專利名稱：包含結(jié)合于EBV(Epstein-Barr病毒)蛋白BARF1的抗體的藥物組合物的制作方法
包含結(jié)合于EBV(Epstein-Barr病毒)蛋白BARF1的抗體的
藥物組合物本發(fā)明涉及用于免疫療法和免疫接種的組合物，其包含結(jié)合于BARFl或從BARFl 衍生的肽的抗體。Epstein-Barr病毒(EBV)與幾種人類癌癥相關(guān)鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma)、胃癌(Gastric carcinoma)、伯基特淋巴瘤(Burkitt，s lymphoma)、何杰金淋巴瘤(Hodgkin，s lymphoma)、在 AIDS 患者中誘導(dǎo)的淋巴瘤(lymphoma induced in AIDS patients)禾口禾口月干內(nèi)EBiW- (Esophage and Intrahepatic cholangiocarcinoma)。最近數(shù)據(jù)顯示EBV還涉及鼻NK/T-細(xì)胞淋巴瘤(nasal NK/T-cell lymphoma)以及肝內(nèi)膽管癌(intra-h印atic cholangiocarcinoma)。常見于 AIDS 患者的口腔毛狀白斑(Oral hairy leucoplasia，0HL)也與EBV緊密相關(guān)。因此，EBV既是親淋巴的(Iymphotropic)，又是趨上皮的(印itheliotropic) ο已使用了幾種針對(duì)EBV相關(guān)癌癥的治療方法，包括放射和化學(xué)療法。然而放射和化學(xué)療法產(chǎn)生周知的問題(毒性，劑量等等)。也開發(fā)了幾種細(xì)胞和病毒基因療法，其一般基于病毒和/或細(xì)胞蛋白作為靶。然而，這些療法的效果并不足夠良好。在免疫療法中，也考慮了抗EGFR抗體(表皮生長因子受體)，特別是用于治療癌瘤 (NPC、胸腺、肺、子宮頸癌瘤、結(jié)腸、乳房和頭頸)，因?yàn)榕cEBV相關(guān)或不相關(guān)的上皮腫瘤細(xì)胞表達(dá)EGFR。因此該治療并不是排他針對(duì)EBV相關(guān)癌瘤的。對(duì)于子宮頸癌和胸腺瘤，正在評(píng)價(jià)治療(單克隆抗體Cetumximab)的效力。然而，用抗EGFR與放射療法組合治療的患者有變得對(duì)放射療法具有抗性的風(fēng)險(xiǎn)。鼻咽癌(NPC)為來源于鼻后腔(retro-nasal cavity)上皮的人惡性腫瘤。其為總是與病毒相關(guān)的人類惡性腫瘤最著名的實(shí)例。Epstein-Ban 病毒(EBV)的全長基因組包含于所有惡性NPC細(xì)胞中，且其編碼可能促成惡性腫瘤表型的病毒蛋白(Decaussin G， Sbih-Lammali F, De Turenne-Tessier M, Bougermouh AM, Ooka Τ. 2000. Cancer Res 60 5584-5588 ；Ooka T :2005.于Epstein-Barr Virus. Horizon Press,Annette Griffin :Erle S. Robertson編.第觀章pp 613-630)。盡管EBV感染在人中廣泛存在，NPC的發(fā)病率取決于地理區(qū)域的不同而變化極大。NPC的活檢總是表達(dá)幾種raV基因，包括編碼EBERs、EBNAU LMPU LMP2A、BARFO 和BARFl的基因。其中，僅LMPl和BARF-I能夠在嚙齒類成纖維細(xì)胞中誘導(dǎo)惡性轉(zhuǎn)化(Wei 和 Ooka,1989, EMBO J. 8 :2897-903 ；Wang D, Liebowitz D 和 Kieff E.1985. Cell 43 831-840)。大部分(> 98% )的 NPC 活檢表達(dá) BARF 1 (Decaussin G，Sbih-Lammali F, De Turenne-Tessier M, Bougermouth AM, Ooka Τ.2000Cancer Res. 60 :5584-8 ；Hayes DP, Brink AA, Vervoort MB, Middeldorp JM, Meijer CJ, van den Brule A. 1999J. Mol. Pathol. 52 :97-103)。而且，全世界5_10%的胃癌與EBV感染相關(guān)，且?guī)缀跛械腅BV相關(guān)癌瘤的活檢表達(dá)BARFl。在病毒溶解蛋白(viral lytic protein)中，僅BARFl在NPC和EBV 相關(guān)GC癌瘤以及體外EBV無限增殖化的上皮細(xì)胞中始終如一地并以高水平表達(dá)(Ooka， 2005，28章，于Epstein-Barr Virus. Horizon Press，Annette Griffin :Erle S. Robertson
3編.613-630頁)。另一方面，BARFl能夠在體外使原代猴腎上皮細(xì)胞無限增殖化(Wei MX, de Turenne-Tessier Μ,Decaussin G,Benet G 禾口 Ooka Τ. 19970ncogene 14:3073-3082)。作為由EBV編碼的癌基因，BARFl是由Wei和Ooka于1989年發(fā)現(xiàn)的(Wei和 Ooka, 1989，EMBO J. 8 :2897-903)。當(dāng)在嚙齒類成纖維細(xì)胞(Wei 和 Ooka, 1989，EMBO J. 8 2897-903)、人 B MM (Wei MX, Moulin, JC, Decaussin G, Berger F, Ooka Τ. 1994, Cancer Res. 54 :1843-8)、人上皮細(xì)胞系和原代靈長類上皮細(xì)胞(Wei MX, de Turenne-Tessier Μ, Decaussin G, Benet G，Ooka Τ. 1997，Oncogene，14 :3073-3082)中表達(dá)時(shí),BARFl 癌基因既有轉(zhuǎn)化活性又有無限增殖化活性。BARFl還在注射EBV顆粒后，在小絹猴(Tamarin)(新大陸猴)中誘導(dǎo)的淋巴瘤中表達(dá)(Zhang CX,Decaussin G,Finerty S,Morgan A,Ooka Τ. 1992， Virus Res26 :153-166)。BARFl 激活 Bcl2、c_myc、CD23、CD21、運(yùn)鐵蛋白受體和幾種轉(zhuǎn)錄因子(Ooka, 2005,第 28 章，于 Epstein-Barr Virus. Horizon Press, Annette Griffin :Erle S. Robertson編.第613-630頁)。BARFl在轉(zhuǎn)染細(xì)胞和EBV相關(guān)的胃癌細(xì)胞中激活細(xì)胞周期蛋白 Dl (ffiech, T. , Nikolopoulos, E. , Lassmann, S. , Heidt, Τ. , Sarbia, Μ. , Werner, Μ., Shimizu, Y. ，Sakka, Μ. ，Ooka, T 禾口 Zur Hausen. Α. 2008，Virchows Archiv 452 :621-628)。 當(dāng)轉(zhuǎn)染入上皮細(xì)胞時(shí)，BARFl激活細(xì)胞周期，且該序列見于“雙微”染色體中，所述染色體常常見于含有擴(kuò)增的細(xì)胞基因如c-myc和mdm2的癌細(xì)胞中(Karran L.，Teo C. G.，King D.， Hitt Μ. M.，Gao Y.，Wedderburn N.和 Griffin B. Ε.，1990. Int. J. Cancer 45，763-772)。 BARFl 蛋白由潛在性感染的 B 細(xì)胞分泌(Fiorini 和 Ooka，2008，Virology Journal，5 :70)。 這表明BARFl基因?qū)儆跐撛谛约易宓幕?。轉(zhuǎn)化域位于BARFl蛋白的N端區(qū)，包含1_56 位氨基酸，其還涉及抗凋亡 Bcl2 的激活(Sheng W，Decaussin G，Sumner S，Ooka T. 2001， Oncogene 20 :1176-1185)。BARFl似在上皮腫瘤生成中起重要作用。BARFl蛋白顯示通過晶體學(xué)研究確定的六聚物寡聚結(jié)構(gòu)(Tarbouriech N, Ruggiero F, de Turenne-Tessier M, Ooka T, Burmeister WP. 2006, J Mol Biol. 359 :667-678)并作為強(qiáng)力的促有絲分裂原起作用(Sail A, Caserta S, Jolicoeur P, Franqueville L, de Turenne-Tessier M 禾口 Ooka Τ.2004. Oncogene. 23 4938-4944)。BARFl蛋白可在體外與CSFl (集落刺激因子_1)復(fù)合，導(dǎo)致巨噬細(xì)胞激活的抑制(Strockbine LD, Cohen JI, Farrah T, Lyman SD, Wagener F, DuBose RF, Armitage RJ 和 Spriggs MK LD. 1998，J Virol. 72 :4015-4021)，并可在 EBV 感染的 B 細(xì)胞中抑制 INF-α 的分泌(Cohen J.和 Lekstrom K. 1999 J. Virol. 73 :7627-7632)。另一方面，在 ADCC 測試中 NK 細(xì)胞識(shí)別 BARFl (Tanner J, Wei M，Ahamad A, Alfieri C, Tailor P, Ooka Τ, Menezes J. 1997 J. Infect Disease. 175 :38-46)。因此，BARFl不僅涉及致癌機(jī)理，還涉及免疫調(diào)節(jié)。 當(dāng)表達(dá)于胃上皮細(xì)胞中時(shí)，BARFl具有抗凋亡活性(Wang Q.，Tsao Sff.，Ooka T.，Nicholls JM.，Cheung HW,Fu S. ,Wong YC,Wang X. 2006Cancer Letter 238 :90-103)。BARFl 通過其激活幾種涉及抗凋亡的細(xì)胞蛋白的自分泌機(jī)理來激活細(xì)胞周期。其促有絲分裂活性在EBV 相關(guān)的腫瘤的形成中其關(guān)鍵作用(Sail A, Caserta S, Jolicoeur P, Franqueville L, de Turenne-Tessier Μ,Ooka Τ. 2004，0ncogene23 :4938-44)。正如BARFl 和 LMPl-外來體分泌于培養(yǎng)基(Houali K, X. Wang, Y. Shimizu, D. Djennaoui, J. NicholIs, S. Fiorini, A. Bougermouh 禾口 Τ·Ooka.2007, Clin.Cancer Res. 13 :4993-5000),這些癌蛋白還在來自NPC患者的血清以及唾液中分泌。這些在血清中分泌的蛋白可對(duì)細(xì)胞激活、免疫調(diào)節(jié)和/或免疫抑制起關(guān)鍵作用。闡明了 BARFl蛋白在 NPC 患者血清和唾液中的分泌(Houali K, X. Wang, Y. Shimizu, D. Djennaoui, J. Nicholls, S. Fiorini, A. Bo μ guermouh 禾口 Τ· Ooka. 2007， Clin. Cancer Res. 13 :4993-5000)且 BARFl 蛋白在體外顯示強(qiáng)力的促有絲分裂活性。該促有絲分裂活性可涉及腫瘤形成。已描述了 BARFl作為B細(xì)胞無限增殖化所需的癌基因的作用。然而也描述了其它無限增殖化所需的癌基因。EP-A-1229043描述了來源于LMP1、LMP2和BARFl的不同肽以及與其反應(yīng)的抗體試劑。然而，未描述使用這些抗體的免疫治療測定。此外，描述于EP-A-1229043的肽包含 34至42個(gè)氨基酸。Decaussin 等(Cancer Res. ,60 :5584-8,2000)描述了來源于 BARFl 的肽和針對(duì)這些肽產(chǎn)生的抗體。這些抗體用于在鼻咽癌中檢測BARFl的表達(dá)。然而，在現(xiàn)有技術(shù)中，從未成功地以特異性結(jié)合于BARFl的抗體應(yīng)用免疫療法。本發(fā)明令人驚訝地顯示BARFl的抗體結(jié)合特異性區(qū)域能夠在體內(nèi)中和癌基因，使得在小鼠模型中預(yù)防和抑制腫瘤成為可能。產(chǎn)生了結(jié)合于三個(gè)來源于BARFl的肽的多克隆抗體。在注射NPC來源的上皮腫瘤細(xì)胞之前連續(xù)注射抗BARFl抗體導(dǎo)致癌癥出現(xiàn)(apparition)的預(yù)防。在腫瘤大小成為直徑約0. 8cm之后，當(dāng)連續(xù)注射抗BARFl抗體時(shí)，腫瘤退行并完全消失。這代表了關(guān)于用抗LMPl 抗體抑制并避免(protect from) EBV陽性腫瘤的免疫療法第一個(gè)報(bào)道。將抗BARFl抗體添加入培養(yǎng)基也能夠抑制EBV陽性B細(xì)胞生長，表明基于抗BARFl 的免疫療法對(duì)于抑制和避免EBV相關(guān)的淋巴瘤的形成也是有效的。基于用抗BARFl進(jìn)行的免疫療法的治療和預(yù)防不僅對(duì)于NPC類型的癌瘤是有效的，對(duì)于GC類型的癌瘤也是有效的。在體內(nèi)和在體外觀察到了抑制作用?；诳笲ARFl抗體處理的免疫療法顯得更加有望，因?yàn)镹PC患者的血清中幾乎無法檢測到抗BARFl抗體。序列表SEQ ID No. 1 對(duì)應(yīng)于人皰疹病毒4類型1的BARFl蛋白的附72至D180位的來源于 BARFl 的月太(Genebank =Gene ID 3783772，mRNA 和蛋白 YP_401719. 1)SEQ ID No. 2 對(duì)應(yīng)于人皰疹病毒4類型1的BARFl蛋白的G203至Ε209位的來源于 BARFl 的月太(Genebank =Gene ID 3783772，mRNA 和蛋白 YP_401719. 1)SEQ ID No. 3 對(duì)應(yīng)于人皰疹病毒4類型1的BARFl蛋白的W48至Ε55位的來源于 BARFl 的月太(Genebank =Gene ID 3783772，mRNA 和蛋白 ΥΡ_401719· 1)

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一個(gè)目的是用作藥物的組合物，其包含特異性結(jié)合于選自SEQ ID NO 1-3的肽的抗體或抗體片段。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，用作藥物的組合物包含特異性結(jié)合于SEQ IDNO :1的肽的抗體或抗體片段。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，用作藥物的組合物包含是單克隆抗體、嵌合抗體或人源化抗體的抗體或抗體片段。
本發(fā)明的第二個(gè)目的是用作藥物或用作疫苗的組合物，其包含選自SEQID NO :1_3 的肽。優(yōu)選地，用作藥物或用作疫苗的組合物包含SEQ ID NO=I的肽。本發(fā)明的另一個(gè)目的是用作藥物或用作疫苗的組合物，其包含編碼選自SEQ ID NO 1-3的肽的多核苷酸。本發(fā)明還涉及用作藥物或用作疫苗的組合物，其包含表達(dá)選自SEQ IDNO :1_3的肽的轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞。優(yōu)選地，組合物是用于預(yù)防或治療Epstein-Barr病毒陽性腫瘤。更優(yōu)選地，本發(fā)明的組合物用于預(yù)防或治療鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma)、胃癌(Gastric carcinoma)、伯基特淋巴瘤(Burkitt，s lymphoma)、何杰金淋巴瘤(Hodgkin' s lymphoma)、在 AIDS 患者中誘導(dǎo)的淋巴瘤(lymphoma induced in AIDS patients)、^": 禾口月干內(nèi) EB iW- (Esophage and Intrahepatic cholangiocarcinoma)、 鼻 NK/T-細(xì)胞淋巴瘤(nasal NK/T-cell lymphoma)以及口腔毛狀白斑(Oral hairy leucoplasia, 0HL)。甚至更優(yōu)選地，本發(fā)明的組合物用于預(yù)防或治療鼻咽癌或胃癌。本發(fā)明涉及用作藥物的組合物，其包含特異性結(jié)合于來自EBV蛋白BARFl的選定肽的抗體或抗體片段。本發(fā)明還涉及用作藥物或用作疫苗的組合物，其包含來源于EBV蛋白BARFl的選定肽。本發(fā)明的另一個(gè)目的是用作藥物或用作疫苗的組合物，其包含編碼 BARFl的選定肽的多核苷酸。本發(fā)明的另一個(gè)目的是用作藥物或用作疫苗的組合物，其包含表達(dá)來源于BARFl的選定肽的轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞。已描述了來源于BARFl的肽和與其反應(yīng)的抗體試劑，但其從未成功地用于免疫療法?，F(xiàn)在令人驚訝地發(fā)現(xiàn)特異性結(jié)合于SEQ ID NO :1-3的肽的抗體能夠在體內(nèi)小鼠模型中預(yù)防和減少腫瘤形成。本發(fā)明提供了藥物組合物，其包含a)如本文中所述的有效量的抗體或抗體片段，如本文中所述的有效量的肽、如本文中所述的有效量的多核苷酸或如本文中所述的有效量的轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，和b)藥學(xué)上可接受的載體，其可為惰性的或生理學(xué)活性的。本發(fā)明還提供疫苗組合物，其包含a)如本文中所述的有效量的多肽、如本文中所述的有效量的多核苷酸或如本文中所述的有效量的轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，和b)佐劑。如本文中使用的“藥學(xué)上可接受的載體”包括任何和所有生理上相容的溶劑、分散介質(zhì)、涂層(coating)、抗細(xì)菌和抗真菌劑等。合適的載體、稀釋劑和/或賦形劑的實(shí)例包括水、鹽水、磷酸鹽緩沖鹽水、右旋糖、甘油、乙醇等的一種或多種以及其組合。在許多情況下，優(yōu)選在組合物中包括等滲劑如糖、多元醇或氯化鈉。具體而言，合適的載體的相關(guān)實(shí)例包括(1)杜爾貝科氏磷酸鹽緩沖鹽水(Dulbecco，s phosphate buffered saline), pH 7. 4，含有或不含有約lmg/ml至25mg/ml人血清白蛋白，(2)0. 9%鹽水(0. 9% w/v氯化鈉 (NaCD)JP (3)5% (w/v)右旋糖；且可含有抗氧化劑如色胺和穩(wěn)定劑如Tween 20。本發(fā)明涵蓋的藥物組合物還可含有用于治療與EBV相關(guān)的癌癥的其它治療劑。
本發(fā)明的組合物可為多種形式。其包括例如液體、半固體和固體劑型，但優(yōu)選的型式取決于意欲的施用模式和治療應(yīng)用。通常優(yōu)選組合物為可注射或可輸注(infusible) 溶液的形式。優(yōu)選的施用模式是腸胃外(例如靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下)。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物作為快速注射(bolus)或在一段時(shí)間內(nèi)連續(xù)輸注來靜脈內(nèi)施用。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，其通過肌肉內(nèi)、皮下、關(guān)節(jié)內(nèi)、滑膜內(nèi)、瘤內(nèi)、瘤周圍 (peritumoral)、損傷內(nèi)(interlesional)或損傷周圍(perilesional)途徑注射，以發(fā)揮局部以及全身的治療效果。用于腸胃外施用的滅菌的組合物可通過將如本發(fā)明中所述的抗體、抗體片段、多肽或多核苷酸以所需量并入合適的溶劑，然后通過微濾滅菌來制備。作為溶劑或運(yùn)載體，可使用水、鹽水、磷酸鹽緩沖鹽水、右旋糖、甘油、乙醇等，以及其組合。在許多情況下，優(yōu)選在組合物中包括等滲劑如糖、多元醇或氯化鈉。這些組合物還可含有佐劑，特別是濕潤劑、等滲劑、乳化劑、分散劑和穩(wěn)定劑。用于腸胃外施用的滅菌的組合物還可以以滅菌的固體組合物的形式制備，其可在使用時(shí)溶解于滅菌水或任何其它可注射的滅菌介質(zhì)。如本文中所述的抗體、抗體片段、多肽、多核苷酸或轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞還可經(jīng)口施用。 作為用于經(jīng)口施用的固體組合物，可使用片劑、丸劑、粉劑(明膠膠囊、小藥囊(sachet))或顆粒劑。在這些組合物中，將本發(fā)明的活性成分與一種或多種惰性稀釋劑如淀粉、纖維素、 蔗糖、乳糖或二氧化硅在氬氣流下混合。這些組合物還可包含除了稀釋劑之外的物質(zhì)，例如一種或多種潤滑劑如硬脂酸鎂或滑石，著色劑，包被劑(糖衣片劑)或薄膜(glaze)。作為用于經(jīng)口施用的液體組合物，可使用藥學(xué)上可接受的溶液、懸液、乳液、糖漿和酏劑，其含有惰性稀釋劑如水、乙醇、甘油、植物油或石蠟油。這些組合物可包含除了稀釋劑之外的物質(zhì)，例如濕潤劑、增甜劑、增稠劑、芳香基或穩(wěn)定劑產(chǎn)物。劑量取決于所需的效果、治療的持續(xù)時(shí)間和使用的施用途徑。本發(fā)明還涉及使用如本文中所述的抗體、抗體片段、多肽、多核苷酸或轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞以供制備用于預(yù)防或治療EBV陽性腫瘤或EBV相關(guān)腫瘤如鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma)、胃癌(Gastric carcinoma)、伯基特淋巴瘤(Burkitt，s lymphoma)、何杰金淋巴瘤(Hodgkin' s lymphoma)、在 AIDS 患者中誘導(dǎo)的淋巴瘤(lymphoma induced in AIDS patients)、^" : 禾口月干內(nèi) EB iW - (Esophage and Intrahepatic cholangiocarcinoma)、 鼻 NK/T-細(xì)胞淋巴瘤(nasal NK/T-cell lymphoma)以及口腔毛狀白斑(Oral hairy leucoplasia, 0HL)的藥物或疫苗。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，如本文中所述的抗體、抗體片段、多肽、多核苷酸或轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞用于預(yù)防或治療EBV陽性腫瘤。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，使用上述公開的含有如本文中所述的抗體、抗體片段、多肽、多核苷酸或轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞的藥物組合物或疫苗組合物之一用于預(yù)防或治療EBV陽性腫瘤。更優(yōu)選地，將其用于預(yù)防或治療鼻咽癌 (Nasopharyngeal carcinoma)、胃癌(Gastric carcinoma)、伯基特淋巴瘤(Burkitt，s lymphoma)、何杰金淋巴瘤(Hodgkin’ s lymphoma)、在AIDS患者中誘導(dǎo)的淋巴瘤 (lymphoma induced in AIDS patients)、食道禾口月干內(nèi)膽管癌(Esophage and Intrahepatic cholangiocarcinoma)、鼻 NK/T-細(xì)胞淋巴瘤(nasal NK/T-cell lymphoma)以及口腔毛狀白斑(Oral hairy leucoplasia,0HL) 0在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，將其用于預(yù)防或治療鼻咽癌或胃癌。
本發(fā)明還提供了用于預(yù)防或治療EBV陽性腫瘤的方法，包括將有效量的如本文中所述的抗體、抗體片段、多肽、多核苷酸或轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞施用于有此需要的人或患者。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及用于預(yù)防或治療鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma)、胃癌(Gastric carcinoma)、伯基特淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)、何杰金淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma)、在 AIDS 患者中誘導(dǎo)的淋巴瘤(lymphoma induced in AIDS patients)、食道和月干內(nèi)膽管癌(Esophage and Intrahepatic cholangiocarcinoma)、鼻 NK/T—細(xì)胞淋巴瘤 (nasal NK/T-cell lymphoma)以及口腔毛狀白斑(Oral hairy leucoplasia，OHL)的方法。 甚至更優(yōu)選地，本發(fā)明涉及預(yù)防或治療鼻咽癌或胃癌的方法。在第一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物包含特異性結(jié)合于來自BARFl的選定肽的抗體或抗體片段。如本文中使用的術(shù)語“結(jié)合”指抗體和抗體片段是與SEQ ID NO :1_3的肽之一的表位反應(yīng)的，或者是針對(duì)SEQ ID NO :1-3的肽之一產(chǎn)生的。優(yōu)選地，所述抗體特異性結(jié)合于SEQ ID NO 1_3的肽之一的表位，且不與其它抗原交叉反應(yīng)。因此，所述抗體與一個(gè)特異性抗原反應(yīng)。在本發(fā)明中，特異性結(jié)合于SEQ ID NO :1_3的肽的多克隆抗體是在兔中產(chǎn)生的。 特異性結(jié)合于SEQ ID NO :1-3的肽的多克隆或單克隆抗體可通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)產(chǎn)生。優(yōu)選的抗體是結(jié)合于SEQ ID NO 1的肽的抗體。本文中使用的術(shù)語“抗體”為其最廣泛的含意，并具體地涵蓋任何同種型的單克隆抗體如IgG、IgM、IgA、IgD和IgE，多克隆抗體，嵌合抗體，人源化抗體和抗體片段。與特異性抗原反應(yīng)的抗體可通過重組方法生成，如選擇噬菌體或類似載體中重組抗體的文庫，或通過用抗原或編碼抗原的核酸對(duì)動(dòng)物進(jìn)行免疫接種。典型的IgG抗體由通過二硫鍵連接的兩個(gè)相同的重鏈和兩個(gè)相同的輕鏈組成。每個(gè)重鏈和輕鏈含有恒定區(qū)和可變區(qū)。每個(gè)可變區(qū)含有三個(gè)稱為“互補(bǔ)決定區(qū)(CDR) ”或“高變區(qū)”的區(qū)段，其主要負(fù)責(zé)結(jié)合抗原的表位。其通常稱作⑶R1、⑶R2和⑶R3，從N端順序編號(hào)。可變區(qū)的較為高度保守的部分稱為“框架區(qū)”。如本文中使用的“VH”或“VH”指抗體的免疫球蛋白重鏈的可變區(qū)，包括Fv、scFv、 dsFV、Fab、Fab，或F(ab，)2片段的重鏈。提及“VL”或“VL”是指抗體的免疫球蛋白輕鏈的可變區(qū)，包括Fv、scFv、dsFv、Fab、Fab，或F(ab，)2片段的輕鏈。“多克隆抗體”是在一種或多種其它的非相同抗體存在下產(chǎn)生的抗體。一般而言， 多克隆抗體是由B淋巴細(xì)胞在幾種其它產(chǎn)生非相同抗體的B淋巴細(xì)胞存在下產(chǎn)生的。通常， 多克隆抗體是直接從經(jīng)免疫接種的動(dòng)物獲得的。如本文中使用的“單克隆抗體”為從基本上同源的抗體群獲得的抗體，即形成該群的抗體除了可以以較小量存在的可能天然存在的突變之外是基本上相同的。這些抗體針對(duì)單一的表位，并因此是高度特異性的。“表位”是抗原上抗體結(jié)合的位點(diǎn)。如本文中使用的“嵌合抗體”指其中恒定區(qū)或其部分經(jīng)改變、替代或交換從而使得可變區(qū)連接于不同物種的恒定區(qū)或?qū)儆诹硪环N抗體類型或亞類型的可變區(qū)的抗體?！扒逗峡贵w”還指其中可變區(qū)或其片段經(jīng)改變、替代或交換從而使得恒定區(qū)連接于不同物種的可變區(qū)或?qū)儆诹硪环N抗體型或亞型的可變區(qū)的抗體。用于產(chǎn)生嵌合抗體的方法
8在本領(lǐng)域是已知的。如本文中使用的術(shù)語“人源化抗體”指含有來源于非人免疫球蛋白的最小序列的嵌合抗體。人源化的目標(biāo)是減少異種抗體如鼠類抗體的免疫原性，以供將其引入人類，而保留抗體的全抗原結(jié)合親和性和特異性。人源化抗體或經(jīng)適應(yīng)以不被其它哺乳動(dòng)物排斥的抗體，可使用幾種技術(shù)如表面重建(resurfacing)和⑶R移植來產(chǎn)生。人源化嵌合抗體優(yōu)選具有除了下述互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)之外的恒定區(qū)和可變區(qū)，所述互補(bǔ)決定區(qū)實(shí)質(zhì)上和排他地來源于相應(yīng)的人抗體區(qū)和CDR，所述人抗體區(qū)和CDR實(shí)質(zhì)上和排他地來源于除了人之外的哺乳動(dòng)物。本發(fā)明的抗體包含上述討論的全長抗體以及其表位結(jié)合片段。如本文中使用的 “抗體片段”包括抗體任何保留結(jié)合于由全長抗體識(shí)別的表位的能力的部分，通常稱為“表位結(jié)合片段”。抗體片段的實(shí)例包括但不僅限于Fab、Fab，和F(ab，)2、Fd、單鏈Fvs (scFv)、 單鏈抗體、二硫連接的Fvs (dsFv)和包含VL或VH區(qū)的片段。表位結(jié)合片段，包括單鏈抗體， 可僅包含可變區(qū)或與下述的整體或一部分組合鉸鏈區(qū)、CHI、CH2和CH3域。在第二個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物包含選自SEQ ID NO :1_3的肽的肽。在第三個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物包含編碼選自SEQ ID NO :1_3的肽的肽的多核苷酸。根據(jù)本發(fā)明術(shù)語“多核苷酸”指可為DNA或RNA類型的單鏈核苷酸鏈或其互補(bǔ)鏈， 或可為cDNA(互補(bǔ))或基因組DNA類型的雙鏈核苷酸鏈。優(yōu)選地，本發(fā)明的多核苷酸是DNA 類型，即雙鏈DNA。術(shù)語“多核苷酸”還指修飾的多核苷酸。將本發(fā)明的多核苷酸從其天然環(huán)境分離或純化。優(yōu)選地，本發(fā)明的多核苷酸可使用常規(guī)的分子生物學(xué)技術(shù)如Sambrook等所述的(Molecular Cloning =ALaboratory Manual, 1989)那些或通過化學(xué)合成來制備。所述多核苷酸可為載體，例如病毒載體。本發(fā)明的另一個(gè)目的是包含轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞的組合物，所述轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞表達(dá)選自 SEQ ID NO 1-3的肽的肽。本領(lǐng)域技術(shù)人員知悉用于將多核苷酸并入宿主細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)方法，例如轉(zhuǎn)染、脂轉(zhuǎn)染、電穿孔、微注射、病毒感染、熱休克、膜的化學(xué)滲透后的轉(zhuǎn)化或細(xì)胞融合。附圖簡述Sl 抗BARFl抗體在EBV陽性或EBV陰性細(xì)胞系中的作用對(duì)于IO5個(gè)細(xì)胞，將5 μ g P印III抗體添加入人^ν陽性AKATA和EBV陰性 LouckesB細(xì)胞系以及人上皮C666-1細(xì)胞系的培養(yǎng)物中，然后在120小時(shí)期間進(jìn)行培養(yǎng)。通過考馬斯藍(lán)染色確定存活％。Ml 抗BARFlP印III抗體對(duì)EBV-AGS細(xì)胞生長的作用將EBV陰性AGS (1)和EBV陽性AGS (2)在5 μ g P印III抗體的存在下進(jìn)行培養(yǎng)。 對(duì)照細(xì)胞不接受抗體。細(xì)胞生存力通過考馬斯藍(lán)染色在5日期間測量。Ml 針對(duì)鼻咽癌來源腫瘤的免疫治療測定將50 μ g抗BARFl PepIII抗體在注射c666_l細(xì)胞之前(j)、同時(shí)(k)或之后(1) 進(jìn)行腹膜內(nèi)注射。將IO7個(gè)細(xì)胞(C666-1)皮下注射。圖中表示的值對(duì)應(yīng)于以mm計(jì)的平均腫瘤直徑大小。方案1 對(duì)于C666-1為(j)及S12 方案2 對(duì)于c666_l為(k)及S12。方案3 對(duì)于C666-1為(1)及S12。不用任何抗體，在注射c666_l細(xì)胞之后腫瘤形成(i)。Mi 針對(duì)胃癌來源腫瘤的免疫治療測定將抗BARFl PepIII在注射EBV-AGS細(xì)胞之前(η)、同時(shí)(ο)或之后(ρ)注射。將 50yg抗體進(jìn)行腹膜內(nèi)注射。將IO7個(gè)細(xì)胞(EBV-AGS)皮下注射。圖中表示的值對(duì)應(yīng)于以mm 計(jì)的平均腫瘤直徑大小。方案1 對(duì)于EBV-AGS為(η)及P印III 方案2 :Ρ印III對(duì)EBV-AGS 細(xì)胞生長的作用，對(duì)于EBV-AGS為(ο)及P印III。方案3 對(duì)于EBV-AGS為(ρ)及P印III。 不用任何抗體，在注射AGS-EBV細(xì)胞之后腫瘤形成(m)。M5 抗EBV DNA酶在腫瘤形成中的作用用兔多克隆抗EBV DNA酶(50 μ g)在20日期間每5日進(jìn)行處理，然后注射IO6個(gè) C666-1細(xì)胞。監(jiān)視腫瘤形成?？贵w對(duì)腫瘤形成無抑制作用。M6 抗兔Ig對(duì)腫瘤形成的作用用抗兔Ig或抗小鼠Ig(50yg)在20日期間每5日進(jìn)行處理，然后注射IO6個(gè) C666-1細(xì)胞。監(jiān)視腫瘤形成。抗體對(duì)腫瘤形成無抑制作用。Ml 通過免疫印跡在小鼠血清和腫瘤細(xì)胞中檢測BARFlA^pIII復(fù)合物分離了 BARFlA^pin復(fù)合物并在12% SDS-聚丙烯酰胺凝膠上進(jìn)行分析。用增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)(ECL ；Amersham)檢測抗原抗體復(fù)合物。在來自形成c666_l或EBV-AGS腫瘤的小鼠的血清中分析BARFl的存在(1)。對(duì)照陽性為純化的BARFl p29。從血清分離的 BARFl/PepIII 復(fù)合物(2)S-c666_l。從腫瘤分離的8六1^1/卩印111 復(fù)合物(3) :MT-c666_l。 通過二級(jí)兔抗Ig發(fā)現(xiàn)P印III。商業(yè)的兔Ig用作陽性對(duì)照Ig(l，2，3)。
實(shí)施例為了闡明抗BARFl抗體可用于預(yù)防和抑制EBV相關(guān)的癌瘤(NPC和GC)，我們使用動(dòng)物模型裸鼠。結(jié)合于SEQ ID NO :1_3的肽的多克隆抗體產(chǎn)生于兔中。結(jié)合于SEQ ID NO 1的肽的多克隆抗體(下文稱為PEPIII)，如前所述產(chǎn)生于兔中(Decaussin 等，Cancer Res.，60 :5584-8, 2000)。對(duì)于在體外分析抗BARFl抗體的作用，在EBV陽性NPC來源的c666_l上皮細(xì)胞系和EBV陽性或EBV陰性的人B細(xì)胞系中檢查多克隆抗BARFl。當(dāng)將NPC來源的c666_l上皮細(xì)胞(Cheung ST, Huang DP, Hui AB, Lo Kff, Ko Cff, Tsang YS, Wong N, Whitney BM, Lee JC. 1999, Int J Cancer 83 :121-6)或 GC 來源的 EBV 陽性 AGS 上皮細(xì)胞(Kassis J, Maeda A, Teramoto N, Takada, K, Wu C, Wells A. 2002, Int. J. Cancer 99:644-51)注射入裸鼠時(shí)， 可誘導(dǎo)NPC來源或GC來源的腫瘤。我們?cè)谶@些小鼠中分析抗BARFl的作用。體外實(shí)驗(yàn)抗BARFl (PEPIII抗體)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的作用對(duì)ffiV陽性c666-l上皮細(xì)胞系、EBV陽性人AKATA和fcijiB細(xì)胞系、EBV陰性人 LouckesB細(xì)胞系、人胃AGS細(xì)胞系和EBV陽性人胃AGS細(xì)胞系在體外培養(yǎng)中分析抗BARFl 抗體的作用(

圖1)。c666-l 細(xì)胞將 BARFl 蛋白分泌入培養(yǎng)基(Houali K, X. Wang, Y. Shimizu, D.Djennaoui, J. Nicholls, S.Fiorini, A.Bouguermouh 禾口 Τ·Ooka. 2007, Clin. CancerRes. 13 :4993-5000)。當(dāng)在體外用抗BARFl抗體中和該分泌的癌蛋白時(shí)(對(duì)于添加于培養(yǎng)基的IO5個(gè)細(xì)胞為5 μ g抗體)，C666-1細(xì)胞死亡，如圖1中存活曲線所示。在添加抗體之后，存活的細(xì)胞在M小時(shí)減少為75%，在48小時(shí)為40%，在96小時(shí)為20%，且?guī)缀跛械腸666_l細(xì)胞在 120分鐘(5日)之后死亡(圖1-3)。這表明BARFl的促有絲分裂活性直接涉及主要的細(xì)胞激活途徑。相似的現(xiàn)象見于EBV陽性人AKATAB細(xì)胞，但作用較弱。在120分鐘，約30%的細(xì)胞死亡，如圖1-4表示。該現(xiàn)象可能涉及這些細(xì)胞中BARFl的低水平表達(dá)(Fiorini和Ooka， 2008 Virology J. 5 :70)。如預(yù)想，未觀察到對(duì)EBV陰性LouckesB細(xì)胞(圖1-2)和EBV陽性Raji細(xì)胞(圖 1-1)的抑制作用，其中在EBV陽性Raji細(xì)胞中，Raji EBV基因組對(duì)于BARFl序列是陰性的。對(duì)于胃癌的AGS或EBV-AGS細(xì)胞檢查了抗BARFl的抑制作用(圖2)。在培養(yǎng)基中添加抗BARFl并不顯示任何對(duì)AGS細(xì)胞生長的抑制(圖2_1)，而抗BARFl在120小時(shí)給出EBV-AGS細(xì)胞生長的顯著抑制。此時(shí)，幾乎所有EBV-AGS細(xì)胞死亡(圖2_2)。該抑制來自在EBV-AGS培養(yǎng)物中分泌的BARFl蛋白。總而言之，識(shí)別BARFl蛋白的表位172-180位氨基酸的抗BARFl抗體可抑制EBV陽性c666_l和AGS上皮細(xì)胞系以及表達(dá)BARFl蛋白的 EBV陽性B細(xì)胞系的細(xì)胞生長。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)我們研究了抗BARFl抗體在皮下注射IO7個(gè)培養(yǎng)的EBV相關(guān)的腫瘤細(xì)胞系來源于NPC的C666-1細(xì)胞或來源于GC的EBV陽性AGS(EBV-AGS)的裸鼠中的活性。本文中使用的裸鼠來自Harlan(法國)，產(chǎn)自意大利。株系=Hsd =Athymic Nude-Foxlnu0我們還測試 T HsdCpb =NMRI-Foxlnu0其年齡為4周。其性別為雄性。其于4周時(shí)的體重為約19_21g。對(duì)于C666-1細(xì)胞，在未經(jīng)處理的小鼠中在第二或第三日可檢測出腫瘤，腫瘤在第 4日達(dá)到約2mm，第8日達(dá)到8mm，而在第14日達(dá)到16mm，并在20日達(dá)到20mm的直徑(圖 3-i)。對(duì)于EBV陽性AGS細(xì)胞，在未經(jīng)處理的小鼠中在第二或第三日可檢測出腫瘤，腫瘤在第4日達(dá)到約3mm，第8日達(dá)到15mm，而在第14日達(dá)到25mm，并在20日達(dá)到30mm的直徑 (圖 4-m)。用C666-1細(xì)胞誘導(dǎo)的腫瘤比用EBV-AGS細(xì)胞誘導(dǎo)的腫瘤略小(以mm計(jì)的腫瘤直徑大小)(圖3-i和圖4-m)。為了分析抗BARFl的作用，對(duì)每只小鼠以三種方案腹膜內(nèi)注射25 μ g的抗BARFl 方案#1，在預(yù)防方案中，將BARFl (P印-III)作為每次25 μ g的5次腹膜內(nèi)注射以 5日間隔施用，結(jié)束后三日(finishing 3days)，進(jìn)行腫瘤攻擊(對(duì)于c666-l為圖3-j，而對(duì)于 EBV-AGS 為圖 4-n)。方案#2，與腫瘤攻擊同時(shí)開始連續(xù)5日每日進(jìn)行注射(對(duì)于C666-1為圖3-k，而對(duì)于EBV-AGS為圖4-0)。方案#3，當(dāng)腫瘤大小成為直徑約0. 8cm時(shí)進(jìn)行5次注射(每日一次注射)(對(duì)于 C6666-1 為圖 3-4，而對(duì)于 EBV-AGS 為圖 4-4)。
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方案#1和#2用于預(yù)防而方案#3用于腫瘤治療。用抗BARFl進(jìn)行的預(yù)防(方案#1-圖3_j和圖4_n)或同時(shí)(方案#2-圖3_k和圖4-0)處理對(duì)于兩個(gè)細(xì)胞系均在所有經(jīng)處理的小鼠中至少3個(gè)月內(nèi)完全消除了腫瘤的出現(xiàn)。即使當(dāng)腫瘤已經(jīng)達(dá)到相當(dāng)?shù)拇笮r(shí)，注射抗BARFl抗體仍為高度有效的。在每日注射抗BARFl抗體5日之后，約8mm(c666-l)和約15mm(EBV-AGS)的瘤迅速穩(wěn)定，然后持續(xù)退行(對(duì)于C666-1為圖3-1，而對(duì)于EBV-AGS為圖4_p)。腫瘤物質(zhì)在治療開始11日之后完全消失，且小鼠在至少3個(gè)月內(nèi)保持無腫瘤。為了確證抗BARFl對(duì)抑制腫瘤生長的特異性，我們將EBV編碼的DNA酶抗體或小鼠多克隆抗Ig抗體分別以方案#1(預(yù)防)注射。在預(yù)防方案中，將抗EBV-DNA酶或抗小鼠 Ig抗體作為5次25 μ g的腹膜內(nèi)注射以5日間隔施用，結(jié)束后3日進(jìn)行腫瘤攻擊。當(dāng)在方案#1 (預(yù)防)中未經(jīng)或經(jīng)抗DNA酶處理的動(dòng)物用C666-1 (圖5)或用抗兔 Ig (圖6)替代抗BARFl用作對(duì)照實(shí)驗(yàn)時(shí)，顯示快速的腫瘤生長(圖5或圖6)。這表明對(duì)腫瘤形成的特異性抑制可能是由于抗BARFl中和BARFl蛋白所致。使用的抗兔Ig購自Sigma(France)，產(chǎn)品號(hào)18772。本文使用的兔多克隆抗DNA酶是在我們的實(shí)驗(yàn)室中從通過桿狀病毒系統(tǒng)獲得的 EBV-DNA 酶產(chǎn)生的(Sbih-Lammali F, Berger F, Busson P 和 Ooka T, 1996, Virology, 222 64-74)(Zeng Y, Middeldorp J, Madjar JJ 禾口 Ooka T, 1997, Virology 239:285-295)。我們?nèi)缓髾z查抗BARFl和BARFl蛋白的復(fù)合物是否存在于血清以及腫瘤細(xì)胞中。BARFl 存在于攜帶 c666_l (圖 7-l，c666_l)和 EBV-AGS (圖 7_1，EBV_AGS)的小鼠的血清中。用于該實(shí)驗(yàn)的陽性對(duì)照(稱為P29)來自從經(jīng)BARFl重組腺病毒感染的293細(xì)胞純化的 BARFl (Sail A, Caserta S, Jolicoeur P, Franqueville L, De Turenne-Tessier M 和 Ooka Τ. (2004)Oncogene. 23 :4938-4944)。我們?cè)谛纬赡[瘤之后用抗體處理(方案#3)的小鼠中研究了這些血清組分。從處理第三日的血清通過刀豆球蛋白A親和色譜回收了 BARFl (Houali K，X. Wang，Y. Shimizu, D. Djennaoui, J. Nicholls, S.Fiorini, A. Bougermouh 禾口 Τ· Ooka. Clin. Cancer Res. 13 4993-5000 ；De Turenne 和 Ooka, 2007 J. Gen. Virol. 88 :2656-2661).通過Wfestern印跡分析經(jīng)c666_l處理的小鼠血清中的復(fù)合物顯示與兔免疫球蛋白(圖7-2 :S-c666-l-Ig)相關(guān)的BARFl的存在(圖7-2 :S-c666_l)。添加商業(yè)的兔Ig作為陽性對(duì)照(圖7-2:Ig)。類似的復(fù)合物也存在于與兔免疫球蛋白(圖7-3 :MT-c666-l-Ig)相關(guān)的腫瘤活檢中(圖7-3，MT-C666-1)。添加商業(yè)的小鼠Ig作為陽性對(duì)照(圖7-3 :Ig)令人驚訝地，我們?cè)趶膩碜越?jīng)適當(dāng)處理的小鼠的腫瘤活檢分離的細(xì)胞之內(nèi)發(fā)現(xiàn)了 BARF1/P印III抗體復(fù)合物。將從腫瘤提取的細(xì)胞鋪于載玻片上并用丙酮固定。通過針對(duì) PepIII的抗兔Ig發(fā)現(xiàn)了該復(fù)合物。發(fā)現(xiàn)BARFlA^pIII復(fù)合物為細(xì)胞質(zhì)內(nèi)和細(xì)胞核內(nèi)的斑點(diǎn)(patch)。顯然，通過與其特異性抗體結(jié)合而致使這些通常促有絲分裂的組分失去效力。之前，我們顯示從NPC患者血清純化的BARFl在EBV陰性Louckes細(xì)胞中是促有絲分裂的(Houali K, X. Wang, Y. Shimizu, D. Djennaoui, J. Nicholls, S. Fiorini, A. Bougermouh 禾口 Τ· Ooka. Clin. Cancer Res. 13 :4993-5000)。
一般而言，幾乎所有raV陽性GC活檢表達(dá)BARFl(zur Hausen A, Brink A A, Craanen ME. , Middeldorp JM, Meijer C J, van Den Brule AJ. 2000, Cancer Res.60 2745-2748)。對(duì)離體和培養(yǎng)中的c666_l和EBV-AGS細(xì)胞通過半定量和定量RT-PCR比較了其BRAFl的轉(zhuǎn)錄。我們發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)的C666-1細(xì)胞中，BARFl出于某種原因表達(dá)較弱，但其表達(dá)在腫瘤活檢中變得更加重要。對(duì)于EBV-AGS，在培養(yǎng)的EBV-AGS細(xì)胞中，BARFl轉(zhuǎn)錄非常弱，但腫瘤活檢表達(dá)多得多的BARF1。由于兩者之間用作標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照的肌動(dòng)蛋白表達(dá)是類似的，這表明 BARFl表達(dá)在離體時(shí)被激活。在對(duì)裸鼠注射EBV-AKATA細(xì)胞之后分析腫瘤活檢時(shí)，我們研究組已經(jīng)觀察到了 EBV基因表達(dá)的離體激活(Sheng W，Decaussin, G.，Ligout A.，Takada, K 和 Ooka, T. 2003. J. Virol. 77 :3859-3865)。我們通過定量RT-PCR確證了這些結(jié)果。與從培養(yǎng)細(xì)胞(EBV-AGS和c666_l)獲得的值相比，在EBV-AGS腫瘤中(EBV-AGS/EBV-AGS-T)，轉(zhuǎn)錄水平增加為兩倍，且在c666_l腫瘤(c666-l/c666-l-T)中，增加為幾乎3倍。在腫瘤中BARF轉(zhuǎn)錄的顯著激活表明其在細(xì)胞周期激活導(dǎo)致腫瘤形成中起重要作用。
1權(quán)利要求
1.用作藥物的組合物，其包含特異性結(jié)合于選自SEQID NO :1-3的肽的抗體或抗體片段。
2.權(quán)利要求1的用作藥物的組合物，其包含特異性結(jié)合于SEQID NO 1的肽的抗體或抗體片段。
3.權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)所述的用作藥物的組合物，其中所述抗體或抗體片段是單克隆抗體、嵌合抗體或人源化抗體。
4.用作藥物或用作疫苗的組合物，其包含選自SEQID NO :1-3的肽。
5.權(quán)利要求4的用作藥物或用作疫苗的組合物，其包含SEQID N0:1的肽。
6.用作藥物或用作疫苗的組合物，其包含編碼選自SEQID NO :1-3的肽的多核苷酸。
7.用作藥物或用作疫苗的組合物，其包含表達(dá)選自SEQID NO :1-3的肽的轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。
8.權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的組合物，用于預(yù)防或治療Epstein-Ban·病毒陽性腫瘤。
9.權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的組合物，用于預(yù)防或治療鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma)、胃癌(Gastric carcinoma)、伯基特淋巴瘤(Burkitt，s lymphoma)、何杰金淋巴瘤(Hodgkin' s lymphoma)、在 AIDS 患者中誘導(dǎo)的淋巴瘤(lymphoma induced in AIDS patients)、^": 禾口月干內(nèi) EB iW- (Esophage and Intrahepatic cholangiocarcinoma)、 鼻 NK/T-細(xì)胞淋巴瘤(nasal NK/T-celllymphoma)以及口腔毛狀白斑(Oral hairy leucoplasia, 0HL)。
10.權(quán)利要求9的組合物，用于預(yù)防或治療鼻咽癌。
11.權(quán)利要求9的組合物，用于預(yù)防或治療胃癌。
全文摘要
本發(fā)明涉及藥物和疫苗組合物，其包含特異性結(jié)合于EBV蛋白BARF的選定肽的抗體的。
文檔編號(hào)A61K39/12GK102176922SQ200980139841
公開日2011年9月7日 申請(qǐng)日期2009年8月7日 優(yōu)先權(quán)日2008年8月8日
發(fā)明者大岡忠正 申請(qǐng)人:克勞德伯納德里昂第一大學(xué), 國家科學(xué)研究中心