專利名稱：促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素腸溶膠囊的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素，尤其是促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素的腸溶膠囊，及其制備工藝 和用途。
背景技術(shù)：
重型病毒性肝炎病理學(xué)認(rèn)為，重型肝炎指在急劇而廣泛的肝細(xì)胞變性、壞死及高 度肝功能損害的基礎(chǔ)上，出現(xiàn)以肝性腦病為主要表現(xiàn)的肝炎。目前認(rèn)為病毒蛋白及其變異、 宿主CTL反應(yīng)、巨噬細(xì)胞、多種細(xì)胞因子、肝細(xì)胞凋亡、凝血系統(tǒng)因素是引起重型肝炎的分 子機(jī)制。肝炎病毒在一定條件下引起宿主免疫反應(yīng)異常，使肝細(xì)胞大量壞死和嚴(yán)重變性，從 而導(dǎo)致肝細(xì)胞功能的衰竭，由此引起的內(nèi)毒素血癥，進(jìn)一步加重肝細(xì)胞損害，使肝衰竭更為 嚴(yán)重，成為后階段的重要致病因素。促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素(HGF)治療理論認(rèn)為促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素具有特異刺激肝細(xì)胞合成 增加，有絲分裂加速，使肝細(xì)胞再生能力增強(qiáng)，肝臟功能和臨床癥狀得到恢復(fù)和改善，以及 激發(fā)機(jī)體的免疫狀態(tài)等作用。其具體機(jī)理包括1.刺激肝細(xì)胞的合成，促進(jìn)肝細(xì)胞的再生； 2.抑制腫瘤壞死因子的活性，促進(jìn)各種肝炎，尤其是重癥肝炎和慢性活動(dòng)性肝炎患者的康 復(fù)；3.增強(qiáng)枯否氏細(xì)胞功能，從而增強(qiáng)人的免疫力；4.對(duì)肝細(xì)胞膜起保護(hù)作用，使肝損傷得 到有效恢復(fù)；5.具有抗纖維化作用，抑制肝臟纖維化。臨床實(shí)驗(yàn)也證明在一般治療基礎(chǔ)上 采用促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素輔助治療具有明顯療效。目前市場(chǎng)上促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素常用的劑型為注射劑和顆粒劑，但這兩種劑型分別存 在各自的缺點(diǎn)注射劑在臨床上應(yīng)用多年，具有良好的治療效果，但其缺點(diǎn)也是顯而易見1.靜 脈注射使用注射器衛(wèi)生要求高時(shí)，不良反應(yīng)時(shí)有發(fā)生，且需要在醫(yī)生監(jiān)護(hù)下使用，對(duì)醫(yī)療條 件落后的地區(qū)應(yīng)用困難；2.每天的靜脈注射給患者帶來(lái)了無(wú)盡的痛苦以及生活的不便，在 我國(guó)，肝病人數(shù)眾多，相當(dāng)一部分在家接受長(zhǎng)期治療，注射劑型使用不便，對(duì)于不同類型的 病人已有一定的局限性；3.價(jià)格較高(約2268 3427元/療程，4 6周一療程計(jì))。顆粒劑使用安全，方便。其缺點(diǎn)在于1.須溫水溶化后沖服，過(guò)熱會(huì)影響其中的多 肽活性，影響藥效；2.顆粒劑是以溶液形態(tài)通過(guò)胃部，活性物質(zhì)易被胃液中胃酸、胃酶酶解 而降低活性，藥理作用由此受到影響，大大削弱治療效果；3.由于以上原因，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道， 顆粒劑口服后生物利用度僅4. 8%，使其用藥劑量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于注射劑，療程周期延長(zhǎng)，相對(duì)價(jià) 格大大提高；4.病人服用時(shí)難以忍受藥物溶解產(chǎn)生的腥味，極易引發(fā)惡心、嘔吐現(xiàn)象，因此 顆粒劑的使用受到很大的限制，盡管該劑型上市多年卻始終未能打開市場(chǎng)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對(duì)以上劑型的不足，提出一種促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素腸溶膠囊，其活性高，副作 用小。同時(shí)還提出了該腸溶膠囊的制備工藝，以及其用途。為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案一種促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素腸溶膠囊，由促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素和藥學(xué)上可接受的腸溶膠囊輔料組成。由于促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素在胃內(nèi)極其不穩(wěn)定，生物活性會(huì)降低至原來(lái)的三分之一左 右，而在小腸中生物活性基本保持不變。本發(fā)明促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素腸溶膠囊，經(jīng)口服后，通常 須進(jìn)入小腸后才得以崩解，其中的藥效成分經(jīng)十二指腸吸收，直接進(jìn)入門靜脈，發(fā)揮全身藥 效。這就避免了胃酸、胃酶對(duì)活性成分的破壞，也減少了應(yīng)用注射劑帶來(lái)的諸多不便和安全 急 ^^ ο本發(fā)明的另一目的，還提供了上述腸溶膠囊的制備工藝，包括以下步驟a、取促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素溶液，濃度為15 30mg/ml ；b、將步驟a的水溶液通過(guò)凝膠色譜層析柱，收集活性刺激指數(shù)大于4. 5峰的洗脫 液；C、將步驟b收集的洗脫液濃縮、冷凍干燥；d、將步驟c制得的促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素干粉，與藥學(xué)上可接受的腸溶膠囊輔料，制成 促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素腸溶膠囊。所述凝膠色譜層析柱層析過(guò)程為i、裝柱將凝膠在純水中浸泡24小時(shí)以上，水洗濾干后，將溶脹的凝膠與水按體 積比3 1混合，經(jīng)超聲波脫氣后濕態(tài)裝柱；裝柱要求無(wú)氣泡、無(wú)裂紋、填料分布均勻；柱的 徑高比為1 5 20，用3 5個(gè)柱體積純水平衡層析柱；ii、系統(tǒng)連接將裝好的層析柱下端出液口與紫外檢測(cè)器進(jìn)口連接；層析柱上端 進(jìn)液口與泵系統(tǒng)連接；iii、加樣取促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素溶液小心加于該層析柱的上表面，上樣體積為柱床 體積的2% 25% ；打開柱下端出口，使促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素溶液進(jìn)入凝膠內(nèi)；iv、洗脫在層析柱的上表面上加入水，保持液位高度為3 4cm，調(diào)節(jié)洗脫速度為 30ml/min ；ν、收集在214nm紫外檢測(cè)器下在線監(jiān)測(cè)，分段收集活性刺激指數(shù)大于4. 5峰的洗 脫液。 本發(fā)明最后還提供了上述腸溶膠囊在制備治療肝臟疾病的藥物中的用途。
由于促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素溶液含有多種多肽、核苷酸、氨基酸等物質(zhì)，為確保藥品的安 全性，本發(fā)明采用凝膠色譜層析法提取純度較高的促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素。凝膠阻滯層析方法利 用凝膠層析介質(zhì)的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，根據(jù)分子大小進(jìn)行分離。其基本原理是含有不同尺寸大小的 分子進(jìn)入層析柱后，較大的分子不能通過(guò)孔道擴(kuò)散進(jìn)入凝膠珠體內(nèi)部，而與流動(dòng)相一起流 出層析柱；較小的分子可通過(guò)部分孔道，更小的分子可通過(guò)任意孔道擴(kuò)散進(jìn)入珠體內(nèi)部。這 種顆粒內(nèi)部擴(kuò)散的結(jié)果，使小分子向柱下的移動(dòng)減慢，從而樣品根據(jù)分子大小的不同依次 按一定順序從柱內(nèi)流出，一般是大分子先流出來(lái)，小分子后流出來(lái)，從而達(dá)到分離的目的。 經(jīng)過(guò)凝膠色譜層析法處理前后的產(chǎn)品，通過(guò)紫外檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，處理后的產(chǎn)品中雜 質(zhì)減少，如附圖中的圖1(處理前產(chǎn)品檢測(cè))和圖2(處理后的產(chǎn)品檢測(cè))所示，雜質(zhì)為圖1 中峰1和峰8，圖2中明顯不存在圖1中的雜質(zhì)峰，因此產(chǎn)品純度提高；同時(shí)對(duì)得到的產(chǎn)品 進(jìn)行活性檢測(cè)，檢測(cè)方法為促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素活性測(cè)定法(MTT法)(見附件)，測(cè)定結(jié)果如表 2所示，處理后的產(chǎn)品的活性明顯較市售的促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素高，提高了 70%左右。


圖1是常規(guī)促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素溶液的紫外光譜圖；圖2是經(jīng)過(guò)凝膠色譜層析柱處理后的促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素溶液的紫外光普?qǐng)D。
具體實(shí)施例方式一種促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素腸溶膠囊，由促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素和藥學(xué)上可接受的腸溶膠囊輔 料組成。本發(fā)明促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素腸溶膠囊，經(jīng)口服后，由于腸溶膠囊一般只會(huì)在進(jìn)入到小 腸后才崩解，其中的藥效成分經(jīng)十二指腸吸收，直接進(jìn)入門靜脈，發(fā)揮全身藥效。這就避免 了胃酸、胃酶對(duì)活性成分的破壞，也減少了應(yīng)用注射劑帶來(lái)的諸多不便和安全隱患。本發(fā)明促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素腸溶膠囊的藥代動(dòng)力學(xué)特征為本品口服后，集中分 布于全身多種組織器官，以肝和胃含量最高，促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素在體內(nèi)分布容積較小，為 1. 4士0. 33L，其在人體內(nèi)前40min衰減較快，基本快慢兩時(shí)相，a -半衰期為19. 7士2. 9min,
半衰期為260士57min，由此提示藥物排泄迅速，在體內(nèi)不易形成積蓄，不會(huì)在體內(nèi)進(jìn)行 再分布。上述促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素腸溶膠囊的制備工藝，包括以下步驟a、取促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素溶液，濃度為15 30mg/ml ；b、將步驟a的水溶液通過(guò)凝膠色譜層析柱，收集活性刺激指數(shù)大于4. 5峰的洗脫 液；c、將步驟b收集的洗脫液濃縮、冷凍干燥；d、將步驟c制得的促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素干粉，與藥學(xué)上可接受的腸溶膠囊輔料，制成 促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素腸溶膠囊。優(yōu)選的，步驟b中凝膠色譜層析柱裝填的為聚丙烯酰胺凝膠、交聯(lián)葡聚糖凝膠、瓊 脂糖凝膠或聚苯乙烯凝膠。1、聚丙烯酰胺凝膠人工合成凝膠，是以丙烯酰胺為單位，由甲叉雙丙烯酰胺交聯(lián) 成的，經(jīng)干燥粉碎或加工成形制成粒狀，控制交聯(lián)劑的用量可制成各種型號(hào)的凝膠。交聯(lián)劑 越多，孔隙越??；2、交聯(lián)葡聚糖凝膠S印hadex G交聯(lián)葡聚糖；S印hadex LH-20，是_S印hadex G-25 的羧丙基衍生物；3、瓊脂糖凝膠依靠糖鏈之間的次級(jí)鏈如氫鍵來(lái)維持網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的疏密 依靠瓊脂糖的濃度；4、聚苯乙烯凝膠具有大網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)，可用于分離分子量1600到40，000，000的生物 大分子，適用于有機(jī)多聚物，分子量測(cè)定和脂溶性天然物的分級(jí)，凝膠機(jī)械強(qiáng)度好。上述步驟d具體可為①、將干燥后的促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素制品用粉碎機(jī)進(jìn)行機(jī)械粉碎，制成促肝細(xì)胞生長(zhǎng) 素干粉。②、添加稀釋劑根據(jù)促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素干粉的多肽含量計(jì)算稀釋劑(淀粉)用 量，使稀釋后的促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素干粉的多肽含量控制在促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素干粉重量的15 25%。將添加稀釋劑后的促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素干粉進(jìn)行均勻混合。
③、灌裝將添加稀釋劑、混合均勻的促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素干粉灌裝至空心膠囊中，最 終完成促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素腸溶膠囊的制備。下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述，本部分的描述僅是示范性和解釋 性，不應(yīng)對(duì)本發(fā)明的保護(hù)范圍有任何的限制作用。上述制備工藝得到的促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素腸溶膠囊，其中存在凝膠色譜層析柱的不 同，對(duì)得到的產(chǎn)品按照MTT法檢測(cè)，結(jié)果如下表1 :表 1 采用上述方法得到的促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素腸溶膠囊，高分子量物質(zhì)被控制在0. 5%以 內(nèi)。用此工藝制備的促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素腸溶膠囊，其得率為80%以上，活性刺激指數(shù)穩(wěn)定在 7.0左右，高出國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)4.0約70%。將本發(fā)明制成的促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素腸溶膠囊與常規(guī)的促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素的其它劑型， 如注射劑和顆粒劑，進(jìn)行活性比較，如下表2 表2 促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素腸溶膠囊，口服后不會(huì)受胃酸、酶的破壞(試驗(yàn)證明經(jīng)胰酶處理2 小時(shí)仍不失活性)，本品在腸道中集中釋放，能夠在腸道中保持穩(wěn)定，使之達(dá)到局部高濃度， 在小腸中保持穩(wěn)定的活性成分易被高效吸收，從而直接進(jìn)入淋巴系統(tǒng)和血液循環(huán)，顯著提 高了本品生物利用度和藥效。 本發(fā)明的腸溶膠囊劑生物活性普遍比上市促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素注射劑高40 %，且更加穩(wěn)定。本發(fā)明促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素中高分子量物質(zhì)非常穩(wěn)定(低于0. 5% )，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定不 得過(guò)5. 0%，為產(chǎn)品安全性提供了可靠保障。促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素腸溶膠囊性價(jià)比高，解決了注射劑價(jià)格高昂的問(wèn)題。按生物利用 度計(jì)算，在同等藥效的情況下本品的價(jià)格只是注射劑型的三分之一。促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素腸溶膠囊的藥效試驗(yàn)例1、病例來(lái)源上海市公共衛(wèi)生臨床中心門診；明確診斷的慢性乙型肝炎及乙肝肝硬化病人。2、診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)《病毒性肝炎防治方案》(2000年)3、納入標(biāo)準(zhǔn)(1)、ALT < 10倍正常值上限；(2)、TBIL < 3倍正常值上限；(3)、凝血酶原活動(dòng)度彡60%。4、治療方案試驗(yàn)組常規(guī)保肝治療+本發(fā)明實(shí)施例2促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素腸溶膠囊50mg/粒；每天 2粒，連續(xù)服用12周；對(duì)照組常規(guī)保肝治療50mg/粒；其中，常規(guī)保肝治療為a、護(hù)肝寧片(上海玉安藥業(yè))，每天4-5片；和b、茴三硫片25mg/片，每天1片；兩組治療期間不再加用其他降酶藥物，相關(guān)基礎(chǔ)治療和抗病毒治療不限。表3
7 5、觀察指標(biāo)①、分別于治療0、4、8、12周時(shí)檢測(cè)肝功能的下述指標(biāo)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)總膽紅素(TBIL)白蛋白(ALB)②、不良反應(yīng)觀察臨床各種不良反應(yīng)如胃腸道反應(yīng)，過(guò)敏等；監(jiān)測(cè)腎功能、血常規(guī)、血糖等指標(biāo)。6、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理統(tǒng)計(jì)方法計(jì)量資料的配對(duì)t檢驗(yàn)7、檢測(cè)結(jié)果分別如下各表7. 1治療前后肝功能各項(xiàng)指標(biāo)變化如下表4 表 4 注* 與同組治療前比較P < 0. 05 ；Δ 治療后試驗(yàn)組與對(duì)照組比較P < 0. 05。從上表可以看出1、兩組患者經(jīng)過(guò)治療12周后，肝功能指標(biāo)ALT、AST、TBIL及ALB均較治療前明顯 改善(P < 0. 05)。2、血清ALT、AST活性及TBIL 治療8周時(shí)，試驗(yàn)組的已基本恢復(fù)正常，而對(duì)照組的于治療后12周時(shí)基本恢復(fù)正常。3、血清ALT、AST、ALB 試驗(yàn)組血清ALT、AST降低幅度及血清ALB含量升高幅度均 比對(duì)照組更為明顯(P<0. 05)。因此，兩組比較ALT、AST、TBIL的結(jié)果a、試驗(yàn)組及對(duì)照組患者肝功能指標(biāo)兩組均有改善b、試驗(yàn)組肝功能改善情況優(yōu)于對(duì)照組c、試驗(yàn)組ALT、AST、TBIL指標(biāo)降低或復(fù)常早于對(duì)照組提示促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素腸溶膠囊具有降低血清ALT、AST活性及TBIL含量，以及縮短 病程；加用促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素腸溶膠囊組，肝功能復(fù)常時(shí)間更短。再根據(jù)兩組比較白蛋白ALB的結(jié)果對(duì)照組治療前后ALB無(wú)明顯改善；試驗(yàn)組治 療8，12周時(shí)ALB較治療前顯著提高，提示促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素腸溶膠囊具有提高患者白蛋白功 效。7. 2兩組治療過(guò)程中均未見明顯惡心嘔吐等消化道癥狀、過(guò)敏等不良反應(yīng)。7. 3兩組治療前后腎功能、血糖比較(X士S) 注試驗(yàn)組及對(duì)照組在治療前及治療中各時(shí)間點(diǎn)血糖差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P > 0. 05)。綜上所述，本發(fā)明的促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素腸溶膠囊，具有促進(jìn)肝細(xì)胞修復(fù)和再生，顯著 提高白蛋白的功能，其應(yīng)用優(yōu)勢(shì)如下療效確切——護(hù)肝保肝作用明顯；藥品特點(diǎn)——腸道吸收綜合療效不亞于注射劑；用藥安全——臨床研究中未見不良反應(yīng)。附促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素活性測(cè)定法(MTT法)試劑的配制0. 01mol/L磷酸鹽緩沖液(PH7. 3)取氯化鈉8. 0g、氯化鉀0. 2g、磷酸 氫二鈉(Na2HP04) 1. 15g及磷酸二氫鉀0. 2g，加超純水1000ml溶解后，高壓滅菌。RPMI-1640培養(yǎng)液取碳酸氫鈉2. 00g及RPMI-164010. 0g加超純水約800ml溶解后，用lmol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至6. 9，加超純水稀釋至1000ml，過(guò)濾除菌。10 %小牛血清培養(yǎng)液取上述RPMI-1640培養(yǎng)液900ml，加已滅活的小牛血清 100ml。0. 25%胰蛋白酶-乙二胺四醋酸二鈉消化液取0. 25g胰蛋白酶及0. 02g乙二胺四 醋酸二鈉，加0. 0lmol/L磷酸鹽緩沖液IOOml溶解后，用5. 6%碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH值至7. 2， 過(guò)濾除菌，_20°C保存。噻唑藍(lán)(MTT)溶液取MTT50mg，加0. Olmol/L磷酸鹽緩沖 液IOml溶解后，過(guò)濾除菌 (保存于冷處，使用不超過(guò)兩周)。操作法供試品溶液的制備取供試品適量，用RPMI-培養(yǎng)液制成每Iml中含多肽100 μ g 的溶液。測(cè)定法用10%小牛血清培養(yǎng)液培養(yǎng)SMMC-7721細(xì)胞至對(duì)數(shù)增長(zhǎng)期，用0. 25% 胰蛋白酶-乙二胺四醋酸二鈉消化液消化，加10%小牛血清培養(yǎng)液稀釋至每Iml中含 (2. 5X IO4) (5X104)個(gè)細(xì)胞，將上述細(xì)胞懸液在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上鋪板，每孔ΙΟΟμΙ， 其中留3孔加10%小牛血清培養(yǎng)液100μ 1作為空白對(duì)照，置37°C，5%二氧化碳飽和水 汽培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3 4小時(shí)使其貼壁。供試品組，每孔加供試品溶液100 μ 1，每批供試品 均做3孔，細(xì)胞對(duì)照組和空白對(duì)照組每孔分別加RPMI-1640培養(yǎng)液100 μ 1，置37°C，5 % 二氧化碳飽和水汽培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)，結(jié)束培養(yǎng)前4小時(shí)取出培養(yǎng)板，吸去培養(yǎng)液，每 孔加入0. Olmol/L磷酸鹽緩沖液(pH7. 3)洗一次，然后在每孔中加入上述磷酸鹽緩沖液 (pH7. 3) 100 μ 1和MTT溶液20 μ 1，繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)結(jié)束后，吸出培養(yǎng)液，每孔加入100 μ 1 二甲基亞砜，搖勻，在酶標(biāo)儀上以550nm的波長(zhǎng)處分別測(cè)定其吸收度A值。
供試品組3孔吸收度平均值(At) 一空白對(duì)照組3孔吸收度平均值 7)
活性刺激指數(shù)=-
對(duì)照組3孔吸收度平均值d)—空白對(duì)照組3孔吸收度平均值 以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人 員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng) 視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
一種促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素腸溶膠囊，由促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素和藥學(xué)上可接受的腸溶膠囊輔料組成。
2.如權(quán)利要求1所述的促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素腸溶膠囊的制備工藝，包括以下步驟a、取促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素溶液，濃度為15 30mg/ml；b、將步驟a的水溶液通過(guò)凝膠色譜層析柱，收集活性刺激指數(shù)大于4.5峰的洗脫液；c、將步驟b收集的洗脫液濃縮、冷凍干燥；d、將步驟c制得的促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素干粉，與藥學(xué)上可接受的腸溶膠囊輔料，制成促肝 細(xì)胞生長(zhǎng)素腸溶膠囊。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備工藝，其特征在于步驟a中促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素是從乳豬 肝臟、小牛肝臟或胎牛肝臟中分離提取的。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備工藝，其特征在于步驟b中凝膠色譜層析柱裝填的為 聚丙烯酰胺凝膠、交聯(lián)葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠或聚苯乙烯凝膠。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備工藝，其特征在于所述凝膠色譜層析柱層析過(guò)程為i、裝柱將凝膠在純水中浸泡24小時(shí)以上，水洗濾干后，將溶脹的凝膠與水按體積比 3 1混合，經(jīng)超聲波脫氣后濕態(tài)裝柱；裝柱要求無(wú)氣泡、無(wú)裂紋、填料分布均勻；柱的徑高 比為1 5 20，用3 5個(gè)柱體積純水平衡層析柱；ii、系統(tǒng)連接將裝好的層析柱下端出液口與紫外檢測(cè)器進(jìn)口連接；層析柱上端進(jìn)液 口與泵系統(tǒng)連接；iii、加樣取促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素溶液小心加于該層析柱的上表面，上樣體積為柱床體積 的2% 25% ；打開柱下端出口，使促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素溶液進(jìn)入凝膠內(nèi)；iv、洗脫在層析柱的上表面上加入水，保持液位高度為3 4cm，調(diào)節(jié)洗脫速度為 30ml/min ；V、收集在214nm紫外檢測(cè)器下在線監(jiān)測(cè)，分段收集活性刺激指數(shù)大于4. 5峰的洗脫液。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備工藝，其特征在于步驟iv中，在促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素溶液 恰好流至與凝膠上表面平齊時(shí)，關(guān)閉層析柱的下端出口 ；用水清洗加樣區(qū)，共洗滌三次；待 上次清洗液應(yīng)完全進(jìn)入凝膠柱內(nèi)后，再進(jìn)行下一次洗滌。
7.如權(quán)利要求1所述腸溶膠囊在制備治療肝臟疾病的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素腸溶膠囊，由促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素和藥學(xué)上可接受的腸溶膠囊輔料組成。還公開了該腸溶膠囊的制備工藝和用途。本發(fā)明經(jīng)過(guò)凝膠色譜層析法處理的產(chǎn)品，雜質(zhì)減少，產(chǎn)品純度提高；活性明顯較市售的促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素高，提高了70％左右。
文檔編號(hào)A61P1/16GK101869701SQ20101021310
公開日2010年10月27日 申請(qǐng)日期2010年6月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月30日
發(fā)明者俞保彬, 周天瓊, 周正兵, 高留根 申請(qǐng)人:杭州華津藥業(yè)股份有限公司