專利名稱：一種具有基質(zhì)金屬蛋白酶抑制功效的中藥提取物及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種具有基質(zhì)金屬蛋白酶抑制功效的中藥提取物及其制備方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrix Metalloproteinase，MMPs)是一類生物活性依賴于鋅離子、有降解細胞外基質(zhì)(Extra-Cellar Matrix,ECM)能力的內(nèi)肽酶家族。MMPs的主要作用是降解真皮中的膠原蛋白及彈性蛋白，MMPs分泌增加可使細胞內(nèi)膠原蛋白降解增加，造成皮膚中膠原蛋白流失，皮膚松弛，彈性下降，細紋增多且不斷加深，使皮膚呈現(xiàn)出衰老的跡象?；贛MP-I在皮膚衰老過程中的重要作用，人們逐漸將抑制MMP-I活性，抑制異常的膠原降解，減少皮膚炎癥反應(yīng)及防止皮膚光老化產(chǎn)生的皺紋，做為延緩衰老的新途徑。隨著衰老研究的深入，研究者們對衰老的認識越來越全面，通過研究MMP-I降解 ECM，膠原蛋白被分解流失的機理，揭示出MMP-I的過度表達是導(dǎo)致皮膚衰老的重要原因之一。篩選MMP-I抑制劑并利用其解決皮膚衰老的問題，將是以后延緩衰老研究的新途徑。同時，人們對抗皺、抗氧化等活性成分的安全性也越來越重視，如何從天然植物中篩選MMP-I 抑制成分，得到安全高效的延緩衰老功效成分是今后研究的重點和方向。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種具有基質(zhì)金屬蛋白酶抑制功效的中藥提取物及其制備方法。本發(fā)明所提供的中藥提取物是從大黃、馬齒莧和丁香組成的中藥組合物中提取得到的；所述中藥組合物中大黃、馬齒莧和丁香的質(zhì)量比為30-60 20-50 10-30。所述中藥組合物中大黃、馬齒莧和丁香的質(zhì)量比可進一步為 40-60 25-35 15-25。所述中藥提取物的制備方法如下將大黃、馬齒莧和丁香按照上述質(zhì)量比混合，得到中藥組合物；向所述中藥組合物加水，煮沸提取，得到所述中藥提取物。所述提取過程中，中藥組合物與水的質(zhì)量比可為1 (10-15)，優(yōu)選為1 10;所述煮沸提取的時間可為45-60分鐘，優(yōu)選60分鐘。本發(fā)明的方法還包括下述純化步驟提取結(jié)束后，冷卻、過濾、離心、收集上清液， 所述上清液即為純化后的中藥提取物。此外，還可對所述上清液進行抽濾，進一步除去其中的不溶性雜質(zhì)。在純化步驟中，所述冷卻的終溫度可為45-50°C，優(yōu)選50°C。所述過濾采用紗布進行過濾，所述紗布為100-200目，優(yōu)選200目。所述離心的離心轉(zhuǎn)速可為4000-5000r/min，優(yōu)選為4000r/min ；離心的時間可為10-15分鐘，優(yōu)選10分鐘。所述抽濾中采用助濾劑硅
藻土進行抽濾。本發(fā)明的再一個目的是提供上述中藥提取物的應(yīng)用。本發(fā)明所提供的中藥提取物的應(yīng)用是其在制備具有基質(zhì)金屬蛋白酶抑制功效的產(chǎn)品中的應(yīng)用；或在制備化妝品中的應(yīng)用，尤其是在制備具有基質(zhì)金屬蛋白酶抑制功效的化妝品中的應(yīng)用。含有本發(fā)明中藥提取物的化妝品以及含有該中藥提取物的組合物也屬于本發(fā)明的保護范圍。本發(fā)明提供的制備中藥提取物的方法，不需要有機試劑，提取分離方法簡便，所得產(chǎn)品純度較高，產(chǎn)品質(zhì)量有了很大的改進。對本發(fā)明得到的中藥提取物進行功能測試，結(jié)果表明該提取物具有較強的抑制基質(zhì)金屬蛋白酶的能力，同時具有延緩皮膚衰老、改善皮膚粗糙度的功效。故本發(fā)明得到的提取物可作為基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑，在制備化妝品中，尤其是制備具有基質(zhì)金屬蛋白酶抑制功效的化妝品，具有廣泛應(yīng)用。


圖1為本發(fā)明提供的中藥提取物的生產(chǎn)工藝流程圖；圖2為不同濃度的中藥提取物對基質(zhì)金屬蛋白酶抑制率的比較圖；圖3為中藥提取物對皮膚粗糙度降低率比較圖。
具體實施例方式下面通過具體實施例對本發(fā)明的方法進行說明，但本發(fā)明并不局限于此。下述實施例中所述實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法；所述試劑和生物材料，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑獲得。實施例1、制備中藥提取物中藥提取物的生產(chǎn)工藝流程圖如圖1所示，具體過程如下取料液比1 10，即IOOg 丁香、大黃和馬齒莧的混合物，其中丁香50克，大黃30 克，馬齒莧20克，之后加入IOOOmL去離子水；煮沸60min (加蓋保鮮膜，減少蒸發(fā))；停止加熱，水循環(huán)冷卻到50°C，200目紗布粗濾；4000r/min的轉(zhuǎn)速下離心10分鐘，取上清液；真空硅藻土濾餅抽濾，所得濾液即為中藥提取物(提取物質(zhì)量濃度記為100%)；之后95°C保溫 30分鐘，水浴降溫至50°C，加入0. 6% LGP液體防腐劑(全稱為LIQUID GERMALL PLUS，購自ISP國際特品有限公司)，得到產(chǎn)品。之后根據(jù)需要，可進行后續(xù)操作，如洗桶，消毒，灌裝，裝箱，打碼，入庫。實施例2、制備中藥提取物中藥提取物的生產(chǎn)工藝流程同實施例1，具體過程如下取料液比1 15，即IOOg 丁香、大黃和馬齒莧的混合物，其中丁香40克，大黃35 克，馬齒莧25克，之后加入1500mL去離子水；煮沸45min (加蓋保鮮膜，減少蒸發(fā))；停止加熱，水循環(huán)冷卻到50°C，200目紗布粗濾；5000r/min的轉(zhuǎn)速下離心10分鐘，取上清液；真空硅藻土濾餅抽濾，所得濾液，即為中藥提取物溶液(提取物質(zhì)量濃度記為100% )；之后 95°C保溫30分鐘，水浴降溫至50°C，加入0. 6% LGP液體防腐劑(全稱為LIQUID GERMALLPLUS，購自ISP國際特品有限公司)，得到產(chǎn)品。之后根據(jù)需要，可進行后續(xù)操作，如洗桶，消毒，灌裝，裝箱，打碼，入庫。實施例3、制備中藥提取物中藥提取物的生產(chǎn)工藝流程同實施例1，具體過程如下取料液比1 12，即IOOg 丁香、大黃和馬齒莧的混合物，其中丁香60克，大黃25 克，馬齒莧15克，之后加入1200mL去離子水；煮沸55min (加蓋保鮮膜，減少蒸發(fā))；停止加熱，水循環(huán)冷卻到50°C，200目紗布粗濾；4000r/min的轉(zhuǎn)速下離心10分鐘，取上清液；真空硅藻土濾餅抽濾，所得濾液，即為中藥提取物溶液(提取物質(zhì)量濃度記為100% )；之后 95°C保溫30分鐘，水浴降溫至50°C，加入0. 6% LGP液體防腐劑，得到產(chǎn)品。之后根據(jù)需要， 可進行后續(xù)操作，如洗桶，消毒，灌裝，裝箱，打碼，入庫。實施例4、中藥提取物的功能測定試驗下述試驗中所用的中藥提取物溶液，即為實施例1制備得到的濃度記為100%的中藥提取物，其它濃度的提取物是將該溶液進行相應(yīng)稀釋得到的。1、抑制基質(zhì)金屬蛋白酶活性能力的測定該抑制基質(zhì)金屬蛋白酶能力測定方法按照如下文獻中提供的方法進行張紅梅.基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑篩選方法的研究與應(yīng)用[學(xué)位論文].山東山東大學(xué)，2005。實驗方法以最優(yōu)實驗條件建立MMP-I酶反應(yīng)實驗平臺，以這個平臺為基礎(chǔ)，在不破壞酶反應(yīng)體系的前提下，加入中藥提取物溶液，通過酶反應(yīng)體系檢測產(chǎn)物熒光強度的變化，間接反映酶活力的變化，從而反映該中藥提取物對MMP-I活性的影響作用。(1)試劑配制配制緩沖液(50mmol/LHEPES，0. 12mol/L NaCl,10mmol/L CaC12,20 μ mol/ LZnS04，0. 05%Brij-35,pH = 7. 5)；將MMP-1 酶原用緩沖液梯度稀釋至0. 22μ g/ΙΟΟμ L備用；將熒光底物DQ-gelatin用緩沖液梯度稀釋至0. 20 μ g/100 μ L備用；在IL的0. lmol/L NaOH溶液中加入30mmol的酶原激活劑ΑΡΜΑ，形成ΑΡΜΑ儲備液(30mmol/L)備用；將本發(fā)明的中藥提取物配制成一定濃度的溶液備用；將MMP-I酶原溶液(0. 22 μ g/100 μ L)和ΑΡΜΑ 溶液(30mmol/L)按10 1的體積比(MMP ΑΡΜΑ)混合，在37°C孵育45min活化。(2)加樣取活化后的MMP-I溶液(濃度已降為0. 20 μ g/100 μ L) 40 μ L加入96孔酶標(biāo)板中， 再加入待測中藥提取物溶液8 μ L，熒光底物DQ-gelatin溶液(0. 20 μ g/100 μ L) 52 μ L，使最終反應(yīng)體系為100 μ L ；將完成加樣的96孔酶標(biāo)板放入37°C培養(yǎng)箱中恒溫孵育600s。實驗過程加樣比例見表1表1體外抑制MMP-I實驗加樣表
權(quán)利要求
1.一種中藥提取物，是從大黃、馬齒莧和丁香組成的中藥組合物中提取得到的；所述中藥組合物大黃、馬齒莧和丁香的質(zhì)量比為30-60 20-50 10-30。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥提取物，其特征在于所述中藥組合物中大黃、馬齒莧和丁香的質(zhì)量比為 40-60 25-35 15-25。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的中藥提取物，其特征在于所述中藥提取物是按照權(quán)利要求4-7中任一項所述方法制備得到的。
4.一種制備權(quán)利要求1所述中藥提取物的方法，包括下述步驟將大黃、馬齒莧和丁香按照權(quán)利要求1所述的質(zhì)量比混合，得到中藥組合物；向所述中藥組合物加水，煮沸提取， 得到所述中藥提取物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于所述中藥組合物與加入的水的質(zhì)量比為 1 (10-15)；所述煮沸提取的時間為45-60分鐘。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的方法，其特征在于所述方法還包括下述的步驟提取結(jié)束后，冷卻、過濾、離心、收集上清液，對所述上清液進行抽濾，收集抽濾液即為純化后的中藥提取物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于所述冷卻的終溫度為45-50°C，;所述過濾采用紗布進行過濾，所述紗布為100-200目；所述離心的轉(zhuǎn)速為4000-5000r/min，離心的時間為10-15分鐘；所述抽濾中采用助濾劑硅藻土進行抽濾。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項所述的中藥提取物在制備具有基質(zhì)金屬蛋白酶抑制功效的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項所述的中藥提取物在制備化妝品中的應(yīng)用。
10.一種具有基質(zhì)金屬蛋白酶抑制功效的化妝品，其特征在于所述化妝品含有權(quán)利要求1-3中任一項所述的中藥提取物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種具有基質(zhì)金屬蛋白酶抑制功效的中藥提取物及其制備方法與應(yīng)用。該中藥提取物是從大黃、馬齒莧和丁香組成的中藥組合物中提取得到的；所述中藥組合物中大黃、馬齒莧和丁香的質(zhì)量比為30-60∶20-50∶10-30。制備方法如下將大黃、馬齒莧和丁香按照比例混合，加水，煮沸提取，提取結(jié)束后冷卻，過濾、離心，抽濾，取上清液，得到所述中藥提取物。本發(fā)明提供的中藥提取物的提取分離方法簡便，所得產(chǎn)品純度較高，產(chǎn)品質(zhì)量有了很大的改進。功能測試結(jié)果表明，該提取物具有較強的抑制基質(zhì)金屬蛋白酶的能力，同時具有延緩皮膚衰老、改善皮膚粗糙度的功效。
文檔編號A61K8/97GK102475750SQ201010572470
公開日2012年5月30日 申請日期2010年11月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月30日
發(fā)明者何聰芬, 彭立偉, 王領(lǐng), 董銀卯, 趙華 申請人:北京工商大學(xué)