專利名稱：：治療皮膚損傷的制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種治療皮膚損傷的制劑，特別是含有水溶性堿性蛋白酶和膠原蛋白的外用制劑。
背景技術(shù)：
：人的皮膚因機(jī)械傷，如刺割、擦傷、挫傷、外科手術(shù)，或燒燙傷、凍傷，以及潰瘍、褥瘡、痔瘡等許多疾患等，都會(huì)造成的損傷。皮膚損傷的康復(fù)與受損傷或異常的區(qū)域內(nèi)機(jī)體粒細(xì)胞的形成和成皮化息息相關(guān)。由于新的上皮組織和結(jié)締組織形成需要有細(xì)胞的增殖和遷移，因此任何可以促進(jìn)損傷區(qū)域內(nèi)細(xì)胞增殖、分化、和遷移的成分都對(duì)康復(fù)有幫助(uspat.6,635,272B2；USpat.5，876，744；USpat.5，891，558)。已知有人使用以下物質(zhì)治療皮膚損傷，如氯化溶菌酶、血活素、獾油、尿囊素、積雪草甙、鋅等。然而，這些物質(zhì)對(duì)皮膚損傷的治療效果都不理想，不能使得損傷在短期內(nèi)完全康復(fù)。這些問(wèn)題的原因歸結(jié)于它們對(duì)上皮的修復(fù)、膠原的合成、微循環(huán)的改善、粒細(xì)胞的形成和成皮化的貢獻(xiàn)甚少。這些發(fā)明的缺陷在于不能有效清除諸如腿部潰瘍、褥瘡潰瘍和灼傷等部位的壞死細(xì)胞和組織碎片。相關(guān)文獻(xiàn)見(jiàn)本文附錄。因此，需要有一種能夠修復(fù)上皮細(xì)胞，有效治療皮膚破損的藥物和方法，不通過(guò)外科方法就能有效清除壞死細(xì)胞或壞死組織，從而促進(jìn)新皮膚的形成，并且不留疤痕。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種有效修復(fù)皮膚破損的配方，不通過(guò)外科方法能夠促進(jìn)新皮膚的形成，并且不留疤痕。本發(fā)明的技術(shù)方案如下一種治療和修復(fù)皮膚損傷的制劑，其特征是含有40%(W/W)蛋白酶和/或5%-30%(W/W)膠原蛋白；所述蛋白酶的比活是2502000酶單位/克；所述膠原蛋白的分子量為30008000。優(yōu)選的蛋白酶是水溶性堿性蛋白酶；可以來(lái)源于植物，如木瓜蛋白酶、無(wú)花果蛋白酶或菠蘿蛋白酶，也可以來(lái)源于動(dòng)物，如糜蛋白酶、胰蛋白酶，也可以來(lái)源于細(xì)菌，如鏈霉菌蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶；所述比活指每克酶蛋白所含的活力單位。優(yōu)選的膠原蛋白是部分水解的低分子量水溶性膠原蛋白。所述膠原蛋白主要來(lái)源于動(dòng)物，如燕窩膠原蛋白、魚皮膠原蛋白、驢皮膠原蛋白。在本發(fā)明的配方制劑中，蛋白酶主要起到治療皮膚損傷的作用，膠原蛋白主要起到修復(fù)皮膚作用。因此，治療初期，藥物中應(yīng)主要以蛋白酶為主。而到治療后期主要目的是修復(fù)皮膚，消除皮膚瘢痕，所以應(yīng)使用主要成分是膠原蛋白的藥物。因此，配方中可以僅有蛋白酶，或僅有膠原蛋白，也可以兩種活性成分都存在。所述蛋白酶可以使用一種，也可以使用幾種。所述膠原蛋白可以使用一種，也可以使用幾種。本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的精神，可以制備出各種蛋白酶和膠原蛋白不同比例、不同含量的制劑，以滿足實(shí)踐中的多種需要。本發(fā)明制劑中可以含有抗菌劑或防腐劑，選自3-二羥甲基-5，5_二甲基乙內(nèi)酰脲、溴硝丙二醇、聚六亞甲基胍、2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮、對(duì)硝基苯甲酸丙酯等。本發(fā)明制劑中還可以含有止痛劑或麻醉劑，選自普魯卡因、苯佐卡因、利多卡因、達(dá)克羅寧、地卡因等。本發(fā)明制劑中還可以含有甘油、糖、可溶淀粉等成分。本發(fā)明提供的配方為外用制劑。可根據(jù)需要，按照本領(lǐng)域公知的制藥方法制成多種劑型，包括乳膏劑、凝膠劑、乳膏劑、貼劑等。根據(jù)藥物的不同劑型和要求，本發(fā)明的制劑中可加入酶制劑可接受的其他輔料，如賦形劑、穩(wěn)定劑、防腐劑以及外用藥常用的輔料等。還可以在本發(fā)明的配方中加入不影響酶活性的麻醉或止痛藥物，可以在治療過(guò)程中緩解患者的疼痛。本發(fā)明的配方既可用于治療皮膚損傷和皮膚疾病，又能用于對(duì)因如糖尿病潰瘍等造成的皮膚損傷和瘢痕的修復(fù)。所述皮膚損傷包括皮膚外傷、手術(shù)創(chuàng)傷，其中外傷包括機(jī)械傷、燒燙傷、凍傷；所述皮膚疾病包括皮膚龜裂，糖尿病或其他原因引起的皮膚潰瘍、肛瘺、褥瘡、粉刺、各種皮疹；所述皮膚還包括粘膜，如可用于角膜傷、牙齦膿腫的治療；所述瘢痕包括癬痕、妊娠斑、蝴蝶斑、曬斑等。本發(fā)明的原理是利用水溶性酶類清除掉壞死細(xì)胞或組織的殘留物，以及傷處充滿死亡白細(xì)胞和細(xì)菌的粘稠狀的物質(zhì)，創(chuàng)造出一個(gè)消毒的環(huán)境，然后用促進(jìn)新皮組織形成的多肽生長(zhǎng)因子加速損傷的康復(fù)。蛋白成分敷施在損傷表面，像一把微型的手術(shù)刀，會(huì)割除大多數(shù)受損傷的細(xì)胞，而保留健康細(xì)胞。酶通過(guò)受損傷的細(xì)胞膜進(jìn)入受損細(xì)胞，并且消化內(nèi)部的蛋白質(zhì)。但它沒(méi)法通過(guò)健康細(xì)胞的雙層膜。蛋白質(zhì)被降解為可溶于水的多肽，因此受損部位的壞死組織就會(huì)被清除。本發(fā)明人應(yīng)用上述配進(jìn)行了所涉及的外傷治療，在實(shí)際應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)對(duì)剛造成的損傷使用我們的配方，會(huì)使得康復(fù)速度增加一倍，而且也不會(huì)在痊愈的地方留下疤痕。在本發(fā)明中，重要的成分包括水溶性蛋白酶或膠原蛋白。本發(fā)明應(yīng)用膠原蛋白，或者部分水解的膠原蛋白，處理?yè)p傷部位或異常皮膚。部分水解的膠原蛋白會(huì)失去其抗原性，因此能夠參與到損傷部位或異常皮膚的保護(hù)層重建工作，從而最大限度地發(fā)揮美容的效果而不遺留疤痕。添加的膠原蛋白也可能活化膠原蛋白的受體，使其開(kāi)始調(diào)動(dòng)機(jī)體內(nèi)部重建膠原蛋白層，從而完成創(chuàng)建新鮮的皮膚內(nèi)層。本發(fā)明制劑的使用量和使用方法取決于不同的制劑和患者的具體情況，包括劑型、活性成分的量、年齡、受試者的情況，如是否患有糖尿病等、損傷的程度或部位等。通常的使用方法，如治療外傷時(shí)，可以將配方直接涂覆于傷口上，每日用藥一次至數(shù)次。經(jīng)臨床試驗(yàn)證明，本發(fā)明的配方制劑對(duì)皮膚疾患效果好，可清除壞死組織和細(xì)胞，并且加速康復(fù)步驟，同時(shí)不留疤痕。圖1是在考察蛋白酶活性對(duì)糖尿病患者皮膚潰瘍治愈率的影響試驗(yàn)中，給出的酶活性和治愈的速度的關(guān)系。圖中縱座標(biāo)是傷口邊緣長(zhǎng)度(mm)，橫座標(biāo)是用藥時(shí)間(周)。從上到下五條線依次為對(duì)照組(蒸餾水)、以及酶活性為250、500、1000、1500U/g的本發(fā)明制劑。圖中可看出，酶的活性與治愈的速度呈正比。圖2圖5是燙傷皮膚的治療前后照片。其中圖2是未處理的燙傷皮膚；圖3是處理2天后的情況。圖4是第5天的皮膚；圖5是第7天的皮膚。下面的實(shí)施例僅對(duì)本發(fā)明的配方做進(jìn)一步說(shuō)明，實(shí)施例中舉出的具體配方并不限制本發(fā)明的范圍。具體實(shí)施例方式說(shuō)明1、實(shí)施例中使用的原料來(lái)源如下1)水溶性堿性蛋白酶胰蛋白酶(購(gòu)自上海錦程生化科技有限公司)、木瓜蛋白酶(購(gòu)自南寧龐博生物工程有限公司)、糜蛋白酶(購(gòu)自濟(jì)寧和美生物工程有限公司)、鏈霉菌蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶(購(gòu)自武漢遠(yuǎn)程科技發(fā)展有限公司)、無(wú)花果蛋白酶(購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑北京有限公司)、以及菠蘿蛋白酶(購(gòu)自廣西科學(xué)院生物研究所)。以下實(shí)施例中，凡未注出的，蛋白酶的比活度是250u/g。在實(shí)際操作中，可根據(jù)所用酶的活度不同，對(duì)酶的用量按比例進(jìn)行增減。2)抗菌劑或防腐劑3-二羥甲基-5，5_二甲基乙內(nèi)酰脲(購(gòu)自洛陽(yáng)科恩精細(xì)化學(xué)品有限公司)、溴硝丙二醇(購(gòu)自廣州偉伯化工有限公司)、聚六亞甲基胍(購(gòu)自上海黛龍生物工程科技有限公司)、2_甲基-4-異噻唑啉-3-酮(購(gòu)自洛陽(yáng)科恩精細(xì)化學(xué)品有限公司)、對(duì)硝基苯甲酸丙酯(購(gòu)自無(wú)錫江大百泰科技有限公司)。3)止痛劑或麻醉劑普魯卡因(購(gòu)自上海銳聰實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司)、苯佐卡因(購(gòu)自常州市陽(yáng)光醫(yī)藥原料有限公司)、利多卡因(購(gòu)自徐州萊恩藥業(yè)有限公司)、達(dá)克羅寧(購(gòu)自武漢市合中化工制造有限公司)、地卡因(購(gòu)自廣州偉伯化工有限公司)。4)膠原蛋白膠原蛋白(江西可生生化有限公司、武漢市合中醫(yī)藥制造有限公司)、小分子膠原蛋白(上海中邦斯瑞生物藥業(yè)技術(shù)有限公司、珠海市遠(yuǎn)城醫(yī)藥化工有限公司)。2、下列制劑的制備方法，按本領(lǐng)域常規(guī)方法制備。實(shí)施例1含一種蛋白酶乳膏制劑配方(一)配方鏈霉菌蛋白酶20g甘油10g，可溶淀粉10g，葡萄糖20g，溴硝丙二醇0.2g，碳酸氫鈉0.3g，利多卡因0.lg，蒸餾水加至100g。實(shí)施例2含一種蛋白酶乳膏制劑配方(二)配方枯草桿菌蛋白酶20g甘油10g，可溶淀粉10g，葡萄糖20g，聚六亞甲基胍0.2g，碳酸氫鈉0.3g，對(duì)硝基苯甲酸丙酯0.0625g，蒸餾水加至100g。實(shí)施例3含一種蛋白酶乳膏制劑配方(三)配方糜蛋白酶20g甘油10g，可溶淀粉10g，葡萄糖20g，2_甲基_4_異噻唑啉-3-酮0.2g，碳酸氫鈉0.3g，對(duì)硝基苯甲酸丙酯0.0625g，蒸餾水加至100g。實(shí)施例4含兩種蛋白酶乳膏制劑配方(一)配方木瓜蛋白酶(250U/g)10g，枯草桿菌蛋白酶(250U/g)10g，甘油10g，可溶淀粉10g,葡萄糖20g,溴硝丙二醇0.2g，碳酸氫鈉0.3g，普魯卡因0.lg,蒸餾水加至100g。實(shí)施例5含兩種蛋白酶乳膏制劑配方(二)配方無(wú)花果蛋白酶(250U/g)5g，枯草桿菌蛋白酶(250U/g)5g，甘油60g，可溶淀粉8g,葡萄糖15g，新科-990.15g，碳酸氫鈉0.5g，苯佐卡因0.lg,蒸餾水加至100g。實(shí)施例6含兩種蛋白酶乳膏制劑配方(三)配方菠蘿蛋白酶(500U/g)10g，鏈霉菌蛋白酶(500U/g)10g，甘油10g，可溶淀粉10g，葡萄糖20g，3-二羥甲基_5，5-二甲基乙內(nèi)酰脲0.2g，碳酸氫鈉0.3g，利多卡因0.lg,蒸餾水加至100g。實(shí)施例7含兩種蛋白酶乳膏制劑配方(四)配方木瓜蛋白酶(1000U/g)10g，糜蛋白酶(1000U/g)10g，甘油10g，可溶淀粉10g，葡萄糖20g，溴硝丙二醇0.2g，碳酸氫鈉0.3g，地卡因0.15g，蒸餾水加至100g。實(shí)施例8含兩種蛋白酶乳膏制劑配方(五)配方兩種糜蛋白酶(1500U/g)10g，鏈霉菌蛋白酶(1500U/g)10g，甘油10g，可溶淀粉10g，葡萄糖20g，達(dá)克羅寧0.2g，碳酸氫鈉0.3g，對(duì)硝基苯甲酸丙酯0.0625g,蒸餾水加至100g。實(shí)施例9含兩種蛋白酶乳膏制劑配方(六)配方糜蛋白酶10g，枯草桿菌蛋白酶10g，甘油10g，可溶淀粉20g，葡萄糖20g，聚六亞甲基胍0.2g，碳酸氫鈉0.3g，對(duì)硝基苯甲酸丙酯0.0625g，蒸餾水加至100g。實(shí)施例10含兩種蛋白酶乳膏制劑配方(七)配方鏈霉菌蛋白酶10g，胰蛋白酶10g，甘油10g，可溶淀粉10g，葡萄糖20g，溴硝丙二醇0.2g，碳酸氫鈉0.3g，對(duì)硝基苯甲酸丙酯0.0625g，蒸餾水加至100g。實(shí)施例11含兩種蛋白酶乳膏制劑配方(八)配方糜蛋白酶10g，枯草桿菌蛋白酶10g，甘油10g，可溶淀粉10g，葡萄糖20g，溴硝丙二醇o(jì).2g，碳酸氫鈉0.3g，普魯卡因0.02g，蒸餾水加至100g。實(shí)施例12含蛋白酶與膠原的乳膏制劑配方(一)配方枯草桿菌蛋白酶(1500U/g)10g，鏈霉菌蛋白酶(1500U/g)10g，，水溶性膠原蛋白30g,PEG40030g,己二醇8g，吐溫802g，聚六亞甲基胍0.2g，碳酸氫鈉0.3g，對(duì)硝基苯甲酸丙酯0.0625g,蒸餾水加至100g。實(shí)施例13含蛋白酶與膠原的乳膏制劑配方(二)配方糜蛋白酶(500U/g)10g，水解低分子膠原蛋白30g，新科-990.2g，碳酸氫鈉60.3g，對(duì)硝基苯甲酸丙酯0.0625g，蒸餾水加至100g。實(shí)施例14含蛋白酶與膠原的乳膏制劑配方(三)配方胰蛋白酶10g，水解低分子膠原蛋白30g，甘油10g，可溶淀粉10g，葡萄糖10g，達(dá)克羅寧0.2g，蒸餾水加至100g。實(shí)施例15含蛋白酶與膠原的乳膏制劑配方(一)配方枯草桿菌蛋白酶10g，鏈霉菌蛋白酶10g，，水溶性膠原蛋白30g，PEG40030g，己二醇8g，吐溫802g，聚六亞甲基胍0.2g，碳酸氫鈉0.3g，對(duì)硝基苯甲酸丙酯0.0625g，蒸餾水加至100g。實(shí)施例16僅含膠原的乳膏制劑配方配方水解低分子膠原蛋白30g，甘油10g，可溶淀粉10g，葡萄糖10g，溴硝丙二醇0.2g，碳酸氫鈉0.3g，蒸餾水加至100g。藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)1糖尿病患者皮膚潰瘍的治療患有糖尿病的志愿者共15人作為被試進(jìn)行試驗(yàn)，隨機(jī)分為5組，每組3人。在潰瘍處切口直徑20毫米，將本發(fā)明的制劑按100微克/處/天施用于患處。所用制劑的配方成分見(jiàn)表1。對(duì)照組涂抹消毒蒸餾水?；颊吡粼哼^(guò)夜觀察，施用16小時(shí)后除去藥用紗布，并進(jìn)行檢測(cè)。清創(chuàng)活性按藥用紗布除去后所治愈的百分比表達(dá)，在處理過(guò)程中通過(guò)鏡檢清創(chuàng)面積、組織病理學(xué)檢查、血管形成、新皮膚分化和形成、以及整個(gè)康復(fù)過(guò)程的動(dòng)力學(xué)等。所以結(jié)果總結(jié)于表1，表明蛋白酶加速損傷的康復(fù)。表1清創(chuàng)程度取決于配方中蛋白酶的活性<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表1的結(jié)果表明，配方中高酶活性的效果比較好。但低酶濃度的配方對(duì)面積小的損傷好，因?yàn)椴粫?huì)造成疼痛?？祻?fù)過(guò)程從清除壞死組織和細(xì)胞開(kāi)始，到治愈傷口結(jié)束。酶活性和治愈的速度的關(guān)系如圖1。圖中可看出，酶的活性與治愈的速度呈正比。藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)2燙傷的治療附圖25的照片展示了使用實(shí)例8配方治療被滾燙的食用油燙傷手臂的過(guò)程。圖2是未處理的燙傷情景。將實(shí)例8配方在藥用紗布上涂抹2毫米厚，然后敷于創(chuàng)面，每24小時(shí)換藥一次；圖3是處理2天后的情況。從第3天開(kāi)始，用實(shí)例16的配方取代實(shí)例8配方，損傷面需要重建新皮和組織。從圖4可以看出在第5天新皮組織有明顯的愈合。圖5是第7天的情況，基本已康復(fù)。如果不使用本發(fā)明所涉及的配方，上述損傷通常需要幾周或甚幾個(gè)月才能完全康復(fù)，且留有疤痕。藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)3手術(shù)創(chuàng)面的治療2例患者肺部慢性積液，需進(jìn)行胸腔開(kāi)窗手術(shù)排出積液創(chuàng)面狀況胸腔開(kāi)窗術(shù)后，創(chuàng)面開(kāi)始化濃，而且手術(shù)傷到了肋骨，造成肋骨附近軟組織壞死。術(shù)后創(chuàng)面的恢復(fù)比較困難。治療將實(shí)例4配方的乳膏直接注射到損傷處，共處理4次，每日一次。結(jié)果第1個(gè)病例是左側(cè)胸腔開(kāi)窗術(shù)，在不流血的情況下成功清除了壞死組織，加快了新鮮組織的生長(zhǎng)和傷口的快速愈合。在使用酶配方的過(guò)程中沒(méi)有副作用或抗藥性出現(xiàn)。第2個(gè)病例是右側(cè)胸腔做開(kāi)窗手術(shù)。經(jīng)過(guò)類似的處理后，施用實(shí)施利14配方的乳膏，傷口完全愈合且沒(méi)有明顯的疤痕。在治療過(guò)程中，2個(gè)病人除了使用本發(fā)明的配方以外，沒(méi)有使用抗生素類藥物，避免了抗生素的副作用。權(quán)利要求一種治療和修復(fù)皮膚損傷的制劑，其特征是含有1％～40％(W/W)蛋白酶和/或5％--30％(W/W)膠原蛋白；所述蛋白酶的比活是250～2000酶單位/克；所述膠原蛋白的分子量為3000～8000。2.權(quán)利要求1所述的制劑，所述蛋白酶是水溶性堿性蛋白酶；所述膠原蛋白是水溶性膠原蛋白。3.權(quán)利要求1所述的制劑，所述蛋白酶選自木瓜蛋白酶、無(wú)花果蛋白酶、菠蘿蛋白酶、糜蛋白酶、胰蛋白酶、鏈霉菌蛋白酶或枯草桿菌蛋白酶；所述膠原蛋白選自燕窩膠原蛋白、魚皮膠原蛋白或驢皮膠原蛋白。4.權(quán)利要求13中任一所述的制劑，所述蛋白酶是一種或一種以上；所述膠原蛋白是一種或一種以上。5.權(quán)利要求13中任一所述的制劑，含有抗菌劑或防腐劑，選自3-二羥甲基-5，5-二甲基乙內(nèi)酰脲、溴硝丙二醇、聚六亞甲基胍、2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮或?qū)ο趸郊姿岜サ取?.權(quán)利要求13中任一所述的制劑，含有止痛劑或麻醉劑，選自普魯卡因、苯佐卡因、利多卡因、達(dá)克羅寧或地卡因。7.權(quán)利要求13中任一所述的制劑，含有甘油、糖或可溶淀粉中的一種或幾種。8.權(quán)利要求13中任一所述的制劑，其劑型是乳膏劑、凝膠劑、乳膏劑或貼劑。9.權(quán)利要求13中任一所述的制劑，所述皮膚損傷包括皮膚外傷、手術(shù)創(chuàng)傷，也包括疾病造成的皮膚損傷。10.權(quán)利要求13中任一所述的制劑，所述皮膚包括損傷包括粘膜的損傷。全文摘要本發(fā)明涉及一種治療皮膚損傷的制劑，特別是含有水溶性堿性蛋白酶和膠原蛋白的外用制劑。本發(fā)明的配方既可用于治療皮膚損傷和皮膚疾病，又能用于對(duì)因如糖尿病潰瘍等造成的皮膚損傷和瘢痕的修復(fù)。文檔編號(hào)A61K38/39GK101822828SQ201010171289公開(kāi)日2010年9月8日申請(qǐng)日期2010年5月13日優(yōu)先權(quán)日2010年5月13日發(fā)明者仵小南申請(qǐng)人:仵小南