專利名稱：板藍根的應用的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領域，具體涉及板藍根的用途。
背景技術(shù)：
板藍根(radixisatidis)為十字花科植物菘藍(Isatis indigotica Fort.)的干燥根，是中國傳統(tǒng)中藥，歷代本草均有記載。其藥性寒味苦，具有清熱解毒、涼血消斑的功效，臨床廣泛用于抗菌、抗病毒、抗血小板聚集、抗內(nèi)毒素，能夠增強機體的免疫功能。單核/巨噬細胞是一種多功能免疫細胞，在機體的特異性免疫反應中起著重要作用。內(nèi)毒素(LPS)是革蘭氏陰性菌外膜的重要組成部分，是介導系統(tǒng)性炎癥反應綜合癥的主要啟動因子。LPS本身并不造成機體的嚴重損害，它主要通過促使巨噬細胞等釋放大量的細胞因子，這些因子通過自分泌、旁分泌相互聯(lián)系、相互影響，使病變得以發(fā)展。若能利用內(nèi)毒素誘導體外培養(yǎng)的人單核/巨噬細胞分泌白介素等炎癥因子，通過考察板藍根對人單核/巨噬細胞(THP-I)炎癥因子表達的影響，同時借助炎癥因子抗體芯片檢測板藍根對人單核/巨噬細胞分泌的炎癥因子表達的影響，可探討板藍根抗炎作用的機制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在提供板藍根在制備內(nèi)毒素誘導的炎癥因子調(diào)節(jié)劑方面的應用。具體為，將板藍根應用于制備內(nèi)毒素誘導的炎癥因子調(diào)節(jié)劑，尤其是制備白介素抑制劑，白介素包括白介素-6和白介素-1 β ；還有制備金屬蛋白酶組織抑制劑-2蛋白表達的促進劑。單核/巨噬細胞是一種多功能免疫細胞，在機體的特異性免疫反應中起著重要作用。內(nèi)毒素(LPS)是革蘭氏陰性菌外膜的重要組成部分，是介導系統(tǒng)性炎癥反應綜合癥的主要啟動因子。LPS本身并不造成機體的嚴重損害，它主要通過促使巨噬細胞等釋放大量的細胞因子，這些因子通過自分泌、旁分泌相互聯(lián)系、相互影響，使病變得以發(fā)展。本發(fā)明選用LPS作為造模藥物，通過構(gòu)建人單核/巨噬細胞炎癥模型，考察板藍根抗炎作用的機制。結(jié)果顯示，板藍根可顯著抑制內(nèi)毒素誘導單核細胞分泌白介素_6(IL-6) 的活性，對內(nèi)毒素誘導單核細胞分泌白介素-1 β (IL-Ιβ)的活性也有一定的抑制作用，同時，對金屬蛋白酶組織抑制劑-2蛋白(ΤΙΜΡ-2)表達也有一定的促進作用。這一結(jié)果是對板藍根增強人體免疫力研究的重要補充，為闡明板藍根的抗炎作用機制提供了可能的研究靶點。


圖1為實施例2中，空白對照組、LBS組和LBS+板藍根組的人炎癥抗體因子芯片實驗的檢測結(jié)果圖2為IL-6 and IL-I β表達量的炎癥抗體檢測結(jié)果
圖3為TIMP-2表達量的炎癥抗體檢測結(jié)果
具體實施例方式藥品與試劑1、板藍根(自制)，將板藍根藥材分別經(jīng)水回流提取，濃縮，80%乙醇沉淀，制得棕褐色粉末；2、RPMI 1640培養(yǎng)液、高滅活胎牛血清、青、鏈霉素均購自美國Gibco公司；3、苯甲基磺酰氟(PMSF)、蛋白酶抑制劑均購自美國Sigma公司；細菌內(nèi)毒素(LPS) 由SIGMA公司生產(chǎn)，大腸桿菌055 :B5，批號:56H4096 ；4、磷酸鹽緩沖溶液(PBS)自配；細胞培養(yǎng)用水為新鮮三蒸水；其它所用試劑均為分析純；5、人炎癥因子抗體芯片I購自RayBio公司。細胞培養(yǎng)人單核/巨噬細胞(Human acute monocytic leukemia cells，THP-1)購自中科院上海生化細胞所細胞庫。采用RPMI 1640培養(yǎng)液(加入10%牛血清，100U雙抗，)，在37°C， 5% CO2條件下培養(yǎng)。實施例1 LPS介導實驗分組為空白對照組(無LPS)、LPS組、和LPS+板藍根組。Control組加入空白培養(yǎng)液，LPS組終末質(zhì)量濃度為lOOng/ml，LPS+板藍根組LPS和板藍根的終末濃度分別為 100ng/ml和lmg/ml。調(diào)單核細胞密度為1 X IO6個/孔，LPS+板藍根組先加入板藍根，15min 后再加入LPS。各組在37°C，5% CO2條件下培養(yǎng)18h，收集上清液保存待測。實施例2人炎癥抗體因子芯片實驗根據(jù)抗體芯片試劑盒說明，在25°C條件下將芯片膜用2ml封閉緩沖液孵化lh，移去封閉緩沖液，用2ml洗片試劑I在室溫下脫色搖床上洗三次，每次5min。用2ml洗片試劑 II在室溫下脫色搖床上洗三次，每次5min，棄去多余液體。分別加Iml實施例1所制備的各組上清液于膜的蛋白面，室溫孵化1 2h。傾去樣品液，用洗片試劑I在室溫下脫色搖床上洗三次，每次5min。用細1洗片試劑II在室溫下脫色搖床上洗三次，每次5min。取出膜，裝入新孔中，將血管生成抗體液用封閉緩沖液稀釋至適當濃度加入孔中。 室溫下孵育池后，用2ml洗片試劑I在室溫下脫色搖床上洗三次，每次5min。用2ml洗片試劑II在室溫下脫色搖床上洗三次，每次5min。同上方法準備辣根過氧化物酶稀釋液并與膜接觸，室溫下孵育Ih后，用2ml洗片試劑I在室溫下脫色搖床上洗三次，每次5min。用2ml洗片試劑II在室溫下脫色搖床上洗三次，每次5min。經(jīng)化學發(fā)光，顯影，定影。將膠片用凝膠圖象處理系統(tǒng)分析目地斑點的凈光密度值，計算蛋白表達量。所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)士標準差 士s)表示，采用SPSS 13. 0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，組間均數(shù)比較用t檢驗，多個樣本均數(shù)比較用單因素方差分析。實驗結(jié)果表明同空白對照組相比，LPS可以誘導人單核/巨噬細胞分泌IL-I β、 IL-6和IL-8上調(diào)。實驗結(jié)果見圖1。炎癥因子抗體芯片實驗發(fā)現(xiàn)，lmg/ml板藍根+LPS組與LPS組相比，IL-6的表達被顯著抑制(P < 0. 01)，對IL-I β的表達也有一定的抑制作用(P < 0. 05)，如表1、圖1和圖 2 ；但對IL-8的表達無明顯影響。結(jié)果表明板藍根可顯著抑制內(nèi)毒素誘導單核細胞分泌白介素-6的活性，對內(nèi)毒素誘導單核細胞分泌白介素-1 β的活性也有一定的抑制作用。表 權(quán)利要求
1.板藍根在制備內(nèi)毒素誘導的炎癥因子調(diào)節(jié)劑方面的應用。
2.板藍根在制備白介素抑制劑方面的應用。
3.權(quán)利要求2所述板藍根在制備白介素抑制劑方面的應用，其特征在于，所述的白介素為白介素-6。
4.權(quán)利要求2所述板藍根在制備白介素抑制劑方面的應用，其特征在于，所述的白介素為白介素_1β。
5.板藍根在制備金屬蛋白酶組織抑制劑-2蛋白表達的促進劑方面的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及了板藍根的應用。選用內(nèi)毒素作為造模藥物，構(gòu)建人單核/巨噬細胞炎癥模型，考察板藍根抗炎作用的機制，結(jié)果顯示，可將板藍根應用于制備內(nèi)毒素誘導的炎癥因子調(diào)節(jié)劑，尤其是制備白介素抑制劑，白介素包括白介素-6和白介素-1β；還有制備金屬蛋白酶組織抑制劑-2蛋白表達的促進劑。這一結(jié)果是對板藍根增強人體免疫力研究的重要補充，為闡明板藍根的抗炎作用機制提供了可能的研究靶點。
文檔編號A61P29/00GK102210727SQ20101013870
公開日2011年10月12日 申請日期2010年4月2日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月2日
發(fā)明者尚鵬, 裴明 申請人:上海市七寶中學