專利名稱：一種中藥組合物在制備脊髓損傷后神經(jīng)保護藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥組合物的新用途，具體地，涉及一種中藥組合物在制備脊髓損傷后神經(jīng)元保護藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
運動神經(jīng)元疾病(motor neuron disease, MND)包括肌萎縮側(cè)索硬化 (amyotrophic lateral sclerosis, ALS)、進(jìn)行性脊肌萎縮、進(jìn)行性延髓麻痹、原發(fā)性側(cè)索硬化等，是由于中樞神經(jīng)系統(tǒng)上下運動神經(jīng)元廣泛變性引起的，其癥狀有肌力減退、肌肉萎縮，并逐漸發(fā)展為飲食嗆咳、吞咽困難、呼吸困難，直到死亡。ALS是一種病因未明的選擇性侵犯脊髓前角細(xì)胞、腦干運動神經(jīng)核及錐體束的慢性進(jìn)行性變性疾病，臨床表現(xiàn)為上下運動神經(jīng)元合并受損的體征，是慢性運動神經(jīng)元疾病中最常見的類型。進(jìn)行性脊肌萎縮，大多數(shù)患者一側(cè)或雙側(cè)手部肌群無力和萎縮，可見肌束顫動，肌張力減低，腱反射減弱或消失， 嚴(yán)重者呈爪形手。肌萎縮和肌無力可向上發(fā)展，感覺神經(jīng)不受累，少數(shù)患者下肢可出現(xiàn)癥狀。原發(fā)性側(cè)索硬化癥，成人起病，病程進(jìn)展緩慢，常先侵犯下胸段的皮質(zhì)脊髓束，出現(xiàn)雙下肢無力、僵硬、行走時呈痙攣步態(tài)，逐漸累及雙上肢。四肢肌張力增高，病理體征陽性。進(jìn)行性延髓麻痹，以逐漸加重的延髓麻痹癥狀首發(fā)，表現(xiàn)為吞咽困難，飲水嗆咳、言語含糊，咳嗽無力，甚至呼吸困難。同時或稍后出現(xiàn)出現(xiàn)軀體運動神經(jīng)元受損的癥狀和體征。臨床表現(xiàn)為，起病緩慢，病程也可呈亞急性，癥狀依受損部位而定。由于運動神經(jīng)元疾病選擇性侵犯脊髓前角細(xì)胞、腦于顱神經(jīng)運動核以及大腦運動皮質(zhì)錐體細(xì)胞、錐體束，因此若病變以下級運動神經(jīng)元為主，稱為進(jìn)行性脊髓性肌萎縮癥；若病變以上級運動神經(jīng)元為主，稱為原發(fā)性側(cè)索硬化；若上、下級運動神經(jīng)元損害同時存在，則稱為肌萎縮側(cè)索硬化；若病變以延髓運動神經(jīng)核變性為主者，則稱為進(jìn)行性延髓麻痹。臨床以進(jìn)行性脊肌萎縮癥、肌萎縮側(cè)索硬化最常見。本病主要表現(xiàn)，最早癥狀多見于手部分，患者感手指運動無力、僵硬、笨拙，手部肌肉逐漸萎縮，可見肌束震顫。四肢遠(yuǎn)端呈進(jìn)行性肌萎縮，約半數(shù)以上病例早期呈一側(cè)上肢手部大小魚際肌萎縮，以后擴展到前臂肌，甚至胸大肌，背部肌肉亦可萎縮，小腿部肌肉也可萎縮，肌肉萎縮肢體無力，肌張力高(牽拉感覺)，肌束顫動，行動困難、呼吸和吞咽障礙等癥狀。如早期病變性雙側(cè)錐體束，則可先出現(xiàn)雙下肢痙攣性截癱。本病病因復(fù)雜，目前尚缺乏有效的治療手段，中醫(yī)藥在改善患者臨床癥狀、提高生存質(zhì)量方面具有明顯的優(yōu)勢，本發(fā)明藥物作為醫(yī)院制劑在運動神經(jīng)元病治療中取得較好的臨床療效[王雅慧，趙輝，黃佳筌.肌萎靈湯治療多發(fā)性硬化的臨床研究.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2006,15(12) :1608-1609;陳金亮，平陽，王殿華.肌萎靈系列制劑治療肌萎縮側(cè)索硬化癥240例療效觀察.新中醫(yī)，2005，37 (9) :38-39]。本發(fā)明通過上調(diào)bcl_2蛋白表達(dá)、下調(diào)bax蛋白表達(dá)，從而抑制谷氨酸誘導(dǎo)的原代神經(jīng)元細(xì)胞凋亡，增強神經(jīng)元細(xì)胞活力，從而延緩病情發(fā)展，推測在改善患者肢體活動，提高生存質(zhì)量等方面具有重要的臨床應(yīng)用價值。本發(fā)明是在中國專利CN1785223A的基礎(chǔ)上進(jìn)行的改進(jìn)發(fā)明，在此引用該專利文件記載的內(nèi)容。本發(fā)明提供了該中藥組合物在制備保護運動神經(jīng)元藥物中的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了該中藥組合物在制備脊髓損傷后神經(jīng)元保護藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明中藥組合物是由如下重量份比例的原料制成 人參總皂苷提取物30-70 淫羊藿總黃酮提取物20-60。優(yōu)選為
人參總皂苷提取物35 淫羊藿總黃酮提取物55。還優(yōu)選為
人參總皂苷提取物65 淫羊藿總黃酮提取物25?；蛘?br> 人參總皂苷提取物50 淫羊藿總黃酮提取物40。本發(fā)明原料中的人參皂苷提取物和淫羊藿總黃酮提取物均按照CN 1785223A公開的方法制得的。人參總皂苷提取物制備方法人參藥材，用60-90%乙醇提取1-3次，第1次加藥材8-12倍量溶劑提取1-2小時，第2次加6-10倍量溶劑提取1_2小時，第3次加6_10倍量溶劑提取0. 5-1小時；合并上述提取液，趁熱濾過，減壓回收乙醇，并濃縮，放入不銹鋼桶內(nèi)，加純水?dāng)嚢杈鶆颍洳貙?3他；將冷藏液取出，放至常溫，板框過濾器過濾，用少量水洗滌板框，濾液加純水稀釋，備用；取人參濃縮藥液通過處理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱，并分別用PH值8-9的氨水、20%乙醇、80%乙醇洗脫，收集80%乙醇洗脫液。將80%洗脫液加入純水，配成50%醇溶液，通過中性氧化鋁柱，收集洗脫液，再用少量50%乙醇洗滌柱子，合并洗脫液備用；取藥液加入活性炭，回流加熱，煮沸20min，趁熱板框抽濾，收集濾液，濃縮， 冷藏過夜；澄清板過濾，減壓干燥，即得人參總皂苷提取物。淫羊藿總黃酮制備方法取淫羊藿藥材，加水煎煮提取2-5次，加水量為10-30倍， 第一次提取時間定為0. 5-2h，以后3次為0. 5-lh ；合并上述提取液，趁熱濾過，減壓濃縮，放入不銹鋼桶內(nèi)，加乙醇至藥液含醇濃度為7096，冷藏；過濾，濾液回收乙醇并濃縮，加水?dāng)嚢杈鶆?，冷藏，過濾，備用；取淫羊藿藥液通過處理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱，并分別用純水、20%乙醇、50%乙醇洗脫，收集50%乙醇洗脫液；洗脫液拌入適量硅藻土混勻，用無水乙醇提取2-5次，提取液合并，回收乙醇并濃縮，濃縮液加入丙酮，并攪拌均勻，冷藏，過濾，沉淀加丙酮再同前處理2次，合并3次濾液，回收溶劑，并濃縮，減壓干燥，即得淫羊藿總黃酮提取物。本發(fā)明還提供了中藥組合物凍干注射劑的制備方法
a、將5-15倍原料重量的羥丙基-β-環(huán)糊精加水溶解制成15 30%的溶液，將淫羊藿總黃酮提取物加水制成3 10%的溶液，分次緩慢加入羥丙基-環(huán)糊精溶液中，保溫 50 90°C，動態(tài)攪拌包合，包合時間3 8小時，將人參總皂苷提取物加水制成30-50%的溶液，加入包合液中，繼續(xù)包合1 2小時；
b、加水調(diào)節(jié)溶液總量至6ml/支，用5 20%的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH到6 9，加入活性炭至含活性炭0. 1 0. 5%，煮沸5 10分鐘，趁熱濾除活性炭，再用0. 22 μ m微孔濾膜過濾，用水定容至6ml/支；
c、105°C熱壓滅菌10 30分鐘，取出，放至常溫，用0.22 μ m微孔濾膜過濾，分裝至西林瓶，每支6ml，半壓塞，置凍干機中，-20°C _40°C預(yù)凍2 5小時；
d、按照預(yù)凍條件，在真空度為0.05-0. 5 狀態(tài)下，從預(yù)凍溫度至0°C升溫升華20-35小時，再從0°C至30°C升溫干燥3-8小時；
e、在升華和干燥的真空狀態(tài)下壓塞，出箱，壓鋁蓋，燈檢，包裝。優(yōu)選為
a、將9倍原料重量的羥丙基-β-環(huán)糊精加水溶解制成20%的溶液，將淫羊藿總黃酮提取物加水制成5%的溶液，分次緩慢加入羥丙基-β -環(huán)糊精溶液中，保溫60 80°C，動態(tài)攪拌包合，包合時間3 5小時，將人參總皂苷提取物加水制成33%的溶液，加入包合液中，繼續(xù)包合1 2小時；
b、加水調(diào)節(jié)溶液總量至6ml/支，用10%的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH到7.5 8. 0，加入活性炭至含活性炭0. 4%，煮沸10分鐘，趁熱濾除活性炭，再用0. 22 μ m微孔濾膜過濾，用水定容至6ml/支；
c、105°C熱壓滅菌30分鐘，取出，放至常溫，用0.22 μ m微孔濾膜過濾，分裝至西林瓶， 每支6ml，半壓塞，置凍干機中，-40°C預(yù)凍3小時；
d、按照預(yù)凍條件，在真空度為0.05-0. IPa狀態(tài)下，從_40°C至0°C升溫升華28小時，再從OV至30°C升溫干燥4. 5小時；
e、在升華和干燥的真空狀態(tài)下壓塞，出箱，壓鋁蓋，燈檢，包裝。本發(fā)明凍干注射劑的制備方法中的所述百分比濃度，如果為固體溶解在液體中一般指重量體積比(g/ml或Kg/L)，例如羥丙基-β -環(huán)糊精加水溶解制成20%的溶液，是指取20克羥丙基- β -環(huán)糊精加水IOOml制成；如果為液體溶解在液體中，則為體積體積比 (ml/ml或L/L)，比如50%乙醇濃度是指50ml純乙醇與50ml的水制成的溶液，也可以使用高濃度乙醇稀釋至體積體積比為50%的溶液。本發(fā)明所述中藥凍干注射劑的原輔料重量比例及制備方法是經(jīng)過大量嚴(yán)格篩選試驗，工藝驗證，穩(wěn)定性研究后才得到的，并非通過制劑教材或其它參考資料就可以直接得到的，經(jīng)過篩選試驗，工藝驗證，穩(wěn)定性研究證實本發(fā)明原輔料比例合理，制備工藝穩(wěn)定，成品制劑穩(wěn)定，符合制劑學(xué)以及國家食品藥品監(jiān)督管理局對于中藥凍干注射劑的制劑指導(dǎo)原則要求。本發(fā)明中藥組合物還可以按常規(guī)的制劑工藝，例如，范碧亭《中藥藥劑學(xué)》(上?？茖W(xué)出版社1997年12月第1版)記載的制備工藝，制成藥劑學(xué)可接受的任意常規(guī)劑型，例如膠囊劑、片劑、顆粒劑、散劑、口服液或丸劑等。本發(fā)明的應(yīng)用中，所述中藥組合物制劑劑型為膠囊劑、片劑、顆粒劑、散劑、口服液或丸劑，為使上述劑型能夠?qū)崿F(xiàn)，需在制備這些劑型時加入藥學(xué)可接受的輔料，例如填充齊 、崩解劑、潤滑劑、助懸劑、粘合劑、甜味劑、矯味劑、防腐劑、基質(zhì)等。填充劑包括淀粉、 預(yù)膠化淀粉、乳糖、甘露醇、甲殼素、微晶纖維素、蔗糖等；崩解劑包括淀粉、預(yù)膠化淀粉、 微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉等；潤滑劑包括硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、滑石粉、二氧化硅等；助懸劑包括聚乙烯吡咯烷酮、微晶纖維素、蔗糖、瓊脂、羥丙基甲基纖維素等；粘合劑包括，淀粉漿、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素等；甜味劑包括糖精鈉、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等； 矯味劑包括甜味劑及各種香精；防腐劑包括尼泊金類、苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸及其鹽類、苯扎溴銨、醋酸氯乙定、桉葉油等；基質(zhì)包括PEG6000，PEG4000，蟲蠟等。為使上述劑型能夠?qū)崿F(xiàn)中藥藥劑學(xué)，需在制備這些劑型時加入藥學(xué)可接受的其它輔料(范碧亭《中藥藥劑學(xué)》，上?？茖W(xué)出版社1997年12月第1版中各劑型記載的輔料)。為闡明本發(fā)明中藥組合物具有保護運動神經(jīng)元的活性，用按實施例1的方法所制得的藥物(以下稱本發(fā)明藥物)進(jìn)行了下列試驗。1實驗材料
1. 1藥物本發(fā)明藥物(JWLF)，有效部位為總皂苷、總黃酮，每支0.8g，含生藥3.5g， 輔料含量約為91. 4%，臨床用量為每日2支，由石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司提供，批號 20081201。輔料對照凍干粉為白色疏松塊狀粉，批號20090303。注射用七葉皂苷鈉(凍干粉)，IOmg/支，黑龍江省珍寶島制藥有限公司生產(chǎn)，批號20090401。利魯唑，由Sigma公司生產(chǎn),批號057K3900。1. 2試劑谷氨酸Sigma公司，批號118K08801 ；高糖DMEM培養(yǎng)液Gibco公司， 批號=1290007 ；胎牛血清=Cellgro公司，批號=50020038 ；MTT 超純級，Amressco公司；二甲基亞砜(DMSO)ACS grade,Amressco公司；RIPA裂解液Solarbio公司，批號90090830 ； bcl-2、bax、β-actin 抗體均為 Santa cruz 公司產(chǎn)品，批號分別為 D0609、C0909、F2007。1. 3實驗動物清潔級SD大鼠，雌雄各半，18(T220g ；清潔級SD雌性大鼠，孕期 l(Tl4d，均購于河北省實驗動物中心，許可證號SCXK (冀)2008-1-003。大鼠籠養(yǎng)，飼養(yǎng)在河北省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)藥研究院新藥評價中心，光照12小時/天，溫度2(T25°C，相對濕度 409^70%。1.4儀器系統(tǒng) Epics-XLII型流式細(xì)胞儀(Beckman Coulter)，凝膠成像分析儀(Biorad)，凝膠成像圖像分析軟件(Quantity one)，5417R型低溫離心機(Eppendorf)， XD711酶標(biāo)分析儀(上海迅達(dá)醫(yī)療儀器公司)，二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱(日本三洋)，座式自動電熱壓力蒸汽滅菌器(上海申安醫(yī)療器械廠)。2實驗方法
2.1對大鼠脊髓損傷損傷后脊髓神經(jīng)功能的影響
2.1.1實驗分組將140只大鼠隨機分為以下7組，每組20只。本發(fā)明藥物設(shè)高中低三個劑量組，其劑量分別為2. 32、1. 16,0. 58g生藥/kg ；另設(shè)假手術(shù)組、模型組、陽性藥組和輔料組。陽性藥為七葉皂苷鈉凍干粉，給藥劑量為3. 33mg/kg。輔料組給藥量為0. 485g/kg。2.1.2給藥方法藥物配制溶媒均為生理鹽水，使用前溶解至相應(yīng)濃度尾靜脈注射給藥，給藥體積為lmL/100g體重。假手術(shù)組、模型組大鼠尾靜脈注射生理鹽水。于手術(shù)造模前2周開始預(yù)防性給藥，造模后繼續(xù)給藥治療2周。2.1.3大鼠脊髓損傷模型的建立 10%的水合氯醛麻醉，大鼠進(jìn)入麻醉狀態(tài)后固定于手術(shù)臺上，常規(guī)碘伏消毒局部皮膚。以大鼠第12胸椎棘突處皮膚為切口的下緣， 做中線3cm長的切口，切開皮膚、皮下，沿中線切開肌筋膜，暴露出T9-T11胸椎棘突，沿其兩側(cè)銳性分離肌肉至關(guān)節(jié)突，尖嘴咬骨鉗咬除TlO及上下各一個節(jié)段的椎板，暴露范圍約 3mmX 12mm大小，保持硬脊膜完整，采用自制靜態(tài)壓迫裝置，以30g重量，壓迫lOmin。滴加抗生素，逐層縫合切口。假手術(shù)組僅行椎板切除手術(shù)，未行靜態(tài)壓迫過程。術(shù)后給損傷組大鼠行人工擠壓膀胱，幫助排尿，每日2-3次，直到能自行排尿為止。2. 1.4觀察指標(biāo)2. 1. 4. 1神經(jīng)運動功能評價于術(shù)后第Mh、7d、14d應(yīng)用21分的BBB評分進(jìn)行神經(jīng)功能評價，觀察其后肢的行走及肢體活動。2. 1. 4. 2損傷處脊髓的形態(tài)學(xué)變化脊髓損傷術(shù)后14d神經(jīng)運動功能評價結(jié)束后，取損傷段脊髓約1.5cm，置于4%甲醛內(nèi)過夜進(jìn)行固定，常規(guī)石蠟包埋，做冠狀面連續(xù)切片，HE染色，觀察損傷處脊髓的形態(tài)學(xué)變化。2.2對谷氨酸誘導(dǎo)的原代神經(jīng)元細(xì)胞凋亡的影響
2.2.1藥物配制將本發(fā)明藥物溶于無血清的DMEM中，配制成41. 2g/L的母液， 0. 22 μ m的針頭濾器過濾除菌，置_20°C冰箱保存。實驗時用無血清DMEM稀釋成相應(yīng)濃度的工作液。2.2.2神經(jīng)元細(xì)胞原代培養(yǎng)碘酒、酒精依次消毒孕鼠腹部，取胎鼠大腦皮層放于PBS中，剝凈腦膜。無血清培養(yǎng)液洗兩遍，吸出液體，將組織剪成細(xì)小碎塊，0. 125%胰酶消化20min，吸出組織塊放入含10%FBS的DMEM中，終止消化，吸管吹打15次左右，過200目篩網(wǎng)，800轉(zhuǎn)離心5min，棄上清，沉淀的細(xì)胞用含10%FBS的DMEM吹打均勻。計數(shù)5. 0 X 105 個/mL，接種于96孔板或6孔板后繼續(xù)培養(yǎng)，48h加入0. 01mmol/L阿糖胞苷，作用24h吸出， 換上新鮮的DMEM培養(yǎng)基。2.2.3實驗分組本發(fā)明藥物設(shè)高中低三個劑量組，其劑量分別為2. 06、1. 03、 0. 52g/L，另設(shè)空白對照組、模型對照組、利魯唑組和輔料組。神經(jīng)元培養(yǎng)7 后，實驗組分別加入用新鮮培養(yǎng)基配制的2. 06g/L、1.03g/L、0. 52g/L本發(fā)明藥物，利魯唑組加入 10 μ mol/L利魯唑，輔料組加入1. 89g/L輔料，空白對照組和模型對照組加入等量新鮮培養(yǎng)基，共同培養(yǎng)24h后，神經(jīng)毒性損傷各組(除空白對照組外)均加入谷氨酸(終濃度為 0. 5mmol/L)，作用24h后進(jìn)行指標(biāo)檢測。2. 2.4 MTT法測定神經(jīng)元細(xì)胞活力谷氨酸作用24h后進(jìn)行細(xì)胞活力檢測，在培養(yǎng)板中加入MTT (5mg/mL)20yL，37°C閉光孵育4h，去上清，各孔加入DMSO 100 μ L，微型震蕩器震蕩IOmin后，570nm測定OD值。2. 2. 5神經(jīng)元細(xì)胞的形態(tài)觀察神經(jīng)元細(xì)胞原代培養(yǎng)經(jīng)過細(xì)胞計數(shù)后接種于含有蓋玻片的6孔板，谷氨酸作用24h后，用冷PBS漂洗aiiin X 3次，4%多聚甲醛4°C孵育10 min，冷 PBS 漂洗 aninX3 次，l%Triton X _1004°C孵育 5 min，冷 PBS 漂洗 2minX 3 次，蘇木素液染核Imin，自來水洗Imin，1%鹽酸酒精分化1 sec，流水沖洗3min，0. 5%伊紅水溶液染色lmin，自來水洗1 min，無水酒精脫水三次，二甲苯透明后封片觀察。2. 2. 6神經(jīng)元細(xì)胞凋亡率檢測實驗結(jié)束后，用0. 125%胰蛋白酶消化收集細(xì)胞， PBS清洗兩遍，去上清液，用500 μ LPBS將細(xì)胞沉淀吹打成單細(xì)胞懸液，緩緩注入70 %乙醇固定，4°C保存過夜。PBS清洗兩次，加入ImL碘化丙啶(PI)染液，4°C冰箱避光染色30min， 采用Epics-XL II型流式細(xì)胞儀檢測凋亡率。2.2.7神經(jīng)元細(xì)胞凋亡蛋白檢測實驗結(jié)束后，加入0. 2mLRIPA裂解液冰上裂解 30min, 4 V、3000rpm離心20min，吸取上清，BCA法測定總蛋白濃度，用樣品緩沖液稀釋至 5 μ g/ μ L。取100 μ g的蛋白樣品進(jìn)行12%的SDS-PAGE凝膠電泳，待目的蛋白接近凝膠中央部分時停止電泳，4°C、120V恒壓電轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，5%脫脂奶粉室溫封閉lh。分別加入 bcl-2,bax和β -actin 一抗，4°C孵育過夜，TBST洗膜IOminX 3次，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗(1 =10000)室溫孵育lh，TBST洗膜5minX3次。ECL發(fā)光顯色，凝膠成像系統(tǒng)照相，采用quantity one軟件分析，掃描灰度值，以目的蛋白與內(nèi)參β-actin的比值表示。2.3統(tǒng)計方法所有數(shù)據(jù)用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(i 士s)表示。采用SPSS統(tǒng)計軟
件包，首先進(jìn)行正態(tài)性檢驗，符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)，均數(shù)比較用單因素方差分析(One-Way AN0VA)，若方差齊，兩兩比較采用最小顯著差法(LSD)，若方差不齊則采用Durmett’ s T3檢驗；如不符合正態(tài)分布，則用非參數(shù)檢驗進(jìn)行統(tǒng)計分析。3 結(jié)果
3. 1神經(jīng)運動功能評價模型組大鼠BBB評分在脊髓靜壓損傷術(shù)后Mh、7d、14d均顯著低于假手術(shù)組；各給藥組BBB評分較模型組均有不同程度的提高，并隨著時間的延長，改善作用尤為明顯。輔料組在各時間段與模型組無明顯差異，見表1。表1本發(fā)明藥物在不同時間對脊髓損傷大鼠的BBB評分結(jié)果比較(士^
權(quán)利要求
1.一種中藥組合物在制備脊髓損傷后神經(jīng)元保護藥物中的應(yīng)用，其特征在于該中藥組合物是由如下重量份比例的原料制成人參總皂苷提取物30-70 淫羊藿總黃酮提取物20-60。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述中藥組合物，其特征在于該中藥組合物是由如下重量份比例的原料制成人參總皂苷提取物35 淫羊藿總黃酮提取物55。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述中藥組合物，其特征在于該中藥組合物是由如下重量份比例的原料制成人參總皂苷提取物65 淫羊藿總黃酮提取物25。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述中藥組合物，其特征在于該中藥組合物是由如下重量份比例的原料制成人參總皂苷提取物50 淫羊藿總黃酮提取物40。
5.如權(quán)利要求1-4中任一項所述的應(yīng)用，其特征在于，所述中藥組合物作為活性成分的藥物制劑為凍干注射劑、膠囊劑、片劑、顆粒劑、散劑、口服液或丸劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于所述凍干注射劑由以下步驟制成a、將5-15倍原料重量的羥丙基-β-環(huán)糊精加水溶解制成15 30%的溶液，將淫羊藿總黃酮提取物加水制成3 10%的溶液，分次緩慢加入羥丙基-環(huán)糊精溶液中，保溫 50 90°C，動態(tài)攪拌包合，包合時間3 8小時，將人參總皂苷提取物加水制成30-50%的溶液，加入包合液中，繼續(xù)包合1 2小時；b、加水調(diào)節(jié)溶液總量至6ml/支，用5 20%的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH到6 9，加入活性炭至含活性炭0. 1 0. 5%，煮沸5 10分鐘，趁熱濾除活性炭，再用0. 22 μ m微孔濾膜過濾，用水定容至6ml/支；c、105°C熱壓滅菌10 30分鐘，取出，放至常溫，用0.22 μ m微孔濾膜過濾，分裝至西林瓶，每支6ml，半壓塞，置凍干機中，-20°C _40°C預(yù)凍2 5小時；d、按照預(yù)凍條件，在真空度為0.05-0. 5 狀態(tài)下，從預(yù)凍溫度至0°C升溫升華20-35小時，再從0°C至30°C升溫干燥3-8小時；e、在升華和干燥的真空狀態(tài)下壓塞，出箱，壓鋁蓋，燈檢，包裝。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于所述凍干注射劑由以下步驟制成a、將9倍原料重量的羥丙基-β-環(huán)糊精加水溶解制成20%的溶液，將淫羊藿總黃酮提取物加水制成5%的溶液，分次緩慢加入羥丙基-β -環(huán)糊精溶液中，保溫60 80°C，動態(tài)攪拌包合，包合時間3 5小時，將人參總皂苷提取物加水制成33%的溶液，加入包合液中，繼續(xù)包合1 2小時；b、加水調(diào)節(jié)溶液總量至6ml/支，用10%的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH到7.5 8. 0，加入活性炭至含活性炭0. 4%，煮沸10分鐘，趁熱濾除活性炭，再用0. 22 μ m微孔濾膜過濾，用水定容至6ml/支；c、105°C熱壓滅菌30分鐘，取出，放至常溫，用0.22 μ m微孔濾膜過濾，分裝至西林瓶， 每支6ml，半壓塞，置凍干機中，-40°C預(yù)凍3小時；d、按照預(yù)凍條件，在真空度為0.05-0. 1 狀態(tài)下，從_40°C至0°C升溫升華觀小時，再從0°C至30°C升溫干燥4. 5小時；e、在升華和干燥的真空狀態(tài)下壓塞，出箱，壓鋁蓋，燈檢，包裝。
8.如權(quán)利要求1-4中任一項所述的應(yīng)用，其特征在于所述中藥組合物在制備促進(jìn)脊髓損傷后大鼠后肢運動功能恢復(fù)藥物中的應(yīng)用。
9.如權(quán)利要求1-4中任一項所述的應(yīng)用，其特征在于所述中藥組合物在制備增強神經(jīng)元細(xì)胞活力藥物中的應(yīng)用。
10.如權(quán)利要求1-4中任一項所述的應(yīng)用，其特征在于所述中藥組合物在制備抑制谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡，調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種中藥組合物對運動神經(jīng)元的保護作用的應(yīng)用。本發(fā)明中藥組合物包括人參和淫羊藿，可促進(jìn)脊髓損傷后大鼠后肢運動功能恢復(fù)，增強神經(jīng)元細(xì)胞活力，抑制谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡，調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)，具有一定的神經(jīng)保護作用。
文檔編號A61P25/00GK102451209SQ20101052449
公開日2012年5月16日 申請日期2010年10月29日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月29日
發(fā)明者劉克劍, 宋劍, 崔慶飛, 張東蛟, 張會欣, 張秋艷, 王宏濤, 王玲玲, 趙韶華 申請人:河北以嶺醫(yī)藥研究院有限公司