專利名稱：雪蓮培養(yǎng)物在食品及消炎鎮(zhèn)痛藥品中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及雪蓮培養(yǎng)物及其經(jīng)提取或其它處理方法制成的再加工產(chǎn)品，在食品及 消炎鎮(zhèn)痛藥物等領(lǐng)域的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
雪蓮培養(yǎng)物是選取雪蓮愈傷組織做為繼代種子，通過細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)繼代培養(yǎng)獲得 的，中國專利ZL200510115902. 0說明了雪蓮培養(yǎng)物大規(guī)模培養(yǎng)的方法。雪蓮培養(yǎng)物含有黃 酮、多糖、綠原酸、紫丁香苷、微量元素及萜類等多種有效成份，在消除炎癥、阻擋紫外線和 抗氧化方面具有顯著作用，但現(xiàn)有的專利和文獻都沒有關(guān)于其在藥品和食品方面應(yīng)用的報 道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，將通過細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)的雪蓮培養(yǎng)物，直接或經(jīng)提取及其 它方法處理后應(yīng)用于藥品和食品中。本發(fā)明涉及的雪蓮培養(yǎng)物是選取雪蓮離體組織，經(jīng)脫分化形成的愈傷組織作為 繼代種子，給予一定條件進行大規(guī)模繼代培養(yǎng)獲得的紫紅色團塊狀顆粒，或該顆粒經(jīng)干燥 粉碎得到的粉末。其特征是雪蓮培養(yǎng)物鮮品的蛋白質(zhì)含量> 1%，總黃酮含量>0.4%， 水分< 96%，灰分< ；雪蓮培養(yǎng)物干品的蛋白質(zhì)含量> 20%，總黃酮含量> 7%，水分 (10%，灰分彡10%。雪蓮培養(yǎng)物的毒性實驗，給予最大濃度、最大容積的雪蓮培養(yǎng)物，相當(dāng)于25. 9g/ kgBff,動物無任何毒性反應(yīng)及死亡發(fā)生，證明其最大耐受量應(yīng)大于25. 9g/kgBW，屬實際無毒 物質(zhì)。雪蓮培養(yǎng)物除含有蛋白質(zhì)、水分及灰分等幾種結(jié)構(gòu)性成份外，還含有黃酮、多糖、 綠原酸、紫丁香苷、微量元素及萜類等多種功效成份。雪蓮培養(yǎng)物對消炎鎮(zhèn)痛、抗氧化、增強 免疫力、緩解體力疲勞及對輻射危害有輔助保護效果確切，可直接或經(jīng)提取及其它方法處 理后作為原料應(yīng)用于制備治療或改善關(guān)節(jié)炎及該疾病引起的各種臨床癥狀的藥物，可應(yīng)用 于制備增強免疫力、抗氧化、緩解體力疲勞及對輻射危害有輔助保護功能的保健食品、功能 性食品、養(yǎng)生酒類及食品添加劑。另外，雪蓮培養(yǎng)物還可做為果料和植物纖維類物質(zhì)應(yīng)用于 乳制品、果蔬汁、茶類及其他飲料和普通食品中。本發(fā)明的優(yōu)點在于，提供了雪蓮培養(yǎng)物的新用途。雪蓮培養(yǎng)物應(yīng)用于制備藥品中， 在消炎鎮(zhèn)痛方面具有顯著功效，制備具有增強免疫力、抗氧化、緩解體力疲勞及對輻射危害 有輔助保護等功能的保健食品、功能性食品和養(yǎng)生酒類，雪蓮培養(yǎng)物還可做為果料和植物 纖維類物質(zhì)應(yīng)用于乳制品、果蔬汁、茶類及其他飲料和普通食品中。而且，雪蓮培養(yǎng)物是純 植物性的，符合當(dāng)今社會崇尚自然的理念。另一方面，由于天山雪蓮生長環(huán)境特異，天然生 長緩慢，人工栽培困難，長期以來掠奪性的采挖已使雪蓮資源嚴(yán)重匱乏，已使得雪蓮成為瀕 危物種，野生雪蓮已經(jīng)被國家明令禁止使用，僅靠自然資源已不能滿足日益增長的需要。雪
3蓮培養(yǎng)物具有與野生雪蓮相似的成份，多種功效成份含量均高于野生雪蓮，能夠滿足市場 對雪蓮的需求，減少了對野生雪蓮的依賴，有效的保護了雪蓮的自然資源，有助于維護生態(tài) 平衡。
具體實施例方式實施例一雪蓮培養(yǎng)物安全性試驗1、雪蓮培養(yǎng)物大鼠長期毒性試驗資料連續(xù)灌胃給予大鼠雪蓮培養(yǎng)物1. 75g/kgBW、3. 5g/kgBW和7g/kgBW三個月，恢復(fù)期 半個月。雄性與雌性大鼠的體重與空白對照組比較，沒有顯著的差異，雪蓮培養(yǎng)物各劑量組 的雌雄性大鼠在給藥三個月及恢復(fù)期內(nèi)飲水量、攝食量均未見明顯變化。血液學(xué)指標(biāo)顯示，與空白對照組比較，雪蓮培養(yǎng)物三個劑量組在給藥3個月及恢 復(fù)期半個月，其紅細(xì)胞總數(shù)、血紅蛋白、白細(xì)胞總數(shù)、血小板數(shù)、中性粒細(xì)胞、淋巴紅胞及凝 血時間均無顯著性變化。血液生化學(xué)指標(biāo)表明，雪蓮培養(yǎng)物三個劑量組雄性大鼠在給藥3個月及恢復(fù)期半 個月，GPT、GOT、AKP、TP、ALB、T-BIL、BUN、Crea、GLU及CHO均無顯著性變化。雌性大鼠以 上各項指標(biāo)在給藥3個月也均沒有明顯變化；在恢復(fù)期，給藥組T-BIL的水平均明顯降低， 其它各項指標(biāo)與對照組比較，無顯著性變化。2、雪蓮培養(yǎng)物的動物急性毒性資料小鼠一次性灌胃給予最大濃度、最大容積的新疆雪蓮組織細(xì)胞培養(yǎng)物后，動物除 靜臥外，未見任何小鼠毒性反應(yīng)及死亡發(fā)生。靜臥小鼠在給藥后3小時左右基本恢復(fù)正常 自主活動，且在觀察的14天內(nèi)生長情況良好。實驗結(jié)果表明，一次性灌胃新疆雪蓮組織細(xì) 胞培養(yǎng)物后，小鼠最大耐受量相當(dāng)于25. 90g/kgBff生藥量。實施例二 雪蓮培養(yǎng)物在乳制品中的應(yīng)用將雪蓮培養(yǎng)物鮮品或干燥后做為果料按1-15%添加，再加入適當(dāng)?shù)氖称诽砑觿┘?其它輔料，經(jīng)常規(guī)乳制品生產(chǎn)工藝制成牛奶或酸牛奶。實施例三雪蓮培養(yǎng)物在飲料中的應(yīng)用將雪蓮培養(yǎng)物直接或打碎后按0.01-5%的比例添加，并加入檸檬酸、檸檬酸鈉、增 稠劑、食用香精、煙酰胺及白砂糖與水調(diào)配制成液體飲料。再經(jīng)滅菌、灌封、包裝后成為成品 飲料。實施例四雪蓮培養(yǎng)物在果醬中的應(yīng)用將雪蓮培養(yǎng)鮮品打碎后，放入用白糖煉制的糖漿中慢火蒸煮并充分?jǐn)嚢?，至制?粘稠狀的雪蓮培養(yǎng)物糖漿，最后加入果膠一起蒸煮并充分?jǐn)嚢瑁叵伦匀簧嶂瞥裳┥?培養(yǎng)物果醬。其中，各成份百分比為雪蓮培養(yǎng)物5-50%、糖20-30%、果膠5-20%。還可將 其它果料復(fù)配其中制成復(fù)合果醬。實施例五雪蓮培養(yǎng)物在糖果中的應(yīng)用將雪蓮培養(yǎng)物粉末與白砂糖分別按0. 01-0. 5%和99. 99-99. 5%的質(zhì)量百分比， 先將白砂糖進行溶糖、過濾、熬煮、冷卻，再與雪蓮培養(yǎng)物粉末進行調(diào)和、成型，然后揀選、包 裝，即得雪蓮培養(yǎng)物糖果。實施例六雪蓮培養(yǎng)物在烘焙食品中的應(yīng)用
按0. 1-5%的添加量，將雪蓮培養(yǎng)物與牛奶、雞蛋、白砂糖、面粉及其它輔料經(jīng)粉碎 后攪拌均勻制成坯料，通過烘焙、揀選、包裝，即得該產(chǎn)品成品。實施例七雪蓮培養(yǎng)物在酒類中的應(yīng)用按0. 1-10%的添加量，將雪蓮培養(yǎng)物單方或復(fù)配其它藥材與提前制成的白酒混 合，即得具有養(yǎng)生功效的雪蓮培養(yǎng)物養(yǎng)生酒。實施例八細(xì)胞培養(yǎng)物對大鼠佐劑關(guān)節(jié)炎的治療作用取體重160_200g的大鼠，雌雄各半。用足容積測定儀分別測定大鼠兩側(cè)后肢足容 積，右后足跖皮下注射弗氏完全佐劑(含滅活結(jié)核桿菌0.5毫克)0. 1ml，注射后第15天測 定動物體重，兩側(cè)后肢足容積，以左側(cè)(非致炎足)后肢腫脹率和體重分組，分為六組，每 組10只。各組分別灌胃給予同容積0. 5%羧甲基纖維素鈉、雪蓮培養(yǎng)物35mg/kg、70mg/kg、 140mg/kg(相當(dāng)于雪蓮總黃酮量)、旭痹顆粒2g/kg、吲哚美辛10mg/kg，給藥容積均為20ml/ kg。每日一次，給予七天。分別在給藥后的第2、5、8天測定每只動物的體重，兩側(cè)后肢足容 積，計算出左右足跖腫脹率。第9天測定大鼠體重后，處死動物，測定大鼠脾臟、胸腺、腎上 腺及髂淋巴結(jié)的重量，算出體重與臟器的相對重量。結(jié)果表明，治療性給予雪蓮培養(yǎng)物后，第5、8天新疆雪蓮組織細(xì)胞培養(yǎng)物對致炎 足足跖腫脹可見一定的抑制作用。(表1)。表1雪蓮培養(yǎng)物對佐劑關(guān)節(jié)炎大鼠致炎足足跖腫脹的影響
m Hii劑量樣本數(shù)腫脹率(%) (X士SD)E&SU(mg/'kg/day)(只)1 (天)5 (天)8 (天)
溶媒組-1054. 07 士32. 1963. 44±29.6361. 14±34. 59雪蓮培養(yǎng)物351051. 74±39. 8841. 69±26. 2767. 89±28. 01雪蓮培養(yǎng)物701062. 97±30. 7052. 50±25. 4955. 26±23.63雪蓮培養(yǎng)物1401052. 07 土20. 0959. 05±33. 5342. 31 土 24. 62旭痹顆粒2g/kg1050.92±21. 5851. 51 土28. 9361.55±19. 73吲哚美辛4.51058. 69±30. 3139. 93±20. 84*31.95±21.84*
注與、i容媒組比較，*P < 0. 05，Student，s_t檢驗
70mg/kg、140mg/kg 的雪蓮培養(yǎng)物。給藥后第5、8天對非致炎足因遲發(fā)型超敏反應(yīng)引起的腫脹有顯著的抑制作用(表2)。
表2雪蓮培養(yǎng)物對佐劑關(guān)節(jié)炎大鼠非致炎足足跖腫脹的影響
日杲Il劑量樣本數(shù)腫脹率(%) (X士SD) Η 力1J(mg/kg/day)(只)1 (天)5 (天)8 (天)溶媒組-1023. 01±10. 2024. 28±8. 1922. 51±10. 92雪蓮培養(yǎng)物351022. 88±17. 7315. 95 ±1.7. 5517. 04±10. 69雪蓮培養(yǎng)物701019. 24±7. 998. 65±11. 15**11.47±8. 67*雪蓮培養(yǎng)物1401020. 09±12. 047. 46±8. 81**9. 76±9· 18*旭痹顆粒2g/kg1022. 60±10. 9720. 23 士 17. 1719. 59±11. 16吲哚美辛4. 51021. 75±7. 891]. 90±8. 99林10.44±8. 27*
5
注與溶媒組比較，*p< 0. 05，**p < 0. 01，Student，s_t 檢驗實施例九雪蓮培養(yǎng)物對DNCB致小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響取小鼠60只，雌雄各半，體重18-22克，隨機分為六組，每組10只。熔媒組灌服同 容積的0.5%羧甲基纖維素鈉，雪蓮培養(yǎng)物(Saul)組分別灌服75、150、300mg/kg的雪蓮培 養(yǎng)物；厄痹顆粒組灌服4g/kg的旭痹顆粒；噴哚美辛組灌服10mg/kg的吲哚美辛，容積均為 20ml/kg。連續(xù)給藥7天，第一天用8 % Na2S于小鼠腹部脫毛，并將1 %的DNCB丙酮溶液 50ul涂于小鼠腹部脫毛區(qū)，第7天給藥后lh，于小鼠右耳涂1 % DNCB丙酮溶液IOul進行攻 擊，36h后，處死小鼠，剪下左右耳稱重，計算耳腫脹率。耳腫脹率(％ )=(左耳重_右耳重)/左耳重X 100 %結(jié)果表明，三個劑量的雪蓮培養(yǎng)物對遲發(fā)型超敏反應(yīng)均有一定程度的抑制作用， 300mg/kg的雪蓮培養(yǎng)物對小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)的抑制作用具有統(tǒng)計學(xué)意義(表3)。表3雪蓮培養(yǎng)物(Saul)對DNCB小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響 注與溶媒組比較，*P < 0. 05，**p < 0· 01，***p < 0. 001，Student，st_ 檢驗。實施例十雪蓮培養(yǎng)物的抗氧化功效根據(jù)雪蓮培養(yǎng)物的體外抗氧化實驗，從細(xì)胞中谷胱甘肽過氧化物酶、谷胱甘肽、丙 二醛、超氧化物歧化酶及清除自由基等5個方面，綜合評價雪蓮培養(yǎng)物的抗氧化活性。結(jié)果 證明，雪蓮培養(yǎng)物對細(xì)胞無損傷作用。在0. 01 %劑量組，雪蓮培養(yǎng)物能夠顯著提高谷胱甘肽 過氧化物酶和超氧化物歧化酶活性，降低細(xì)胞中丙二醛的含量，清除DPPH自由基。其中超 氧化物歧化酶活性及體外清除DPPH自由基實驗中，雪蓮培養(yǎng)物在0. 01%濃度下的抗氧化 效果與維生素C相當(dāng)，谷胱甘肽過氧化物酶活性略優(yōu)于維生素C(表4)。表4雪蓮培養(yǎng)物對細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽過氧化物酶丙二醛和超氧化物歧化酶的影響 實施例十一雪蓮培養(yǎng)物的緩解體力疲勞作用根據(jù)2003版《保健食品功能學(xué)評價程序與檢驗方法規(guī)范》第二部分功能學(xué)評價檢 驗方法十二，測定雪蓮培養(yǎng)物的緩解體力疲勞作用。經(jīng)口給予小鼠普瑞康牌雪神膠囊40、400、1200mg/kg Bff d，連續(xù)灌胃30天。
61200mg/kg Bff d劑量組能延長小鼠負(fù)重游泳時間，減少小鼠游泳時血清尿素的產(chǎn)生，減少 游泳時血乳酸的產(chǎn)生，400mg/kg Bff d劑量組能減少小鼠游泳時血清尿素的產(chǎn)生，各劑量組 對肝糖原儲備均未見影響。由此判定，本實驗劑量范圍內(nèi)可見雪蓮培養(yǎng)物具有緩解體力疲勞功能。實施例十二 雪蓮培養(yǎng)物對輻射危害的輔助保護作用根據(jù)2003版《保健食品功能學(xué)評價程序與檢驗方法規(guī)范》第二部分功能學(xué)評價檢 驗方法十四，測定雪蓮培養(yǎng)物對輻射危害的輔助保護作用。經(jīng)口給予小鼠不同劑量普瑞康牌雪神膠囊30天后，對各組小鼠以60Co- γ射線 一次性照射。與Og/kgBW組比較，在1. 2g/kgBff組能提高輻射后第3天輻射損害模型小 鼠外周血白細(xì)胞數(shù)(P <0.01)、提高輻照后第14天輻射損害模型小鼠外周血白細(xì)胞數(shù)(P < 0. 05)，降低輻射損害模型小鼠骨髓細(xì)胞微核率(P < 0. 05)、提高輻射損害模型小鼠血中 超氧化物歧化酶活性(P < 0. 05)。受試物對小鼠體重增長無不良影響。由此判定，本實驗劑量范圍內(nèi)雪蓮培養(yǎng)物對輻射危害有助保護功能的動物實驗結(jié) 果陽性。
權(quán)利要求
雪蓮培養(yǎng)物在藥品及食品中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雪蓮培養(yǎng)物經(jīng)過提取或其它處理方法制成的雪蓮培養(yǎng)物提 取液、提取粉、浸膏及其它形式的再加工產(chǎn)品，也可用于制備藥品及食品。
3.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述的雪蓮培養(yǎng)物在藥品及食品中的應(yīng)用，其特征在于雪蓮 培養(yǎng)物及其再加工產(chǎn)品在乳制品中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述的雪蓮培養(yǎng)物在藥品及食品中的應(yīng)用，其特征在于雪蓮 培養(yǎng)物及其再加工產(chǎn)品在飲料中的應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述的雪蓮培養(yǎng)物在藥品及食品中的應(yīng)用，其特征在于雪蓮 培養(yǎng)物及其再加工產(chǎn)品在果醬中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述的雪蓮培養(yǎng)物在藥品及食品中的應(yīng)用，其特征在于雪蓮 培養(yǎng)物及其再加工產(chǎn)品在糖果及烘焙等休閑食品中的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述的雪蓮培養(yǎng)物在藥品及食品中的應(yīng)用，其特征在于雪蓮 培養(yǎng)物及其再加工產(chǎn)品在酒類制品中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述的雪蓮培養(yǎng)物在藥品及食品中的應(yīng)用，其特征在于雪蓮 培養(yǎng)物用于制備治療或改善關(guān)節(jié)炎及該疾病引起的各種臨床癥狀的藥物的用途。
9.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述的雪蓮培養(yǎng)物在藥品及食品中的應(yīng)用，其特征在于雪蓮 培養(yǎng)物用于制備增強免疫力、抗氧化、緩解體力疲勞及對輻射危害有輔助保護功能的食品 和食品添加劑。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種由細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)獲得的雪蓮培養(yǎng)物為原料，用于制備食品及消炎鎮(zhèn)痛藥物的應(yīng)用。本發(fā)明涉及的雪蓮培養(yǎng)物及其經(jīng)提取或其它處理方法制成的再加工產(chǎn)品，可用于制備治療或改善關(guān)節(jié)炎及該疾病引起的各種臨床癥狀的藥物，也可用于制備增強免疫力、抗氧化、緩解體力疲勞及對輻射危害有輔助保護功能的食品和食品添加劑，以及用于制備乳制品、酒類、飲料、果醬、糖果及烘焙食品。
文檔編號A61P19/02GK101904887SQ20101022485
公開日2010年12月8日 申請日期2010年7月13日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月13日
發(fā)明者劉漢石 申請人:大連普瑞康生物技術(shù)有限公司