專利名稱：治療肺間質纖維化的燈盞花素與三七皂苷Rgl組合物及其應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種用于治療肺間質纖維化的組合物，具體地說，涉及一種燈盞花素與三七皂苷Rg1組成的組合物，以及該組合物在制備藥品中的應用。

背景技術：
肺間質纖維化是由不同病因或不明原因引起的肺間質病變，其病理特征是早期有肺泡結構破壞和彌漫性肺泡炎，繼發(fā)出現(xiàn)細胞外基質過度沉積，并逐漸演變?yōu)閺浡苑伍g質纖維化，從而造成肺功能障礙，患者多死于進行性加重的呼吸衰竭。據(jù)資料顯示，不明原因引起的特發(fā)性肺間質纖維化(Idiopathicpulmonary Fibrosis，IPF)約占肺間質疾病的60～65％，是最常見的肺間質疾病，其5年生存率低于50％，10年生存率約30％。目前，肺間質纖維化的發(fā)病率呈不斷上升趨勢，且病死率高，嚴重威脅著人們的生命健康。
目前，臨床上對于肺間質纖維化的治療主要采用激素、免疫抑制劑、細胞毒類藥物(如硫哇嚷吟、環(huán)磷酞胺)和抗纖維化制劑(如秋水仙堿、D-青霉胺)單用或聯(lián)用，但無論哪一種治療方法都缺乏有效性、且副作用較大。
此外，對于肺間質纖維化的治療也出現(xiàn)了一些新的觀點和治療方法，比如采用細胞因子抑制劑、抗粘附分子抗體、抗C-C趨化因子、抗氧化劑、細胞外基質沉積的拮抗、抗蛋白酶等，但是以上幾種治療肺間質纖維化的方法，很多都還處在實驗研究或臨床研究階段。而至今尚沒有一種藥物可以改變或逆轉肺間質纖維化的炎癥過程以及纖維化過程。因此，研究和開發(fā)治療肺間質纖維化的有效藥物，有著重要的現(xiàn)實意義和發(fā)展前景。
燈盞花和三七主要分布于我國西南省區(qū)，燈盞花的主要活性成分是燈盞花素(Breviscapine)，對其藥理作用的研究多集中在其對心、腦、血管、血液和消化系統(tǒng)等的影響方面，也有研究表明燈盞花素具有一定的抗肺間質纖維化作用；三七具有抗疲勞、提高耐缺氧能力、活血化瘀及提高免疫功能等多方面的作用，有研究表明三七總皂苷具有抗肝纖維化作用，三七皂苷Rg1(Ginsenoside-Rg1)是其主要成份；本發(fā)明人將燈盞花素和三七皂苷Rg1按照一定比例混合后，進行抗肺纖維化研究，發(fā)現(xiàn)該組合物具有良好的抗肺間質纖維化作用。


發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一種用于治療肺間質纖維化的燈盞花素和三七皂苷Rg1組合物。
本發(fā)明的另一目的在于提供所述組合物在制備治療肺間質纖維化藥物中的應用。
為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明治療肺間質纖維化的燈盞花素和三七皂苷Rg1的組合物，其燈盞花素與三七皂苷Rg1的重量比為2～5∶1～2。
優(yōu)選的是，燈盞花素與三七皂苷Rg1的重量比為2～3∶1。
特別地，本發(fā)明中的燈盞花素和三七皂苷Rg1均為從天然植物中提取的單體化合物，其結構分別如式I、式II所示，分子量分別為462.5及801.01，且水溶性好，易制成各種制劑。

式I 式II 所述燈盞花素及三七皂苷Rg1組合物在制備治療肺間質纖維化藥物中的應用。
所述藥物為以燈盞花素與三七皂苷Rg1組合物為活性成分，與可藥用載體制成的常用劑型，如片劑、膠囊劑、注射劑等。
所述片劑按重量份計的配方為燈盞花素200～500份、三七皂苷Rg1100～200份、崩解劑8～150份、潤滑劑5～15份；所述崩解劑為微晶纖維素(MCC)、低取代羥丙基纖維素或羧甲基淀粉鈉；所述潤滑劑為硬脂酸鎂、微粉硅膠或聚乙二醇。此外，還可以包括矯味劑120～360份；所述矯味劑為乳糖。
制備方法將除潤滑劑之外的原料混合均勻，用水潤濕，過篩(16～20目)，干燥，再次過篩(18～22目)，加入潤滑劑，混合均勻，壓片。
所述膠囊劑按重量份計的配方為燈盞花素200～500份、三七皂苷Rg1100～200份、潤滑劑5～15份；所述潤滑劑為硬脂酸鎂、微粉硅膠或聚乙二醇。此外，還可以包括矯味劑80～200份；所述矯味劑為乳糖。
制備方法將除潤滑劑之外的原料混合均勻，用水潤濕，過篩(18～20目)，干燥，再次過篩(20～22目)，加入潤滑劑，混合均勻，裝入膠囊。
所述注射劑按重量份計的配方為燈盞花素300～600份、三七皂苷Rg1150～300份、氯化鈉120～360份、注射用水500～1500份。
制備方法將活性成分和氯化鈉溶于注射用水中，過濾，將濾液在無菌條件下裝入安瓶中。
本發(fā)明通過體外細胞試驗、小鼠體內試驗以及臨床試驗，進一步說明了本發(fā)明組合物的藥理作用及藥效。體外實驗結果表明，本發(fā)明中的燈盞花素與三七皂苷Rg1按一定比例復配后，對人胚肺成纖維細胞的抑制率顯著高于單用燈盞花素及三七皂苷Rg1(同濃度相比)；體內實驗也表明本發(fā)明組合物在降低肺組織羥脯氨酸含量、肺泡炎和肺纖維化評分方面優(yōu)于單用燈盞花素及三七皂苷Rg1；本發(fā)明中的燈盞花素與三七皂苷Rg1按一定比例復配后，燈盞花素和三七皂苷Rg1之間具有優(yōu)異的協(xié)同作用。
本發(fā)明的優(yōu)點在于 1、三七皂苷Rg1與燈盞花素按一定比例進行復配，具有良好的抗肺間質纖維化作用，效果顯著，副作用少。
2、組合物原料易得，且能夠通過常規(guī)方法制成各種常用劑型，如片劑、膠囊劑、注射劑等，制備方法簡單。
3、三七皂苷Rg1與燈盞花素組合物的藥理作用明顯，主要表現(xiàn)為體外能抑制人胚肺成纖維細胞的活性，有較好的劑量依賴性；體內能降低肺間質纖維化小鼠的肺系數(shù)和肺組織羥脯氨酸的含量；還能減輕肺間質纖維化小鼠的肺泡炎和肺間質纖維化程度。



圖1為本發(fā)明中燈盞花素、三七皂苷Rg1和組合物對MRC-5細胞的抑制率量-效曲線。
圖2為本發(fā)明中正常對照組的MRC-5細胞的形態(tài)。
圖3～9依次為本發(fā)明中不同濃度(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L和320μmol/L)的燈盞花素對MRC-5細胞作用后的細胞形態(tài)。
圖10-16依次為本發(fā)明中不同濃度(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L和320μmol/L)的三七皂苷Rg1對MRC-5細胞作用后的細胞形態(tài)。
圖17～23依次為本發(fā)明中不同濃度(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L和320μmol/L)的組合物對MRC-5細胞作用后的細胞形態(tài)。

具體實施例方式 實施例1組合物片劑的制備(1000片) 配方三七皂苷Rg1(昆明制藥廠，以下實施例均相同)100g、燈盞花素粉劑(杰象藥物原料有限公司，以下實施例均相同)200g、乳糖120g、MCC 50g、硬脂酸鎂5g。
制備方法將活性成分、乳糖及MCC混合均勻，用水潤濕，然后18目篩，干燥，再次過20目篩，加入硬脂酸鎂，混合均勻，壓片。
實施例2組合物片劑的制備(1000片) 配方燈盞花素300g、三七皂苷Rg1100g、羧甲基淀粉鈉24g、硬脂酸鎂5g。
制備方法將活性成分、MCC混合均勻，用水潤濕，然后18目篩，干燥，再次過20目篩，加入硬脂酸鎂，混合均勻，壓片。實施例3組合物膠囊劑的制備(1000粒) 配方燈盞花素200g、三七皂苷Rg1100g、乳糖80g、硬脂酸鎂5g。
制備方法將活性成分、乳糖混合均勻，用水潤濕，然后過20目篩，干燥，再次過22目篩，加入硬脂酸鎂，混合均勻，裝入膠囊。實施例4組合物膠囊劑的制備(1000粒) 配方燈盞花素250g、三七皂苷Rg1100g、乳糖100g、硬脂酸鎂15g。
制備方法將活性成分、乳糖混合均勻，用水潤濕，然后過20目篩，干燥，再次過22目篩，加入硬脂酸鎂，混合均勻，裝入膠囊。實施例5組合物注射劑的制備(100瓶) 配方燈盞花素30g、三七皂苷Rg115g、氯化鈉12g、注射用水1.5L。
制備方法將活性成分和氯化鈉溶于注射用水中，過濾，在無菌條件下，將濾液裝入安瓶中，每瓶裝15mL。
以下通過藥理及臨床試驗進一步說明本發(fā)明。
試驗例1細胞活性試驗 1、試驗材料 1.1藥品與試劑胎牛血清(杭州四季青公司)、MEM培養(yǎng)液(Gibco公司)、胰酶(Gibco公司)、MTT(廣州威佳生物科技有限公司)；三七皂苷Rg1(白色粉末，純度＞98％，昆明制藥廠)、燈盞花素粉劑(淡黃色粉末，純度＞95％，杰象藥物原料有限公司)。
1.2供試細胞人胚肺成纖維細胞(MRC-5細胞，上海中科院細胞庫)。
MRC-5細胞在含有10％(體積百分數(shù))新生小牛血清，100U/mL青霉素，100U/mL鏈霉素的MEM培養(yǎng)液中貼壁生長，在37℃的溫度下，含5％(體積分數(shù))CO2、95％(體積分數(shù))O2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，2天更換一次培養(yǎng)液，培養(yǎng)瓶鋪滿時用2.5g/L胰酶消化傳代，細胞培養(yǎng)至對數(shù)期。
1.3儀器CO2培養(yǎng)箱(MCO-15AC，日本三洋)、Mk3型自動酶標儀(美國Thermro公司)、倒置顯微鏡(XDS-200D，上海蔡康光學儀器有限公司)。
1.4統(tǒng)計方法采用SPSS-10進行統(tǒng)計學處理，計量資料均用x±s表示。
2、方法與結果 2.1配制藥物原液定量稱取4.63mg燈盞花素、8.01mg三七皂苷Rg1以及5.47mg燈盞花素與三七皂苷Rg1組合物(燈盞花素與三七皂苷Rg1的重量比為3∶1)，分別加入1mL MEM培養(yǎng)液，配制成1×104μmol/L的燈盞花素、三七皂苷Rg1與三七皂苷Rg1組合物藥物原液，備用。
2.2MTT法測定三七皂苷Rg1、燈盞花素及組合物對MRC-5細胞的抑制作用取培養(yǎng)至對數(shù)生長期的MRC-5細胞，細胞計數(shù)約5×103個/mL，接種于96孔板中，每孔液體100μL，細胞貼壁后傾去原液；然后加入含有0.5％(體積百分數(shù))胎牛血清的MEM培養(yǎng)液，饑餓培養(yǎng)；24h后更換培養(yǎng)液，并分別加入上述燈盞花素、三七皂苷Rg1及組合物的藥物原液，各配制成5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L和320μmol/L七個不同濃度劑量組，同時設置正常細胞作為對照組(每組設置6個復孔)，繼續(xù)培養(yǎng)24h；然后每孔加入15μL MTT，4h后傾去所有液體，加入115μL DMSO，使固體溶解，在37℃溫度下靜置0.5h；用自動酶標儀在570nm的波長下檢測，630nm波長作為參考；計算燈盞花素、三七皂苷Rg1及組合物對MRC-5細胞抑制率和半數(shù)抑制濃度(IC50)。
結果表明，燈盞花素對MRC-5細胞的IC50為100.67μmo/L，三七皂苷Rg1對MRC-5細胞的IC50為81.26μmol/L，組合物對MRC-5細胞的IC50為40μmol/L，抑制率結果如表1所示，抑制率量-效曲線圖如圖1所示。
從上述IC50值可以看出組合物對MRC-5細胞的抑制強度明顯優(yōu)于燈盞花素和三七皂苷Rg1單體對MRC-5細胞的抑制作用。
表1不同濃度的燈盞花素、三七皂苷Rg1及組合物對MRC-5細胞的抑制率
注抑制率＝(1-劑量組OD 值/正常對照組OD值)×100％； aP＜0.05，aaP＜0.01，與同濃度燈盞花素相比；bP＜0.05，bbP＜0.01，與同濃度三七皂苷Rg1相比 從表1可以看出同濃度的組合物對MRC-5細胞的抑制作用與同濃度的燈盞花素和三七皂苷Rg1相比存在顯著性差異，結果表明組合物對MRC-5細胞的抑制作用顯著。從圖1可以更直觀地觀測出不同濃度組合物對MRC-5細胞的抑制作用明顯強于等濃度兩種單體對MRC-5細胞的抑制作用。
2.3倒置顯微鏡下細胞形態(tài)學的觀察取培養(yǎng)至對數(shù)生長期的MRC-5細胞，細胞計數(shù)約1×104個/mL，接種于96孔板中，每孔液體100μL，細胞貼壁后傾去原液；加入含0.5％(體積百分數(shù))胎牛血清的MEM培養(yǎng)液，饑餓培養(yǎng)；24h后更換培養(yǎng)液，并加入燈盞花素藥物原液、三七皂苷Rg1藥物原液及組合物藥物原液，分別配制成5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L和320μmol/L七個不同濃度藥物劑量組，同時設置正常細胞作為對照組(每組設置6個復孔)，繼續(xù)培養(yǎng)24h后，在倒置顯微鏡下(10×20)拍照(如圖2-23所示)。
觀察結果表明，正常對照組(圖2)、5μmol/L燈盞花素組(圖3)、5μmol/L三七皂苷Rg1組(圖10)和5μmol/L的組合物組(圖17)，MRC-5細胞呈條索狀，細胞飽滿，生長旺盛，形態(tài)正常；10μmol/L和20μmol/L燈盞花素組(圖3-4)，細胞形態(tài)基本正常，有少數(shù)細胞出現(xiàn)皺縮、變形；40μmol/L燈盞花素組(圖6)可看到少量死亡細胞；80μmol/L和160μmol/L燈盞花素劑量組(圖7-8)大量細胞失去正常條索狀形態(tài)，細胞碎片明顯可見，多數(shù)細胞死亡；320μmol/L燈盞花素組(圖9)，細胞失去正常纖維細胞形態(tài)，細胞基本完全死亡；10μmol/L和20μmol/L三七皂苷Rg1組(圖11-12)MRC-5細胞開始出現(xiàn)皺縮，部分細胞條索狀形態(tài)消失；40μmol/L三七皂苷Rg1組(圖13)細胞碎片明顯，皺縮細胞清晰可見，細胞出現(xiàn)明顯死亡；80μmol/L三七皂苷Rg1組(圖14)細胞死亡數(shù)量明顯增加，但存活細胞仍清晰可見；160μmol/L和320μmol/L三七皂苷Rg1組(圖15-16)MRC-5細胞完全失去正常細胞形態(tài)，細胞基本全部死亡；10μmol/L和20μmol/L組合物組(圖18-19)，細胞出現(xiàn)明顯皺縮，并可看到部分細胞碎片，部分細胞出現(xiàn)死亡；40μmol/L和80μmol/L組合物組(圖20-21)作用明顯，細胞大量死亡；160μmol/L和320μmol/L組合物組(圖22-23)，細胞失去正常成纖維細胞形態(tài)，基本完全死亡。
從體外試驗結果可以看出，三七皂苷Rg1、燈盞花素和組合物均有抑制MRC-5細胞的作用，均有顯著的劑量依賴性，且組合物作用優(yōu)于燈盞花素和三七皂苷Rg1。
試驗例2小鼠體內試驗 1、試驗材料 1.1藥品與試劑三七皂苷Rg1(白色粉末，純度＞98％，昆明制藥廠)、燈盞花素粉劑(淡黃色粉末，純度＞95％，杰象藥物原料有限公司)、博來霉素(BLM，日本化藥株式會社)、片強的松(5mg/片，安陽玉威制藥廠)、羥脯氨酸試劑盒(南京建成生物工程研究所)。
1.2供試動物和分組ICR小鼠，體重18～22g，共112只。隨機分為正常對照組、模型組、陽性藥物對照組、燈盞花素組(經預試驗得出最佳有效劑量為20mg/kg)、三七皂苷Rg1組(經前期實驗得出最佳有效劑量為100mg/kg)、燈盞花素與三七皂苷組合物(燈盞花素與三七皂苷Rg1的重量比為2∶1)高劑量組(180mg/kg)、中劑量組(90mg/kg)、低劑量組(45mg/kg)8組，每組14只。
1.3統(tǒng)計方法采用SPSS-10進行統(tǒng)計學處理，計量資料均用x±s表示，采用方差分析，兩兩比較，方差齊者采用LSD法，方差不齊者采用Duttet法，P＜0.05者有顯著性差異。
2、方法與結果 2.1肺間質纖維化模型的建立 采用BLM誘導法，對ICR小鼠一次氣管內給予博來霉素，給藥量5mg/kg。
2.2給藥方法 ICR小鼠于造模后第2天開始給藥，正常對照組和模型組給予蒸餾水，燈盞花素組按20mg/kg給藥，三七皂苷Rg1組按100mg/kg給藥，組合物高劑量組、中劑量組、低劑量組均按劑量給藥，各組供試小鼠均按20mL/kg進行腹腔注射，陽性對照組給予強的松片，給藥量6mg/kg，將藥品溶解后，按20mL/kg灌胃給藥。
試驗藥物均為每天給藥1次，連續(xù)用藥至所需天數(shù)。用藥后第7天處死一半小鼠，剩余小鼠于給藥后第28天全部處死。
2.3肺系數(shù)測定 處死小鼠后打開胸腔，取全肺，用濾紙吸干血跡稱體重和全肺重，按下式計算出肺系數(shù)，肺系數(shù)＝肺重(mg)/體重(g)。結果如表2所示。
表2組合物和燈盞花素用藥后7天對小鼠肺系數(shù)的影響
注aP＜0.05，aaP＜0.01，與模型組比較；bP＜0.05，bbP＜0.01，與陽性對照組比較；cP＜0.05，ccP＜0.01，模型組與正常組比較；dP＜0.05，ddP＜0.01，組合物與燈盞花素比較；eP＜0.05，eeP＜0.01，組合物與三七皂苷Rg1組比較 從表2可以看出用藥后7天，模型組與正常組比較有顯著性差異(P＜0.01)，證明模型成功；燈盞花素組、組合物各劑量組與模型組比較均有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)；組合物各劑量組與陽性藥對照組比較也有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)；組合物各劑量組與燈盞花素組比較有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)；結果表明，燈盞花素與三七皂苷Rg1組合物具有良好的抗肺間質纖維化作用，且優(yōu)于陽性對照藥強的松和單體藥物燈盞花素，但與三七皂苷Rg1作用相當。
2.4形態(tài)學研究 取右肺用10％甲醛溶液固定，取中肺葉制作肺組織病理標本，用石蠟冷凍兩用切片機進行石蠟連續(xù)切片，間隔2張取1張，每個標本取4張切片，每2張為一組，分別進行HE和Masson染色，進行形態(tài)學觀察和肺泡炎及肺間質纖維化評分。
2.4.1一般光鏡觀察正常組無肺泡炎及肺間質纖維化改變，肺泡結構完整；模型組肺泡壁破壞，形成肺大泡，部分實變，肺泡隔增寬明顯，有纖維結締組織增生，呈中重度肺間質纖維化改變，淋巴細胞浸潤，病損范圍廣泛；陽性對照組肺泡隔增寬，有間質水腫，部分大鼠肺內有片狀壞死，灶性膿腫，有較多纖維結締組織增生，部分肺泡實變；燈盞花素組肺組織有輕度的間質水腫和片狀壞死，有少量纖維結締組織增生，部分肺泡實變；組合物組肺部有輕度炎癥，病損范圍有限，有少量淋巴細胞浸潤，偶有纖維結締組織增生，肺間質纖維化改變程度極輕。
2.4.2肺泡炎和肺間質纖維化程度評價HE染色和Masson染色后，進行光鏡觀察，根據(jù)以下判別標準，進行評分。肺泡炎和肺間質纖維化程度的判別標準(共4級)為0級無明顯改變；1級輕度改變，病變范圍小于全肺的20％；2級中度改變，病變范圍占全肺的20％～50％；3級重度改變，病變范圍占全肺的50％以上。然后分別進行評分，0級計0分，1級計1分，以此類推；對每組小鼠分別評分，求平均值。結果如表3-4所示。
表3組合物和燈盞花素用藥7天后對小鼠肺泡炎程度的影響
注aP＜0.05，aaP＜0.01，與模型組比較；bP＜0.05，bbP＜0.01，與陽性對照組比較； cP＜0.05，ccP＜0.01，模型組與正常組比較；dP＜0.05，ddP＜0.01，組合物與燈盞花素比較；P＜0.05，eeP＜0.01，組合物與三七皂苷Rg1組比較 表4組合物和燈盞花素用藥28天后對小鼠肺間質纖維化程度
注aP＜0.05，aaP＜0.01，與模型組比較；bP＜0.05，bbP＜0.01，與陽性對照組比較；cP＜0.05，ccP＜0.01，模型組與正常組比較；dP＜0.05，ddP＜0.01，組合物與燈盞花素比較；eP＜0.05，eeP＜0.01，組合物與三七皂苷Rg1組比較. 從表3-4可以看出，用藥后7天肺泡炎程度和28天肺間質纖維化程度的模型組與正常組比較有顯著性差異(P＜0.01)，證明模型成功；燈盞花素組、組合物各劑量組與模型組比較均有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)；組合物中、高劑量組與陽性對照藥和燈盞花素組比較均有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)；組合物高劑量組與三七皂苷Rg1組比較有顯著性差異(P＜0.05)。試驗結果表明，燈盞花素與三七皂苷Rg1組合物能顯著改善小鼠肺間質纖維化的程度，有良好的抗肺間質纖維化作用，且某些劑量作用優(yōu)于陽性對照藥、燈盞花素和三七皂苷Rg1。
2.5肺組織羥脯氨酸(HyP)含量測定 用酸解法測定肺組織HyP含量，測定步驟按照試劑盒說明書進行。結果如表5所示。
表5組合物和燈盞花素用藥后28天對小鼠肺組織羥脯氨酸含量的影響

注aP＜0.05，aaP＜0.01，與模型組比較；bP＜0.05，bbP＜0.01，與陽性對照組比較；cP＜0.05，ccP＜0.01，模型組與正常組比較；dP＜0.05，ddP＜0.01，組合物與燈盞花素比較；eP＜0.05，eeP＜0.01，組合物與三七皂苷Rg1組比較 從表5可以看出模型組與正常組比較有顯著性差異(P＜0.01)，證明模型成功；燈盞花素組、組合物各劑量組與模型組比較均有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)；組合物中、高劑量組與陽性對照藥、燈盞花素組和三七皂苷Rg1組比較均有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)；結果表明，燈盞花素與三七皂苷Rg1組合物能降低羥脯氨酸含量，優(yōu)于陽性對照藥、燈盞花素和單用三七皂苷Rg1單劑良好的抗肺間質纖維化作用。
試驗例3臨床試驗 1臨床資料 選擇2008年10月～2009年12月期間，新鄉(xiāng)市一院門診根據(jù)《特發(fā)性肺(間質)纖維化診斷和治療指南(草案)》診斷為特發(fā)性肺間質纖維化的患者20例。按照隨機原則分為治療組與對照組，其中，治療組共15例(男性10例，女性5例)，年齡35-65歲，平均年齡50±10.3歲，病程3個月至10年，平均病程4.05±1.35年；對照組10例(男性6例，女性4例)，年齡40-60歲，平均年齡45+9.6歲，病程5個月至8年，平均病程5.02±2.15年。兩組性別、年齡、病程無顯著差異性。
2方法 2.1治療方法 治療組口服實施例3的組合物膠囊，每次4粒，每日3次，溫開水沖服；原來服用強地松的患者(5例)，以每周5mg遞減至完全停用；用藥期間患有其它疾病予以相應治療。
對照組每天給予強的松0.5mg/kg口服；治療3個月觀察療效。
2.2判斷標準 觀察兩組治療前后癥狀(咳嗽、咳痰、呼吸困難、活動能力)、體征(Velcro啰音)、HRCT及肺功能、動脈血氣分析變化。
具體判定標準如下 氣短重(+++)，安靜時氣短不得接續(xù)，不能平臥；中(++)，安靜時氣短不著，稍事活動后即加重；輕(+)，安靜時不覺氣短，明顯活動(如登樓、勞作等)后輕度氣短。
咳嗽重(+++)，晝夜咳嗽頻繁，影響工作及睡眠；中(++)，陣咳，不影響睡眠；輕(+)，間斷咳。
唾痰涎多(+++)，24h痰量在100mL以上；中(++)，24h痰量50～100mL；輕(+)，24h痰量20～50mL。
Velcros啰音多(+++)，兩肺時時可聞及；中(++)，介于多、輕之間；輕(+)，偶聞。
此外，對于HRCT，初診時按常規(guī)掃描，復查時統(tǒng)一規(guī)定為選取3個區(qū)，即1、右中葉支氣管開口水平；2、主動脈弓水平；3、右隔上2cm水平，每區(qū)掃4層，每層厚2.5mm。
2.3療效標準 參照《特發(fā)性肺(間質)纖維化診斷和治療指南(草案)》，按照如下標準判定療效 2.3.1改善或反應良好①癥狀體征中有兩項及以上明顯減輕為有效，兩項以下減輕為無效；②X線胸片或HRCT異常影像減少；③肺功能表現(xiàn)為肺總量(TLC)、肺活量(VC)、一氧化碳彌散率(DLCO)、氧分壓(PaOz)較長時間保持保持穩(wěn)定(具有兩項或兩項以上者認為肺功能改善)； 2.3.2惡化或反應差①癥狀加重，特別是呼吸困難和咳嗽；②X線胸片或HRCT上異常影像增多，特別是出現(xiàn)了蜂窩肺或肺動脈高壓跡象；③肺功能惡化，TLC或VC下降≥10％或下降200ml，DLCO下降≥15％或至少下降≥3mL/min·mmHg。
2.4統(tǒng)計方法計量資料以(x±s)表示，采用t檢驗和X2檢驗。
3結果 3.1兩組癥狀、體征改善的比較，結果顯示治療6個月后治療組臨床癥狀、體征改善均明顯優(yōu)于對照組，組間差異有顯著性(P＜0.01或P＜0.05)，結果如表6所示。
表6兩組患者癥狀體征改善的比較
注*P＜0.05，**P＜0.01，與對照組比較 3.2兩組患者肺功能變化的比較，結果表明肺功能各項指標改善情況均明顯優(yōu)于對照組，組間差異有顯著性(P＜0.01或P＜0.05)，結果見表7。
表7兩組患者治療前后肺功能指標變化的比較
注*P＜0.05，**P＜0.01，與對照組比較 3.3兩組患者治療前后胸部影像學的比較，治療組患者胸部影像學的治療后計分減小，與治療前相比有顯著性差異(P＜0.01)；對照組治療后積分增加，顯示病情惡化，與治療前比較有顯著性差異(P＜0.05)；治療后，治療組與對照組比較也有顯著性差異(P＜0.01)，結果表明，本發(fā)明的燈盞花素與三七皂苷Rg1組合物具有良好的抗肺間質纖維化作用(見表8)。
表8兩組治療前后胸部影響學結果的比較
注*P＜0.05，**P＜0.01，治療組治療后與對照組治療后比較；△P＜0.05，△△P＜0.01，治療后與治療前比較 雖然，上文中已經通過一般性說明、具體實施方案以及臨床試驗等對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎上，可以對之作一些修改或改進，這對本領域技術人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎上所做的這些修改或改進，均屬于本發(fā)明要求保護的范圍。
權利要求
1.一種用于治療肺間質纖維化的燈盞花素與三七皂苷Rg1組合物，其特征在于，燈盞花素與三七皂苷Rg1的重量比為2～5∶1～2。
2.根據(jù)權利要求1所述的組合物，其特征在于，燈盞花素與三七皂苷Rg1的重量比為2～3∶1。
3.權利要求1或2所述的組合物在制備治療肺間質纖維化藥物中的應用。
4.根據(jù)權利要求3所述的應用，其特征在于，所述藥物為以燈盞花素與三七皂苷Rg1組合物為活性成分，與可藥用載體制成的片劑、膠囊劑、注射劑。
5.根據(jù)權利要求4所述的應用，其特征在于，所述片劑按重量份計的配方為燈盞花素200～500份、三七皂苷Rg1 100～200份、崩解劑8～150份、潤滑劑5～15份；所述崩解劑為微晶纖維素、低取代羥丙基纖維素或羧甲基淀粉鈉；所述潤滑劑為硬脂酸鎂、微粉硅膠或聚乙二醇。
6.根據(jù)權利要求5所述的應用，其特征在于，所述片劑還包括矯味劑120～360份；所述矯味劑為乳糖。
7.根據(jù)權利要求4所述的應用，其特征在于，所述膠囊劑按重量份計的配方為燈盞花素200～500份、三七皂苷Rg1 100～200份、潤滑劑5～15份；所述潤滑劑為硬脂酸鎂、微粉硅膠或聚乙二醇。
8.根據(jù)權利要求7所述的應用，其特征在于，所述膠囊劑還包括矯味劑80～200份；所述矯味劑為乳糖。
9.根據(jù)權利要求4所述的應用，其特征在于，所述注射劑按重量份計的配方為燈盞花素300～600份、三七皂苷Rg1 150～300份、氯化鈉120～360份、注射用水500～1500份。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種用于治療肺間質纖維化的燈盞花素與三七皂苷Rg1組合物，其重量比為2～5∶1～2。本發(fā)明還提供了所述組合物在制備治療肺間質纖維化藥物中的應用。本發(fā)明的燈盞花素與三七皂苷Rg1組合物按照一定比例進行復配，具有良好的抗肺間質纖維化作用，效果顯著，副作用少；該組合物原料易得，并且能夠通過常規(guī)方法制成各種常用劑型，如片劑、膠囊劑、注射劑等，制備方法簡單；所述組合物的藥理作用明顯，主要表現(xiàn)為體外能抑制人胚肺成纖維細胞的活性，有較好的劑量依賴性；體內能降低肺間質纖維化小鼠的肺系數(shù)和肺組織羥脯氨酸的含量；還能減輕肺間質纖維化小鼠的肺泡炎和肺間質纖維化的程度。
文檔編號A61K31/704GK101757015SQ20101000073
公開日2010年6月30日 申請日期2010年1月15日 優(yōu)先權日2010年1月15日
發(fā)明者詹合琴, 海廣范, 郭蘭青, 李鵬, 張小毅, 劉俊扇, 張崇 申請人:新鄉(xiāng)醫(yī)學院