專利名稱：：高良姜有效部位在制備治療白癜風(fēng)的藥物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體是從中藥高良姜中提取含高良姜素的有效部位作為制備治療白癜風(fēng)的藥物的用途。
背景技術(shù)：
：白癜風(fēng)是三大世界性疑難性皮膚病之一，在世界各地均有發(fā)生，發(fā)病率約在1-2%。并且，全世界各地不斷發(fā)病的報(bào)道均有繼續(xù)上升趨勢(shì)。白癜風(fēng)是一種常見(jiàn)多發(fā)的后天性、原發(fā)性皮膚色素脫失癥，非繼發(fā)于其他皮膚病之后遺留的脫色素性病變，表現(xiàn)為局部或泛發(fā)性脫色素性病變。白癜風(fēng)的危害性不僅僅是影響患者容貌，而且還給患者施以嚴(yán)重的心理壓力和精神上的痛苦。因此，對(duì)本病的防治具有重要的意義。白癜風(fēng)發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，病因還不完全清楚。由于白癜風(fēng)的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，因此對(duì)白癜風(fēng)的治療僅停留在治標(biāo)的階段。目前白癜風(fēng)的藥物治療方法有皮質(zhì)激素療法，苯丙氨酸配合UVA療法，補(bǔ)骨脂素聯(lián)合UVA治療和中藥治療。高良姜為姜科植物高良姜(AlpiniaofficeinarumHance)的干燥根莖。具有溫胃、祛風(fēng)、散寒、行氣、止痛的功效，臨床常用于治療脘腹寒痛、胃寒嘔吐、消化不良、噯氣吞酸等病癥，高良姜化學(xué)成份復(fù)雜，藥理活性強(qiáng)，有較強(qiáng)的抗?jié)儭⒖垢篂a、利膽、鎮(zhèn)痛、抗炎、抗缺氧、抗凝、抗血栓形成等作用，但關(guān)于高良姜含高良姜素有效部位作為制備治療白癜風(fēng)的藥物用途尚未見(jiàn)報(bào)道。高良姜素通用名為galangin，化學(xué)名為3，5，7_三羥基黃酮，是中藥高良姜中主要有效成分之一。高良姜中除此之外，還含有山奈酚，槲皮素等黃酮類成分。高良姜藥理作用多，但目前還沒(méi)有對(duì)其在治療白癜風(fēng)方面的藥理用途。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于，提供一種含高良姜素有效部位作為制備治療白癜風(fēng)的藥物的用途，是從植物高良姜根莖中提取總黃酮有效部位，然后將提取物總黃酮按常規(guī)制藥方法制成膠囊、片劑、顆粒、或滴丸劑型，通過(guò)實(shí)驗(yàn)表明含高良姜素有效部位可以促進(jìn)黑素細(xì)胞增殖，上調(diào)酪氨酸酶活性，增加黑素含量；抑制小鼠免疫系統(tǒng)作用；白癜風(fēng)動(dòng)物模型皮膚基底層黑色素細(xì)胞數(shù)、基底層含黑素顆粒細(xì)胞數(shù)顯著增多，酪氨酸酶表達(dá)增強(qiáng)。為以植物高良姜根莖為原料制備治療白癜風(fēng)的藥物提供了新的途徑。本發(fā)明所述的含高良姜素有效部位作為制備治療白癜風(fēng)的藥物用途，是從植物高良姜根莖中提取含高良姜素有效部位，然后將提取物按常規(guī)制藥方法制成膠囊、片劑、顆粒、或滴丸劑型，具體操作按下列步驟進(jìn)行a、以植物高良姜根莖為原料，用50-95%濃度的乙醇進(jìn)行3次，料液比為10倍，8倍，8倍，提取溫度60-80°C，每次時(shí)間為2，2，1小時(shí)，得到總粗提物；b、再將總粗提物用體積百分比30-60%乙醇溶解，用大孔樹脂、聚酰胺或者葡聚糖凝膠吸附，用體積百分比40%-70%乙醇洗脫，收集洗脫液；將洗脫液減壓濃縮，干燥，即得含高良姜素有效部位，以干品重量計(jì)算含總黃酮大于50%，用制備液相色譜儀制備得到高良姜素的含量為20-99.8%；或?qū)⒉襟Ea總粗提物用石油醚、乙酸乙酯或氯仿溶劑進(jìn)行萃取，所得萃取物干燥后得到脂溶性產(chǎn)物，再用體積百分比30-60%乙醇溶解，用大孔樹脂、聚酰胺或者葡聚糖凝膠吸附，用體積百分比40%-70%乙醇洗脫，收集洗脫液；將洗脫液減壓濃縮，干燥，即得含高良姜素有效部位，以干品重量計(jì)算含總黃酮大于50%，用制備液相色譜儀制備得到高良姜素的含量為20-99.8%。本發(fā)明采用相關(guān)的藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行體內(nèi)外藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，說(shuō)明含高良姜素有效部位在用于治療白癜風(fēng)方面的藥物用途。含高良姜素有效部位是指以干品重量計(jì)算含總黃酮大于50%，高良姜素的含量為20-99.8%，含高良姜素有效部位中總黃酮的測(cè)定方法采用文獻(xiàn)[林輝.中藥高良姜總黃酮的含量測(cè)定.2001，12(6)486]分光光度法測(cè)定。高良姜素的測(cè)定方法采用文獻(xiàn)[李彩君，等.HPLC法測(cè)定高良姜中高良姜素的含量.2002，13(1)41]高效液相色譜法測(cè)定。本發(fā)明所述的含高良姜素有效部位作為制備治療白癜風(fēng)的藥物用途，通過(guò)實(shí)驗(yàn)表明含高良姜素有效部位可以促進(jìn)黑素細(xì)胞增殖，上調(diào)酪氨酸酶活性，增加黑素含量；抑制小鼠免疫系統(tǒng)作用；白癜風(fēng)動(dòng)物模型皮膚基底層黑色素細(xì)胞數(shù)、基底層含黑素顆粒細(xì)胞數(shù)顯著增多，酪氨酸酶表達(dá)增強(qiáng)。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1a、以植物高良姜根莖為原料，用50%濃度的乙醇進(jìn)行提取3次，料液比為10倍，8倍，8倍，提取溫度60°C，每次時(shí)間為2，2，1小時(shí)，得到總粗提物；b、再將總粗提物用體積百分比30%乙醇溶解，用聚酰胺柱吸附，再用體積百分比40%乙醇洗脫，收集洗脫液，將洗脫液減壓濃縮，干燥，即得高良姜素有效部位，以干品重量計(jì)算含總黃酮大于50%，進(jìn)一步采用制備液相色譜儀制備得到高良姜素的含量為20-99.8%。實(shí)施例2a、以植物高良姜根莖為原料，用60%濃度的乙醇進(jìn)行提取3次，料液比為10倍，8倍，8倍，提取溫度65°C，每次時(shí)間為2，2，1小時(shí)，得到總粗提物；b、再將總粗提物用石油醚溶劑進(jìn)行萃取，所得萃取物干燥后得到脂溶性產(chǎn)物，再用體積百分比40%乙醇溶解，用大孔樹脂吸附，用體積百分比50%乙醇洗脫，收集洗脫液，將洗脫液減壓濃縮，干燥，即得高良姜素有效部位，以干品重量計(jì)算含總黃酮大于50%，進(jìn)一步采用制備液相色譜儀制備得到高良姜素的含量為20-99.8%；實(shí)施例3a、以植物高良姜根莖為原料，用70%濃度的乙醇進(jìn)行提取3次，料液比為10倍，8倍，8倍，提取溫度70°C，每次時(shí)間為2，2，1小時(shí)，得到總粗提物；b、再將總粗提物用體積百分比50%乙醇溶解，用大孔樹脂吸附，用體積百分比55%乙醇洗脫，收集洗脫液，將洗脫液減壓濃縮，干燥，即得高良姜素有效部位，以干品重量計(jì)算含總黃酮大于50%，進(jìn)一步采用制備液相色譜儀制備得到高良姜素的含量為20-99.8%。實(shí)施例4a、以植物高良姜根莖為原料，用80%濃度的乙醇進(jìn)行提取3次，料液比為10倍，8倍，8倍，提取溫度75°C，每次時(shí)間為2，2，1小時(shí)，得到總粗提物；b、再將總粗提物用乙酸乙酯溶劑進(jìn)行萃取，所得萃取物干燥后得到脂溶性產(chǎn)物，再用體積百分比55%乙醇溶解，用聚酰胺柱吸附，用體積百分比65%乙醇洗脫，收集洗脫液，將洗脫液減壓濃縮，干燥，即得高良姜素有效部位，以干品重量計(jì)算含總黃酮大于50%，進(jìn)一步采用制備液相色譜儀制備得到高良姜素的含量為20-99.8%。實(shí)施例5a、以植物高良姜根莖為原料，用95%濃度的乙醇進(jìn)行提取3次，料液比為10倍，8倍，8倍，提取溫度80°C，每次時(shí)間為2，2，1小時(shí)，得到總粗提物；b、再將總粗提物用體積百分比60%乙醇溶解，用大孔樹脂吸附，用體積百分比70%乙醇洗脫，收集洗脫液；將洗脫液減壓濃縮，干燥，即得高良姜素有效部位，以干品重量計(jì)算含總黃酮大于50%，進(jìn)一步采用制備液相色譜儀制備得到高良姜素的含量為20-99.8%。實(shí)施例6a、以植物高良姜根莖為原料，用95%濃度的乙醇進(jìn)行提取3次，料液比為10倍，8倍，8倍，提取溫度78°C，每次時(shí)間為2，2，1小時(shí)，得到總粗提物；b、再將總粗提物用氯仿溶劑進(jìn)行萃取，所得萃取物干燥后得到脂溶性產(chǎn)物，再用體積百分比60%乙醇溶解，用聚酰胺柱吸附，用體積百分比60%乙醇洗脫，收集洗脫液，將洗脫液減壓濃縮，干燥，即得高良姜素有效部位，以干品重量計(jì)算含總黃酮大于50%，進(jìn)一步采用制備液相色譜儀制備得到高良姜素的含量為20-99.8%。實(shí)施例7含高良姜素有效部位的體外藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)篩選模型正常人黑素細(xì)胞，HaCat細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)方法取正常兒童環(huán)切包皮，選用加入CT，bFGF，TPA的DMEM培養(yǎng)基常規(guī)原代培養(yǎng)一周，HaCat常規(guī)DMEM培養(yǎng)，共培養(yǎng)體系以黑素細(xì)胞HaCat細(xì)胞=13接種于96孔板，傳代培養(yǎng)24h后，加入不同濃度的藥物和對(duì)照，48h后進(jìn)行測(cè)定分析相關(guān)指標(biāo)。陽(yáng)性對(duì)照藥為8-mop(日本東京化成)，濃度為5ug/ml。細(xì)胞增殖的測(cè)定使用MTT法；酪氨酸酶活性的測(cè)定使用多巴氧化法；黑素含量用NaOH法；結(jié)果見(jiàn)表1。表1含高良姜素有效部位對(duì)黑素細(xì)胞、共培養(yǎng)體系細(xì)胞的影響(I士S，η=6)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>[注Γ為與正常對(duì)照組比較P<0.05廣為與正常對(duì)照組比較P<0.01。含高良姜素有效部位對(duì)黑素細(xì)胞遷移功能的影響取transwell，在上表面涂布50ul人纖維連接蛋白(FN)(10ug/ml,)，在干燥的孵箱中干燥2h，在24孔培養(yǎng)板中加入600ulDMEM培養(yǎng)基(10%牛血清FBS)，將預(yù)處理過(guò)的Transwell放入孔中，藥物處理過(guò)的細(xì)胞胰酶消化后用DMEM(不含F(xiàn)BS)稀釋為1X105/ml,取200ul加入Transwell小室的上室放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)18h，取出Transwell，用棉簽擦去上室細(xì)胞和FN，緩沖液(PBS)洗2遍，將小室放入醋酸甲醇=13的固定液中固定30min，晾干，放入吉姆薩中染色lOmin，PBS洗滌3遍，晾干后將小室放在載玻片上，置于顯微鏡下觀察細(xì)胞，換不同視野拍照，每組8張，細(xì)胞計(jì)數(shù)。結(jié)果見(jiàn)表2.表2含高良姜素有效部位對(duì)黑素細(xì)胞遷移功能的影響G士S，η=8)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>[注Γ為與正常對(duì)照組比較P<0.05廣為與正常對(duì)照組比較P<0.01。含高良姜素有效部位對(duì)黑素細(xì)胞粘附能力的影響96孔板，每孔20ulFN(5ug/ml)，室溫晾干，將藥物預(yù)處理過(guò)細(xì)胞制備成5X104/ml的細(xì)胞懸液，每孔lOOul，每組6個(gè)重復(fù)孔培養(yǎng)lh，吸去上清，加入10%三氯乙酸50ul，4°C固定lh，蒸餾水沖洗5遍，晾干。2%結(jié)晶紫染色lOmin，蒸餾水沖洗晾干。每孔加入2%SDSlOOul震蕩5min，570nm測(cè)定OD值，結(jié)果見(jiàn)表3。表3含高良姜素有效部位對(duì)黑素細(xì)胞粘附能力的影響G士S，η=6)組別給藥劑量OD正常對(duì)照組O0.292±0.007陽(yáng)性對(duì)照組5ug/ml0.412±0.010**低劑量給藥組25ug/ml0.352±0.008**中劑量給藥組50ug/ml0.387±0.006**_高劑量給藥組_lOOug/ml_0.422士0.011**[注Γ為與正常對(duì)照組比較P<0.05廣為與正常對(duì)照組比較P<0.01。結(jié)果分析結(jié)果表明含高良姜素有效部位可使黑素細(xì)胞增殖，酪氨酸酶活性提高，黑素含量增加；并以共培養(yǎng)體系更為明顯；說(shuō)明含高良姜素有效部位可通過(guò)刺激角質(zhì)形成細(xì)胞分泌相關(guān)細(xì)胞因子作用于黑素細(xì)胞使得黑素合成增多。實(shí)施例8含高良姜素有效部位的體內(nèi)藥效學(xué)研究通過(guò)灌胃給藥觀察含高良姜素有效部位對(duì)黑色豚鼠皮膚基底層黑素細(xì)胞，酪氨酸酶活性表達(dá)的影響。動(dòng)物模型的建立黑色豚鼠背部每天涂抹5%氫醌，每次0.5ml，每天2次，涂抹30天；常規(guī)制作石蠟切片觀察發(fā)現(xiàn)，黑色豚鼠皮膚基底層黑色素細(xì)胞，基底層含黑素顆粒細(xì)胞，酪氨酸酶表達(dá)減弱。模型成功。8.2不同劑量的含高良姜素有效部位對(duì)黑色豚鼠皮膚增色作用黑色豚鼠72只，隨機(jī)分為6組；脫去背部黑色毛5cmX5cm，其中第1組涂抹生理鹽水，其余5組采用等量5%氫醌脫色，連續(xù)涂抹30天。I組(正常對(duì)照組)動(dòng)物脫毛區(qū)涂抹生理鹽水0.5ml，每天2次，連續(xù)涂抹30天。而后每天灌胃生理鹽水2ml，連續(xù)30天。II組(模型組)動(dòng)物脫毛區(qū)涂抹5%氫醌O.5ml，每天2次，連續(xù)涂抹30天。IV組(陽(yáng)性對(duì)照組)動(dòng)物脫毛區(qū)涂抹氫醌5%0.5ml，每天2次，連續(xù)涂抹30天。而后隔天灌胃8-甲氧沙林片0.93mg/只，連續(xù)30天。V組(低劑量組)動(dòng)物脫毛區(qū)涂抹氫醌5%0.5ml，每天2次，連續(xù)涂抹30天。而后每天灌胃相當(dāng)于高良姜生藥0.186g/只，連續(xù)30天。VI組(中劑量組)動(dòng)物脫毛區(qū)涂抹氫醌5%0.5ml，每天2次，連續(xù)涂抹30天。而后每天灌胃相當(dāng)于高良姜生藥0.930g/只，連續(xù)30天。VII組(高劑量組)動(dòng)物脫毛區(qū)涂抹氫醌5%0.5ml，每天2次，連續(xù)涂抹30天。而后每天灌胃相當(dāng)于高良姜生藥1.860g/只，連續(xù)30天。結(jié)果處理給藥結(jié)束后，處死動(dòng)物，取皮膚組織，常規(guī)石蠟包埋，切片后分別進(jìn)行Dopa-氧化酶染色、Lillie染色、DAB-H2O2染色以及鏈霉素抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連接(S-P)常規(guī)染色，光鏡下(400X)觀察。表皮黑素細(xì)胞的觀察皮膚切片Dopa-氧化酶染色后置于光鏡下觀察，每個(gè)標(biāo)本觀察10個(gè)視野，計(jì)算每100個(gè)表皮基底細(xì)胞中MC的平均數(shù)量。SPSS12.0軟件統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果見(jiàn)表4。表4含高良姜素有效部位對(duì)豚鼠表皮黑素細(xì)胞數(shù)的影響G士S，η=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>[注]6為與模型組比較P<0.05;ΔΔ為與模型組比較P<0.01。含黑素顆粒的基底細(xì)胞計(jì)數(shù)皮膚切片Lillie染色后置于光鏡下觀察，每個(gè)標(biāo)本觀察10個(gè)視野，計(jì)算每100個(gè)表皮基底細(xì)胞中含黑素顆粒的基底細(xì)胞的平均數(shù)量。SPSS12.0軟件統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果見(jiàn)表5。表5含高良姜素有效部位對(duì)豚鼠表皮含黑素顆粒基底細(xì)胞數(shù)的影響(I士S，η=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>[注]6為與模型組比較P<0.05;ΔΔ為與模型組比較P<0.01。酪氨酸酶含量觀察采用二級(jí)計(jì)分法對(duì)酪氨酸酶陽(yáng)性表達(dá)情況進(jìn)行判定，酪氨酸酶陽(yáng)性產(chǎn)物定位于細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，為黃色或棕黃色顆粒。陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)<5%為0分；5%-25%為1分；25%-50%為2分；50%-75%為3分；>75%為4分。按染色強(qiáng)度分類淡黃色1分；黃或深黃2分；褐或棕黃色3分。兩者相加小于2分為陰性(_)，2-3分為陽(yáng)性(+)，4-5分為中等陽(yáng)性(2+)，6-7分為強(qiáng)陽(yáng)性(3+)。各組動(dòng)物皮膚之間的陽(yáng)性率比較均采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)，P<0.05為差異有顯著性差異。結(jié)果見(jiàn)表6。表6含高良姜素有效部位對(duì)豚鼠表皮酪氨酸酶強(qiáng)度的影響G)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>[注]*為與模型組比較P<0.05為與模型組比較P<0.01。黑素細(xì)胞刺激素(a-MSH)陽(yáng)性表達(dá)數(shù)的觀察采用二級(jí)計(jì)分法對(duì)a-MSH陽(yáng)性表達(dá)情況進(jìn)行判定，a-MSH陽(yáng)性產(chǎn)物定位于黑素細(xì)胞胞漿和細(xì)胞外基質(zhì)內(nèi)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，以顯微鏡下黑素細(xì)胞胞漿或細(xì)胞外基質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒狀或團(tuán)塊狀者為陽(yáng)性。陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)<10%為0分；11%-40%為1分；41%-70%為2分；>71%為3分。按著色深淺分類淡黃色0分；黃或深黃1分；褐或棕黃色2分；深棕色為3分。兩者相加小于2分為陰性(_)，2-3分為弱陽(yáng)性(+)，4-5分為陽(yáng)性(2+)，6-7分為強(qiáng)陽(yáng)性(3+)。各組動(dòng)物皮膚之間的陽(yáng)性率比較均采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)，P^0.05為差異有顯著性差異。結(jié)果見(jiàn)表7。表7含高良姜素有效部位對(duì)豚鼠表皮a-MSH陽(yáng)性表達(dá)數(shù)的影響G)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>[注]*為與模型組比較P<0.05為與模型組比較P<0.01。結(jié)果分析通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)表明含高良姜素有效部位能夠通過(guò)活化黑素細(xì)胞，增強(qiáng)黑素合成，激活酪氨酸酶活性來(lái)達(dá)到色素恢復(fù)的作用。與此同時(shí)，含高良姜素有效部位對(duì)黑素細(xì)胞刺激素也具有明顯的促進(jìn)作用，這提示含高良姜素有效部位可能通過(guò)刺激分泌黑素細(xì)胞刺激素達(dá)到黑素細(xì)胞增殖并遷移至病灶區(qū)，從而治愈白癜風(fēng)。實(shí)施例9不同劑量的含高良姜素有效部位對(duì)小鼠免疫調(diào)節(jié)作用MTT法考察含高良姜素有效部位對(duì)小鼠免疫功能的抑制作用動(dòng)物分組共40只小鼠，隨機(jī)分為4組，每組10只對(duì)照組，含高良姜素有效部位高、中、低劑量三組。脾細(xì)胞懸液制備無(wú)菌條件下，剝離小鼠脾臟，PBS清洗，置于細(xì)胞過(guò)濾篩，研碎脾臟，RPMI-1640液沖洗，1000r/min離心lOmin，棄上清，再加入2ml0.83%NH4CL,靜置3min，除去紅細(xì)胞，1000r/min離心5min，棄上清，用RPMI-1640培養(yǎng)液調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度為(1_5)*106個(gè)/ml。Τ、B淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)將細(xì)胞懸液加入96孔培養(yǎng)板中，每孔IOOul，藥物組再加入IOOul不同濃度的藥物，藥物+conA組加入IOOul不同濃度的藥物以及conA溶液(終濃度為5mg/ml)，conA對(duì)照組加入RPMI-1640培養(yǎng)液IOOul以及conA溶液(終濃度為5mg/ml)，生長(zhǎng)對(duì)照組加入RPMI-1640培養(yǎng)液IOOul，每個(gè)濃度6個(gè)復(fù)孔，置于37°C、5%C02飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)66h后，向每孔中加入IOul的MTT(濃度10mg/ml)，繼續(xù)孵育4h，離心(lOOOrpm,IOmin)后，輕輕吸棄上清液，加入lOOulDMSO，震蕩5min，于酶標(biāo)儀570nm處測(cè)定OD值。結(jié)果見(jiàn)表8。表8含高良姜素有效部位對(duì)小鼠T、B淋巴細(xì)胞的影響G士S，η=6)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>[注Γ為與生長(zhǎng)對(duì)照組比較P<0.05廣為與生長(zhǎng)對(duì)照組比較P<0.01。含高良姜素有效部位對(duì)小鼠免疫球蛋白的影響動(dòng)物分組共60只小鼠，隨機(jī)分為6組，每組10只正常對(duì)照組，模型組，陽(yáng)性對(duì)照組，含高良姜素有效部位高、中、低劑量三組。小鼠免疫功能低下模型的建立上述動(dòng)物除正常對(duì)照組外，其余五組于實(shí)驗(yàn)開始日一次性予以腹腔注射環(huán)磷酸胺(300mg/kg)，誘導(dǎo)建立小鼠免疫功能低下模型。誘導(dǎo)建立小鼠免疫功能低下模型后，按照如下方法進(jìn)行給藥觀察，連續(xù)觀察給藥10天。I組正常對(duì)照組，每只小鼠每天灌胃生理鹽水0.2ml；II組模型組，每只每天灌胃生理鹽水0.2ml；III組陽(yáng)性對(duì)照組，每只每天灌胃0.2%左旋咪唑1次，每次0.2ml；IV組高劑量組，每只小鼠每天灌胃含高良姜素有效部位80mg/只；V組中劑量組，每只小鼠每天灌胃含高良姜素有效部位40mg/只；VI組低劑量組，每只小鼠每天灌胃含高良姜素有效部位20mg/只。對(duì)小鼠免疫球蛋白IgG、IgM、IgA的影響各實(shí)驗(yàn)組小鼠末次用藥后禁食，24h后處死動(dòng)物，摘眼球取血，分離血清用于測(cè)定免疫球蛋白IgG、IgM、IgA(mg/L)。數(shù)據(jù)進(jìn)采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件行組間t檢驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表9。表9高良姜對(duì)小鼠免疫球蛋白IgG、IgM、IgA的影響(；士S，η=4)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>[注Γ為與生長(zhǎng)對(duì)照組比較P<0.05廣為與生長(zhǎng)對(duì)照組比較P<0.01。對(duì)小鼠胸腺系數(shù)及脾臟系數(shù)的影響各實(shí)驗(yàn)組小鼠末次用藥后禁食，24h后處死動(dòng)物，取脾臟以及胸腺，稱重，計(jì)算脾臟、胸腺指數(shù)(mg/10g體重)。數(shù)據(jù)進(jìn)行組間t檢驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表10。表10含高良姜素有效部位對(duì)小鼠胸腺系數(shù)及脾臟系數(shù)的影響(I士S，η=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>[注Γ為與生長(zhǎng)對(duì)照組比較P<0.05廣為與生長(zhǎng)對(duì)照組比較P<0.01。結(jié)果分析通過(guò)結(jié)果可以看出，含高良姜素有效部位具有一定的免疫抑制作用。實(shí)施例10高良姜含高良姜素有效部位治療白癜風(fēng)臨床療效觀察白癜風(fēng)患者68例，男30例，女38例，年齡8-75歲，平均26.1歲；病程1_12月35例，1-5年18例，6-30年15例；臨床分型泛發(fā)型12例，散發(fā)性13例，局限型28例，節(jié)段性15例；臨床分期進(jìn)展期42例，穩(wěn)定期26例。隨機(jī)分為兩組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，兩組無(wú)顯著性差異(P>0.05)。治療組34例，給予含高良姜素有效部位的制劑；對(duì)照組34例，給予陽(yáng)性對(duì)照藥8-甲氧沙林片。療效判定標(biāo)準(zhǔn)痊愈白斑全部消退，恢復(fù)正常膚色；顯效白斑部分消退或縮小，恢復(fù)正常膚色的面積占皮損面積>50%；有效白斑部分消退或縮小，恢復(fù)正常膚色的面積占皮損面積10%-50%；無(wú)效白斑無(wú)變化或縮小，恢復(fù)正常膚色的面積占皮損面積<10%.數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)方法，使用EpiInfoversion6.04b軟件Epitable過(guò)程作數(shù)據(jù)處理及分析。結(jié)果含高良姜素有效部位治療白癜風(fēng)34例臨床療效觀察，治療組34例，痊愈7例，顯效10例，有效9例，無(wú)效8例，痊愈率20.59%，總有效率76.47%；對(duì)照組34例，痊愈8例，顯效8例，有效11例，無(wú)效7例，痊愈率23.54%，總有效率79.41%。治療組與對(duì)照組相比，無(wú)顯著性差異(Χ2=0.81,P=0.21)。結(jié)果見(jiàn)表11。表11兩組白癜風(fēng)患者臨床療效觀察<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>含高良姜素有效部位治療白癜風(fēng)不同患病年齡、病期和臨床類型療效比較結(jié)果治療效果與治療時(shí)間、發(fā)病年齡、病程及臨床類型有關(guān)，治療時(shí)間越長(zhǎng)、年齡越小、病程越短、病情越輕，則療效越好，結(jié)果見(jiàn)表12.表12含高良姜素有效部位治療不同病患<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>討論由以上結(jié)果，可以看出從高良姜根莖中制備含高良姜素有效部位制備成口服或外用制劑，臨床上能夠治療白癜風(fēng)，但是治療效果與病程長(zhǎng)短、治療時(shí)間、發(fā)病年齡及臨床分型有關(guān)，，且無(wú)明顯副作用，其治療白癜風(fēng)患者痊愈率和總有效率與8-甲氧沙林片相比無(wú)顯著性差異(P>0.05)，提示含高良姜素有效部位治療白癜風(fēng)有效，可推廣應(yīng)用。權(quán)利要求一種含高良姜素有效部位作為制備治療白癜風(fēng)的藥物用途，其特征在于從植物高良姜根莖中提取含高良姜素有效部位，然后將提取物按常規(guī)制藥方法制成膠囊、片劑、顆粒、或滴丸劑型，具體操作按下列步驟進(jìn)行a、以植物高良姜根莖為原料，用50-95％濃度的乙醇提取3次，料液比為10倍，8倍，8倍，提取溫度60-80℃，每次時(shí)間為2，2，1小時(shí)，得到總粗提物；b、再將總粗提物用體積百分比30-60％乙醇溶解，用大孔樹脂、聚酰胺或者葡聚糖凝膠吸附，用體積百分比40％-70％乙醇洗脫，收集洗脫液，將洗脫液減壓濃縮，干燥，即得含高良姜素有效部位，以干品重量計(jì)算含總黃酮大于50％，用制備液相色譜儀制備得到高良姜素的含量為20-99.8％；或?qū)⒉襟Ea總粗提物用石油醚、乙酸乙酯或氯仿溶劑進(jìn)行萃取，所得萃取物干燥后得到脂溶性產(chǎn)物，再用體積百分比30-60％乙醇溶解，用大孔樹脂、聚酰胺或者葡聚糖凝膠吸附，用體積百分比40％-70％乙醇洗脫，收集洗脫液；將洗脫液減壓濃縮，干燥，即得含高良姜素有效部位，以干品重量計(jì)算含總黃酮大于50％，用制備液相色譜儀制備得到高良姜素的含量為20-99.8％。全文摘要本發(fā)明涉及一種高良姜有效部位在制備治療白癜風(fēng)的藥物的用途，是從植物高良姜根莖中提取有效部位總黃酮，然后將提取物總黃酮按常規(guī)制藥方法制成膠囊、片劑、顆粒、或滴丸劑型使用。通過(guò)實(shí)驗(yàn)表明含高良姜素有效部位可以促進(jìn)黑素細(xì)胞增殖，上調(diào)酪氨酸酶活性，增加黑素含量；抑制小鼠免疫系統(tǒng)作用；白癜風(fēng)動(dòng)物模型皮膚基底層黑色素細(xì)胞數(shù)、基底層含黑素顆粒細(xì)胞數(shù)顯著增多，酪氨酸酶表達(dá)增強(qiáng)。為以植物高良姜根莖為原料制備治療白癜風(fēng)的藥物提供了新的途徑。文檔編號(hào)A61K9/16GK101810812SQ201010122088公開日2010年8月25日申請(qǐng)日期2010年3月11日優(yōu)先權(quán)日2010年3月11日發(fā)明者唐曉琴,康雨彤,閆明,霍仕霞,高莉申請(qǐng)人:閆明