專利名稱：人參皂苷元20(R)-甲氧基-達(dá)瑪烷-3β,12β,25-三醇及其制備方法和醫(yī)藥用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一個新的人參皂苷元及其制備方法和醫(yī)藥用途， 具體涉及其在制備抗腫瘤藥物中的用途
背景技術(shù)：
人參皂苷是人參的主要活性成份，近來的研究表明，人參皂苷經(jīng)體內(nèi)或體外代謝 產(chǎn)生的次級皂苷表現(xiàn)出很好的腫瘤細(xì)胞毒活性，如人參皂苷Rg3、Rh2、人參皂苷CK等，它們 能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化，抑制腫瘤細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡等，在腫瘤治療和預(yù)防方面具有很 高的藥用價值。其中已經(jīng)上市的抗腫瘤藥物有參一膠囊(人參皂苷_Rg3)，正在用于臨床實(shí) 驗(yàn)研究的抗腫瘤藥物有人參皂苷_Rh2和人參皂苷-C-K。為了在人參皂苷系列物中尋找高效低毒的新型抗腫瘤藥物，由天然皂苷轉(zhuǎn)化而來 的次級皂苷、苷元或二者的衍生物成為研究的重點(diǎn)。研究結(jié)果也表明次級皂苷、苷元或二者 的衍生物是天然人參皂苷發(fā)揮其藥效的原型。人參皂苷元20(R)_甲氧基-達(dá)瑪烷-30，120，25_三醇 [20 (R) -methoxyl-dammarane-3 ^，12 3，25-triol (簡稱 20RMDT)]是PPD 的衍生物，具有較 好的抗腫瘤作用，如上化合物及其制備方法和它們的新型抗腫瘤制劑在現(xiàn)有技術(shù)中并未見 有報道，因此具有較好的開發(fā)前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所解決的技術(shù)問題是提供一個新的人參皂苷元及其制備方法和醫(yī)藥用途， 具體涉及其在制備抗腫瘤藥物中的用途。本發(fā)明所述的化合物為20 (R)-甲氧基-達(dá)瑪烷-3日，123，25-三醇 [20 (R) -methoxyl-dammarane-3 3,123，25-triol (簡稱 20RMDT)]。本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明所述的化合物的結(jié)構(gòu)如下 本發(fā)明所述化合物可以通過如下方法制備
A、硅膠層析法用低級醇提取、大孔吸附樹脂純化后的人參總皂苷，經(jīng)有機(jī)溶劑萃 取、硅膠柱層析及反相硅膠柱層析分離后得到；B、酸水解法人參總皂苷溶解于低級醇中在超聲條件下進(jìn)行酸水解，然后將溶液 處理至中性，有機(jī)溶劑萃取及硅膠柱層析分離得到；C、堿水解法人參總皂苷溶解于低級醇溶液中，用堿金屬氫氧化物作為水解試劑 進(jìn)行堿水解，經(jīng)過酸中和、有機(jī)溶劑萃取及硅膠柱層析分離后得到；D、化學(xué)合成方法E、采用核磁共振光譜法對所得20RMDT進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。所述的酸水解法包括酸水解法I 人參總皂苷溶解于低級醇中在超聲條件下進(jìn)行酸水解，然后經(jīng)過堿 金屬氫氧化物中和，有機(jī)溶劑萃取及硅膠柱層析分離后得到；酸水解法II 人參總皂苷溶解于低級醇中在超聲條件下進(jìn)行酸水解，然后加水沉 淀，水洗至中性的沉淀經(jīng)硅膠柱層析分離后得到；所述的人參總皂苷，是指來自五加科人參屬具有達(dá)瑪烷四環(huán)三萜結(jié)構(gòu)骨架的所有 植物的根、莖、葉、花(蕾)、果實(shí)(漿)、種子中及絞股藍(lán)中含有的皂苷類化合物。所說的低級醇為甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇；有機(jī)溶劑為石油醚、正己烷、 苯、甲苯、二甲苯、氯仿、二氯甲烷、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇之一種或其中2-3種任意比例 的混合物；所說的堿金屬氫氧化物包括鈉、鉀和鈣的氫氧化物，堿金屬氫氧化物的濃度為 0. 02-9% ff/Vo人參總皂苷的水解在酸性水溶液和有機(jī)溶劑中在超聲條件下進(jìn)行；其中人參總皂 苷的用量10-800g/L ；低級醇為甲醇，濃度為1-95% V/V ；酸為鹽酸、硫酸、高氯酸、磷酸、草酸、冰乙酸、甲酸，濃度為0.2-9mol/L和它們的 飽和酸；超聲條件頻率:20-70kHz；功率2. 4-6KW ；時間1-120 分鐘；水溫:15_100°C ；水解后的反應(yīng)液用氫氧化鈉或氫氧化鉀中和，使用濃度為0. 2-9mol/L ；萃取用的有機(jī)溶劑為石油醚、正己烷、苯、甲苯、二甲苯、氯仿、二氯甲烷、乙醚、乙 酸乙酯、正丁醇；柱層析用硅膠粒度為100-400目；水解溫度為4-100°C，時間lmin_5d。所述的化學(xué)合成方法包括化學(xué)合成方法I :20RMDT是采用20 (R)-達(dá)瑪烷_3日，12 3，20，25-四醇(簡稱 20(R)-25-0H-PPD)在堿催化下與碘甲烷/無水四氫呋喃溶劑中進(jìn)行甲基化反應(yīng)而得；(a)將 1-100 份 20 (R) -25-0H-PPD、1-1200 份鹵代烴、1-1200 份堿性催化劑，溶于 無水有機(jī)溶劑中，20-100°C攪拌回流下反應(yīng)l_24h后，將生成的沉淀趁熱過濾收集濾液；濾 液減壓蒸干的粗品；選取的鹵代烴試劑為CH3X，其中X = F、Cl、Br、I ；選取的無水有機(jī)溶劑是THF或DMF ；選取的堿性催化劑為Ag20、NaH、NaOH、NaH ；(b)將步驟a制得的粗品經(jīng)硅膠柱色譜，用石油醚丙酮或石油醚乙酸乙酯系統(tǒng)從10 1依次到1 1梯度洗脫，得到所述結(jié)構(gòu)的20位氧烴基取代物；其合成路線為 b :CH3X X:鹵素R:CH3化學(xué)合成方法II :20RMDT是采用20 (R) -25-0H-PPD在堿催化下與硫酸二甲酯/無 水丙酮溶劑中反應(yīng)而得；(a)將 1-100 份 20 (R) -25_0H_PPD、1-1200 份硫酸二 甲酯、1-1200 份堿性催化劑， 溶于無水有機(jī)溶劑中，20-100°C攪拌回流下反應(yīng)l_24h后，將生成的沉淀趁熱過濾收集濾 液；濾液減壓蒸干的粗品；選取的堿性催化劑為Ag20、NaH、NaOH、NaH ；選取的無水有機(jī)溶劑是THF、DMF或丙酮；(b)將步驟a制得的粗品經(jīng)硅膠柱色譜，用石油醚丙酮或石油醚乙酸乙酯系 統(tǒng)從10 1依次到1 1梯度洗脫，得到所述結(jié)構(gòu)的20位氧烴基取代物；其合成路線為 a 無水有機(jī)溶劑；堿性催化劑b:硫酸二甲酯化學(xué)合成方法III :20RMDT是采用20 (R) -25_0H_PPD在堿催化和相轉(zhuǎn)移催化劑下 與碳酸二甲酯/無水四氫呋喃溶劑中反應(yīng)而得；(a)將 1-100 份 20 (R) -25-0H-PPD、1-1200 份 DMC 或 DEC、1-1200 堿性催化劑、 1-1200份相轉(zhuǎn)移催化劑溶于DMF或THF中，70_150°C攪拌回流下反應(yīng)3_12h ；選取的堿性催化劑為 K2C03、KOH、KHC03、CsC03 ；選取的相轉(zhuǎn)移催化劑為(Et)4NBr、(Bu)4NBr、(Octyl)4NBr、(Bu)4N0H、Ph3(CH2CH20H) PC1、CHBG-HC1C、(Bu) 4PC1 ；(b)將步驟a制得的反應(yīng)液用鹽酸水溶液(Ph = 1)和MTBE或乙酸乙酯液液萃取，有機(jī)相得到烷基取代粗品化合物；(c)步驟b得到的粗品經(jīng)硅膠柱色譜，用石油醚丙酮或石油醚乙酸乙酯系統(tǒng) 從10 1依次到1 1梯度洗脫，得到所述結(jié)構(gòu)的20位氧烴基取代物；其合成路線為 b :DEC 或 DMCR:CH3本發(fā)明所提供的新型抗腫瘤制劑中，以20RMDT為有效成分，其總有效劑量為 l-100mg/kg/do本發(fā)明所提供的新型抗腫瘤制劑中，20RMDT可與任何法定藥用配合劑和賦形劑制 成各種藥用劑型的制劑。本發(fā)明所提供的新型抗腫瘤制劑中，20RMDT可與目前市場上的任何化療藥、生物 制劑，包括激素類、烷化劑類、鉬類、抗代謝類、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑類、抗微絲微管類、誘導(dǎo)分 化類、抗腫瘤生長類、提高機(jī)體免疫類及其他藥物，制備成復(fù)方制劑。本發(fā)明所提供的新型抗腫瘤制劑中，制劑劑型為口服、注射或局部用藥劑型。本發(fā)明所提供的新型抗腫瘤制劑中，口服劑型包括片劑、粉劑、懸濁液、乳濁液、膠 囊、顆粒劑、糖衣片、藥丸、液體、糖漿和檸檬水劑等。本發(fā)明所提供的新型抗腫瘤制劑中，注射劑型包括水劑、凍干粉針、靜脈乳劑、多 相質(zhì)脂體制劑、靜脈微乳劑、懸濁液等。本發(fā)明所提供的新型抗腫瘤制劑中，局部用藥劑型包括軟膏、固體、懸濁液、水劑、 粉劑、糊劑、栓劑、氣溶膠、泥敷劑、涂抹劑、灌腸劑和乳劑等。20RMDT具有顯著的抗腫瘤作用，并可被制成用于不同癌癥治療的任何藥用及保健 品劑型，主要應(yīng)用于惡性腫瘤的防治，具有廣闊的應(yīng)用前景。研究證明，20RMDT對體內(nèi)外腫 瘤細(xì)胞的抑制作用均優(yōu)于PPD和人參皂苷_Rg3。


圖120 (R)-甲氧基-達(dá)瑪烷-3 0，12 0，25-三醇的氫譜220 (R)-甲氧基-達(dá)瑪烷-3 0，12 0，25-三醇的碳譜320 (R)-甲氧基-達(dá)瑪烷-3 0，12 0，25-三醇的紅外光譜420 (r)_甲氧基-達(dá)瑪烷-3 3，12 3，25-三醇的質(zhì)譜圖
具體實(shí)施例方式
以下通過實(shí)施例進(jìn)一步描述本發(fā)明，但這些實(shí)施例僅是說明本發(fā)明，而不應(yīng)理解 為對本發(fā)明范圍的任何限制。(1) 20RMDT制備實(shí)施方式實(shí)施例1 氫氧化鈉水解法制備20RMDT稱取三七總皂苷10g，加入1000ml氫氧化鈉(濃度為2. 5mol/L)和甲醇后加熱回 流水解24h，用2. 5mol/L鹽酸中和反應(yīng)液，減壓回收甲醇，用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液，萃取液 經(jīng)水洗、無水硫酸鈉干燥、蒸干后經(jīng)硅膠柱層析分離，用正己烷乙酸乙酯(5 1-1 1) 梯度洗脫得125個流分，流分25-45經(jīng)TLC檢查后合并，丙酮重結(jié)晶后得20RMDT。20R-甲 氧基-達(dá)瑪烷H 123,25-三醇理化數(shù)據(jù)白色結(jié)晶，[a]D2°+7.0(c 0. 1, MeOH)； IR vmax3301,2961, 1467，1385，1262，1168，1084，1037,802cm-1 ；1H NMR(pyridine-d5, 300MHz)數(shù)據(jù)0. 8 (1H, m, 5_CH)，0. 89 (3H, S, 19-CH3)，0. 87 (3H, S, 30-CH3)，1. 00 (3H, S, 29-CH3)，1. 04 (3H, S, 18-CH3)，1. 16 (3H, S，21-CH3)，1. 23 (3H, S，28-CH3)，1. 41 (6H, S, 26-CH3,27-CH3)，1. 48(2H, m,24-CH2)，1. 50(2H, m,23-CH2)，1. 51(1H, m,9-CH)，1. 83(1H, m,13-CH)，2. 35(1H，m,17-CH)，3. 16(3H, S，20-0CH3)，3. 43(1H，m,3_CH)，3. 78(1H, m, 12-CH). 13C NMR(pyridine-d5,75MHz)數(shù)據(jù)39. 1 (C_l)，28. 2 (C_2)，78. 0 (C_3)，40. 1 (C_4)， 56. 4(C-5)，18. 8(C-6)，35. 2 (C_7)，V39. 6 (C_8)，49. 7 (C_9)，37. 4 (C-10)，31. 3(C_11)， 69. 5 (C-12)，48. 4 (C—13) ,51. 8 (C—14) ,31. 4 (C—15)，26. 3 (C—16)，50. 3 (C—17)，16. 4 (C—18)， 16. 5 (C-19)，80. 3 (C-20)，17. 8 (C—21)，36. 6 (C—22)，18. 8 (C—23)，45. 0 (C—24)，70. 5 (C—25)， 30. 2 (C-26)，30. 1 (C-27)，28. 7 (C-28) , 15. 9 (C-29) , 17. 4 (C-30)，48. 9 (0CH3-20)； positive-mode ESIMS m/z 515[M+Na]+,493[M+H]+ ；HRESIMS m/z 515. 4066 [M+Na] + (calcd for C31H5604Na，515. 4076).實(shí)施例2 鹽酸水解法制備得到20RMDT稱取三七葉總皂苷10g，加入1000ml鹽酸(濃度為2. 5mol/L)和甲醇后進(jìn)行超 聲水解反應(yīng)。超聲條件頻率50kHz ；功率3KW ；時間30分鐘；在溫度40°C水解12h，用 2. 5mol/L氫氧化鈉中和反應(yīng)液，減壓回收甲醇，用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液，萃取液經(jīng)水洗、無 水硫酸鈉干燥、蒸干后經(jīng)硅膠柱層析分離、氯仿丙酮(8 1-1 1)梯度洗脫得118個流 分，流分22-36經(jīng)乙酸乙酯重結(jié)晶后得20RMDT。實(shí)施例3 硫酸水解法制備20RMDT稱取人參總皂苷10g，溶于1000ml硫酸濃度為3. Omol/L、濃度為80%的甲醇水溶 液中超聲，超聲條件頻率50kHz ；功率3KW ；時間60分鐘；在溫度40°C水解8h，然后加 水沉淀，水洗至中性的沉淀經(jīng)硅膠柱層析分離，氯仿甲醇(20 1-5 1)梯度洗脫得97 個流分，流分15-30經(jīng)乙酸乙酯重結(jié)晶后得20RMDT。實(shí)施例4 化學(xué)合成方法I半合成制備20RMDT0. 60g20 (R)-25-0H-PPD 加入 40ml THF 溶解，攪拌下加入 0. 36g 氫化鈉(60% ) 氫化鈉全部溶解后加入1.03ml碘甲烷(達(dá)瑪烷-3 0，12 0，20，25-四醇?xì)浠c碘甲烷 =1 12 12摩爾比)，加熱至85 95°C，磁力攪拌，回流3小時。將生成的沉淀趁熱過 濾收集濾液，濾液減壓蒸干得粗品。粗品經(jīng)硅膠柱色譜，用石油醚丙酮或石油醚乙酸乙酯系統(tǒng)梯度洗脫(從 10 1依次到1 1洗脫)，得20RMDT(收率約38% )。
實(shí)施例5 化學(xué)合成方法I半合成制備20RMDT0. 60g20 (R)-25-0H-PPD 加入 40ml THF 溶解，攪拌下加入 0. 36g 氫化鈉(60% ) 氫化鈉全部溶解后加入1.03ml碘甲烷(達(dá)瑪烷-3 0，12 0，20，25-四醇?xì)浠c碘甲烷 =1 12 12摩爾比)，加熱至70°C，磁力攪拌，回流3小時。將生成的沉淀趁熱過濾收 集濾液，濾液減壓蒸干得粗品。粗品經(jīng)硅膠柱色譜，用石油醚丙酮或石油醚乙酸乙酯系統(tǒng)梯度洗脫(從 10 1依次到1 1洗脫)，得20RMDT(收率約25% )。實(shí)施例6 化學(xué)合成方法I半合成制備20RMDT0. 60g20 (R)-25-0H-PPD 加入 40ml THF 溶解，攪拌下加入 0. 36g 氫化鈉(60% ) 氫化鈉全部溶解后加入0.51ml碘甲烷(達(dá)瑪烷-3 0，12 0，20，25-四醇?xì)浠c碘甲烷 =1 12 6摩爾比)，加熱至90°C，磁力攪拌，回流3小時。將生成的沉淀趁熱過濾收集 濾液，濾液減壓蒸干得粗品。粗品經(jīng)硅膠柱色譜，用石油醚丙酮或石油醚乙酸乙酯系統(tǒng)梯度洗脫(從 10 1依次到1 1洗脫)，得20RMDT(收率約26% )。實(shí)施例7 化學(xué)合成方法II半合成制備20RMDT0. 60g20 (R)-25-0H-PPD 加入 40ml THF 溶解，攪拌下加入 0. 18g 氫化鈉(60% ) 氫化鈉全部溶解后加入0. 72ml硫酸二甲酯(達(dá)瑪烷-3 0，12 0，20，25-四醇?xì)浠c硫 酸二甲酯=1 6 6摩爾比)，加熱至90°C，磁力攪拌，回流2. 5-3小時。將生成的沉淀 趁熱過濾收集濾液，濾液減壓蒸干得粗品。粗品經(jīng)硅膠柱色譜，用石油醚丙酮或石油醚乙酸乙酯系統(tǒng)梯度洗脫(從 10 1依次到1 1洗脫)，得20RMDT(收率約22%)實(shí)施例8 化學(xué)合成方法II半合成制備20RMDT0. 60g20 (R)-25-0H-PPD 加入 40ml THF 溶解，攪拌下加入 0. 36g 氫化鈉(60% ) 氫化鈉全部溶解后加入1. 44ml硫酸二甲酯(達(dá)瑪烷-3 0，12 0，20，25-四醇?xì)浠c硫 酸二甲酯=1 12 12摩爾比)，加熱至90-100°C，磁力攪拌，回流3-4h。將生成的沉淀 趁熱過濾收集濾液，濾液減壓蒸干得粗品。粗品經(jīng)硅膠柱色譜，用石油醚丙酮或石油醚乙酸乙酯系統(tǒng)梯度洗脫(從 10 1依次到1 1洗脫)，得20RMDT (收率約26% )實(shí)施例9 化學(xué)合成方法II半合成制備20RMDT0. 60g20 (R)-25-0H-PPD 加入 40ml THF 溶解，攪拌下加入 0. 36g 氫化鈉(60% ) 氫化鈉全部溶解后加入1. 44ml硫酸二甲酯(達(dá)瑪烷-3 0，12 0，20，25-四醇?xì)浠c硫 酸二甲酯=1 12 12摩爾比)，加熱至80°C，磁力攪拌，回流3-4h。將生成的沉淀趁熱 過濾收集濾液，濾液減壓蒸干得粗品。粗品經(jīng)硅膠柱色譜，用石油醚丙酮或石油醚乙酸乙酯系統(tǒng)梯度洗脫(從 10 1依次到1 1洗脫)，得20RMDT(收率約23%)實(shí)施例10 化學(xué)合成方法III半合成制備20RMDT將20(R)-25-0H_PPD、DMC、堿性催化劑、份相轉(zhuǎn)移催化劑按摩爾比 1 150 3.75 3投料，首先達(dá)瑪烷-3 3，12 3，20，25-四醇溶于THF中，攪拌狀態(tài)下加 入K2C03和(Et) 4NBr，攪拌，再緩慢滴加DMC，93°C攪拌回流下反應(yīng)5h。
反應(yīng)完成后將上步驟制得的反應(yīng)液用鹽酸水溶液(Ph = 1)中和到中性，再用乙酸 乙酯液液萃取，有機(jī)相得到烷基取代粗品化合物。將上步驟得到的粗品經(jīng)硅膠柱色譜，用石油醚丙酮或石油醚乙酸乙酯系統(tǒng)梯 度洗脫(從10 1依次到3 1洗脫)，得到20RMDT。實(shí)施例11 化學(xué)合成方法III半合成制備20RMDT將20(R)-25-0H_PPD、DMC、堿性催化劑、份相轉(zhuǎn)移催化劑按摩爾比 1 100 3.75 3投料，首先達(dá)瑪烷-3 3，12 3，20，25-四醇溶于THF中，攪拌狀態(tài)下加 入K2C03和(Et) 4NBr，攪拌，再緩慢滴加DMC，98_100°C攪拌回流下反應(yīng)5h。反應(yīng)完成后將上步驟制得的反應(yīng)液用鹽酸水溶液(Ph = 1)中和到中性，再用乙酸 乙酯液液萃取，有機(jī)相得到烷基取代粗品化合物。將上步驟得到的粗品經(jīng)硅膠柱色譜，用石油醚丙酮或石油醚乙酸乙酯系統(tǒng)梯 度洗脫(從10 1依次到3 1洗脫)，得到20RMDT。實(shí)施例12 化學(xué)合成方法III半合成制備20RMDT將20 00-25-011^^0、01 、堿性催化劑、份相轉(zhuǎn)移催化劑按摩爾比1 80 5 3 投料，首先達(dá)瑪烷-3 0，12 0，20，25-四醇溶于THF中，攪拌狀態(tài)下加入K2C03和(Et)4NBr, 攪拌，再緩慢滴加DMC，93°C攪拌回流下反應(yīng)9h。反應(yīng)完成后將上步驟制得的反應(yīng)液用鹽酸水溶液(Ph = 1)中和到中性，再用乙酸 乙酯液液萃取，有機(jī)相得到烷基取代粗品化合物。將上步驟得到的粗品經(jīng)硅膠柱色譜，用石油醚丙酮或石油醚乙酸乙酯系統(tǒng)梯 度洗脫(從10 1依次到3 1洗脫)，得到20RMDT。(2) 20RMDT 以 MCF，H印G2，Du 145，Colon205, A549 和 HL-60 為靴點(diǎn)的細(xì)胞毒性試驗(yàn)。以MCF，HepG2,Dul45,Colon205,A549和HL-60作為細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)的靶點(diǎn)細(xì)胞。藥物 與細(xì)胞接觸72h后，把10ii L MTT(2. 5mg/ml)溶液分別加到各細(xì)胞培養(yǎng)基中，在37°C，加濕 室溫，含5% C02的條件下培養(yǎng)4h。在培養(yǎng)的最后出去培養(yǎng)媒介用100 y L的DMSO(室溫) 代替。攪拌10分鐘，在492nm測定吸光度生物作為一個Bio-Rad(model 550)計算50%抑 制濃度(IC50)。表20RMDT的體外抗腫瘤活性 20RMDT,20(R)-PPD,20(R)-25-OH-PPD 在 6 種細(xì)胞系(MCF-7, H印G2， Dul45, Colon205，A549，HL-60)中測定了它們的細(xì)胞毒性。結(jié)果如上表所示，20RMDT對6種細(xì)胞有很強(qiáng)的細(xì)胞毒性。20RMDT的IC50s低于20 (R)-25-0H-PPD (其IC50值比Rg3低5-15倍) 和原人參二醇PPD。
權(quán)利要求
具有如下結(jié)構(gòu)的20(R)-甲氧基-達(dá)瑪烷-3β，12β，25-三醇FSA00000027999100011.tif
2.
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的的制備方法，其特征在于所述的人參總皂苷，是指來自五加 科人參屬具有達(dá)瑪烷四環(huán)三萜結(jié)構(gòu)骨架的所有植物的根、莖、葉、花(蕾)、果實(shí)(漿)、種子 中及絞股藍(lán)中含有的皂苷類化合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于所述的低級醇為甲醇、乙醇、正丙醇、 異丙醇、正丁醇；有機(jī)溶劑為石油醚、正己烷、苯、甲苯、二甲苯、氯仿、二氯甲烷、乙醚、乙酸 乙酯、正丁醇之一種或其中2-3種任意比例的混合物；所述的堿金屬氫氧化物包括鈉、鉀和 鈣的氫氧化物，堿金屬氫氧化物的濃度為0. 02-9% W/V。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于所述的酸水解法包括酸水解法I 人參總皂苷溶解于低級醇中在超聲條件下進(jìn)行酸水解，然后經(jīng)過堿金屬 氫氧化物中和，有機(jī)溶劑萃取及硅膠柱層析分離后得到；酸水解法II 人參總皂苷溶解于低級醇中在超聲條件下進(jìn)行酸水解，然后加水沉淀， 水洗至中性的沉淀經(jīng)硅膠柱層析分離后得到；
6.根據(jù)權(quán)利要求2或5所述的制備方法，其特征在于人參總皂苷溶解于低級醇中在 超聲條件下進(jìn)行酸水解，其中人參總皂苷的用量10-800g/L ；低級醇的濃度為1-95% V/V ；酸為鹽酸、硫酸、高氯酸、磷酸、草酸、冰乙酸、甲酸，濃度為0. 2-9mol/L和它們的飽和酸；水解溫度為4-100°C，時間lmin-5d。超聲條件頻率:20-70kHz ；功率2. 4-6KW ；時間1-120分鐘；水溫:15_100°C ； 水解后的反應(yīng)液用氫氧化鈉或氫氧化鉀中和，使用濃度為0. 2-9mol/L ； 柱層析用硅膠粒度為100-400目。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于所述的化學(xué)合成方法包括 化學(xué)合成方法I :20RMDT是采用20 (R) -25-0H-PPD,在堿催化下與碘甲烷/無水四氫呋 喃溶劑中進(jìn)行甲基化反應(yīng)而得；(a)將1-100份20(R) -25-0H-PPD、1-1200份鹵代烴、1-1200份堿性催化劑，溶于無水 有機(jī)溶劑中，20-100°C攪拌回流下反應(yīng)l_24h后，將生成的沉淀趁熱過濾收集濾液；濾液減 壓蒸干的粗品；選取的鹵代烴試劑為CH3X，其中X = F、Cl、Br、I ； 選取的無水有機(jī)溶劑是THF或DMF ； 選取的堿性催化劑為Ag20、NaH、NaOH、NaH ；(b)將步驟a制得的粗品經(jīng)硅膠柱色譜，用石油醚丙酮或石油醚乙酸乙酯系統(tǒng)從 10 1依次到1 1梯度洗脫，得到所述結(jié)構(gòu)的20位氧烴基取代物；其合成路線為 a無水有機(jī)溶劑；堿性催化劑b :CH3X X 鹵素 R :CH3化學(xué)合成方法II :20RMDT是采用20 (R) -25-0H-PPD在堿催化下與硫酸二甲酯/無水丙 酮溶劑中反應(yīng)而得；(a)將1-100份20(R) -25-0H-PPD、1-1200份硫酸二甲酯、1-1200份堿性催化劑，溶于 無水有機(jī)溶劑中，20-100°C攪拌回流下反應(yīng)l_24h后，將生成的沉淀趁熱過濾收集濾液；濾 液減壓蒸干的粗品；選取的堿性催化劑為Ag20、NaH、NaOH、NaH ； 選取的無水有機(jī)溶劑是THF、DMF或丙酮；(b)將步驟a制得的粗品經(jīng)硅膠柱色譜，用石油醚丙酮或石油醚乙酸乙酯系統(tǒng)從 10 1依次到1 1梯度洗脫，得到所述結(jié)構(gòu)的20位氧烴基取代物；其合成路線為 a無水有機(jī)溶劑；堿性催化劑b 硫酸二甲酯化學(xué)合成方法III :20RMDT是采用20(R)-25-0H-PPD在堿催化和相轉(zhuǎn)移催化劑下與碳酸二甲酯/無水四氫呋喃溶劑中反應(yīng)而得；(a)將1-100 份 20 (R) -25-0H-PPD、1-1200 份 DMC 或 DEC、1-1200 堿性催化劑、1-1200 份相轉(zhuǎn)移催化劑溶于DMF或THF中，70-150°C攪拌回流下反應(yīng)3_12h ；選取的堿性催化劑為K2C03、KOH、KHC03、CsC03 ；選取的相轉(zhuǎn)移催化劑為(Et)4NBr、(Bu)4NBr、(0ctyl)4NBr、(Bu)4N0H、Ph3(CH2CH20H)PCl、 CHBG-HC1C、(Bu) 4PC1 ；(b)將步驟a制得的反應(yīng)液用鹽酸水溶液(Ph=1)和MTBE或乙酸乙酯液液萃取，有機(jī) 相得到烷基取代粗品化合物；(c)步驟b得到的粗品經(jīng)硅膠柱色譜，用石油醚丙酮或石油醚乙酸乙酯系統(tǒng)從 10 1依次到1 1梯度洗脫，得到所述結(jié)構(gòu)的20位氧烴基取代物；其合成路線為 b :DEC 或 DMCR :CH3
8.根據(jù)權(quán)利要求2或7所述的制備方法，其特征在于采用的化學(xué)合成法是由 20(R)-25-0H-PPD經(jīng)過加成制得，使用的合成原料20 (R)-25-0H-PPD可由人參總皂苷通過 酸、堿、酶和微生物水解或轉(zhuǎn)化制得。
9.20 (R)-甲氧基-達(dá)瑪烷-3 0，12 0，25-三醇在制備治療乳腺癌、人小細(xì)胞肺癌、人胃 癌、人結(jié)腸癌、人神經(jīng)膠質(zhì)癌、人黑色素瘤、人宮頸癌、人肝癌、早幼粒白血病、肉瘤S-180、肝 癌腹水型、小鼠宮頸癌-14及艾氏腹水癌藥物中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的20(R)-甲氧基-達(dá)瑪烷-3 0，12 0，25-三醇，其特征在于 其可與任何法定藥用配合劑和賦形劑制成各種藥用劑型的制劑。
11.權(quán)利要求10所述的化合物，其特征在于其可以與目前市場上的任何化療藥、生物 制劑，包括激素類、烷化劑類、鉬類、抗代謝類、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑類、抗微絲微管類、誘導(dǎo)分 化類、抗腫瘤生長類、提高機(jī)體免疫類及其他藥物，制備成復(fù)方制劑。
12.按照權(quán)利要求11所述的化合物，其特征在于所述復(fù)方制劑為口服、注射或局部用 藥劑型的任何一種。
13.按照權(quán)利要求12所述的化合物，其特征在于所述口服劑型包括片劑、粉劑、懸濁 液、乳濁液、膠囊、顆粒劑、糖衣片、藥丸、液體、糖漿和檸檬水劑；所述注射劑包括水劑、凍干 粉針、靜脈乳劑、多相質(zhì)脂體制劑、靜脈微乳劑、懸濁液等；所述局部用藥劑型包括軟膏、固 體、懸濁液、水劑、粉劑、糊劑、栓劑、氣溶膠、泥敷劑、涂抹劑、灌腸劑和乳劑。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一個新的人參皂苷元及其制備方法和醫(yī)藥用途，具體涉及其在制備抗腫瘤藥物中的用途。該化合物的名稱為20(R)-甲氧基-達(dá)瑪烷-3β，12β，25-三醇[20(R)-methoxyl-dammarane-3β，12β，25-triol(簡稱20RMDT)]。20RMDT經(jīng)研究證明具有顯著的抗腫瘤作用。在MCF-7，HepG2，Du145，Colon205，A549，HL-60六種細(xì)胞系中測定了20RMDT的細(xì)胞毒性。結(jié)果表明，20RMDT對6種細(xì)胞有很強(qiáng)的抑制人腫瘤細(xì)胞生長的作用。20RMDT的IC50s低于20(R)-25-OH-PPD和原人參二醇PPD。其總有效劑量為1-100mg/kg/d。其可以和藥學(xué)上可接受的一種或多種載體結(jié)合制成20RMDT的藥物組合物或制劑，主要應(yīng)用于惡性腫瘤的防治。
文檔編號A61P35/02GK101875682SQ20101010747
公開日2010年11月3日 申請日期2010年2月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年2月9日
發(fā)明者關(guān)健, 趙余慶, 趙駿銘 申請人:遼寧新中現(xiàn)代醫(yī)藥有限公司