專利名稱：：一種防治人胃部疾病的卵黃免疫球蛋白IgY的漂浮片制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種能夠防治人類胃部疾病的生物制劑一抗幽門螺桿菌的特異性卵黃免疫球蛋白(抗HP-IgY)制劑，尤其涉及其新劑型——胃內(nèi)漂浮片劑，屬于生物醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：胃部疾病或稱胃病，實(shí)際上是許多病的統(tǒng)稱。它們有相似的癥狀，如上腹胃脘部不適、疼痛、飯后飽脹、返酸，甚至惡心、嘔吐等等。臨床上常見(jiàn)的胃病有急性胃炎、慢性胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、胃十二指腸復(fù)合潰瘍以及胃的良性、惡性腫瘤等。1982年澳大利亞學(xué)者巴里馬歇爾和羅賓沃倫發(fā)現(xiàn)了幽門螺桿菌(Helicobacterpylori,以下簡(jiǎn)稱Hp)，并證明該細(xì)菌感染胃部會(huì)導(dǎo)致胃炎、胃潰瘍和十二指腸潰瘍等胃部疾病。據(jù)估計(jì)，全世界約50%的人胃部都“藏”有幽門螺桿菌。幽門螺旋桿菌Hp是引起慢性胃炎和消化性潰瘍等胃腸疾病的病原菌，感染率極高，也是世界衛(wèi)生組織(WHO)認(rèn)定的胃癌致病因子。統(tǒng)計(jì)表明，在潰瘍患者中Hp的感染率為80%，健康人群為60%，60歲以上人群為70%。臨床研究證明，Hp不僅與慢性胃炎和潰瘍的發(fā)生有密切關(guān)系，而且Hp的感染還是誘發(fā)胃癌的主要因素之一，嚴(yán)重危害人類健康。目前對(duì)Hp感染的常規(guī)治療方法是抗生素三聯(lián)或四聯(lián)療法，即同時(shí)使用三種或四種抗生素治療。由于Hp深藏于胃與腸接合部的幽門處，抗生素很難達(dá)到幽門發(fā)揮作用；更嚴(yán)重的是，Hp耐藥性菌株和細(xì)胞缺陷L型的出現(xiàn)造成臨床上因Hp感染引起的胃部疾病極易復(fù)發(fā)。到目前為止，針對(duì)Hp感染還沒(méi)有理想的治療方法?，F(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道，用某種特定的抗原(如幽門螺桿菌Hp)免疫母雞，受免疫刺激，母雞發(fā)生免疫反應(yīng)，在血液中產(chǎn)生免疫球蛋白IgG;在輸卵管內(nèi)卵黃成熟期，血液中IgG可被選擇性地轉(zhuǎn)移到卵黃中，而且是卵黃中唯一的免疫球蛋白類，也即特異性抗體IgY。IgY也即卵黃免疫球蛋白或卵黃抗體。這種IgY具有很強(qiáng)的針對(duì)性，能夠特異性地殺死幽門螺桿菌Hp，對(duì)胃中幽門螺桿菌Hp感染具有很好的治療作用。特異性卵黃抗體IgY對(duì)病原體感染的防御無(wú)動(dòng)物種屬的差異，這為IgY防治人類疾病的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)?？笻p-IgY是治療幽門螺桿菌Hp的一個(gè)新方向，近年日益受到關(guān)注。目前有將這種抗Hp-IgY制成濃縮液或凍干粉，但使用不便，針對(duì)性不強(qiáng)，治療效果欠佳。有關(guān)防治人類胃部疾病的卵黃免疫球蛋白(抗HP-IgY)胃內(nèi)漂浮片制劑的文獻(xiàn)還未見(jiàn)報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的旨在提供一種治療效果好、針對(duì)性強(qiáng)、能夠防治人類胃部疾病的抗幽門螺桿菌的特異性卵黃免疫球蛋白(抗HP-IgY)胃內(nèi)漂浮片制劑，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。研究表明，位于幽門螺桿菌Hp細(xì)胞膜表面存在一種專門負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)胞質(zhì)內(nèi)尿酶產(chǎn)生的蛋白質(zhì)toel，toel起“質(zhì)子通道”作用，可控制進(jìn)入細(xì)胞的胃酸量。研究表明，治療幽門螺桿菌Hp感染的特異性IgY可破壞toel，使幽門螺桿菌Hp菌體失去酶保護(hù)膜，無(wú)法在胃中強(qiáng)酸環(huán)境下存活，從而有效殺滅幽門螺桿菌Hp。由于抗幽門螺桿菌的特異性卵黃免疫球蛋白(抗HP-IgY)只特異性地與幽門螺桿菌Hp結(jié)合并使菌體死亡，而且起作用的部位只在胃部，因而如何保持抗HP-IgY在胃部的滯留時(shí)間而不是很短時(shí)間內(nèi)被胃內(nèi)食物卷帶至腸道，以及如何保持抗HP-IgY持續(xù)的生物活性，成為影響抗HP-IgY實(shí)際應(yīng)用的關(guān)鍵所在。而將抗HP-IgY制備成胃內(nèi)漂浮片，可以使上述問(wèn)題迎刃而解。本發(fā)明即是通過(guò)將抗HP-IgY制備成胃內(nèi)漂浮片實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的。胃漂浮片(floatingtablets)，也稱懸浮片，是指口服后能保持自身密度小于胃內(nèi)容物密度而在胃液中呈漂浮狀態(tài)的制劑，主要是指根據(jù)流體動(dòng)力學(xué)平衡體系設(shè)計(jì)的漂浮制劑。這種制劑能滯留于胃中，延長(zhǎng)藥物釋放時(shí)間，改善藥物的吸收，提高藥物的生物利用度。當(dāng)片劑與胃液接觸時(shí)水化而形成凝膠，體積膨脹、比重變小而漂浮于胃液之上，在胃排空時(shí)，不至于與胃內(nèi)食物一起排至小腸。其原理是將藥物成分與親水性和疏水性高分子輔料混合，利用親水性輔料HPMC控制藥物釋放速度，疏水性輔料十八醇質(zhì)輕，根據(jù)用量調(diào)節(jié)片劑比重(使其比胃液比重輕)，延長(zhǎng)片劑在胃內(nèi)滯留時(shí)間，使藥物在胃內(nèi)釋放完全。本發(fā)明具體技術(shù)實(shí)施方案如下1、抗幽門螺桿菌的特異性卵黃免疫球蛋白(抗HP-IgY)制備采用幽門螺桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株，經(jīng)滅活、加佐劑乳化后免疫健康母雞而獲得抗幽門螺桿菌的特異性卵黃免疫球蛋白(抗HP-IgY)。1)對(duì)產(chǎn)卵母雞的免疫A、基礎(chǔ)免疫選用產(chǎn)卵母雞(健康)隔離飼養(yǎng)。進(jìn)行雞皮下多點(diǎn)注射上述疫苗，0.5ml/只。B、強(qiáng)化免疫基礎(chǔ)免疫7—15天后，進(jìn)行強(qiáng)化免疫，注射抗原0.5ml/只。C、超強(qiáng)化免疫10天后需超強(qiáng)化免疫13次，注射量1aiil/只，以保持抗體滴度。于710天后開始收集雞蛋，4°C儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?)抗幽門螺桿菌的特異性卵黃免疫球蛋白的提取根據(jù)相關(guān)參考文獻(xiàn)(劉灝等，2005年，雞卵黃抗幽門螺桿菌-IgY的特性研究，中華消化雜志，第25卷第4期；王子軾等，2008年，抗幽門螺桿菌特異卵黃抗體的制備及其理化特性檢測(cè)，揚(yáng)州大學(xué)學(xué)報(bào)，第四卷第2期)，經(jīng)膜分離或硫酸胺鹽析等常規(guī)制備工藝，提取抗幽門螺桿菌的特異性免疫球蛋白抗HP-IgY?？笻P-IgY的來(lái)源除雞外，也可以是鴨、鵝、鴿、鵪鶉、火雞、雉雞、鴕鳥、孔雀等野生或飼養(yǎng)的其它禽鳥類。2、該抗HP-IgY胃漂浮片每片由如下組份(以重量計(jì))組成抗HP-IgY5-40mg乳糖(干燥)60-70mg甘露醇20-30mg羧甲基纖維素鈉85-130mg羥丙基甲基纖維素50_65mg聚乙烯吡咯烷酮10-20mg甲基纖維素(1723cps)65-80mg單硬脂酸甘油酯20-35mg滑石粉5_15mg硬脂酸鎂I-IOmg。該抗HP-IgY胃漂浮片每片優(yōu)選如下組份(以重量計(jì))抗HP-IgY20mg乳糖(干燥)eang甘露醇24mg羧甲基纖維素鈉105mg羥丙基甲基纖維素55mg聚乙烯吡咯烷酮15mg甲基纖維素(1723cps)75.6mg單硬脂酸甘油酯29.4mg滑石粉ang硬脂酸鎂5mg。該抗HP-IgY胃漂浮片制備工藝如下按上述配比計(jì)量稱重各組分，將輔料乳糖、甘露醇、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纖維素、單硬脂酸甘油酯、滑石粉粉碎過(guò)80目篩，混合均勻，于4050°C烘干；主藥抗HP-IgY為凍干粉末，主輔料混均；加入粘合劑羧甲基纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素，制軟材；加入硬脂酸鎂，混勻，用IOmm淺凹沖模壓片；片劑硬度控制在0.53kg/cm2。服用說(shuō)明每天1-3片。本發(fā)明胃漂浮制劑設(shè)計(jì)成敗的關(guān)鍵在于其在胃中是否能達(dá)到預(yù)期的漂浮效果，能否延長(zhǎng)胃內(nèi)滯留時(shí)間，如果不能呈漂浮狀態(tài)，只相當(dāng)于一個(gè)普通的緩釋骨架片。因此材料的選擇、制備工藝等均能影響制劑的漂浮性能。輔料選擇原理首先是親水性骨架材料的選擇，胃漂浮片的骨架材料密度必須小于1，并能保持相當(dāng)長(zhǎng)的一段時(shí)間，而且盡量選擇能采用全粉末直接壓片的材料，因此在選擇親水性骨架材料的時(shí)候，應(yīng)充分考慮材料的理化性質(zhì)和用量。一般認(rèn)為粘度高的骨架材料的水化速率低于粘度低的骨架材料，然而前者的密度小，膨脹體積松大，漂浮性能好，有利于片劑在胃中滯留，制劑處方中常?；旌鲜褂貌煌扯鹊墓羌懿牧?，以控制水化作用的快慢、漂浮能力及保持制劑凝膠屏障膜狀態(tài)的時(shí)間長(zhǎng)短。目前常用的親水凝膠有羥丙基甲基纖維素(HPMC)、甲基纖維素(MC)、羥丙基纖維素(HPC)、羧甲基纖維素(CMC)、羥乙基纖維素(HEC)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、卡波姆等。其中應(yīng)用最廣泛的是HPMC，用量在50%左右，它的粘度范圍廣，能緩慢溶解于冷水中，在熱水中發(fā)生溶脹，利用高低粘度的HPMC適當(dāng)調(diào)節(jié)，可控制水化作用的快慢及保持凝膠時(shí)間的長(zhǎng)短。為了增加漂浮力，在處方中添加疏水性而相對(duì)密度小的脂肪醇類、酯類、脂肪酸類等作為助漂劑，從而使漂浮片在水化膨脹之前即開始漂浮。為了調(diào)節(jié)藥物的緩釋速率，在處方中加入適量乳糖、甘露醇、丙烯酸樹脂等。胃漂浮片的制備工藝基本與普通片相同，但要考慮其成型后應(yīng)具有漂浮性能和滯留作用，盡量采用干法制粒壓片或干粉末直接壓片，濕法制粒壓片不利于片劑應(yīng)用時(shí)的水化、滯留。另外，壓片力的大小也會(huì)對(duì)片劑的漂浮性能產(chǎn)生影響，壓力太大，使制劑的密度增大，則片劑的漂浮性受到影響。51、通過(guò)如下實(shí)驗(yàn)對(duì)本發(fā)明胃漂浮片進(jìn)行了漂浮性能測(cè)定采用介質(zhì)為人工胃液900mL，37士1°C恒溫。以該片劑在人工胃液中的起漂時(shí)間和漂浮滯留時(shí)間作為漂浮性能指標(biāo)，考察不同組分配比對(duì)漂浮性能的影響。將上述胃漂浮片放入盛有37°C人工胃液的燒杯中進(jìn)行觀察，結(jié)果片劑硬度小于Ikg的投入后不下沉，硬度為23kg時(shí)先下沉后漂浮，硬度大于3kg時(shí)則不易漂浮。片劑硬度小于或等于Ikg時(shí)，漂浮片在胃內(nèi)的滯留時(shí)間可達(dá)67小時(shí)。對(duì)照實(shí)驗(yàn)表明，同樣規(guī)格和硬度(小于Ikg)的抗HP-IgY普通片，放入人工胃液后則立即沉底。2、緩釋性能測(cè)定采用中國(guó)藥典(2000年版)轉(zhuǎn)籃法測(cè)定，轉(zhuǎn)速為lOOr/min，溶出介質(zhì)為人工胃液9001^，37士1°〇恒溫；分別測(cè)定第1、2、4、6、8小時(shí)時(shí)的釋放(溶出)濃度。經(jīng)測(cè)定，本發(fā)明漂浮片的T50(即半數(shù)釋放所需要的時(shí)間，單位為分鐘)為抗HP-IgY普通片劑的36倍，因而其具有十分明顯的緩釋作用。3、抗HP-IgY胃漂浮片活性觀察上述結(jié)果表明，依照上述方法制備的抗HP-IgY胃漂浮片既有漂浮性也具備緩釋性能。以下對(duì)其生物活性進(jìn)行測(cè)定。1)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)抗HP-IgY胃漂浮片活性測(cè)定采用介質(zhì)為人工胃液900mL，37士1°C恒溫，pHl.4。分別測(cè)定第1、2、4、6、8小時(shí)時(shí)的抗HP-IgY活性。活性檢測(cè)采用ELISA間接試驗(yàn)，操作方法參照常規(guī)ELISA間接法，所用Hp抗原、抗HP-IgY均按棋盤滴定法確定工作濃度，Hp抗原濃度為100μg/ml，被測(cè)抗HP-IgY每孔加樣100μ1。2)實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)果見(jiàn)表1-1。以對(duì)照組的活性為100，其余顯示的為不同時(shí)間段相對(duì)于對(duì)照組的比較活性。結(jié)果表明，在面對(duì)強(qiáng)酸環(huán)境(PHI.4)、胃蛋白酶等聯(lián)合作用下，抗HP-IgY漂浮片在8小時(shí)時(shí)依然保持89%的活性，表明抗HP-IgY漂浮片具有很強(qiáng)的耐酸性能和抗酶解能力，因而具有十分巨大的應(yīng)用價(jià)值。表1-1抗HP-IgY漂浮片活性測(cè)定(％)權(quán)利要求1.一種防治人胃部疾病的卵黃免疫球蛋白IgY的漂浮片，其特征在于以抗幽門螺桿菌的特異性卵黃免疫球蛋白為活性成份，將其制成胃漂浮片制劑。2.如權(quán)利要求1所述的防治人胃部疾病的卵黃免疫球蛋白IgY的漂浮片，其特征在于該抗HP-IgY胃漂浮片每片由如下組份及含量組成抗HP-IgY5-40mg乳糖(干燥)60-70mg甘露醇20-30mg羧甲基纖維素鈉85-130mg羥丙基甲基纖維素50-65mg聚乙烯吡咯烷酮10-20mg甲基纖維素(I723cps)65-80mg單硬脂酸甘油酯20-35mg滑石粉5-15mg硬脂酸鎂l-10mg。3.如權(quán)利要求1所述的防治人胃部疾病的卵黃免疫球蛋白IgY的漂浮片，其特征在于該抗HP-IgY胃漂浮片每片優(yōu)選如下組份及含量抗HP-IgY20mg乳糖(干燥)6Smg甘露醇羧甲基纖維素鈉105mg羥丙基甲基纖維素55mg聚乙烯吡咯烷酮15mg甲基纖維素(1723cps)75.6mg單硬脂酸甘油酯29.4mg滑石粉8mg硬脂酸鎂5mg。全文摘要本發(fā)明公開了一種能夠防治人類胃部疾病的生物制劑——抗幽門螺桿菌的特異性卵黃免疫球蛋白(抗HP-IgY)制劑，尤其涉及其新劑型——胃內(nèi)漂浮片劑，屬于生物醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
。該抗HP-IgY胃漂浮片以抗幽門螺桿菌的特異性卵黃免疫球蛋白(抗HP-IgY)為活性成份，并輔以疏水性藥用輔料和親水性藥用輔料。該胃漂浮片可延長(zhǎng)活性成份(抗HP-IgY)在胃內(nèi)的滯留時(shí)間，十分有利于抗HP-IgY殺滅由幽門處間歇性上浮的幽門螺桿菌Hp；抗HP-IgY胃漂浮片專一性強(qiáng)，無(wú)耐藥性，無(wú)毒副作用。此外其熱穩(wěn)定性、耐酸性、抗蛋白酶的性能都很好。材料易得，制作方法簡(jiǎn)單，便于推廣使用。文檔編號(hào)A61K39/395GK102370626SQ20101026261公開日2012年3月14日申請(qǐng)日期2010年8月26日優(yōu)先權(quán)日2010年8月26日發(fā)明者國(guó)為民,曹吉祥申請(qǐng)人:國(guó)為民,曹吉祥