadione reductase), ^^ K iSJ^BI (vitamin K reductase), DT- HjlSI (DT-diaphorase)等。從而，醌還原酶使肝的解毒功能增強，從而使肝功能改善，而在事先阻斷可使癌發(fā)生的致癌物質(zhì)的作用而可預(yù)防癌。由化學(xué)的癌預(yù)防的解毒酶系的基因調(diào)節(jié)中則報告為，抗氧化反應(yīng)因子 (Antioxidant response element ；ARE)與活體異物反應(yīng)因子(Xenobiotics-responsive element ；XRE)的兩個調(diào)節(jié)因子關(guān)聯(lián)(Okey AB et al. ,Toxicol Lett，70，1 22)。其中抗氧化反應(yīng)因子(ARE)由于調(diào)節(jié)2相解毒酶系的活性誘導(dǎo)，可在單一功能誘導(dǎo)劑的效果檢定中被利用。通過通過這樣的2相解毒酶的活性的增強的使肝的解毒功能增強的機理而阻止由于乙醇攝取的肝的損傷，從而可保護肝。另一方面，是在體內(nèi)代謝為醌系化合物的藥物的醋氨酚(acetaminophen)是代替阿司匹林而頻繁地被使用的代表性的解熱鎮(zhèn)痛劑。但是，長期施用醋氨酚時，有導(dǎo)致嚴重的肝毒性的問題(A.J.Ware et al. , Int. Med. ,88 267(1978)；及 H. L. Bonkowsky et al.，Lancet，2 1016 (1978))。通過醌還原酶為首的肝解毒酶的增強而可從由于如醋氨酚的醌系列藥物的肝毒性保護肝。目前，全世界性地為找出誘導(dǎo)解毒酶系的活性的癌預(yù)防用或肝功能改善用組合物的嘗試在進行中，且代表性地從植物分離天然組合物的研究在進行中。但是，在韓國為首的東北亞地域則是成主要局限于藥用植物而研究的傾向，且對于各國中自產(chǎn)的山菜類，蔬菜類及水果類的研究至現(xiàn)在是幾乎無被報告的實情。另外，本發(fā)明人為了從以往完全無被知的植物開發(fā)具有癌預(yù)防或肝功能改善用途的物質(zhì)而進行了努力，且在其中，也對于在韓國自產(chǎn)的齒裂黃鵪菜便具有了關(guān)心。齒裂黃鵪菜(Yoimgia denticulate)作為雙子葉植物合瓣花綱吊鐘花目菊花科的一年生或兩年生草，在山野的干燥處生長，且高度是30 70cm，而莖細，且是紫色。枝展，且切則出汁。結(jié)于根的葉是勺模樣，且花開時消失，而結(jié)于莖的葉錯開，且無葉柄。葉長度是 6 11cm，寬度是3 7cm，且端鈍。底部成耳狀而將莖半分包裹，而邊緣稀疏有此模樣的齒葉。花在8 9月開成黃色，而頭花是直徑15mm左右，結(jié)為傘房花序，然而花開時直立，而凋謝之后下垂?？偘L成窄筒樣，而總苞瓣是長的橢圓模樣柳葉刀形，排列為2行，而內(nèi)瓣是線形，且是8個。果實是瘦果，是褐色或黑色，且有12個棱線。冠毛是白色，且長度是約 3. 5mm，且將幼筍作為菜吃，而分布于韓國 日本 中國·印度支那。但是，以往完全不知齒裂黃鵪菜的提取物，其級分或由其分離的化合物的癌預(yù)防用途或肝保護效果，且另外，具體地對于通過何種途徑而具有這樣的活性也完全無被公開。 對此，本發(fā)明人為開發(fā)人體毒性無或微弱的化學(xué)的癌預(yù)防劑或肝功能改善劑而在可食用的天然物質(zhì)中檢索解毒酶活性時，齒裂黃鵪菜提取物，其級分或由其分離的化合物不僅是肝的解毒酶，而且誘導(dǎo)作為癌預(yù)防指標(biāo)酶的醌還原酶的活性，且無細胞毒性，而誘導(dǎo)解毒酶系的活性，從而保護肝功能，進而示化學(xué)的癌預(yù)防效果，而解明含有其作為有效成分的組合物可用作為癌預(yù)防或肝功能改善的藥品及健康功能食品，從而完成了本發(fā)明。
權(quán)利要求
1.癌預(yù)防用藥物組合物，其含有利用水，有機溶劑或這些的混合溶劑而提取的齒裂黃鵪菜提取物作為有效成分。
2.權(quán)利要求1的癌預(yù)防用藥物組合物，其特征在于所述有機溶劑是選自C1 C4的醇， 醋酸乙酯，二氯甲烷及氯仿的任一種或這些的混合溶劑。
3.權(quán)利要求2的癌預(yù)防用藥物組合物，其特征在于所述有機溶劑是C1 C4的醇。
4.權(quán)利要求3的癌預(yù)防用藥物組合物，其特征在于所述C1 C4的醇是甲醇或乙醇。
5.權(quán)利要求1的癌預(yù)防用藥物組合物，其特征在于所述齒裂黃鵪菜提取物使作為癌預(yù)防指標(biāo)酶的醌還原酶的活性增加而將致癌物質(zhì)解毒。
6.權(quán)利要求1的癌預(yù)防用藥物組合物，其特征在于所述齒裂黃鵪菜提取物使誘導(dǎo)2相解毒酶系活性的抗氧化反應(yīng)因子(ARE)的活性增加而將致癌物質(zhì)解毒。
7.權(quán)利要求1的癌預(yù)防用藥物組合物，其特征在于所述癌是肝癌或結(jié)腸癌。
8.癌預(yù)防用藥物組合物，其含有齒裂黃鵪菜級分作為有效成分。
9.權(quán)利要求8的癌預(yù)防用藥物組合物，其特征在于所述級分是將權(quán)利要求1的齒裂黃鵪菜提取物用η-己烷(n-hexane)，乙酸乙酯(ethyl acetate)及η-丁醇(n-butanol)依次地分級分離而得到。
10.權(quán)利要求8的癌預(yù)防用藥物組合物，其特征在于所述齒裂黃鵪菜級分使作為癌預(yù)防指標(biāo)酶的醌還原酶的活性增加而將致癌物質(zhì)解毒。
11.權(quán)利要求8的癌預(yù)防用藥物組合物，其特征在于所述齒裂黃鵪菜級分使誘導(dǎo)2相解毒酶系活性的抗氧化反應(yīng)因子(ARE)的活性增加而將致癌物質(zhì)解毒。
12.權(quán)利要求8的癌預(yù)防用藥物組合物，其特征在于所述癌是肝癌或結(jié)腸癌。
13.癌預(yù)防用藥物組合物，其含有選自下記化學(xué)式1，2，3，4及5的一種以上的化合物作為有效成分[化學(xué)式1][化學(xué)式2]
[化學(xué)式3]
[化學(xué)式4]
[化學(xué)式5]
14.權(quán)利要求13的癌預(yù)防用藥物組合物，其特征在于所述化學(xué)式1 5的化合物由包括下列階段的方法制成向齒裂黃鵪菜加水，有機溶劑或這些的混合物而收獲齒裂黃鵪菜提取物的階段(階段1)；將在所述階段1中收獲的提取物用η-己烷，乙酸乙酯及η- 丁醇分級分離而得到級分的階段(階段2、；及對在所述階段2中收獲的級分施行硅膠層析而將化合物分離并純化的階段(階段3)。
15.權(quán)利要求14的癌預(yù)防用藥物組合物，其特征在于所述階段1的有機溶劑是甲醇或乙醇。
16.權(quán)利要求13的癌預(yù)防用藥物組合物，其特征在于所述選自化學(xué)式1，2，3，4及5的一種以上的化合物使作為癌預(yù)防指標(biāo)酶的醌還原酶的活性增加而將致癌物質(zhì)解毒。
17.權(quán)利要求13的癌預(yù)防用藥物組合物，其特征在于所述選自化學(xué)式1，2，3，4及5的一種以上的化合物使誘導(dǎo)2相解毒酶系活性的抗氧化反應(yīng)因子(ARE)的活性增加而將致癌物質(zhì)解毒。
18.權(quán)利要求13的癌預(yù)防用藥物組合物，其特征在于所述癌是肝癌或結(jié)腸癌。
19.癌預(yù)防或改善用健康功能食品組合物，其含有權(quán)利要求118中任一項的齒裂黃鵪菜的提取物，其級分或化學(xué)式1 5的化合物作為有效成分。
20.肝功能改善用藥物組合物，其含有權(quán)利要求1 18中任一項的齒裂黃鵪菜的提取物，其級分或化學(xué)式1 5的化合物作為有效成分。
21.肝功能改善用健康功能食品組合物，其含有權(quán)利要求1 18中任一項的齒裂黃鵪菜的提取物，其級分或化學(xué)式1 5的化合物作為有效成分。
全文摘要
本發(fā)明涉及含有齒裂黃鵪菜(Youngia denticulata)提取物，其級分或是由其分離的化合物的選自氯原酸(Chlorogenic acid)，3，5-二-O-咖啡?？崴?3，5-Di-O-caffeoylquinic acid)，黃鵪菜苷A(Youngiaside A)，黃鵪菜苷B(Youngiaside B)，黃鵪菜苷C(Youngiaside C)的一種以上的化合物作為有效成分的癌預(yù)防用藥物組合物或肝功能改善用藥物組合物，而由于根據(jù)本發(fā)明的齒裂黃鵪菜提取物，其級分或由此分離被的化合物使作為癌預(yù)防指標(biāo)酶的醌還原酶(Quinone reductase，QR)與是抗氧化反應(yīng)因子的以抗氧化反應(yīng)因子(Antioxidant response element，ARE)為首的肝的解毒酶的活性增強，而不僅無細胞毒性，而且從由乙醇與醋氨酚誘導(dǎo)的肝損傷保護肝，所以根據(jù)本發(fā)明的組合物可作為用于癌預(yù)防或肝功能改善的藥品，健康功能食品有用地被使用。
文檔編號A61P35/00GK102186488SQ201080002926
公開日2011年9月14日 申請日期2010年2月9日 優(yōu)先權(quán)日2009年2月9日
發(fā)明者盧周嫄, S·B·李, 尹智浩, 鄭相勛, 李熙珠, 姜京秀, 柳智慧, 金明洙, 安手鏞, 金宗煥 申請人:韓國科學(xué)技術(shù)研究院