專(zhuān)利名稱(chēng)：用于治療真菌感染的含膽固醇的脂質(zhì)體兩性霉素的制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及基于納米脂質(zhì)體(nanosomal)系統(tǒng)的新藥物遞送系統(tǒng)。在本研究中，用冷凍電子顯微鏡術(shù)(cryoEM)研究了在鹽水中含有膽固醇的納米脂質(zhì)體兩性霉素B的樣品。分析了未超聲處理以及超聲處理(sonication)之后的新鮮樣品和兩年的樣品。cryoEM圖像的分析包括尺寸分布和整體形態(tài)學(xué)，例如層性質(zhì) (Iamellarity)(單層與多層)和聚集。
背景技術(shù)：
在免疫缺陷和具有免疫能力的患者中，由不同屬的酵母真菌和皮膚真菌導(dǎo)致的全身性和局部真菌病上升的發(fā)病率仍是重要和未能充分解決的醫(yī)學(xué)問(wèn)題。導(dǎo)致的死亡率和令人擔(dān)憂(yōu)的增加的發(fā)病率引起重大關(guān)注。對(duì)于迄今所有已發(fā)現(xiàn)的藥物，存在有限的治療譜、不良的功效、適合的制劑的限制、藥物不良反應(yīng)和威脅生命的毒性的問(wèn)題，并且經(jīng)常存在上述問(wèn)題的某些或全部的組合。多烯氨基糖苷類(lèi)抗生素顯示出最有希望的廣譜和功效。但是， 大部分這些化合物的毒性妨礙了它們用作治療劑。兩性霉素B是唯一仍廣泛用于臨床的多烯大環(huán)內(nèi)酯，盡管事實(shí)上，例如脫氧膽酸鈉膠束懸浮液、脂質(zhì)體、脂質(zhì)絡(luò)合物和脂質(zhì)膠體分散體的多種制劑均不同程度地具有威脅生命的腎毒性。兩性霉素B制劑的目的是去除腎毒性、使制劑穩(wěn)定、確保低劑量的有效性和甚至在高劑量避免毒性和藥物不良反應(yīng)。存在大量的描述兩性霉素B制劑的已授權(quán)/提交的專(zhuān)利和出版物。除了下文描述的4種制劑，沒(méi)有其它制劑是可應(yīng)用的，因?yàn)樗鼈儾荒軌蚴惯@類(lèi)其它制劑充分成為腎臟/安全的。在所有已知的兩性霉素B制劑中，組分選自磷脂/脂質(zhì)和穩(wěn)定劑的大量選擇。由于已知兩性霉素B在鹽水中沉淀，沒(méi)有制劑浸于鹽水中。1.常規(guī)兩性霉素B 在5%葡萄糖中的兩性霉素B-脫氧膽酸鹽膠體懸浮液，功效33% 腎毒性67%兩性霉素B不溶于水性介質(zhì)。在20世紀(jì)50年代末期，如下最低限度地克服了該問(wèn)題通過(guò)將兩性霉素B溶解在脫氧膽酸鹽中，配制成5 %的葡萄糖水溶液中的膠束懸浮液。 兩性霉素B在NaCl中沉淀，因此在脫氧膽酸鹽中的兩性霉素B既不在NaCl中制備，也不在鹽水中稀釋。此外，將該懸浮液凍干以使制劑穩(wěn)定。2.在5%葡萄糖中稀釋的脂質(zhì)體兩性霉素B功效77% 腎毒性20%脂質(zhì)體兩性霉素B由在作為緩沖液的4. 5%蔗糖和琥珀酸二鈉六水合物中的氫化大豆磷脂酰膽堿、雙硬脂?；字８视?、膽固醇和α生育酚的組合組成，所述脂質(zhì)體兩性霉素B是經(jīng)過(guò)對(duì)磷脂、留醇、膜穩(wěn)定糖和它們的不同比例的大量組合進(jìn)行選擇得到的。盡管使用膜穩(wěn)定蔗糖，還是將該制劑凍干以克服不穩(wěn)定性。已報(bào)道該脂質(zhì)體兩性霉素B制劑在鹽水中沉淀，因此嚴(yán)禁在鹽水中稀釋或接觸鹽水。美國(guó)專(zhuān)利4766046描述由于兩性霉素B脂質(zhì)體的尺寸和不穩(wěn)定性，還不能制備和儲(chǔ)存在若干周的保存時(shí)期內(nèi)沒(méi)有顯著(幾倍)尺寸增加的小-直徑(diamater)兩性霉素B脂質(zhì)體。因此，由于不同的體內(nèi)脂質(zhì)體攝取和藥物釋放以及涉及脂質(zhì)體尺寸的毒性性質(zhì)，難以控制和評(píng)價(jià)儲(chǔ)存的兩性霉素B脂質(zhì)體的治療指數(shù)。當(dāng)脂質(zhì)體尺寸大于1-2微米時(shí)，尺寸不穩(wěn)定性問(wèn)題特別嚴(yán)重，因?yàn)榘懝檀嫉膬尚悦顾谺脂質(zhì)體實(shí)質(zhì)上比更小、原始尺寸的脂質(zhì)體更具毒性。迄今，僅僅通過(guò)在制備后不久給予特定尺寸的脂質(zhì)體，才解決尺寸穩(wěn)定性問(wèn)題。在通常的臨床環(huán)境中，這當(dāng)然是不切實(shí)際的藥物遞送方法。3.在5%葡萄糖中稀釋的兩性霉素B脂質(zhì)絡(luò)合物功效34% 腎毒性63%該制劑由兩性霉素B、合成的磷脂即二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿和二肉豆蔻酰磷脂酰甘油組成。在給藥之前將水性懸浮液稀釋于5%葡萄糖中。相對(duì)于常規(guī)兩性霉素B，其功效和毒性性質(zhì)均無(wú)改善。4.稀釋于5%葡萄糖中的兩性霉素B膠體分散劑功效46% 腎毒性40%將氨丁三醇、無(wú)水乙二胺四乙酸(edentate) 二鈉和HCl乳糖一水合物與兩性霉素 B和膽固醇基硫酸鈉凍干。存在于兩性霉素B脂質(zhì)制劑中的葡萄糖顯著地減少局部應(yīng)用制劑的有益效果。暗示葡萄糖的抑制原理涉及由葡萄糖引起的高黏度或由葡萄糖引起的膠體顆粒的脂質(zhì)/水界面上的變化(Crowe JH 等人 1988Biochim. Biophys Acta. 947 :367-384)。甚至最好的脂質(zhì)體兩性霉素B的治療成功率(success)是77%，其不如(sub par)本發(fā)明。因此，在本發(fā)明中構(gòu)思用鹽水代替葡萄糖，其具有降低兩性霉素B腎毒性的附加優(yōu)勢(shì)。根據(jù)眾所周知的和記載的事實(shí)，鹽水導(dǎo)致兩性霉素B1—4的沉淀，獨(dú)特地設(shè)計(jì)脂質(zhì)組合物和脂質(zhì)與藥物的比率以確保在納米脂質(zhì)體中的兩性霉素B被固定，以預(yù)防納米脂質(zhì)體藥物的沉淀。發(fā)明目的本發(fā)明的目的是，提供在鹽水懸浮液中被穩(wěn)定的含有膽固醇的納米脂質(zhì)體新制劑，其具有降低的腎毒性。本發(fā)明的另一個(gè)目的是，提供在鹽水懸浮液中被穩(wěn)定的、含有膽固醇的納米脂質(zhì)體的新制劑，其具有增強(qiáng)的抗真菌活性。仍然是本發(fā)明的另一個(gè)目的是，提供在鹽水懸浮液中被穩(wěn)定的含有膽固醇的納米脂質(zhì)體的制劑，其非常穩(wěn)定。本發(fā)明的另一個(gè)目的是，提供在鹽水懸浮液中被穩(wěn)定的含有膽固醇的納米脂質(zhì)體的新制劑，其毒性更低。仍然是本發(fā)明的另一個(gè)目的是，提供在鹽水懸浮液中被穩(wěn)定的含有膽固醇的納米脂質(zhì)體的新制劑，其中由于兩性霉素B的高抗感染活性，所使用的兩性霉素B的劑量是非常小的。另外本發(fā)明的另一個(gè)目的是，提供不同用途的新制劑，所述用途目的在于為了更高的抗感染活性?xún)?yōu)化更低的兩性霉素B的劑量，以及進(jìn)一步將腎/毒性最小化和例如靜脈內(nèi)、眼的和局部等多種用途的穩(wěn)定的制劑。發(fā)明概述根據(jù)本發(fā)明提供了用于治療真菌感染的新制劑，所述新制劑包含在懸浮液中含有膽固醇的納米脂質(zhì)體兩性霉素B納米脂質(zhì)體。根據(jù)本發(fā)明，也提供了用于制備在鹽水懸浮液中被穩(wěn)定的含有膽固醇的納米脂質(zhì)體的新制劑的方法。發(fā)明詳述在溶液中，濃度是單位體積溶劑中溶質(zhì)分子的數(shù)量，所述溶劑在注射、灌注或其它液體劑型的情況下通常是含水的，而在包括混懸劑(例如膠體混懸劑)的顆粒制劑中，通過(guò)承載藥物的顆粒的數(shù)量確定藥物的有效濃度。這種載體是用于注射、口服或吸入、透皮等的脂質(zhì)、蛋白質(zhì)或其它生物可降解的載體和主要用于局部制劑的非生物可降解載體的不同納米或微米尺寸的集合。在本發(fā)明中，納米脂質(zhì)體具有優(yōu)化的脂質(zhì)與藥物的高比率，以增加每單位量藥物含有藥物的納米脂質(zhì)體的數(shù)量，并通過(guò)給藥之前補(bǔ)充納米化(nanof ication) 由此實(shí)現(xiàn)功效最優(yōu)化。顆粒尺寸的脂質(zhì)與藥物的比率的優(yōu)化基于本發(fā)明的新概念，該新概念為通過(guò)在制備后和給藥前增加制劑中API載體顆粒的數(shù)量，以增加活性藥物的有效濃度。這通過(guò)降低更多含有脂質(zhì)的制劑的顆粒尺寸而實(shí)現(xiàn)。在制劑中，因?yàn)閮?yōu)化的脂質(zhì)與藥物的更高比率，存在更大數(shù)目的顆粒/mg藥物。更多顆粒導(dǎo)致藥物在體內(nèi)更好/更高的分布。由于在懸浮液中存在更有效的藥物濃度，存在更多數(shù)量的遍及身體均勻地分布的分子。這將減少所需要的治療劑量。由于例如兩性霉素B的API在更高劑量下具有毒性，通過(guò)降低API的需要，將自動(dòng)減少對(duì)動(dòng)物/患者的毒性并因此導(dǎo)致更安全的藥物制劑。在顆粒制劑中的API包囊于載體顆粒的多個(gè)層中。疏水/親脂藥物維持插入在脂質(zhì)納米脂質(zhì)體的脂質(zhì)雙層中，因此甚至當(dāng)這類(lèi)納米脂質(zhì)體分裂或破碎時(shí)所述藥物不釋放在水性體內(nèi)環(huán)境中。包囊于脂質(zhì)納米脂質(zhì)體中的這種藥物從納米脂質(zhì)體的表面轉(zhuǎn)移至靶細(xì)胞的表面。在這種情況下，包囊于納米脂質(zhì)體內(nèi)層中的藥物不用于治療且停止通過(guò)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)細(xì)胞被吞噬并從體內(nèi)治療鏈中退出。藥物在內(nèi)層中累積的包囊是納米脂質(zhì)體表面層上的數(shù)倍。如果多層納米脂質(zhì)體的所有層分離以形成新的小的多個(gè)納米脂質(zhì)體，包囊藥物的內(nèi)層將因此轉(zhuǎn)化成納米脂質(zhì)體的外部暴露藥物的層中，可以從邏輯上預(yù)期，在沒(méi)有任何API 加入至該混合層制劑的情況下，藥物的有效濃度將增加。通過(guò)在患者的床邊使混合層微米和/或納米脂質(zhì)體經(jīng)歷超聲分裂(disruption)，得到更高活性濃度以實(shí)現(xiàn)更高治療功效的最優(yōu)化將使其成為可能。從混合層群體中，各顆粒使各轉(zhuǎn)化為若干納米脂質(zhì)體的若干層可獲得。通過(guò)增加納米脂質(zhì)體的數(shù)量，大部分在載體顆粒中的API被帶至表面，因此與載有藥物的納米脂質(zhì)體的數(shù)量增加成比例地增加了治療功效。在本實(shí)例中，如下表所示，脂質(zhì)與藥物的比率為45 1至45 15。表1不同的脂質(zhì)制劑的形狀和尺寸
權(quán)利要求
1.用于治療真菌感染的新制劑，所述制劑包含在懸浮液中含有膽固醇的兩性霉素B。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的制劑，其中所述脂質(zhì)與兩性霉素B的比率為45 1至45 15。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的制劑，其中所使用的懸浮液是鹽水。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的制劑，其中將所述兩性霉素B超聲處理以將顆粒轉(zhuǎn)化為更小的和更少層的直徑為20-200nm的納米脂質(zhì)體。
全文摘要
用于治療真菌感染的新制劑，所述制劑包含在鹽水懸浮液中含有膽固醇的納米脂質(zhì)體兩性霉素B。
文檔編號(hào)A61K31/7048GK102333522SQ201080001964
公開(kāi)日2012年1月25日 申請(qǐng)日期2010年3月4日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月16日
發(fā)明者J·N·沃瑪, L·沃瑪 申請(qǐng)人:萊富凱爾創(chuàng)新私人有限公司