專利名稱:桑葉和/或桑枝提取物的制備方法及所得產(chǎn)品和應用的制作方法
技術領域:
本發(fā)明涉及桑葉和/或桑枝提取物的制備方法及所得產(chǎn)品和應用。
背景技術:
桑葉和/或桑枝屬于桑科桑屬植物桑(Morus alba L.)。桑原產(chǎn)于中國和朝鮮, 全球約有16種,分布于北溫帶、亞洲熱帶和非洲熱帶及美洲地區(qū);我國約有11種,分布于全國大部分地區(qū),以長江流域尤其江浙一帶為多。桑樹在我國已有4000多年的栽培歷史, 我國現(xiàn)有近千萬畝桑園,是世界上最大的桑樹種植國,資源極其豐富,但傳統(tǒng)的桑葉只用于養(yǎng)蠶,用途單一,出現(xiàn)了大量桑葉過?,F(xiàn)象,因此開發(fā)桑葉功效活性成分無疑具有很好的前
旦
ο在我國桑葉用于美白已有悠久的歷史,民間有人通過飲用桑樹葉煎煮的湯劑或將新鮮桑葉搗碎敷臉來治療色斑和青春痘。研究證明,黃酮類物質是一種天然的強抗氧化劑, 能夠清除人體中超氧離子自由基、羥自由基、脂質過氧化物、過氧化氫等,桑葉黃酮類物質可以通過抑制酪氨酸酶活性可有效減少黑色素生成,將其添制于護膚品中可達到美白的效果,因此,桑葉備受美白產(chǎn)品的青睞,這些活性物質協(xié)同對皮膚有營養(yǎng)、保濕及修復作用,可以增加彈性,消除色素沉著,防止皮膚粗糙。自古以來,中醫(yī)就將桑葉作為治療消渴癥的中藥應用于臨床;日本古書《吃茶養(yǎng)生記》也有記載桑葉有改善“飲水病”(即糖尿病)的作用;近代醫(yī)家也常將桑葉配伍于中藥復方中應用于臨床。國內外研究資料證實,生物堿和多糖是桑葉中主要的降血糖活性成分; 大量研究表明桑葉的降血糖作用是通過兩個方面實現(xiàn)的一是通過生物堿DNJ對二糖類分解酶活性產(chǎn)生抑制作用,從而抑制小腸對雙糖的吸收,降低餐后血糖的高峰值;二是桑葉生物堿(Fagomine)及桑葉多糖促進β細胞分泌胰島素,而胰島素可以促進細胞對糖的利用、 肝糖原合成以及改善糖代謝,最終達到降血糖的效果。因此,提取桑葉中的降糖功效成分, 開發(fā)降糖新降糖藥和功能性食品前景十分廣闊。目前關于桑葉功效成分的研究較多,但僅是對桑葉中某一組分進行單獨研究,尤其是涉及提取工藝的研究,往往是針對一種功效成分的提取工藝,這對于工業(yè)化大生產(chǎn)無疑是很大的浪費。楊虎等(楊虎,馬燮等,桑葉中黃酮類化合物的提取工藝研究[J],應用化工,2008,37 (5) :520 52 報道桑葉中黃酮類化合物的提取工藝研究,該研究通過正交試驗確定了桑葉黃酮的最佳提取工藝回流提取時間1.5h,提取3次,乙醇濃度80%,料液質量比1 30,其提取率為0. 723%。王芳(王芳,桑葉中酪氨酸酶抑制成分的研究[D],浙江工商大學,2008)對桑葉中酪氨酸酶活性抑制成分的研究,確定桑葉中酪氨酸酶抑制劑主要是黃酮類物質,并對對桑葉中黃酮類物質的提取工藝進行了優(yōu)化,確定了超聲波輔助提取法效果最好優(yōu)化條件為70%乙醇提取溶劑、1 20料液比、200W功率超聲預處理IOmiru 70°C浸提1. 5h,桑葉黃酮提取得率為28. 8mg/g。應之(應芝,桑葉多糖提取分離、結構鑒定及其降血糖活性的初步研究[D],浙江工商大學,2009)采用響應面分析法優(yōu)化了三種不同方法(包括普通水提法、微波輔助提取法和超聲波輔助提取法)提取桑葉多糖工藝,結果表明,相比普通水提法的多糖得率,微波輔助提取多糖得率提高了 104 %,超聲波輔助提取多糖得率提高了 131% ;并通過注射四氧嘧啶建立糖尿病小鼠模型,研究了桑葉多糖降血糖活性,研究結果表明桑葉多糖具有降血糖作用。馬靜(馬靜,桑葉中1-脫氧野尻霉素(DNJ) 的提取分離及其活性的研究[D],陜西科技大學,2007)以DNJ含量為指標,通過正交試驗優(yōu)選其提取工藝的最佳條件,確定酸水提取法的最佳工藝條件物料粒度60目、pH為3的鹽酸溶液、料液比1 20、超聲功率150W,超聲溫度60°C,超聲時間25min,提取2次,DNJ得率0.083%,純度沈.3%。并以與人體接近的動物小腸(豬小腸)內的蔗糖酶為對象,對桑葉中提取出來的DNJ進行了體外活性的研究,結果表明DNJ對蔗糖酶的抑制作用類型為競爭性抑制。由上述可見現(xiàn)有技術中對桑葉和/或桑枝提取獲得提取物的方法獲得的提取物收率及產(chǎn)品純度仍不夠理想,卻只針對一種功效成分進行提取工藝,造成資源浪費。
發(fā)明內容
本發(fā)明所要解決的技術問題是克服了現(xiàn)有桑葉和/或桑枝提取物的制備方法往往能夠只能針對其中一種成分進行提取,并且獲得提取物的收率和純度仍然不夠理想的缺陷,提供了桑葉和/或桑枝提取物的制備方法及所得產(chǎn)品和應用。該方法充分利用原料資源,能夠同時有效提取多種有效成分,操作步驟簡單方便,工藝合理,獲得的產(chǎn)品的收率和純度顯著提高,產(chǎn)品用于美白或降血糖功效顯著,達到產(chǎn)值最大化的目的,具有一定的經(jīng)濟和社會效益。本發(fā)明目的之一是提供一種桑葉和/或桑枝提取物的制備方法,包括如下步驟(1)將桑葉和/或桑枝用體積百分比為40% 90%的乙醇水溶液提取,之后固液分離,得提取液A與濾渣;(2)將步驟(1)的濾渣用純水提取,之后固液分離,得提取液B ;(3)將提取液A與提取液B合并,然后除去乙醇,濃縮,靜置,之后過濾,得桑葉和/ 或桑枝粗提液;(4)將桑葉和/或桑枝粗提液上弱極性或非極性大孔吸附樹脂柱吸附,之后用純水洗脫至洗脫液無多糖為止,收集的流出液和純水洗脫液即為桑葉和/或桑枝提取物I。下面,進一步的對本發(fā)明的桑葉和/或桑枝提取物I的制備方法進行詳細介紹本發(fā)明中,所述的桑葉和/或桑枝為使用原料,桑葉與桑枝的有效成分基本相同, 因而本發(fā)明可單獨以桑葉或桑枝為原料,也可以兩者任意比例的混合物為原料;進一步地, 所述桑葉或桑枝各自經(jīng)提取后,提取物可分別利用,也可混合后利用。所述桑葉與桑枝作為原料的使用方式?jīng)]有特殊要求。其中所述的桑葉和/或桑枝大小沒有限定只要不影響提取即可,工業(yè)上一般不對桑葉和/或桑枝進行另行粉碎處理。本發(fā)明中,所述步驟(1)的提取操作可為本領域常規(guī)操作和條件。其中,步驟(1)中,所述乙醇水溶液與桑葉和/或桑枝的質量比較佳的為2 1 10 1。其中,步驟(1)中,所述提取溫度較佳的為60°C 90°C。其中,步驟(1)中,所述提取時間較佳的為Ih 池。其中,步驟⑴中,所述提取次數(shù)較佳的為1 3次;當提取次數(shù)多于1次時,合并提取液。
其中,步驟(1)中,所述固液分離為本領域常規(guī)操作,一般過濾即可。本發(fā)明中,所述步驟O)的提取操作可為本領域常規(guī)操作和條件。其中,步驟O)中,所述純水與步驟(1)的濾渣的質量比較佳的為2 1 10 1。其中,步驟O)中,所述提取溫度較佳的為60V 90°C。其中,步驟O)中,所述提取時間較佳的為Ih 池。其中,步驟( 中,所述提取次數(shù)較佳的為1 3次,較佳的1次;當提取次數(shù)多于 1次時,合并提取液。其中,步驟O)中,所述固液分離為本領域常規(guī)操作,一般過濾即可。本發(fā)明中,所述步驟(3)中除去乙醇的方式為本領域常規(guī)方式,較佳的為減壓蒸餾。所述的乙醇較佳的回收利用。本發(fā)明中,所述步驟(3)中濃縮為本領域常規(guī)操作。所述濃縮較佳的為濃縮至濃縮液中乙醇體積百分比< 5%。所述濃縮的方式較佳的為減壓濃縮。其中,所述減壓濃縮的條件較佳的為真空度-O. 08mpa -0. lmpa,溫度55°C 65°C。本發(fā)明中,所述步驟(3)中靜置的溫度較佳的為0°C 5°C,靜置的時間較佳的為 8小時以上。其中,所述的靜置為控制溫度一般在冷藏箱中進行。本發(fā)明中,所述步驟中桑葉和/或桑枝粗提液與大孔吸附樹脂柱的用量及吸附時間本領域技術人員可根據(jù)具體使用的大孔吸附樹脂合理選擇。所述步驟(4)中桑葉和 /或桑枝粗提液的吸附流速較佳的為lBV/h !3BV/h,更佳的為lBV/h。本發(fā)明中,所述步驟(4)中弱極性或非極性大孔吸附樹脂的型號較佳的為D101、 NKA-9、AB-8、ADS-7或ADS-17。其中,所述的弱極性大孔吸附樹脂以及非極性大孔吸附樹脂為本領域常規(guī)技術術語,是大孔吸附樹脂根據(jù)分子結構及極性大小進行的分類。本發(fā)明中,所述步驟⑷中純水洗脫速度較佳的為lBV/h !3BV/h,更佳的為IBV/ h。本發(fā)明中,所述步驟中純水洗脫至洗脫液無多糖的檢測方式較佳的為α -萘酚法和/或菲林試劑法。所述α-萘酚法與菲林試劑法均屬于本領域常規(guī)方法。本發(fā)明中,所述步驟中的流出液是指桑葉和/或桑枝粗提液流經(jīng)樹脂后的收集液。所述步驟(4)中的流出液和純水洗脫液,可按本領域常規(guī)方法經(jīng)除水,干燥,即得桑葉和/或桑枝提取物I成品。其中,所述除水方式較佳的為減壓濃縮。所述干燥方式較佳的為真空干燥、熱風干燥、冷凍干燥或噴霧干燥。本發(fā)明目的之二是提供一種桑葉和/或桑枝提取物的制備方法,包括如下步驟①同前述桑葉和/或桑枝提取物I的制備方法的步驟(1) (3);②將桑葉和/或桑枝粗提液上弱極性或非極性大孔吸附樹脂柱吸附,之后用純水洗脫至無多糖,然后以體積百分比為30% 90%的乙醇水溶液繼續(xù)洗脫至洗脫液無黃酮, 收集的乙醇水溶液洗脫液即為桑葉和/或桑枝提取物II。下面,進一步的對本發(fā)明的桑葉和/或桑枝提取物II的制備方法進行詳細介紹本發(fā)明中,所述步驟①的各條件以及步驟②中將桑葉和/或桑枝粗提液上弱極性或非極性大孔吸附樹脂柱吸附,之后用純水洗脫至無多糖的各步驟條件均如前所述。本發(fā)明中,所述步驟②乙醇水溶液洗脫速度較佳的為lBV/h !3BV/h。本發(fā)明中,所述步驟②中乙醇水溶液洗脫至洗脫液無黃酮的檢測方式較佳的為鹽酸-鎂粉顯色法。所述鹽酸-鎂粉比色法屬于本領域常規(guī)測定黃酮方法。
本發(fā)明中,所述步驟②中的乙醇水溶液洗脫液,可按本領域常規(guī)方法除乙醇,經(jīng)除水干燥,即得桑葉和/或桑枝提取物II干燥成品。其中,所述除乙醇的方式為本領域常規(guī)方式,較佳的為減壓蒸餾。所述乙醇較佳的可回收利用。所述除水方式較佳的為濃縮。所述干燥方式較佳的為真空干燥、熱風干燥、冷凍干燥或噴霧干燥。本發(fā)明目的之三是提供一種桑葉和/或桑枝提取物的制備方法,包括如下步驟(a)同前述桑葉和/或桑枝提取物I的制備方法的步驟(1) (3);(b)然后將桑葉和/或桑枝粗提液上弱極性或非極性大孔吸附樹脂柱吸附,之后用純水洗脫至無多糖為止,收集的純水洗脫液即為桑葉和/或桑枝提取物I ;(c)之后再以體積百分比為30% 90%的乙醇水溶液洗脫至洗脫液無黃酮,收集的乙醇水溶液洗脫液即為桑葉和/或桑枝提取物II。本發(fā)明中,所述步驟(a) (C)中涉及各步驟具體條件均如前所述。本發(fā)明目的之四是提供由本發(fā)明桑葉和/或桑枝提取物制備方法制得的桑葉和/ 或桑枝提取物I,其含有多糖類物質和生物堿DNJ,總多糖含量為10% 50%,DNJ含量為 0.5% 90%,百分比為多糖類物質或生物堿DNJ占提取物總量的質量百分比。本發(fā)明中,所述桑葉和/或桑枝提取物I對α -葡萄糖苷酶抑制率的IC5tl為 IOppm 2000ppm。本發(fā)明中,所述總多糖的測定方法為以葡萄糖為標準品,純水溶解,配制標準溶液。取適量葡萄糖標準溶液,加入6%苯酚溶液,加入濃硫酸,靜置lOmin,搖勻,在一定條件下進行顯色反應,反應結束,在波長490nm處測定吸光度值,以水按同樣顯色操作為空白對照。以吸光度值為縱坐標,葡萄糖含量為橫坐標,繪制標準曲線。準確稱取提取物,純水溶解,作為待測液,取適量待測液,按標準曲線檢測方法操作,測定其在490nm處的吸光度值, 根據(jù)標準曲線計算提取物中總多糖含量,表示為總多糖含量(以葡萄糖計)。本發(fā)明中,所述生物堿DNJ的檢測方法為采用高效液相色譜法,色譜柱 Inertsil NH2,5um,4. 6*250mm ;流動相為乙睛水(8 2);流速0. 8mL/min ;柱溫40°C ; 檢測器ELSD ;以DNJ標準品按100%,采用歸一化法計算樣品中DNJ含量。本發(fā)明目的之五是提供本發(fā)明桑葉和/或桑枝提取物制備方法制得的桑葉和/或桑枝提取物11,其含有桑葉和/或桑枝黃酮類物質,總黃酮含量為10 % 50 %,百分比為總黃酮占提取物總量的質量百分比。本發(fā)明中,所述桑葉和/或桑枝提取物II對酪氨酸酶抑制率的IC5tl為IOppm 2000ppm,對DPPH自由基清除效果的IC5tl為IOppm 2000ppm。本發(fā)明中,所述總黃酮的測定方法為以蘆丁為標準品,30%體積濃度乙醇超聲溶解,配制標準溶液;取適量標準溶液,加入5%質量濃度NaNO2水溶液,靜置5min,加入10% 質量濃度Al (NO3) 3的水溶液,靜置6min,加入濃度lmol/L的NaOH,加入30%體積濃度的乙醇,80°C水浴lOmin,同時以不加10%質量濃度Al (NO3) 3的反應體系作為空白對照,以調節(jié)分光光度計零點,待反應結束后,在510nm處測定吸光度值,以吸光度值為縱坐標,蘆丁含量為橫坐標,繪制標準曲線。準確稱取提取物,30%乙醇溶解,作為待測液,取適量待測液, 按標準曲線檢測方法操作,測定其在510nm處的吸光度值,根據(jù)標準曲線計算提取物中總黃酮含量。
本發(fā)明目的之六是提供本發(fā)明的桑葉和/或桑枝提取物制備方法制得的桑葉和/ 或桑枝提取物I在制備降血糖食品中的應用。本發(fā)明目的之七是提供本發(fā)明的桑葉和/或桑枝提取物制備方法制得的桑葉和/ 或桑枝提取物II在制備美白化妝品中的應用。本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得。在符合本領域常識的基礎上,本發(fā)明中上述的各技術特征優(yōu)選條件可以任意組合得到較佳實例。本發(fā)明的積極進步效果在于本發(fā)明桑葉和/或桑枝提取物的制備方法充分利用桑葉和/或桑枝原料資源,能夠同時有效提取多種有效成分,操作步驟簡單方便,工藝合理,獲得的產(chǎn)品的收率和純度顯著提高,產(chǎn)品用于美白或降血糖功效顯著,達到產(chǎn)值最大化的目的,具有一定的經(jīng)濟和社會效益。
具體實施例方式下面通過實施例的方式進一步說明本發(fā)明,但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實施例范圍之中。下述實施例中,除特殊說明外,百分比均為質量百分比。實施例1桑葉和/或桑枝提取物的制備方法取粉碎的桑葉400g,加入800mL體積百分比40%的乙醇水溶液,90°C保溫提取,提取1次,每次lh,合并提取液,過濾,得提取液A與濾渣;向濾渣中加入800mL純水,90°C保溫提取,提取lh,過濾,得提取液B,將提取液A 與提取液B合并,減壓蒸餾回收乙醇,濃縮至濃縮液中乙醇體積百分比< 5%以下(減壓濃縮條件為真空度-0. OSmpa -0. lmpa,濃縮溫度55°C 65°C );濃縮液置于冷藏箱中0°C 冷藏,靜置他,過濾,濾液澄清,得桑葉和/或桑枝粗提液;取桑葉和/或桑枝粗提液上ADS-7大孔吸附樹脂柱,粗提液全部通過大孔樹脂吸附柱后(吸附速度為lBV/h),用純水沖洗大孔吸附樹脂柱,洗脫速度為lBV/h,至菲林試劑法檢測洗脫液中無多糖止(即生成磚紅色沉淀,下同),收集流出液和純水洗脫液,減壓濃縮,真空干燥(干燥溫度70V,真空度-0. OSmpa -0. Impa),得桑葉和/或桑枝提取物I 成品;純水洗脫結束,繼續(xù)以體積百分比30%的乙醇水溶液洗脫(洗脫速度lBV/h)至鹽酸-鎂粉顯色法檢測洗脫液中無黃酮(即洗脫液呈紫紅色,下同),收集乙醇水溶液洗脫液,回收乙醇,真空干燥(干燥溫度70°C,真空度-0. OSmpa -0. Impa),得桑葉和/或桑枝提取物II成品。本實施例制得桑葉和/或桑枝提取物I的得率為13.3%,其中總多糖含量為 42. 59%, DNJ含量為4. 62% ;制得桑葉和/或桑枝提取物II的得率為3.5%,其中總黃酮含量為35. 62%。實施例2桑葉和/或桑枝提取物的制備方法取粉碎的桑枝400g,加入MOOmL體積百分比70%的乙醇水溶液,60°C保溫提取,提取2次,每次2. Oh,合并提取液,過濾,得提取液A與濾渣;向濾渣中加入MOOmL純水,60°C保溫提取,提取池,過濾,得提取液B,將提取液A 與提取液B合并,減壓蒸餾回收乙醇,濃縮至濃縮液中乙醇體積百分比< 5%以下(減壓濃縮條件為真空度-0. OSmpa -0. lmpa,濃縮溫度55°C 65°C );濃縮液置于冷藏箱中2V 冷藏,靜置12h,過濾,濾液澄清,得桑葉和/或桑枝粗提液;取桑葉和/或桑枝粗提液上DlOl大孔吸附樹脂柱,粗提液全部通過大孔樹脂吸附柱后(吸附速度為2BV/h),用純水沖洗大孔吸附樹脂柱,洗脫速度為2BV/h,至菲林試劑法檢測洗脫液中無多糖止,收集流出液和純水洗脫液,減壓濃縮,冷凍干燥(干燥溫度-40°C ),得桑葉和/或桑枝提取物I成品;純水洗脫結束,繼續(xù)以體積百分比70%的乙醇水溶液(2BV/h)洗脫至鹽酸-鎂粉顯色法檢測洗脫液中無黃酮,收集乙醇水溶液洗脫液,回收乙醇,冷凍干燥(干燥溫度-40°C ),得桑葉和/或桑枝提取物II成品。本實施例制得桑葉和/或桑枝提取物I的得率為13. 1%,其中總多糖含量為 40. 05%, DNJ含量為5. 67% ;桑葉和/或桑枝提取物II的得率為2. 9%,其中總黃酮含量為 37. 79%。實施例3桑葉和/或桑枝提取物的制備方法取粉碎的桑枝200g,粉碎的桑葉200g,混合,加入4000mL體積百分比90%的乙醇水溶液,70°C保溫提取,提取3次,每次池,合并提取液,過濾,得提取液A與濾渣;向濾渣中加入4000mL純水,70°C保溫提取,提取池,過濾,得提取液B,將提取液A 與提取液B合并,減壓蒸餾回收乙醇,濃縮至濃縮液中乙醇體積百分比< 5%以下(減壓濃縮條件為真空度-0. OSmpa -0. lmpa,濃縮溫度55°C 65°C );濃縮液置于冷藏箱中5°C 冷藏,靜置16h,過濾,濾液澄清,得桑葉和/或桑枝粗提液;取桑葉和/或桑枝粗提液上ADS-17大孔吸附樹脂柱,粗提液全部通過大孔樹脂吸附柱后(吸附速度為3BV/h),用純水沖洗大孔吸附樹脂柱,洗脫速度為!3BV/h,至菲林試劑法檢測洗脫液中無多糖止,收集流出液和純水洗脫液,減壓濃縮,噴霧干燥(進風溫度 200°C,出風溫度80°C ),得桑葉和/或桑枝提取物I成品;純水洗脫結束,繼續(xù)以體積百分比90%的乙醇水溶液C3BV/h)洗脫,鹽酸-鎂粉顯色法檢測洗脫液中無黃酮,收集乙醇水溶液洗脫液,回收乙醇,噴霧干燥(進風溫度200°C, 出風溫度80°C ),得桑葉和/或桑枝提取物II成品。本實施例制得桑葉和/或桑枝提取物I的得率為12.5%,其中總多糖含量為 36. 72%, DNJ含量為3. 97% ;桑葉和/或桑枝提取物II的得率為3. 1%,其中總黃酮含量為 35. 79%。實施例4桑葉和/或桑枝提取物的制備方法取粉碎的桑葉400g,加入800mL體積百分比40%的乙醇水溶液,90°C保溫提取,提取1次,每次lh,合并提取液,過濾,得提取液A與濾渣;向濾渣中加入800mL純水,90°C保溫提取,提取lh,過濾,得提取液B,將提取液A 與提取液B合并,減壓蒸餾回收乙醇,濃縮至濃縮液中乙醇體積百分比< 5%以下(減壓濃縮條件為真空度-0. OSmpa -0. lmpa,濃縮溫度55°C 65°C );濃縮液置于冷藏箱中0°C 冷藏,靜置他,過濾,濾液澄清,得桑葉和/或桑枝粗提液;取桑葉和/或桑枝粗提液上ADS-7大孔吸附樹脂柱,粗提液全部通過大孔樹脂吸附柱后(吸附速度為lBV/h),用純水沖洗大孔吸附樹脂柱,洗脫速度為lBV/h,至菲林試劑法檢測洗脫液中無多糖止(即生成磚紅色沉淀),收集流出液和純水洗脫液,減壓濃縮,真空干燥(干燥溫度70°C,真空度-0. OSmpa -0. Impa),得桑葉和/或桑枝提取物I成品。本實施例制得桑葉和/或桑枝提取物I的得率為13.3%,其中總多糖含量為 42. 59 %,DNJ 含量為 4. 62 %。實施例5桑葉和/或桑枝提取物的制備方法取粉碎的桑枝400g,加入MOOmL體積百分比70%的乙醇水溶液,60°C保溫提取, 提取2次,每次2. Oh,合并提取液,過濾,得提取液A與濾渣;向濾渣中加入MOOmL純水,60°C保溫提取,提取池,過濾,得提取液B,將提取液A 與提取液B合并,減壓蒸餾回收乙醇,濃縮至濃縮液中乙醇體積百分比< 5%以下(減壓濃縮條件為真空度-0. OSmpa -0. lmpa,濃縮溫度55°C 65°C );濃縮液置于冷藏箱中2V 冷藏,靜置12h,過濾,濾液澄清,得桑葉和/或桑枝粗提液;取桑葉和/或桑枝粗提液上DlOl大孔吸附樹脂柱,粗提液全部通過大孔樹脂吸附柱后(吸附速度為lBV/h),用純水沖洗大孔吸附樹脂柱,洗脫速度為2BV/h,至菲林試劑法檢測洗脫液中無多糖;純水洗脫結束,繼續(xù)以體積百分比70%的乙醇水溶液2BV/h洗脫至鹽酸-鎂粉法檢測洗脫液中無黃酮,收集乙醇水溶液洗脫液,回收乙醇,冷凍干燥(干燥溫度-40°C ),得桑葉和/或桑枝提取物II成品。本實施例制得桑葉和/或桑枝提取物II的得率為2.9%,其中總黃酮含量為 37. 79%。效果實施例1抑制α -葡萄糖苷酶活性功效試驗1、試驗試劑ρΗ 6. 81 磷酸鹽緩沖溶液l/15mol/L Na2HPO4 水溶液和 l/15mo VLKH2PO4 等體積混合;α -葡萄糖苷酶溶液的配制取α -葡萄糖苷酶原液用ρΗ 6. 81磷酸鹽緩沖溶液稀釋定容,配制為0. 08U/mL的酶液;PNPG底物的配制稱取0. 0301g PNPG,用ρΗ 6. 81磷酸鹽緩沖溶液溶解稀釋至 IOOmL,配制為lumol/mL的溶液;Na2CO3溶液準確稱取26. 4975g Na2CO3用純水溶解稀釋至500mL,配制為0. 5mol/ mL的溶液;樣品的配制準確稱取樣品150mg,用PH 6. 81磷酸鹽緩沖溶液稀釋定容至 50mL (母液);樣品稀釋液分別取母液用緩沖溶液稀釋至不同濃度,備用。2、試驗方法分別吸取不同濃度的樣品稀釋液0. 4mL,加入0. 4mL PNPG溶液,搖勻,冰水浴冷卻 5min,再加入0. 2mL α -葡萄糖苷酶溶液,搖勻,37°C水浴20min,加入3mL Na2CO3溶液,終止反應,搖勻,于400nm處測定吸光度值As,每個稀釋度的樣品以不加α -葡萄糖苷酶溶液的體系為對照,消除樣品顏色的影響,測定吸光度值Atl;再以不加抑制劑的體系作為對照, 測定吸光度值Α。,各管均以空白體系作為調零管,按照式(1)計算抑制率
抑制率(%) = [1 - As~Ao]xl00
AC式(1)以樣品濃度為橫坐標,抑制率為縱坐標,作對數(shù)回歸曲線,查找樣品對α-葡萄糖苷酶抑制效果的IC5。。3、試驗結果本發(fā)明實施例1 3所得的桑葉和/或桑枝提取物I對α -葡萄糖苷酶的抑制效果見表1 表1桑葉和/或桑枝提取物I的功效評價
編號α -葡萄糖苷酶活性抑制率(IC5。)實施例1956ppm實施例2603ppm實施例3426ppm效果實施例2抑制酪氨酸酶活性功效試驗1、試驗試劑ρΗ 6. 81 磷酸鹽緩沖溶液l/15mol/L Na2HPO4 水溶液和 l/15mo VLKH2PO4 等體積混合;酪氨酸酶溶液的配制取α -葡萄糖苷酶原液用ρΗ 6. 81磷酸鹽緩沖溶液稀釋定容,配制為1081. 58U/mL的酶液;L-酪氨酸底物的配制稱取35mg L-酪氨酸,用ρΗ 6.81磷酸鹽緩沖溶液溶解稀釋至IOOmL ;樣品的配制準確稱取樣品150mg,用ρΗ 6. 81磷酸鹽緩沖溶液稀釋定容至 50mL (母液);樣品稀釋液分別取母液用緩沖溶液稀釋至不同濃度,備用。2、試驗方法分別吸取不同濃度的樣品稀釋液0.2mL,加入0.3mL L-酪氨酸溶液,再加入緩沖溶液2mL,搖勻,冰水浴冷卻5min,加入0. ImL酪氨酸酶溶液,搖勻,37°C水浴40min,放置冰水浴lOmin,于470nm處測定吸光度值As,每個稀釋度的樣品以不加酪氨酸酶溶液的體系為對照,消除樣品顏色的影響,測定吸光度值Atl ;再以不加抑制劑的體系作為對照,測定吸光度值A。,各管均以空白體系作為調零管,按照式(2)計算抑制率
權利要求
1.一種桑葉和/或桑枝提取物的制備方法,其特征在于其包括如下步驟(1)將桑葉和/或桑枝用體積百分比為40% 90%的乙醇水溶液提取,之后固液分離,得提取液A與濾渣;(2)將步驟(1)的濾渣用純水提取,之后固液分離,得提取液B;(3)將提取液A與提取液B合并,然后除去乙醇,濃縮,靜置,之后過濾,得桑葉和/或桑枝粗提液;(4)將桑葉和/或桑枝粗提液上弱極性或非極性大孔吸附樹脂柱吸附,之后用純水洗脫至洗脫液無多糖為止,收集的流出液和純水洗脫液即為桑葉和/或桑枝提取物I。
2.一種桑葉和/或桑枝提取物的制備方法,其特征在于其包括如下步驟①如權利要求1所述桑葉和/或桑枝提取物的制備方法的步驟(1) (3);②將桑葉和/或桑枝粗提液上弱極性或非極性大孔吸附樹脂柱吸附,之后用純水洗脫至無多糖,然后以體積百分比為30% 90%的乙醇水溶液繼續(xù)洗脫至洗脫液無黃酮,收集的乙醇水溶液洗脫液即為桑葉和/或桑枝提取物II。
3.一種桑葉和/或桑枝提取物的制備方法,其特征在于其包括如下步驟(a)如權利要求1所述桑葉和/或桑枝提取物的制備方法步驟(1) (3);(b)然后將桑葉和/或桑枝粗提液上弱極性或非極性大孔吸附樹脂柱吸附,之后用純水洗脫至無多糖為止,收集的流出液和純水洗脫液即為桑葉和/或桑枝提取物I ;(c)之后再以體積百分比為30% 90%的乙醇水溶液洗脫至洗脫液無黃酮,收集的乙醇水溶液洗脫液即為桑葉和/或桑枝提取物II。
4.如權利要求1 3任一項所述的制備方法,其特征在于步驟(1)中,所述乙醇水溶液與桑葉和/或桑枝的質量比為2 1 10 1;和/或,步驟(1)中,所述提取溫度為60°C 90°C ;和/或,步驟⑴中,所述提取時間為Ih : ;和/或,步驟(1)中,所述提取次數(shù)為1 3次;當提取次數(shù)多于1次時,合并提取液;和/或,步驟O)中,所述純水與步驟(1)的濾渣的質量比為2 1 10 1 ;和/或,步驟O)中,所述提取溫度為60V 90°C ;和/或,步驟⑵中,所述提取時間為Ih !Bh;和/或,步驟O)中,所述提取次數(shù)為1 3次,較佳的1次;當提取次數(shù)多于1次時, 合并提取液;和/或,所述步驟(3)中除去乙醇的方式為減壓蒸餾,所述的乙醇回收利用;和/或,所述步驟(3)中濃縮為濃縮至濃縮液中乙醇體積百分比< 5% ;所述濃縮的方式為減壓濃縮;其中,所述減壓濃縮的條件為真空度-0. OSmpa -0. lmpa,溫度55°C 65 0C ;和/或,所述步驟⑶中靜置的溫度為0°C 5°C,靜置的時間為8小時以上。
5.如權利要求1或4所述的制備方法,其特征在于所述步驟(4)中桑葉和/或桑枝粗提液的吸附流速為lBV/h !3BV/h,較佳的為IBV/h;和/或,所述步驟中弱極性或非極性大孔吸附樹脂的型號為D101、NKA-9、AB-8、 ADS-7 或ADS-17;和/或,所述步驟(4)中純水洗脫速度為lBV/h !3BV/h,較佳的為lBV/h ;和/或,所述步驟中純水洗脫至洗脫液無多糖的檢測方式為α-萘酚法和/或菲林試劑法;和/或,所述步驟(4)中的流出液和純水洗脫液,經(jīng)除水,干燥,即得桑葉和/或桑枝提取物I成品;其中,所述除水方式為減壓濃縮;所述干燥方式為真空干燥、熱風干燥、冷凍干燥或噴霧干燥。
6.如權利要求2所述的制備方法,其特征在于所述步驟②桑葉和/或桑枝粗提液的吸附流速為lBV/h !3BV/h,較佳的為lBV/h ;和/或,所述步驟②弱極性或非極性大孔吸附樹脂的型號為D101、NKA-9、AB-8、ADS-7 或 ADS-17 ;和/或,所述步驟②純水洗脫速度為lBV/h !3BV/h,較佳的為lBV/h ;和/或,所述步驟②純水洗脫至洗脫液無多糖的檢測方式為α-萘酚法和/或菲林試劑法;和/或,所述步驟②乙醇水溶液洗脫速度為lBV/h !3BV/h ;和/或,所述步驟②中乙醇水溶液洗脫至洗脫液無黃酮的檢測方式為鹽酸-鎂粉顯色法;和/或,所述步驟②中的乙醇水溶液洗脫液經(jīng)除乙醇,除水干燥,即得桑葉和/或桑枝提取物II干燥成品;其中,所述除乙醇的方式為減壓蒸餾;所述乙醇回收利用;所述除水方式為濃縮;所述干燥方式為真空干燥、熱風干燥、冷凍干燥或噴霧干燥。
7.如權利要求3所述的制備方法,其特征在于所述步驟(b)桑葉和/或桑枝粗提液的吸附流速為lBV/h !3BV/h,較佳的為lBV/h ;和/或,所述步驟(b)弱極性或非極性大孔吸附樹脂的型號為D101、NKA-9、AB-8、ADS-7 或 ADS-17 ;和/或,所述步驟(b)純水洗脫速度為lBV/h !3BV/h,較佳的為lBV/h ;和/或,所述步驟(b)純水洗脫至洗脫液無多糖的檢測方式為α -萘酚法和/或菲林試劑法;和/或,所述步驟(b)中的流出液和純水洗脫液,經(jīng)除水,干燥,即得桑葉和/或桑枝提取物I成品;其中,所述除水方式為減壓濃縮;所述干燥方式為真空干燥、熱風干燥、冷凍干燥或噴霧干燥;和/或,所述步驟(c)乙醇水溶液洗脫速度為lBV/h !3BV/h ;和/或,所述步驟(c)中乙醇水溶液洗脫至洗脫液無黃酮的檢測方式為鹽酸-鎂粉顯色法;和/或,所述步驟(c)中的乙醇水溶液洗脫液經(jīng)除乙醇,除水干燥,即得桑葉和/或桑枝提取物II干燥成品;其中,所述除乙醇的方式為減壓蒸餾;所述乙醇回收利用;所述除水方式為濃縮;所述干燥方式為真空干燥、熱風干燥、冷凍干燥或噴霧干燥。
8.如權利要求1、3、4、5和7中任一項所述桑葉和/或桑枝提取物制備方法制得的桑葉和/或桑枝提取物I。
9.如權利要求8所述的桑葉和/或桑枝提取物I,其特征在于其含有多糖類物質和生物堿DNJ,總多糖含量為10 % 50 %,DNJ含量為0. 5 % 90 %,百分比為多糖類物質或生物堿DNJ占提取物總量的質量百分比。
10.如權利要求8或9所述的桑葉和/或桑枝提取物I在制備降血糖食品中的應用。
11.如權利要求2 4、6和7中任一項所述桑葉和/或桑枝提取物制備方法制得的桑葉和/或桑枝提取物II。
12.如權利要求11所述的桑葉和/或桑枝提取物II,其特征在于其含有桑葉和/或桑枝黃酮類物質,總黃酮含量為10% 50%,百分比為總黃酮占提取物總量的質量百分比。
13.如權利要求11或12所述的桑葉和/或桑枝提取物II在制備美白化妝品中的應用。
全文摘要
本發(fā)明公開桑葉和/或桑枝提取物制備方法及所得產(chǎn)品和應用。該方法包括如下步驟將桑葉和/或桑枝用40%~90%(V/V)乙醇水溶液提取,固液分離,得提取液A與濾渣;將濾渣用純水提取,得提取液B;將提取液A與B合并,除去乙醇,濃縮,靜置,過濾,得粗提液;將粗提液上大孔吸附樹脂柱吸附,之后用純水洗脫至無多糖,收集流出液和純水洗脫液即為桑葉和/或桑枝提取物I;之后再以30%~90%(V/V)乙醇水溶液洗脫至無黃酮,收集的洗脫液即為桑葉和/或桑枝提取物II。該方法充分利用原料資源,能夠同時有效提取多種有效成分,操作步驟簡單方便,工藝合理,獲得的產(chǎn)品的收率和純度顯著提高,產(chǎn)品用于美白或降血糖功效顯著,達到產(chǎn)值最大化的目的。
文檔編號A61P3/10GK102370707SQ20101026158
公開日2012年3月14日 申請日期2010年8月25日 優(yōu)先權日2010年8月25日
發(fā)明者周自華, 楊海延, 駱峰 申請人:上海輝文生物技術有限公司, 駱峰