專利名稱：骨替代物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及骨替代物及其制備方法。
背景技術(shù)：
骨是主要由細(xì)胞；構(gòu)成有機(jī)蛋白網(wǎng)絡(luò)的I型膠原；以及由納米大小的羥基磷灰石 晶體所組成的礦物相構(gòu)成的混雜材料。這種三維的大規(guī)模有機(jī)/礦物的結(jié)合賦予骨組織彈 性和硬度，使得其經(jīng)受住施加于其上的力。因此，骨是堅(jiān)硬的、致密的和非常強(qiáng)壯的。Weiner & Wagner (Ann. Rev. Mater, ki.沘，271-298，1998)提供了各個(gè)尺度下分 級(jí)結(jié)構(gòu)的描述，其可以分成下文所述并由附

圖1示例的七個(gè)級(jí)別-級(jí)別1(圖la)骨的兩個(gè)主要構(gòu)成基本組分，即羥基磷灰石小板和條紋膠原原纖 維構(gòu)成結(jié)構(gòu)的第一等級(jí)。在納米尺度內(nèi)，這是結(jié)構(gòu)的最低級(jí)別。特別地，磷灰石相的特征在 于存在特征晶面(plans inter r6ticulaires)，如(002)和(300)。在該結(jié)構(gòu)級(jí)別上，磷灰 石晶體不具有特定的取向。膠原原纖維的特征在于電子顯微鏡可見的周期性條紋，其來自 膠原I分子組裝，從而誘導(dǎo)67nm的周期位移；-級(jí)別2(圖lb)羥基磷灰石小板根據(jù)它們的c軸，沿條紋膠原原纖維主軸的共排 列(coalignement)構(gòu)成第二級(jí)別，即磷灰石的晶面(002)與原纖維的主軸垂直，并因此根 據(jù)膠原原纖維(條紋=67nm)的軸向周期(即根據(jù)條紋)取向。使用了術(shù)語礦化的膠原原 纖維(寬度100至300納米)。級(jí)別2也在納米尺度內(nèi)；-級(jí)別3(圖Ic)一些礦化的膠原原纖維在平行束中并排組裝，從而形成礦化的膠 原纖維(寬度1至3微米)。結(jié)構(gòu)級(jí)別3達(dá)到微米尺度；-級(jí)別4(圖Id)其是復(fù)雜的，因?yàn)榈V化的膠原原纖維或纖維可以在三維上有序 化。特別地，在該級(jí)別中，可以區(qū)分結(jié)構(gòu)域的共存，其中原纖維/纖維在優(yōu)選方向上在一大 段距離上排列成行和/或根據(jù)“膽留型”幾何結(jié)構(gòu)形成它們堆疊的拱形結(jié)構(gòu)特征。也可以 區(qū)分原纖維/纖維未有序化的結(jié)構(gòu)域(“各向同性”結(jié)構(gòu)域)。該尺度從微米到毫米變化；-級(jí)別5(圖Ie)密質(zhì)骨具有毫米大小的平行圓柱結(jié)構(gòu)排列，表示為“骨單位”。在 截面中，這些骨單位表現(xiàn)為由同心膠原薄片組成；-級(jí)別6(圖If):長(zhǎng)骨的富細(xì)胞中心部分稱為“松質(zhì)骨”。在這種骨中，骨片形成薄 且不規(guī)則行的大孔網(wǎng)絡(luò)。密質(zhì)骨/松質(zhì)骨組合構(gòu)成結(jié)構(gòu)級(jí)別6。該尺度大于一毫米；-級(jí)別7(圖Ig)最終級(jí)別很明顯是全骨?，F(xiàn)有技術(shù)提出了幾類合成材料(表示為“植入材料”)或天然材料(表示為“移植 物”)。植入材料通常為生物惰性的，即被有機(jī)體容易耐受；或生物相容的，即它們完美地整 合入宿主有機(jī)體。移植物為取自其用于本人的人(同體移植)或第三者(異源移植)的骨 組織，并且其通常為骨傳導(dǎo)的(ostSo-conducteur)，即其能夠引導(dǎo)骨再生長(zhǎng)。然而，能夠誘導(dǎo)骨重建的骨誘導(dǎo)性骨替代物構(gòu)成了理想的替代物。這樣的材料的 開發(fā)是復(fù)雜的。使用這樣的材料要求使用具有特殊晶相和化學(xué)性質(zhì)的組分以優(yōu)化其在人體 或動(dòng)物體中的完美整合，并且因而避免排斥。必須重建該材料的三維結(jié)構(gòu)以提供適，首先，機(jī)械性質(zhì)；以及其次，適合于宿主組織對(duì)所述替代物定植(colonisation)的多孔性。使有 機(jī)骨網(wǎng)絡(luò)(20%質(zhì)量比)有序化的方法及其與組織中礦物相(70%質(zhì)量比)的結(jié)合在體外 非常難再現(xiàn)。已經(jīng)進(jìn)行了許多研究以合成骨替代物，特別是涉及膠原礦化的研究。W. Traub et al. [Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1989，86，9822-9826]研究了火雞骨腱膠原的礦化，但獲得 的材料沒有表現(xiàn)出類似于骨的結(jié)構(gòu)。已經(jīng)進(jìn)行了使用體外純化膠原的其他測(cè)試，但在進(jìn)行 測(cè)試的強(qiáng)稀釋條件未能獲得具有在活骨組織中發(fā)現(xiàn)的骨密度和三維膠原結(jié)構(gòu)的材料[參 見 D. Lickorish et al. (J. Biomed. Mat. Res. 2004,68A, 19-27) ；S. Yunoki et al. (Mat. Lett.，2006，60，999-1002) ；D. A. Wahl et al. (Eur. Cell. Mat. 2006,11,43-56)] L. Addadi et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1987，84，2732-2736)描述了來自在 由(NH4) CO3粉末于環(huán)境溫度下熱分解所產(chǎn)生的氨氣氛下的CaCl2溶液的方解石CaCO3結(jié)晶。同樣已知的是通過升高pH從酸溶液沉淀膠原。R.L. Ehrman et al. (J. Nat. Cancer Inst. 1956,16,1375-1403)描述了使膠原在乙酸中的溶液與NH3蒸氣接觸的方法。其轉(zhuǎn)化 為含有細(xì)粒的凝膠。沒有描述所得材料的結(jié)構(gòu)。Μ. M. Giraud-Guille et al. (J. Mol. Biol. 1995，251，197—202)禾口 (J. Mol. Biol. 1992，224，861-873)描述了利用膠原的濃溶液而獲得的“液晶”結(jié)構(gòu)和通過從酸到堿 升高PH而獲得的溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變。G. Mosser,M. M. Giraud-Guille et al. (Matrix Biol. 2006,25,3-13)描述了這樣 的方法，其中將膠原的酸性溶液(5mg/mL)在玻璃微室中逐漸濃縮以獲得膠原分子的長(zhǎng)久 螺旋結(jié)構(gòu)以及濃度梯度。然后使溶液與氨蒸氣接觸，以形成膠原原纖維并實(shí)現(xiàn)液相中的穩(wěn) 定結(jié)構(gòu)。B. A.Harley et al. (Biomaterials 2006，27，866-874)描述了也含有糖胺聚糖的 膠原結(jié)構(gòu)基質(zhì)的生產(chǎn)。將膠原微原纖維與硫酸軟骨素在4°C下均勻混合。然后將溶液在模 具中離心分離，超速冷凍，冷凍干燥；然后于105°C下，在50mTorr的真空下交聯(lián)M小時(shí)。沒 有描述膠原的纖維狀性質(zhì)。C. Guo et al. (Biomaterials 2007，28，1105-1114)描述了磁性小珠在排列膠原 原纖維溶液中的用途。使維持于4°C下、在磷酸鹽緩沖液中制備的濃度為2. 5mg/ml的膠原 溶液與磁性小珠接觸。還在細(xì)胞的存在下制備了最終膠原濃度為1.2mg/ml的相同樣品。 在兩種情況下，在通過將溫度升高至37°C以誘導(dǎo)原纖維生成期間，將樣品置于小于IG的磁 場(chǎng)中。當(dāng)將細(xì)胞整合入基質(zhì)時(shí)還使用CO2氣氛?；|(zhì)是非常松散的，并且沒有提及膠原的 纖維性質(zhì)。M.J. Olsza et al. (Calcif. Tissue Int. 2003，72，583-591)描述了存在或不存 在聚(天冬氨酸)型聚合物的條件下的膠原海綿的鈣化作用。膠原海綿由獲得自牛腱的I 型膠原構(gòu)成。礦物為碳酸鈣而不是磷酸鈣，因此沒有獲得磷灰石相。沒有證明條紋纖維的 存在，并且膠原纖維是無取向的。J. H. Bradt et al. (Chem. Mater. 1999，11，2694-2701)描 述了在4°C下制備兩種溶液的方法，第一種為用HCl酸化并含有CaCl2的lmg/mL膠原溶液 (小牛真皮I型膠原)，第二種為含有磷酸根離子的緩沖溶液。然后將磷酸鹽溶液與膠原溶 液混合，使得可以實(shí)現(xiàn)6. 8的pH，并將整體混合物加熱到30°C。共沉淀得到含有磷酸鈣、羥 基磷灰石和磷酸八鈣的混合物相。另外，膠原纖維為分離的無取向纖維，并且不構(gòu)成致密基 質(zhì)。N. Gehrke, N. Nassif et al. (Chem. Mater. 2005，17，6514-6516)描述了在存在或不存在聚(天冬氨酸)型聚合物的條件下，用碳酸鈣將預(yù)先去礦化的珍珠母的有機(jī)網(wǎng)絡(luò)再礦化。目前沒有已知的合成方法使得可以獲得這樣的骨替代物，其再現(xiàn)在天然骨中所觀 察到的與磷灰石晶體礦物相結(jié)合的膠原的級(jí)別4的三維結(jié)構(gòu)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供合成材料及其制備方法，所述合成材料可以用作結(jié)構(gòu)非常接 近活骨(級(jí)別4)結(jié)構(gòu)的生物相容性骨替代物。本發(fā)明的合成材料包含有機(jī)相(I)和礦物相(II)。所述有機(jī)相(I)包含由膠原I三螺旋構(gòu)成的條紋膠原原纖維，以及它們未有序化 的各向同性結(jié)構(gòu)域，其中所述條紋的周期為約67nm，所述原纖維是根據(jù)聯(lián)合了排列成行的 結(jié)構(gòu)域和膽留型結(jié)構(gòu)域的3D幾何形狀在一大段距離上有序化的。所述礦物相(II)包含具有六方晶體結(jié)構(gòu)的磷灰石晶體，空間群6/m，所述晶體包 含至少鈣離子和至少磷酸根離子。在本發(fā)明的材料中，所述礦物相的磷灰石晶體的c軸與所述有機(jī)相的條紋膠原原 纖維的縱軸共排列。所述材料的膠原含量為至少75mg/cm3。在所述材料中，各種結(jié)構(gòu)域(膽甾型、線型和各向同性)的數(shù)量級(jí)為約50微米。根據(jù)一具體實(shí)施方案，礦物相由純羥基磷灰石晶體組成。對(duì)本申請(qǐng)的目的而言，術(shù) 語“純羥基磷灰石”旨在表示不含諸如透鈣磷石的其他結(jié)晶磷酸鹽相的羥基磷灰石。在本發(fā)明的一具體實(shí)施方案中，礦物相由化學(xué)計(jì)量的下式(I)的羥基磷灰石晶體 組成Ca10 (PO4)6(OH)2(I)根據(jù)本發(fā)明的一具體實(shí)施方案，式(I)的羥基磷灰石晶體的Ca/P原子比為1. 67。根據(jù)本發(fā)明的另一實(shí)施方案，礦物相包含磷灰石晶體，其還包含至少氫氧根離子， 其中磷酸根離子(B型)和/或氫氧根離子(A型)部分地由碳酸根離子代替。在這些羥基磷灰石中，晶體結(jié)構(gòu)的一個(gè)或多個(gè)位置可以不含離子。在這種情況下， 它們?yōu)榘Q為一個(gè)或多個(gè)離子間隙的非化學(xué)計(jì)量羥基磷灰石。在另一實(shí)施方案中，礦物相包含磷灰石晶體，其包含Ca2+離子、PO43-離子和0H—離 子，其中Ca2+、PO43-或0H—離子的至少一種部分地由其他離子代替。在能夠部分地代替Ca2+離子的離子中，可以提及Mg2+、Cu2+、Sr2+、Ba2+、Zn2\ Cd2+、 Pb2+、Na+、K+ 和 Eu3+離子。在能夠部分地代替P043_離子的離子中，可以提及C032_、Si043_、As043_、Mn043_、V043_、 CrO43-和 HPO42-離子。在能夠部分地代替0H—離子的離子中，可以提及C032—、F—、Cl—、Br—、Γ、S2—和02_離子。本發(fā)明的材料還可以含有少量的蛋白聚糖、糖胺聚糖和/或促進(jìn)礦化的有機(jī)分 子。術(shù)語“少量”意圖表示小于2%的比例。本發(fā)明材料的特征可以通過光學(xué)顯微鏡分析、掃描電子顯微鏡SEM分析、透射電 子顯微鏡TEM分析和X-射線衍射分析確定。
通過偏振光光學(xué)顯微鏡觀察到本發(fā)明材料的半薄部分顯示出雙折射的性質(zhì)。在理 想的情況下，在顯微平臺(tái)旋轉(zhuǎn)期間，對(duì)與這些條紋的運(yùn)動(dòng)有關(guān)的交替亮帶和暗帶的觀察表 明了螺旋結(jié)構(gòu)。通過SEM分析，本發(fā)明材料的樣品顯示出包埋于礦化層中的定向原纖維，并且無 約一毫米的單獨(dú)晶體聚集。對(duì)本發(fā)明材料所拍的小角X-射線散射照片顯示出膠原原纖維的各向異性信號(hào)和 D = 67nm的諧波周期。廣角X-射線散射照片顯示出磷灰石相的主峰。原纖維信號(hào)與礦物 信號(hào)之間存在的共排列表征了本發(fā)明的材料。更特別地在原纖維排列成行的區(qū)域中局部地 證實(shí)這一共排列。本發(fā)明的材料可以通過以下方法獲得制備作為有機(jī)相(I)的前體的膠原的初始 酸性水溶液，以及至少一種礦物相(II)的前體的水溶液；并且通過將PH升高到至少7來沉 淀該膠原。其特征在于-膠原在酸性水溶液中的濃度為至少75mg/ml，并且在所述pH升高時(shí)保持恒定；-礦物相前體包含至少一種鈣鹽和至少一種磷酸鹽，-礦物相(II)的沉淀通過使礦物相前體溶液與有機(jī)相(I)接觸來進(jìn)行，所述接觸 在所述有機(jī)相(I)沉淀之前或之后進(jìn)行。接觸的持續(xù)時(shí)間根據(jù)沉淀速度和最終材料中預(yù)想 的礦物填充物水平而設(shè)置。在所述方法的第一實(shí)施方案中，將有機(jī)相(I)的膠原在使其與礦物相(II)的前體 的中性溶液接觸前沉淀。在這種情況下，礦物相(II)的前體的溶液包含至少所述鈣鹽和至 少所述磷酸鹽。最終材料中礦物相的比例通過引入溶液的離子的量來調(diào)節(jié)。在該實(shí)施方案 中，膠原在使其與礦物相接觸前要求其纖維結(jié)構(gòu)。在所述方法的第二實(shí)施方案中，使有機(jī)相(I)的前體的酸性溶液與(II)的前體的 酸性溶液接觸。然后升高混合物的PH，這導(dǎo)致膠原與磷灰石的共沉淀。在該實(shí)施方案中，特 別重要的是保持膠原的初始濃度恒定。避免稀釋的第一種方法是在模具中含有有機(jī)相(I) 的前體的濃酸性溶液，該模具的形狀適合于期望的用途，并且封入滲析膜中。第二種方法是 將濃膠原溶液引入由滲析膜構(gòu)成的柔性包膜(erweloppe)中。然后將模具或所述包膜浸入 礦物相(II)的前體的溶液中。當(dāng)本發(fā)明的材料的礦物相II由純羥基磷灰石的晶體組成時(shí)，所述方法優(yōu)選在密 閉室中進(jìn)行，該密閉室中放置了 -至少一個(gè)第一容器，其含有至少一種磷酸鹽和至少一種鈣鹽的水溶液，其是礦物 相II的前體，其中將至少一個(gè)滲析袋浸入該溶液中，所述滲析袋含有作為有機(jī)相(I)的前 體的膠原的初始酸性水溶液，-至少一個(gè)第二容器，其含有氨水溶液或(NH4)2CO3粉末；應(yīng)當(dāng)理解_(礦物相I前體溶液的體積)/(密閉室內(nèi)部體積)比為約2X 10_3，-包含于第一容器中的礦物相I前體溶液的高度為約3cm至5cm，所述容器的直徑 為約2 cm至5 cm ；_(氨水溶液的體積)/(密閉室內(nèi)部體積)比為8X10_3，或者((NH4)20)3粉末的體 積)/(密閉室內(nèi)部體積)比為約6X10_3。
當(dāng)具備這些條件時(shí)，獲得了其中礦物相II由純磷灰石組成、不含任何其他類型磷 酸鈣相的材料。
權(quán)利要求
1.一種包含有機(jī)相(I)和礦物相(II)的合成材料，其特征在于-所述有機(jī)相(I)包含由膠原I三螺旋構(gòu)成的條紋膠原原纖維，以及它們未有序化的各 向同性結(jié)構(gòu)域，其中所述條紋的周期為67nm，所述原纖維是根據(jù)聯(lián)合了排列成行的結(jié)構(gòu)域 和膽留型結(jié)構(gòu)域的3D幾何形狀在一大段距離上有序化的；-所述礦物相(II)包含具有六方晶體結(jié)構(gòu)的磷灰石晶體，空間群6/m，所述晶體包含至 少鈣離子和至少磷酸根離子；-所述礦物相的磷灰石晶體的c軸與所述有機(jī)相的條紋膠原原纖維的縱軸共排列；-所述材料的膠原含量為至少75mg/cm3。
2.如權(quán)利要求1所述的材料，其特征在于所述礦物相由純羥基磷灰石晶體組成。
3.如權(quán)利要求1或2所述的材料，其特征在于所述礦物相由化學(xué)計(jì)量的下式(I)的羥 基磷灰石晶體組成Ca10(PO4)6(OH)2 (I)。
4.如權(quán)利要求3所述的材料，其特征在于式(I)的羥基磷灰石晶體的Ca/P原子比為 1. 67。
5.如權(quán)利要求1所述的材料，其特征在于所述礦物相包含磷灰石晶體，所述晶體還包 含至少氫氧根離子，其中磷酸根離子和/或氫氧根離子部分地由碳酸根離子代替。
6.如權(quán)利要求1所述的材料，其特征在于所述礦物相包含磷灰石晶體，所述晶體包含 Ca2+離子、PO43-離子和0H—離子，其中Ca2+、P043_或0H—離子的至少一種部分地由其他離子代 替，應(yīng)當(dāng)理解能夠部分地代替 Ca2+ 離子的離子選自 Mg2+、CU2+、Sr2+、Ba2+、ai2+、Cd2+、Pb2+、Na+、K+ 和 Eu3+ 離子；能夠部分地代替P043_離子的離子選自C032_、SiO43"俄、As043_、Μπ043_、V043_、CrO43"和 HPO42-離子；以及能夠部分地代替0H—離子的離子選自C032—、F—、Cl—、Br—、Γ、S2—和02_離子。
7.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的材料，其特征在于其還含有少于2%的量的蛋白聚 糖、糖胺聚糖和/或促進(jìn)礦化的有機(jī)分子。
8.一種制備如權(quán)利要求1所述的材料的方法，所述方法在于制備作為所述有機(jī)相(I) 的前體的膠原的初始酸性水溶液，以及至少一種所述礦物相(II)的前體的水溶液；并且通 過將PH升高到至少7來沉淀所述膠原，其特征在于-膠原在所述酸性水溶液中的濃度為至少75mg/ml，并且在所述pH升高時(shí)保持恒定，-所述礦物相前體包含至少一種鈣鹽和至少一種磷酸鹽，-所述礦物相(II)的沉淀通過使所述礦物相前體溶液與所述有機(jī)相(I)接觸來進(jìn)行， 所述接觸在所述有機(jī)相(I)沉淀之前或之后進(jìn)行。
9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于將所述有機(jī)相(I)的膠原在使其與所述礦物 相(II)的前體的中性溶液接觸前沉淀，所述中性溶液含有至少所述鈣鹽和至少所述磷酸鹽。
10.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于使所述有機(jī)相(I)的前體的酸性溶液與所述 礦物相(II)的前體的酸性溶液接觸，并升高所得混合物的PH，這導(dǎo)致所述膠原與所述磷灰 石的共沉淀。
11.如權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于在封入滲析膜中的模具中含有所述有機(jī)相 (I)的前體的濃酸性溶液，然后將整體浸入所述礦物相(II)的前體的溶液中。
12.如權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于將濃膠原溶液引入由滲析膜構(gòu)成的柔性包 膜中，然后將所述包膜浸入所述礦物相(II)的前體的溶液中。
13.如權(quán)利要求8所述的方法，其用于制備其中所述礦物相II由純羥基磷灰石晶體組 成并且如權(quán)利要求2所定義的材料，其特征在于所述方法在密閉室中進(jìn)行，所述密閉室中 放置了 -至少一個(gè)第一容器，其含有至少一種磷酸鹽和至少一種鈣鹽的水溶液，其是所述礦物 相II的前體，將至少一個(gè)滲析袋浸入其中，所述滲析袋含有作為所述有機(jī)相(I)的前體的 膠原的初始酸性水溶液，-至少一個(gè)第二容器，其含有氨水溶液或(NH4)2CO3粉末； 應(yīng)當(dāng)理解_(礦物相I前體溶液的體積)/(密閉室內(nèi)部體積)比為2X10_3， -包含于所述第一容器中的礦物相I前體溶液的高度為3cm至5cm，所述容器的直徑為 約 2 cm 至 5 cm ；_(氨水溶液的體積)/(密閉室內(nèi)部體積)比為8X10_3，或者((NH4)2CO3粉末的體積)/ (密閉室內(nèi)部體積)比為6X10_3。
14.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于所述膠原的初始酸性水溶液具有下列特征 -其膠原濃度為75mg/mL至1000mg/mL ；-在酸的存在下，其PH小于4。
15.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于所述礦物相(II)的前體的溶液具有下列特征-鈣前體的濃度小于溶度極限；-磷酸鹽前體的濃度小于溶度極限；-前體的量是這樣的Ca/P摩爾比為1. 5至1. 8。
16.如權(quán)利要求8所述的方法，其用于制備如權(quán)利要求6所述的材料，其特征在于所述 礦物相的前體的溶液還含有一種或多種鹽，所述鹽的陽離子用于至少部分地代替Ca2+ ；和/ 或含有一種或多種鹽，所述鹽的陰離子用于至少部分地代替PO43-和/或0H—。
17.如權(quán)利要求8所述的方法，其用于制備如權(quán)利要求7所述的材料，其特征在于所述 礦物相(II)的前體的溶液還含有蛋白聚糖、糖胺聚糖和/或促進(jìn)礦化的有機(jī)分子。
18.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于pH的升高借助于堿性氣氛進(jìn)行。
全文摘要
本發(fā)明涉及可以用作骨替代物的材料及其制備方法。所述材料包含有機(jī)相(I)，其包含由膠原I三螺旋構(gòu)成的條紋膠原原纖維，以及它們未有序化的各向同性結(jié)構(gòu)域，所述原纖維是根據(jù)聯(lián)合了排列成行的結(jié)構(gòu)域和膽甾型結(jié)構(gòu)域的3D幾何形狀在一大段距離上有序化的；以及礦物相(II)，其包含具有六方晶體結(jié)構(gòu)的磷灰石晶體，空間群6/m，所述晶體包含至少鈣離子和磷酸根離子；所述礦物相的磷灰石晶體的c軸與所述有機(jī)相的條紋膠原原纖維的縱軸共排列；并且所述材料的膠原含量為至少75mg/cm3。制備所述材料的方法包括制備所述有機(jī)相(I)的前體的膠原的初始酸性水溶液，以及至少一種所述礦物相(II)的前體的水溶液；并且通過將pH升高到至少7來沉淀所述膠原。根據(jù)該方法膠原在所述酸性水溶液中的濃度為至少75mg/ml，并且在所述pH升高時(shí)保持恒定；所述礦物相前體包含至少一種鈣鹽和至少一種磷酸鹽；所述礦物相(II)的沉淀通過使所述礦物相前體溶液與所述有機(jī)相(I)接觸來進(jìn)行；所述接觸在所述有機(jī)相(I)沉淀之前或之后進(jìn)行。
文檔編號(hào)A61L27/12GK102105179SQ200980125269
公開日2011年6月22日 申請(qǐng)日期2009年6月26日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月30日
發(fā)明者F·戈博, G·莫瑟, M·M·吉羅吉耶, N·納西夫 申請(qǐng)人:國(guó)立科學(xué)研究中心, 皮埃爾-瑪麗-居里大學(xué)(巴黎第六大學(xué)), 高等研究實(shí)踐學(xué)院