專利名稱：一種含有天然成分的食品添加劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種含有天然成分的食品添加劑。
背景技術：
冠心病、心肌梗死、中風和其它血管栓塞性疾病是威脅健康的主要因素。這類疾病 的共同特征是動脈的粥樣硬化或者狹窄。血小板是導致動脈粥樣硬化形成和發(fā)生的因素， 它釋放生長因子、化學聚合物質和其它因子，加速動脈粥樣硬化過程。另外，血小板在動脈 損傷部位或附近的聚集導致動脈粥樣硬化的形成和急性血小板血栓形成。低密度脂蛋白(LDL)膽固醇也與動脈粥樣硬化有關。已有報道指出血液循環(huán)中的 非致動脈粥樣硬化性低密度脂蛋白膽固醇通過多不飽和脂類的氧化轉化為致動脈粥樣硬 化性低密度脂蛋白膽固醇，導致對脫輔基蛋白質的修飾。醫(yī)生使用各種藥物，如阿司匹林，來治療動脈粥樣硬化性疾病。但是，阿司匹林具 有副作用，包括胃腸道刺激癥狀等。還有一些介入療法如血管成形術可以使狹窄的動脈擴 張以增加血流量。但是，介入技術會產生動脈內膜或中層的損傷，并將血栓形成表面暴露。 正是這種原因，對于已知或懷疑有冠心病的病人來說，主要關心的是血管形成術后的再狹 窄和突發(fā)性冠心病死亡。鑒于動脈粥樣硬化的嚴重后果和有關的醫(yī)療費用，需要藥物和營養(yǎng)的共同介入， 以適用于防止這類疾病的發(fā)生或再發(fā)生。流行病學研究表明，在來源于水果和蔬菜的食用黃酮類物質攝入量和冠心病死亡 之間存在著負相關性。這種相關性被認為是水果和蔬菜中的黃酮類物質的抗氧化和血小板 抑制特性所致。已經發(fā)現(xiàn)某些黃酮類物質，包括存在于葡萄籽和葡萄皮提取物中的黃酮類物質， 與阿司匹林表現(xiàn)出的有益健康作用相關，但是沒有阿司匹林的副作用。盡管如此，但是許多 黃酮類物質來源中的黃酮類物質生物利用度或活性較低。鑒于這種原因，某些食品來源的 黃酮類物質需要大劑量才實用。結果是，基于每天可利用的黃酮類物質來說，許多黃酮類物 質來源不切實用，太昂貴，或者二者兼有。
發(fā)明內容
本發(fā)明涉及如下發(fā)現(xiàn)，即將某些黃酮類物質與酶組合制成食品添加劑的形式，可 以減少為有效降低哺乳動物體內血小板活性和低密度脂蛋白膽固醇氧化所需的添加劑劑 量。本發(fā)明還涉及一種與血小板活性和低密度脂蛋白膽固醇氧化有關的疾病的治療方法， 其通過給藥黃酮類物質和酶的組合物以減少血小板活性和低密度脂蛋白膽固醇氧化。一方面，本發(fā)明的特征在于一種食品添加劑，它包括至少一種黃酮類物質來源和一種酶，其中該添加劑在以大約30mg/kg或更小劑量能有效抑制哺乳動物體內血小板活性 和低密度脂蛋白膽固醇氧化。根據本發(fā)明，食品添加劑的一個例子是PR0VEXCV 。應當理 解為本發(fā)明所使用的添加劑劑量是指黃酮類物質來源和酶的結合重量。另外，作為添加劑 還可以包括其它成分如填充劑、潤滑劑、載體等。該食品添加劑中的黃酮類物質來源可以是來源于葡萄籽提取物、葡萄皮提取物、 越桔(bilberry)提取物、銀杏(ginkgo biloba)提取物或槲皮素。酶可包括真菌蛋白酶、 酸穩(wěn)定性蛋白酶、中性穩(wěn)定蛋白酶、堿性穩(wěn)定蛋白酶或菠蘿蛋白酶。另一方面，本發(fā)明的特征在于提供一種食品添加劑，它包括至少一種黃酮類物質 來源，其中該添加劑在以大約30mg/kg或更小劑量能有效抑制哺乳動物體內血小板活性和 低密度脂蛋白膽固醇氧化。優(yōu)選的是，根據本發(fā)明的食品添加劑還包括一種酶，它可以基本 上減少達到這種抑制所需的劑量。另一方面，本發(fā)明的特征是提供一種抑制哺乳動物體內血小板活性或低密度脂蛋 白膽固醇氧化或同時抑制二者的方法，該方法是通過給藥一種包括黃酮類物質來源和酶的 食品添加劑，其中該添加劑可以在以大約30mg/kg或更小劑量有效減少血小板活性和低密 度脂蛋白膽固醇氧化。該方法也可以用來治療與血小板活性或低密度脂蛋白膽固醇氧化有 關的疾病，該方法是通過給藥一種包括能有效減少血小板活性或低密度脂蛋白膽固醇氧化 的黃酮類物質和酶的食品添加劑。另一方面，本發(fā)明的特征是提供一種包裝在一種包裝材料之中的、含有能有效減 少血小板活性和低密度脂蛋白膽固醇氧化的食品添加劑的產品。其中的包裝材料標示有該 食品添加劑在大約30mg/kg或更小劑量可以有效減少血小板活性或低密度脂蛋白膽固醇 氧化或抑制二者的標記。在該產品的另一個實施方案中，包裝材料可以標示有該食品添加 劑適用于治療與血小板活性或低密度脂蛋白膽固醇氧化有關的疾病的標記。除非另有定義，本發(fā)明使用的所有科技術語和縮寫與本發(fā)明相關領域中的普通技 術人員所通常理解的含義相同。盡管在實施或檢驗本發(fā)明的過程中可以使用與本發(fā)明所述 相似或相同的方法和材料，但是下面還是描述了合適的方法或材料。本發(fā)明所涉及的所有 出版物、專利申請、專利和其他參考文獻均被本發(fā)明作為參考文獻全部引用。如果有所不清 楚，本發(fā)明的說明書，包括定義，將用于解釋和說明。
通過下面的詳細描述以及要求保護的權利要求書將更清楚地描述本發(fā)明的其他 特征和優(yōu)點。圖1表示用于制備動物模型的示意圖，該模型形成狹窄的動脈，用于測量當間歇 性血栓形成時所觀察到的冠狀動脈血流變化，以便模仿因動脈粥樣硬化所致冠狀動脈狹窄 的病人體內所發(fā)生的疾病。圖2是一種帶狀記錄圖，表示反復的血小板介導性血栓形成，之后形成栓塞，通過 測量Folts模型形成的狹窄動脈中的血流發(fā)現(xiàn)這種栓塞產生了循環(huán)血流減少(CFR’ s)。圖3是一種帶狀記錄圖，顯示攝入PR0VEXCV 后循環(huán)血流減少消失，這是因為 PR0VEXCV 這種本發(fā)明的優(yōu)選食品添加劑在體內具有血小板抑制活性。圖4是一種帶狀記錄圖，顯示在給藥PR0VEXCV 后的2個半小時當給以腎上腺素時，通過攝入PR0VEXCV 消除的循環(huán)血流減少不再重新出現(xiàn)。圖5表示一種描述本發(fā)明用以測定體外血小板活性的全血集合度計量方法的示 意圖。圖6是用于表示在維生素E、ProVeX Plus 或PR0VEXCV 存在下于234nm下測定 的低密度脂蛋白膽固醇氧化時間過程的曲線圖。圖7是表示由PR0VEXCV 產生的抗低密度脂蛋白膽固醇氧化的預防水平圖。圖8是表示低密度脂蛋白膽固醇氧化速率的曲線圖。
具體實施例方式本發(fā)明涉及如下發(fā)現(xiàn)，即將某些黃酮類物質與酶組合制成食品添加劑的形式，可 以減少為有效降低哺乳動物體內血小板活性和低密度脂蛋白膽固醇氧化所需的添加劑劑 量。本發(fā)明還涉及一種與血小板活性和低密度脂蛋白膽固醇氧化有關的疾病的治療方法， 其通過給藥黃酮類物質、提取物和酶的組合物以減少血小板活性和低密度脂蛋白膽固醇氧 化。冠心病、腦血管疾病和外周血管閉塞的特征是動脈狹窄。如果動脈狹窄再合并血 栓栓塞，血流將進一步減少，可能會發(fā)生心肌梗死或中風。這些疾病與血小板活性和低密度 脂蛋白膽固醇氧化有關。目前治療這類血管栓塞性疾病的方法，如血管成形術，會引起動脈 內膜和中層的損傷，這會引起再狹窄、急性血栓形成、心肌梗死和病人突發(fā)性冠心病死亡。 而且，血小板介導性血栓形成對于血管成形術或動脈切除術后的不穩(wěn)定性心絞痛、心肌梗 死和再狹窄的發(fā)生也有一定的作用。本發(fā)明提供了一種防止新生血栓和再形成血栓的食品 添加劑和方法，即通過施用一種能抑制血小板活性和低密度脂蛋白膽固醇氧化的食品添加 劑。評價血小板活性的方法l、Folts 模型Folts冠脈血栓模型(“Folts模型”)用于研究各種動物模型中的血小板聚集和 血栓形成。Folts，J. D.，循環(huán)雜志(增刊4)，83 3-14(1991) ；Folts, J. D.，心血管藥物和療 法雜志，9 31~43(1995) ；Folts 等人，循環(huán)雜志，54 365~370 (1976)。 Folts 模型模仿了因 動脈粥樣硬化引起的冠狀動脈狹窄在病人體內出現(xiàn)的一些問題。使用Folts模型時，需要全部打開麻醉動物的胸腔并暴露心臟。雖然本發(fā)明描 述的實驗使用的是狗，但是可以建立Folts模型的其它動物還包括豬、兔子、猴子和其它 類似動物。而且，F(xiàn)olts模型是一種模擬不穩(wěn)定性心絞痛臨床癥狀和人體內其它血小板介 導性血栓疾病的模型。Samama 等人，Thromb. Haeost. ,68 500~05 (1992) ；Raeder 等人， Am. Heart.!.，104 249~253 (1983) ；Sherry, s.，Cardiovasc. Rev. Rep.，5 1208-19 (1984)； Ikeda 等人，J. Am. Coll. Cardiol. ,21 1008-1017 (1993)。如圖1所示，將彎曲冠狀動脈切斷，并將冠狀動脈流量探針置于動脈上。冠狀動脈 流量探針連續(xù)不斷地測量通過動脈的血流量而不影響該動脈。然后將該動脈用鉗夾后造成 冠狀動脈的內膜和中層損傷。將一種塑料限制性環(huán)置于在動脈損傷處的冠狀動脈外環(huán)以減 小冠狀動脈的內徑。使用血管成形氣囊或其它合適的方法改變狹窄程度或由塑料環(huán)造成的 內徑減小。
用冠狀動脈流量探針測定血栓間歇性形成時冠狀動脈血流的變化。當動脈狹窄 時，血小板周期性的聚集在狹窄處，并損傷部分冠狀動脈。血小板聚集產生血栓(血凝塊)， 其形狀增大，并逐漸切斷冠狀動脈的血流量。當動脈變得閉塞時，血小板聚集后引起血壓升 高，這樣可以推動血塊迫使其通過狹窄處，引起狹窄動脈中冠狀動脈血流的突然恢復。在損 傷動脈中足以能減少血流量的血小板聚集被稱為急性血小板血栓形成(APTF)。人體內血栓性動脈閉塞被認為是由動脈內膜下的血栓形成表面暴露引發(fā)。另外， 最新資料提示各種不同的刺激因素激活血小板粘附和聚集在暴露的血栓形成表面。盡管如 此，應當指出的是本發(fā)明的范圍并不受該特定病理理論的限制。反復的血小板性血栓形成，之后出現(xiàn)栓塞，和觀察到伴發(fā)血流變化被稱作為循環(huán) 血流減少(CFR’s)或循環(huán)血流改變(CFV’s)。本申請文件將使用術語CFR’s。人體股動脈 或冠狀動脈疾病造成的動脈損傷和狹窄也發(fā)現(xiàn)有CFR’ s。Folts等人，Tex. Heart Int. T., 9 19-27 (1982) :Eichom 等人，T Am. Coll. Cardiol. , 17 :43_52(1991)。如圖 2 所示，通過測 量冠狀動脈血流可以測得和監(jiān)測CFR’s。盡管圖2表示的是由冠脈血流觀察到的CFR’s，但 是應當理解為Folts模型適用于一般的動脈血流(例如，股動脈血流)。另外，使用Folts 模型及其改進模型所需的方法記載于Folts，J. D.，循環(huán)雜志(增刊4)，83 =3-14 (1991)； Folts, J. D.,心血管藥物和療法雜志，9 :31-43(1995)，本文作為文獻引用。每單位時間內出現(xiàn)CFR’s的頻率或次數(shù)是對體內血小板活性的直接測定。Folts, J. D.,心血管藥物和療法雜志，9 =31-43(1995)。通過測定狹窄動脈中CFR，s的頻率和程度， 可以用Folts模型評價能夠改變血小板活性的因素，F(xiàn)olts, J. D.，心血管藥物療法雜志，9 31-43(1995)。正是如此，利用Folts模型可以鑒別血小板抑制因子、抑制因子活性的程度、 抑制因子的有效劑量、抑制周期和抑制因子拮抗血小板機動劑的能力。阿斯匹林提供了一種Folts模型的解釋性舉例。Folts模型顯示阿斯匹林抑制血 小板活性并在實驗條件下消除CFR’ s。Folts等人，臨床研究雜志，22 =595(1974)(摘要)； Folts J.，循環(huán)雜志(增刊4)，83 3-14(1991) ；Folts, J. D.，心血管藥物和療法雜志，9 31-43 (1995)。已知阿斯匹林在5mg/kg劑量下抑制血小板活性。當在Folts模型中所用條 件下使用阿斯匹林抑制血小板活性時，通過增加血液中的腎上腺素或去鉀腎上腺素濃度可 以恢復血小板活性。當人體處于緊張、驚嚇、焦慮或興奮時，許多人自然出現(xiàn)這種腎上腺素 的增加。Folts，J. D. &Rowe，G. G. ,Thromb. Res. ,50 :507_516 (1988)。另外，動脈狹窄的增加 也會使得由阿斯匹林消除的CFR’s再出現(xiàn)。Folts，J.，循環(huán)雜志(增刊4)，83 :3_14(1991)。 因此，F(xiàn)olts模型提供了一種評價血小板活性抑制的有效工具。2、血小板集合度試驗測量人體或動物體內血小板活性的第二種方法是全血血小板集合度試驗。本發(fā) 明所述和使用的進行全血血小板集合度評價的設備和方法記載于Chronolog Inc. ,2ffest Park Rd. , Haver ton, PA 19083。為了進行該試驗，通過常規(guī)方法抽取血樣，然后將血樣置 于塑料試管中。將一對電極置于血樣中測量血樣中的電阻。由于血液中存在的大量離子和 電解質，通常血液中的電阻較低。將一種已知的血小板聚集刺激因子，如腎上腺素二磷酸鹽 (ADP)或膠原蛋白，加入到血樣中以激活血小板。激活的血小板粘附在血小板集合度試驗 中所用的電極上。如圖5所示(右邊)，當血小板聚集在電極上時血樣中的電阻通常會以S 形增加。如果受試者施用一種抑制血小板活性的物質，加入血小板刺激因子后出現(xiàn)的電阻增加將會減小。阿斯匹林提供一種使用血液集合度試驗的說明性舉例。來源于人體的血樣具有一 定基礎水平的血小板活性。加入ADP會增加血樣的電阻。參見圖5，右邊，“ADP”曲線。在 人體給藥325mg阿斯匹林片劑后2小時抽取第二份血樣。加入ADP后的血小板激活不會使 血小板活性增加到開始血樣所觀察到的水平。參見圖5，右邊，“ADP+ASA”曲線。所觀察到 的血樣中電阻的降低被表述為由阿斯匹林引起的血小板體外活性降低百分率。當一個服 用阿斯匹林的人在抽取血樣之前使其腎上腺素水平升高，所觀察到的阿斯匹林的抑制活性 已經消失。參見圖5，右邊，“ADP+ASA+EPI”曲線。Folts, J. D.,心血管藥物和療法雜志，9 31-43(1995) ；Ingerman-ffojenski &Silver, Thromb. Haemost. ,51 154-156(1984)。當使用膠原蛋白刺激血小板活性時，阿斯匹林也會有類似的反應。當在血液集合 度試驗中使用膠原蛋白激活血小板活性時，阿斯匹林降低了血小板活性大約30-40%。因 此，血液集合度技術也可以用來作為測定由藥物或黃酮類物質產生的血小板抑制效果的另 一種方法。 3、評價低密度脂蛋白膽固醇氧化可以通過幾種方法確定低密度脂蛋白膽固醇氧化或對其的預防。Kleinveld等人， Clin. Chem. ,38(10) =2066-2072(1992)描述了本發(fā)明所述和使用的低密度脂蛋白氧化實 驗方法。所述該方法的優(yōu)選方式包括使用常規(guī)技術從受試者采集的全血血樣中提取低密度 脂蛋白膽固醇。將提取的低密度脂蛋白膽固醇分為對照組和實驗組樣本。通過向每一種低 密度脂蛋白膽固醇樣本中加入銅離子溶液催化低密度脂蛋白的氧化。已知銅離子可以催化 和加強低密度脂蛋白膽固醇的氧化。對照組低密度脂蛋白膽固醇樣本含有提取的低密度脂蛋白膽固醇和銅離子。對照 組樣本提供了一種對抽取血液的受試者飲食中和由該血液制備的低密度脂蛋白膽固醇中 抗氧化劑的基礎測試。將試驗低密度脂蛋白膽固醇樣本在其它可以作為抗氧化劑的化合物 如食品添加劑存在或不存在下與銅離子結合。另外，在對受試者采集血樣之前通過常規(guī)方法給藥一種抗氧化劑，這可以有助于 體內測定抗氧化劑的活性。為了測定體內的低密度脂蛋白膽固醇抗氧化劑活性，在給藥一 種被檢測的抗氧化劑來源之前或之后采集全血樣本。銅離子加速低密度脂蛋白膽固醇氧化中共軛二烯的產生，其光譜在234nm處有吸 收峰。因此，按照如圖6所示的隨著時間推移跟蹤234nm處吸收率的增加可以監(jiān)測低密度 脂蛋白膽固醇的氧化?？寡趸瘎┛梢酝蒲拥兔芏戎鞍啄懝檀贾卸┊a生的啟動。結果， 可以通過對低密度脂蛋白膽固醇氧化之前觀察到的時間推移(延遲時間)進行計算來比較 含有抗氧化劑的低密度脂蛋白膽固醇樣本。參見圖7。延遲時間是在本發(fā)明所述低密度脂 蛋白氧化實驗條件下防止低密度脂蛋白膽固醇被氧化損傷的最佳信號。延遲時間越長表示 抗氧化劑性能越好。抑制血小板活性和減少低密度脂蛋白膽固醇氧化許多復雜因素導致動脈粥樣硬化、冠心病和相關疾病。在這些因素當中，已知血 小板與動脈內壁的相互作用會加速動脈粥樣硬化的過程。而且，血小板活性增加是與動脈 粥樣硬化的發(fā)展和暫時性及持續(xù)性血栓形成密切相關的。因此，基于每天都能減少血小板 活性的因素應當可以抑制動脈粥樣硬化、冠心病和相關疾病的發(fā)展或發(fā)生。Folts等人，T. Myocard. Ischemia, 6 (8) :33_40 (1994)。流行病學研究表明在攝入富含抗氧化劑黃酮類物質或維生素E食品的消耗和冠心 病減少之間存在負相關性。Hertog 等人，Lancet，342 (8878) :1007_11，(1993) ；ffaterhouse 等人，HypernutritiousFoods, Agscience, Inc.，Auburndale, F1.，219-238 (1997)。己知含 有黃酮類物質的食品來源包括紅葡萄酒、啤酒、葡萄汁、水果和蔬菜。從葡萄籽、葡萄皮、銀 杏、越桔和其它類似水果、蔬菜和草藥中獲得的提取物也是黃酮類物質和抗氧化劑的來源。盡管如此，為了有效地獲得與黃酮類物質和抗氧化劑有關的益處，還必須克服許 多障礙。障礙之一是食品來源的黃酮類物質中活性成分的生物利用度。如果生物利用度或 活性較低，人體必須消耗大量的血小板抑制劑或抗氧化劑食品添加劑以獲得血小板抑制劑 或抗氧化劑帶來的益處。結果是，低生物利用度會導致食品添加劑對于許多消費者來說不 實用、太昂貴，或二者兼有。另外，與不同的黃酮類物質有關的血小板抑制和抗氧化劑特征的有效性在特定 的黃酮類物質之間也有所不同，例如，來源于葡萄的黃酮類物質比來源于柑桔類水果汁的 黃酮類物質在自愿者人體和動物體內的是更好的血小板抑制劑。Folts等人，T. Am. Coll. Cardiology, 29 (2) (J曾干A) :303A(1997) :Folts, T. D. , T. Am. Coll. Cardiology, 29 (2)(增 刊 A) :226A(1997) :Folts 等人，T. Am. Coll. Cardiology, 29 (2)(增干!J A) :180A(1997)。而且，血流中的環(huán)境條件是不穩(wěn)定的。要達到有效，一種食品添加劑必須在各種條 件下，包括不同程度的緊張、興奮和勞累等這些傾向于升高血小板活性水平的條件下，都是 有效的。最后，許多黃酮類物質的食品來源，還含有不需要的成分，如葡萄酒和啤酒中的酒 精、葡萄汁中的糖分和熱量。對于各種黃酮類物質和藥物還存在相關的毒性。例如，許多文 獻記載阿司匹林具有副作用，包括胃腸道刺激、在腎上腺素存在下有效性的喪失和在極度 動脈狹窄環(huán)境下不能抑制CFR’ s。因此，希望創(chuàng)制一種實用和價值有效而適用的食品添加劑，它能夠在各種不同條 件下抑制血小板活性和低密度脂蛋白膽固醇氧化。還希望這種適用的食品添加劑的主要特 征是通過含有能增加吸收該食品添加劑活性成分的組分來增加該食品添加劑的生物利用 度。本發(fā)明已經發(fā)現(xiàn)了這樣一種添加劑，并且本文對該添加劑進行了描述和提請專利保護。在第一個實施方案中，本發(fā)明提供了一種食品添加劑，它含有至少一種黃酮類化 合物來源和一種酶，該食品添加劑給哺乳動物以大約30mg/kg或更少的劑量服用時，可以 有效地抑制體內血小板活性和低密度脂蛋白膽固醇氧化。該食品添加劑可以進一步含有黃 酮類物質來源，如葡萄籽提取物、葡萄皮提取物、銀杏提取物、槲皮素、越桔提取物或其它任 何特定的黃酮類物質?！霸擖S酮類物質來源，，可以是來源于任何來源，并且可以包括合成或 從已知來源中純化的黃酮類物質。該黃酮類物質來源也可以是，例如，被確定為單獨或作為 結合物具有高活性的一種或多種黃酮類物質，其中該黃酮類物質是從含有多種黃酮類物質 的復合混合物中，如從一種植物提取物中分離得到的。雖然不受特定作用理論的限制，應當相信本發(fā)明公開的食品添加劑通過增加生物 利用度或藥理相互作用以發(fā)揮協(xié)同作用，抑制血小板活性和抑制低密度脂蛋白膽固醇氧 化。在本發(fā)明的有關方面，該食品添加劑在血小板激動劑(如，腎上腺素)濃度升高的情況 下仍能保持有效地降低血小板活性和抑制低密度脂蛋白膽固醇氧化。
食品添加劑的制劑的實例包括下述一種或多種成分水果提取物、蔬菜提取物、消 化酶、草藥、黃酮類物質、抗氧化劑和其它類似物。適用消化酶舉例說明的實例包括胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、真菌蛋白酶、酸穩(wěn)定蛋白 酶、中性穩(wěn)定蛋白酶、堿性穩(wěn)定蛋白酶和菠蘿蛋白酶。適用黃酮類物質的舉例說明的實例包括黃酮類物質的兒茶素、矢車菊苷配質、原 花色素、槲皮素、蕓香苷和糖苷的形式。本發(fā)明的食品添加劑可以作為一種植物類(phytosome)成分通過口服、靜脈內、 皮下、舌下、胃內或通過任何其它可接受的給藥方法給藥。另外，該食品添加劑可以與任何 合適的載體結合使用以便于給藥。本發(fā)明使用Folts模型檢測的食品添加劑可以通過靜脈 內或胃內給藥。通過胃內膜吸收通常需要2-4小時。因此，胃內給藥食品添加劑在該食品 添加劑攝入后2-4小時才會影響CFR’ s。市場上的食品添加劑一般制成可口服給藥的劑型。適合于食品添加劑的給藥的劑 型包括丸劑、膏劑、粉劑、液體制劑和其它普通口服制劑。對于本發(fā)明所述的各種劑型的食 品添加劑可以使用常規(guī)的生產技術進行生產。本發(fā)明所述的食品添加劑另外還可以含有硬 脂酸鎂作為潤滑劑以便將該食品添加劑制備成膠囊。硬脂酸鎂一般的使用濃度為l_4mg/ 每膠囊，優(yōu)選l_2mg/每膠囊?？梢杂肍olts模型來鑒別能夠降低血小板活性的食品添加劑的制劑。按照本發(fā)明 所述，制備狗的冠狀動脈使其表現(xiàn)出CFR’ s。然后通過一種認可的方法以測定的劑量對狗 給藥。監(jiān)測該食品添加劑的劑量對觀察到的CFR’的影響。通過使用Folts模型可以確定 有效劑量、半衰期和吸收程度。從狗體采集的血樣提供了有關該添加劑濃度和血流內血小 板活性水平的信息?？梢允褂闷渌膶嶒瀬碓u價適用的食品添加劑的特征。例如，通過在給藥食品添 加劑后可使狹窄程度增加來確定是否有CFR’ s的再出現(xiàn)。另外，通過在給藥食品添加劑之 前或之后的不同時間點施用血小板激動劑可以鑒別出能夠在血小板激活條件下保持CFR 消除作用的食品添加劑。適用的激動劑包括腎上腺素和去鉀腎上腺素。用于此目的的腎上 腺素適用劑量包括靜脈內以0. 2 u g/kg/分鐘的劑量給藥腎上腺素15分鐘。也可以對患有人類冠心病的自愿者或病人給以本發(fā)明所述的和要求專利保護的 食品添加劑及其類似產品，使用本發(fā)明所述的血小板集合度實驗和低密度脂蛋白膽固醇氧 化實驗來評價該食品添加劑的效果。適用的食品添加劑的制劑可以包括下述一種或幾種成分葡萄籽提取物、葡萄皮 提取物、銀杏提取物、越桔提取物、槲皮素和一種酶混合物。可以按照下述的重量比制備該 食品添加劑葡萄籽提取物12% w/w,葡萄皮提取物20% w/w，銀杏提取物10% w/w，越桔提 取物10%，槲皮素24% w/w和酶混合物24% w/w。根據本發(fā)明含有黃酮類物質和酶的適用食品添加劑是PR0VEXCV 。PR0VEXCV 可 以從 Melaleuca, Inc. , Idaho Falls, Idaho 獲得。PR0VEXCV 每380mg膠囊含有下述組分
組分制劑中％含量用量葡萄籽提取物12%45mg銀杏提取物10%38mg越桔提取物10%38mg葡萄皮提取物20%76mg槲皮素24%92mg酶混合物24%91mg總量 100%380mg
根據本發(fā)明，制備該添加劑時也可以包括除酶混合物之外的上述全部組分。 每380mg PR0VEXCV 膠囊中所用的酶混合物含有如下酶
組分
真菌蛋白酶20053 真菌蛋白酶20054
酸穩(wěn)定性幫蛋白酶 菠蘿蛋白酶
占酶混合物的％量 25% 25% 25% 25%
總量
活性單位 11250HUT 11250HUT 3375 SAPU 5760000PU
100%真菌蛋白酶20053和20054是酸性、中性和堿性蛋白酶的酶混合物。HUT活性是 在基于水解變性血紅蛋白的FCC HUT測試中測得的一種酶的活性。一個HUT單位被定義 為在一分鐘內產生一種水解物(hydrosylate)所用酶的量，且該水解物在275nm的吸收 率等于一種1. 10mg/ml的酪氨酸的0. 006N鹽酸溶液的吸收率。SAPU活性是在基于水解 Hammarstan酪蛋白底物的FCCSAPU測試中測得的SAPU活性。一個SAPU單位被定義為在 PHU3和37°C條件下每分鐘釋放出1微摩爾酪氨酸所需酶的量。PU活性是在基于水解酪 蛋白的FCC PU測試中測得的一種酶的活性。一個PU單位被定義為在PH6.0和40°C條件 下每小時釋放出1微克酪氨酸所需酶的量。關于上述有關酶的更多信息可以從National EnzymeCompany, Forsyth, Missouri, (417)-546-4796 的有關酶的技術期刊獲得。PR0VEXCV 中含有的組分可以從下述來源獲得。使用的實際來源以下劃線將廠商 標出。組分/提取物 葡萄籽提取物
銀杏提取物
來源
Indena - Milan,Italy polyphenolics-Canadaigua,NY InterHealth-Concord,CA Tri-K Industries-Fanerson，NJ
Indena - Milanjtaly Weinstein Nutritional-Irvine,CA OptiPure-Los Angles,CA Botanicals International-Long
liBeach,CA
越桔提取物
Indena - Milanjtaly OptiPure-Los Angles,CA Chemco Industries-Los Angeles,CA
葡萄皮提取物
Freeman Industries-Tuckahoe,NY Weinstein Nutritional-Irvine,CA Brucia Extracts-Califoenia
槲皮素
Weinstein Nutritional-Irvine,CA Botanicals International-Long Beach,CA Triarco Industries - Wayne,NY
酶混合物
National Enzyme Co.-Forsyth,MO MakWood - Thiensville,WI Botanicals International-Long Beach,CA
柑桔提取物
Botanicals International-Long Beach’CA ProVex Plus 每125mg膠囊含有下述組分
組分 葡萄籽提取物 銀杏提取物 越桔提取物 葡萄皮提取物 柑桔提取物
制劑中％含量 20% 8% 8% 24% 40%
用量
25mg
10mg
10mg
30mg
50mg
125mg
總量 100% 在使用含有除酶混合物以外的PR0VEXCV 全部組分的添加劑的Folts模型中的 實驗，發(fā)現(xiàn)這種添加劑在大約20mg/kg或更少劑量下能夠有效地消除CFR’ s。已經發(fā)現(xiàn)在Folts模型中觀察到的消除CFR’s所需劑量在將食用黃酮類物質與一種酶結合時還可以進 一步減少。將含有等份的兩種真菌蛋白酶、一種酸穩(wěn)定性蛋白酶和菠蘿蛋白酶的酶混合物 加入到含有除酶混合物以外全部PR0VEXCV 組分的添加劑當中，可以將消除本發(fā)明所用動 物模型中CFR’ s所需的劑量由大約20mg/kg減少到大約10mg/kg。PR0VEXCV 的效率為它可以將本發(fā)明動物模型中消除CFR’ s所需的劑量由ProVex Plus 所需的大約30mg/kg減少到PR0VEXCV 所需的大約10mg/kg。結果是，本發(fā)明食品添 加劑的適用劑量是大約30mg/kg或更少。優(yōu)選的有效劑量是大約20mg/kg或更少。更優(yōu)選 的有效劑量是大約10mg/kg或更少。正是如此，使用具有抗氧化和血小板抑制特性的PR0VEXCV 能夠預防發(fā)生冠心 病、急性栓塞、心肌梗死性死亡和與血小板活性和低密度脂蛋白膽固醇氧化有關的疾病。
本發(fā)明的另一個實施方案包括一種命名為PR0VEXCV2 的食品添加劑。如同 ProVex Plus 和PR0VEXCVTM，PR0VEXCV2 可以被用作一種抑制血小板活性或低密度脂蛋白 膽固醇氧化的食品添加劑。每1638mg的PR0VEXCV2 含有下述組分
組分 制劑中％含量用量
酶混合物4.58%75mg
葡萄籽提取物3.30%54mg
葡萄皮提取物67.77%l,110mg
槲皮素7.32%120mg
銀杏提取物9.71%159mg
越桔提取物7.32%120mg
總量 100%l，6 38mg本發(fā)明所述的食品添加劑，包括PR0VEXCV2 的組分可以從任何供貨方獲得。例 如，可以從上述所列舉的廠商獲得用于PR0VEXCV2 的全部組分。另外，該組分可以從 未經發(fā)酵過的來源獲得。例如，未發(fā)酵過的葡萄籽提取物和未發(fā)酵過的葡萄皮提取物 可以用作本發(fā)明所述的食品添加劑的組分。這種未發(fā)酵過的組分可以從任何供貨方如 Polyphenolics (Canandaigua, NY) —0簡而言之，在制備葡萄酒的過程中使用了發(fā)酵方法。如果該組分是來源于生產葡 萄酒的廠商，那么該組分可是發(fā)酵過的組分，例如，發(fā)酵過的組分，如發(fā)酵過的葡萄籽提取 物或發(fā)酵過的葡萄皮提取物，可以是從經過發(fā)酵的來源，如葡萄，分離的任何組分。相對而 言，未經發(fā)酵過的組分可以是從未經發(fā)酵的的來源分離獲得的任何組分。這種未發(fā)酵過的 組分與發(fā)酵過的組分相比是更有效的黃酮類物質來源。例如，未發(fā)酵過的葡萄籽提取物或 未發(fā)酵過的葡萄皮提取物比發(fā)酵過的葡萄籽提取物或發(fā)酵過的葡萄皮提取物能夠更有效 地抑制血小板活性或低密度脂蛋白膽固醇氧化。應當指出，ProVex Plus 、PR0VEXCV 和PR0VEXCV2 中的每一組分的百分含量可 以改變，只要最終的組合物能夠抑制血小板活性或低密度脂蛋白膽固醇氧化。例如，銀杏提 取物的百分含量可以增加到大于10%。另一方面，本發(fā)明提供了一種抑制哺乳動物體內血小板活性或低密度脂蛋白膽固
13醇氧化的方法，該方法是通過給藥一種含有能有效減少血小板活性或低密度脂蛋白膽固醇 氧化或者抑制二者的至少一種黃酮類物質來源和一種酶的食品添加劑。本發(fā)明的另一方面，提供了一種在哺乳動物中治療與血小板活性或低密度脂蛋白 膽固醇氧化有關的疾病的方法。該方法包括給藥一種含有至少一種黃酮類物質來源和一種 酶的食品添加劑的步驟，該添加劑能在大約30mg/kg或更小劑量有效減少血小板活性和低 密度脂蛋白膽固醇氧化。為了實施所述方法，對哺乳動物通過一種可接受的給藥方法給藥一定劑量的本發(fā) 明所述的食品添加劑。該劑量可以根據情況確定為按小時、天、周或其部分階段給藥。在給 藥食品添加劑后，可以對該哺乳動物的血小板活性和低密度脂蛋白膽固醇氧化程度進行評 價?？梢詫⑵溲“寤钚院偷兔芏戎鞍啄懝檀佳趸潭扰c給藥該食品添加劑之前的程度 加以比較。本發(fā)明另一方面，提供了一種含有能有效降低血小板活性和低密度脂蛋白膽固醇 氧化的食品添加劑的產品。該產品的包裝材料上標示有該食品添加劑適用于在大約30mg/ kg或更小劑量能減少哺乳動物體內血小板活性或低密度脂蛋白膽固醇氧化或二者的標記。 在本發(fā)明產品的另一個實施方案中，該包裝材料上標示有該食品添加劑適用于治療與血小 板活性或低密度脂蛋白膽固醇氧化有關的疾病的標記?？梢允褂萌魏纹胀ǖ陌b和印刷方法制備該該產品。參照下述的說明性實施例可以進一步理解本發(fā)明，這些實施例純屬舉例性的，不 應當理解為限制本發(fā)明權利要求當中所要求保護的真實范圍。實施例實施例1-評價食品添加劑的血小板抑制活性使用Folts，J.，循環(huán)雜志(增刊4)，83 :3_14(1991)中公開的Folts模型方法建立 10只患有冠狀動脈狹窄和中層膜損傷的被麻醉的狗模型，以用于進行評價。連續(xù)監(jiān)控整個 實驗過程當中的血壓和冠狀動脈血流情況。如圖2所示，在給藥PR0VEXCV 前，10只狗在30 分鐘的時間段內出現(xiàn)了 8士3次因急性血小板血栓形成而表現(xiàn)出與圖2中的CFR’ s相似的 CFR’s。所有表示帶狀記錄圖的數(shù)據是基于相同水平，即每12個方格表示10分鐘。給每一 只狗通過胃管給藥10mg/kg的PR0VEXCV 。如圖3所示，在10只狗中，有9只狗在174士24 分鐘內觀察到胃飼給藥10mg/kg PR0VEXCV 可以消除CFR’s。在給藥10mg/kg PR0VEXCV 3 小時后，在30分鐘的時間段內第十只狗中出現(xiàn)的CFR’ s減少為2個CFR’ s。PR0VEXCV 中 的食用黃酮類物質并沒有產生心率和動脈血壓的變化。在Folts模型中的評價提示，由阿司匹林抑制的血小板活性在靜脈內以0. 2 ii g/ kg/分鐘給藥腎上腺素后可以被再激活，F(xiàn)olts，J.，循環(huán)雜志(增刊4)，83 :3-14(1991)。對 于給藥10mg/kg PR0VEXCV 的而消除了 CFR’ s的8只狗，靜脈內以0. 2 u g/kg/分鐘給藥腎 上腺素15分鐘。圖4的右邊顯示，靜脈內在以0. 2 y g/kg/分鐘給藥腎上腺素15分鐘后， 所有8只狗中因胃飼給藥10mg/kg PR0VEXCV 消除的CFR’ s沒有再出現(xiàn)。使用本文所述的全血集合度方法確定全部10只狗的體外血小板活性。在給藥 10mg/kg PR0VEXCV 之前和之后采集每一只狗的血樣并進行檢測。當使用膠原蛋白激活血 小板聚集時，在給藥10mg/kg PR0VEXCV 的所有10只狗的體外全血血小板聚集降低了 40% 士9%。不象圖5中所示的阿司匹林，因腎上腺素而引起的血小板聚集增加在PR0VEXCV 實驗中沒有出現(xiàn)。
_7] _仿丨丨2- ■*口口口_徹低濟趙胃__氧北白牆口向如上所述，當將低密度脂蛋白膽固醇暴露于氧化條件下時，通常通過觀察一定時 間內234nm處(Abs234J的吸收率來測定低密度脂蛋白膽固醇的氧化。測定PR0VEXCV 和 其它物質的抗氧化效率。從自愿者人體的血樣中制備低密度脂蛋白膽固醇。然后將分離的低密度脂蛋白膽 固醇與一種緩沖液、維生素E、ProVex Plus (圖6中的“orig”)^PR0VEXCV (圖6中的 “Curr”)混合。將ProVex Plus 和PR0VEXCV 的實驗溶液制備成0. 5和1. Omg/ml的最終 濃度。選擇的ProVex Plus 和PR0VEXCV 的濃度是基于可接受的血液吸收模型而估計的 食品添加劑的預期血濃度水平。向每一份樣本中加入測定量的銅離子。所使用的維生素E 的量相當于以400IU的維生素E給人體給藥而預期的血中含量。混合之后，監(jiān)測一定時間內每種溶液的Abs234nm。如圖6所示，將低密度脂蛋白膽固 醇與0. 5mg/L或1. 0mg/L的ProVex Plus 或PR0VEXCV —起孵育，其對低密度脂蛋白膽固 醇氧化的防止作用比5. 3IU/L的公知抗氧化劑維生素E觀察到的作用更長。如圖7所示，低密度脂蛋白膽固醇在加入銅離子后的45分鐘才表現(xiàn)出可觀的氧 化作用。上述濃度的維生素E可以防止低密度脂蛋白膽固醇進行氧化的時間達大約95分 鐘。1. 0mg/L的ProVex Plus 防止低密度脂蛋白膽固醇的氧化超過100分鐘。最后，在這 些實驗條件下，1. 0mg/L的PR0VEXCV 防止低密度脂蛋白膽固醇氧化超過150分鐘。因此， ProVex Plus 和PR0VEXCV 是比維生素E更好的抗氧化劑。實施例3-對PR0VEXCV2 的評價使用Folts模型評價狗體內PR0VEXCV2 對血小板活性的作用，并用全血血小板集 合度實驗評價其體外的作用。簡言之，將10只具有兩種性別的mongrel成年狗麻醉，在第 5肋間打開胸腔。將左側彎曲的冠狀動脈切開，并在動脈周圍設置一個電磁流量探針，以測 定冠狀動脈的血流量。在該流量探針的末端，用一種特定的外科鉗夾該動脈3次以造成內 膜和中層膜的損傷。用一個合適內徑的塑料環(huán)置于動脈外環(huán)以形成70%的動脈內徑狹窄。在CFR’ s出現(xiàn)過程中，采集血樣用于體外全血血小板集合度測試。在監(jiān)測CFR’ s的 持續(xù)形成過程20分鐘之后，通過胃管給藥15mg/kg的PR0VEXCV2 。監(jiān)測CFR’s 3小時。當 CFR’ s消失后，抽取第二份血樣以重復體外血小板聚集實驗。然后輸注腎上腺素(0.2i!g/ kg/分鐘)20分鐘以觀察CFR’ s是否再出現(xiàn)。患有冠狀動脈狹窄和內膜損傷的10只狗由于急性血小板血栓形成，以每30分鐘 7士3的頻率出現(xiàn)了 CFR，s。通過胃管給藥15mg/kg的PR0VEXCV2 后，CFR，s消失了 164士29 分鐘。靜脈輸注腎上腺素(0.2i!g/kg/分鐘給藥20分鐘)不會使任何狗內再出現(xiàn)CFR’s。 但是，在5-10mg/kg的阿斯匹林消除CFR’ s后輸注腎上腺素會導致50-60%的實驗狗再出 現(xiàn)CFR’ s。因此，PR0VEXCV2 似乎比阿斯匹林表現(xiàn)出更強的血小板抑制活性。使用全血血小板集合度實驗來評價在給藥PR0VEXCV2 前和后所采集的全血血樣 中血小板的活性。在給藥PR0VEXCV2 后，由ADP(20微摩爾/毫升)引起的血小板聚集降 低了 42士 10% (P < 0. 03) 另夕卜，在PR0VEXCV2 給藥后，由腎上腺素和ADP結合引起的血 小板聚集降低了 32士 11% (P < 0. 05) 使用全血血小板集合度實驗，也在體外評價了 PR0VEXCV2 在人體內對血小板活性的影響。具體講，使12名年齡在22-50歲的健康志愿者(8個男性，4個女性)充實體力。 在研究之前的1周和研究過程中，受試者均戒除茶、酒精飲料、葡萄產品、黃酮類物質和維 生素添加劑，以及包括阿斯匹林在內的所有醫(yī)藥制劑。素食者從本實驗中排除。在實驗的第1天上午8點和中午12點之間，采集每一位空腹志愿者的18毫升靜 脈血樣用于體外全血血小板集合度測試。然后，讓每一位志愿者根據其體重服用5-7個膠 囊(大約20mg/kg/天)的PR0VEXCV2 ，共服用7-14天。7_14天之后，每一位志愿者空腹 回到實驗室，但是服用當天劑量的PR0VEXCV2 ，采集第2次血樣。此血樣在最后一次劑量 的PR0VEXCV2 后大約2-4小時之后采集。簡言之，將18毫升的全血抽取到裝有2毫升3. 8%的檸檬酸鈉作為抗凝劑的注射 器中。馬上用等量的不含防腐劑的鹽水稀釋血液。將1毫升的稀釋血液加入到帶有硅化攪 拌棒的小杯當中，并加熱至37°C保持5分鐘。向小杯中放入一個電極以測量電阻的變化，它 與血小板聚集成比例。一旦記錄了基準的血小板活性，便向該預熱的血樣中加入大劑量的 膠原蛋白(12. 5微克)，并置于集合度計中以獲取最大的血小板聚集反應。跟蹤由血小板 聚集產生的電阻變化7分鐘。使用次高劑量的膠原蛋白(0.5微克/毫升)、12-肉豆蔻酸 13-乙酸佛波醇酯(PMA) (0. 5nmol/ml)，和ADP(20微摩爾/毫升)作為血小板激動劑。另 外在用腎上腺素(0. 5微克/毫升)孵育1分鐘的1毫升血樣中也使用ADP(20微摩爾/毫 升)作為激動劑以聚集血小板。這種聚集反應在對照樣本中重復檢測兩次，并與每天服用 PR0VEXCV2 7-14天后的反應進行比較。在每天服用PR0VEXCV2 7-14天后采集的血樣中，血小板聚集對膠原蛋白(0.5 微克/毫升)、ADP(20微摩爾/毫升)和一種佛波醇酯，12-肉豆蔻酸13-乙酸佛波醇酯 (PMA 0. 5nmol/ml)的反應表現(xiàn)為分別降低 51. 6士41. 1 % (P < 0. 005)、39. 8士41. 5% (P < 0. 005)和 17. 9士 10. 0% (P < 0. 002)。另外，在每天服用 PR0VEXCV2 7-14 天后采集的 血樣中，血小板聚集對腎上腺素(0.5微克/毫升)和ADP (20微摩爾/毫升)的結合的反應 表現(xiàn)為降低了 14. 9 士8. 5% (P < 0. 05)。這些結果表明PR0VEXCV2 的血小板活性抑制機 制可能是通過抑制血小板的蛋白激酶C而起作用，因為在每天給藥PR0VEXCV2 7-14天后， PMA誘導的血小板聚集減少。除了評價PR0VEXCV2 對血小板活性的作用之外，還要研究PR0VEXCV2 對低密 度脂蛋白膽固醇氧化的作用。簡言之，從健康空腹的自愿者采集的血樣中分離低密度脂蛋 白，方法是使用連續(xù)超速離心在1.006g/ml的密度離心去除VLDL/乳糜微粒和在1. 063g/ ml (KBr)從更高密度的HDL和血清蛋白中分離低密度脂蛋白。使用Beckman Optima系統(tǒng)以 100，000rpm(> 4，000, 000xg)每次離心3小時。使用含有EDTA的磷酸鹽緩沖鹽溶液(PBS) 透析該低密度脂蛋白48小時，其中更換幾次不同的緩沖液。然后通過電泳(瓊脂凝膠)檢 測透析的物質表明已經去除了其它的脂蛋白成分和血清蛋白。測定分離的低密度脂蛋白的 蛋白濃度，并用含有EDTA的PBS來稀釋調節(jié)至0. 5g/L。然后將低密度脂蛋白溶液按0. 7ml 的量分成等份裝入小的玻璃容器內，并用旋蓋擰緊。將小瓶和低密度脂蛋白溶液用氮氣沖 洗以去除微量氧氣，以確保穩(wěn)定，并在使用之前儲存于-80°C下。如上所述使低密度脂蛋白氧化。簡言之，用不含EDTA的PBS稀釋該低密度脂蛋 白，方法是在氧化實驗之前，將100微升融化的低密度脂蛋白與900微升的PBS混合。將新 制備的CuCl2 (最終濃度5微摩爾/L) 10微升加入到低密度脂蛋白溶液中，以啟動氧化。在30°C 234nm處通過分光光度計監(jiān)測共軛二烯的形成速率，監(jiān)測5小時，每3分鐘讀取一次吸 收率。該分光光度計帶有6個自動樣本存放處，可以在一次分析中提供最多6個樣本的分 析。在使用體外實驗直接混合方法測試PR0VEXCV2 的活性時，用低密度脂蛋白單獨與PBS 和CuCl2作為對照。低密度脂蛋白的氧化時間過程表現(xiàn)出3個連續(xù)階段第一是延遲期，其中幾乎沒 有任何共軛二烯形成，然后是旺盛期，其中共軛二烯的形成快速增加，最后是分解期。延遲 期定義為CuCl2的加入和旺盛期開始之間的時間段，它被認為是反映了低密度脂蛋白對于 氧化作用的敏感性。低密度脂蛋白膽固醇樣本中共軛二烯的產生速率表示在圖8中。將天然的低密 度脂蛋白膽固醇與等量的已經與維生素E(5. 3mg/L)或PR0VEXCV2TM(1.0mg/L)孵育的低 密度脂蛋白膽固醇進行比較。在氧化開始之前，延遲時間是通過維生素E來延遲，而通 過PR0VEXCV2 可延遲至明顯的較強程度。該結果表明當暴露于銅離子強氧化條件下時， PR0VEXCV2 是一種比維生素E更強的抗氧化劑。本發(fā)明的其它方面、優(yōu)點和變化描述在下述的權利要求書中。
權利要求
用于抑制哺乳動物體內血小板活性和低密度脂蛋白膽固醇氧化的食品添加劑，其包括有效量的至少一種黃酮類物質來源和消化酶，其中所述黃酮類物質來源選自葡萄籽提取物、葡萄皮提取物、越桔提取物、銀杏提取物和槲皮素。
2.權利要求1的添加劑，其中所述消化酶選自真菌蛋白酶、酸性穩(wěn)定蛋白酶和菠蘿蛋 白酶。
3.權利要求1的添加劑，其中所述黃酮類物質來源包括至少一種葡萄提取物。
4.權利要求1的添加劑，其中所述黃酮類物質來源包括越桔提取物。
5.權利要求1的添加劑，其中所述黃酮類物質來源包括銀杏提取物。
6.權利要求1的添加劑，其中所述黃酮類物質來源包括槲皮素。
7.權利要求1的添加劑，其中所述添加劑是丸劑、粉劑或液體形式。
8.權利要求1的添加劑，其中所述黃酮類物質來源是未發(fā)酵過的黃酮類物質來源。
9.用于抑制哺乳動物體內血小板活性和低密度脂蛋白膽固醇氧化的食品添加劑，其包 括有效量的葡萄籽提取物、葡萄皮提取物、銀杏提取物、越桔提取物、槲皮素、真菌蛋白酶、 酸性穩(wěn)定蛋白酶和菠蘿蛋白酶。
10.權利要求9的添加劑，其中所述添加劑是丸劑、粉劑或液體形式。
11.權利要求9或10的添加劑，其中所述添加劑包括12重量％的葡萄籽提取物、20重 量％的葡萄皮提取物、10重量％的銀杏提取物、10重量％的越桔提取物、24重量％的槲皮 素和24重量％的酶混合物。
12.權利要求9或10的添加劑，其中所述添加劑包括3.30重量％的葡萄籽提取物、 67. 77重量％的葡萄皮提取物、9. 71重量％的銀杏提取物、7. 32重量％的越桔提取物、7. 32 重量％的槲皮素和4. 58重量％的酶混合物。
13.—種產品，其含有包裝在包裝材料中的根據前述權利要求之任一項的食品添加劑， 其中所述包裝材料標示有所述食品添加劑用于降低血小板活性或低密度脂蛋白膽固醇氧 化或二者。
14.權利要求13的產品，其中所述包裝材料標示有所述食品添加劑用于治療與血小板 活性或低密度脂蛋白膽固醇氧化或二者相關的病癥。
15.權利要求1-12之任一項的食品添加劑在制備用于抑制哺乳動物體內血小板活性 或低密度脂蛋白膽固醇氧化的藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明提供用于抑制哺乳動物體內血小板活性和低密度脂蛋白膽固醇氧化的食品添加劑，其包括有效量的至少一種黃酮類物質來源和消化酶，其中所述黃酮類物質來源選自葡萄籽提取物、葡萄皮提取物、越桔提取物、銀杏提取物和槲皮素。本發(fā)明還提供用于抑制哺乳動物體內血小板活性和低密度脂蛋白膽固醇氧化的食品添加劑，其包括有效量的葡萄籽提取物、葡萄皮提取物、銀杏提取物、越桔提取物、槲皮素、真菌蛋白酶、酸性穩(wěn)定蛋白酶和菠蘿蛋白酶。本發(fā)明還提供含有所述添加劑的產品以及添加劑的應用。
文檔編號A61K36/00GK101849675SQ20101015112
公開日2010年10月6日 申請日期1998年8月5日 優(yōu)先權日1997年8月6日
發(fā)明者林恩·珀克斯 申請人:麥萊琉卡有限公司