專利名稱：一種連翹酯苷a及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及從藥用植物中提取連翹酯苷A的制備方法，屬醫(yī)藥領(lǐng)域范疇。
背景技術(shù)：
連翹是中國臨床常用傳統(tǒng)中藥之一，又名黃花條、連殼、青翹、落翹、黃奇丹等。《中 華人民共和國藥典》2010年版一部收載的連翹為木犀科(Oleaceae)連翹屬O^rsythia) 植物連翹(Forsythia suspensa (Thunb. ) Vahl)的干燥果實，果實初熟尚帶綠色時采收稱為 青翹，果實熟透顏色發(fā)黃時采收稱為老翹。連翹有抗菌、強心、利尿、鎮(zhèn)吐等藥理作用，常用連翹治療急性風(fēng)熱感冒、癰腫瘡 毒、淋巴結(jié)結(jié)核、尿路感染等癥，為雙黃連口服液、雙黃連粉針劑、清熱解毒口服液、連草解 熱口服液、銀翹解毒沖劑等中藥制劑的主要原料。最新的研究表明，連翹中抗病毒的主要活 性成分是連翹酯苷A，因此，采用合理的中藥分離純化技術(shù)，從中藥連翹中制備出純度高、質(zhì) 量可控、療效確切的連翹酯苷A，開發(fā)成臨床用于抗病毒的藥物，將具有很好的社會價值。本 發(fā)明提供的高純度連翹酯苷A能更好的保障連翹酯苷制劑的臨床療效，更好的為廣大患者 服務(wù)，使其發(fā)揮更大社會價值。目前，國內(nèi)外均有文獻報道連翹酯苷A提取分離方法，采用的方法有直接水提 法、有機溶劑提取法、超聲提取法、微波提取法等，提取物經(jīng)過硅膠、氧化鋁、大孔樹脂、反向 柱或色譜制備等一系列方法分離得到產(chǎn)物。上海玉森新藥開發(fā)有限公司申請了三項名為“從連翹提取物中純化連翹酯苷A的 方法”的專禾U (200610027024. 1,200610027036. 4,200610027037. 9)，該系列專利工藝主要采用硅膠柱層析法、色譜制備法，其使用材料昂貴，制備成本高，而且操作復(fù)雜，難以進行產(chǎn) 業(yè)化生產(chǎn)，只適用于少量樣品的制備。上海凱寶藥業(yè)有限公司申請了名為“一種連翹提取物的制備方法”的專利 (200610027331. X)，該專利是將連翹加水煎煮提取，經(jīng)醇沉初步純化，最后采用水飽和正丁 醇萃取進一步精制。雖然該專利也采用了萃取步驟，但其最終產(chǎn)品為連翹提取物，與本發(fā)明 的目標(biāo)產(chǎn)物具有本質(zhì)的不同，操作方法也不相同。北京太兆天元知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司申請了名為“一種連翹及其有效部位的制備 方法及新用途”的專利(200610086245. 4)，其工藝為連翹藥材用水蒸餾提取揮發(fā)油，水提 液拌硅藻土，醇洗，醇洗液過樹脂柱，將連翹油、連翹酚和連翹提取物混合得最終產(chǎn)物連翹 有效部位。該專利提取連翹有效部位的操作繁瑣，步驟多，不利于工業(yè)化生產(chǎn)，且與本發(fā)明 的目的產(chǎn)物連翹酯苷A，具有本質(zhì)的差別。山西大學(xué)申請了名為“一種連翹酯苷A制備方法”的專利(2008100544 . 9)，其工 藝為采用連翹殼為原料，用去離子水或者水醇作為提取溶劑提取，過大孔樹脂柱，濃縮流 出液，上反向?qū)游霾牧?，濃縮流出液，冷凍干燥得產(chǎn)物。眾所周知，該專利中分離所用反向材 料價格極其昂貴，因此制備費用很高，而且該專利中運用了多次過柱的方法，操作繁瑣，再 加上其干燥工藝中采用冷凍干燥技術(shù)，對儀器設(shè)備要求高，能耗較大，因此該發(fā)明專利的實用性較差。綜上所述，以往工藝制備成本高、操作復(fù)雜、對儀器設(shè)備要求高、能耗大，不利于工 業(yè)化大生產(chǎn)。本發(fā)明利用中藥現(xiàn)代化分離純化技術(shù)，以中藥連翹為原料，制備得到一種高純 度的連翹酯苷A。采用萃取技術(shù)及大孔樹脂純化技術(shù)，將提取液在一定條件下萃取去除部 分雜質(zhì)，再通過大孔樹脂純化，然后結(jié)晶處理，從而得到一種含量高、穩(wěn)定性好、成本低的連 翹酯苷A。本發(fā)明克服以往工藝的不足，提供了一種制備高含量連翹酯苷A的方法，工藝新 穎，操作簡便，節(jié)能環(huán)保，有很好的實用性，目前尚無相關(guān)專利或文獻報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服以往工藝的不足，通過提取、萃取、分離、結(jié)晶、重結(jié)晶等一 系列步驟，提供一種高含量的連翹酯苷A及其制備方法。根據(jù)本發(fā)明的比較優(yōu)選的實施方案，制備連翹酯苷A的方法包括如下步驟取連翹藥材，加入適量的溶劑提取數(shù)次，每次提取一定時間，過濾，合并提取液。調(diào)節(jié)提取液pH值，用一定量的溶劑萃取數(shù)次，回收有機溶劑，得到稠膏。取稠膏，加入一定量水，加熱溶解，放置，冷卻。取冷卻液，過一定型號的樹脂柱，上柱完成后，加水充分洗脫后，改用不同濃度的 水醇溶液洗脫，收集洗脫液減壓濃縮至稠膏。取稠膏，加入適量有機溶劑，加熱溶解，過濾，濾液冷卻，加入少量純度大于90% 的連翹酯苷A作為晶種，靜置，結(jié)晶，得連翹酯苷A粗品，粗品重結(jié)晶1 3次，可得到含量 60 99. 8%的連翹酯苷A。上述步驟(1)中，提取溶劑可用水、甲醇、乙醇或正丁醇，從生產(chǎn)成本角度考慮，優(yōu) 先使用水作溶劑進行提取，提取方法可以是回流提取或保溫提取方式，每次提取ai;提取 溶劑的用量為藥材量的5 12倍量(V/M)，優(yōu)選為7倍量；提取次數(shù)為1 3次，優(yōu)選2次。上述步驟(2)中，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)提取液PH值的范圍在8.0 11.0，優(yōu)選pH值為 9. 0，其中調(diào)節(jié)pH值可用氫氧化鈉、碳酸氫鈉、碳酸鈉或者氨水，優(yōu)選為氫氧化鈉。所用萃取 溶劑可以為乙酸乙酯或正丁醇，優(yōu)選為乙酸乙酯；萃取溶劑用量為提取液的0. 5 2倍量， 優(yōu)選為1倍量；萃取2 4次，優(yōu)選為3次。上述步驟(3)中，加入一定量的水加熱溶解，水的用量可為藥材量的1 3倍，優(yōu) 選為2倍量，水太少則溶液過于粘稠，過柱阻力大，水太多則溶液上柱量太大，生產(chǎn)周期長。上述步驟中，一定型號的樹脂柱可以為HPD-100、HPD-400、HPD-500、HPD-600， 或D101、D1300。通過正交試驗優(yōu)選，綜合上樣量、吸附率、解吸速度等各方面因素，優(yōu)選樹 脂型號為HPD-100大孔樹脂。上柱完成后，用水洗凈雜質(zhì)，然后使用一定比例的乙醇洗脫， 通過對洗脫率、樣品得率、樣品含量的綜合篩選，洗脫液乙醇的濃度為20 60%，優(yōu)選濃度 為50%。洗脫溶劑用量為藥材量的2 5倍(V/M)，優(yōu)選為3倍量。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的技 術(shù)方案，將事先處理好的大孔樹脂裝柱，對所用層析柱的規(guī)格和材質(zhì)無特殊要求，可根據(jù)實 際生產(chǎn)的需要選定，并按常規(guī)操作方法裝填，裝柱量不少于柱高的2/3，最好選用直徑與柱 高比在1 6 1 7的柱子。上述步驟(5)中，結(jié)晶所用的溶劑可以為水、甲醇、乙醇、丙酮，或是以上溶劑中兩 種或幾種溶劑的組合，優(yōu)選為甲醇-水組合，更優(yōu)選為甲醇水(75 25)；重結(jié)晶所用晶種純度一般不低于99. 5% ；結(jié)晶時間為8 18小時，優(yōu)選為12小時。根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案，采用科學(xué)可行的方法從連翹果實中經(jīng)提取、萃取、分離、 結(jié)晶、重結(jié)晶等一系列步驟，制得連翹酯苷A的含量大于60%，最高可達99.8%。與之前 的制備工藝相比，具有節(jié)能環(huán)保、生產(chǎn)成本低、操作簡便的優(yōu)點。本發(fā)明的制備工藝已經(jīng)通 過多批生產(chǎn)驗證，證明其重復(fù)性、穩(wěn)定性都好，適合工業(yè)化生產(chǎn)，易于推廣，具有很強的實用 性。具體實施方案以下實施例中所用連翹藥材購于安徽毫州，含量測定用對照品由本公司提供。所 用乙醇為藥用級，水為純化水，其他溶劑為分析純。以下實施內(nèi)容是為了對權(quán)利要求的技術(shù)特征給予說明，并進一步說明本發(fā)明的實 用性，不應(yīng)理解為對本發(fā)明的原料來源或?qū)Ρ景l(fā)明權(quán)利要求的限制。實施例1取連翹藥材50kg，分別加350L水加熱回流提取2次，每次2小時，合并提取液， 過濾，冷卻；將濾液用NaOH調(diào)節(jié)PH值到9. 0，分別加350L乙酸乙酯萃取3次，上層萃取液 于65°C下濃縮至稠膏，稱重5. 4kg ；向稠膏中加入IOOkg純化水，40°C下加熱溶解，過濾；濾 液上HPD-100大孔吸附樹脂柱，上柱完成后，加水充分洗脫去除大極性雜質(zhì)后，改用濃度為 50%的乙醇150L洗脫至洗脫液中無連翹酯苷A，收集洗脫液，減壓濃縮至稠膏；向稠膏中加 入甲醇2L，加熱溶解，冷卻，加入少量純度為90. 2%的連翹酯苷A結(jié)晶作為晶種，攪拌，靜置 結(jié)晶12h，過濾，干燥，即得連翹酯苷A粗品315g。取連翹酯苷A粗品，用濃度為75%的甲醇1575ml加熱溶解，過濾，濾液冷卻，加入 微量純度為99. 8%的連翹酯苷A結(jié)晶作為晶種，攪拌，靜置結(jié)晶12h，過濾，并按上述操作步 驟重結(jié)晶2次，即得連翹酯苷A227g，含量為99. 8%。取連翹酯苷A結(jié)晶50g，淀粉80g，硬脂酸鎂2. Og,微粉硅膠1. Og,糊精117g混勻， 制粒，過60目篩，干燥后壓成1000片(250mg/片)，即得。用法用量為口服，每次1 2 片，每日3次。實施例2取連翹藥材50kg，加入350L乙醇，在75°C下保溫提取1次，提取2小時，收集提取 液，過濾，冷卻；將濾液用NaOH調(diào)節(jié)PH值到11.0，分別加350L正丁醇萃取2次，上層萃取 液于85°C下濃縮至稠膏，稱重5. ^cg ；向稠膏中加入IOOkg純化水，40°C下加熱溶解，過濾； 濾液上HPD-400大孔吸附樹脂柱，上柱完成后，加水充分洗脫去除大極性雜質(zhì)后，改用濃度 為20%的乙醇150L洗脫至洗脫液中無連翹酯苷A，收集洗脫液，減壓濃縮至稠膏；向稠膏中 加入丙酮2L，加熱溶解，冷卻，加入少量純度為90. 5%的連翹酯苷A結(jié)晶作為晶種，攪拌，靜 置結(jié)晶10h，過濾，干燥，即得連翹酯苷A粗品256g。取連翹酯苷A粗品，用濃度為50%的丙酮1280ml加熱溶解，過濾，濾液冷卻，加入 微量純度為99. 5%的連翹酯苷A結(jié)晶作為晶種，攪拌，靜置結(jié)晶12h，過濾，并按上述操作步 驟重結(jié)晶2次，即得連翹酯苷A142g，含量為99. 7%。實施例3取連翹藥材100kg，加700L水加熱回流提取1次，提取2小時，收集提取液，過濾，冷卻；將濾液用碳酸鈉調(diào)節(jié)PH值到8. 0，分別加700L乙酸乙酯萃取3次，上層萃取液于65°C 下濃縮至稠膏，稱重10. Ag ；向稠膏中加入200kg純化水，40°C下加熱溶解，過濾；濾液上 HPD-500大孔吸附樹脂柱，上柱完成后，加水充分洗脫去除大極性雜質(zhì)后，改用濃度為35% 的乙醇300L洗脫至洗脫液中無連翹酯苷A，收集洗脫液，減壓濃縮至稠膏；向稠膏中加入乙 醇4L，加熱溶解，冷卻，加入少量純度為91. 4%的連翹酯苷A結(jié)晶作為晶種，攪拌，靜置結(jié)晶 15h，過濾，干燥，即得連翹酯苷A粗品586g。取連翹酯苷A粗品，用濃度為65%的乙醇加熱溶解，過濾，濾液冷卻，加入 微量純度為99. 8%的連翹酯苷A結(jié)晶作為晶種，攪拌，靜置結(jié)晶15h，過濾，干燥，即得連翹 酯苷A371g，含量為89.2%。實施例4取連翹藥材100kg，分別加700L甲醇，在60°C下保溫提取2次，每次2小時，合并 提取液，過濾，冷卻；將濾液用碳酸氫鈉調(diào)節(jié)PH值到9. 0，分別加700L正丁醇萃取2次，上 層萃取液于85°C下濃縮至稠膏，稱重10. ^g;向稠膏中加入200kg純化水，40°C下加熱溶 解，過濾；濾液上D-101大孔吸附樹脂柱，上柱完成后，加水充分洗脫去除大極性雜質(zhì)后，改 用濃度為50%的乙醇300L洗脫至洗脫液中無連翹酯苷A，收集洗脫液，減壓濃縮至稠膏；向 稠膏中加入甲醇4L，加熱溶解，冷卻，加入少量純度為91. 6%的連翹酯苷A結(jié)晶作為晶種， 攪拌，靜置結(jié)晶16h，過濾，干燥，即得連翹酯苷A粗品674g。取連翹酯苷A粗品，用濃度為75%的甲醇3370ml加熱溶解，過濾，濾液冷卻，加入 微量純度為99. 6%的連翹酯苷A結(jié)晶作為晶種，攪拌，靜置結(jié)晶10h，過濾，干燥，并即得連 翹酯苷A453g，含量為91.4%。實施例5取連翹藥材200kg，分別加1400L水加熱回流提取2次，每次2小時，合并提取液， 過濾，冷卻；將濾液用NaOH調(diào)節(jié)PH值到9. 0，分別加1400L乙酸乙酯萃取3次，上層萃取液 于65°C下濃縮至稠膏，稱重20. 2kg ；向稠膏中加入400kg純化水，40°C下加熱溶解，過濾； 濾液上HPD-100大孔吸附樹脂柱，上柱完成后，加水充分洗脫去除大極性雜質(zhì)后，改用濃度 為50%的乙醇600L洗脫至洗脫液中無連翹酯苷A，收集洗脫液，減壓濃縮至稠膏；向稠膏中 加入甲醇8L，加熱溶解，冷卻，加入少量純度為90. 7%的連翹酯苷A結(jié)晶作為晶種，攪拌，靜 置結(jié)晶10h，過濾，干燥，即得連翹酯苷A粗品l.^kg。取連翹酯苷A粗品，用濃度為75%的甲醇6450ml加熱溶解，過濾，濾液冷卻，加入 微量純度為99. 6%的連翹酯苷A結(jié)晶作為晶種，攪拌，靜置結(jié)晶12h，過濾，干燥，并即得連 翹酯苷A984kg，含量為94. 3 %。實施例6取連翹藥材200kg，分別加1400L水加熱回流提取2次，每次2小時，合并提取液， 過濾，冷卻；將濾液用NaOH調(diào)節(jié)PH值到9. 0，分別加1400L乙酸乙酯萃取3次，上層萃取液 于65°C下濃縮至稠膏，稱重20. 3kg ；向稠膏中加入400kg純化水，40°C下加熱溶解，過濾； 濾液上D-101大孔吸附樹脂柱，上柱完成后，加水充分洗脫去除大極性雜質(zhì)后，改用濃度為 50 %的乙醇600L洗脫至洗脫液中無連翹酯苷A，收集洗脫液，減壓濃縮至稠膏；向稠膏中加 入甲醇8L，加熱溶解，冷卻，加入少量純度為90. 4%的連翹酯苷A結(jié)晶作為晶種，攪拌，靜置 結(jié)晶12h，過濾，干燥，即得連翹酯苷A粗品1412g。
取連翹酯苷A粗品，用濃度為75%的甲醇7060ml加熱溶解，過濾，濾液冷卻，加入 微量純度為99. 8%的連翹酯苷A結(jié)晶作為晶種，攪拌，靜置結(jié)晶10h，過濾，并按上述操作步 驟重結(jié)晶2次，即得連翹酯苷A863g，含量為99. 8%。
權(quán)利要求
1.一種高含量的連翹酯苷A，其特征在于采用高效液相色譜法測定，含量范圍為 60% 99. 8%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的連翹酯苷A，其特征在于可以加入適量藥學(xué)上可接受的載體 進一步制成各種適合于臨床應(yīng)用的制劑，包括片劑、膠囊、滴丸、軟膠囊、粉針或注射液。
3.一種用連翹制備連翹酯苷A的方法，其制備方法由以下幾步組成(1)取連翹藥材，加入適量的溶劑提取數(shù)次，每次提取一定時間，過濾，合并提取液。(2)調(diào)節(jié)提取液至一定PH值，用一定量的溶劑萃取數(shù)次，回收有機溶劑，得到稠膏。(3)取稠膏，加入一定量水加熱溶解，放置，冷卻。(4)取冷卻液，過一定型號的樹脂柱，上柱完成后，加水充分洗脫后，改用不同濃度的水 醇溶液洗脫，收集洗脫液減壓濃縮，得稠膏。(5)取稠膏，加入適量有機溶劑，加熱溶解，過濾，濾液冷卻，加入少量純度大于90% 的連翹酯苷A作為晶種，靜置，結(jié)晶，得連翹酯苷A粗品，粗品重結(jié)晶1 3次，可得到含量 60 99. 8%的連翹酯苷A。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用連翹制備連翹酯苷A的方法，其特征在于步驟(1)中的提 取溶劑可以是水、甲醇、乙醇或正丁醇，優(yōu)選水作為提取溶劑；提取方法可以是保溫提取或 回流提?。惶崛∪軇┑挠昧繛樗幉牧康? 12倍量(V/M)，優(yōu)選為7倍量；提取次數(shù)為1 3次，優(yōu)選2次。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用連翹制備連翹酯苷A的方法，其特征在于步驟⑵中，調(diào)節(jié) 提取液PH值所用的試劑可以為氫氧化鈉、碳酸氫鈉、碳酸鈉或者氨水，優(yōu)選為氫氧化鈉；pH 值的范圍為8. 0 11. 0，優(yōu)選為9. 0 ；萃取溶劑可以為乙酸乙酯或正丁醇，優(yōu)選為乙酸乙酯； 萃取溶劑的用量為提取液的0. 5 2倍量，優(yōu)選為1倍量；萃取次數(shù)為2 4次，優(yōu)選為3 次。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用連翹制備連翹酯苷A的方法，其特征在于步驟(3)中，加入 水的用量為藥材量的1 3倍(V/M)，優(yōu)選為2倍量。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用連翹制備連翹酯苷A的方法，其特征在于步驟(4)中，所 用樹脂的型號可以為HPD-100、HPD-400、HPD-500、HPD-600，或D101、D1300，優(yōu)選樹脂型號 為HPD-100 ；洗脫液乙醇的濃度為20 60%，優(yōu)選濃度為50% ；洗脫溶劑用量為藥材量的 2 5倍(V/M)，優(yōu)選為3倍量。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用連翹制備連翹酯苷A的方法，其特征在于步驟(5)中，結(jié)晶 所用的溶劑可以為水、甲醇、乙醇、丙酮，或是以上溶劑中兩種或幾種溶劑的組合，優(yōu)選為甲 醇-水組合，更優(yōu)選的比例為甲醇水(75 25)；重結(jié)晶所用品種純度一般不低于99. 5%; 結(jié)晶時間為8 18小時，優(yōu)選為12小時。
全文摘要
本發(fā)明提供一種連翹酯苷A及其制備方法，屬醫(yī)藥領(lǐng)域范疇。本制備方法是以中藥連翹果實為原料，經(jīng)提取、萃取、分離、結(jié)晶、重結(jié)晶等一系列步驟，制備得到具有良好清熱解毒功效、能預(yù)防急慢性肝損傷的高含量連翹酯苷A，采用高效液相色譜法測定，其含量范圍為60～99.8％；本發(fā)明提供的連翹酯苷A及其制備方法采用中藥現(xiàn)代化分離純化技術(shù)，工藝新穎，操作簡便，適合工業(yè)化生產(chǎn)，具有很強的實用性。
文檔編號A61P31/12GK102050849SQ20101057943
公開日2011年5月11日 申請日期2010年12月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月9日
發(fā)明者季浩, 楊永安, 柏強強, 袁紅波, 鐘慧 申請人:江蘇天晟藥業(yè)有限公司