專利名稱：T細(xì)胞免疫平衡肽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種負(fù)向調(diào)節(jié)大分子蛋白、病毒、細(xì)菌等所引起的T細(xì)胞介導(dǎo)的特異 性免疫反應(yīng)，特別是過度劇烈的T細(xì)胞特異性免疫反應(yīng)的多肽混合物，它能使T細(xì)胞特異性 免疫反應(yīng)更加溫和而持久地進(jìn)行。
背景技術(shù)：
用于超敏反應(yīng)、自身免疫病、移植排斥、炎癥等免疫功能亢進(jìn)性疾病的治療的藥物 包括①非特異性免疫抑制劑如化學(xué)制劑(烷化劑和抗代謝藥)、激素、真菌代謝產(chǎn)物(環(huán) 孢素A和Π(-506)及一些中藥成分。此類制劑大多具有明顯的毒副作用，可導(dǎo)致機(jī)體免疫 功能下降，增加感染機(jī)會(huì)，長(zhǎng)期應(yīng)用還可能誘發(fā)腫瘤，主要用于器官移植排斥反應(yīng)。②淋巴 細(xì)胞及其表面分子的抗體能用于抗移植物排斥反應(yīng)、自身免疫病等疾病的治療。如CD3單 抗治療急性心、肝、腎移植排斥的治療；抗CD4單抗治療RA等自身免疫疾病。但近年來發(fā)生的病毒感染，如傳染性非典型肺炎，全稱嚴(yán)重急性呼吸綜合癥 (SevereAcute Respiratory Syndromes)，簡(jiǎn)稱 SARS，是一種因感染 SARS 相關(guān)冠狀病毒而 導(dǎo)致的以發(fā)熱、干咳、胸悶為主要癥狀，嚴(yán)重者出現(xiàn)快速進(jìn)展的呼吸系統(tǒng)衰竭，是一種新的 呼吸道傳染病，傳染性極強(qiáng)、病情進(jìn)展快速。該疾病一般有一兩周的潛伏期，而后快速進(jìn)展。 病毒感染的清除，最終都要激發(fā)有效的特異性T細(xì)胞免疫反應(yīng)，而SARS引起的特異性免疫 反應(yīng)(包括Thl相關(guān)的細(xì)胞免疫和Th2相關(guān)的體液免疫)過度激烈，導(dǎo)致了大量的糖皮質(zhì) 激素的廣泛使用，糖皮質(zhì)激素對(duì)固有免疫和適應(yīng)性免疫都有廣泛的抑制作用，對(duì)控制病毒 的感染起負(fù)面作用，另外可繼發(fā)的支原體、衣原體、肺炎球菌等其他微生物的感染，加重病 人肺臟損傷。該病除了導(dǎo)致多例病人死亡外，治愈者也留下了嚴(yán)重后的遺癥，肺部功能嚴(yán)重 受損，并出現(xiàn)股骨頭壞死。SARS感染肺、腎和消化道上皮細(xì)胞，但是未見慢性感染報(bào)道。兒 童感染通常預(yù)后較好，而青壯年感染反而癥狀嚴(yán)重，與其免疫高反應(yīng)性有關(guān)。如何開發(fā)一種免疫抑制作用更有特異性、更溫和、更安全的藥物，面對(duì)以后可能再 次發(fā)生的烈性感染病，具有很強(qiáng)的現(xiàn)實(shí)意義。

發(fā)明內(nèi)容
在人體面臨異常的異源性蛋白、病毒、細(xì)菌入侵時(shí)，機(jī)體往往能激發(fā)自我保護(hù)的免 疫反應(yīng)，清除這些外來物，但某些時(shí)候，機(jī)體會(huì)作出過度反應(yīng)，導(dǎo)致疾病癥狀加重，甚至致殘 致死的情況。某些特殊的自身抗原，也能導(dǎo)致機(jī)體作出過度的免疫反應(yīng)，導(dǎo)致自身免疫病的 發(fā)生。在這些情況出現(xiàn)的時(shí)候，最好能在機(jī)體免疫反應(yīng)過度劇烈發(fā)生時(shí)，給予某種程度 的負(fù)向調(diào)節(jié)。為了克服當(dāng)前免疫抑制劑的作用過于強(qiáng)烈和廣泛的情況，根據(jù)最近十多年的 免疫學(xué)進(jìn)展，本發(fā)明提供一種作用于特異性T細(xì)胞免疫反應(yīng)的負(fù)向調(diào)節(jié)劑。一、T細(xì)胞特異性免疫反應(yīng)T細(xì)胞不能識(shí)別完整的天然抗原分子，需要抗原提呈細(xì)胞(APC)先將抗原降解為抗原肽段，然后與抗原提呈分子(MHC)結(jié)合后遷移至APC細(xì)胞膜表面時(shí)才能被識(shí)別。T細(xì)胞 識(shí)別的抗原主要由經(jīng)典的MHC I類和II類分子提呈。由MHC分子、抗原肽和TCR分子形成 的復(fù)合體簡(jiǎn)稱為TCR-pMHC三元體，其中pMHC是“肽-MHC”的簡(jiǎn)化形式。TCR-pMHC三元體 是T-APC相互作用中能夠體現(xiàn)T細(xì)胞抗原識(shí)別特異性的最重要的分子結(jié)構(gòu)群。I類分子提 呈的抗原肽和II類分子提呈的抗原片段不僅結(jié)構(gòu)上不同，而且兩種分子的近膜端結(jié)構(gòu)域所 結(jié)合的輔助受體也不同，分別為⑶8和⑶4分子，由此造就了下列不同的抗原提呈格局I 類分子提呈內(nèi)源性抗原供⑶8CTL識(shí)別；II類分子提呈外源性抗原供⑶4Th細(xì)胞識(shí)別。I類 分子的結(jié)合槽兩端封閉，接納8 10肽，肽段N端和C端埋在槽的兩端。II類分子的抗原 結(jié)合槽開放，能容納13 25肽的長(zhǎng)鏈。TCR-pMHC中的三個(gè)組成成分皆顯示高度變異性。首先，抗原的數(shù)量極大，進(jìn)入MHC抗原結(jié)合槽中的抗原肽，不僅可以來自不同的抗 原分子，而且可以是同一抗原分子上的不同肽段，其多樣性之大難以估算。第二，MHC的變異性來自兩個(gè)方面多基因性和多態(tài)性。僅以提呈抗原的經(jīng)典HLA 分子而言，不僅有I類和II類之別，I類中又分成HLA-A、HLA-B、HLA-C不同座位的產(chǎn)物，各 自構(gòu)成結(jié)構(gòu)不同的抗原提呈分子。而且，HLA的多態(tài)性極為豐富，即經(jīng)典的I類和II類分子 有大量的等位基因。第三，TCR分子的多樣性更是以十萬到百萬計(jì)。T細(xì)胞識(shí)別抗原的過程中，受體TCR和配體pMHC之間的密切結(jié)合，而構(gòu)成配體分子 pMHC的兩種成分即抗原肽和MHC分子之間，也發(fā)生相互作用?？乖囊话愫?個(gè)或2個(gè) 以上與某個(gè)特定MHC分子結(jié)合的部位，成為錨著點(diǎn)，位于該部位上的氨基酸稱為錨著殘基。 這些錨著殘基插入MHC分子抗原結(jié)合槽的小袋中，通過氫鍵與MHC分子相結(jié)合?？乖闹?間部位一般均有一定程度的隆起，可作為T細(xì)胞表位供TCR識(shí)別。某一抗原肽與某一特定 MHC II類分子的結(jié)合是抗原肽與結(jié)合槽氨基酸殘基之間相互吸引和排斥的結(jié)果。抗原肽和MHC分子間的相互作用能否實(shí)現(xiàn)，是由MHC等位基因分子抗原結(jié)合槽的 結(jié)構(gòu)特點(diǎn)、進(jìn)入該結(jié)合槽的抗原肽是否符合其接納抗原肽的共同基序，以及這些肽可能顯 示的抑制性殘基的部位和類型所決定的。MHC等位基因的差異(多態(tài)性)體現(xiàn)在個(gè)體之間， 因而，抗原肽-MHC相互作用的不同格局，有可能直接參與構(gòu)成不同個(gè)體對(duì)同一抗原應(yīng)答格 局的差異，甚至決定對(duì)同一種病原體引起的疾病是否存在遺傳易感性。TCR復(fù)合物識(shí)別APC表面的pMHC之后，使一些受體及其相連接的胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分 子迅速被動(dòng)員到T-APC的接觸部位。形成免疫突觸。免疫突觸形成的意義首先，多個(gè)TCR-pMHC三元體的聚集使得單一受體(TCR)和 單一配體(pMHC)間的親和力有機(jī)會(huì)轉(zhuǎn)變成一種結(jié)構(gòu)性親和力。結(jié)構(gòu)親和力為相應(yīng)信號(hào)轉(zhuǎn) 導(dǎo)提供足夠強(qiáng)的動(dòng)力，促進(jìn)T細(xì)胞行使其抗原識(shí)別后的生物學(xué)功能，包括增值、細(xì)胞因子分 泌和對(duì)靶細(xì)胞的殺傷。其中涉及多種機(jī)制1.穩(wěn)定的超分子結(jié)構(gòu)使多個(gè)TCR分子成簇，以 平行的方式傳遞T細(xì)胞的活化信號(hào)，使T細(xì)胞完全活化。2.在免疫突觸的微結(jié)構(gòu)域中，縮小 了 T-APC相互作用的空間，使TCR有連續(xù)被觸發(fā)的機(jī)會(huì)。3. TCR-pMHC復(fù)合物向中心移動(dòng)，可 使之濃縮100倍左右，而且T細(xì)胞受力均衡，基本不會(huì)移動(dòng)。4.免疫突觸提供了一個(gè)生化 反應(yīng)的極化界面和分子間相互作用的平臺(tái)，增強(qiáng)了 T細(xì)胞識(shí)別抗原的能力，也增強(qiáng)了 APC上 B7-1/B7-2和T細(xì)胞⑶觀的相互作用而產(chǎn)生協(xié)同刺激信號(hào)，參見圖1和圖2。
在自然界形成的TCR的配體pMHC，一部分對(duì)免疫反應(yīng)起激活作用，一部分肽似乎 起拮抗作用。一篇2004年發(fā)表在The Journal of Cell Biology上，由Cenk Sumen等撰 寫的文章對(duì)pMHC對(duì)TCR的拮抗作用作了深入的研究，名為“Τ cell receptor antagonism interfereswith MHC clustering and integrin patterning during immunological synapseformation".在前言中他們寫到非自身肽pMHC引起的T細(xì)胞活化過程，可以被特 定序列變異的T細(xì)胞受體(TCR)的拮抗肽所阻斷。其抑制機(jī)理尚不清楚，但這類變異可以 在病毒感染過程中遇到，并且可能對(duì)促進(jìn)病毒進(jìn)行免疫逃避有幫助。在這里，我們研究了肽 拮抗劑對(duì)T細(xì)胞免疫突觸形成的影響作用。我們發(fā)現(xiàn)，在復(fù)合膜上表達(dá)拮抗-激動(dòng)復(fù)合物 形成的免疫突觸時(shí)，MHC密度降低，從而使T細(xì)胞的增殖減少，并且這種減少是增加共刺激 配體CD48和B7-1所克服不了的。在膜上面由高度密集的ICAM-I形成的新月接觸面緩慢 滑行過程中，大多數(shù)T細(xì)胞最終不能捕獲，從而不能形成免疫突觸。因此，拮抗肽選擇性阻 斷MHC集群，并產(chǎn)生停止信號(hào)。從上可知，由pMHC-TCR介導(dǎo)的T細(xì)胞特異性免疫反應(yīng)是極其復(fù)雜的。二、用免疫雙向選擇學(xué)說闡釋T細(xì)胞特異性免疫反應(yīng)中MHC與多肽以及pMHC與 TCR的相互作用為了更方便理解MHC與多肽以及pMHC與TCR的相互作用以及由此引發(fā)的T細(xì)胞 特異性免疫反應(yīng)，發(fā)明人引入免疫雙向選擇學(xué)說。為了更深入地理解免疫系統(tǒng)，發(fā)明人提出免疫雙向選擇學(xué)說生物體對(duì)進(jìn)入體內(nèi) 的藥物、抗原、微生物、病原細(xì)胞或其他異體細(xì)胞生物體等的選擇性排斥作用稱為順向選 擇；進(jìn)入生物體的藥物、抗原、微生物、病原細(xì)胞或其他異體細(xì)胞等對(duì)生物體的選擇性排斥 作用稱為反向選擇；人體中各種細(xì)胞和各種成分之間的雙向選擇作用中數(shù)量增大的一方的 選擇性排斥作用為順向選擇，被動(dòng)方的選擇性排斥作用為反向選擇。相互的選擇性排斥作用將使對(duì)方的數(shù)量和結(jié)構(gòu)(結(jié)構(gòu)決定功能、性狀等)發(fā)生改 變，使二者組成的體系趨向于穩(wěn)定。雙方對(duì)對(duì)方的選擇性排斥作用由各自的數(shù)量和結(jié)構(gòu)決 定，這種雙向作用都將導(dǎo)致適者存在，不適者被淘汰或被改造適應(yīng)，最終趨向于實(shí)現(xiàn)免疫雙 向選擇平衡。由于各自的數(shù)量和結(jié)構(gòu)均能被二者組成的體系之外的因素所改變，所以二者 組成的體系所需要達(dá)到的穩(wěn)定是發(fā)展變化的。即以數(shù)量和結(jié)構(gòu)決定的雙向選擇，適者存在， 不適者被改造或被淘汰。亦即以數(shù)量和結(jié)構(gòu)決定的陰陽(yáng)，平衡，相生相克。結(jié)構(gòu)相似的物體稱為相似體。結(jié)構(gòu)的組成包括其內(nèi)所含的相似體的種類和數(shù)量， 以及它們之間的相對(duì)位置和相對(duì)運(yùn)動(dòng)。結(jié)構(gòu)內(nèi)部的相似體之間的相對(duì)運(yùn)動(dòng)可導(dǎo)致相對(duì)位置 的改變，從而使結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，也使其內(nèi)部的相似體內(nèi)部結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，超過一定界限時(shí)， 生成新的相似體，發(fā)生數(shù)量改變。相似體的相似度用0 1表示，當(dāng)相似度等于1時(shí)，表示用當(dāng)前所有技術(shù)方法均不 能檢測(cè)到它們的不同，稱為同一體，當(dāng)相似體的相似度向0靠近時(shí)，超過一定的數(shù)值，可以 認(rèn)為它不再是相似體，可以把它歸為不同體。免疫雙向選擇方程F1+F2 — S1+S2 (Fl的相似度趨近于1、F2的相似度趨近于1、Sl的相似度趨近于 1和S2的相似度趨近于1)方程一般為不可逆，方程左邊為相克的兩種相似體Fl和F2，右邊為Fl和F2相克
5后相生的Sl和S2。在化學(xué)方程式中，左邊的同樣為相克，右邊的為左邊相克后相生的產(chǎn)物。在一個(gè)雙向選擇雙方平衡共存的體系中，對(duì)于大分子或細(xì)胞之間的雙向選擇，反 應(yīng)式一般為不可逆過程，反應(yīng)的啟動(dòng)和中止，只與左邊的Fl和F2有關(guān)系，所以，雙方的濃度 (或者頻率)與它們之間的選擇親和力應(yīng)存在著如下的關(guān)系F1aXF2bXQ = !"(F1和F2為濃度(或頻率)；a，b為結(jié)合效價(jià)；Q為F1和F2的選擇 親和力；T為雙向選擇平衡常數(shù)，也稱共存常數(shù)，其值可能受溫度的影響)通常的免疫學(xué)觀念認(rèn)為DC細(xì)胞在外周捕獲抗原后，逐漸成熟，進(jìn)入淋巴結(jié)后，就 能激活初始的T細(xì)胞，似乎是生命過程中自然而然的事情。而雙向選擇學(xué)說認(rèn)為DC細(xì)胞 成熟后，就會(huì)選擇性對(duì)初始的T細(xì)胞產(chǎn)生排斥作用，尤其對(duì)它們之間有高的選擇親和力的 那一小部分初始T細(xì)胞，這是兩種結(jié)構(gòu)不同的物體的一種“勢(shì)不兩立、有你沒我”的不能在 同一體系中共存的關(guān)系，必然導(dǎo)致相互的結(jié)構(gòu)改造，使各自的頻率減少，并且同時(shí)產(chǎn)生新的 相似體。TCR是一個(gè)高分子蛋白，由兩個(gè)亞基組成。每個(gè)T細(xì)胞只表達(dá)一類TCR。在pMHC 的選擇性排斥作用下，同一個(gè)TCR的多個(gè)重復(fù)頻率，其中部分將發(fā)生空間結(jié)構(gòu)的改變，由 同一體向相似體遷移，當(dāng)PMHC的頻率進(jìn)一步增大時(shí)，這些相似體繼續(xù)向不同體遷移，即形 成pMHC-TCR的結(jié)構(gòu)。pMHC引起同一體TCR的結(jié)構(gòu)改變，這是改造作用，當(dāng)結(jié)構(gòu)巨變，形成 PMHC-TCR的結(jié)構(gòu)，就發(fā)生了淘汰作用，使同一體TCR頻率減少。其變化如圖3所示。在pMHC與TCR的二者雙向選擇作用關(guān)系中，用Fl代表某一個(gè)個(gè)體中的某一同一 體pMHC，F(xiàn)2代表同一個(gè)個(gè)體中的某一同一體TCR，它們?cè)谶@個(gè)個(gè)體中的共存關(guān)系應(yīng)符合雙 向選擇平衡常數(shù)的限制，但人體屬于非均勻的選擇體系，F(xiàn)l和F2代表頻率，而不是濃度。為了使方程F1aXF2bXQ = T變得簡(jiǎn)單化，令a = b = 1，令T= 1，那么就有 F1XF2XQ= 1，將方程變換，有F1 = (1/F2) X (1/Q)；如果這個(gè)個(gè)體中F2的頻率在一定時(shí)間 內(nèi)恒定，而F1和&的選擇親和力受它們之間的結(jié)構(gòu)本身決定，為定值，那么F1等于(或小 于)某一定值。當(dāng)把同一體F1，擴(kuò)張到這個(gè)個(gè)體其他與Fl相似的其他多種同一體pMHC(fl)時(shí)， F2與Π的親和力就發(fā)生了變化，此時(shí)親和力用q表示，此時(shí)有= (1/F2) X (1/q)，變成了 與q的函數(shù)，那么它表示就是類似y = Ι/x的函數(shù)， 在坐標(biāo)中為雙曲線。fl中某一個(gè)具體的pMHC與一定頻率的F2的親和力是唯一的，也就是 說不同的多肽與相同的MHC和TCR的親和力都是不同的，不存在重疊。如果親和力相同，那 么一定是同一肽所介導(dǎo)。如果將同一體F2，擴(kuò)張到這個(gè)個(gè)體其他與F2相似的其他多種同一體TCR(f2)時(shí)， ^Xf2Xq= 1，那么它表示的就是類似xyz = 1的函數(shù)，在坐標(biāo)中為鐘型的面。這種情況復(fù) 雜，在此不再做討論。= (1/F2) X (1/q)，在坐標(biāo)中形成的曲線，稱為F2的雙向選擇平衡曲線，也稱為 F2的共存曲線，意即在F2的頻率為F2時(shí)，在某一親和力位點(diǎn)，fl的頻率要小于等于，如 果超過，就會(huì)發(fā)生雙向選擇，引發(fā)相克淘汰作用，同時(shí)相生新的相似體。如圖4所示。同一個(gè)個(gè)體，MHC結(jié)構(gòu)一定，沒有TCR那么多的多樣性。長(zhǎng)度能被MHC接納的多肽 群(ρ)與MHC(M)的作用同樣符合雙向選擇作用關(guān)系，即有ρ (單個(gè)多肽的頻率)X M (MHC的頻率)X q = T
在一個(gè)個(gè)體中，M結(jié)構(gòu)一定，當(dāng)q極大時(shí)，這一群ρ的結(jié)構(gòu)特征有相對(duì)固定的錨著 點(diǎn)，這只不過是MHC與多肽雙向選擇作用關(guān)系中最高親和力時(shí)的一種極端特征，并不能代 表P與M作用的全部特征，只要有親和力，那么當(dāng)M頻率一定時(shí)，ρ中某一多肽的頻率增加， 根據(jù)雙向選擇平衡方程，就一定能出現(xiàn)PMHC的結(jié)構(gòu)，因此不必考慮錨著點(diǎn)氨基酸的限制。圖5中，親和力q軸上，數(shù)字1 12代表某蛋白與MHC可形成的pMHC的12個(gè)多 肽片段的編號(hào)，在此蛋白一定分子數(shù)量的情況下，它們出現(xiàn)的頻率是一樣的，等高，但它們 與MHC的親和力是依次增高的，假設(shè)細(xì)胞內(nèi)MHC的頻率能及時(shí)得到表達(dá)補(bǔ)充，使MHC頻率維 持恒定，即共存曲線不發(fā)生移動(dòng)，那么，5、6、7、8、9、10、11、12號(hào)肽可以形成pMHC的結(jié)構(gòu)，而 1-4號(hào)不能。要使1-4號(hào)肽出現(xiàn)pMHC的結(jié)構(gòu)，需再進(jìn)一步增加蛋白的分子數(shù)量，以使其頻 率增加，向上觸及共存曲線，方可形成PMHC結(jié)構(gòu)。圖中可形成的pMHC結(jié)構(gòu)的多肽中，第12 號(hào)肽的形成量是最大的，那么這種蛋白形成的PMHC與某TCR的親和力，第12號(hào)肽最具代表 性，其他5-11號(hào)肽形成的pMHC與此TCR的親和力以12號(hào)為中心，在其兩側(cè)分布，其頻率類 似正態(tài)分布。在圖6中，對(duì)肽與MHC的親和力，以及它們的生物活性進(jìn)行了對(duì)比，顯示與MHC 高結(jié)合力的肽的生物活性不一定是最高的，而中等親和力的3條肽有更高或者更低的增殖 強(qiáng)度。同時(shí)，在生物學(xué)中，同一群體的某種特性指標(biāo)，如某地區(qū)同齡組兒童的身高、體重、 肺活量，在一定條件下生長(zhǎng)的農(nóng)作物的產(chǎn)量等一般服從正態(tài)分布。可以認(rèn)為，在F2的共存 曲線的左下方的Π，或者獨(dú)立體系的Π，在沒有共存曲線的限制下，某一病毒蛋白的形成 的多肽序列與MHC形成的pMHC與F2的親和力的頻率呈正態(tài)分布，某一隨機(jī)的混合的數(shù)目 極多的多肽序列與MHC形成的pMHC與F2的親和力的頻率呈正態(tài)分布，該個(gè)體自身某蛋白 形成的pMHC與F2的親和力的頻率也呈正態(tài)分布。如果一個(gè)正態(tài)分布的肽-MHC群與TCR 處于最高親和力，q軸的最右端的時(shí)候，它一定能由高親和力介導(dǎo)劇烈的特異性免疫反應(yīng)， 在一定程度時(shí)，它可能是有益的，但如果這種反應(yīng)持續(xù)時(shí)間過長(zhǎng)，或者強(qiáng)度過強(qiáng)，將導(dǎo)致疾 病產(chǎn)生或者疾病加重，介導(dǎo)這種反應(yīng)的多肽，稱為病原肽。如果F2所代表的TCR是這個(gè)個(gè) 體介導(dǎo)乙肝病毒核心抗原特異性免疫反應(yīng)最主要的TCR，那么這個(gè)個(gè)體乙肝病毒核心抗原 (HBcAg)所有可形成的pMHC的正態(tài)分布應(yīng)處于親和力最大的位置，也就是說其親和力均數(shù) 最靠右側(cè)。其他病毒蛋白的均數(shù)均位于其左側(cè)，隨機(jī)混合多肽的也是如此，自身蛋白的均數(shù) 位于最左側(cè)，如圖7所示。在圖7中，E代表HBcAg形成的pMHC，A代表人體自身蛋白形成的pMHC，B代表與 人較接近的動(dòng)物蛋白形成的PMHC，C代表隨機(jī)氨基酸序列的混合多肽形成的pMHC，D代表其 他病毒細(xì)菌蛋白形成的pMHC。在人體內(nèi)，F(xiàn)2與fl的共存體系中，人體由于自身抗原肽，多種寄生微生物，被輕微 感染的微生物，它們形成的fl在雙向選擇曲線下應(yīng)該有分布，某些親和力位點(diǎn)可能出現(xiàn)超 越曲線的高頻率出現(xiàn)，引起輕微的免疫反應(yīng)。如圖8所示。為了更便于簡(jiǎn)化分析，在接下來的分析中，以上fl的背景分布將不會(huì)再被考慮。 下面分析特異性免疫反應(yīng)中免疫激活和效應(yīng)階段的雙向選擇作用，F(xiàn)2以介導(dǎo)HBcAg免疫的 高親和力的某種TCR為代表進(jìn)行分析形成的pMHC-TCR處于免疫激活階段，如圖9所示。隨著乙肝病毒的感染，病毒在人體內(nèi)表達(dá)越來越多的HBcAg，按正態(tài)分布的fl(APC上表達(dá))的頻率曲線向上移動(dòng)，先不考慮共存曲線的限制，當(dāng)fl的頻率曲線(C)較 大地高于共存曲線時(shí)，假設(shè)此時(shí)固定雙向選擇的雙方的頻率和分布，對(duì)雙方的雙向選擇結(jié) 果進(jìn)行分析。F2在雙向選擇中頻率減少，即幼稚型T細(xì)胞上的TCR，轉(zhuǎn)變成了活化T細(xì)胞上的 TCR(CenkSumen,Michae1 L. Dustin,et al. T cell receptor antagonism interferes with MHCclustering and integrin patterning during immunological synapse formation. TheJournal of Cell Biology, Volume 166，Number 4，August 16，2004579-590，文章中 T 細(xì)胞結(jié)合后分離，大部分不能再結(jié)合，說明結(jié)構(gòu)已改變)，雖然它們的一級(jí)結(jié)構(gòu)沒有改變，但 空間結(jié)構(gòu)一定發(fā)生了改變，歸為不同體，此時(shí)共存曲線向右上移動(dòng)，原來正態(tài)分布曲線(C) 與共存曲線的交叉區(qū)域向下移動(dòng)。事實(shí)上，在免疫反應(yīng)發(fā)生的短暫時(shí)間內(nèi)，F(xiàn)2的頻率是一 定的，而HBcAg的正態(tài)分布曲線在免疫反應(yīng)發(fā)生的前期，直到病毒復(fù)制和表達(dá)被較大程度 抑制前，它都是一直向上的，伴隨F2的共存曲線(A)向右上離去。這種動(dòng)態(tài)的變化，稱為追 擊型雙向選擇模式?；罨?yīng)產(chǎn)生了大量的單克隆活化T細(xì)胞，包括Thl、Th2和CTL，同時(shí) 產(chǎn)生大量細(xì)胞因子，如IFN-gamma，TNF等，協(xié)助B細(xì)胞產(chǎn)生大量抗體?；罨腡細(xì)胞上的 TCR，雖然其與初始T細(xì)胞的一級(jí)結(jié)構(gòu)相同，但它們的空間結(jié)構(gòu)，在活化前與被活化后，一定 不相同，它們與APC上同一個(gè)pMHC的親和力也必然不同?；罨腡細(xì)胞上的TCR形成效應(yīng) 階段的F2*，大量細(xì)胞因子表達(dá)，有利于被病毒感染細(xì)胞形成HBcAg pMHC，形成f 1*，以*表 示它們和激活階段的相似體已屬于不同體。形成的pMHC-TCR處于免疫效應(yīng)階段，中間的MHC由I類分子介導(dǎo)，如圖10所示。在乙肝病毒感染發(fā)生的過程中，由于病毒在肝細(xì)胞內(nèi)的持續(xù)復(fù)制并進(jìn)行多種蛋白 的表達(dá)，又由于它們刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)，釋放大量的細(xì)胞因子，特別是IFN-gamma，使 MHC表達(dá)增加，按正態(tài)分布的fl*(肝細(xì)胞上表達(dá))的頻率曲線(C)向上移動(dòng)，先不考慮共存 曲線的限制，F(xiàn)2*的頻率大增，共存曲線(A)快速向左下移動(dòng)，二者的這種動(dòng)態(tài)變化，稱為對(duì) 沖型雙向選擇模式。病毒感染為細(xì)胞內(nèi)感染，而特異性免疫反應(yīng)一般都在96小時(shí)后，才能 產(chǎn)生作用。此時(shí)，在被感染的細(xì)胞內(nèi)已經(jīng)大量復(fù)制表達(dá)，fl*的分布曲線都已經(jīng)上移了很多， 而F2*的頻率此時(shí)大增，共存曲線快速下壓，導(dǎo)致劇烈的免疫反應(yīng)，大量被感染的細(xì)胞被通 過顆粒酶、穿孔素、Fas, TNF等作用而被殺死。同時(shí)釋放的大量炎癥物質(zhì)，導(dǎo)致感染部位充 血腫脹，繼而發(fā)生組織缺血缺氧和缺血-再灌注損傷，嚴(yán)重者導(dǎo)致組織壞死，并引起局部免 疫能力低下，可繼發(fā)多種感染，嚴(yán)重時(shí)很可以出現(xiàn)重癥情況，甚至出現(xiàn)病人死亡。在急性乙肝患者在固有免疫和IFN-gamma的細(xì)胞因子作用下，可在不發(fā)生細(xì)胞破 壞和調(diào)亡的情況下，清除肝臟內(nèi)的乙肝病毒，但隨后而來的大量特異性T細(xì)胞和非特異性T 細(xì)胞導(dǎo)致了大量的炎癥和肝細(xì)胞損傷，甚至出現(xiàn)重癥化的情況。雖然病毒滴度或者其DNA 已經(jīng)檢測(cè)不到，但留在感染細(xì)胞中的積累的病毒蛋白及其已被酶解的相關(guān)多肽，此時(shí)仍在 大量的被MHC高效提呈表達(dá)出來，通過pMHC-TCR的特異性交聯(lián)，介導(dǎo)了高峰值的CTL的殺 滅作用，這些殺滅作用在很多程度上來說是本不必再發(fā)生，或者不需要高強(qiáng)度的再發(fā)生。三、免疫雙向選擇學(xué)說在T細(xì)胞特異性免疫反應(yīng)中的運(yùn)用T細(xì)胞免疫平衡肽的產(chǎn) 生如圖7和圖9所示，對(duì)于介導(dǎo)HBcAg發(fā)生T細(xì)胞特異性免疫反應(yīng)的TCR，相對(duì)于 HBcAg形成的pMHC有很高的親和力，以此形成高效的活化免疫突觸，激活T細(xì)胞特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)。如果引入一群如圖7中所示的位于E左側(cè)的低親和力的pMHC群(用J表示)， 在圖9中出現(xiàn)，那么就形成了圖11所示的情形。J群的出現(xiàn)，將共存曲線A移至G的位置，那么，分布曲線C將降至F的位置，而不 是原來D的位置，這樣，C群中參與反應(yīng)的頻率將大大減少，使得HBcAg相關(guān)的高親和力的 PMHC-TCR形成減少，那么它將使HBcAg特異性T細(xì)胞免疫反應(yīng)減弱。J群的出現(xiàn)，推動(dòng)共存曲線右上移動(dòng)，使右側(cè)高親和力的C群形成pMHC-TCR減少， J群形成的pMHC-TCR的出現(xiàn)能產(chǎn)生什么樣的生物活性呢？雙向選擇在數(shù)量上的變化，由于 受共存常數(shù)的限制，超過一定的程度，可以判斷結(jié)構(gòu)必然發(fā)生變化，但這種變化形成的新結(jié) 構(gòu)能帶來什么功能，什么樣的生物學(xué)活性，是未知的。PMHC與TCR的免疫雙向選擇作用只說 明了二者不能共存的關(guān)系，它們不能共存的結(jié)果是形成PMHC-TCR，但這種結(jié)構(gòu)會(huì)帶來什么 樣的功能，是從理論上不可知的。在Cenk Sumen等的文章中，作者提供了答案。根據(jù)親和力的不同，作者將TCR的可 修改的肽配體(alterd peptide ligands，API，由自然存在的天然氨基酸組成、氨基酸的排 列順序可以改變的多肽-MHC復(fù)合體，對(duì)TCR的刺激，其范圍從可以誘導(dǎo)多種不同的細(xì)胞因 子產(chǎn)生過渡到毫無作用)分為無效型，親和力檢測(cè)不到；拮抗型，低親和力；激活型，更高 的親和力。他們用蛾細(xì)胞色素c (MCC ；88-103)作為激活型pMHC，MCC肽中一個(gè)氨基酸改變 形成的K99R作為拮抗型pMHC，另一個(gè)K99A作為無效型pMHC進(jìn)行了研究。將k99R和K99A 以10倍的比例參與MCC介導(dǎo)的增殖反應(yīng)中時(shí)，MCC的介導(dǎo)的增殖能力明顯減弱(圖12)。形 成的免疫突觸中央的MHC的密度明顯降低。同時(shí)，在APC細(xì)胞表面一定MCC-MHC密度的情 況下，加入k99R和K99A，可使其誘生T細(xì)胞產(chǎn)生IL-2的濃度減少(圖13)，它們的使用量 是MCC的10倍的情況下開始出現(xiàn)，100倍的情況下就更明顯了，特別是K99R。文中提到，拮 抗肽和無效肽(PMHC)都可以參與到激活肽(pMHC)形成的免疫突觸中，減少突觸中MHC的 數(shù)量，并起到阻斷活化信號(hào)傳遞的作用。在其討論部分中的附圖(圖14)，對(duì)某一個(gè)TCR作用下，一群pMHC與之的親和力 關(guān)系從低親和力至高親和力、從左至右依次分布“null ρ印tides”、“TCR antagonists”、 "weakagonists"禾口 "strong agonists，，。本專利所指pMHC與TCR之間的親和力是細(xì)胞上的pMHC與TCR(目前有三種測(cè) 量 pMHC 與 TCR 之間親和力的方法，見 David K. Cole, Nicholas J. Pumphrey, et al. Human TCR-BindingAffinity is Governed by MHC Class Restriction. J. Immunol. 2007 ；178 ； 5727-5734)，代表細(xì)胞之間的親和力，用細(xì)胞通過pMHC-TCR相互作用的半衰期T1/2來表示 親和力，是與T細(xì)胞活化最相關(guān)的方法。作者將pMHC與TCR的親和力由低至高，從左至右， 依次排列為“無能肽”、“拮抗肽”、“低能激活肽”和“高能激活肽”。由于他們的實(shí)驗(yàn)，是通 過pMHC與TCR的類似實(shí)體細(xì)胞反應(yīng)，進(jìn)行的實(shí)際的測(cè)量，所以他們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)受到雙向 選擇平衡方程的限制，他們得出了一條雙曲線，跟理論一致，說明雙向選擇理論在處理PMHC 與TCR的作用關(guān)系是符合實(shí)際情況的。但是他們可能考慮了很多種肽-MHC，高親和力的肽 的頻率較少，而低親和力的頻率較多，所以圖14中的曲線又有點(diǎn)像某一非共存體系某一多 肽群與某一 TCR的正態(tài)分布圖，但這個(gè)圖只有正態(tài)分布曲線很右側(cè)的一部分。這就是理論 與實(shí)際測(cè)量的矛盾之處。根據(jù)圖11所示，那么J群可以形成大量的“無能肽”、“拮抗肽”和“低能激活肽”，這些肽-MHC的復(fù)合體，在同一 APC上分布時(shí)，“無能肽”和“拮抗肽”對(duì)“高能激活肽”形成 免疫突觸起到了明顯的抑制作用。 綜上所述，J群肽主要通過減少C群肽形成TCR-pMHC的數(shù)量，并且在MHC-C群 肽-TCR形成的免疫突觸中抑制其活化信號(hào)的傳遞。 在上面的說明中，采用的是HBcAg的高親和力TCR為代表，如果J群的抑制作用可 以放大到任意高親和力的pMHC-TCR，可以超越任意個(gè)體MHC甚至不同種屬的MHC限制，那么 這種介導(dǎo)的親和力介于MHC-自身肽-TCR和特異性高親和力的MHC-病原肽-TCR之間，能 降低特異性高親和力的MHC-病原肽-TCR介導(dǎo)的促進(jìn)T細(xì)胞的活化、增值和效應(yīng)的多肽或 多肽混合物，稱為T細(xì)胞免疫平衡肽。四、T細(xì)胞免疫平衡肽T細(xì)胞免疫平衡肽可以不考慮個(gè)體的遺傳背景，即MHC的限制，使其形成的pMHC群 或群的主要部分對(duì)任意一 TCR的親和力，處于高親和力pMHC (或群)與人體自身pMHC群之 間，對(duì)高親和力PMHC(或群)的T細(xì)胞免疫反應(yīng)起負(fù)向調(diào)節(jié)作用。相同的肽-MHC對(duì)個(gè)體內(nèi) 的不同的TCR親和力不同，在q軸上的位置不確定，相同的肽，在另一個(gè)個(gè)體中，由于MHC和 TCR都不同，其親和力變異更大，但是，作為一個(gè)多條多肽組成的整體，在q軸上的位置卻是 可以確定的。從理論上講，可能可以找到單獨(dú)的一條多肽，其在q軸上的位置都是相對(duì)恒定 的，處于低親和力的位置，符合平衡肽的要求，但這種方法不是本專利的追求。本專利是在 單一多肽的不確定性中，追求混合多肽的整體的確定性。1.隨機(jī)序列對(duì)于病毒和細(xì)菌引起的劇烈的T細(xì)胞特異性免疫，介導(dǎo)的MHC-病原肽-TCR必然 處于高親和力水平，其PMHC群必然處于q軸的最右側(cè)。隨機(jī)的肽與MHC形成的pMHC群的親 和力，必然處于其左側(cè)的中間位置。在Cenk Sumen的文章中，它們使用的多肽大多都是人 工合成的，他們提到相對(duì)于任意一個(gè)TCR，無效肽的頻率相對(duì)于高效肽的頻率總是很多的。 因此，這樣合成的隨機(jī)多肽群，形成的PMHC群，對(duì)于任意一個(gè)高親和力的pMHC-TCR來說，其 頻率的主要分布(均數(shù))在q軸上應(yīng)該都是位于左側(cè)的。為了排除偶然性，多肽的種類是 越多越好。2.從接近人的脊椎動(dòng)物蛋白中提取從脊椎動(dòng)物開始，形成pMHC-TCR的特異性免疫系統(tǒng)，它們的結(jié)構(gòu)可能有不同之 處，但也有相似之處。它們體內(nèi)的蛋白，都是這種選擇系統(tǒng)選擇后保留的。它們的蛋白形成 的pMHC相對(duì)于病毒和細(xì)菌形成的pMHC與人體的TCR的親和力，從整體上來說，應(yīng)該要小得 多。從動(dòng)物發(fā)生的胚系分析，外源性的強(qiáng)弱和物種間胚系基因的差異程度有關(guān)?？乖瓉碜?系統(tǒng)發(fā)育距離越遠(yuǎn)的物種，其外源性越突出，免疫原性也越強(qiáng)。因而病原體有很強(qiáng)的免疫原 性。近親性，低親和力，免疫原性較弱，越遠(yuǎn)，親和力越高，免疫原性更強(qiáng)。因此，可以從脊椎 動(dòng)物蛋白中提取多肽，形成T細(xì)胞免疫平衡肽。上述兩種來源的T細(xì)胞免疫平衡肽，其序列多樣、長(zhǎng)短不限，但一般都要含有可以 覆蓋I和II分子長(zhǎng)度的多肽，可以加入比它們長(zhǎng)或短的多肽，但分子不超過10000。五、T細(xì)胞免疫平衡肽對(duì)T細(xì)胞特異性免疫反應(yīng)的影響1. T細(xì)胞免疫平衡肽與MHC結(jié)合過程，對(duì)特異性抗原與MHC結(jié)合的影響多肽與MHC的雙向選擇關(guān)系，除I、II類分子長(zhǎng)度的多肽外，過長(zhǎng)的多肽可通過內(nèi)體-溶酶體途徑水解或酶解成合適的長(zhǎng)度，對(duì)于小于8個(gè)氨基酸的多肽，也有可能對(duì)MHC 起作用，它們?cè)诓煌挠H和力位點(diǎn)上，共同推動(dòng)共存曲線向右上移動(dòng)，導(dǎo)致特異性病原肽與 MHC的結(jié)合減少，從而減少病原肽-MHC的形成。從另外一個(gè)角度上來講，這也可能導(dǎo)致了病 原肽的積壓，使病原肽提呈速度減慢，延長(zhǎng)了提呈時(shí)間，從而使病原肽引起的特異性免疫反 應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)。從豬的肝臟中提取的多肽物質(zhì)促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素(pHGF)對(duì)大多數(shù)受檢對(duì)象的單核 細(xì)胞HLA-DR的表達(dá)有不同程度的促進(jìn)作用，對(duì)健康人的促進(jìn)作用明顯(朱晴暉，張宜俊。 PHGF對(duì)人單核——巨噬細(xì)胞HLA——DR表達(dá)的影響，上海免疫學(xué)雜志，1996年第01期)， 說明PHGF中的多肽與人體的MHC結(jié)合，形成了大量的pMHC，并在淋巴細(xì)胞上大量表達(dá)。2. T細(xì)胞免疫平衡肽-MHC對(duì)對(duì)T細(xì)胞特異性免疫反應(yīng)的影響多肽進(jìn)入人體后，很可能絕大部分被單核巨噬粒細(xì)胞、DC和B細(xì)胞所捕獲，通過內(nèi) 體-溶酶體途徑，主要由II類分子提呈，其主要影響激活階段。也可能某些多肽可以直接和 細(xì)胞表面的II類分子直接結(jié)合。雖然不排除抗原可以通過交叉途徑，由I類分子提呈，可能 影響CTL的激活，仍處于激活階段。人體實(shí)體細(xì)胞的吞飲功能較差，攝取多肽后經(jīng)過交叉途 徑提呈的可能性不大，另外被感染的細(xì)胞內(nèi)病原蛋白豐富，MHC可能主要被它們所占據(jù)。另外多肽可能可以直接和細(xì)胞表面的MHC結(jié)合，如很多表位肽研究經(jīng)常采用CTL 表位多肽直接刺激淋巴細(xì)胞，能產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)。但I(xiàn)類分子表達(dá)量最高的是淋巴細(xì) 胞，一個(gè)細(xì)胞可含5 X IO5個(gè)分子，約占膜蛋白的1 %。M、DC及中性粒細(xì)胞也高表達(dá)HLA I類 分子，相反，肺、心、肝細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、肌細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞表達(dá)低水平的I類分子。另外I 類分子結(jié)合一般8 10個(gè)氨基酸。T細(xì)胞免疫平衡多肽與靶器官細(xì)胞上空載的MHC結(jié)合， 介導(dǎo)細(xì)胞毒作用的可能性微乎其微。所以，T細(xì)胞免疫平衡肽對(duì)T細(xì)胞特異性免疫反應(yīng)的激活階段，對(duì)激活過程直接起 抑制作用。通過減少激活，使Thl和CTL的數(shù)量減少，進(jìn)而使特異性TCR頻率減少；同時(shí)使 IFN-gamma等細(xì)胞因子減少，使病原肽-MHC的提呈減少，使選擇雙方的數(shù)量減少，從而在效 應(yīng)階段減少CTL特異性殺傷的范圍、速度和強(qiáng)度，間接起作用。T細(xì)胞免疫平衡肽由II類分子提呈后，與同一 APC細(xì)胞上的病原pMHC，一起競(jìng)爭(zhēng)病 原特異性TCR，減少病原pMHC與特異性TCR結(jié)合的數(shù)量，減少它們引導(dǎo)的免疫突觸形成減 少，同時(shí)在已形成的特異性免疫突觸中，抑制其活化信號(hào)的傳遞，減少T細(xì)胞的激活，減少 相應(yīng)細(xì)胞因子的產(chǎn)生，降低特異性T細(xì)胞的增殖能力，從而降低了 Thl引導(dǎo)的特異性細(xì)胞免 疫和Th2引導(dǎo)特異性體液免疫的強(qiáng)度。pMHC-TCR介導(dǎo)的雙向選擇，只不過是細(xì)胞間雙向選 擇關(guān)系中微觀的一部分，細(xì)胞的雙向選擇作用，使細(xì)胞的結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，功能隨之改變。綜述所述，T細(xì)胞免疫平衡肽能干擾病原肽與MHC的結(jié)合，并使單位時(shí)間內(nèi)的被提 呈量減少，延長(zhǎng)抗原肽的提呈時(shí)間，是T細(xì)胞特異性免疫反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)；T細(xì)胞免疫平衡肽 形成pMHC以II類分子為主，使形成的病原肽-MHC與高親和力特異性TCR的結(jié)合減少，同時(shí) T細(xì)胞免疫平衡肽形成的pMHC參與到病原肽-MHC與特異性TCR形成的免疫突觸中，起到中 止或減弱其活化信號(hào)傳遞的作用，使T細(xì)胞活化減少，增殖能力降低和細(xì)胞因子產(chǎn)生減少， T細(xì)胞介導(dǎo)的病原特異性免疫強(qiáng)度減弱，但由于病原蛋白提呈時(shí)間延長(zhǎng)，而使特異性免疫反 應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)，使T細(xì)胞特異性免疫反應(yīng)從峰形的免疫反應(yīng)變成平臺(tái)形，特異性免疫反應(yīng)持 久且更溫和，如圖15所示。
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運(yùn)用ELISP0T 方法，由 LLNQHACAV、env-236CTL 表位、pol_538CTL 表位、env313CTL 表位、88-96YVNTNMGLK、pol354_365TPARVTGGVF、18-27FLPSDFFPSV、141-151STLPETTWRR、 padre AKFVAAWTLKAAA、pol501-516LHLYSHPIILGFRKI，每條肽各 20 μ g/ml，對(duì)HBcAg (20 μ g/ ml)誘生外周血單個(gè)核細(xì)胞IFN-gamma產(chǎn)生細(xì)胞頻率起明顯的抑制作用(P < 0. 05)。從豬 肝臟中提取的促肝細(xì)胞素(PHGF)能起到更明顯的作用，并且呈明顯的量效關(guān)系。這從一個(gè) 方面反應(yīng)了 T細(xì)胞免疫平衡肽的負(fù)向調(diào)節(jié)特異性免疫反應(yīng)的作用。六、T細(xì)胞免疫平衡肽對(duì)正常免疫系統(tǒng)的影響1.對(duì)固有免疫中的吞噬細(xì)胞功能的促進(jìn)作用。從乳豬新鮮肝臟中提取的低分子量多肽類物(促肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子)，按每天Im g/ 次給小鼠腹腔內(nèi)注射共5次后，用化學(xué)發(fā)光儀測(cè)定，實(shí)驗(yàn)組小鼠腹腔細(xì)胞吞噬細(xì)菌后的化 學(xué)發(fā)光率高比值明顯高于對(duì)照組，峰時(shí)明顯縮短，該制劑還能明顯增強(qiáng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞 產(chǎn)生促凝血活性因子，據(jù)此認(rèn)為該制劑對(duì)巨噬細(xì)胞功能有明顯的促進(jìn)作用(陳華青，張宜 俊。pHGF對(duì)人中性粒細(xì)胞吞噬功能的影響，上海免疫學(xué)雜志，1996年第01期)。增強(qiáng)吞噬 細(xì)胞的吞噬功能，是在感染疾病中運(yùn)用T細(xì)胞免疫平衡肽的一個(gè)重要基石，有利于病原體 的清除和防止并發(fā)感染的產(chǎn)生。2.誘導(dǎo)微弱的特異性免疫反應(yīng)，且具有不完整性T細(xì)胞免疫平衡肽由大量多肽混合而成，模糊掉了個(gè)體MHC和TCR的差異性，可以 不考慮個(gè)體差異。T細(xì)胞免疫平衡肽中肽的同一體重復(fù)頻率低，使形成的pMHC同一體的頻 率降低，從而使其在與個(gè)體全體TCR的雙向選擇中，共存曲線位于右上方，遠(yuǎn)離坐標(biāo)軸，減 少其與正態(tài)分布的TCR頻率的交互區(qū)域，減少發(fā)生激活反應(yīng)的可能性。并且少量由平衡肽 引發(fā)的高親和力PMHC-肽結(jié)構(gòu)，在形成免疫突觸激活T細(xì)胞的過程中，也很可能被平衡肽中 的其它多肽所干擾。理想的抗原，其分子量應(yīng)在IOOkDa以上，一般說，分子質(zhì)量低于5 IOkDa,免疫原 性不佳。已有的多肽疫苗的研究中，抗原表位的免疫原性通常較弱，單獨(dú)使用很難引起較強(qiáng) 的免疫反應(yīng)。它們誘生外周血單個(gè)核細(xì)胞產(chǎn)生IFN-gamma，通常只有ELISP0T這種高度敏感 的檢測(cè)方法才能檢測(cè)得到，用常用的ELISA方法通常檢測(cè)不到。初始T細(xì)胞通過“MHC-抗原肽-TCR”三元體得到抗原識(shí)別信號(hào)(第一信號(hào))之后， 需要有協(xié)同刺激信號(hào)(第二信號(hào))的出現(xiàn)方能活化。第二信號(hào)可有多方面來源，主要來自 APC表面B7分子(配體)和T細(xì)胞表面CD^分子(受體)的結(jié)合。沒有第二信號(hào)，很多 基因(如編碼IL-12的基因)不發(fā)生轉(zhuǎn)錄激活，因而獲得了抗原識(shí)別信號(hào)的T細(xì)胞不能進(jìn) 入克隆增殖分化階段，呈現(xiàn)無能(anergy)狀態(tài)。靜止的APC不表達(dá)或很少表達(dá)協(xié)同刺激分 子。以從豬肝臟中提取的多肽，很可能能激活人體中與對(duì)豬的種屬免疫有關(guān)的TCR，也許它 們?cè)隗w內(nèi)能形成這樣的pMHC-TCR結(jié)構(gòu)，但由于多肽缺乏病原體相關(guān)分子模式(PAMP)，用來 激活固有免疫的模式識(shí)別受體，以此來促進(jìn)共刺激分子和多種細(xì)胞因子的表達(dá)，缺乏共刺 激分子和相應(yīng)的細(xì)胞因子環(huán)境，其免疫活化能力非常有限，另外，即使有激活的效應(yīng)性T細(xì) 胞，也缺乏具體的作用靶器官，它們很可能介導(dǎo)很微量且分散的細(xì)胞毒作用，但這引起的機(jī) 體細(xì)胞死亡，可能相對(duì)于機(jī)體正常的新陳代謝也是微乎其微。運(yùn)用多年的PHGF還未發(fā)現(xiàn)由 于激活免疫細(xì)胞，而導(dǎo)致自身免疫病發(fā)生的報(bào)告，說明其形成的親和力的整體水平仍低于 發(fā)生自身免疫抗原介導(dǎo)的親和力水平。
七、T細(xì)胞免疫平衡肽的制造和使用1.隨機(jī)序列，化學(xué)合成各肽，組成T細(xì)胞平衡肽，用于病毒、細(xì)菌等微生物急性時(shí)T 細(xì)胞免疫的負(fù)向調(diào)節(jié)；可能可以用于自身免疫病的治療。2.動(dòng)物提取，可以取牛、豬、羊等的肝臟、心臟、腎臟、脾臟制作?？梢詥为?dú)一種器官 制作，也可以選多種器官一起混合制造，也可以選不同動(dòng)物的多種器官一起混合制造，以此 來提高多肽的種類，從而減少單個(gè)肽的使用劑量。對(duì)于從蛋白中分解多肽的方式應(yīng)用物理 切割的方式，不得使用有具體酶切位點(diǎn)的蛋白酶水解。用于病毒、細(xì)菌等微生物感染和自身 免疫病的治療。特別是人體臟器提取的多肽，相對(duì)于從豬和牛身上提取的，對(duì)于人體TCR更 具有普遍的低親和力，非常適合用于人體自身免疫病的治療。由于倫理的問題，不能批量生 產(chǎn)，但可以用來制作復(fù)制的模板。3.對(duì)動(dòng)物提取的T細(xì)胞免疫平衡肽，采用化學(xué)分析成分后，選擇部分或全部成分， 采用化學(xué)合成的方式合成，如果由于多肽鏈過長(zhǎng)，難于合成，可采用基因工程的方式，采用 原核表達(dá)生產(chǎn)。4.多肽的廣泛親和力(生物制品一般具有的廣泛親和力，即有廣泛的選擇作用)， 在與人體的雙向選擇中，多肽種類多、單個(gè)肽使用重復(fù)頻率低，減少對(duì)某一具體同一體的選 擇強(qiáng)度，能減少毒性的產(chǎn)生。由于T細(xì)胞免疫平衡肽在q軸上處于左側(cè)，而病源蛋白在體內(nèi) 的表達(dá)量通常達(dá)到μ g以上，甚至mg以上，T細(xì)胞免疫平衡肽的使用劑量應(yīng)該要高100倍， 甚至1000倍以上，達(dá)到mg和g水平，才能推動(dòng)業(yè)已被病原蛋白多肽向右上推遠(yuǎn)的兩條共存 曲線。在這么大的劑量要求下，多肽的種類多樣性顯得尤為重要，這與安全性密切相關(guān)。從 動(dòng)物臟器提取的促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素一次靜脈給藥可以用到360mg甚至更高的劑量，病人都是 能耐受的，說明這類藥物具有非常可靠的安全性。


圖1 :TCR_pMHC信號(hào)傳導(dǎo)通過T細(xì)胞骨架蛋白重排誘導(dǎo)免疫突觸形成，摘自《免疫 學(xué)原理》第144頁(yè)，周光炎主編，上?？茖W(xué)技術(shù)出版社出版。圖2 免疫突觸使多個(gè)TCR-pMHC分子間形成功能性親和力引起T細(xì)胞激活，摘自 《免疫學(xué)原理》第144頁(yè)，周光炎主編，上?？茖W(xué)技術(shù)出版社出版。圖3 表示TCR在pMHC作用下，有同一體向相似體，直至不同體的變化過程。圖4 在親和力q的橫軸上，相似體fl中五個(gè)位點(diǎn)上，A、B、D不會(huì)引發(fā)雙向選擇排 斥作用，C、E位點(diǎn)將發(fā)生選擇排斥作用。圖5 某蛋白形成肽段與MHC發(fā)生雙向選擇作用時(shí)的選擇關(guān)系。圖6 某14條不同多肽與某MHC的親和力以及與之對(duì)應(yīng)的對(duì)Th的促增殖能力對(duì) 比圖。摘自《免疫學(xué)原理》第8頁(yè)，周光炎主編，上?？茖W(xué)技術(shù)出版社出版。圖7 其它不同來源的多肽群與介導(dǎo)核心抗原多肽群高親和力的TCR的親和力在 核心抗原多肽群與其相關(guān)高親和力的TCR的雙向選擇作用坐標(biāo)中的示意圖。圖8 正常人體中某TCR共存曲線下pMHC分布背景示意圖。圖9 乙肝病毒核心抗原形成的pMHC與其相對(duì)于的某特異性TCR發(fā)生免疫激活過 程的雙向選擇作用關(guān)系圖。圖10 乙肝病毒核心抗原形成的pMHC與其相對(duì)于的某特異性TCR發(fā)生免疫殺傷過程的雙向選擇作用關(guān)系圖。圖11 低親和力肽群J對(duì)高親和力肽群C與其特異性TCR之間的雙向選擇作用的 影響示意圖。圖12 拮抗肽99R、無效肽99A與激活肽MCC的促增殖活性的比較。圖13 在限定的激活肽-MHC密度的情況下，拮抗肽和無效肽均可以阻斷T細(xì)胞的 效應(yīng)功能。5C. C7T細(xì)胞和CH27-ICAM-GFP B細(xì)胞，加入途中相應(yīng)濃度的多肽，共培養(yǎng)56小 時(shí)，然后用ELISA方法檢測(cè)IL-12的濃度。圖14:一個(gè)動(dòng)態(tài)變化的狹窄范圍的TCR拮抗肽模型。曲線代表了一群pMHC復(fù)合 體作為某一個(gè)給定TCR的配體的假設(shè)分布。由右開始向左移動(dòng)，Tl/2(TCR-pMHC相互作用 的半衰期)減少，最佳刺激T細(xì)胞的激動(dòng)肽越來越少。越來越多的肽表現(xiàn)出低的活化潛力 (增加f，肽的頻率)，最終延伸至一個(gè)無效表型，它們沒有能力參與MHC簇的形成，這些肽本 身不刺激T細(xì)胞。TCR拮抗肽是假設(shè)占據(jù)了弱激動(dòng)肽和無效肽之間一個(gè)狹窄的動(dòng)態(tài)區(qū)域，它 們能有足夠的相互作用時(shí)間，傳遞一個(gè)信號(hào)異常或不完整的信號(hào)，而無效肽相互作用時(shí)間 不足夠長(zhǎng)，它們自己的不產(chǎn)生任何信號(hào)活化信號(hào)。圖15 =T細(xì)胞免疫平衡肽對(duì)特異性CTL效應(yīng)的影響示意圖。此圖在《醫(yī)學(xué)免疫學(xué)》 第三版(陳慰峰主編，人民衛(wèi)生出版社出版)第3頁(yè)插圖的基礎(chǔ)上示意。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1從動(dòng)物組織中制備T細(xì)胞免疫平衡肽1.選取健康的乳豬或未哺乳新生牛，取新鮮肝臟、心臟、腎臟和脾臟等，用注射用 水洗凈后，24 °C左右剪碎或切碎；2.按重量體積為1 1加入滅菌注射用水，于低溫條件下反復(fù)勻漿10分 鐘，得勻漿液；將勻漿液放入零下60度 70度的低溫中冷凍結(jié)冰后，將速融液迅速升溫至 85°C，恒溫10分鐘，以達(dá)到大分子蛋白熱變性，并去除大分子蛋白；3.熱變性后，4°C，3000轉(zhuǎn)/分，離心20分鐘，棄沉淀，取上清；4.分級(jí)超濾及病毒滅活將離心上清以超濾器進(jìn)行分級(jí)超濾。一級(jí)超濾，收集分 子量30000道爾頓以下的組分；二級(jí)超濾，收集分子量為10000道爾頓以下的多肽組分，然 后，可按需要，進(jìn)一步超濾，獲取不同分子量的組分。目標(biāo)組分，60°C保溫10小時(shí)，滅活病5.以0. 45um、0. 22um微孔膜過濾，將檢查合格的過濾液加入賦形劑，適量分裝，凍
干而成。實(shí)施例2采用化學(xué)合成方法制備T細(xì)胞免疫平衡肽多肽的制備用Fmoc固相肽合成法，首先將一個(gè)用Fmoc基團(tuán)對(duì)α -氨基進(jìn)行保護(hù) 的氨基酸通過一個(gè)支臂連結(jié)到一個(gè)不溶性載體上，隨后將α-氨基脫保護(hù)，用溶液洗滌氨 基酸-支臂-樹脂。將第二個(gè)預(yù)先活化的α -氨基保護(hù)的氨基酸通過耦聯(lián)反應(yīng)連接上去，縮 合反應(yīng)完成后，用溶液洗滌，重復(fù)進(jìn)行脫保護(hù)、耦聯(lián)，直到得到目的肽。最后將肽-支臂-樹 脂裂解。多肽純化，用HPLC法，粗肽產(chǎn)品經(jīng)C18高壓柱分離純化，用液相色譜儀跟蹤收集所需流出液，樣品峰合并后去鹽、凍干，制得多肽精品。以HBcAg (18-27)合成為例(1) Fmoc-Val-Wang樹脂的溶脹及脫Fmoc保護(hù)稱取Fmoc-Val-Wang樹脂62. 5克(150目，0. 8mmol/g)，裝入專用的反應(yīng)器中，開 啟CS936生產(chǎn)型多肽合成儀總電源，打開工作站，調(diào)用事先編著的接肽程序。用700mlDMF 浸泡，使樹脂充分溶脹，氮?dú)獯蹈?。加?00ml20% PIP的DMF溶液，25°C振搖30分鐘。氮 氣吹慮去PIP，用DMF洗滌3次，氮?dú)獯蹈伞?2) Fmoc-Ser (tBu)-Val-樹脂的制備加入Fmoc-Ser (tBu)-0H57. 5g, H0Bt20. 5g, DIC 50. 6g，300mlDMF，將混合物 25°C
振搖1小時(shí)。氮?dú)獯蹈?，DMF洗滌3次，氮?dú)獯蹈?。加?00ml20% PIP的DMF溶液，25°C振搖30分鐘。氮?dú)獯蹈?，用DMF洗滌6次，
氮?dú)獯蹈伞?3) Fmoc-Pro-Ser (tBu) -Val-樹脂的制備加入Fmoc-Pro-OH 50. 6g，H0Bt20. 5g，DIC 50. 6g，300mlDMF，將混合物 25°C振搖 1 小時(shí)。氮?dú)獯蹈?，DMF洗滌3次，氮?dú)獯蹈?。加?00ml20% PIP的DMF溶液，25°C振搖30分鐘。氮?dú)獯蹈?，用DMF洗滌6次，
氮?dú)獯蹈伞?4) Fmoc-Phe-Pro-Ser (tBu) -Val-樹脂的制備加入Fmoc-Phe-OH 58. lg，H0Bt20. 5g，DIC 50. 6g，300mlDMF，將混合物 25°C振搖 1 小時(shí)。氮?dú)獯蹈?，DMF洗滌3次，氮?dú)獯蹈?。加?00ml20% PIP的DMF溶液，25°C振搖30分鐘。氮?dú)獯蹈桑肈MF洗滌6次，
氮?dú)獯蹈伞?5) Fmoc-Phe-Phe-Pro-Ser (tBu) -Val-樹脂的制備加入Fmoc-Phe-OH 58. lg,H0Bt20. 5g，DIC 50. 6g，300mlDMF，將混合物 25°C振搖 1 小時(shí)。氮?dú)獯蹈?，DMF洗滌3次，氮?dú)獯蹈?。加?00ml20% PIP的DMF溶液，25°C振搖30分鐘。氮?dú)獯蹈桑肈MF洗滌6次，
氮?dú)獯蹈伞?6) Fmoc-Asp (OtBu) -Phe-Phe-Pro-Ser (tBu) -Val-樹脂的制備加入Fmoc-Asp(OtBu)-OH 61.7g, H0Bt20. 5g, DIC 50. 6g,300mlDMF,將混合物 25°C振搖1小時(shí)。氮?dú)獯蹈?，DMF洗滌3次，氮?dú)獯蹈?。加?00ml20% PIP的DMF溶液，25°C振搖30分鐘。氮?dú)獯蹈桑肈MF洗滌6次，
氮?dú)獯蹈伞?7) Fmoc-Ser (tBu) -Asp (OtBu) -Phe-Phe-Pro-Ser (tBu) -Val-樹脂的制備加入Fmoc-Ser (tBu)-OH 57. 5g, H0Bt20. 5g, DIC 50. 6g，300mlDMF，將混合物 25°C 振搖1小時(shí)。氮?dú)獯蹈?，DMF洗滌3次，氮?dú)獯蹈伞＜尤?00ml20% PIP的DMF溶液，25°C振搖30分鐘。氮?dú)獯蹈?，用DMF洗滌6次，
氮?dú)獯蹈伞?8) Fmoc-Pro-Ser (tBu) -Asp (OtBu) -Phe-Phe Pro-Ser (tBu) -Val- _對(duì)月旨的制備加入Fmoc-Pro-OH 50. 6g，H0Bt20. 5g，DIC 50. 6g，300mlDMF，將混合物 25°C振搖 1小時(shí)。氮?dú)獯蹈桑珼MF洗滌3次，氮?dú)獯蹈?。加?00ml20% PIP的DMF溶液，25°C振搖30分鐘。氮?dú)獯蹈?，用DMF洗滌6次，
氮?dú)獯蹈伞?9)Fmoc-Leu-Pro-Ser(tBu)-Asp (OtBu)-Phe-Phe-Pro-Ser(tBu)-Val-樹脂的制 備加入Fmoc-Leu-OH 53. lg，H0Bt20. 5g，DIC 50. 6g，300mlDMF，將混合物 25°C振搖 1 小時(shí)。氮?dú)獯蹈?，DMF洗滌3次，氮?dú)獯蹈?。加?00ml20% PIP的DMF溶液，25°C振搖30分鐘。氮?dú)獯蹈?，用DMF洗滌6次，
氮?dú)獯蹈伞?10) Fmoc-Phe-Leu-Pro-Ser (tBu) -Asp (OtBu) -Phe-Phe-Pro-Ser (tBu) -Val-樹脂 的制備2加入Fmoc-Phe-OH 58. lg，H0Bt20. 5g，DIC 50. 6g，300mlDMF，將混合物 25°C振搖 1 小時(shí)。氮?dú)獯蹈?，DMF洗滌3次，氮?dú)獯蹈?。加?00ml20% PIP的DMF溶液，25°C振搖30分鐘。氮?dú)獯蹈?，用DMF洗滌6次，
氮?dú)獯蹈?。再用無水乙醇洗滌3次。抽干后，放入真空氮?dú)獯蹈善髦械獨(dú)獯蹈?，得保護(hù)的 HBcAg (18-27)樹脂 103g。(11) Phe-Leu-Pro-Ser-Asp-Phe-Phe-Pro-Ser-Val 的制備取103g保護(hù)的HbcAg (18-27)樹脂轉(zhuǎn)移到切肽瓶中，冷卻，邊攪拌邊加入切肽試劑 (TFA/HBr/TIS/EDT = 700ml/28ml/43ml/21ml)，25°C攪拌 4 小時(shí)。過濾，減壓濃縮，濾液加 無水乙醚沉淀，收集沉淀，用乙醚洗，P2O5干燥，獲得切肽后的HBcAg(18-27)粗品，約45g。純化將45g HbcAg (18-27)粗品溶于20L純化水中，過濾，濾液經(jīng)C18柱純化，流動(dòng)相 O-IMNH4Ac:乙腈(75-25)，流速為300ml/min。用HPLC跟蹤收集所需要的流出液。樣品峰 合并后去鹽，凍干，得成品12. 5g(MW :11 )，總收率約22%。按上述方法合成其他多肽。將各種肽按一定的比例配比用無菌PBS溶解，過濾除 菌，加入賦形劑凍干制成。實(shí)施例3ELISP0T方法檢測(cè)合成多肽混合物和PHGF對(duì)HBcAg誘生IFN-gamma的抑制作用目 的采用HBcAg聯(lián)合刺激人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)誘生IFN-gamma，觀察不同濃度 的合成多肽混合物和PHGF對(duì)IFN-gamma產(chǎn)生的影響，以此反映它們對(duì)T細(xì)胞特異性免疫的 調(diào)節(jié)作用實(shí)驗(yàn)試劑RPMI1640培養(yǎng)基和胎牛血清，淋巴細(xì)胞分離液，anti-human CD3，HBcAg，合成的十 肽(前文中提及)，PHGF, ELISP0T試劑盒，固體肝素鈉抗凝劑，雙蒸餾水，無菌去離子水。實(shí)驗(yàn)方法健康人6名，采血前至少需禁食6小時(shí)。用高壓滅菌消毒的采血管在無菌條件下 取志愿者或者患者外周血5ml，肝素鈉100單位抗凝，輕輕搖勻使之達(dá)到抗凝作用。每份血
16標(biāo)本予5mlRPMI-1640 (含雙抗、室溫)稀釋混勻，2等份分置于2管盛有5ml的淋巴分層液 上，注意保持界面清晰。2000轉(zhuǎn)離心20分鐘后吸取界面淋巴細(xì)胞層，予RPMI-1640(含雙 抗、室溫)洗滌兩次，繼懸于Iml RPMI-1640(含雙抗、10^^03，室溫)，冰醋酸融解紅細(xì)胞， 計(jì)數(shù)，將細(xì)胞濃度調(diào)至2X 107ml。在操作過程中需嚴(yán)格無菌，動(dòng)作要輕柔，減少細(xì)胞損傷， 保證細(xì)胞活力。在2000r/min轉(zhuǎn)速下分離單個(gè)核細(xì)胞，離心20分鐘。操作前嚴(yán)格要求平衡， 減少離心管破裂的現(xiàn)象。在超凈臺(tái)內(nèi)吸取單個(gè)核細(xì)胞層，盡量少吸淋巴細(xì)胞分離液和血漿 成分，減少淋巴細(xì)胞分離液和血清成分對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾。刺激物采用兩步稀釋法.第一 步，將刺激物稀釋成所需終濃度的10倍，然后稀釋成2倍備用.在業(yè)經(jīng)IFNy單抗包被和 小牛血清封閉的96孔微孔板小孔中，加入受檢細(xì)胞4X IO5個(gè)/孔和相應(yīng)刺激物，同一樣品 均設(shè)復(fù)孔，置37°C、5% CO2溫育15 20h，經(jīng)洗滌后，相繼用生物素化抗IFN γ多抗和酶標(biāo) 記的山羊抗生物素抗體作用，繼用Activator I、II顯色后經(jīng)儀器閱讀計(jì)數(shù)斑點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果
權(quán)利要求
1.T細(xì)胞免疫平衡肽是由分子量在10000或以下的隨機(jī)氨基酸序列、數(shù)量在10條以上 的多肽混合而成，其特征在于其可以對(duì)正在發(fā)生的T細(xì)胞介導(dǎo)的針對(duì)大分子蛋白、細(xì)胞和 組織等以及病毒和細(xì)菌等微生物的特異性免疫反應(yīng)，尤其是對(duì)劇烈的特異性反應(yīng)能造成干 擾，對(duì)其進(jìn)行負(fù)向調(diào)節(jié)，降低特異性T細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞的活化、增值能力、效應(yīng)能力，減少 多種細(xì)胞因子的產(chǎn)生和分泌能力，使特異性免疫反應(yīng)變得更溫和而持久，并且這種作用可 以不考慮病人的遺傳背景。
2.根據(jù)權(quán)利要求1，該多肽混合物的分子量范圍可以是0 10000，也可以是800 2000，也可以是800 3000，也可以是1000 2000，也可以是800 1000，也可以是800 10000，也可以是800 1000和1300 1800兩個(gè)區(qū)段，包括0 10000中除只含0 700 的區(qū)段外的任意區(qū)段和任意幾個(gè)區(qū)段組合。
3.根據(jù)權(quán)利要求1，該多肽混合物對(duì)T細(xì)胞介導(dǎo)的特異性免疫反應(yīng)的干擾作用，主要通 過干擾MHC-特異性免疫反應(yīng)介導(dǎo)病原肽-TCR形成起作用，包括干擾介導(dǎo)特異性免疫反應(yīng) 的病原肽與MHC的結(jié)合、pMHC與特異性TCR的結(jié)合；另外，也通過抑制病原特異性免疫反應(yīng) 的免疫突觸形成、減少免疫突觸中MHC-特異性免疫反應(yīng)介導(dǎo)病原肽-TCR的數(shù)量和密度，干 擾免疫突觸中強(qiáng)烈的活化信號(hào)的傳遞起作用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1，該多肽混合物可以由化學(xué)方法合成和(或)基因工程菌表達(dá)而獲 得，也可以從富含蛋白質(zhì)的脊椎動(dòng)物中提取獲得。
5.根據(jù)權(quán)利要求1、2、4，該隨機(jī)多肽混合物可根據(jù)藥效學(xué)和(或)臨床研究結(jié)果，形成 多肽數(shù)目、氨基酸序列和含量限定的混合多肽，以此形成固定配方的T細(xì)胞免疫平衡肽。
6.根據(jù)權(quán)利要求4，將動(dòng)物肝臟提取的多肽物質(zhì)促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素、心臟提取的多肽物 質(zhì)心肌肽素轉(zhuǎn)變成T細(xì)胞免疫平衡肽。
7.根據(jù)權(quán)利要求1，該多肽混合物的制劑形式為凍干粉劑，也可以是水劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求1，該多肽混合物的使用量在0.5mg/kg 50mg/kg之間，通過靜脈給藥。
9.根據(jù)權(quán)利要求1，該多肽混合物在嚴(yán)重的流感、SARS、手足口病、病毒性肺炎、細(xì)菌感 染和嚴(yán)重的自身免疫病等伴隨有過度特異性T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，而導(dǎo)致病理過程的疾 病中的運(yùn)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求4和9，從人體臟器中提取的T細(xì)胞免疫平衡肽，用于人類自身免疫 疾病的治療，該多肽混合物可根據(jù)化學(xué)成分分析結(jié)果，選擇部分或全部成分，用化學(xué)合成和 基因工程表達(dá)聯(lián)用的方法制備。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種多肽混合物，它可以不必考慮病人的遺傳背景，干擾MHC-病原肽-TCR的形成，包括干擾病原肽與MHC的結(jié)合以及pMHC與特異性TCR的結(jié)合，抑制特異性T細(xì)胞免疫反應(yīng)發(fā)生時(shí)的免疫突觸形成，抑制免疫突觸中MHC-特異性免疫反應(yīng)介導(dǎo)病原肽-TCR的數(shù)量和密度，抑制免疫突觸中強(qiáng)烈的活化信號(hào)的傳遞，對(duì)正在發(fā)生的劇烈的T細(xì)胞所介導(dǎo)的特異性免疫反應(yīng)進(jìn)行負(fù)向調(diào)節(jié)，降低特異性免疫細(xì)胞的活化、增值、效應(yīng)能力，使過激的T細(xì)胞特異性免疫反應(yīng)變得更平和而持久，用于嚴(yán)重的流感、SARS、手足口病、病毒性肺炎、細(xì)菌感染和嚴(yán)重的自身免疫病等伴隨有過度T細(xì)胞特異性免疫反應(yīng)發(fā)生的疾病的治療。
文檔編號(hào)A61P31/04GK102060929SQ20101019613
公開日2011年5月18日 申請(qǐng)日期2010年6月7日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月7日
發(fā)明者夏書奇 申請(qǐng)人:夏書奇