專利名稱：：一種獨(dú)行千里提取物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種獨(dú)行千里提取物及其制備方法和其在制備抗炎鎮(zhèn)痛、抗風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物方面的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：獨(dú)行千里為山柑科(C即paraceae)植物獨(dú)行千里C即parisacutifoliaSweet〔C.membranaceaGardn.etChamp.〕的干燥根。別名扣鈕子(廣東乳源)、膜葉槌果藤、獨(dú)虎龍、黑皮蛇、黑鉤榕(海南)等，產(chǎn)于廣東、廣西、江西(大余)、福建(沙縣、崇安、延平)、湖南(宜章)、臺(tái)灣；生于低海拔灌叢、林中、曠野或山坡路旁。本品為我國(guó)南方的民間草藥。性平，味苦、澀，有毒；功能活血散瘀，解痙止痛。用于治療風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛，筋骨不舒，咽喉腫痛，腹痛；外用根或葉治瘡癤腫毒，跌打損傷。目前獨(dú)行千里在臨床上應(yīng)用多為簡(jiǎn)單加工使用，可以內(nèi)服或外用；粗提制劑，成分復(fù)雜，普遍存在著粗、大、黑的不足，因其有效部位的不明確，臨床應(yīng)用存在服用劑量較難控制和治療效果不穩(wěn)定等缺陷。亟需在藥效學(xué)引導(dǎo)下，篩選獨(dú)行千里的有效部位并加以應(yīng)用研究，但目前尚無(wú)獨(dú)行千里有效部位提取工藝、最佳提取條件的報(bào)道，也未見其提取物在抗炎鎮(zhèn)痛、抗炎抗風(fēng)濕藥理方面的研究報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種獨(dú)行千里提取物。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供所述提取物的制備方法。本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供所述獨(dú)行千里提取物的應(yīng)用。本發(fā)明的目的通過(guò)下述技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)提供一種獨(dú)行千里提取物，是取植物獨(dú)行千里根莖，粉碎后加熱回流、冷浸或滲漏提取，減壓濃縮得到粗提浸膏，用氯仿提取得到。本發(fā)明提供了所述獨(dú)行千里提取物的制備方法，包括以下步驟(1)獨(dú)行千里根莖干燥后粉碎成粗粉；(2)采用體積比濃度為7095%的乙醇浸提、回流提取或超聲提取獨(dú)行千里根莖粉；合并提取液，減壓濃縮得浸膏；或采用體積比濃度為7095%的乙醇滲漏提取獨(dú)行千里根莖粉；合并提取液，減壓濃縮得浸膏；(3)將步驟(2)所得浸膏經(jīng)柱層析純化后，即得獨(dú)行千里有效部位氯仿部位或乙酸乙酯部位；或?qū)⒉襟E(3)所得浸膏經(jīng)石油醚脫脂后以氯仿萃取、氯仿回流提取或氯仿超聲提取，提取液減壓回收氯仿，得稠膏，即為獨(dú)行千里有效部位。步驟(2)若采用乙醇浸提，乙醇的加入量?jī)?yōu)選按照獨(dú)行千里根莖粉重量的820倍量加入；優(yōu)選浸提3次，每次1天7天；步驟(2)若采用乙醇回流提取，乙醇的加入量?jī)?yōu)選按照獨(dú)行千里根莖粉重量的820倍量加入；優(yōu)選提取23次，每次16小時(shí)；或步驟(2)所述乙醇超聲提取，乙醇的加入量?jī)?yōu)選按照獨(dú)行千里根莖粉重量的820倍量加入，超聲提取23次，每次16小時(shí)；或步驟(2)所述乙醇滲漏提取，優(yōu)選流速13ml/秒，直至滲漏液顏色較淡為止。本發(fā)明還同時(shí)提供了另一獨(dú)行千里提取物的制備方法，包括以下步驟(A)獨(dú)行千里根莖干燥后粉碎成粗粉；(B)采用6080%乙醇回流提取獨(dú)行千里根莖粉，合并提取液，減壓濃縮得浸(C)以12%(體積比濃度)的稀酸水(可采用鹽酸或硫酸等)酸化后(優(yōu)選酸化至ra值為23)，酸水液以氨水調(diào)ra值至9ll，氯仿萃取，減壓回收氯仿所得稠膏，即為獨(dú)行千里有效部位。步驟(B)乙醇的加入量是獨(dú)行千里根莖粗粉重量的820倍，提取3次，每次16小時(shí)。本發(fā)明成功從植物獨(dú)行千里中提取抗炎鎮(zhèn)痛、抗關(guān)節(jié)炎有效部位將原料粉碎后加熱回流、冷浸或滲漏提取，減壓濃縮得到粗提浸膏，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮、水等提取，得到不同部位，進(jìn)行藥理粗篩，本發(fā)明將氯仿部位進(jìn)行進(jìn)行碘化汞鉀、碘化鉍鉀、硅鎢酸生物堿指示劑的試管定性反應(yīng)，均呈陽(yáng)性反應(yīng)，說(shuō)明本發(fā)明制備得到的獨(dú)行千里有效部位為總生物堿成分，經(jīng)系統(tǒng)的抗炎鎮(zhèn)痛及抗弗氏完全佐劑性關(guān)節(jié)炎實(shí)驗(yàn)，其抗炎、鎮(zhèn)痛、抗佐劑性關(guān)節(jié)炎效果明顯，證明其具有顯著的藥理作用，可用于制備抗炎鎮(zhèn)痛、抗風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)、肩周炎的藥物，為臨床用藥提供新的選擇。因此，本發(fā)明同時(shí)提供了獨(dú)行千里提取物在制備治療抗炎鎮(zhèn)痛、抗風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)、肩周炎藥物方面的應(yīng)用。優(yōu)選地，所述獨(dú)行千里提取物可應(yīng)用于制備治療神經(jīng)病理性疼痛藥物、治療炎性疼痛藥物、治療癌癥性疼痛藥物、治療糖尿病疼痛藥物，可應(yīng)用于制備治療風(fēng)濕病疼痛藥物、跌打損傷疼痛、咽喉腫痛、牙痛、腹痛(特別是痙攣性疼痛)等藥物。上述應(yīng)用，優(yōu)選的劑量是0.5200mg/kg體重。所述有效部位可以加入藥劑學(xué)允許的賦形劑制備成各種藥物制劑，制劑形式有口服片劑、膠囊、丸劑、顆粒劑、散劑、口服液或乳劑；或者外用涂抹劑、膏劑、巴布劑、貼劑或凝膠劑。本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明對(duì)獨(dú)行千里原料藥材中的有效成分進(jìn)行了充分的提取、濃縮、分離，得到的有效部位(所述獨(dú)行千里提取物)占藥材重量的0.21.5%左右，具有顯著的藥理功效，可抗炎鎮(zhèn)痛、抗風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。本發(fā)明獲得的有效部位優(yōu)于粗提物入藥，便于制成各種制劑，為臨床用藥提供新的選擇。本發(fā)明方法設(shè)計(jì)合理，具有工藝過(guò)程簡(jiǎn)單、成本低、能耗低的特點(diǎn)。圖1模型組大鼠踝關(guān)節(jié)腔光鏡結(jié)構(gòu)圖圖2獨(dú)行千里有效部位大劑量組對(duì)大鼠踝關(guān)節(jié)腔光鏡結(jié)構(gòu)圖圖3獨(dú)行千里有效部位中劑量組對(duì)大鼠踝關(guān)節(jié)腔光鏡結(jié)構(gòu)圖圖4獨(dú)行千里有效部位小劑量組對(duì)大鼠踝關(guān)節(jié)腔光鏡結(jié)構(gòu)圖圖5陽(yáng)性對(duì)照組對(duì)大鼠踝關(guān)節(jié)腔光鏡結(jié)構(gòu)圖具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)總結(jié)得到本發(fā)明技術(shù)方案，總結(jié)見前述
發(fā)明內(nèi)容部分，乙醇浸提、回流提取、超聲提取、滲漏提取中乙醇的加入量、浸提次數(shù)及時(shí)間等參數(shù)的優(yōu)選方案不一一在實(shí)施例中贅述，但并不因此限定本發(fā)明范圍。實(shí)施例1獨(dú)行千里有效部位(即獨(dú)行千里提取物)的制備取粉碎后的獨(dú)行千里(根莖)2公斤左右，加12倍量(重量體積)95%乙醇浸提7天，過(guò)濾后濾渣再用10倍量95%乙醇浸提5天，過(guò)濾后濾渣再用10倍量95%乙醇浸提3天，合并濾液，減壓回收乙醇，得到浸膏。浸膏用60g硅膠拌勻后上硅膠柱，分別以石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮洗脫，減壓回收溶劑，得到的氯仿部位、乙酸乙酯部位分別為5.8g和6.lg。實(shí)施例2獨(dú)行千里有效部位的制備取粉碎獨(dú)行千里(根莖)2公斤左右，加12倍量85%乙醇超聲(100KHZ)3次，每次45min，得到浸膏約86.2g。浸膏用60g硅膠拌勻后，分別以石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮回流提取3次，每次10倍量溶劑，提取1小時(shí)；減壓回收溶劑，得到的氯仿部位、乙酸乙酯部位分別為9.2g和10.9g。實(shí)施例3獨(dú)行千里有效部位的制備取粉碎獨(dú)行千里(根莖)2公斤左右，加12倍量85%乙醇回流提取3次，分別為2小時(shí)、1小時(shí)、1小時(shí)，得到浸膏約95.2g。浸膏用60g硅膠拌勻后，分別以石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮回流提取3次，每次10倍量溶劑，提取1小時(shí)；減壓回收溶劑，得到的氯仿部位、乙酸乙酯部位分別為11.lg和12.6g。實(shí)施例4獨(dú)行千里有效部位的制備取粉碎后的獨(dú)行千里(根莖)2公斤左右，加95%乙醇滲漏提取，流速13ml/min，至提取液顏色較淡無(wú)生物堿顯色反應(yīng)，回收乙醇，得到浸膏約91.3g。石油醚脫脂后，用水混懸，再分別以氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮萃取，得到的萃取液分別濃縮，得到氯仿部位和乙酸乙酯部位分別為6.3g和7.2g。實(shí)施例5獨(dú)行千里有效部位的制備獨(dú)行千里根莖干燥后粉碎，分別加入20、15、10倍量6080%(體積比濃度)乙醇回流提取3次，提取時(shí)間分別為2、1.5、1.5小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮至浸膏，以12%稀酸水(鹽酸、硫酸或硝酸等)酸化后，酸水液以氨水調(diào)ra值至9，氯仿萃取，減壓回收氯仿所得稠膏，即為獨(dú)行千里氯仿部位5.46g。將實(shí)施例15制備得到的氯仿部位進(jìn)行碘化汞鉀、碘化鉍鉀、硅鎢酸生物堿指示5劑的試管定性反應(yīng)，均呈陽(yáng)性反應(yīng)。實(shí)施例6涂抹劑制備稱取聚乙烯醇120g(優(yōu)選PVA05-88與17-88各60g)，用10g甘油潤(rùn)濕后加入到300ml蒸熘水中浸泡溶漲。另取上述15任一實(shí)施例方法獲得的獨(dú)行千里有效部位(氯仿部位)50g與30g苯甲酸一起加入至500ml乙醇中在攪拌下至藥物基本溶解或均勻混懸，攪拌均勻后緩緩加入聚乙烯醇液中，隨加隨攪拌，攪勻后過(guò)濾即得。實(shí)施例7軟膏劑制備稱取硬脂酸lOOg在水浴上熔化，加入羊毛脂20g、白凡士林120g并水浴加熱至80°C，另取上述15任一實(shí)施例方法獲得獨(dú)行千里有效部位50g加入；另將甘油120g及蒸鎦水500ml加熱至9(TC，再加入十二烷基硫酸鈉10g和羥苯乙酯lg溶解為水相，然后慢慢將水相倒入油相中，邊加邊攪拌直至冷凝，即得乳劑型軟膏劑。實(shí)施例8硬膏劑制備取生膠洗凈，切成適宜大小的條塊，在煉膠機(jī)中塑煉成網(wǎng)狀膠片，浸入適量的溶劑汽油中，浸泡至完全溶漲成凝膠狀，移入打膏桶內(nèi)攪拌34小時(shí)，依次加入凡士林、羊毛脂、松香、氧化鋅等按照常規(guī)方法制成基質(zhì)，再加入上述15任一實(shí)施例方法獲得的獨(dú)行千里有效部位550g，繼續(xù)攪拌3小時(shí)，待已成均勻膏漿時(shí)，經(jīng)涂布、切割、加襯、包裝即得。實(shí)施例9凝膠劑制備取卡波姆980適量用10ml丙二醇潤(rùn)濕后，逐漸緩慢攪拌加入水90ml，使其充分溶漲；再加入10ml水溶解的1%苯甲酸鈉溶液；上述15任一實(shí)施例方法獲得的獨(dú)行千里有效部位550g用丙二醇90ml研磨混懸，再加入至膠體中，攪拌均勻后，攪拌下滴加三乙醇胺，即制得凝膠劑。實(shí)施例10巴布劑制備將120g的Carbopo1⑧Ultrez10(卡伯母，市購(gòu))撒在去離子水15ml中，低速攪拌30min，得到A相溶液；稱取獨(dú)行千里有效部位浸膏0.120g，加入少量水，加入10ml甘油、透皮促進(jìn)劑，不斷攪拌，水浴加熱使熔化得B相；高嶺土、二氧化鈦混合均勻，再與聚丙烯酸鈉NP700混合均勻，加入剩余甘油潤(rùn)濕，研勻，將熔化的稠膏加入，研勻；山梨醇、亞硫酸氫鈉、EDTA用28ml去離子水溶解，逐漸緩慢加入到B相中；甘羥鋁、檸檬酸溶解于18ml水中，為C相；攪拌中將C相透明溶液加入B相，再將A相加入B、C相的混合物中。研磨均勻后涂布在無(wú)紡布上，室溫下放置過(guò)夜，干燥后，與保護(hù)層復(fù)合，切割成6X8cm2包裝即可。實(shí)施例11貼劑制備稱取130g聚乙烯醇17-88，加入蒸餾水浸泡過(guò)夜，待其充分溶脹后，水浴回流至溶，備用。精密稱取獨(dú)行千里有效部位浸膏0.120g，加入無(wú)水乙醇1030ml、甘油520ml、吐溫800.1lml，適當(dāng)加熱溶解后趁熱加入聚乙烯醇17-88膠液，緩慢攪拌混勻，涂布，干燥，即得。實(shí)施例12片劑取上述15任一實(shí)施例方法獲得的獨(dú)行千里有效部位50g，粉碎后過(guò)80目篩，與淀粉120g、20g乳糖、羧甲基淀粉鈉10g混勻，加8X淀粉槳適量制成軟沐過(guò)20目篩制成濕顆粒，6(TC干燥整粒后，加入干顆粒重量0.8%的硬脂酸鎂為潤(rùn)滑劑，壓制成1000素片，包薄膜衣即得。實(shí)施例13膠囊劑稱取淀粉120g、糊精20g、羧甲基淀粉鈉10g混勻后，逐漸緩慢加入藥物(取上述15任一實(shí)施例方法獲得的獨(dú)行千里有效部位50g，加入95%乙醇適量，水浴融化成的液體)，制成軟材，過(guò)20目篩制成濕顆粒，60°C干燥整粒后，填充2號(hào)膠囊殼即可。實(shí)施例14丸劑制備稱取上述15任一實(shí)施例方法獲得的獨(dú)行千里有效部位50g，粉碎后過(guò)80目篩，適量蜂蜜作黏合劑泛制成丸。實(shí)施例15顆粒劑制備稱取糖粉300g，乳糖50g、糊精150g混勻后，逐漸緩慢加入藥物(取上述15任一實(shí)施例方法獲得的獨(dú)行千里有效部位5g，加入95%乙醇適量水浴融化成液體)，制成軟材，過(guò)14目篩制成濕顆粒，6(TC干燥12目篩整粒后，分裝(每袋重5g)，包裝即可。實(shí)施例16散劑制備取上述15任一實(shí)施例方法獲得的獨(dú)行千里有效部位5g，加入淀粉100g，混合均勻，分裝每包lg，包裝即得。實(shí)施例17乳劑制備將獨(dú)行千里有效部位浸膏550g干燥后過(guò)120目篩的細(xì)粉，加入110ml豆油混合均勻，加入豆磷脂溶液(llg豆磷脂加入甘油18ml，再加水約50ml研磨用蒸餾水稀釋至250ml)，加蒸餾水至1000ml，用膠體磨勻化2次，即得。實(shí)施例18獨(dú)行千里提取物的鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)動(dòng)物ICR小鼠(由廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心提供)，雌性，體重20.34±1.43g。藥品及試劑獨(dú)行千里有效部位(臨用前以0.5%羧甲基纖維素(CMC)配成混懸液)；阿司匹林片(石家莊制藥有限公司，規(guī)格0.3g/片，臨用時(shí)以0.5XCMC配成混懸液)；0.5%CMC溶液。(1)扭體法小鼠50只，適應(yīng)性飼養(yǎng)三天，按體重隨機(jī)分為5組，分別灌服獨(dú)行千里氯仿部位(折算成藥材量)40g/kg(小劑量組)、80g/kg(中劑量組)、120g/kg(大劑量組)、阿司匹林200mg/kg(陽(yáng)性對(duì)照組)、0.5%CMC溶液(空白對(duì)照組)，連續(xù)給藥5天。實(shí)驗(yàn)前禁食16小時(shí)，自由飲水，灌胃給藥后30min，腹腔注射0.6%冰醋酸溶液0.2ml，記錄40min內(nèi)小鼠扭體次數(shù)，進(jìn)行組間t檢驗(yàn)，結(jié)果見表1:表1獨(dú)行千里有效部位對(duì)小鼠扭體次數(shù)的影響G士SD，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注與對(duì)照組比較，*P<0.01;△P<0.05實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與空白組比較，阿司匹林組、大劑量組均能顯著減少小鼠扭體次數(shù)(P<0.01);大、中、小劑量組均可減少小鼠扭體次數(shù)(P<0.05)。(2)熱板法小鼠50只(初篩痛閾在1030s)，適應(yīng)性飼養(yǎng)三天，按體重隨機(jī)分為5組，分別灌服獨(dú)行千里氯仿部位(折算成藥材量)40g/kg(小劑量組)、80g/kg(中劑量組)、120g/kg(大劑量組)、阿司匹林200mg/kg(陽(yáng)性對(duì)照組)、0.5%CMC溶液(空白對(duì)照組)，連續(xù)給藥5天。末次給藥40min后，再測(cè)痛閾。痛閾超過(guò)60s者以60s計(jì)算。服藥后痛閾減去服藥前痛閾即得服藥后痛閾延長(zhǎng)時(shí)間，結(jié)果見表2:表2獨(dú)行千里有效部位對(duì)小鼠痛域的影響G士SD，n=10)組別動(dòng)物數(shù)劑量d藥前痛閾藥后痛閾痛閾延長(zhǎng)值(n)(g/kg)(s)(s)(s)對(duì)照組10—11.5±3.414.5±3.8+(3.0±1.7)阿司匹林10200(mg/kg)12.0±3.425.5±4.7+(13.6±3.7)*大劑量1012012.6±3.923.2±4.8+(10.7±2.8)*中劑量10809.8±2.317.5±2.6+(7.7±1.7)*小劑量104011,1±3.713.5±4.2+(2.3±1.8)注與對(duì)照組比較盧P〈0.01結(jié)果表明，與空白組比較，阿司匹林組、大劑量、中劑量組均能顯著提高小鼠熱板痛閾；小劑量組未能顯著性提高小鼠的熱板痛閾。鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，獨(dú)行千里有效部位在大、中劑量下有明顯的鎮(zhèn)痛作用。實(shí)施例19獨(dú)行千里有效部位抗炎實(shí)驗(yàn)1、對(duì)抗二甲苯致小鼠耳廓腫脹所造成的炎癥模型動(dòng)物ICR小鼠(由廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心提供)雌雄各半，體重20.31±1.66g。器材小鼠灌胃器、BP-211D電子分析天平(北京賽多利斯天平有限公司)、50yL可調(diào)微量取樣器、6mm打孔器藥品及試劑獨(dú)行千里有效部位(臨用前以0.5%羧甲基纖維素(CMC)配成混懸液)；阿司匹林片(石家莊制藥有限公司，規(guī)格0.3g/片，臨用時(shí)以0.5XCMC配成混懸液)；0.5%CMC溶液。小鼠50只，適應(yīng)性飼養(yǎng)三天，按體重隨機(jī)分為5組，每組10只，灌服獨(dú)行千里有效部位(折算成藥材量)40g/kg(小劑量組)、80g/kg(中劑量組)、120g/kg(大劑量組)、阿司匹林200mg/kg(陽(yáng)性對(duì)照組)、0.5%CMC溶液(空白對(duì)照組)，每日一次，連續(xù)給藥5天。末次給藥l小時(shí)后，每只小鼠左耳兩面均涂布二甲苯O.03ml致炎，30分鐘后脫臼處死動(dòng)物，沿耳廓基線剪下兩耳，用6mm打孔器取雙側(cè)耳對(duì)稱處的圓耳片，用電子分析天平稱重，并計(jì)算腫脹度和抗炎抑制率。結(jié)果見表3。腫脹度=左耳片重-右耳片重抗炎抑制率(R)=(對(duì)照組平均腫脹度_給藥組平均腫脹度)/對(duì)照組平均腫脹度X100%表3獨(dú)行千里有效部位對(duì)二甲苯所致小鼠耳殼腫脹的影響(；士SD，n=10)組別動(dòng)物數(shù)劑量(rO(g/kg)腫脹度(mg)抑制率(%)對(duì)照組10_L88±0.55—阿司匹林組10200(mg/kg)1.20±0.4536.20*大劑量組101200.70±0.4862.77*A^中劑量組10801.06±0.5443.62*小劑量組10401.34±0.4228.72*注與對(duì)照組比較，*P<0.05，AP<0.01;與阿司匹林組相比，眾P<0.05從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，獨(dú)行千里有效部位大、中、小劑量組與對(duì)照組相比，均呈不同程度的抑制小鼠耳殼腫脹作用，具有隨劑量增加而作用增強(qiáng)的趨勢(shì)，大劑量組有極顯著性差異(P<0.01)，中、小劑量組有顯著性差異(P<0.05)。與阿司匹林組比較，大劑量組有顯著性差異(P<0.05)，中、小劑量組均無(wú)顯著性差異。2、對(duì)蛋清致小鼠足趾腫脹的炎癥模型小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分成5組，每組10只。灌服獨(dú)行千里有效部位(折算成藥材量)40g/kg(小劑量組)、80g/kg(中劑量組)、120g/kg(大劑量組)、阿司匹林200mg/kg(陽(yáng)性對(duì)照組)、0.5%CMC溶液(空白對(duì)照組)，每日一次，連續(xù)給藥5天。末次給藥1小時(shí)后，小鼠左后足掌皮內(nèi)注入蛋清每只O.03ml，注射前及注射后lh、2h測(cè)定右后足容積。足爪腫脹增加百分率(％)=(致炎后右后足容積-致炎前右后足容積)/致炎前右后足容積X100%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。表4獨(dú)行千里有效部位對(duì)蛋清所致小鼠足趾腫脹的影響G±SD)組別動(dòng)物數(shù)劑量腫脹度(lh)腫脹率(lh)腫脹度(2h)腫脹率(2h)(n)(g/kg)(ml)(%)(ml)(%)對(duì)照組10_0.12±0.0148.31±2.930.13±0.0153.41±5.47阿司匹林組9200(mg/kg)0.09±0.0135.93±4.400.08±0.0234.20±7.04A大劑量組81200.08±0.0132.00±3.980.04±0.0114.50±5.07A眾中劑量組9800.09±0.0134.62士3.210.09±0.0233.33±7.54A小劑量組9400.10±0.0138.96±2.630.10±0.0137.23±4.74A注與對(duì)照組比較，AP<0.01;與阿司匹林組相比，眾P<0.01實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，阿司匹林組、給藥組與空白對(duì)照組相比，在2h均呈現(xiàn)了顯著的抑制炎癥腫脹的作用(P<0.01);大劑量組與阿司匹林組相比，也有顯著性差異。3、小鼠腹腔毛細(xì)管通透性實(shí)驗(yàn)小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分成5組，每組10只。灌服獨(dú)行千里有效部位(折算成9藥材量)40g/kg(小劑量組)、80g/kg(中劑量組)、120g/kg(大劑量組)、阿司匹林200mg/kg(陽(yáng)性對(duì)照組)、0.5%CMC溶液(空白對(duì)照組)，每日一次，連續(xù)給藥5天。末次給藥1小時(shí)后，取伊文思藍(lán)生理鹽水溶液，以0.lml/10g尾靜脈注射，立刻腹腔注射0.6%冰醋酸0.2ml/只。20分鐘后，斷脊椎處死，用剪刀剪開腹腔，以5ml生理鹽水反復(fù)洗滌，將洗滌液以離心管收集，用離心機(jī)以1000r/min離心5分鐘取濾液，濾液用UV2300型分光光度計(jì)，以590nm處波長(zhǎng)測(cè)OD值，結(jié)果見表5。表5獨(dú)行千里有效部位對(duì)小鼠毛細(xì)血管通透性的影響G±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注與對(duì)照組比較，AP<0.01實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，獨(dú)行千里有效部位具有良好的抗炎作用。實(shí)施例20獨(dú)行千里有效部位對(duì)大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎治療作用本實(shí)驗(yàn)用弗氏完全佐劑(FAC)建立大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎(AA)模型，用游標(biāo)卡尺測(cè)量大鼠足跖厚度，以FAC致炎后大鼠足跖腫脹度、病理改變程度為指標(biāo)，觀察獨(dú)行千里有效部位的抗炎作用。藥物獨(dú)行千里有效部位、正清風(fēng)痛寧片(西安利君集團(tuán))試劑弗氏完全佐劑(Freund'sAdjuvantComplete,FAC)美國(guó)SIGMA公司產(chǎn)品。動(dòng)物SD大鼠，雄性，體重180-200g。由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。儀器At:S-1EAS型電子天平(精度0.5g)北京市菲姆斯科技開發(fā)公司產(chǎn)品大鼠50只，適應(yīng)性飼養(yǎng)三天，按體重隨機(jī)分為5組，分別灌服獨(dú)行千里氯仿部位(折算成藥材量)40g/kg(小劑量組)、80g/kg(中劑量組)、120g/kg(大劑量組)、正清風(fēng)痛寧片組、模型組，連續(xù)給藥2天后。第三天用游標(biāo)卡尺在測(cè)量正常足厚度之后，每只大鼠右后足趾皮內(nèi)注射弗氏完全佐劑0.lml，并在6h、18h、24h、3d、5d分別測(cè)量致炎后足腫脹度，并在10d、14d、18d、22d、26d分別測(cè)定左后足趾(非致炎足)的厚度。以足腫脹度為指標(biāo)，采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行單因素方差分析。急發(fā)性和繼發(fā)性炎癥實(shí)驗(yàn)結(jié)果分別見表6和表7。表6.獨(dú)行千里有效部位對(duì)大鼠急性炎癥實(shí)驗(yàn)結(jié)果(右足腫脹度)(；士SD，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注與模型組相比:P>0.05*;P<0.01***;0.05>P>0.01**從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，24小時(shí)內(nèi)為急性炎癥的發(fā)生期，與模型組相比，給藥組各個(gè)劑量和陽(yáng)性對(duì)照組對(duì)其均有明顯抗炎作用。24小時(shí)后為繼發(fā)性炎癥的形成期，各個(gè)給藥組對(duì)繼發(fā)性炎癥形成雖有一定的抑制作用，但不是特別明顯。3天后，給藥組和陽(yáng)性對(duì)照組的炎癥抑制作用較弱。由此可見，獨(dú)行千里有效部位高、中、低劑量組，對(duì)大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎急性炎癥，均有抑制作用。_表7獨(dú)行千里有效部位對(duì)大鼠繼發(fā)性炎癥實(shí)驗(yàn)結(jié)果(左足腫脹度)(；士SD，n=10)左足腫脹度(mm)10D14D18D22D26D模型組0.96±0.330.89±0.330.87±0.310.88±0.320.80±0.18低劑量40g/kg0.94士0.160.85±0.120.78±0.220.61±0.210.51±0.25中劑量80g/kg0.93±0.110.80±0.150.75±0.170.56±0.18**0,39±0.12**高劑量120g/kg0.89±0.090.82±0.170.70±0.150.54±0.18**0.35±0.14***鹽酸青0.93±0.070.86±0.120.80士0.130.56±0.13**0.38±0.10**藤堿_注與模型組相比:P<0.01***;0.05>P>0.01**從表7實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知18天以內(nèi)是繼發(fā)性炎癥的形成期，藥物對(duì)繼發(fā)性炎癥的形成有一定的抑制作用，作用相對(duì)緩和，無(wú)顯著性。18天后，繼發(fā)性炎癥形成，藥物的抗炎作用開始顯效。與空白組相比，高、中劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組都有明顯的抗炎作用。高劑量組26天有極顯著性差異(P<0.01***)，中劑量組與陽(yáng)性對(duì)照組有顯著性差異(P<0.05)。實(shí)施例21獨(dú)行千里有效部位對(duì)大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎病理改變的影響1組織固定和切片方法取材、固定和脫f丐取藥效實(shí)驗(yàn)第26天結(jié)束，大鼠處死后，在踝關(guān)節(jié)上15mm處剪斷后肢，用10%的中性福爾馬林浸泡固定48h，再用甲酸脫鈣液浸泡4周脫鈣。沖洗流水沖洗24h，洗去甲酸脫鈣溶液。脫水用系列濃度乙醇逐級(jí)脫水，70%乙醇30min，80%乙醇30min，90%乙醇30min，95X乙醇30min，無(wú)水乙醇I60min，無(wú)水乙醇1130min。透明二甲苯I20min，二甲苯II觀察至組織透明。浸蠟透明后的組織立即置于預(yù)先用烤箱融化的石蠟中，石蠟I60min，石蠟I160min。包埋將組織定向置于裝有融化石蠟的包埋板中，待石蠟?zāi)坛蓧K。切片、貼片和烤片用石蠟切片機(jī)將蠟塊切成6iim的薄片，將蠟片貼在涂有蛋白甘油的載玻片上，45°C恒溫箱內(nèi)過(guò)夜后，常溫下保存待染色。2HE染色步驟將烤干的切片放入二甲苯I、二甲苯II、二甲苯III各5min脫蠟；依次移入無(wú)水乙醇1、無(wú)水乙醇11、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇、60%乙醇、50%乙醇、蒸餾水中復(fù)水，各5min;蘇木精染色5min;自來(lái)水洗、蒸餾水洗各3遍；1%鹽酸乙醇分色5秒鐘；自來(lái)水洗3遍，氨水堿化10秒；蒸餾水洗3遍；0.5%伊紅酒精染色13min;依次移入90%乙醇、95%乙醇、無(wú)水乙醇I各O.5min;無(wú)水乙醇II5min;二甲苯1、二甲苯11、二甲苯III各5min;最后用中性樹膠封片。實(shí)驗(yàn)結(jié)果致炎后第26天的AA大鼠踝關(guān)節(jié)組織切片顯微鏡下觀察，模型組可見滑膜內(nèi)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，滑膜組織腫脹，有少量纖維組織滲出；滑膜細(xì)胞有一定程度增生，排列不規(guī)則；滑膜層下毛細(xì)血管擴(kuò)張，血管腔內(nèi)充滿炎性細(xì)胞。見附圖l所示。各給藥組鏡下所見，滑膜組織炎性細(xì)胞較少，滑膜腫脹較輕纖維組織滲出不明顯；滑膜細(xì)胞有增生但程度低于模型組；滑膜層毛細(xì)血管腔內(nèi)炎性細(xì)胞較少，見附圖24所示，陽(yáng)性對(duì)照組結(jié)果見附圖5。1權(quán)利要求一種獨(dú)行千里提取物，其特征在于是取植物獨(dú)行千里根莖，粉碎后加熱回流、冷浸或滲漏提取，減壓濃縮得到粗提浸膏，用氯仿提取粗提浸膏得到。2.—種權(quán)利要求1所述獨(dú)行千里提取物的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)獨(dú)行千里根莖干燥后粉碎成粗粉；(2)采用體積比濃度為95%的乙醇浸提、回流提取或超聲提取獨(dú)行千里根莖粉；合并提取液，減壓濃縮得浸膏；或采用體積比濃度為7095%的乙醇滲漏提取獨(dú)行千里根莖粉；合并提取液，減壓濃縮得浸膏；(3)將步驟(2)所得浸膏經(jīng)柱層析純化后，即得獨(dú)行千里有效部位氯仿部位；或?qū)⒉襟E(3)所得浸膏經(jīng)石油醚脫脂后以氯仿萃取、氯仿回流提取或氯仿超聲提取，提取液減壓回收氯仿，得稠膏，即為所述獨(dú)行千里提取物。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于步驟(2)所述乙醇浸提采用的乙醇的加入量按照獨(dú)行千里根莖粉重量的820倍量加入；優(yōu)選浸提3次，每次1天7天；或步驟(2)所述乙醇回流提取，乙醇的加入量按照獨(dú)行千里根莖粉重量的820倍量加入；優(yōu)選提取23次，每次16小時(shí)；或步驟(2)所述乙醇超聲提取，乙醇的加入量按照獨(dú)行千里根莖粉重量的820倍量加入，超聲提取23次，每次16小時(shí)；或步驟(2)所述乙醇滲漏提取的流速13ml/秒。4.一種權(quán)利要求1所述獨(dú)行千里提取物的制備方法，其特征在于包括以下步驟(A)獨(dú)行千里根莖干燥后粉碎；(B)采用6080%乙醇回流提取獨(dú)行千里根莖粉，合并提取液，減壓濃縮得浸膏；(C)以稀酸水酸化后，酸水液以氨水調(diào)K1值至9ll，氯仿萃取，減壓回收氯仿所得稠膏，即為獨(dú)行千里有效部位。5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于步步驟(B)所述乙醇的加入量是獨(dú)行千里根莖粉重量的820倍，提取3次，每次16小時(shí)。6.—種權(quán)利要求1所述獨(dú)行千里提取物的應(yīng)用，其特征在于應(yīng)用于制備抗炎鎮(zhèn)痛、抗風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、治療痛風(fēng)或肩周炎方面的藥物。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于應(yīng)用于制備治療神經(jīng)病理性疼痛、治療炎性疼痛、治療癌癥性疼痛、治療糖尿病疼痛、治療風(fēng)濕病疼痛、治療跌打損傷疼痛、治療咽喉腫痛、治療牙痛或治療腹痛藥物方面。8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的應(yīng)用，其特征在于應(yīng)用于制備治療痙攣性疼痛藥物方面。9.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的應(yīng)用，其特征在于所述獨(dú)行千里提取物的應(yīng)用劑量為單次服用劑量0.5200mg/kg體重。10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于是將所述獨(dú)行千里提取物輔以藥劑學(xué)允許的賦形劑制備成為口服片齊U、膠囊、丸齊U、顆粒齊IJ、散齊IJ、口服液或乳劑；或者制備成為外用涂抹劑、膏劑、巴布劑、貼劑或凝膠劑。全文摘要本發(fā)明公開了一種獨(dú)行千里提取物及其制備方法和應(yīng)用。所述獨(dú)行千里提取物是取植物獨(dú)行千里根莖，粉碎后加熱回流、冷浸或滲漏提取，減壓濃縮得到粗提浸膏，用氯仿提取粗提浸膏得到，可應(yīng)用于制備治療神經(jīng)病理性疼痛、治療炎性疼痛、治療癌癥性疼痛、治療糖尿病疼痛、治療風(fēng)濕病疼痛、治療跌打損傷疼痛、治療咽喉腫痛、治療牙痛或治療腹痛藥物方面，具有很好的鎮(zhèn)痛、抗炎活性，對(duì)弗氏完全佐劑性關(guān)節(jié)炎效果明顯。本發(fā)明的制備工藝具有成本低、易于工業(yè)化生產(chǎn)的特點(diǎn)。文檔編號(hào)A61K36/185GK101780124SQ20101012248公開日2010年7月21日申請(qǐng)日期2010年3月12日優(yōu)先權(quán)日2010年3月12日發(fā)明者鄧亞利申請(qǐng)人:華南農(nóng)業(yè)大學(xué)