專利名稱：疫苗的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉 及改良的疫苗和免疫原性組合物和它們在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用。具體地，本發(fā) 明涉及包含水包油乳狀液佐劑的疫苗或免疫原性制劑和它們在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用，尤其是它們 在增強(qiáng)對不同抗原(包括肺炎鏈球菌抗原)的免疫應(yīng)答中的應(yīng)用，也涉及制備方法，其中所 述水包油乳狀液包含母育酚、可代謝油和乳化劑。
背景技術(shù)：
總是需要具有提高的免疫原性的新組合物或疫苗。作為一個策略，已經(jīng)將佐劑用 于試驗和提高對任意特定抗原產(chǎn)生的免疫應(yīng)答和/或減少宿主中的致反應(yīng)力/毒性。水包油乳狀液本身是本領(lǐng)域熟知的，且已經(jīng)被提議用作佐劑組合物(EP 399843 ； WO 95/17210)。W095/17210公開了包含2-10%角鯊烯、2-10% α生育酚和0. 3-3%吐溫80的水 包油乳狀液和它們單獨(dú)的或與QS21和/或3D-MPL組合的應(yīng)用。W099/12565公開了包含可代謝油、皂苷和固醇的水包油乳狀液組合物。所述水包 油乳狀液另外包含3D-MPL。W099/11241公開了包含可代謝油和皂苷的水包油乳狀液，其中所述油和皂苷以 1 1至200 1的比例存在。仍然需要改良的疫苗和免疫原性組合物，其提供合適的免疫應(yīng)答，且在宿主中的 致反應(yīng)力更低。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，可以使用包含更低量的水包油乳狀液的每種組分的疫苗或免疫 原性組合物，同時仍然維持對所述組合物內(nèi)的抗原或抗原性組分的相當(dāng)免疫應(yīng)答。它的優(yōu) 點是，維持對抗原的免疫原性水平，同時降低宿主受體內(nèi)的致反應(yīng)力。因此，在本發(fā)明的第一個方面，提供了包含肺炎鏈球菌抗原和佐劑組合物的免疫 原性組合物，所述佐劑組合物包含水包油乳狀液，其中所述水包油乳狀液每人劑量包含 0. 5-10mg可代謝油、0. 5-1 Img母育酚和0. 4_4mg乳化劑。在本發(fā)明的另一個方面，提供了包含肺炎鏈球菌抗原和佐劑組合物的疫苗組合 物，所述佐劑組合物包含水包油乳狀液，其中所述水包油乳狀液每人劑量包含0. 5-10mg可 代謝油、0. 5-1 Img母育酚和0. 4-4mg乳化劑。在本發(fā)明的另一個方面，提供了包含肺炎鏈球菌抗原和佐劑組合物的疫苗或免疫 原性組合物在生產(chǎn)用于治療、緩解或預(yù)防肺炎鏈球菌感染或疾病的免疫原性組合物中的應(yīng) 用，所述佐劑組合物包含水包油乳狀液，其中所述水包油乳狀液包含0. 5-10mg可代謝油、 0. 5-1 Img母育酚和0. 4-4mg乳化劑。在另一個方面，提供了上文定義的方法或應(yīng)用，用于保護(hù)免于病原體造成的感染 或疾病，所述病原體是免疫原性組合物中的抗原的來源病原體的變體。在另一個實施方案中，提供了上文定義的方法或應(yīng)用，用于保護(hù)免于病原體造成的感染或疾病，所述病原體包 含抗原，該抗原是免疫原性組合物中的抗原的變體。


圖1 臨床試驗在 不同時間點的抗-HA抗體的幾何平均滴度(GMT)(免疫原性的 ATP隊列)。圖2 臨床試驗在第0天和第21天時具有95%置信區(qū)間的HI抗體滴度的血清保 護(hù)率(SPR)(免疫原性的ATP隊列)。圖3 臨床試驗在第21天時具有95%置信區(qū)間的HI抗體滴度的血清轉(zhuǎn)化率 (SCR)(免疫原性的ATP隊列)。圖4 臨床試驗在第21天時具有95%置信區(qū)間的HI抗體滴度的血清轉(zhuǎn)化系數(shù) (SCF)(免疫原性的ATP隊列)。圖5 小鼠試驗用異亞型菌株(劑量范圍AS03)弓丨發(fā)的BALB/c小鼠中的血凝素 抑制實驗(GMT+/-IC95)。圖5A 抗-A/新喀里多尼亞/20/99HI滴度；圖5B 抗-A/巴拿馬 /2007/99HI 滴度·圖 5C 抗-B/ 山東 /7/97HI 滴度。圖6 小鼠試驗用異亞型菌株(劑量范圍AS03)引發(fā)的C57B1/6小鼠中的血凝素 抑制實驗(GMT+/-IC95)。圖7 小鼠試驗用異亞型菌株(劑量范圍AS03)弓丨發(fā)的C57B1/6小鼠的PBMC中 的細(xì)胞免疫應(yīng)答(CD4+T細(xì)胞)。圖8 小鼠試驗用異亞型菌株引發(fā)并用劑量范圍AS03佐劑化的低劑量抗原 (0. 5 μ g)免疫的C57B1/6小鼠的PBMC中的細(xì)胞免疫應(yīng)答(⑶4+T細(xì)胞)。圖9 小鼠試驗2種不同抗原劑量免疫后第14天的H5N1-特異性的血清Ig ELISA 滴度(A 和 B)和抗-H5NlIgGl (C 和 D)和 IgG2b (Ε 和 F)同種型應(yīng)答(GMT+/-IC95) 1. 5 μ g (A、C 和 E)或 0. 38 μ g (B、D 和 F)。圖10 小鼠試驗2種不同抗原劑量免疫后第21天的血凝抑制實驗 (GMT+/-IC95) 1. 5 μ g (A)或 0. 38 μ g (B)。圖11 小鼠試驗用劑量范圍AS03佐劑化的不同劑量的H5W疫苗(1. 5或 0. 38 μ g)免疫的首次用于實驗的C57B1/6小鼠中的細(xì)胞免疫應(yīng)答(⑶4+T細(xì)胞) (A)1.5yg HA Ag(抗原)或(B)O. 38 μ g HA Ag(抗原)。圖12:豬試驗。用同源菌株(劑量范圍AS03)引發(fā)的豬中的血凝素抑制實驗 (GMT+/-IC95)。圖13 小鼠試驗。通過ELISA在C57bl小鼠中測量的體液免疫應(yīng)答，所述小鼠用 在含有250、125或62. 5yg SB62的AS03佐劑中的各3 μ g dPly、PhtD和蛋白D免疫。圖14 小鼠試驗。通過ELISA在C57bl小鼠中測量的體液免疫應(yīng)答，所述小鼠用在 含有250、125或62. 5μ g SB62的AS03佐劑中的6、3或1. 5 μ gdPly、PhtD和蛋白D免疫。發(fā)明詳述發(fā)明人意指，在每種情況下，本文的術(shù)語“包含”和“包括”可任選地用術(shù)語
“由......組成”替換。本文中關(guān)于本發(fā)明的“疫苗組合物”的實施方案也適用于關(guān)于本發(fā)明的“免疫原性組合物”的實施方案，反之亦然。 在本發(fā)明的一個實施方案中，提供了包含抗原或抗原組合物和佐劑組合物的疫苗 或免疫原性組合物，所述佐劑組合物由水包油乳狀液組成，其中所述水包油乳狀液每人劑 量包含0. 5-10mg可代謝油、0. 5-1 Img母育酚和0. 4_4mg乳化劑。在本發(fā)明的另一個實施方案中，提供了包含抗原或抗原組合物和佐劑組合物的疫 苗或免疫原性組合物，所述佐劑組合物包含水包油乳狀液，其中所述水包油乳狀液每人劑 量包含0. 5-10mg可代謝油(諸如角鯊烯)、0· 5-1 Img母育酚(諸如α -生育酚和0. 4_4mg 乳化劑(諸如聚氧乙烯去水山梨糖醇單油酸酯)。水包油乳狀液組分本發(fā)明的佐劑組合物包含水包油乳狀液佐劑，優(yōu)選地所述乳狀液包含量為 0. 5-10mg的可代謝油、量為0. 5-1 Img的母育酚和量為0. 4_4mg的乳化劑，且具有油滴，其中 至少70% (按強(qiáng)度計算)的油滴具有小于1 μ m的直徑。為了使任意水包油組合物適合人施用，乳狀液系統(tǒng)的油相必須包含可代謝油。術(shù) 語可代謝油的意思在本領(lǐng)域是公知的。可代謝被定義為“能被代謝作用轉(zhuǎn)化的”(Dorland's Illustrated Medical Dictionary,W. B. Sanders Company,第 25 版(1974))。該油可以是 任何植物油、魚油、動物油或合成油，這些油對受體是無毒的，并且能被代謝作用轉(zhuǎn)化。堅 果、種子和谷物是植物油的常用來源。合成油也是本發(fā)明的一部分，并且可包括商品油如 NEOBEE 和其它。一種特別合適的可代謝油是角鯊烯。角鯊烯(2，6，10，15，19，23_六 甲基_2，6，10，14，18，22- 二十四碳六烯)是被發(fā)現(xiàn)在鯊魚肝油中大量存在而在橄欖油、 麥胚油、米糠油和酵母中較少量存在的不飽和油，并且是適用于本發(fā)明的一種特別優(yōu)選的 油。角鯊烯是可代謝油，這依據(jù)了角鯊烯是膽固醇生物合成過程中的中間體的事實(Merck index，第10版，條目號8619)。合適地，可代謝油存在于佐劑組合物中，其量為0. 5-10mg、優(yōu)選1_10、2-10、3_9、
4-8、5-7、或5-6mg(例如 2_3、5_6、或 9-IOmg)、尤其是 5. 35mg 或 2. 14mg。在本發(fā)明的另一 個實施方案中，可代謝油存在于疫苗(或免疫原性的)組合物中，其量為0. 5-10mg、優(yōu)選 1-10、2-10、3-9、4-8、5-7、或 5_6mg (例如 2_3、5_6、或 9-IOmg)、尤其是 5. 35mg 或 2. 14mg?？纱x油在疫苗或免疫原性組合物中的量可以表示為總組合物的百分比。合適 地，可代謝油存在于疫苗組合物中，其量為總組合物體積的0. 5% -2%、優(yōu)選0. 25-2或 0. 25-1. 75 或 0. 5-1. 65 或 0. 6-1. 5 或 0. 8-1. 4 或 1-1. 25% (ν/ν)油。在另一個具體實施方案中，可代謝油以疫苗(或免疫原性的)組合物總體積的約 1.25%的最終量存在。在另一個具體實施方案中，可代謝油以總組合物體積的0.25% (ν/ ν)的最終量存在。作為澄清，通過應(yīng)用下述轉(zhuǎn)化系數(shù)，可以將以ν/ν給出的濃度轉(zhuǎn)換成以w/v計算的 濃度5% (ν/ν)角鯊烯濃度相當(dāng)于4. 28% (w/v)角鯊烯濃度。水包油乳狀液包含母育酚。母育酚是本領(lǐng)域熟知的，且描述在EP0382271中。合 適地，母育酚是α-生育酚或其衍生物，諸如琥珀酸α-生育酚酯(也稱作維生素E琥珀酸 酯)。所述母育酚合適地存在于佐劑組合物中，其量為0. 5-1 lmg、優(yōu)選1-11、2-10、3-9、4-8、
5-7、5-6(例如10-11,5-6,2.5-3. 5或l_3mg)。在一個具體的實施方案中，母育酚以5. 94mg 或2.38mg的量存在。在另一個實施方案中，母育酚合適地存在于疫苗(或免疫原性的)組合物中，其量為 0. 5-llmg、優(yōu)選 1-11、2-10、3-9、4-8、5-7、5-6(例如 10-11、5_6、2. 5-3. 5 或
1-3mg)。在一個具體的實施方案中，母育酚以5.94mg或2. 38mg的量存在。 母育酚的量可以表示為總疫苗或免疫原性組合物體積的百分比。合適地，母育酚 存在于疫苗組合物中，其量為免疫原性組合物總體積的0. 25% -2% (ν/ν)，優(yōu)選地0. 25-2 包含總體積的 0. 25-2 或 0. 25-1. 75 或 0. 5-1. 65 或 0. 6-1. 5 或 0. 8-1. 4 或 1-1. 25% (ν/ν) 的母育酚。優(yōu)選地母育酚以疫苗(或免疫原性的)組合物總體積的0. 2%至2% (ν/ν)的量 存在，更優(yōu)選地量為0. 5ml劑量體積中的1. 25% (ν/ν)。在一個具體的實施方案中，母育酚以疫苗或免疫原性組合物總體積的約1. 25%的 最終量存在。在另一個具體實施方案中，母育酚以總體積的0.25% (ν/ν)、或0. 5ml劑量體 積中的1.25% (ν/ν)、或0. 7ml劑量體積中的0.9% (ν/ν)、或0. 5ml劑量中的0. 5% (ν/ν)、 或0. 7ml疫苗或免疫原劑量中的0. 35-0. 37%、優(yōu)選0. 36%的最終量存在。作為澄清，通過應(yīng)用下述轉(zhuǎn)化系數(shù)，可以將以ν/ν給出的濃度轉(zhuǎn)換成以w/v計算的 濃度5% (ν/ν) α -生育酚濃度相當(dāng)于4. 8% (w/v) α -生育酚濃度。水包油乳狀液另外包含乳化劑。乳化劑可以合適地是聚氧乙烯去水山梨糖醇單油 酸酯。在一個具體的實施方案中，乳化劑可以選自包含下列的組聚山梨醇酯 80或吐溫 80。所述乳化劑合適地存在于佐劑組合物中，其量為0. 1-5,0. 2-5,0. 3-4,0. 4-3或
2-3mg(例如0.4-1. 2,2-3或4_5mg)乳化劑。在一個具體的實施方案中，乳化劑以0. 97mg 或2. 425mg的量存在。另外，所述乳化劑合適地存在于疫苗或免疫原性組合物中，其量為0. 1-5,0. 2-5、 0. 3-4,0. 4-3或2-3mg(例如0. 4-1. 2、2_3或4_5mg)乳化劑。在一個具體的實施方案中，乳 化劑以0. 97mg或2. 425mg的量存在。乳化劑的量可以表示為總疫苗或免疫原性組合物體積的百分比。合適地，乳化劑 存在于疫苗(或免疫原性的)組合物中，其量為組合物總體積的0. 125-0. 8% (ν/ν)，優(yōu)選 總體積的 0. 08- 05 或 0. 1-0. 7 或 0. 2-0. 6 或 0. 25-0. 55 或 0. 3-0. 52 或 0. 4-0. 5% (ν/ν)。 在一個具體的實施方案中，乳化劑以總疫苗或免疫原性組合物體積的1%、0.5%或0.2% (ν/ν)的量存在。作為澄清，通過應(yīng)用下述轉(zhuǎn)化系數(shù)，可以將以ν/ν給出的濃度轉(zhuǎn)換成以w/v計算的 濃度1. 8% (ν/ν)聚山梨醇酯80濃度相當(dāng)于1. 91% (w/v)聚山梨醇酯80濃度。在一個具體的實施方案中，0. 5ml疫苗或免疫原劑量體積含有0. 45% (ν/ν)吐溫 80，0.7ml劑量體積含有0.315% (ν/ν)吐溫80。在另一個具體的實施方案中，0. 5ml劑量 含有0. 18% (ν/ν)乳化劑，0. 7ml疫苗或免疫原性組合物劑量含有0. 126% (ν/ν)乳化劑。術(shù)語“人劑量”是指其體積適合人用的劑量。通常，這是在0. 25至1. 5ml之間。在 一個實施方案中，人劑量是0. 5ml。在另一個實施方案中，人劑量高于0. 5ml，例如0. 6,0. 7、 0.8、0.9或lml。在另一個實施方案中，人劑量是在Iml至1.5ml之間。在另一個實施方 案中，具體地，當(dāng)免疫原性組合物用于兒科人群時，人劑量可以小于0. 5ml，諸如在0. 25至 0. 5ml之間。本發(fā)明的特征在于，免疫原性組合物內(nèi)的佐劑的每種或所有單個組分的水平比 以前認(rèn)為有用的水平更低，且典型地是如上所述。特別合適的組合物包含下述量的下述佐劑組分，它們是在0. 5ml的人劑量終體積中表 權(quán)利要求
1.包含未綴合的肺炎鏈球菌蛋白和佐劑組合物的免疫原性組合物，所述佐劑組合物包 含水包油乳狀液，其中所述水包油乳狀液每人劑量包含0. 5-10mg可代謝油、0. 5-1 Img母育 酚和0. l-4mg乳化劑。
2.包含未綴合的肺炎鏈球菌蛋白和佐劑組合物的免疫原性組合物，所述佐劑組合物由 水包油乳狀液組成，其中所述水包油乳狀液每人劑量包含0. 5-10mg可代謝油、0. 5-1 Img母 育酚和0. l-4mg乳化劑。
3.包含未綴合的肺炎鏈球菌蛋白和佐劑組合物的免疫原性組合物，所述佐劑組合物包 含含一種或更多種其它免疫刺激劑的水包油乳狀液，其中所述水包油乳狀液每人劑量包含 0. 5-10mg可代謝油、0. 5-1 Img母育酚和0. l-4mg乳化劑。
4.包含未綴合的肺炎鏈球菌蛋白和佐劑組合物的疫苗組合物，所述佐劑組合物包含水 包油乳狀液，其中所述水包油乳狀液每人劑量包含0. 5-10mg可代謝油、0. 5-1 Img母育酚和 0. l-4mg乳化劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4的免疫原性組合物，其中所述水包油乳狀液每人劑量包含1-10、 2-10、3-9、4-8. 5-7 或 5_6mg (例如 2-3,5-6 或 9-IOmg)可代謝油。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5的免疫原性組合物，其中所述水包油乳狀液每人劑量包含 0. 5-11、1-11、2-10、3-9、4-8、5-7、5-6(例如 10-11、5_6、2· 5-3. 5 或 l_3mg)母育酚。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6的免疫原性組合物，其中所述水包油乳狀液每人劑量包含0.1-5、 0. 2-5,0. 3-4,0. 4-3 或 2_;3mg(例如 0. 4-1. 2,2-3 或 4_5mg)乳化劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7的免疫原性組合物，其中所述可代謝油的量是每人劑量5.35mg。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8的免疫原性組合物，其中所述可代謝油的量是每人劑量2.14mgo
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9的免疫原性組合物，其中所述母育酚的量是每人劑量5.94mgo
11.根據(jù)權(quán)利要求1-10的免疫原性組合物，其中所述母育酚的量是每人劑量2.38mg。
12.根據(jù)權(quán)利要求1-11的免疫原性組合物，其中所述乳化劑的量是每人劑量2.425mg。
13.根據(jù)權(quán)利要求1-12的免疫原性組合物，其中所述乳化劑的量是每人劑量0.97mg。
14.根據(jù)權(quán)利要求1-13的免疫原性組合物，其中所述可代謝油是角鯊烯。
15.權(quán)利要求1-14中任一項的免疫原性組合物，其中所述母育酚是α-生育酚。
16.權(quán)利要求1-15中任一項的免疫原性組合物，其中所述乳化劑是聚氧乙烯去水山梨 糖醇單油酸酯。
17.權(quán)利要求16的免疫原性組合物，其中所述聚氧乙烯去水山梨糖醇單油酸酯選自包 含下列的組聚山梨醇酯 80或吐溫 80。
18.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的免疫原性組合物，其中所述疫苗組合物體積是在 0.4至1.5ml之間。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的免疫原性組合物，其中所述劑量體積是0.5ml。
20.根據(jù)權(quán)利要求18的免疫原性組合物，其中所述劑量體積是0.7ml。
21.根據(jù)權(quán)利要求18的免疫原性組合物，其中所述劑量體積是1.Oml0
22.權(quán)利要求1-21中任一項的免疫原性組合物，其中所述未綴合的肺炎鏈球菌蛋白 選自PhtA、PhtD, PhtB, PhtE、肺炎鏈球菌溶血素、LytB, LytC, LytA, Spl25、SPlOl、Spl28、 Spl30、Spl33 或在 US6699703 中公開的蛋白，包括由 US6699703 的 SEQ ID NO :5225、5200、 3166、4360、5137、4263、3166、5226、3716、4360、5243、3964、5179、3850、4263、5137、5226、.5325、3850、5179或5325代表或編碼的肺炎鏈球菌蛋白，或其免疫功能等效物。
23.權(quán)利要求22的免疫原性組合物，其包含2種或更多種未綴合的蛋白。
24.權(quán)利要求23的免疫原性組合物，其包含未綴合的肺炎鏈球菌WitD和未綴合的肺炎 鏈球菌肺炎鏈球菌溶血素。
25.治療或預(yù)防肺炎鏈球菌疾病的方法，其包含，給患有或易感肺炎鏈球菌感染或疾病 的患者施用根據(jù)權(quán)利要求1- 中任一項的免疫原性組合物。
26.用于預(yù)防性治療或治療肺炎鏈球菌感染或疾病的根據(jù)權(quán)利要求I-M中任一項的 免疫原性組合物。
27.根據(jù)權(quán)利要求I-M中任一項的免疫原性組合物在生產(chǎn)用于預(yù)防性治療或治療肺 炎鏈球菌感染或疾病的藥劑中的應(yīng)用。
28.權(quán)利要求27的應(yīng)用，其中所述佐劑組合物另外包含一種或更多種免疫刺激劑。
全文摘要
本發(fā)明提供了包含肺炎鏈球菌抗原和佐劑組合物的免疫原性組合物，所述佐劑組合物包含水包油乳狀液，其中所述水包油乳狀液每人劑量包含0.5-10mg可代謝油、0.5-11mg母育酚和0.1-4mg乳化劑。
文檔編號A61K39/145GK102099052SQ200980122687
公開日2011年6月15日 申請日期2009年4月16日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月16日
發(fā)明者E·J·哈農(nóng), W·R·小巴羅 申請人:葛蘭素史密絲克萊恩生物有限公司