專利名稱：治療蛋白尿的組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，特別涉及治療蛋白尿的藥物。
背景技術(shù)：
由于腎小球?yàn)V過膜的濾過作用和腎小管的重吸收作用，健康人尿中蛋白質(zhì)(多指分子量較小的蛋白質(zhì))的含量很少(每日排出量小于150mg)，蛋白質(zhì)定性檢查時(shí)，呈陰性反應(yīng)。當(dāng)尿中蛋白質(zhì)含量增加，普通尿常規(guī)檢查即可測(cè)出，稱蛋白尿。如果尿蛋白含量 ^3. 5g/Mh，則稱為大量蛋白尿。蛋白尿是慢性腎臟病的主要癥狀，也是腎臟病進(jìn)展的重要原因。當(dāng)前治療蛋白尿的方法有如下幾種1.激素治療或者激素聯(lián)合免疫抑制劑治療；2.使用RAS阻斷(包括ACEI和ARB)治療；3.使用NSAIDs藥物治療；采用第一種方法的激素治療可能導(dǎo)致感染，血糖升高，血脂代謝紊亂，蛋白質(zhì)分解代謝增加，電解質(zhì)紊亂，骨質(zhì)疏松，消化道出血，精神異常等大量副作用。聯(lián)合免疫抑制劑增加了骨髓移植，肝功能損害，脫發(fā)，生殖功能障礙，腫瘤發(fā)生等副作用。采用第二種方法的RAS阻斷劑降低血壓，可能引起急性腎損傷，可能導(dǎo)致血鉀升高，ACEI可能導(dǎo)致咳嗽發(fā)生。采用第三種方法的NSAIDs藥物治療，可能會(huì)減少腎臟血流，加重腎間質(zhì)損害，導(dǎo)致腎功能衰竭，導(dǎo)致消化道出血。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種治療蛋白尿的組合物及其制備方法，可以有效降低蛋白尿。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的實(shí)施方式提供了一種治療蛋白尿的組合物，該組合物由藥學(xué)上可接受的載體以及活性成份組成，活性成份為代謝型谷氨酸受體(mGluR)l 和5的激動(dòng)劑。本發(fā)明的實(shí)施方式還提供了一種制備治療蛋白尿的組合物的方法，包括下述步驟將代謝型谷氨酸受體1和5的激動(dòng)劑與藥學(xué)上可接受的載體混合，從而得到上述的組合物。本發(fā)明實(shí)施方式與現(xiàn)有技術(shù)相比，主要區(qū)別及其效果在于使用代謝型谷氨酸受體1和5的激動(dòng)劑作為活性成份的組合物，可以降低蛋白尿， 有效治療蛋白尿。因?yàn)檠芯堪l(fā)現(xiàn)mGluRl和5的激動(dòng)劑可以減少足細(xì)胞足突融合，防止足細(xì)胞損傷。只需要每周一次靜脈注射，大大減少了治療的次數(shù)，從而減少了治療痛苦和費(fèi)用， 增加了患者的順應(yīng)性。
發(fā)明人發(fā)現(xiàn)足細(xì)胞表達(dá)mGluRl和5的基因和蛋白質(zhì)，腎小球中mGluRl的表達(dá)和足細(xì)胞標(biāo)志蛋白synaptopodin表達(dá)共定位，免疫電鏡顯示mGluRl位于足細(xì)胞體和足突細(xì)胞膜下層。體外實(shí)驗(yàn)中，DHPG誘導(dǎo)足細(xì)胞快速地產(chǎn)生cAMP，并且細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子CREB也被激活。DHPG誘導(dǎo)足細(xì)胞內(nèi)游離鈣緩慢持續(xù)地增加，提示足細(xì)胞表達(dá)有功能的mGluRl和 5。發(fā)明人使用嘌呤霉素氨基核苷(Puromycin aminonucleoside，簡稱“PAN”)小鼠模型和阿霉素(Adriamycin，簡稱“ADR”)小鼠模型，發(fā)現(xiàn)使用DHPG治療的小鼠蛋白尿顯著降低，PAN小鼠和ADR小鼠腎小球Mphriri表達(dá)顯著降低，腎小球足細(xì)胞足突融合，而DHPG 治療的小鼠腎小球nephrin表達(dá)正常，足細(xì)胞大部分足突結(jié)構(gòu)存在，部分足突融合。PAN和ADR小鼠腎小球中WT-1染色陽性細(xì)胞數(shù)顯著降低，TUNEL染色陽性的凋亡細(xì)胞數(shù)增加，而且凋亡陽性的細(xì)胞數(shù)和WT-I染色陽性細(xì)胞數(shù)呈負(fù)相關(guān)。DH PG治療的小鼠 WT-I染色陽性細(xì)胞數(shù)顯著高于PAN和ADR小鼠，TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)非常少。體外實(shí)驗(yàn)中，DHPG防止PAN和ADR誘導(dǎo)的足細(xì)胞減少，減少PAN和ADR誘導(dǎo)的足細(xì)胞線粒體膜電位降低，caspase3激活。進(jìn)一步地，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，(s) 3，5-DHPG是代謝型谷氨酸受體1和5的激動(dòng)劑中治療效果比較顯著的一種。進(jìn)一步地，(8)3，5-0朋6在磷酸緩沖液中的濃度為50讓01/1，實(shí)驗(yàn)證明這是治療效果較好的一個(gè)濃度。
具體實(shí)施例方式在以下的敘述中，為了使讀者更好地理解本申請(qǐng)而提出了許多技術(shù)細(xì)節(jié)。但是，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以理解，即使沒有這些技術(shù)細(xì)節(jié)和基于以下各實(shí)施方式的種種變化和修改，也可以實(shí)現(xiàn)本申請(qǐng)各權(quán)利要求所要求保護(hù)的技術(shù)方案。為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方式作進(jìn)一步地詳細(xì)描述。本發(fā)明第一實(shí)施方式涉及一種治療蛋白尿的組合物。該治療蛋白尿的組合物該組合物由藥學(xué)上可接受的載體以及活性成份組成，活性成份為代謝型谷氨酸受體 (Metabotropic Glutamate Rec印tor,簡稱"mGluR”)1 禾口 5 的激動(dòng)齊[J。在本發(fā)明各實(shí)施方式中的術(shù)語“藥學(xué)上可接受的載體”指用于治療劑給藥的載體， 包括各種賦形劑和稀釋劑。該術(shù)語指這樣一些藥劑載體它們本身并不是必要的活性成分， 且施用后沒有過分的毒性。合適的載體是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的。在Remington's Pharmaceutical Science (Mack Pub. Co.，N. J. 1991)中可以找到關(guān)于藥學(xué)上可接受的賦形劑的充分討論。在組合物中藥學(xué)上可接受的載體可包括液體，如水、鹽水、甘油和乙醇。另外，這些載體中還可能存在輔助性的物質(zhì)，如崩解劑、潤濕劑、乳化劑、PH緩沖物質(zhì)等。代謝型谷氨酸受體1和5中，1、5是指代謝型谷氨酸受體的兩個(gè)亞型，組成一組。使用代謝型谷氨酸受體1和5的激動(dòng)劑作為活性成份的組合物，可以降低蛋白尿， 有效治療蛋白尿。因?yàn)檠芯堪l(fā)現(xiàn)mGluRl和5的激動(dòng)劑可以減少足細(xì)胞足突融合，防止足細(xì)胞損傷。只需要每周一次靜脈注射，大大減少了治療的次數(shù)，從而減少了治療痛苦和費(fèi)用， 增加了患者的順應(yīng)性。
發(fā)明人發(fā)現(xiàn)足細(xì)胞表達(dá)mGluRl和5的基因和蛋白質(zhì)，腎小球中mGluRl的表達(dá)和足細(xì)胞標(biāo)志蛋白synaptopodin表達(dá)共定位，免疫電鏡顯示mGluRl位于足細(xì)胞體和足突細(xì)胞膜下層。體外實(shí)驗(yàn)中，DHPG誘導(dǎo)足細(xì)胞快速地產(chǎn)生cAMP，并且細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子CREB也被激活。DHPG誘導(dǎo)足細(xì)胞內(nèi)游離鈣緩慢持續(xù)地增加，提示足細(xì)胞表達(dá)有功能的mGluRl和 5。發(fā)明人使用PAN小鼠模型和ADR小鼠模型，發(fā)現(xiàn)使用DH PG治療的小鼠蛋白尿顯著降低，PAN小鼠和ADR小鼠腎小球Mphriri表達(dá)顯著降低，腎小球足細(xì)胞足突融合，而DHPG 治療的小鼠腎小球η印hrin表達(dá)正常，足細(xì)胞大部分足突結(jié)構(gòu)存在，部分足突融合。PAN和ADR小鼠腎小球中WT-1染色陽性細(xì)胞數(shù)顯著降低，TUNEL染色陽性的凋亡細(xì)胞數(shù)增加，而且凋亡陽性的細(xì)胞數(shù)和WT-I染色陽性細(xì)胞數(shù)呈負(fù)相關(guān)。DH PG治療的小鼠 WT-I染色陽性細(xì)胞數(shù)顯著高于PAN和ADR小鼠，TU NEL陽性細(xì)胞數(shù)非常少。體外實(shí)驗(yàn)中，DH PG防止PAN和ADR誘導(dǎo)的足細(xì)胞減少，減少PAN和ADR誘導(dǎo)的足細(xì)胞線粒體膜電位降低，caspase3激活。本發(fā)明第二實(shí)施方式涉及一種治療蛋白尿的組合物。第二實(shí)施方式是第一實(shí)施方式的一個(gè)優(yōu)選例子。其中，代謝型谷氨酸受體1和5的激動(dòng)劑選用(s)3，5_DHPG(其中DHPG是 dihydroxyphenylglycine的縮寫，中文名為二羥基苯氨酸)。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，(s)3，5_DHPG 是代謝型谷氨酸受體1和5的激動(dòng)劑中治療效果比較顯著的一種。當(dāng)然，在本發(fā)明的其他某些實(shí)施方式中，也可以使用其它類型的代謝型谷氨酸受體1和5的激動(dòng)劑，如 (RS) - (s)3，5-DHPG，(RS)-3-Hydroxyphenylglycine, (S)-3-Hydroxyphenylglycine, S-Sulfo-L-cysteine sodium 8已1七，等。藥學(xué)上可接受的載體選用磷酸緩沖液。可以理解，在本發(fā)明的其他某些實(shí)施方式中，也可以使用其它類型的緩沖液，如磷酸氫二鈉/磷酸二氫鈉緩沖液，磷酸二氫鉀/氫氧化鈉緩沖液，Tris鹽酸緩沖液等。(s)3，5_DHPG在磷酸緩沖液中的優(yōu)選濃度為lO-lOOmmol/L，實(shí)驗(yàn)證明，(s)3, 5-DHPG在磷酸緩沖液中的濃度為50mmol/L，這是治療效果較好的一個(gè)濃度?？梢岳斫?， (s)3，5-DHPG在磷酸緩沖液中也可以是其它的濃度。發(fā)明人通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)足細(xì)胞表達(dá)代謝型谷氨酸受體1和5(mGluRl，5)，使用 mGluRl和5激動(dòng)劑(s)3，5_DH PG將導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)的cAMP信號(hào)激活。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)使用 (s) 3，5-DHPG減少PAN和ADR小鼠蛋白尿，減少足突融合，防治足細(xì)胞凋亡。實(shí)際使用時(shí)，可以將mGluRl和5激動(dòng)(s)3，5_DHPG溶解于磷酸緩沖液中，濃度為 50mmol/L，靜脈內(nèi)注射，每周一次。本發(fā)明第三實(shí)施方式涉及一種制備治療蛋白尿的組合物的方法。該方法包括下述步驟將代謝型谷氨酸受體1和5的激動(dòng)劑與藥學(xué)上可接受的載體混合，從而得到第一實(shí)施方式中的組合物。本實(shí)施方式是與第一實(shí)施方式相對(duì)應(yīng)的方法實(shí)施方式，本實(shí)施方式可與第一實(shí)施方式互相配合實(shí)施。第一實(shí)施方式中提到的相關(guān)技術(shù)細(xì)節(jié)在本實(shí)施方式中依然有效，為了減少重復(fù)，這里不再贅述。相應(yīng)地，本實(shí)施方式中提到的相關(guān)技術(shù)細(xì)節(jié)也可應(yīng)用在第一實(shí)施方式中。本發(fā)明第四實(shí)施方式涉及一種制備治療蛋白尿的組合物的方法。第四實(shí)施方式是第三實(shí)施方式的一個(gè)優(yōu)選例子。代謝型谷氨酸受體1和5的激動(dòng)劑優(yōu)選采用(s) 3，5-DHPG。藥學(xué)上可接受的載體優(yōu)選采用磷酸緩沖液。(s)3，5_DH PG在磷酸緩沖液中的優(yōu)選濃度為10-100mmol/L。建議的優(yōu)選值是50mmol/L。本實(shí)施方式是與第二實(shí)施方式相對(duì)應(yīng)的方法實(shí)施方式，本實(shí)施方式可與第二實(shí)施方式互相配合實(shí)施。第二實(shí)施方式中提到的相關(guān)技術(shù)細(xì)節(jié)在本實(shí)施方式中依然有效，為了減少重復(fù)，這里不再贅述。相應(yīng)地，本實(shí)施方式中提到的相關(guān)技術(shù)細(xì)節(jié)也可應(yīng)用在第二實(shí)施方式中。雖然通過參照本發(fā)明的某些優(yōu)選實(shí)施方式，已經(jīng)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了描述，但本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)該明白，可以在形式上和細(xì)節(jié)上對(duì)其作各種改變，而不偏離本發(fā)明的精神和范圍。
權(quán)利要求
1.一種治療蛋白尿的組合物，其特征在于，該組合物由藥學(xué)上可接受的載體以及活性成份組成，所述活性成份為代謝型谷氨酸受體1和5的激動(dòng)劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療蛋白尿的組合物，其特征在于，所述代謝型谷氨酸受體1 和5的激動(dòng)劑可以是(s)3，5-DHPG。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的治療蛋白尿的組合物，其特征在于，所述藥學(xué)上可接受的載體可以是磷酸緩沖液。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的治療蛋白尿的組合物，其特征在于，所述(s)3，5-DHPG在磷酸緩沖液中的濃度范圍為lO-lOOmmol/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的治療蛋白尿的組合物，其特征在于，所述(s)3，5-DHPG在磷酸緩沖液中的濃度優(yōu)選為50mmol/L。
6.一種制備治療蛋白尿的組合物的方法，其特征在于，包括下述步驟將代謝型谷氨酸受體1和5的激動(dòng)劑與藥學(xué)上可接受的載體混合，從而得到權(quán)利要求 1所述的組合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備治療蛋白尿的組合物的方法，其特征在于，所述代謝型谷氨酸受體1和5的激動(dòng)劑可以是(s)3，5-DHPG。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備治療蛋白尿的組合物的方法，其特征在于，所述藥學(xué)上可接受的載體可以是磷酸緩沖液；所述(s)3，5-DHPG在磷酸緩沖液中的濃度范圍為lO-lOOmmol/L。
9.如權(quán)利要求1所述的組合物在制備治療蛋白尿的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，公開了一種治療蛋白尿的組合物及其制備方法。本發(fā)明中，使用代謝型谷氨酸受體1和5的激動(dòng)劑作為活性成份的組合物，可以有效降低蛋白尿。優(yōu)選地，可以使用謝型谷氨酸受體1和5的激動(dòng)劑中的(s)3，5-DHPG。
文檔編號(hào)A61K31/196GK102552909SQ20101061929
公開日2012年7月11日 申請(qǐng)日期2010年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月30日
發(fā)明者嚴(yán)玉澄, 倪兆慧, 戴慧莉, 梁馨月, 錢家麒, 顧樂怡, 高嘉元 申請(qǐng)人:上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院