專利名稱：：依地酸鈣鈉在制備抑制人或哺乳動(dòng)物結(jié)締組織生長因子、單胺氧化酶藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及依地酸鈣鈉在制備治療人類疾病中的藥物中的應(yīng)用，又涉及一種依地酸鈣鈉注射劑，更涉及一種肺部靶向脂質(zhì)注射劑。
背景技術(shù)：
：依地酸鈣鈉(Ca-Na2EDTA)是一種金屬離子螯合劑，能夠用于能與多種二價(jià)、三價(jià)金屬螯合，形成穩(wěn)定的可性金屬絡(luò)合物，現(xiàn)有的依地酸鈣鈉制劑主要為注射劑(lg，5ml)和片劑(0.5g/片)，在臨床上主要用于治療無機(jī)鉛中毒，對(duì)銅、鋅、鐵、錳、鎘、釩、鈷及某些放射性元素如釷、鈾、鐳、钚等亦有一定的促排作用。肺纖維化是"彌漫性間質(zhì)性肺疾病"即"間質(zhì)性肺疾病"的簡稱。肺纖維化是一大組彌漫性肺實(shí)質(zhì)疾病群，病理特征是肺泡壁(包括呼吸性細(xì)支氣管)彌漫性慢性炎癥和間質(zhì)纖維化。特發(fā)性肺纖維化(idiopathicpulmonaryfibrosis,IPF)是最常見肺纖維化類型，占所有肺纖維化的65%。其它肺纖維化類型主要有矽肺、藥物、中毒等引的肺纖維化。IPF病因不明，發(fā)病機(jī)制亦未完全闡明，但已有足夠證據(jù)表明與免疫炎癥損傷有關(guān)，多種發(fā)病機(jī)理完全不同的自身免疫性疾病如哮喘、慢性阻塞性肺炎、紅斑狼瘡、系統(tǒng)性硬化癥均有相當(dāng)一部分病例會(huì)并發(fā)肺纖維化疾病，因此在臨床上多使用皮質(zhì)激素和其它免疫抑制劑如來治療肺部纖維化，然而由于皮質(zhì)激素和其它免疫抑制劑具有很多副作用，并且對(duì)于其它類型的肺纖維化治療效果也不明顯，在使用時(shí)受到很多限制。其它治療肺纖維化的藥物主要有青霉胺，秋水仙堿等，但由于這些藥物在治療肺纖維化時(shí)療效并不確切，并且副作用很大，因此在使用時(shí)也受到很大限制樸紅梅等(結(jié)締組織生長因子在支氣管哮喘大鼠肺組織中的表達(dá)及其與氣道重塑的關(guān)系，中國呼吸和結(jié)核雜志，2007.9,705-707)公開了結(jié)締組織生長因子CTGF與肺纖維化等多種器官纖維化有關(guān)，而單胺氧化酶(MA0)是一種細(xì)胞外酶，無FAD而含有磷酸吡哆醛，只對(duì)伯胺起作用。血清中MA0和結(jié)締組織中的MA0性質(zhì)相似，能促進(jìn)結(jié)締組織的成熟，在膠原形成過程中，參與膠原成熟的最后階段架橋形成，使膠原和彈性硬蛋白結(jié)合。上述CTGF和MAO均是肺纖維化中起重要作用的酶或因子，現(xiàn)有技術(shù)中的治療藥物由于不能向針對(duì)肺纖維化的致病因子，因此治療效果差。馮立等(肺耙向微粒的研究概況，中國藥業(yè)，2005年第15巻第12期，1-2)公開了，粒徑730ytm的微粒靜脈注射后在肺部蓄積，從而產(chǎn)生肺部靶向作用。因此，找到一種能夠針對(duì)肺纖維化致病因子或酶產(chǎn)生治療作用的藥物，更進(jìn)一步的找到一種成為現(xiàn)有技術(shù)中要解決的問題。
發(fā)明內(nèi)容為解決現(xiàn)有技術(shù)問題，我們意外的發(fā)現(xiàn)，依地酸鈣鈉能夠同時(shí)抑制結(jié)締組織生長因子(CTGF)和單胺氧化酶，治療肺部纖維化。同時(shí)更為意外的是依地酸鈣鈉在治療不同病因引起的肺部纖維化還存在一定的差異，依地酸鈣鈉對(duì)于由哮喘、慢性阻塞性肺炎引起的肺部纖維化疾病具有更好的療效，目前造成這種情況的原因還不明確，可能是不同疾病引起肺部的結(jié)締組織生長因子CTGF、單胺氧化酶(MAO)不同造成的，也有可能是不同疾病引起肺部纖維化機(jī)理不同造成的。本發(fā)明還提供了依地酸鈣鈉在制備抑制人或哺乳動(dòng)物結(jié)締組織生長因子、單胺氧化酶藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供了依地酸鈣鈉在制備治療人或哺乳動(dòng)物肺部纖維化疾病藥物中的應(yīng)用。所述的肺部纖維化疾病為系統(tǒng)性硬化癥引起的肺部纖維化疾病，紅斑狼瘡引起的肺部纖維化疾病，慢性阻塞性肺炎引起的肺部纖維化疾病，哮喘引起的肺部纖維化疾病，特發(fā)性肺纖維化以及矽肺引起的肺部纖維化。所述依地酸鈣鈉在制備上述疾病藥物中的應(yīng)用時(shí)為注射劑。所述依地酸鈣鈉在治療上述疾病時(shí)的劑量為0.l-3g/日，優(yōu)選為0.3-2g/日。所述的依地酸鈣鈉注射劑，所述注射劑含有重量百分比5_30%的依地酸鈣鈉以及可用于注射劑的輔料，所述輔料為注射用水。所述注射劑優(yōu)選含有20%重量百分比的依地酸牽丐鈉。所述依地酸鈣鈉注射液，由重量百分比5_30%的依地酸鈣鈉、和余量的注射用水組成，優(yōu)選由重量百分比20%的依地酸鈣鈉，和余量的注射用水組成。所述依地酸鈣鈉注射劑，優(yōu)選制成肺部靶向注射劑，含有重量百分比0.1_5%的依地酸鈣鈉和一種或幾種適用于肺部靶向制劑的輔料。所述制成肺部靶向注射劑為微球劑，微囊劑，脂質(zhì)體注射劑，所述微球、微囊、脂質(zhì)體的粒徑優(yōu)選7-30iim，所述肺靶向制劑優(yōu)選為脂質(zhì)體注射液，所述的脂質(zhì)體注射液優(yōu)選含有作為活性成分的依地酸鈣鈉0.1%1%，還含有作為輔料的磷脂O.5%10%，親脂性添加劑0.025%1X，將pH值保持在6.57.0的pH緩沖劑，以及余量的注射用水。更優(yōu)選含依地酸鈣鈉O.1%0.5%，特別優(yōu)選含依地酸鈣鈉0.1%、0.2%、0.5%。本發(fā)明所述的百分比均為占脂質(zhì)體注射液重量百分比。所述的pH緩沖劑可以包括磷酸/磷酸鹽緩沖劑、醋酸/醋酸鹽緩沖劑、檸檬酸/檸檬酸鹽緩沖劑、硼酸/硼酸鹽緩沖劑，優(yōu)選磷酸/磷酸鹽緩沖劑，所用磷酸鹽緩沖劑的用量為0.01-0.02mol/L(以總磷酸鹽計(jì)，以注射液最終體積計(jì))本發(fā)明所述的脂質(zhì)體注射液中，所述的磷脂包括但不僅限于磷脂酰膽堿如二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿，磷脂酰甘油如二棕櫚酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油，磷脂酰絲氨酸如二棕櫚酰磷脂酰絲氨酸、二硬脂酰磷脂酰絲氨酸，大豆卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂中的一種或幾種，優(yōu)選大豆卵磷脂、氫化大豆卵磷脂或蛋黃卵磷脂中的一種或幾種。所述磷脂與活性成分的重量比為530:1，優(yōu)選i020:i。所述的親脂性添加劑包括但不僅限于膽固醇、磷脂酸、硬脂胺，優(yōu)選膽固醇，所述的親脂性添加劑的用量與磷脂的比例為1:320。所述的依地酸鈣鈉脂質(zhì)體注射液中，還可以加入注射劑中常見的附加劑，所述的4附加劑的加入可以按照《藥劑學(xué)》(崔福德，2003年11月第五版)第三章第二節(jié)中表3-4公開的附加劑種類和濃度范圍添加。優(yōu)選加入滲透壓調(diào)節(jié)劑，抗菌防腐劑，PH緩沖劑，抗氧化劑中的一種或幾種。所述滲透壓調(diào)節(jié)劑優(yōu)選為0.4%0.9%氯化鈉、4%5%葡萄糖、1%2.5%甘油中的一種或幾種。所述的抗氧化劑的優(yōu)選抗壞血酸、a-生育酚和2，6-二叔丁基對(duì)甲酚(BHT)、焦亞硫酸鈉，優(yōu)選a_生育酚，所述的抗氧化劑的用量優(yōu)選為0.05%0.3%。所述的抗菌防腐劑可以包括但不僅限于苯甲酸、苯甲醇、對(duì)羥基苯甲酸酯(尼泊金)，包括尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯中的一種或幾種，特別優(yōu)選對(duì)羥基苯甲酸酯(尼泊金酯)，所述的抗菌防腐劑用量優(yōu)選為0.1%。本發(fā)明所述的脂質(zhì)體注射液可以用以下方法配制(1)脂質(zhì)體溶液(1)的配制方法1.稱取處方量的磷脂、親脂性添加劑、抗氧化劑，溶于適量低沸點(diǎn)溶媒中，所述的低沸點(diǎn)溶媒包括但不僅限于二氯甲烷、甲醇、乙醇、四氫呋喃、丙酮、乙醚、二氯甲烷、三氯甲烷中的一種或幾種，優(yōu)選乙醇，然后加入溶于處方量pH緩沖液的依地酸鈣鈉溶液。超聲乳化，所得乳化液在低溫下(304(TC，優(yōu)選37t:，必要時(shí)加以一定的真空度)蒸發(fā)除去溶媒，補(bǔ)入剩余的注射用水和其他輔料，繼續(xù)減壓蒸餾出去溶媒，加入用注射用水，超聲分散，得到脂質(zhì)體溶液。方法2.稱取處方量、磷脂、親脂性添加劑、抗氧化劑，溶于適量低沸點(diǎn)的溶媒中，所述溶媒包括但不僅限于甲醇、乙醇、四氫呋喃、丙酮中、乙醚中的一種或幾種，優(yōu)選乙醇或乙醚；將此溶液緩慢注入用pH緩沖劑調(diào)好pH值的依地酸鈣鈉溶液中，在304(TC下低溫蒸發(fā)(必要時(shí)減壓)，除去溶媒。將剩余溶液用高壓均質(zhì)機(jī)在10001500bar壓力下處理至澄清，得到脂質(zhì)體溶液。(2)凍融脂質(zhì)體溶液置-2(TC冷凍過夜后，于室溫下完全融化；再置于-2(TC冷凍過夜后，于室溫下融化；第三次置于-2(TC冷凍過夜，于室溫下完全融化；冷藏備用。將余量注射用水補(bǔ)入凍融后的脂質(zhì)體溶液至處方量得到脂質(zhì)體注射液。本發(fā)明提供了依地酸鈣鈉在抑制人或哺乳動(dòng)物結(jié)締組織生長因子、單胺氧化酶藥物中的應(yīng)用，治療人或哺乳動(dòng)物肺部纖維化疾病藥物中的應(yīng)用，在應(yīng)用依地酸鈣鈉治療肺部纖維化疾病時(shí)優(yōu)選采用注射劑，本發(fā)明提供的依地酸鈣鈉注射劑，與現(xiàn)有技術(shù)中用于治療肺部纖維化疾病的皮質(zhì)激素如地塞米松磷酸鈉注射液相比，依地酸鈣鈉能夠更好的抑制結(jié)締組織生長因子CTGF和單胺氧化酶(MAO)從而對(duì)肺部纖維化進(jìn)行更有針對(duì)性的治療，此外我們意外的發(fā)現(xiàn)，依地酸鈣鈉在治療于哮喘引起的肺部纖維化時(shí)產(chǎn)生了更好的治療效果，于地塞米松等激素類藥相比，本發(fā)明提供的藥物更加適用于治療哮喘引起的肺部纖維化。同時(shí)由于實(shí)驗(yàn)表明，依地酸鈣鈉沒有皮質(zhì)激素的副作用，不會(huì)引起體重減少等副作用，更適用于長期治療使用，特別是本發(fā)明還提供了一種脂質(zhì)體注射劑，通過本發(fā)明提供的方法制備特殊粒徑范圍的脂質(zhì)，從而實(shí)現(xiàn)了藥物在肺部的靶向富集，降低了藥物的總用量，從而降低了依地酸鈣鈉潛在的引起肝腎副反應(yīng)的危險(xiǎn)，更適合長期或者肝腎功能有缺陷的人使用。5具體實(shí)施例以下具體實(shí)施方式僅為對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案實(shí)施的說明，不能解釋為對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案的限制，在配制封裝過程中采用充氮方法避免氧化發(fā)生。0.2M磷酸鹽緩沖溶液，配制方法為將注射用水分別配制成0.2mol/LNaH2P04和Na2HP04的溶液，分別按照下表的具體配方混合即得pH0.2mol/LNaH2P04(ml)0.2mol/LNa2HP04(ml)6.578.521.56.662.537.56.756.543.56.850.549.56.945.055.07.039.061.0還可以按照《中國藥典》2005版中附錄158液公開的的pH=6.57.0的磷酸鹽緩沖液的配制方法，實(shí)施例1脂質(zhì)體溶液的配方依地酸f丐鈉lg大豆卵磷脂20g膽固醇2ga-生育酚lgpH=7.0的0.2M磷酸鹽緩沖液100ml葡萄糖50g注射用水至1000ml配制稱取處方量的磷脂、膽固醇、a-生育酚溶于二氯甲烷/甲醇(v:V=1:1)中，加入融入處方量依地酸鈣鈉的注射用水500ml，用超聲乳化30min，所得乳化液在37°C，減壓蒸發(fā)除去溶媒，至乳化液形成粘稠凝膠狀液體時(shí)的加入剩余的注射用水和磷酸鹽緩沖液以及葡萄糖，，繼續(xù)在37t:下減壓蒸發(fā)出去溶媒，超聲乳化，得到脂質(zhì)體溶液，脂質(zhì)體溶液置-2(TC冷凍過夜后，于室溫下完全融化；再置于-2(rC冷凍過夜后，于室溫下融化；第三次置于_201:冷凍過夜，于室溫下完全融化；得到脂質(zhì)體溶液，補(bǔ)足注射用水量，得到0.1%依地酸鈣鈉脂質(zhì)體注射液。應(yīng)用Mastersizer2000粒徑測定儀，以去離子水為分散介質(zhì)測定樣品的體積平均粒徑分別為7.53iim。實(shí)施例2脂質(zhì)體溶液配方依地酸鈣鈉2g二棕櫚酰磷脂酰甘油15g膽固醇5ga-生育酚lg6pH=6.5的0.2M磷酸鹽緩沖液100ml氯化鈉9g注射用水至1000ml配制稱取處方量的磷脂、膽固醇、a-生育酚lg溶于適量的無水乙醇中，加入融入處方量依地酸鈣鈉的注射用水500ml，減壓蒸發(fā)除去溶媒，加入剩余的注射用水和磷酸鹽緩沖液以及氯化鈉，繼續(xù)在37t:下減壓蒸發(fā)出去溶媒，剩余溶液用高壓均質(zhì)機(jī)在1200bar下處理2次，并補(bǔ)足蒸發(fā)掉的注射用水量，得到0.2%依地酸鈣鈉脂質(zhì)體注射液。應(yīng)用Mastersizer2000粒徑測定儀，以去離子水為分散介質(zhì)測定樣品的體積平均粒徑分別為8.31iim。實(shí)施例3脂質(zhì)體溶液配方依地酸f丐鈉5g二棕櫚酰磷脂酰膽堿25g，膽固醇1.25gpH=6.8的0.2M磷酸鹽緩沖液50ml葡萄糖50g注射用水至1000ml如實(shí)施例1的配制方法制得0.5%的依地酸鈣鈉脂質(zhì)體注射液。應(yīng)用Mastersizer2000粒徑測定儀，以去離子水為分散介質(zhì)測定樣品的體積平均粒徑分別為8.05iim。實(shí)施例4脂質(zhì)體溶液的配方依地酸f丐鈉10g二硬脂酰磷脂酰膽堿100g膽固醇5gpH=6.7的0.2M磷酸鹽緩沖液50ml氯化鈉9g注射用水至1000ml如實(shí)施例1的配制方法制得0.1%的依地酸鈣鈉脂質(zhì)體注射液。應(yīng)用Mastersizer2000粒徑測定儀，以去離子水為分散介質(zhì)測定樣品的體積平均粒徑分別為7.02iim。實(shí)施例5注射液依地酸f丐鈉200g注射用水至1000ml，依地酸鈣鈉溶于注射用水中，滅菌、過濾分裝得到20%依地酸鈣鈉注射液。實(shí)施例6依地酸鈣鈉100g注射用水至1000ml，依地酸鈣鈉溶于注射用水中，滅菌、過濾分裝得到10%依地酸鈣鈉注射液。實(shí)施例7依地酸f丐鈉50g注射用水至1000ml，依地酸鈣鈉溶于注射用水中，滅菌、過濾分裝得到5%依地酸鈣鈉注射液。實(shí)施例8依地酸f丐鈉300g注射用水至1000ml，依地酸鈣鈉溶于注射用水中，滅菌、過濾分裝得到30%依地酸鈣鈉注射液。藥理實(shí)施例1、對(duì)肺纖維化模型大鼠的作用博萊霉素造模組雄性SD大鼠，SPF級(jí)，體重(295±20)g，將造模成功后隨機(jī)分為模型組、假手術(shù)組(對(duì)照組)和實(shí)驗(yàn)組1-6組，每組10只，實(shí)驗(yàn)組1-5分別給予實(shí)施例1-5，實(shí)驗(yàn)6組給予對(duì)照藥物地塞米松磷酸鈉。各實(shí)驗(yàn)組給藥情況如下表實(shí)驗(yàn)組1實(shí)驗(yàn)組2實(shí)驗(yàn)組3實(shí)驗(yàn)組4實(shí)驗(yàn)組5實(shí)驗(yàn)組6給藥實(shí)施例1實(shí)施例2實(shí)施例3實(shí)施例4實(shí)施例5對(duì)照藥物日劑量10mg/kglOmg/kglOmg/kg20mg/kg50mg/kglmg/kg對(duì)照藥物采用市售0.5%地塞米松磷酸鈉注射液各組以12%烏拉坦腹腔內(nèi)注射麻醉動(dòng)物后，在額鏡直視下將硬脊膜外麻醉導(dǎo)管插入氣管l-2cm，觀察到導(dǎo)管內(nèi)液柱隨動(dòng)物呼吸而波動(dòng)后，對(duì)實(shí)驗(yàn)組和模型組按5mg/kg劑量緩慢注入博來霉素A5制作肺纖維化模型。，假手術(shù)組只進(jìn)行手術(shù)，不注入博來霉素。各組給藥采用靜脈注射，連續(xù)給藥14d后(模型組和對(duì)照組采用生理鹽水)，分別對(duì)動(dòng)物進(jìn)行肺功能檢測、臟器系數(shù)檢測、CTGF檢測并檢測實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血清中的MAO(單胺氧化酶)含量。檢測結(jié)締組織生長因子在實(shí)驗(yàn)大鼠肺纖維化中的表達(dá)，實(shí)驗(yàn)儀器與試劑為CTGF-mRNA原位雜交試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司)；OLYMPUSCX41圖象采集顯微鏡(OLYMPUS公司)；復(fù)日FR-988生物顯微圖像分析軟件(上海復(fù)日科技有限公司)。對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的肺組織石蠟切片進(jìn)行原位雜交；CTGFmRNA采用下列mRNA序列(5，-CTGCTGCCGCGTCTGCGCCAAGCAGCTGGG-3，；5'-CAACTGCCTGGTCCAGACCACAGAGTGGAG-3，；5'-TGTACTACAGGAAGATGTACGGAGACATGG-3')作為寡核苷酸探針。嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。用PBS代替雜交液作為陰性對(duì)照。實(shí)驗(yàn)基底保持相對(duì)無菌，實(shí)驗(yàn)所用試劑均由含DEPC水配制以消除RNA酶的作用，所有實(shí)驗(yàn)用品均經(jīng)高壓消毒，整個(gè)操作過程戴口罩、手套，避免交叉污染，出現(xiàn)假陽性。胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒即為陽性。結(jié)果判定每個(gè)標(biāo)本隨機(jī)取5個(gè)不同的高倍視野(X400)，每個(gè)視野計(jì)算出兩個(gè)平均灰度值(平均灰度值和陽性表達(dá)強(qiáng)度呈反比關(guān)系)。CTGF因子檢測結(jié)果(5C±S，n=IO，平均灰度值范圍O-l，值越小，陽性越強(qiáng))8<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>5的平均灰度值也顯著高于采用采用地塞米松磷酸鈉的實(shí)驗(yàn)組6(P<0.05)，說明依地酸鈣鈉可以抑制CTGF因子的產(chǎn)生從而治療肺部纖維化，特別是采用脂質(zhì)體制劑的實(shí)驗(yàn)組l-4，顯示出了脂質(zhì)體制劑能夠靶向抑制肺部的CTGF，在較小劑量的基礎(chǔ)上實(shí)現(xiàn)了很好的療效。血清中單胺氧化酶(MAO)活力的檢測結(jié)果(5±s，n=10，U/h/mgprot)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>與模型組相比，實(shí)驗(yàn)各組血清中單胺氧化酶(MAO)活力均有顯著降低(P<0.05)，并且采用依地酸鈣鈉的實(shí)驗(yàn)組1-5的酶活力也低于采用采用地塞米松磷酸鈉的實(shí)驗(yàn)組6，說明依地酸鈣鈉可以抑制單胺氧化酶從而治療肺部纖維化，特別是采用脂質(zhì)體制劑，由于脂質(zhì)體制劑的能夠使藥物在血液中保持較長事件，因此在較小劑量的基礎(chǔ)上實(shí)現(xiàn)了很好的療效。動(dòng)物肺功能檢查方法以10%戊巴比妥鈉(50mg/kg)腹腔注射麻醉動(dòng)物后，將其固定在木板上，在無菌操作下做頸部正中切口，充分暴露氣管，并下穿手術(shù)線待固定氣管插管。在氣管下段做一小"T"形切口，將自制的氣管插管固定于氣管內(nèi)，然后將麻醉大鼠放入體描箱中，打開肺功能儀各開關(guān)，調(diào)整各項(xiàng)參數(shù)到備用狀態(tài)后，將氣管插管與體描箱中的導(dǎo)管聯(lián)通，關(guān)閉體描箱，行肺功能檢查，檢查完畢后保存各項(xiàng)數(shù)據(jù)，計(jì)算每分鐘通氣量、肺順應(yīng)性。肺功能檢測于處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物前進(jìn)行。動(dòng)物肺功能分析系統(tǒng)型號(hào)AniRes2003，購于北京貝蘭博科技公司。檢驗(yàn)結(jié)果如下(殳士s，n=10)12<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>與模型組相比，實(shí)驗(yàn)各組肺功能均有顯著提高(P<0.01)，并且采用依地酸鈣鈉的實(shí)驗(yàn)組1-5的各組肺功能也好于采用地塞米松磷酸鈉的實(shí)驗(yàn)組6，說明依地酸f丐鈉可以很好的治療肺部纖維化，特別是采用脂質(zhì)體制劑，由于脂質(zhì)體制劑的能夠使藥物在血液中保持較長事件，并且本發(fā)明提供的脂質(zhì)體制劑能夠使有效成分富集在肺部，因此在較小劑量的基礎(chǔ)上實(shí)現(xiàn)了很好的療效。于肺功能檢測后檢測臟器系數(shù)，處死前稱取大鼠體重，處死后，取肺臟，清除淤血和污物后計(jì)算臟器系數(shù)，臟器系數(shù)=(大鼠肺重量/大鼠體重)X1000，臟器系數(shù)檢測結(jié)果(5±s，n=10)實(shí)驗(yàn)組69.52±1.8實(shí)驗(yàn)組5CMi~l+1i~lCO實(shí)驗(yàn)組46.28±1.1實(shí)驗(yàn)組37.68±1.5實(shí)驗(yàn)組27.69±1.3實(shí)驗(yàn)組17.53±1.4CO模型組12.2±2假手術(shù)組5.27±1.1臟器系數(shù)與模型組相比，實(shí)驗(yàn)各組臟器系數(shù)均有顯著降低(P<0.01)，并且采用依地酸牽丐鈉的實(shí)驗(yàn)組1-5的臟器系數(shù)也低于采用地塞米松磷酸鈉的實(shí)驗(yàn)組6，說明依地酸f丐鈉可以很好的治療肺部纖維化，特別是采用脂質(zhì)體制劑，由于脂質(zhì)體制劑的能夠使藥物在血液中保持較長事件，并且本發(fā)明提供的脂質(zhì)體制劑能夠使有效成分富集在肺部，因此在較小劑15量的基礎(chǔ)上實(shí)現(xiàn)了很好的療效，而采用的地塞米松磷酸鈉的實(shí)驗(yàn)組6其肺臟平均重量與實(shí)驗(yàn)組5基本相當(dāng)，但由于地塞米松在治療時(shí)存在副作用，因此造成了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重下降較為嚴(yán)重，造成了臟器系數(shù)的提高。2、嚴(yán)重哮喘致肺部纖維化模型雄性SD大鼠，SPF級(jí)，體重(295士20)g，采用雞卵蛋白(OVA，美國Sigma公司產(chǎn)品)即每組各在腹腔注射OVA10mg，Al(OH)310mg，生理鹽水1ml的混懸液，第10天重復(fù)一次；12天(即第18天)開始激發(fā)，給予1%OVA生理鹽水5rnl霧化吸入，每天1次，每次30min，持續(xù)2周，對(duì)照組采用生理鹽水代替。取造模成功的大鼠分成實(shí)驗(yàn)組l-6、模型組，每組10只，對(duì)照組10只，實(shí)驗(yàn)組1-5分別給予實(shí)施例1-5，實(shí)驗(yàn)6組給予對(duì)照藥物地塞米松磷酸鈉，均采用靜脈注射方式給藥，(模型組和對(duì)照組采用生理鹽水)，連續(xù)給藥14d后，檢測血清中單胺氧化酶(MAO)活力和肺功能。各實(shí)驗(yàn)組給藥情況如下表編號(hào)實(shí)驗(yàn)組1實(shí)驗(yàn)組2實(shí)驗(yàn)組3實(shí)驗(yàn)組4實(shí)驗(yàn)組5實(shí)驗(yàn)組6給藥實(shí)施例1實(shí)施例2實(shí)施例3實(shí)施例4實(shí)施例5對(duì)照藥物日劑量10mg/kg10mg/kg10mg/kg20mg/kg50mg/kglmg/kg經(jīng)過檢測，模型組以及各實(shí)驗(yàn)組的血清中單胺氧化酶(MAO)活力與博萊霉素造模的模型組及相應(yīng)實(shí)驗(yàn)組相比無顯著差異，說明對(duì)于嚴(yán)重哮喘致肺部纖維化模型，各實(shí)驗(yàn)組藥物的降低血清中單胺氧化酶(MAO)活力作用與對(duì)博萊霉素致肺纖維化模型基本相同肺功能檢查結(jié)果如下(5±s，n=10)[O川]實(shí)驗(yàn)組647.9±5.8143±162.35±1.24.9±1.7實(shí)驗(yàn)組554.2±6.5112±133.10±1.23.8±1.7實(shí)驗(yàn)組457.1±7.1106±14。+13.3±1.2實(shí)驗(yàn)組355.8±7.8109±133.17±1.13.6±1.5實(shí)驗(yàn)組256.1±8.0109±153.18±1.23.5±1.6實(shí)驗(yàn)組155.5±73110±133.15±1.33.6±1.9模型組44.5±7.5161±162.02±1.55.7±1.5對(duì)照組58.2±7.5104±113.52±1.6LOi~1+1of每分通氣量(ml)呼吸頻率(次/min)肺順應(yīng)性(mL/cmH20)氣道阻力(cmH2QmL—0本發(fā)明提供的依地酸鈣鈉注射液對(duì)于嚴(yán)重哮喘致肺部纖維化的模型的治療效果17比對(duì)于博來霉素致肺纖維化模型的治療效果更好。經(jīng)過同樣的依地酸鈣鈉的治療，嚴(yán)重哮喘致肺部纖維化的模型動(dòng)物的肺功能改善情況好于博來霉素致肺纖維化模型，與此同時(shí)，經(jīng)過同樣的地塞米松磷酸鈉的治療，博來霉素致肺纖維化模型動(dòng)物的肺功能改善情況卻好于嚴(yán)重哮喘致肺部纖維化的模型，說明與地塞米松磷酸鈉相比，本發(fā)明提供的依地酸鈣鈉注射劑更適合于對(duì)嚴(yán)重哮喘或慢性阻塞性肺炎引起的肺部纖維化的治療。權(quán)利要求依地酸鈣鈉在制備抑制人或哺乳動(dòng)物結(jié)締組織生長因子、單胺氧化酶藥物中的應(yīng)用。2.依地酸鈣鈉在制備治療人或哺乳動(dòng)物肺部纖維化疾病藥物中的應(yīng)用。3.如權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征是所述的依地酸鈣鈉為注射液劑型。4.如權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征所述的依地酸鈣鈉在治療肺部纖維化疾病時(shí)的劑量為0.l-3g/日。5.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征所述的依地酸二鈉鈣在治療肺部纖維化疾病時(shí)的劑量為0.3-2g/日。6.如權(quán)利要求3所述的依地酸鈣鈉注射液，其特征是所述依地酸鈣鈉注射液含有重量百分比5-30%的依地酸鈣鈉，以及余量的注射用水。7.如權(quán)利要求3所述的依地酸鈣鈉注射液，其特征是所述依地酸鈣鈉注射液制成肺部靶向注射劑，含有重量百分比0.1_5%的依地酸鈣鈉和一種或幾種適用于肺部靶向制劑的輔料。8.如權(quán)利要求7所述的依地酸鈣鈉注射液，其特征是所述注射液制成肺部的靶向制劑為微球劑，微囊劑，脂質(zhì)體注射劑，所述微球、微囊、脂質(zhì)體的粒徑優(yōu)選7-30ym。9.如權(quán)利要求7或8所述的依地酸鈣鈉注射液，優(yōu)選制備成為脂質(zhì)體注射液。10.如權(quán)利要求9所述的依地酸鈣鈉注射液，所述的脂質(zhì)體注射液優(yōu)選含有作為活性成分的依地酸鈣鈉O.1%1%，還含有作為輔料的磷脂0.5%10%，親脂性添加劑`0.025%1%，將pH值保持在6.57.0的pH緩沖劑，以及余量的注射用水。全文摘要依地酸鈣鈉在制備抑制人或哺乳動(dòng)物結(jié)締組織生長因子、單胺氧化酶藥物中的應(yīng)用，依地酸鈣鈉在制備上述疾病藥物中的應(yīng)用時(shí)為注射劑，所述注射劑含有重量百分比5-30％的依地酸鈣鈉以及可用于注射劑的輔料；優(yōu)選制成肺部靶向注射劑，含有重量百分比0.1-5％的依地酸鈣鈉和一種或幾種適用于肺部靶向制劑的輔料，所述制成肺部靶向注射劑為微球劑，微囊劑，脂質(zhì)體注射劑，所述微球、微囊、脂質(zhì)體的粒徑優(yōu)選7-30μm，所述肺靶向制劑優(yōu)選為脂質(zhì)體注射液。文檔編號(hào)A61K9/08GK101780065SQ20101012608公開日2010年7月21日申請(qǐng)日期2010年3月17日優(yōu)先權(quán)日2010年3月17日發(fā)明者于潤芳,劉凱,吳媛媛,張冬蘭,張嵐,李靜,楊國存,林劼,王虹,程振國,肖敏霞申請(qǐng)人:天津金耀集團(tuán)有限公司