專利名稱：用于藥物投送的組合物和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
總的來(lái)說(shuō)，本公開涉及包含涂層粒子的組合物，以及制造和使用這樣的組合物用 于靶向藥物投送的方法。相關(guān)技術(shù)簡(jiǎn)述在本文中合稱為“粒子”的納粒(包括納球)和微粒(包括微球)，是直徑從約Inm 到約10，OOOnm(10微米)的固體或半固體粒子。這樣的粒子可以從各種不同的材料形成， 所述材料包括蛋白質(zhì)、合成聚合物、多糖、核酸、小分子及其組合，并且已被用于許多不同應(yīng) 用中，主要是分離、診斷和藥物投送。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，包含這種粒子的組合物可用于藥物投送。例如，美國(guó)專利申請(qǐng)公開號(hào) No. 2006/0073199公開了包含活性劑的粒子可以配制成水性懸液，并通過(guò)在粒子上或周圍 提供表面活性劑涂層而對(duì)聚集和粒子生長(zhǎng)穩(wěn)定。對(duì)于開發(fā)包含粒子的組合物以及制造和使用它、特別是在目標(biāo)藥物的投送中使用 它的方法，存在著持續(xù)的需求。發(fā)明簡(jiǎn)述本發(fā)明的一個(gè)方面涉及表面改性的粒子，所述粒子包含粒子核心和與粒子核心結(jié) 合的涂層。粒子核心包含活性劑，例如治療劑或診斷劑(例如小的有機(jī)分子或生物大分 子)。涂層包含調(diào)理素，例如具有IgG同種型的抗體或例如C3b和C5的補(bǔ)體蛋白。也可以 使用其他已知起到調(diào)理素作用的蛋白。本發(fā)明的表面改性粒子一般來(lái)說(shuō)具有從約Inm到約 10, OOOnm的平均粒度。本發(fā)明的另一方面涉及增加活性劑的細(xì)胞攝取的方法。所述方法包含將細(xì)胞與表 面改性粒子在足以增加表面改性粒子的細(xì)胞攝取的條件下相接觸。粒子包含粒子核心和與 粒子核心結(jié)合的涂層，其中粒子核心包含活性劑，涂層包含調(diào)理素(例如具有IgG同種型的 抗體或例如C3b和C5的補(bǔ)體蛋白)，并且表面改性粒子具有從約Inm到約2，OOOnm的平均粒度。本發(fā)明的另一方面涉及用于治療患有炎性疾病或紊亂的對(duì)象的方法，所述方法包 括向所述對(duì)象給藥大量表面改性粒子，所述表面改性粒子包含粒子核心和與粒子核心結(jié)合 的涂層，其中粒子核心包含活性劑(例如抗炎劑)，涂層包含調(diào)理素(例如具有IgG同種型 的抗體或例如C3b和C5的補(bǔ)體蛋白)，表面改性粒子具有從約Inm到約2，OOOnm的平均粒 度，并且所述給藥有效緩解、治療和/或預(yù)防與所述炎性疾病或紊亂相關(guān)的癥狀或病狀。本發(fā)明的另一方面涉及用于治療患有增殖性疾病或紊亂的對(duì)象的方法，所述方法 包括向所述對(duì)象給藥大量表面改性粒子，所述表面改性粒子包含粒子核心和與粒子核心結(jié)合的涂層，其中粒子核心包含活性劑(例如抗增殖藥劑例如抗腫瘤劑)，涂層包含調(diào)理素 (例如具有IgG同種型的抗體或例如C3b和C5的補(bǔ)體蛋白)，表面改性粒子具有從約Inm 到約2，OOOnm的平均粒度，并且所述給藥有效緩解、治療和/或預(yù)防與所述增殖性疾病或紊 亂相關(guān)的癥狀或病狀。本發(fā)明的另一方面涉及用于治療患有感染性疾病或紊亂的對(duì)象的方法，所述方法 包括向所述對(duì)象給藥大量表面改性粒子，所述表面改性粒子包含粒子核心和與粒子核心結(jié) 合的涂層，其中粒子核心包含活性劑(例如抗感染藥劑)，涂層包含調(diào)理素(例如具有IgG 同種型的抗體或例如C3b和C5的補(bǔ)體蛋白)，表面改性粒子具有從約Inm到約2，OOOnm的 平均粒度，并且所述給藥有效緩解、治療和/或預(yù)防了與所述感染性疾病或紊亂相關(guān)的癥 狀或病狀。另一方面，本發(fā)明涉及用于治療患有神經(jīng)變性疾病或紊亂的對(duì)象的方法，所述方 法包括向所述對(duì)象給藥大量表面改性粒子，所述表面改性粒子包含粒子核心和與粒子核心 結(jié)合的涂層，其中粒子核心包含活性劑(例如抗神經(jīng)變性藥劑)，涂層包含調(diào)理素(例如 具有IgG同種型的抗體或例如C3b和C5的補(bǔ)體蛋白)，表面改性粒子具有從約Inm到約 2，OOOnm的平均粒度，并且所述給藥有效緩解、治療和/或預(yù)防與所述神經(jīng)變性疾病或紊亂 相關(guān)的癥狀或病狀。附圖簡(jiǎn)述

圖1顯示了各種不同的超順磁性氧化鐵(SPIO)納粒(NP)從S印harose 4B-CL 柱上的洗脫圖。顯示的是將IgG與氧化的SPIO溫育后(實(shí)心圓圈)IgG結(jié)合的SPIO NP(IgG-SPIO)；與未氧化的SPIO溫育的IgG (實(shí)心正方形)；以及通過(guò)添加過(guò)量胺基而阻斷 的氧化的SPIO(空心圓圈)。圖2顯示了結(jié)合后當(dāng)在4°C下儲(chǔ)存不同時(shí)間時(shí)IgG-SPIO的尺寸(單位為納米)和 多分散指數(shù)測(cè)量值。圖3顯示了通過(guò)菲洛嗪比色測(cè)定法評(píng)估的各種不同時(shí)間長(zhǎng)度后單核細(xì)胞攝取 SPIO和 IgG-SPIOo圖4顯示了通過(guò)MRI測(cè)量弛豫(R2)所評(píng)估的各種不同時(shí)間長(zhǎng)度后單核細(xì)胞攝取 SPIO和 IgG-SPIOo圖5提供的圖顯示了各種不同條件下單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞所攝取的SPIO和 IgG-SPIO0 (A)提供了單核細(xì)胞攝取與IOOkDa葡聚糖結(jié)合的不同尺寸的SPIO粒子(62nm、 122nm、266nm和394nm)和與IOkDa葡聚糖結(jié)合的130_170nm的SPIO粒子的圖。(B)提供 了單核細(xì)胞攝取使用具有各種不同濃度IgG的溶液制備的IgG-SPIO粒子的圖。(C)提供了 單核細(xì)胞攝取與游離IgG溫育的天然SPIO的圖。(D)提供了在4°C和37°C下單核細(xì)胞攝取 IgG-SPIO粒子的圖。(E)提供了單核細(xì)胞和單核細(xì)胞衍生的巨噬細(xì)胞(MDM)攝取IgG-SPIO 粒子的圖。(F)提供了單核細(xì)胞攝取與過(guò)量的游離IgG共溫育的IgG-SPIO粒子的圖。(G) 提供了單核細(xì)胞攝取與人類血清白蛋白(HSA)結(jié)合的SPIO粒子的圖。(H)提供的圖顯示了 天然的、氧化的、IgG結(jié)合的和HSA結(jié)合的SPIO粒子的粒子表面電荷(ζ電位)和粒徑。圖6提供的圖顯示了使用CPMG相循環(huán)T2作圖MRI對(duì)體內(nèi)SPIO和IgG-SPIO粒子 的定量。(A)是顯示了將12. 5μ g SPIO或IgG-SPIO注射到小鼠尾靜脈中(η = 6)之后脾 臟中弛豫率(R2 = 1/Τ2)變化的圖。(B)是顯示了將62. 5μ g SPIO或IgG-SPIO注射到小鼠尾靜脈中(η = 5)之后脾臟中弛豫率(R2 = 1/Τ2)變化的圖。(C)是顯示了將12. 5μ g SPIO 或IgG-SPIO注射到小鼠尾靜脈中(η = 6)之后肝臟中弛豫率(R2 = 1/Τ2)變化的圖。(D) 是顯示了將62. 5μ g SPIO或IgG-SPIO注射到小鼠尾靜脈中(η = 6)之后肝臟中弛豫率(R2 =1/τ2)變化的圖。(E)是顯示了將12.5yg SPIO或IgG-SPIO注射到小鼠尾靜脈中(η = 6)之后腎臟中弛豫率(R2 = 1/Τ2)變化的圖。(F)是顯示了將62.5yg SPIO或IgG-SPIO 注射到小鼠尾靜脈中(η = 5)之后腎臟中弛豫率(R2 = 1/Τ2)變化的圖。圖7是顯示了各種不同的IgG與紫杉醇比率下IgG涂層的紫杉醇粒子的ζ電位 的圖。圖8是顯示了各種不同的IgG與利托那韋(ritonavir)比率下IgG涂層的利托那 韋粒子的ζ電位的圖。圖9是顯示了未涂層的用俄勒R綠標(biāo)記的紫杉醇粒子(未涂層)、IgG涂層的用俄 勒岡綠標(biāo)記的紫杉醇粒子(IgG)和魚精蛋白涂層的用俄勒R綠標(biāo)記的紫杉醇粒子(魚精蛋 白)的攝取的圖。圖10是顯示了未涂層的紫杉醇粒子(未涂層)、IgG涂層的用俄勒R綠標(biāo)記的紫 杉醇粒子(IgG)和魚精蛋白涂層的用俄勒R綠標(biāo)記的紫杉醇粒子(魚精蛋白)的攝取的 圖。圖11提供的圖顯示了未涂層的用俄勒R綠標(biāo)記的紫杉醇粒子(未涂層)和IgG 涂層的用俄勒R綠標(biāo)記的紫杉醇粒子(IgG)的攝取。詳細(xì)描述本發(fā)明允許許多不同形式的實(shí)施方案。本文中公開的優(yōu)選實(shí)施方案應(yīng)該被當(dāng)作 是對(duì)本發(fā)明的原理的示例，因此不打算將要求保護(hù)本發(fā)明的廣度范圍限于所顯示的實(shí)施方案。本發(fā)明的一個(gè)方面提供了表面改性粒子，所述粒子包含粒子核心和與粒子核心結(jié) 合的涂層。粒子核心包含活性劑，涂層包含調(diào)理素(例如具有IgG同種型的抗體或例如C3b 和C5的補(bǔ)體蛋白)，并且表面改性粒子具有從約Inm到約2，OOOnm的平均粒度。在某些 實(shí)施方案中，具有包含補(bǔ)體蛋白的涂層的粒子可以與能夠減弱組胺釋放效應(yīng)的物質(zhì)組合使 用，所述組胺釋放可以被活化的補(bǔ)體蛋白誘導(dǎo)。本發(fā)明的另一方面提供了通過(guò)將細(xì)胞吞噬性細(xì)胞或非細(xì)胞吞噬性細(xì)胞暴露于包 含粒子核心和與粒子核心結(jié)合的涂層的表面改性粒子，增加這些細(xì)胞對(duì)活性劑的攝取的方 法。粒子核心包含活性劑，涂層包含調(diào)理素(例如具有IgG同種型的抗體或例如C3b和C5 的補(bǔ)體蛋白)，并且表面改性粒子具有從約Inm到約2，OOOnm的平均粒度。同與不具有包含 調(diào)理素的涂層的粒子相接觸的細(xì)胞相比，觀察到了細(xì)胞對(duì)活性劑的增加的攝取。另一方面，本發(fā)明還提供了通過(guò)細(xì)胞運(yùn)輸將表面改性粒子投送到哺乳動(dòng)物對(duì)象的 靶組織的方法。本文中使用的“靶組織”或“組織靶”是指待治療哺乳動(dòng)物的特定組織。這 樣的靶組織的實(shí)例包括但不限于腦和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的其他部分、淋巴系統(tǒng)、肝臟以及任何 感染、炎癥或腫瘤的位點(diǎn)。例如，一方面，本發(fā)明涉及用于治療患有炎性疾病或紊亂的對(duì)象的方法和組合物， 包括向所述對(duì)象給藥大量表面改性粒子，所述表面改性粒子包含粒子核心和與粒子核心結(jié) 合的涂層，其中粒子核心包含活性劑，涂層包含調(diào)理素(例如具有IgG同種型的抗體或例如C3b和C5的補(bǔ)體蛋白)，表面改性粒子具有從約Inm到約2，OOOnm的平均粒度，并且所述給 藥有效緩解、治療和/或預(yù)防與所述炎性疾病或紊亂相關(guān)的癥狀或病狀。一種情況下，活性 劑是抗炎劑。另一方面，本發(fā)明涉及用于治療患有神經(jīng)變性疾病或紊亂的對(duì)象的方法和組合 物，包括向所述對(duì)象給藥大量表面改性粒子，所述表面改性粒子包含粒子核心和與粒子核 心結(jié)合的涂層，其中粒子核心包含活性劑，涂層包含調(diào)理素(例如具有IgG同種型的抗體或 例如C3b和C5的補(bǔ)體蛋白)，表面改性粒子具有從約Inm到約2，OOOnm的平均粒度，并且所 述給藥有效緩解、治療和/或預(yù)防了與所述神經(jīng)變性疾病或紊亂相關(guān)的癥狀或病狀。一種 情況下，活性劑是抗神經(jīng)變性藥劑。另一方面，本發(fā)明涉及用于治療患有增殖性疾病或紊亂的對(duì)象的方法和組合物， 包括向所述對(duì)象給藥大量表面改性粒子，所述表面改性粒子包含粒子核心和與粒子核心結(jié) 合的涂層，其中粒子核心包含活性劑，涂層包含調(diào)理素(例如具有IgG同種型的抗體或例如 C3b和C5的補(bǔ)體蛋白)，表面改性粒子具有從約Inm到約2，OOOnm的平均粒度，并且所述給 藥有效緩解、治療和/或預(yù)防與所述增殖性疾病或紊亂相關(guān)的癥狀或病狀。在一種情況下， 治療劑是抗增殖藥劑例如抗腫瘤劑。另一方面，本發(fā)明涉及用于治療患有感染性疾病或紊亂的對(duì)象的方法和組合物， 包括向所述對(duì)象給藥大量表面改性粒子，所述表面改性粒子包含粒子核心和與粒子核心結(jié) 合的涂層，其中粒子核心包含活性劑，涂層包含調(diào)理素(例如具有IgG同種型的抗體或例如 C3b和C5的補(bǔ)體蛋白)，表面改性粒子具有從約Inm到約2，OOOnm的平均粒度，并且所述給 藥有效緩解、治療和/或預(yù)防與所述感染性疾病或紊亂相關(guān)的癥狀或病狀。一種情況下，活 性劑是抗感染藥劑，例如抗真菌劑、抗病毒劑、抗細(xì)菌劑或抗寄生蟲劑。因此，本文公開的給藥方法涉及給藥治療有效量的所述表面改性粒子。本文中使 用的術(shù)語(yǔ)“治療有效量”，是指足以緩解、改善、清除、治療和/或預(yù)防與考慮按照本文公開 的治療方法治療的疾病或紊亂相關(guān)的癥狀或病狀的表面涂層粒子的量。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“調(diào)理素”是指與粒子或細(xì)胞結(jié)合的蛋白或肽類，由此增加所述 粒子或細(xì)胞對(duì)吞噬細(xì)胞的易感性。當(dāng)在本文中使用時(shí)，已知調(diào)理素的具有與相應(yīng)的全長(zhǎng)調(diào) 理素可比的生物活性的片段，也被當(dāng)作調(diào)理素。例如，IgG的片段典型情況下包括足以與吞 噬細(xì)胞結(jié)合的片段。這樣的片段可以進(jìn)一步包括足夠的疏水部分，以與本文描述的疏水粒 子表面非共價(jià)結(jié)合。適合的IgG片段包括例如IgG-Fab片段和IgG-Fc片段。類似地，在本 文中使用時(shí)，調(diào)理素模擬物也被當(dāng)作調(diào)理素。本文中使用的“調(diào)理素模擬物”是指具有與調(diào) 理素可比的生物活性或模擬調(diào)理素活性的化合物(包括肽類)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易 地根據(jù)調(diào)理素的已知生物活性確定組成部分是否是調(diào)理素模擬物。下面對(duì)表面改性粒子的描述典型地適用于本文公開的所有實(shí)施方案。表面改性粒 子的活性劑可以是水溶性不良的或水溶性的?；钚詣┛梢允侵委焺┗蛟\斷劑。用于本文公 開的組合物和方法的活性劑表現(xiàn)出通常與這些活性劑有關(guān)的的藥物活性，即使活性劑被細(xì) 胞吞噬性或非細(xì)胞吞噬性細(xì)胞攝入并隨后投送?；钚詣┛梢赃x自各種不同的已知藥物化合物，例如但不限于鎮(zhèn)痛劑，麻醉劑，興 奮劑，腎上腺素能劑，腎上腺素能阻斷劑，抗腎上腺素劑，腎上腺類皮質(zhì)激素，擬腎上腺素 劑，抗膽堿能劑，抗膽堿酯酶藥物，抗驚厥藥，烷化劑，生物堿類，變構(gòu)抑制劑，促蛋白合成甾類，減食欲藥，解酸劑，止瀉劑，解毒劑，抗葉酸劑，退燒藥，抗風(fēng)濕藥劑，精神治療劑，神經(jīng)阻 斷劑，抗炎劑，驅(qū)腸蟲劑，抗凝劑，抗抑郁藥，抗癲癇劑，抗感染藥劑(例如抗真菌劑、抗病毒 劑例如抗反轉(zhuǎn)錄病毒劑和抗生素)，抗組胺劑，抗毒蕈堿藥劑，抗分枝桿菌藥劑，抗腫瘤劑， 抗原生動(dòng)物劑，抗焦慮鎮(zhèn)定劑，β “腎上腺素能受體阻斷劑，皮質(zhì)類固醇，止咳劑，多巴胺能 藥，止血?jiǎng)?，血液藥劑，安眠藥，免疫藥劑，蕈毒堿藥物，擬副交感神經(jīng)劑，前列腺素，放射藥 物，鎮(zhèn)靜劑，刺激劑，擬交感神經(jīng)劑，維生素，黃嘌呤，生長(zhǎng)因子，激素和抗朊病毒劑。抗腫瘤劑的實(shí)例包括但不限于紫杉醇、紫杉醇衍生的化合物、生物堿類、抗代謝 物、酶抑制劑、烷化劑及其組合?；钚詣┮部梢允堑鞍酌敢种苿?，例如HIV蛋白酶抑制劑。蛋白酶抑制劑的實(shí)例包 括但不限于茚地那韋、利托那韋、沙奎那韋、奈非那韋及其組合?；钚詣┛梢允呛塑辗崔D(zhuǎn)錄酶抑制劑。核苷反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的實(shí)例包括但不限于疊 氮胸苷、去羥肌苷、司他夫定、扎西他濱、拉米夫定及其組合?；钚詣┛梢允欠呛塑辗崔D(zhuǎn)錄酶抑制劑。非核苷反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的實(shí)例包括但不限 于依法韋侖、奈韋拉平、德拉維拉丁及其組合?？寡讋┑膶?shí)例包括但不限于非留類抗炎劑、非選擇性環(huán)加氧酶(COX)抑制劑、 C0X-1抑制劑、C0X-2抑制劑、脂氧合酶抑制劑、皮質(zhì)類固醇、抗氧化劑、腫瘤壞死因子(TNF) 抑制劑及其組合。C0X-2抑制劑的實(shí)例包括但不限于塞來(lái)昔布、羅非昔布、伐地考昔、帕瑞昔 布、羅美昔布、依他昔布及其組合。診斷劑包括χ-射線顯影劑和造影劑。χ-射線顯影劑的實(shí)例包括WIN_8883(3， 5-二乙酰胺基-2，4，6_三碘苯甲酸乙酯)，也被稱為泛影酸(diatrazoic acid)乙基酯 (EEDA) ；WIN 67722，即(6-乙氧基-6-氧代己基-3，5-雙(乙酰胺基)_2，4，6-三碘苯甲 酸；2-(3，5_雙(乙酰胺基)-2，4，6_三碘-苯甲酰氧基)丁酸乙酯(WIN 16318) ；ethyl diatrizoxyacetate (WIN12901) ；2_(3，5_ 雙(乙酰胺基)_2，4，6_ 三碘苯甲酰氧基)丙酸 乙酯(WIN16923) ；N-乙基_2-(3，5_雙(乙酰胺基)_2，4，6-三碘苯甲酰氧基乙酰胺(WIN 65312)；異丙基2-(3，5-雙(乙酰胺基)_2，4，6-三碘苯甲酰氧基)乙酰胺(WIN 12855)； 2-(3，5-雙(乙酰胺基)-2，4，6-三碘苯甲酰氧基)丙二酸二乙酯(WIN 67721) ；2-(3，5-雙 (乙酰胺基)_2，4，6-三碘苯甲酰氧基)苯乙酸乙酯(WIN 67585)；丙二酸，[[3，5-雙(乙 酰氨基)-2，4，5-三碘苯甲?；鵠氧基]雙(1-甲基)酯(WIN 68165)和苯甲酸，3，5-雙 (乙酰氨基)-2，4，6-三碘-4-(乙基-3-乙氧基-2-丁烯酸)酯(WIN 68209)。造影劑包 括預(yù)計(jì)在生理?xiàng)l件下分解相對(duì)快速、從而使任何與粒子相關(guān)炎性反應(yīng)最小化的造影劑。分 解可以源自于酶水解、羧酸在生理PH下的增溶作用或其他機(jī)制。因此，包括了溶解性不好 的碘代羧酸例如碘肥胺(iodipamide)、泛影酸和甲基泛影酸，以及不耐水解的碘代物質(zhì)例 如 WIN67721、WIN 12901、WIN 68165 和 WIN 68209。其他造影劑包括但不限于磁共振成像助劑的顆粒制備物例如釓螯合劑，或其他順 磁性造影劑。這樣的化合物的實(shí)例是釓噴酸葡胺(MAGNEVIST )和釓特醇(PR0HANCE )。治療劑和診斷劑類型和每類中物質(zhì)列舉的描述，可以在Martindale的《藥學(xué)大 ^)) (The Extra Pharmacopoeia) . 31 片反(The PharmaceuticalPress, London, 1996)中胃 現(xiàn)，該書在此引為參考并作為本文的一部分。列出的治療劑和診斷劑是可商購(gòu)的和/或可 以通過(guò)已知技術(shù)制備。
在具體實(shí)施方案中，活性劑是水溶性不良的化合物?！八苄圆涣肌钡暮x是化合 物在水中的溶解度低于約10mg/mL，優(yōu)選低于約lmg/mL。這些水溶性不良的化合物特別適 合于水性懸浮制備物，因?yàn)閷⑦@些化合物配制在水性介質(zhì)中的可選方案有限。有利情況下， 提供了本發(fā)明的涂層的調(diào)理素例如IgG，能夠吸附到包含這些水溶性不良的活性劑的粒子 的表面，在其上形成基本上均勻的涂層。例如，調(diào)理素例如IgG的疏水尾部能夠與粒子表 面的疏水區(qū)域結(jié)合。此外，當(dāng)PH低于調(diào)理素的等電點(diǎn)時(shí)，調(diào)理素例如IgG帶正電，因此調(diào)理 素與疏水粒子(它可以帶負(fù)電)之間的強(qiáng)的靜電相互作用能夠使包含調(diào)理素蛋白的涂層 穩(wěn)定?；蛘?，當(dāng)PH高于調(diào)理素的等電點(diǎn)時(shí)，調(diào)理素例如IgG帶負(fù)電，因此調(diào)理素與疏水粒子 (它可以帶正電)之間的強(qiáng)的靜電相互作用能夠使包含調(diào)理素蛋白的涂層穩(wěn)定。在一種優(yōu) 選情況下，水溶性不良的活性劑化合物是分子量低于2500克/mol、低于2000克/mol、最典 型低于1000克/mol，例如在200克/mol到900克/mol之間的有機(jī)化合物。這樣的有機(jī)化 合物有時(shí)被稱為“小分子”?；蛘?，本發(fā)明可以用水溶性化合物來(lái)實(shí)施。這些水溶性活性化合物可以捕集在固 相載體基質(zhì)(例如聚乳酸化物-聚乙醇酸化物共聚物、白蛋白、淀粉)中，或囊封基本上不 透活性劑的外層囊中。這種用于囊封的囊可以是聚合包衣，例如聚丙烯酸化物。此外，從這 些水溶性化合物制備的小粒子可以被改性以提高化學(xué)穩(wěn)定性，并通過(guò)控制化合物從粒子的 釋放來(lái)控制化合物的藥物動(dòng)力學(xué)性質(zhì)。水溶性化合物的實(shí)例包括但不限于簡(jiǎn)單的有機(jī)分 子、蛋白、肽類、核苷酸、寡核苷酸和糖類。下面對(duì)于粒子的描述也適用于本文公開的所有實(shí)施方案。粒子可以是無(wú)定形、半 晶體、晶體或其組合，正如通過(guò)適合的分析方法例如差示掃描量熱法(DSC)或X-射線衍射 所測(cè)定的。在給藥之前，可以通過(guò)均化過(guò)程將粒子均勻化。也可以通過(guò)微量沉淀/均化過(guò) 程將粒子均勻化。一般情況下，涂層粒子具有的平均有效粒徑通常從約Inm到約2 μ m(或2000 納米)，正如通過(guò)動(dòng)態(tài)光散射方法(例如光子相關(guān)光譜術(shù)、激光衍射、小角激光光散射 (LALLS)、中角激光光散射(MALLS))、光遮蔽方法(例如Coulter方法)、流變學(xué)或顯微術(shù) (光學(xué)或電子)所測(cè)量的。優(yōu)選的平均有效粒徑取決于多種因素，例如化合物所打算的給藥 途徑、劑型、溶解性、毒性和生物可利用性。其他適合的粒徑包括但不限于約IOnm到Ιμπκ 約50nm到約500nm和/或約IOOnm到約250nm。粒子核心的制備在本發(fā)明中使用的制備粒子的方法可以通過(guò)大量技術(shù)來(lái)實(shí)現(xiàn)。關(guān)于制備粒子的技 術(shù)的代表性而非窮舉的討論如下。 一般來(lái)說(shuō)，使用能量添加技術(shù)制備小粒子分散體的方法，包括向適合的介質(zhì)例如 通常含有一種或多種下面提到的表面活性劑的水或水性溶液、或藥物化合物不能顯著溶解 在其中的其他液體，以批量形式加入有時(shí)將被稱為藥物的活性劑或藥物活性化合物，以形 成第一懸液的步驟，所述第一懸液將被稱為預(yù)懸液。向預(yù)懸液添加能力以形成在物理上比 預(yù)懸液更穩(wěn)定的粒子分散體。能量通過(guò)機(jī)械研磨(例如珍珠研磨、球磨研磨、錘磨研磨、流 體能量研磨、噴射研磨或濕法研磨)來(lái)添加。這樣的技術(shù)公開在美國(guó)專利No. 5，145，684中， 在此引為參考并作為本發(fā)明的一部分。
能量添加技術(shù)還包括使預(yù)懸液經(jīng)歷高剪切力條件，包括利用微型流化裝置施加空 化、剪切或沖擊力。本發(fā)明還考慮到了使用活塞間隙勻漿機(jī)或反向流動(dòng)勻漿機(jī)向預(yù)懸液添 加能量，例如在美國(guó)專利No. 5，091，188中公開的，在此引為參考并作為本發(fā)明的一部分。 適合的活塞間隙勻漿機(jī)可以在產(chǎn)品名EMULSIFLEX (Avestin)和FRENCH 壓力器(Thermo Spectronic)下商購(gòu)。適合的微型流化裝置可以從Microfluidics Corp獲得。添加能量的步驟也可以使用超聲技術(shù)實(shí)現(xiàn)。超聲處理步驟可以使用任何適合的超 聲裝置來(lái)進(jìn)行。適合的裝置包括Branson S-450A型和Cole-Parmer 500/750瓦型。這樣 的裝置在工業(yè)中是公知的。典型情況下，超聲裝置具有超聲處理聲horn或探頭，所述超聲 處理horn或探頭插入到預(yù)懸液中，以將聲能發(fā)射到溶液中。在本發(fā)明的優(yōu)選形式中，超聲 裝置的操作頻率從約IkHz到約90kHz，更優(yōu)選從約20kHz到約40kHz，或其中的任何范圍或 范圍組合。探頭的尺寸可以變化，優(yōu)選具有獨(dú)特的尺寸，例如1/2英寸或1/4英寸等。小粒子的分散體在給藥之前可以經(jīng)殺菌。殺菌可以通過(guò)加熱滅菌、Y輻照、過(guò)濾 (直接作為粒徑在200nm以下的分散體，或在形成固體分散體系之前通過(guò)對(duì)在沉淀方法中 使用的溶液除菌過(guò)濾)、和通過(guò)施加非常高的壓力(大于2000大氣壓)、或通過(guò)高壓與高溫 的組合來(lái)實(shí)現(xiàn)。II.用干制各亞微米尺寸粒子分散體的沉淀方法小粒子分散體也可以通過(guò)沉淀技術(shù)來(lái)制備。下面是沉淀技術(shù)的實(shí)例的描述。微量沉淀方法。微量沉淀方法的一個(gè)實(shí)例公開在美國(guó)專利No. 5，780，062中，在此 引為參考并作為本發(fā)明的一部分。’ 062號(hào)專利公開了有機(jī)化合物沉淀方法，包括(i)將 有機(jī)化合物溶解在與水混溶的第一溶劑中；(ii)在水性第二溶劑中制備聚合物和兩親物 的溶液，在所述第二溶劑中有機(jī)化合物基本上不溶，由此形成了聚合物/兩親物復(fù)合物；以 及(iii)混合來(lái)自步驟(i)和(ii)的溶液，以便導(dǎo)致有機(jī)化合物與聚合物/兩親物復(fù)合物 的聚集體的沉淀。其他適合的沉淀方法公開在美國(guó)專利Nos 6，607，784,7, 037，528,6, 869，617、 6，884，436中，所述專利在此引為參考并作為本發(fā)明的一部分。公開的方法包括下列步驟 (1)將有機(jī)化合物溶解在與水混溶的第一有機(jī)溶劑中以產(chǎn)生第一溶液；(2)將第一溶液與 第二溶劑或水混合，使有機(jī)化合物沉淀，以產(chǎn)生預(yù)懸液；以及(3)以高剪切力混合或加熱的 形式向預(yù)懸液添加能量，以提供小粒子的分散體。任選地，通過(guò)任何適合的手段例如離心或 過(guò)濾方法從混合物中除去第一有機(jī)溶劑。此外，可以通過(guò)使用例如離心和過(guò)濾的方法除去 第一連續(xù)相并添加第二連續(xù)相，然后將固體物質(zhì)重新分散在第二連續(xù)相中，任選地將分散 體的連續(xù)相用另一種連續(xù)相代替。下面提出的一種或多種任選表面活性劑可以添加到第一 有機(jī)溶劑或第二水性溶液中。乳液沉淀方法。一種適合的乳液沉淀技術(shù)公開在美國(guó)專利公開號(hào) No. 2005/0037083中，所述專利在此引為參考并作為本發(fā)明的一部分。在該方法中，方法包 括下列步驟(1)提供具有有機(jī)相和水相的多相系統(tǒng)，有機(jī)相在其中具有藥物活性化合物； 以及(2)對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行超聲處理以蒸發(fā)一部分有機(jī)相，導(dǎo)致化合物在水相中沉淀，形成小粒 子的分散體。提供多相系統(tǒng)的步驟包括下列步驟(1)將與水不混溶的溶劑與藥物活性化 合物混合以產(chǎn)生有機(jī)溶劑，(2)制備具有一種或多種表面活性化合物的水基溶液，以及(3) 將有機(jī)溶液與水性溶液混合以形成多相系統(tǒng)?；旌嫌袡C(jī)相與水相的步驟可以包括使用活塞間隙勻漿機(jī)、膠體磨機(jī)、高速攪拌設(shè)備、擠壓設(shè)備、手動(dòng)攪拌或搖動(dòng)設(shè)備、微型流化裝置或其 他用于提供高剪切力條件的設(shè)備或技術(shù)。粗乳液將在水中具有尺寸為直徑低于約1μ 1的 油滴。將粗乳液進(jìn)行超聲處理以產(chǎn)生微乳液，并最終提供小粒子的分散體。制備小粒子的分散體的另一種方法公開在美國(guó)專利No. 6，835，396中，在此引為 參考并作為本發(fā)明的一部分。方法包括下列步驟(1)提供具有有機(jī)相和水相的多相系 統(tǒng)的粗分散體，有機(jī)相在其中具有藥物化合物；(2)向粗分散體提供能量以形成細(xì)分散體； (3)冷凍細(xì)分散體；以及(4)將細(xì)分散體冷凍干燥以獲得藥物化合物的小粒子。小粒子可 以通過(guò)下面提到的技術(shù)除菌，或小粒子可以在水性介質(zhì)中復(fù)溶并除菌。提供多相系統(tǒng)的步驟包括下列步驟(1)將與水不混溶的溶劑與藥效化合物混合 以產(chǎn)生有機(jī)溶劑，(2)制備具有一種或多種表面活性化合物的水基溶液，以及(3)將有機(jī)溶 液與水性溶液混合以形成多相系統(tǒng)。混合有機(jī)相與水相的步驟包括使用活塞間隙勻漿機(jī)、 膠體磨機(jī)、高速攪拌設(shè)備、擠壓設(shè)備、手動(dòng)攪拌或搖動(dòng)設(shè)備、微型流化裝置或其他用于提供 高剪切力條件的設(shè)備或技術(shù)。溶劑-抗溶劑沉淀。小粒子分散體系也可以使用溶劑_抗溶劑沉淀技術(shù)來(lái)制備， 所述技術(shù)公開在Fessi等的美國(guó)專利No. 5，118，528和Leclef等的美國(guó)專利No. 5，100，591 中，在此引為參考并作為本發(fā)明的一部分。兩種方法都包括下列步驟(1)制備生物活性物 質(zhì)在溶劑或溶劑混合物中的液體相，可以向溶劑中添加一種或多種表面活性劑；(2)制備 非溶劑或非溶劑混合物的第二液體相，非溶劑與用于物質(zhì)的溶劑或溶劑混合物可混溶；(3) 一邊攪拌一邊將(1)和(2)的溶液添加到一起；以及(4)除去不想要的溶劑以產(chǎn)生小粒子 的分散體。這些方法與前面的“微量沉淀方法”部分下描述的方法的區(qū)別在于它們不提供 以高剪切力混合或加熱的形式向懸液添加能量的最后一步。相轉(zhuǎn)化沉淀。小粒子分散體可以使用相轉(zhuǎn)化沉淀來(lái)形成，該方法公開在美國(guó)專利 Nos. 6，235，224,6, 143，211和6，616，869中，所述每個(gè)專利在此引為參考并作為本發(fā)明的 一部分。相轉(zhuǎn)化是用于描述溶解在連續(xù)相溶劑系統(tǒng)中的聚合物轉(zhuǎn)變成聚合物作為連續(xù)相的 固體大分子網(wǎng)絡(luò)這一物理現(xiàn)象的術(shù)語(yǔ)。誘導(dǎo)相轉(zhuǎn)化的一種方法是通過(guò)向連續(xù)相添加非溶 劑。聚合物經(jīng)歷了從單一相向不穩(wěn)定的兩相混合物富聚合物和貧聚合物部分的過(guò)渡。非 溶劑在富聚合物相中的膠束液滴起到成核位點(diǎn)的作用，并被聚合物包層?！?24專利公開 了聚合物溶液在某些條件下的相轉(zhuǎn)化能夠?qū)е码x散微粒、包括納粒的自發(fā)形成?！?24專 利公開了將聚合物溶解或分散在溶劑中。藥劑也溶解或分散在溶劑中。在該方法中，為了 使晶種形成步驟有效，希望將藥劑溶解在溶劑中。聚合物、藥劑和溶劑一起形成了具有連續(xù) 相的混合物，其中溶劑是連續(xù)相。然后將混合物導(dǎo)入至少過(guò)量十倍的可混溶非溶劑中，導(dǎo)致 自發(fā)形成微包膠的藥劑微粒，其平均粒徑在IOnm到10 μ m之間。粒徑受到溶劑非溶劑體 積比、聚合物濃度、聚合物_溶劑溶液的粘度、聚合物的分子量以及溶劑_非溶劑對(duì)的特性 的影響。pH轉(zhuǎn)變沉淀。小粒子分散體可以通過(guò)pH轉(zhuǎn)變沉淀技術(shù)來(lái)形成。這樣的技術(shù)典型 地包括將藥物溶解在具有藥物可以在其中溶解的PH的溶液中的步驟，然后是將pH改變到 藥物不再能夠在其中溶解的點(diǎn)的步驟。取決于具體的藥物化合物，PH可以是酸性或堿性 的。然后將溶液中和以形成小粒子的分散體。一種適合的PH轉(zhuǎn)變沉淀方法公開在美國(guó)專 利No. 5，665，331中，在此引為參考并作為本發(fā)明的一部分。方法包括將藥劑與晶體生長(zhǎng)改性劑(CGM) —起溶解在堿性溶液中，然后在存在適合的表面改性的表面活性劑或多種表面 改性的表面活性劑的情況下用酸中和溶液，以形成藥物的小粒子分散體的步驟。沉淀步驟 后可以進(jìn)行分散體的透濾清理，然后將分散體的濃度調(diào)整到所需水平的步驟。pH轉(zhuǎn)變沉淀方法的其他實(shí)例公開在美國(guó)專利Nos. 5，716，642、5，662，883、 5，560，932和4，608，278中，在此引為參考并作為本發(fā)明的一部分。MmaM^i^形成小粒子分散體的適合的灌注沉淀技術(shù)公開在美國(guó)專利 Nos. 4，997，454和4，826，689中，在此引為參考并作為本發(fā)明的一部分。首先，將適合的固 體化合物溶解在適合的有機(jī)溶劑中以形成溶劑混合物。然后，將與有機(jī)溶劑混溶的沉淀用 非溶劑，在約-10°C到約100°C之間的溫度下，以每50ml體積每分鐘約0. Olml到每分鐘約 IOOOml的灌注速度灌注到溶劑混合物中，以產(chǎn)生沉淀的非聚集化合物固體粒子的懸液，粒 子具有基本上均勻的小于10 μ m的平均直徑。優(yōu)選情況下，對(duì)用沉淀用非溶劑灌注的溶液 進(jìn)行攪動(dòng)(例如通過(guò)攪拌)。非溶劑可以包含表面活性劑，以使粒子穩(wěn)定對(duì)抗聚集。然后從 溶劑分離粒子。取決于固體化合物和所需粒徑，溫度、非溶劑與溶劑的比、灌注速度、攪拌速 度和體積等參數(shù)可以按照本發(fā)明進(jìn)行改變。粒徑與非溶劑溶劑的體積比和灌注溫度成正 比，與灌注速度和攪拌速度成反比。沉淀用非溶劑可以是水性或非水性的，取決于化合物的 相對(duì)溶解性和所需的懸浮介質(zhì)。溫度轉(zhuǎn)變沉淀技術(shù)也可用于形成小粒子分散體。該技術(shù)公開在美 國(guó)專利No. 5，188，837中，在此引為參考并作為本發(fā)明的一部分。在本發(fā)明的實(shí)施方案中， 通過(guò)下述步驟制備了脂質(zhì)球(liposphere) (1)將待投送的物質(zhì)例如藥物融化或溶解在熔 化的介質(zhì)中，以形成待投送物質(zhì)的液體；(2)在高于物質(zhì)或介質(zhì)的熔點(diǎn)溫度的溫度下，向熔 化的物質(zhì)或介質(zhì)中添加磷脂和水性介質(zhì)；(3)在高于介質(zhì)的熔點(diǎn)溫度的溫度下混合懸液， 直到獲得均勻的細(xì)小制備物；以及然后(4)將制備物快速冷卻到室溫或低于室溫。溶劑蒸發(fā)沉淀。溶劑蒸發(fā)沉淀技術(shù)公開在美國(guó)專利No. 4，973，465中，在此引為參 考并作為本發(fā)明的一部分?！?65專利公開了用于制備微晶體的方法，包括下列步驟(1) 提供溶解在常用有機(jī)溶劑或溶劑組合中的藥用組合物和磷脂的溶液，(2)蒸發(fā)溶劑或多種 溶劑，以及(3)通過(guò)劇烈攪拌將通過(guò)溶劑或多種溶劑的蒸發(fā)獲得的薄膜懸浮在水性溶液 中，以形成小粒子的分散體。溶劑可以通過(guò)蒸發(fā)足夠量的溶劑來(lái)除去，以引起化合物沉淀。 溶劑也可以通過(guò)其他公知的技術(shù)來(lái)除去，例如向溶液施加真空或使氮?dú)鈴娜芤荷洗颠^(guò)。反應(yīng)沉淀。反應(yīng)沉淀包括將藥物化合物和任選的其他賦形劑溶解在適合的溶劑中 以形成溶液的步驟?；衔锟梢蕴幱诨虻陀诨衔镌谌軇┲械娘柡忘c(diǎn)的量添加?；衔锘?任何賦形劑通過(guò)與化學(xué)試劑反應(yīng)而從溶液中沉淀，或通過(guò)對(duì)添加能量例如熱或UV光等作 出反應(yīng)而改性，使得改性的化合物在溶劑中具有較低溶解度并從溶液中沉淀，以形成小粒 子分散體。賦形劑的沉淀提供了藥物吸附在其中的固體基質(zhì)。壓縮流體沉淀。通過(guò)壓縮流體沉淀的適合技術(shù)公開在Johnston的WO 97/14407 中，在此引為參考并作為本發(fā)明的一部分。方法包括將水不溶性藥物溶解在溶劑中以形成 溶液的步驟。然后將溶液噴灑到壓縮流體中，壓縮流體可以是氣體、液體或超臨界流體。向 溶質(zhì)在溶劑中的溶液添加壓縮流體，導(dǎo)致溶質(zhì)獲得或達(dá)到超臨界狀態(tài)并作為細(xì)小粒子沉淀 出來(lái)。在這種情況下，壓縮流體用作抗溶劑，它降低了藥物溶解在其中的溶劑的內(nèi)聚能密 度。
或者，可以將藥物溶解在壓縮流體中，然后將其噴灑到水性相中。壓縮流體的快速 膨脹降低了流體的溶劑溶解能力，這反過(guò)來(lái)導(dǎo)致溶質(zhì)作為小粒子在水性相中沉淀出來(lái)。在 這種情況下，壓縮流體用作溶劑。為了使粒子對(duì)聚集穩(wěn)定，在本技術(shù)中包括了表面改性劑，例如表面活性劑。噴射到低溫流體中。通過(guò)壓縮流體沉淀的適合技術(shù)由Williams等公開在美國(guó)專 利公開號(hào)No. 2004/0022861中，在此引為參考并作為本發(fā)明的一部分。方法提供了用于生 產(chǎn)小粒子的系統(tǒng)和方法，其中將活性成分與水、一種或多種溶劑或其組合混合，并將得到的 混合物噴灑到低溫流體表面處或下方。由此提供了冷凍的粒子。也可以加入用于囊封固體 粒子的材料，以便產(chǎn)生包膠劑包圍著活性劑的冷凍粒子。蛋白納球/微球沉淀。在本發(fā)明中使用的粒子也可以從涉及將大分子例如蛋白 與水溶性聚合物混合或溶解的方法來(lái)產(chǎn)生。這種方法公開在美國(guó)專利Nos. 5，849，884、 5，981，719,6, 090，925,6, 268，053,6, 458，387 和美國(guó)專利公開號(hào) No. 2004/0043077 中，它 們?cè)诖艘秊閰⒖疾⒆鳛楸景l(fā)明的一部分。在本發(fā)明的實(shí)施方案中，通過(guò)將溶液中的大分子 與溶液中的聚合物或聚合物混合物在接近大分子的等電點(diǎn)的PH下混合，制備了粒子。將混 合物在存在能量源例如熱、輻射或電離作用的情況下溫育預(yù)定量的時(shí)間。得到的粒子可以 通過(guò)物理分離方法與溶液中存在的任何未摻入的成分分離開。還有大量其他適合的方法可用于制備能夠在本發(fā)明中使用的小粒子分散體。III.制備藥物組合物的粒子分散體的附加方法下面的用于制備在本發(fā)明中使用的藥物組合物(即活性劑或有機(jī)化合物)粒子的 附加方法，可以分成四種通用類別。每種方法類別共有下列步驟(1)將有機(jī)化合物溶解在 與水混溶的第一溶劑中，以產(chǎn)生第一溶液，(2)將第一溶液與第二溶劑水混合，使有機(jī)化合 物沉淀，以產(chǎn)生預(yù)懸液，以及(3)以高剪切力混合或加熱或二者的組合的形式向預(yù)懸液添 加能量，以提供具有上面定義的所需尺寸范圍的有機(jī)化合物的穩(wěn)定形式?；旌喜襟E與添加 能量步驟可以在相繼的步驟中或同時(shí)進(jìn)行。方法的類別根據(jù)有機(jī)化合物的物理性質(zhì)來(lái)區(qū)分，所述物理性質(zhì)正如通過(guò)在能量添 加步驟之前和能量添加步驟之后進(jìn)行的χ-射線衍射研究、差示掃描量熱術(shù)(DSC)研究或其 他適合的研究所確定的。在第一種方法類別中，在能量添加步驟之前，預(yù)懸液中的有機(jī)化合 物采取無(wú)定形形式、半晶體形式或超冷卻液體形式，并具有平均有效粒徑。在能量添加步驟 之后，有機(jī)化合物處于晶體形式中，其平均有效粒徑與預(yù)懸液的基本上相同或小一些。在第二種方法類別中，在能量添加步驟之前有機(jī)化合物處于晶體形式，并具有平 均有效粒徑。在能量添加步驟之后，有機(jī)化合物處于晶體形式，具有與能量添加步驟之前基 本上相同的平均有效粒徑，但能量添加步驟之后晶體聚集或形成大晶體的可能性較低。有機(jī)化合物聚集或形成大晶體的較低的傾向性，通過(guò)激光動(dòng)態(tài)光散射和光學(xué)顯微 術(shù)進(jìn)行觀察。在第三種方法類別中，在能量添加步驟之前，有機(jī)化合物處于易碎的晶體形式，并 具有平均有效粒徑。術(shù)語(yǔ)“易碎”的意義是指粒子是脆的，更容易破碎成較小的粒子。在能 量添加步驟之后，有機(jī)化合物處于晶體形式，其平均有效粒徑小于預(yù)懸液的晶體。當(dāng)與處于 不太易碎的晶體形態(tài)的有機(jī)化合物相比時(shí)，通過(guò)采取使有機(jī)化合物處于易碎晶體形式所必 需的步驟，隨后的能量添加步驟可以進(jìn)行得更快、更有效。
在第四種方法類別中，第一溶液和第二溶劑同時(shí)進(jìn)行能量添加步驟。因此，沒(méi)有測(cè) 量能量添加步驟之前和之后有機(jī)化合物的物理性質(zhì)。能量添加步驟可以任何方式進(jìn)行，其中預(yù)懸液或第一溶液和第二溶劑暴露于空 化、剪切或沖擊力。在一種形式中，能量添加步驟是退火步驟。在本發(fā)明中，退火被定義為 通過(guò)單次或重復(fù)地施加能量(直接加熱或機(jī)械應(yīng)力)，然后進(jìn)行熱弛豫，以將熱力學(xué)不穩(wěn)定 的物質(zhì)轉(zhuǎn)變成更穩(wěn)定形式的過(guò)程。這種能量的降低可以通過(guò)將固體形式從不太有序轉(zhuǎn)變成 更有序的晶格結(jié)構(gòu)來(lái)實(shí)現(xiàn)?；蛘?，這種穩(wěn)定作用可以通過(guò)表面活性劑分子在固-液界面處 的重新排序來(lái)產(chǎn)生。這四種方法類別在下面分別顯示。但是，應(yīng)該理解，可以對(duì)方法的條件例如表面活 性劑或表面活性劑組合的選擇、使用的表面活性劑的量、反應(yīng)溫度、溶液混合的速度、沉淀 速度等進(jìn)行選擇，以允許任何藥物將在下面討論的任一類別下被加工。第一種方法類別，以及第二、第三和第四種方法類別，可以進(jìn)一步分成兩個(gè)子類 別，方法A和B。根據(jù)下面的方法，第一溶劑是目標(biāo)有機(jī)化合物在其中相對(duì)可溶并可與第二溶劑混 溶的溶劑或溶劑混合物。這樣的溶劑包括但不限于與水混溶的質(zhì)子化合物，其中分子中的 氫原子與電負(fù)性原子例如氧、氮或元素周期表中其他族VA、VIA和VII A的原子相結(jié)合。這 樣的溶劑的實(shí)例包括但不限于醇、胺(伯胺或仲胺)、肟、異羥肟酸、羧酸、磺酸、膦酸、磷酸、 酰胺和脲。第一溶劑的其他例子還包括非質(zhì)子有機(jī)溶劑。某些這樣的非質(zhì)子溶劑能夠與水形 成氫鍵，但是只能作為質(zhì)子受體，因?yàn)樗鼈內(nèi)鄙儆行У奶峁┵|(zhì)子的基團(tuán)。一類非質(zhì)子溶劑 是偶極非質(zhì)子溶劑，如由國(guó)際理論和應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會(huì)(International Union of Pure and AppliedChemistry) (IUPAC Compendium of Chemical Terminology, 2nd Ed. , 1997)所定義 的具有大于約15的相對(duì)高的相對(duì)電容率(或介電常數(shù))和相當(dāng)大的永久偶極矩，不 能提供適合的不穩(wěn)定的氫原子以形成強(qiáng)的氫鍵的溶劑，例如二甲亞砜。偶極非質(zhì)子溶劑可以選自酰胺(完全取代的，氮缺少相連的氫原子)，脲(完全 取代的，不具有與氮相連的氫原子)，醚，環(huán)醚，腈，酮，砜，亞砜，完全取代的磷酸，膦酸酯，磷 酰胺，硝基化合物等。二甲亞砜(DMSO)、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)、2-吡咯烷酮、1，3-二 甲基咪唑啉酮(DMI)、二甲基乙酰胺(DMA)、二甲基甲酰胺(DMF)、二噁烷、丙酮、四氫呋喃 (THF)、四亞甲基砜(環(huán)丁砜)、乙腈和六甲基磷酰胺(HMPA)、硝基甲烷等，是該類的成員。也可以選擇總的來(lái)說(shuō)不與水混溶、但在小體積(小于10% )下具有足夠的水溶性 的溶劑，以這些小體積用作與水混溶的第一溶劑。實(shí)例包括芳香族烴類、鏈烯烴、鏈烷烴和 鹵代芳族化合物、鹵代鏈烯烴和鹵代鏈烷烴。芳族化合物包括但不限于苯(取代或未取代 的)和單環(huán)或多環(huán)芳烴。取代苯的實(shí)例包括但不限于二甲苯(鄰位、間位或?qū)ξ?和甲苯。 鏈烷烴的實(shí)例包括但不限于己烷、新戊烷、庚烷、異辛烷和環(huán)己烷。鹵代芳族化合物的實(shí)例 包括但不限于氯苯、溴苯和氯代甲苯。鹵代鏈烷烴和鏈烯烴的實(shí)例包括但不限于三氯乙烷、 二氯甲烷、二氯乙烷(EDC)等。適合用作第一溶劑的溶劑的其他具體實(shí)例包括但不限于N-甲基-2-吡咯烷酮 (也稱為N-甲基-2-吡咯烷酮)，2-吡咯烷酮(也稱為2-吡咯烷酮)，1，3- 二甲基-2-咪唑啉酮(DMI)，二甲亞砜，二甲基乙酰胺，乙酸，乳酸，甲醇，乙醇，異丙醇，3-戊醇，正丙醇， 苯甲醇，甘油，丁二醇(丁二醇)，乙二醇，丙二醇，單?；投；母视蛦熙?例如辛酸甘 油酯)，二甲基異山梨醇，丙酮，二甲砜，二甲基甲酰胺，1，4_二噁烷，四亞甲基砜(環(huán)丁砜)， 乙腈，硝基甲烷，四甲基脲，六甲基磷酰胺(HMPA)，四氫呋喃(THF)，二噁烷，二乙醚，叔丁基 甲基醚(TBME)，芳香族烴類，鏈烯烴，鏈烷烴，鹵代芳族化合物，鹵代鏈烯烴，鹵代鏈烷烴，二 甲苯，甲苯，苯，取代苯，乙酸乙酯，乙酸甲酯，乙酸丁酯，氯苯，溴苯，氯代甲苯，三氯乙烷，二 氯甲烷，二氯乙烷(EDC)，己烷，新戊烷，庚烷，異辛烷，環(huán)己烷，聚乙二醇(PEG，例如PEG-4、 PEG-8、PEG-9、PEG-12、PEG-14、PEG-16、PEG-120、PEG-75、PEG-150)，聚乙二醇酯(實(shí)例例如 PEG-4 二月桂酸酯、PEG-20 二月桂酸酯、PEG-6異硬脂酸酯、PEG-8棕櫚酰硬脂酸酯、PEG-150 棕櫚酰硬脂酸酯)，聚乙二醇失水山梨糖醇(例如PEG-20失水山梨糖醇異硬脂酸酯)，聚乙 二醇單烷醚(實(shí)例例如PEG-3 二甲基醚、PEG-4 二甲基醚)，聚丙二醇(PPG)，聚藻酸亞丙酯， PPG-10 丁二醇，PPG-10甲基葡萄糖醚，PPG-20甲基葡萄糖醚，PPG-15硬脂基醚，丙二醇二 辛酸酯/ 二癸酸酯，丙二醇月桂酸酯和四乙二醇醚(glycofurol)(四氫糠醇聚乙二醇醚)。 優(yōu)選的第一溶劑是N-甲基-2-吡咯烷酮。另一種優(yōu)選的第一溶劑是乳酸。第二溶劑是水性溶劑。這種水性溶劑可以是水本身。這種溶劑也可以包含緩沖劑、 鹽、表面活性劑、水溶性聚合物以及這些賦形劑的組合。方法A。在方法A中，首先將有機(jī)化合物(“活性劑”或“藥物”)溶解在第一溶 劑中以產(chǎn)生第一溶液。取決于有機(jī)化合物在第一溶劑中的溶解度，有機(jī)化合物可以添加約 0. 1% (w/v)到約50% (w/v) 0為了確?；衔镌诘谝蝗軇┲械目?cè)芙舛?，可能必需將濃縮 物從約30°C加熱到約100°C。第二水性溶劑提供有添加到其中的一種或多種任選表面改性劑，例如陰離子表面 活性劑、陽(yáng)離子表面活性劑、兩性離子表面活性劑、非離子表面活性劑或生物表面活性分 子。適合的陰離子表面活性劑包括但不限于烷基磺酸化物、烷基磷酸化物、烷基膦酸化物、 月桂酸鉀、硬脂酸三乙醇胺、月桂基硫酸鈉、十二烷基硫酸鈉、烷基聚氧乙烯硫酸鹽、藻酸 鈉、琥珀酸二辛酯磺酸鈉、磷脂酰甘油、磷脂酰肌苷、磷脂酰肌醇、二磷脂酰甘油、磷酯酰絲 氨酸、磷脂酸及其鹽、羧甲基纖維素鈉、膽酸和其他膽汁酸(例如膽酸、脫氧膽酸、甘膽酸、 ?；悄懰?、甘脫氧膽酸)及其鹽(例如脫氧膽酸鈉等)。兩性離子表面活性劑是電中性的，但是在同一個(gè)分子中具有局部正電荷和負(fù)電 荷。適合的兩性離子表面活性劑包括但不限于兩性離子磷脂。適合的磷脂包括磷脂酰膽 堿、磷脂酰乙醇胺、二?；?甘油-磷酸乙醇胺(例如二肉豆蔻?；?甘油-磷酸乙醇胺 (DMPE)、二棕櫚?；?甘油-磷酸乙醇胺(DPPE)、二硬脂?；?甘油-磷酸乙醇胺(DSPE) 和二油?；?甘油-磷酸乙醇胺(DOPE))。在本發(fā)明中可以使用包含陰離子和兩性離子磷 脂的磷脂混合物。這樣的混合物包括但不限于溶血磷脂、卵或大豆磷脂或其任何組合。磷 脂、無(wú)論是陰離子、兩性離子磷脂還是磷脂混合物，可以是含鹽或脫鹽的，加氫或部分加氫 的，或天然、半合成或合成的。在本發(fā)明中，磷脂也可以與水溶性或親水性聚合物結(jié)合，以將 投送特異性靶向巨噬細(xì)胞。但是，在其他應(yīng)用中，結(jié)合的磷脂可用于靶向其他細(xì)胞或組織。 優(yōu)選的聚合物是聚乙二醇(PEG)，也被稱為單甲氧基聚乙二醇(mPEG)。PEG的分子量可以 不同，例如從200到50,000。一些常用的可商購(gòu)的PEG包括PEG 350、PEG 550、PEG 750、 PEG 1000、PEG 2000、PEG 3000和PEG 5000。磷脂或PEG-磷脂結(jié)合物也可以包含能夠與配體共價(jià)結(jié)合的官能團(tuán)，所述配體包括但不限于蛋白、肽類、糖類、糖蛋白、抗體或藥物活性 劑。這些官能團(tuán)可以通過(guò)例如酰胺鍵形成、二硫化物或硫醚形成或生物素/鏈親和素結(jié)合 與配體結(jié)合。配體結(jié)合官能團(tuán)的實(shí)例包括但不限于己酰胺、十二酰胺、1，12-十二烷二羧酸 化物、巰基乙醇、4_(對(duì)-馬來(lái)酰亞胺基苯基)丁酰胺(MPB)、4_(對(duì)-馬來(lái)酰亞胺基甲基) 環(huán)己烷-羧酰胺(MCC)、3-(2_吡啶基二硫代)丙酸化物(PDP)、琥珀酸化物、戊二酸化物、 十二烷酸化物和生物素。適合的陽(yáng)離子表面活性劑包括但不限于季銨化合物，例如苯扎氯銨、溴化十六烷 基三甲基銨、脫乙酰殼多糖、月桂基二甲基苯基氯化銨、酰基肉堿鹽酸鹽、二甲基雙十八烷 基溴化銨(DDAB)、二油?；谆@丙烷(DOTAP)、二肉豆蔻?；谆@丙烷(DMTAP)、 二甲基氨基乙烷氨甲酰基膽留醇(DC-Chol)、l，2-二?；视?3-(0-烷基)磷酸膽堿、 0-烷基磷脂酰膽堿、烷基吡啶鹵化物或長(zhǎng)鏈烷基胺例如正辛胺和油胺。適合的非離子表面活性劑包括甘油酯，聚氧乙烯脂肪醇醚(MACR0G0L 和 BRIJ )，聚氧乙烯失水山梨糖醇脂肪酸酯(聚山梨酸酯)，聚氧乙烯脂肪酸酯(MYRJ )，失 水山梨糖醇酯(SPAN )，單硬脂酸甘油酯，聚乙二醇，聚丙二醇，鯨蠟醇，十六醇十八醇混合 物，硬脂醇，芳基烷基聚醚醇，聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物(泊洛沙姆)，poloxamine，甲基 纖維素，羥甲基纖維素，羥丙基纖維素，羥丙基甲基纖維素，非晶體纖維素，多糖包括淀粉和 淀粉衍生物例如羥乙基淀粉(HES)，聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮。在優(yōu)選形式中，非離子 表面活性劑是聚氧乙烯和聚氧丙烯共聚物，優(yōu)選為丙二醇和乙二醇的嵌段共聚物。這樣的 聚合物在商品名泊洛沙姆、有時(shí)也稱為PLUR0NIC⑧下銷售，并由幾家供應(yīng)商包括Spectrum Chemical和Ruger銷售。在聚氧乙烯脂肪酸酯中，包括了具有短烷基鏈的聚氧乙烯脂肪酸 酯。這種表面活性劑的一個(gè)實(shí)例是S0LUT0L HS 15，聚氧乙烯-660-羥基硬脂酸化物，由 BASF Aktiengesellschaft 制造。表面活性生物分子包括例如白蛋白、酪蛋白、水蛭素或其他適合的蛋白這樣的分 子。例如，也可以使用具有親水和疏水結(jié)構(gòu)域的蛋白。也包括多糖表面活性生物制品，它們 包括但不限于淀粉、肝素和脫乙酰殼多糖。其他適合的表面活性劑包括任何氨基酸，例如亮 氨酸、丙氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、賴氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸，或這些氨 基酸的衍生物例如酰胺或酯衍生物，以及由這些氨基酸形成的多肽。向第二溶劑加入pH調(diào)節(jié)劑可能也是需要的。適合的pH調(diào)節(jié)劑包括但不限于鹽 酸、硫酸、磷酸、單羧酸(例如乙酸和乳酸)、二羧酸(例如琥珀酸)、三羧酸(例如檸檬酸)、 THAM(三(羥甲基)氨基甲烷)、葡甲胺(N-甲基葡萄糖胺)、氫氧化鈉以及氨基酸例如甘氨 酸、精氨酸、賴氨酸、丙氨酸、組氨酸和亮氨酸。第二溶劑應(yīng)該具有從約3到約11范圍內(nèi)的 pH。水性介質(zhì)可以附加地包含滲透壓調(diào)節(jié)劑，例如但不限于甘油、單糖例如葡萄糖、二糖例 如蔗糖、三糖例如棉子糖和糖醇例如甘露糖醇、木糖醇和山梨糖醇。對(duì)于口服劑型來(lái)說(shuō)，可以使用一種或多種下列賦形劑明膠，酪蛋白，卵磷脂(磷 脂類)，阿拉伯樹膠，膽固醇，黃蓍膠，硬脂酸，苯扎氯銨，硬脂酸鈣，單硬脂酸甘油酯，十六醇 十八醇混合物，cetomacrogol乳化蠟，失水山梨糖醇酯，聚氧乙烯烷基醚例如聚乙二醇醚例 如cetomacrogollOOO、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯失水山梨糖醇脂肪酸酯例如可商 購(gòu)的TWEENS 、聚乙二醇、聚氧乙烯硬脂酸酯、膠體二氧化硅、磷酸化物、十二烷基硫酸鈉、羧 甲基纖維素鈣、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖
16維素鄰苯二甲酸化物、非晶體纖維素、硅酸鎂鋁、三乙醇胺、聚乙烯醇(PVA)和聚乙烯吡咯 烷酮(PVP)。大多數(shù)這些賦形劑詳細(xì)描述在由美國(guó)制藥聯(lián)合會(huì)(American Pharmaceutical Association)禾口英國(guó)制藥學(xué)會(huì)(The Pharmaceutical Society of Great Britain)聯(lián)合出 片反白勺《胃^/貝武$齊[J￥·》 (Handbook of Pharmaceutical Excipients) (thePharmaceutical Press, 1986)中。表面改性劑可商購(gòu)，和/或可以通過(guò)本技術(shù)領(lǐng)域已知的技術(shù)制備。兩種或 以上表面改性劑可以組合使用。在優(yōu)選形式中，用于制備有機(jī)化合物小粒子的方法包括將第一溶液添加到第二溶 劑中的步驟。添加速度取決于批量大小和有機(jī)化合物的沉淀動(dòng)力學(xué)。典型情況下，對(duì)于小 規(guī)模實(shí)驗(yàn)室工藝(制備1升)來(lái)說(shuō)，添加速度從每分鐘約0. 05cc到每分鐘約10cc。在添加 過(guò)程中，溶液應(yīng)該在恒定的攪拌下。使用光學(xué)顯微術(shù)已經(jīng)觀察到形成了無(wú)定形粒子、半晶體 固體或超冷卻液體，以產(chǎn)生預(yù)懸液。方法還包括對(duì)預(yù)懸液進(jìn)行能量添加步驟，以將無(wú)定形粒 子、超冷卻液體或半晶體固體轉(zhuǎn)變成更穩(wěn)定的晶體固態(tài)的步驟。得到的粒子將具有平均有 效粒徑，正如通過(guò)動(dòng)態(tài)光散射方法(例如上面提到的范圍內(nèi)的光子相關(guān)光譜術(shù)、激光衍射、 小角激光光散射(LALLS)、中角激光光散射(MALLS)、光遮蔽方法(例如Coulter方法)、流 變學(xué)或顯微術(shù)(光學(xué)或電子))所測(cè)量的。在第四種方法類別中，將第一溶液和第二溶劑合 并，同時(shí)進(jìn)行能量添加步驟。能量添加步驟包括通過(guò)超聲、均化、逆向流均化、微流化或提供沖擊、剪切或空化 力的其他方法來(lái)添加能量。在該階段中，樣品可以被冷卻或加熱。在一種形式中，能量添加 步驟通過(guò)活塞間隙勻漿機(jī)執(zhí)行，例如由Avestin Inc.公司在產(chǎn)品名EmulsiFleX-C160下銷 售的活塞間隙勻漿機(jī)。在另一種形式中，能量添加步驟通過(guò)超聲完成，使用了超聲處理器例 如由Sonics and Materials, Inc.公司制造的Vibra-Cell超聲處理器(600W)。在另一種 形式中，能量添加步驟通過(guò)使用在美國(guó)專利No. 5，720，551中描述的乳化裝置來(lái)完成，所述 專利在此引為參考并作為本發(fā)明的一部分。取決于能量添加的速度，可能需要將被處理樣品的溫度調(diào)整到從約-30°C到30°C 的范圍內(nèi)?；蛘撸瑸榱嗽诒惶幚淼墓腆w中實(shí)現(xiàn)所需的相變，在能量添加步驟過(guò)程中將預(yù)懸液 加熱到從約30°C到約100°C范圍內(nèi)的溫度，可能也是必需的。方法B。方法B與方法A的區(qū)別在以下方面。第一個(gè)區(qū)別是表面活性劑或表面活 性劑的組合添加到第一溶液中。表面活性劑可以選自上面提到的陰離子、非離子、陽(yáng)離子表 面活性劑和表面活性生物改性劑。方法A和方法B與美國(guó)專利No. 5,780,062的比較例。美國(guó)專利No. 5，780，062公 開了制備有機(jī)化合物小粒子的方法，所述方法為將化合物首先溶解在適合的與水混溶的第 一溶劑中。通過(guò)將聚合物和兩親物溶解在水性溶劑中制備了第二溶液。然后將第一溶液添 加到第二溶液中，以形成由有機(jī)化合物和聚合物-兩親物復(fù)合物構(gòu)成的沉淀?！?62專利 沒(méi)有公開在其方法中使用了方法A和方法B中的能量添加步驟。缺乏穩(wěn)定性典型地通過(guò)快 速聚集和粒子生長(zhǎng)來(lái)證明。在某些情況下，無(wú)定形粒子重結(jié)晶成大的晶體。以本文公開的 方式向預(yù)懸液添加能量所形成的粒子，典型情況下顯示出粒子聚集和生長(zhǎng)速度的降低，以 及在產(chǎn)品儲(chǔ)存后不發(fā)生重結(jié)晶。方法A和方法B與'062專利方法的進(jìn)一步區(qū)別在于在沉淀之前不存在形成聚合 物-兩親物復(fù)合物的步驟。在方法A中，這樣的復(fù)合物不能形成，因?yàn)橄♂?水性)相中沒(méi)有添加聚合物。在方法B中，也用作兩親物的表面活性劑或聚合物與有機(jī)化合物一起溶解 在第一溶劑中。這預(yù)先排除了在沉淀之前任何兩親物-聚合物復(fù)合物的形成。在'062專 利中，小粒子的成功沉淀依賴于沉淀之前兩親物-聚合物復(fù)合物的形成?！?62專利公開 了兩親物-聚合物復(fù)合物在水性第二溶液中形成聚集體?！?62專利解釋說(shuō)，疏水有機(jī)化 合物與兩親物_聚合物復(fù)合物相互作用，從而降低這些聚集體的溶解性并導(dǎo)致沉淀。在本 發(fā)明的方法中，已經(jīng)證明在第一溶劑中包含表面活性劑或聚合物(方法B)，在隨后添加到 第二溶劑中以后，導(dǎo)致形成了與'062專利描述的方法所產(chǎn)生的相比更均勻、細(xì)小的顆粒。粒子的涂層用于為通過(guò)本發(fā)明制備的粒子涂層的方法，可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的各種 不同技術(shù)來(lái)實(shí)現(xiàn)。涂層可以通過(guò)各種不同的結(jié)合作用與粒子結(jié)合，這些結(jié)合作用包括共價(jià) 和/或非共價(jià)結(jié)合(例如共價(jià)鍵合、離子相互作用、靜電相互作用、偶極_偶極相互作用、氫 鍵形成、范德華力、疏水/疏水結(jié)構(gòu)域相互作用、交聯(lián)和/或任何其他相互作用)。非共價(jià)結(jié)合的涂層可以通過(guò)例如將大量粒子與含有調(diào)理素例如免疫球蛋白 G(IgG)或補(bǔ)體蛋白例如C3b或C5的溶液混合來(lái)制備。溶液可以在高剪切力條件下，使用例 如微量流化裝置、活塞間隙勻漿機(jī)、反向流勻漿機(jī)或超聲處理器來(lái)混合。為了證實(shí)涂層成功 吸附到粒子上，可以通過(guò)在涂層操作之前和之后測(cè)量ζ電位來(lái)確定粒子的表面電位。也可 以使用其他用于測(cè)量涂層吸附的已知方法，例如調(diào)理素可以用熒光標(biāo)記物修飾，熒光標(biāo)記 的調(diào)理素的吸收可以通過(guò)熒光顯微術(shù)來(lái)檢測(cè)。ELISA方法或其他基于抗體的檢測(cè)系統(tǒng)也可 用于檢測(cè)調(diào)理素。有利情況下，調(diào)理素涂層能夠容易地吸附到粒子表面，特別是正如上面解 釋的包含水溶性不良的活性劑的粒子。涂層也可以與粒子核心共價(jià)結(jié)合。共價(jià)結(jié)合的涂層可以通過(guò)例如將大量粒子與包 含調(diào)理素的溶液相混合來(lái)制備，所述粒子包含反應(yīng)性官能團(tuán)。反應(yīng)性官能團(tuán)包括能夠與例 如調(diào)理素的含有氨基、羥基和/或硫醇基的氨基酸反應(yīng)的親電官能團(tuán)。適合的反應(yīng)性官能 團(tuán)包括例如醛、N-羥基-琥珀酰亞胺酯和馬來(lái)酰亞胺。由上述反應(yīng)形成的不穩(wěn)定的共價(jià)鍵 可以通過(guò)其他反應(yīng)步驟穩(wěn)定化。例如，胺與醛的反應(yīng)形成水解不穩(wěn)定的亞胺，所述亞胺可以 通過(guò)使用還原劑例如硼氫化鈉或氰基硼氫化鈉還原亞胺鍵來(lái)穩(wěn)定化。另一方面，涂層可以包含共價(jià)結(jié)合到涂層的另一個(gè)分子例如多糖上的調(diào)理素。典 型情況下，包含活性劑的粒子首先用多糖涂層，然后使用例如前面剛剛描述過(guò)的共價(jià)鍵 合方法將多糖與調(diào)理素反應(yīng)。多糖或其他適合與調(diào)理素結(jié)合的分子可用于對(duì)涂層的性 質(zhì)改性，例如通過(guò)增加涂層與粒子核心的結(jié)合親和性。適合的多糖包括但不限于葡聚糖 (dextran)、葡聚糖(glucan)、纖維素、淀粉、糖原、果聚糖、幾丁質(zhì)和肝素。多糖的分子量一 般在約5，000道爾頓到約250，000道爾頓之間，例如在約8，000道爾頓到約200，000道爾 頓之間，和/或約10，000道爾頓到約150，000道爾頓之間，但是也可以使用更高或更低分 子量的多糖。涂層還可以包括單一表面活性劑或表面活性劑的組合。表面活性劑可以選自各種 不同的已知陰離子表面活性劑、陽(yáng)離子表面活性劑、兩性離子表面活性劑、非離子表面活性 劑和表面活性生物改性劑。適合的表面活性劑包括本文前面提到的表面活性劑。示例性的 表面活性劑包括但不限于泊洛沙姆、磷脂、聚乙二醇結(jié)合的磷脂和聚山梨酸化物。示例性的 表面活性劑組合包括但不限于泊洛沙姆和磷脂、泊洛沙姆和聚乙二醇結(jié)合的磷脂、以及泊洛沙姆和聚山梨酸化物。或者，涂層可以基本上不含表面活性劑(例如少于2wt. %的表面 活性劑，少于Iwt. %的表面活性劑或少于0. 5wt. %的表面活性劑)。涂層粒子的細(xì)胞攝取本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案涉及增加活性劑的細(xì)胞攝取的方法，所述方法包括將細(xì)胞 與大量表面改性粒子相接觸，所述粒子包含粒子核心和與粒子核心結(jié)合的涂層。細(xì)胞可以 是細(xì)胞吞噬性細(xì)胞、弱細(xì)胞吞噬性細(xì)胞或非細(xì)胞吞噬性細(xì)胞。粒子核心包含活性劑，涂層包 含調(diào)理素(例如具有IgG同種型的抗體或例如C3b和C5的補(bǔ)體蛋白)，并且表面改性粒子 具有從約Inm到約2，OOOnm的平均粒度。由此，相對(duì)于使用不含上述涂層的粒子時(shí)活性劑 的攝取，細(xì)胞對(duì)活性劑的攝取增加了。細(xì)胞攝取允許將活性劑投送到需要治療的靶組織，因?yàn)楸竟_的能夠增加攝取涂 層粒子的各種不同細(xì)胞類型，也運(yùn)輸?shù)交疾』虬l(fā)炎組織。例如，在感染或炎癥早期嗜中性 細(xì)胞占統(tǒng)治地位，隨后是離開血管并進(jìn)入被感染組織的單核細(xì)胞衍生的吞噬細(xì)胞占統(tǒng)治地 位。固定的巨噬細(xì)胞(組織細(xì)胞)大量存在于肝臟、神經(jīng)系統(tǒng)、肺、淋巴結(jié)、骨髓和幾種其它 組織中。大多數(shù)受細(xì)菌、病毒或真菌病原體感染并發(fā)炎的組織，可以通過(guò)投送具有通過(guò)趨化 性而被導(dǎo)向這些炎癥位點(diǎn)的傾向性的藥物裝載細(xì)胞(例如粒細(xì)胞)來(lái)定向。因此，通過(guò)促 進(jìn)細(xì)胞攝取，將藥劑從這些細(xì)胞釋放到治療上最需要的區(qū)域中。因此，裝載有涂層粒子的細(xì) 胞促進(jìn)了藥劑向靶組織的投送以治療疾病或紊亂。這樣的疾病和紊亂包括但不限于感染性 疾病或紊亂、炎性疾病或紊亂、神經(jīng)變性疾病或紊亂和增殖性疾病或紊亂。存在大量能夠攝取涂層粒子的細(xì)胞吞噬性細(xì)胞。這些細(xì)胞包括但不限于巨噬細(xì) 胞、單核細(xì)胞、粒細(xì)胞、無(wú)粒細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞。本發(fā)明還包含弱細(xì)胞吞噬性細(xì)胞和非細(xì) 胞吞噬性細(xì)胞。因此，其他適合的細(xì)胞類型包括但不限于T-淋巴細(xì)胞、B-淋巴細(xì)胞、裸細(xì) 胞、自然殺傷細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、血紅細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、干細(xì)胞、骨細(xì)胞、血管細(xì)胞、器 官組織細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、嗜堿性細(xì)胞、嗜曙紅細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞。還有其他細(xì)胞可 用于向?qū)ο笸端退幬锘钚曰衔铩Ｈ魏渭?xì)胞類型，只要它能夠攝取粒子，都可用于本發(fā)明 中。細(xì)胞對(duì)粒子的攝取可以包括細(xì)胞吞噬作用或其他胞吞作用，或?qū)⒘Ｗ痈街?吸附在細(xì) 胞表面上。與細(xì)胞表面結(jié)合的粒子也可以通過(guò)胞飲作用攝入細(xì)胞內(nèi)，胞飲作用是細(xì)胞膜的 內(nèi)陷形成了包圍粒子的細(xì)胞內(nèi)囊狀物。在胞飲作用(“細(xì)胞飲用”)中，吞入的粒子相對(duì)較小 (例如20nm) (Watts等，“胞吞作用發(fā)生了什么以及如何發(fā)生 ”(Endocytosis :what goes in and how ？ ), Journal of Cell Science，1992，volume 103 (1)，1-8 頁(yè))。胞飲作用在 幾乎所有真核細(xì)胞中連續(xù)發(fā)生。正如在本文中解釋的，在有利情況下，粒子包括促進(jìn)細(xì)胞攝取的涂層。尤其是，涂 層能夠促進(jìn)細(xì)胞例如單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和T-淋巴細(xì)胞的攝取，這些細(xì)胞能夠通過(guò)已知機(jī) 制例如趨化性運(yùn)輸?shù)窖装Y、感染和/或腫瘤的位點(diǎn)，并由此將粒子投送到特定靶組織在本發(fā)明的一個(gè)方面，細(xì)胞與表面改性粒子的接觸(以形成裝載有活性劑的細(xì) 胞)離體進(jìn)行(即在哺乳動(dòng)物對(duì)象體外)?？商孢x地或此外，細(xì)胞與表面改性粒子的接觸 可以在體內(nèi)進(jìn)行(即在哺乳動(dòng)物內(nèi)部)。在接觸步驟過(guò)程中使用了能夠有效治療疾病或紊 亂的量的表面改性粒子。本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解，一定量的粒子可能被不運(yùn)輸?shù)侥繕?biāo)靶 組織的細(xì)胞類型所攝取，或者不被細(xì)胞在目標(biāo)靶組織處釋放。因此，本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理 解，給藥的粒子量可以通過(guò)常規(guī)方案進(jìn)行優(yōu)化，只要這些量處于已建立的給藥方案的范圍內(nèi)。為了進(jìn)行離體給藥，可以使用細(xì)胞分離器或單采血液成分術(shù)裝置從哺乳動(dòng)物對(duì)象 分離細(xì)胞。例如，可以使用CS-3000 細(xì)胞分離器(Fenwal Inc.，Lake Zurich，111.)或 IS0LEX 細(xì)胞分離器(BaxterHealthcare Corp.，Deerfield，111.)分離各種不同細(xì)胞。也 可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其他離體細(xì)胞分離方法來(lái)獲得可用于本發(fā)明的細(xì)胞。這 樣的方法包括但不限于外周血單采血液成分書、通過(guò)例如G-CSF、M-CSF或GM-CSF遷移骨 髓細(xì)胞、或通過(guò)脊椎、胸骨、腰或髂脊穿刺直接取出骨髓細(xì)胞。離體細(xì)胞可以維持在細(xì)胞培 養(yǎng)基或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其他分離系統(tǒng)中。這樣的培養(yǎng)基的實(shí)例是Alserver' s溶 液、Ames'培養(yǎng)基、Eagle' s基本培養(yǎng)基、CHO(中華倉(cāng)鼠卵巢)細(xì)胞培養(yǎng)基、Click' s培 養(yǎng)基、Dulbecco' s修改的Eagle' s培養(yǎng)基、磷酸鹽緩沖鹽水、磷酸鹽緩沖的葡萄糖或蔗 糖、Earle' s平衡鹽溶液、基因療法培養(yǎng)基_3、Gey ‘ s平衡鹽溶液、Glasgow極限必須培養(yǎng) 基、Hanks'平衡鹽溶液、雜交瘤培養(yǎng)基、Iscove' s修改的Dulbecco‘ s培養(yǎng)基、含有糖的 Krebs-Henseleit 緩沖液、Leibovitz 培養(yǎng)基(L-15)、M16 培養(yǎng)基、McCoy' s 培養(yǎng)基、MCDB、 MDBK (Madin-Darby 牛腎)、MDCK (Madin-Darby 狗腎)、培養(yǎng)基 199、NCTC、Ham' s 培養(yǎng)基(例 如營(yíng)養(yǎng)混合物F-10)、C00n' s修改的Ham' s培養(yǎng)基、RPMI，以及其他例如在《用于生命科 學(xué)研究的生物化學(xué)品和反應(yīng)試劑》(Biochemicals&Reagents for LifeScience Research, Sigma-Aldrich Co. (St. Louis,Mo. ,USA))中列出的培養(yǎng)基。所描述的培養(yǎng)的目的，可以是 為了簡(jiǎn)單地保存而不損失細(xì)胞，或通過(guò)適當(dāng)添加促進(jìn)細(xì)胞擴(kuò)增的生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子和營(yíng) 養(yǎng)物質(zhì)用于細(xì)胞增殖或擴(kuò)增的目的。這種擴(kuò)增將使患者必須準(zhǔn)備取出細(xì)胞樣品的次數(shù)降到 最低。分離后，細(xì)胞可以與涂層粒子接觸并溫育一段短時(shí)間，以允許細(xì)胞攝取粒子。在離 體步驟中使用的粒子濃度將隨幾種因素變化，包括但不限于所用細(xì)胞的類型、細(xì)胞的濃度、 使用的活性劑、小粒子分散體的尺寸、待治療的疾病等。但是，一般來(lái)說(shuō)，細(xì)胞分離物與約1 到約300mg/ml本發(fā)明的粒子相接觸。在粒子與細(xì)胞接觸的過(guò)程中，粒子的濃度高于熱力學(xué) 飽和溶解度，從而允許粒子在攝取和投送到哺乳動(dòng)物對(duì)象的過(guò)程中保持在顆粒形式。細(xì)胞 可以與粒子溫育長(zhǎng)達(dá)24小時(shí)或以上，以允許細(xì)胞攝取足夠的藥物粒子?？梢允褂萌魏文軌驁?zhí)行活性劑粒子被離體細(xì)胞攝取的方法，其必要條件是方法不 破壞細(xì)胞或使細(xì)胞不能用于向?qū)ο蠼o藥。例如，可以使用通過(guò)生物識(shí)別分子對(duì)粒子的位點(diǎn) 特異性投送。參見例如美國(guó)專利公開號(hào)No. 2003/0092069，在此引為參考，它公開了通過(guò) 中空納粒將基因轉(zhuǎn)移到特定細(xì)胞或組織中。其他裝載離體細(xì)胞的方法包括電穿孔、超聲穿 孔，以及其他破壞細(xì)胞膜(例如超聲)并能將固體顆粒插入細(xì)胞的機(jī)械手段。超聲波已被 Zarnitsyn等(Zarnitsyn等，“影響超聲介導(dǎo)的DNA轉(zhuǎn)染的優(yōu)化的物理參數(shù)”(Physical parameters influencingoptimization of ultrasound-mediated DNA transfection)， Ultrasound Med. Biol.，2004，volume 30 (4)，527-538 頁(yè))成功地用于瞬時(shí)破壞細(xì)胞膜， 由此促進(jìn)了 DNA裝載于活細(xì)胞中。其他機(jī)械方法對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域有經(jīng)驗(yàn)的人來(lái)說(shuō)是公知 的，這些方法被包含作為本公開的一部分。使細(xì)胞膜瞬時(shí)去穩(wěn)定的化學(xué)方法也是眾所周知 的。轉(zhuǎn)染試劑包含表面活性劑，并包括293FECTIN 轉(zhuǎn)染試劑和LIP0FECTAMINE ，二者都是 Invitrogen Corporation (Carlsbad, Calif.)的產(chǎn)品。用于將DNA轉(zhuǎn)化到細(xì)胞中的表面活 性劑的另一個(gè)實(shí)例是來(lái)自 Synvolux Therapeutics B. V. L. J. (Groningen，荷蘭)的 SAINT 試劑，該試劑是基于吡啶鹽表面活性劑。下面對(duì)粒子的描述也適用于本文公開的所有實(shí)施方案。對(duì)于溶解度較低的藥物來(lái) 說(shuō)，可以使用細(xì)胞裝載步驟，只要細(xì)胞能夠以比競(jìng)爭(zhēng)的溶解過(guò)程更快的速度攝取涂層活性 劑粒子即可。粒子應(yīng)該具有適合的尺寸，以允許細(xì)胞攝取涂層粒子并在粒子完全溶解前將 它們投送到靶組織。因?yàn)橐阎\(yùn)輸?shù)侥繕?biāo)靶組織的細(xì)胞能夠攝取粒子，因此活性劑最終從 細(xì)胞釋放到靶組織的附近。此外，活性劑組合物的濃度將保持高于組合物的飽和溶解度，以 便粒子在攝取過(guò)程中能夠保持在晶體狀態(tài)。下面對(duì)粒子的描述也適用于本文公開的所有實(shí)施方案。表面改性粒子的給藥可以 通過(guò)本技術(shù)領(lǐng)域已知的各種不同的用于給藥粒子的技術(shù)來(lái)進(jìn)行。給藥包括將表面改性粒子 給藥于哺乳動(dòng)物對(duì)象。適合的給藥表面改性粒子的方法包括但不限于靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、肌 肉內(nèi)、皮下、真皮內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、鞘內(nèi)、硬膜外、腦內(nèi)、經(jīng)頰、直腸、局部、透皮、經(jīng)口、鼻內(nèi)、經(jīng)肺途 徑、腹膜內(nèi)和/或眼內(nèi)給藥粒子。給藥的步驟可以通過(guò)快速濃注、通過(guò)間歇灌注或通過(guò)連續(xù) 灌注進(jìn)行。表面改性粒子的量和投送方法可以由熟練的臨床醫(yī)師來(lái)決定。各種不同的因 素將影響投送的量和方法，所述因素包括但不限于所用的細(xì)胞類型(對(duì)于離體給藥方法來(lái) 說(shuō))、待治療的對(duì)象的性別、體重和年齡、待治療的疾病或紊亂的類型和成熟度、被給藥的活 性劑，等等。一般來(lái)說(shuō)，活性劑可以Ipg化合物/kg體重到1000mg/kg、0. lmg/kg到IOOmg/ kg、0. lmg/kg到50mg/kg和1到20mg/kg的劑量提供，以或長(zhǎng)或短的時(shí)間間隔、例如每?jī)商臁?每周兩次、每周一次、或每日兩或三次，以每日劑量或等價(jià)的劑量給藥。本發(fā)明的方法可以治療各種不同疾病或紊亂，所述疾病或紊亂包括但不限于感染 性疾病或紊亂、炎性疾病或紊亂、神經(jīng)變性疾病或紊亂和增殖性疾病或紊亂。就此而言，這 些疾病或紊亂的癥狀可以通過(guò)本發(fā)明的方法緩解。本文使用的“感染性疾病或紊亂”是指由病原微生物例如細(xì)菌、病毒、寄生蟲或真 菌引起的病癥。能夠從本公開的方法獲益的感染性疾病或紊亂包括但不限于病毒感染(包 括反轉(zhuǎn)錄病毒感染)例如登革熱、腸道病毒感染、HIV、乙肝病毒、丙肝病毒和流感病毒，真 菌感染，寄生蟲感染例如非洲錐蟲病和瘧疾，以及細(xì)菌感染例如霍亂、腦膜炎和結(jié)核病。本文使用的“炎性疾病或紊亂”是指其特征為發(fā)紅、發(fā)熱、腫脹和疼痛(即炎癥)的 病癥，典型地涉及組織損傷或破壞。炎性疾病或紊亂與白細(xì)胞內(nèi)流和/或白細(xì)胞趨化性顯著 相關(guān)。炎性病癥可以由病原生物體或病毒的感染引起，或由非感染性事件引起，所述非感染性 事件包括但不限于外傷或心肌梗塞或中風(fēng)后的再灌注、對(duì)外來(lái)抗原的免疫應(yīng)答和自身免疫應(yīng) 答。因此，可以用本發(fā)明的方法和化合物治療的炎性病癥包括與特異性防御系統(tǒng)的反應(yīng)有關(guān) 的病癥、與非特異性防御系統(tǒng)的反應(yīng)有關(guān)的病癥以及與炎性細(xì)胞活化有關(guān)的病癥。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“特異性防御系統(tǒng)”是指免疫系統(tǒng)對(duì)特定抗原的存在發(fā)生反應(yīng) 的成分。由特異性防御系統(tǒng)的應(yīng)答所產(chǎn)生的炎性病癥的實(shí)例包括但不限于對(duì)外來(lái)抗原的典 型應(yīng)答、自身免疫疾病和B-細(xì)胞和/或T-細(xì)胞(即B-淋巴細(xì)胞和/或T-淋巴細(xì)胞)介 導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)。慢性炎性疾病、移植的實(shí)體組織和器官包括但不限于腎臟和骨髓移 植物的排斥、以及移植物抗宿主疾病(GVHD)，是由特異性防御系統(tǒng)的應(yīng)答所產(chǎn)生的炎性病 癥的其他實(shí)例。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“非特異性防御系統(tǒng)”是指由不能免疫記憶的白細(xì)胞(例如包 括但不限于嗜中性細(xì)胞、嗜曙紅細(xì)胞和嗜堿性細(xì)胞的粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞)介導(dǎo)的炎性病癥。至少部分由非特異性防御系統(tǒng)的反應(yīng)所產(chǎn)生的炎性病癥的實(shí)例包括 但不限于成人(急性)呼吸窘迫綜合征(ARDS)、多器官損傷綜合征、再灌注損傷、急性腎小 球腎炎、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、具有急性炎性成分的皮炎、急性化膿性腦膜炎、其他中樞神經(jīng)系統(tǒng) 炎性病癥，其包括但不限于中風(fēng)、熱損傷、炎性腸病、與粒細(xì)胞灌輸相關(guān)的綜合征以及細(xì)胞 因子誘導(dǎo)的毒性。本發(fā)明的治療方法包括用于改善與炎性細(xì)胞活化有關(guān)的病癥的方法?！把仔约?xì)胞 活化”是指由刺激物(包括但不限于細(xì)胞因子、抗原和自身抗體)誘導(dǎo)的增殖性細(xì)胞應(yīng)答、 可溶性介導(dǎo)物(包括但不限于細(xì)胞因子、氧自由基、酶、前列腺素類化合物和血管活性胺) 的產(chǎn)生，或炎性細(xì)胞(包括但不限于單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、粒細(xì)胞 (包括嗜中性細(xì)胞、嗜堿性細(xì)胞和嗜曙紅細(xì)胞的多形核淋巴細(xì)胞)、肥大細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、 朗格漢斯細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞)中新的或增加數(shù)量的介導(dǎo)物(包括但不限于主要組織相容性抗 原和細(xì)胞黏附分子)的細(xì)胞表面表達(dá)。本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)認(rèn)識(shí)到，這些細(xì)胞中這些表型 的一種或其組合的活化，可能有助于炎性病癥的引發(fā)、繼續(xù)或加劇。其他可以成功治療的疾病或紊亂包括以炎癥或感染為特征的疾病或紊亂，包括但 不限于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)(Graves' disease)、重癥肌無(wú)力、甲狀腺炎、糖尿 病、炎性腸病、自體免疫性卵巢炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡和干燥綜合征(Sjegren's syndrome)。可以成功治療的神經(jīng)變性疾病或紊亂的實(shí)例包括但不限于帕金森氏癥、阿茨海默 氏病、多發(fā)性硬化、腦脊髓炎、腦炎(包括HIV腦炎)、亨廷頓舞蹈癥、肌萎縮性側(cè)索硬化(也 稱為L(zhǎng)ou Gehrig' s病)、額顳癡呆、朊病毒疾病、克雅氏病和腎上腺腦白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良。其 他可以成功治療的神經(jīng)變性疾病或紊亂包括Pick' s病、額顳葉變性、進(jìn)行性失語(yǔ)和語(yǔ)義 性癡呆。朊病毒疾病、也稱為傳染性海綿狀腦病(TSE)，包括克雅氏病、克雅氏病的新變體、 Gerstmann- Straussler -Scheinker綜合征、致死性家族性失眠癥和庫(kù)魯病。神經(jīng)變性疾 病或紊亂也可以是亞歷山大病、進(jìn)行性腦灰質(zhì)萎縮、共濟(jì)失調(diào)毛細(xì)血管擴(kuò)張癥、Batten病 (也禾爾為 Spielmeyer-Vogt-Sjogren-Batten 病)、Canavan 病、Cockayne 綜合征、皮質(zhì)基底 節(jié)變性、HIV相關(guān)癡呆、肯尼迪病、Krabbe病、路易體癡呆、Machado-Joseph病(脊髓小腦 性共濟(jì)失調(diào)3型)、多系統(tǒng)萎縮、神經(jīng)萊姆病、Pelizaeus-Merzbacher病、原發(fā)性側(cè)索硬化、 Refsum' s病、Sandhoff病、Schilder' s病、精神分裂癥、脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)、脊髓性肌萎 縮、Steele-Richardson-Olszewski 病和脊髓癆?？梢詮谋竟_的方法獲益的增殖性疾病或紊亂包括但不限于結(jié)腸癌、腎癌、非小 細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌、宮頸癌、乳腺癌、前列腺癌、腦癌、肉瘤、黑素瘤、白血病、急性淋巴細(xì) 胞性白血病、急性髓性白血病、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、慢性髓性白血病、霍奇金淋巴瘤、非 霍奇金淋巴瘤、骨髓瘤和成膠質(zhì)細(xì)胞瘤。甲狀腺炎包括橋本甲狀腺炎、亞急性甲狀腺炎(也 稱為de Quervain' s甲狀腺炎)、無(wú)癥狀性甲狀腺炎(也稱為無(wú)痛性甲狀腺炎)、產(chǎn)后甲狀 腺炎、藥物誘導(dǎo)的甲狀腺炎、輻射誘導(dǎo)的甲狀腺炎和急性化膿性甲狀腺炎。參考下面的實(shí)施例將可以更好地理解本公開，這些實(shí)施例不打算是限制性的，而 僅僅是提出了本公開的示例性實(shí)施方案。
實(shí)施例實(shí)施例1
棘1減,_丨_髓晝(SPIO)鮮_丨1高碘酸鈉、氰基硼氫鈉、新亞銅試劑(neocuproine)、乙酸銨、抗壞血酸和高錳 酸鉀購(gòu)自Sigma-Aldrich，St. Louis，M0。鼠類和人類IgG F (ab ‘片段購(gòu)自 Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc. , West Grove, ΡΑ。大鼠 IgG2a 抗 MsCD 16/ CD32抗體(FcgRIII/FcgRII) (2. 4G2)、大鼠IgG2a抗三硝基苯酚(TNP)抗體同種型對(duì)照、 IgGl 抗-Hu CD16 抗體(FcgRIII) (3G8)、IgGl 抗 Hu_CD32 抗體(FcgRII) (3D3)、IgGl 抗 TNP 抗體(107. 3)購(gòu)自 BD Biosciences, San Jose, CA。IgGl 抗 _HuCD64 抗體(FcgRI) (10. 1)購(gòu)自 eBioscience，San Diego, CA。Alexa Fluor 488 羧酸、琥珀酰亞胺基酯和 Alexa Fluor 488 輕胺購(gòu)自 Invitrogen0 菲立磁(Ferumoxide) (Feridex IV , Bayer HealthcarePharmaceuticals，Wayne，NJ)是超順磁性氧化鐵(SPIO)粒子，平均流體力學(xué)尺 寸為150nm，鐵濃度為11. 2mg/mL。SPIO 納粒(NP)使用 Microcon YM-30 離心過(guò)濾裝置(Millipore，Billerica, ΜΑ) 濃縮，并針對(duì)乙酸緩沖液(0. 1Μ，ρΗ 5. 5)在4°C透析過(guò)夜。圍繞SPIO的鐵核心的葡聚糖 T-10，通過(guò)與IOmM偏高碘酸鈉在暗處在室溫下反應(yīng)1小時(shí)而被氧化。為了除去過(guò)量的反 應(yīng)試劑，將氧化的SPIO針對(duì)磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)在4°C透析過(guò)夜。將人類IgG(BaXter Heathcare Corporation, Westlake Village, CA)或鼠類 IgG(Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.)加入到氧化的NP在PBS和50mM氰基硼氫鈉在IM NaOH中的懸液 中，終濃度為2mg/ml IgG和10mg/ml SPIO0溫育在輕柔攪拌下在室溫進(jìn)行過(guò)夜，通過(guò)加入 50mMTris-HCl淬滅反應(yīng)。使用S印harose CL-4B柱從NP中除去游離IgG。NP結(jié)合物反應(yīng) 的Sepharose CL-4B層析顯示出NP在20ml到25ml之間洗脫，游離的IgG在45ml到60ml 之間洗脫(圖1)。粒徑通過(guò)動(dòng)態(tài)光散射測(cè)量。與NP共價(jià)結(jié)合的IgG的存在和游離IgG的量使用微 量二喹林甲酸(BCA)測(cè)定法(Pierce Biotechnology，Rockford，IL)估算。結(jié)合產(chǎn)率據(jù)估 算為約50%。在平行制備物中，將Alexa Fluor 488羥胺、小鼠IgG和小鼠與人類IgG F(ab' )2片段與醛SPIO在室溫下在PBS緩沖液中反應(yīng)，以獲得用于Fc阻斷研究的對(duì)照試 劑并合成合并的熒光和抗體結(jié)合的SPIO制備物。對(duì)于熒光納米制劑來(lái)說(shuō)，將Alexa Fluor 488羧酸琥珀酰亞胺基酯與IgG SPIO在碳酸鹽-碳酸氫鹽緩沖液中結(jié)合2小時(shí)。使用PD-IO 柱將游離染料與結(jié)合物分離開。在一個(gè)月期間，在4°C下，在選定的時(shí)間點(diǎn)，通過(guò)測(cè)量尺寸和多分散指數(shù)研究了 IgG-SPIO的穩(wěn)定性(圖2)。在剛剛結(jié)合后，IgG-SPIO的尺寸為175nm，多分散指數(shù)為約 0. 2。在前兩周，沒(méi)有觀察到流體動(dòng)力學(xué)直徑和尺寸分布的顯著改變。但是，結(jié)合后30天時(shí)， IgG-SPIO增加到最高270nm，多分散指數(shù)約為0. 3，表明了有限的NP聚集。實(shí)施例2單核細(xì)胞、單核細(xì)胞衍生的巨噬細(xì)胞(MDM)和骨髓衍生的巨噬細(xì)胞(BMM)的分離 和培養(yǎng)人類單核細(xì)胞通過(guò)白細(xì)胞清除術(shù)從HIV-I和肝炎血清反應(yīng)陰性的供體獲得，并通 過(guò)反向流離心淘洗進(jìn)行純化。制備了 Wright染色的細(xì)胞離心涂片器(cytospin)，通過(guò)用 抗⑶68抗體(克隆KP-1)免疫標(biāo)記來(lái)測(cè)定細(xì)胞純度。為了產(chǎn)生單核細(xì)胞衍生的巨噬細(xì)胞(MDM)，將淘洗過(guò)的單核細(xì)胞在37°C和加濕大氣環(huán)境下，以2X IO6個(gè)細(xì)胞/ml的濃度在添 加了 10%熱失活的合并人血清、谷氨酰胺、50 μ g/ml慶大霉素、10 μ g/ml環(huán)丙沙星和 1000U/ml重組人類巨噬細(xì)胞集落刺激因子(MCSF)的Dulbecco，s修改的Eagles培養(yǎng)基 (DMEM) (ffyeth Inc.，Cambridge，·的慷慨禮物)中，培養(yǎng)多達(dá)7天。4_5周齡的雄性BALB/ c小鼠(Charles River Laboratory, Inc.，MA)被用作骨髓衍生的巨噬細(xì)胞(BMM)供體。取 下股骨，取出骨髓，將細(xì)胞解離成單細(xì)胞懸液，添加1000單位/ml MCSF (ffyeth, Inc.)培養(yǎng) 10天。使用FACS Calibur流式細(xì)胞儀(BD Biosciences)，通過(guò)流式細(xì)胞分析證明了培養(yǎng) 的 BMM 是 98% CDllb+ 的。實(shí)施例3凃?qū)拥膕pio^mmmM^mmmMm將人類單核細(xì)胞或MDM轉(zhuǎn)移到8孔Lab-Tek II腔室玻片中(0. 5X IO6個(gè)細(xì)胞/ 孔)。添加SPIO到鐵的終濃度為0.5mg/ml，并在37°C溫育1小時(shí)。在清洗三次后，將細(xì)胞 用4%聚甲醛在室溫固定30分鐘。對(duì)于Fc阻斷研究來(lái)說(shuō)，將人類IgG Fc片段或抗Fc受 體抗體(克隆3G8、3D3和10. 1) (10 μ g/ml)添加到MDM培養(yǎng)物中，在37°C溫育20分鐘，然 后將鐵的終濃度為0. 5mg/ml的SPI0、IgG-SPIO或F(ab' )2_SPI0溫育0. 5、1、2和4小時(shí)。 只具有培養(yǎng)基和具有抗TNP抗體同種型對(duì)照107. 3的細(xì)胞被用作對(duì)照。對(duì)于鼠類BMM來(lái)說(shuō)， 步驟與人類細(xì)胞相同，但是使用小鼠IgG Fc片段和IgG FcgRIII/FcgRII作為Fc阻斷物。 在用2X PBS清洗細(xì)胞后，通過(guò)熒光顯微術(shù)觀察細(xì)胞。鐵含量通過(guò)菲洛嗪(ferrozine)進(jìn)行估算(參見下文)。鐵的存在通過(guò)使用5% 亞鐵氰化鉀和5%鹽酸的普魯士藍(lán)染色來(lái)觀察。在清洗三次后，將細(xì)胞用核固紅復(fù)染。使 用IgG-SPIO時(shí)觀察到了鐵的高積累，然而天然SPIO被人類單核細(xì)胞的攝取是有限的。單 核細(xì)胞和MDM的存活率通過(guò)活/死測(cè)定法估算(Axxora，LLC, San Diego, CA)。將鐵標(biāo)記的 單核細(xì)胞與0. 5 μ M溴乙錠均二聚體-1和1 μ M鈣黃綠素AM的混合物，在37°C和加濕大氣 環(huán)境下溫育25分鐘。將細(xì)胞清洗三次，用4%聚甲醛在室溫固定30分鐘，并通過(guò)熒光顯微 術(shù)觀察。鈣黃綠素-AM積累和被胞質(zhì)酯酶的切開將活細(xì)胞標(biāo)記為綠色，溴乙錠均二聚體-1 將死細(xì)胞的核標(biāo)記為紅色。人類單核細(xì)胞的存活率一致地高于90%。細(xì)胞存活率通過(guò)錐蟲 藍(lán)排斥得到證實(shí)，其中將鐵標(biāo)記的人類單核細(xì)胞與錐蟲藍(lán)溫育15分鐘，并洗滌三次。大多 數(shù)鐵標(biāo)記的單核細(xì)胞排斥錐蟲藍(lán)，證明了 IgG-SPIO的內(nèi)化不誘導(dǎo)毒性效應(yīng)。未標(biāo)記的細(xì)胞 和使用70%甲醇溶液殺死的人類單核細(xì)胞用作對(duì)照。透射電子顯微術(shù)(TEM)被用于研究SPIO在人類單核細(xì)胞中的位置。為了進(jìn) 行TEM，將人類單核細(xì)胞和MDM培養(yǎng)在聚d-賴氨酸涂層的Thermanox蓋玻片(Thermo Fisher Scientific, Rochester, NY)上，與SPIO在37 °C溫育1小時(shí)，并用磷酸鹽緩沖 鹽水洗滌三次。將它們固定在含有2%戊二醛、2%低聚甲醛、0.5%丙烯醛的pH 7. 2的 0. IMSorensen' s磷酸鹽緩沖液中，并在1 %四氧化鋨水溶液中后固定30分鐘。在清洗后， 將人類單核細(xì)胞在一系列逐級(jí)變化的乙醇溶液中脫水，每步5分鐘，并通過(guò)一系列逐級(jí)變 化的乙醇/araldite環(huán)氧樹脂溶液用araldite環(huán)氧樹脂包埋介質(zhì)浸透。將蓋玻片培養(yǎng)物一 側(cè)朝下包埋在空白araldite環(huán)氧樹脂盤上，在烤箱中在65°C放置過(guò)夜進(jìn)行聚合，并通過(guò)浸 在液氮中取出。將單核細(xì)胞和MDM集落切下并正面固定，用于超薄切片。將切片放置在200 目銅格網(wǎng)上，將格網(wǎng)用乙酸雙氧鈾和Reynold' s檸檬酸鉛染色。使用以SOKv運(yùn)行的Philips LS410TEM檢測(cè)細(xì)胞。在人類單核細(xì)胞的核周緣中觀察到染色質(zhì)的積累。IgG-SPIO 被攝取到細(xì)胞中的內(nèi)吞囊泡中，其尺寸達(dá)到0.7-1 μ m。IgG-SPIO的分布是細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的，NP 的優(yōu)選位置在小的膜皺褶上。載有鐵的囊泡的數(shù)量和尺寸二者在IgG-SPIO劑型的情況下 都增加了。使用菲洛嗪比色測(cè)定法估算了鐵含量。為了進(jìn)行這種測(cè)定，將人類單核細(xì)胞和MDM 的雙份批樣在24孔板中進(jìn)行培養(yǎng)(1父106個(gè)細(xì)胞/孔)。將5 10在41和371下，以0. 5mg/ ml的終濃度溫育0. 5、1、2、4和8小時(shí)。將鐵標(biāo)記的細(xì)胞用PBS清洗三次，用50mM NaOH在 搖床上在室溫裂解1小時(shí)。將細(xì)胞裂解液的等分試樣以同樣體積與IOmM鹽酸(HCl)混合， 以便溶解SPI0。向裂解液中加入鐵釋放試劑，即1.4M HCl和4. 5% (w/v)KMnO4在蒸餾水中 的混合物，并將混合物在60°C溫育2小時(shí)。菲洛嗪測(cè)定試劑從預(yù)先溶解在甲醇中的6mM菲 洛嗪、2. 5M乙酸銨、IM抗壞血酸和6. 5mM新亞銅試劑制備在蒸餾水中。將樣品轉(zhuǎn)移到96孔 板中，并在540nm處讀數(shù)。在同樣反應(yīng)條件下使用0. 2mg/m的鐵儲(chǔ)用溶液(Ricca Chemical Company, Arlington, TX)制備了鐵標(biāo)準(zhǔn)品。將鐵的濃度值歸一化到通過(guò)微量BCA測(cè)定法 (PierceBiotechnology)測(cè)定的蛋白濃度。正如通過(guò)比色測(cè)定法所測(cè)定的，人類IgG的共價(jià)結(jié)合加速了 SPIO的攝取(圖3)。 1小時(shí)后，細(xì)胞的鐵濃度為 0.2yg鐵/μ g蛋白，達(dá)到了最大值的一半。與IgG-SPIO相 比，SPIO隨時(shí)間的內(nèi)化在8小時(shí)的溫育時(shí)間內(nèi)是線性的，在4到8小時(shí)之間從 0. 03變化 到0. 06 μ g鐵/ μ g蛋白。對(duì)于大部分研究的時(shí)間來(lái)說(shuō)，與用未涂層NP處理的細(xì)胞相比，NP
含量高出接近一個(gè)數(shù)量級(jí)。也通過(guò)對(duì)每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的三份平行樣的MRI分析，進(jìn)行了鐵標(biāo)記的人類單核細(xì)胞的 T2弛豫率測(cè)量。MRI被用于檢測(cè)單核細(xì)胞的標(biāo)記和確保結(jié)合步驟不改變NP的磁性性質(zhì)。 SPIO標(biāo)記的細(xì)胞模型在200 μ 1的塑料管中被制備成，將100 μ 1 0.5 X IO6個(gè)細(xì)胞/ml懸浮 在ΙΟΟμΙ 2%瓊脂糖中。根據(jù)菲洛嗪比色測(cè)定法的結(jié)果，當(dāng)人類單核細(xì)胞暴露于IgG-SPIO 時(shí)，鐵的攝取急劇增加(圖4)。SPIO的最高水平在溫育4小時(shí)后達(dá)到。盡管存在氧化步驟， IgG-SPIO的弛豫性質(zhì)仍被保留。實(shí)施例4粒子的細(xì)胞攝取為了檢測(cè)尺寸和葡聚糖涂層對(duì)細(xì)胞攝取的影響，將用IOOkDa葡聚糖涂層的尺寸 為62到394nm的SPIO與人類單核細(xì)胞在37°C溫育1小時(shí)(圖5A)。對(duì)于具有同樣的葡聚 糖分子量的最大的NP來(lái)說(shuō)，檢測(cè)到了較大的鐵攝取。用IOkDa葡聚糖(Feridex )涂層的 SPI0，與用IOOkDa葡聚糖涂層的其他NP相比，以較高的水平攝取到單核細(xì)胞中。在1小時(shí) 的氧化后，SPIO與不同濃度的IgG(0. 5、1、2和4mg/ml)結(jié)合，并將每種結(jié)合的IgG-SPIO復(fù) 合物與人類單核細(xì)胞在37°C溫育0. 5和1小時(shí)。在不同IgG濃度下制備的IgG-SPIO，在與 單核細(xì)胞溫育0. 5和1小時(shí)后，其細(xì)胞攝取沒(méi)有很大差別(圖5B)。這些結(jié)果表明或者細(xì)胞 表面被SPIO飽和，或者內(nèi)化作用不依賴于配體密度。對(duì)于這些特定實(shí)驗(yàn)來(lái)說(shuō)，IgG的非共 價(jià)結(jié)合沒(méi)有誘導(dǎo)攝取的增加(圖5C)。然而，由葡聚糖圍繞著NP的鐵核心所產(chǎn)生的空間阻 擋，可能阻止了 IgG的吸收。當(dāng)溫育在4°C下進(jìn)行時(shí)，IgG-SPIO攝取被部分抑制(圖5D)。 接下來(lái)，比較了 IgG-SPIO被單核細(xì)胞和MDM的攝取，并發(fā)現(xiàn)對(duì)于兩種細(xì)胞類型來(lái)說(shuō)事實(shí)上 是相等的(圖5E)。結(jié)果支持了下述想法，即在這兩種細(xì)胞類型中起作用的是相似的鐵攝取機(jī)制。為了研究?jī)?nèi)化的機(jī)制，將濃度為lmg/ml的IgG-SPIO和游離IgG與人類單核細(xì)胞共 溫育(圖5F)。在用游離IgG阻斷單核細(xì)胞Fc受體后，沒(méi)有檢測(cè)到明顯的差異。這些結(jié)果 表明IgG-SPIO以不依賴于Fc受體的機(jī)制進(jìn)入細(xì)胞。為了測(cè)試這種可能性，使用與IgG結(jié) 合相同的氧化/還原步驟，將人血清白蛋白(HSA)共價(jià)結(jié)合于SPI0。與IgG相似，HSA顯著 增加了 SPIO的攝取(圖5G)。為了證實(shí)粒子攝取不依賴于Fc受體這種想法，我們進(jìn)行了 阻斷研究。在4小時(shí)的共培養(yǎng)中，被MDM攝取的IgG-SPIO和F (ab，)2-SPI0的細(xì)胞內(nèi)鐵的 回歸分析，在攝取動(dòng)力學(xué)上沒(méi)有顯示出差異(P = 0.271)，表明IgG Fc部分的存在沒(méi)有為 IgG-SPIO攝取動(dòng)力學(xué)提供顯著益處。類似地，用人類Fc片段、抗Fc受體-γ抗體(⑶16/ ⑶32/⑶64)或同種型對(duì)照抗體處理MDM，與未處理的MDM相比，在IgG-SPIO攝取動(dòng)力學(xué)上 沒(méi)有可察覺(jué)的差別(P = 0.624)。此外，人類MDM中的結(jié)果在小鼠BMM中得到驗(yàn)證，其中 用小鼠Fc片段、大鼠抗小鼠Fc受體-Y抗體(CD16/CD32)或大鼠同種型對(duì)照抗體處理的 BMM，與未處理的BMM相比，在小鼠IgG-SPIO的攝取動(dòng)力學(xué)上沒(méi)有觀察到差別(P = 0. 988)。 這些結(jié)果證實(shí)了 IgG-SPIO的內(nèi)化不是Fc受體介導(dǎo)的這一假說(shuō)。盡管HSA-SPIO的內(nèi)化與 IgG-SPIO類似，但在與IgG-SPIO溫育的單核細(xì)胞中，與HSA-SPIO的情況相比，人類單核細(xì) 胞中的鐵含量更高。這可能是由于HSA修飾了結(jié)合的SPIO自身這個(gè)事實(shí)。為了試驗(yàn)后一 種可能性，在PH 7.4的HEPES緩沖液中進(jìn)行了 SPIO的物理化學(xué)性質(zhì)研究，包括納粒的ζ 電位和尺寸測(cè)量。SPIO的HSA修飾不影響其尺寸(圖5Η)。此外，在配體連接后，NP的ζ 電位沒(méi)有明顯變化；因此SPIO保持帶負(fù)電荷。實(shí)施例5通過(guò)MRI對(duì)SPIO和IgG-SPIO在小鼠中的組織分布進(jìn)行成像5-8 M Witti BALB/c /Jn (Charles River Laboratory, Inc. , Wilmington, MA)用于所有實(shí)驗(yàn)。將動(dòng)物飼養(yǎng)在無(wú)菌微型隔離飼養(yǎng)籠中，按照內(nèi)布拉斯加大學(xué)醫(yī) 學(xué)中心(University of Nebraska Medical Center)和國(guó)立衛(wèi)生研究院(National Institutes ofHealth)關(guān)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物護(hù)理的倫理規(guī)范進(jìn)行維持。以12. 5μ g/0. 2ml/小鼠 或62. 5 μ g/0. 2ml/小鼠的量用SPIO或IgG-SPIO經(jīng)尾靜脈對(duì)小鼠進(jìn)行靜脈內(nèi)注射。用于 人類成人或年輕人的推薦劑量是560 μ g/kg。在體內(nèi)分析中使用兩組小鼠，每組3-5只動(dòng) 物。對(duì)SPIO和IgG-SPIO處理的組，在注射前、注射后連續(xù)4小時(shí)和注射后24小時(shí)進(jìn)行成 像。結(jié)合的SPIO制備后24小時(shí)內(nèi)給小鼠注射。SPIO粒子在組織中的積累導(dǎo)致場(chǎng)依賴性的組織水的磁自旋-自旋弛豫率(R2)的 增力口°使用兩個(gè) 7T MRI 系統(tǒng)(Bruker 21cm Biospec/16cm Pharmascan systems operating Paravision 4.0)進(jìn)行的自旋-自旋弛豫率測(cè)量，證明了在SPIO標(biāo)記的細(xì)胞模型中，弛豫 率與細(xì)胞密度直接相關(guān)。弛豫率的測(cè)量能夠追蹤細(xì)胞攝取，已被用于追蹤注射后細(xì)胞向肝 臟、腎臟和脾臟的遷移。使用25-mm鳥籠式容積線圈獲取了小鼠身體的高分辨率、多層多回 波CPMG相循環(huán)T2作圖MRI掃描，覆蓋了從頸部到髖部的區(qū)域，使用的獲取參數(shù)為回波時(shí)間 (TE) = 10、20、30、40、50、60、70、80ms，重復(fù)時(shí)間(TR) = 4650ms，平均次數(shù)(NA) =4，視野= 40x40mm，分辨率為256x 128 (三維象素尺寸=156x 312 μ m)，重建到256x 256，50個(gè)隔行 連續(xù)Imm厚斷層，總獲取時(shí)間=39分鐘。信號(hào)強(qiáng)度被歸一化到外部標(biāo)準(zhǔn)，以闡述信號(hào)隨時(shí)間 的漂移。SPIO積累通過(guò)選定目標(biāo)區(qū)域中R2 (1/T2)的變化來(lái)測(cè)定。在注射SPIO或IgG-SPIO 后，連續(xù)4小時(shí)每40分鐘以及在24小時(shí)時(shí)獲取T2圖譜。脾臟、肝臟和腎臟中目標(biāo)區(qū)域來(lái)自偶數(shù)回波(精確地重新聚焦在CPMG相循環(huán)回波列中)的強(qiáng)度，使用與圖像中測(cè)量到的噪 音水平匹配的最小值擬合到指數(shù)衰減。通過(guò)每組圖像中外部標(biāo)準(zhǔn)的T2測(cè)定監(jiān)控?cái)?shù)據(jù)質(zhì)量。在將SPIO或IgG-SPIO注射到小鼠尾靜脈中之后，測(cè)量了脾臟(圖6A和7B)、肝臟 (圖6C和6D)和腎臟(圖6E和6F)中弛豫率(R2 = 1/T2)的變化。12. 5 μ g(圖6A、6C和 6E) (η = 6)和62. 5 μ g(圖6B、6D和6F) (η = 5)的注射顯示，到注射后0. 5小時(shí)及以后的 時(shí)間中，具有IgG涂層的循環(huán)單核細(xì)胞在較低濃度下顯示出較高攝取(ρ < 0. 05，雙路重復(fù) 測(cè)量ANOVA用于脾臟和肝臟的時(shí)間和SPIO類型的影響)。在較高的62. 5 μ g劑量下，SPIO 與IgG-SPIO的攝取相比，在任何時(shí)間點(diǎn)沒(méi)有觀察到差異。實(shí)施例6組織學(xué)評(píng)估在SPIO或IgG-SPIO給藥后4和24小時(shí)時(shí)收集脾臟和肝臟。在MRI后，通過(guò)用 4%低聚甲醛灌注立即將組織固定，后固定24小時(shí)，包埋在石蠟中，并切成5 μ m厚的切片用 于組織學(xué)分析。對(duì)于普魯士藍(lán)染色來(lái)說(shuō)，將載玻片固定的切片脫石蠟、重新水合，并在2%亞 鐵氰化鉀和3. 7%鹽酸中反應(yīng)30分鐘，以通過(guò)普魯士藍(lán)觀察亞鐵粒子。將染色的切片清洗 并用核固紅復(fù)染，以提供組織細(xì)胞分布。圖像通過(guò)Optronics數(shù)字相機(jī)(Buffalo Grove, IL)使用 MagnaFire 2. 0 軟件(Goleta, CA)獲得，并通過(guò) Adobe Photoshop 7. 0 軟件處 理。在0.5小時(shí)和24小時(shí)的圖像中，觀察到來(lái)自SPIO積累的信號(hào)損失。通過(guò)分析來(lái)自MRI試驗(yàn)后用Alexa Fluor 488羥胺IgG-SPIO納米制劑注射的 動(dòng)物的脾臟和肝臟的組織樣本，在循環(huán)血單核細(xì)胞和組織巨噬細(xì)胞中看到了 SPIO的攝取。實(shí)施例7通過(guò)將藥物從與水混溶的有機(jī)溶劑沉淀在含有表面活性劑的水性溶液中，然后使 用活塞間隙勻漿機(jī)進(jìn)行均化步驟，制備了晶體紫杉醇粒子。用于防止粒子聚集的表面活性 劑以各種不同的組合使用，以產(chǎn)生納米懸液制劑ΡΤΧ-1、ΡΤΧ-2和PTX-3。所有的紫杉醇納米 懸液都使用IOmM磷酸緩沖液緩沖到ρΗ 7. 8-7. 9。紫杉醇粒子的平均粒度在150-300nm的 范圍內(nèi)，正如通過(guò)激光光散射(Horiba LA-920，相對(duì)折射率=116A001I)所測(cè)量的。紫杉醇 粒子的ζ電位的測(cè)量使用PH 7. 4的IOmM HEPES緩沖液作為稀釋劑(Malvern Nano ZS)。 IgG涂層前的紫杉醇懸液ζ電位值在表1中給出。表權(quán)利要求
一種表面改性粒子，所述表面改性粒子包含粒子核心和與粒子核心結(jié)合的涂層，其中粒子核心包含活性劑，涂層包含調(diào)理素，并且表面改性粒子具有從約1nm到約2,000nm的平均粒度。
2.權(quán)利要求1的粒子，其中調(diào)理素是抗體或補(bǔ)體蛋白。
3.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的粒子，其中調(diào)理素選自具有IgG同種型的抗體、補(bǔ)體蛋白C3b 和補(bǔ)體蛋白C5。
4.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的粒子，所述涂層被吸附到粒子核心的表面。
5.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的粒子，所述涂層被吸附到粒子核心的表面并且還包含多糖， 所述調(diào)理素與多糖共價(jià)連接。
6.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的粒子，其中多糖是葡聚糖。
7.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的粒子，其中多糖具有約5，000道爾頓到約250，000道爾頓之間的分子量。
8.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的粒子，其中涂層還包含表面活性劑。
9.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的粒子，其中表面活性劑選自陰離子表面活性劑、陽(yáng)離子表面 活性劑、兩性離子表面活性劑、非離子表面活性劑、表面活性生物改性劑及其組合。
10.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的粒子，其中表面活性劑包含泊洛沙姆和磷脂中的至少一種。
11.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的粒子，其中活性劑是治療劑。
12.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的粒子，其中治療劑選自鎮(zhèn)痛劑、麻醉劑、興奮劑、腎上腺素 能劑、腎上腺素能阻斷劑、抗腎上腺素劑、腎上腺類皮質(zhì)激素、擬腎上腺素劑、抗膽堿能劑、 抗膽堿酯酶劑、抗驚厥藥、烷化劑、生物堿類、變構(gòu)抑制劑、促蛋白合成留類、減食欲藥、解酸 劑、止瀉劑、解毒劑、抗葉酸劑、退燒藥、抗風(fēng)濕藥劑、精神治療劑、神經(jīng)阻斷劑、抗炎劑、驅(qū)腸 蟲劑、抗生素、抗凝劑、抗抑郁藥、抗癲癇劑、抗真菌劑、抗感染劑、抗寄生蟲劑、抗組胺劑、抗 毒蕈堿劑、抗分枝桿菌劑、抗腫瘤劑、抗原生動(dòng)物劑、抗病毒劑、抗焦慮鎮(zhèn)定劑、β -腎上腺素 能受體阻斷劑、皮質(zhì)類固醇、止咳劑、多巴胺能藥、止血?jiǎng)?、血液藥劑、安眠藥、免疫藥劑、?毒堿藥物、擬副交感神經(jīng)劑、前列腺素、放射藥物、鎮(zhèn)靜劑、刺激劑、擬交感神經(jīng)劑、維生素、 黃嘌呤、生長(zhǎng)因子、激素、抗朊病毒劑及其組合。
13.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的粒子，其中活性劑是選自紫杉醇、紫杉醇衍生化合物、生物 堿類、抗代謝物、酶抑制劑、烷化劑及其組合的抗腫瘤劑。
14.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的粒子，其中活性劑是蛋白酶抑制劑。
15.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的粒子，其中蛋白酶抑制劑選自茚地那韋、利托那韋、沙奎那 韋、奈非那韋及其組合。
16.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的粒子，其中活性劑是核苷反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑。
17.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的粒子，其中核苷反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑選自疊氮胸苷、去羥肌苷、 司他夫定、扎西他濱、拉米夫定及其組合。
18.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的粒子，其中活性劑是非核苷反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑。
19.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的粒子，其中非核苷反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑選自依法韋侖、奈韋拉 平、德拉維拉丁及其組合。
20.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的粒子，其中活性劑是抗炎劑。
21.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的粒子，其中抗炎劑選自非留類抗炎劑、非選擇性環(huán)加氧酶(COX)抑制劑、C0X-1抑制劑、C0X-2抑制劑、脂氧合酶抑制劑、皮質(zhì)類固醇、抗氧化劑、腫瘤 壞死因子(TNF)抑制劑及其組合。
22.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的粒子，其中活性劑選自塞來(lái)昔布、羅非昔布、伐地考昔、帕瑞 昔布、羅美昔布、依他昔布及其組合。
23.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的粒子，其中活性劑是生物制劑。
24.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的粒子，其中生物制劑選自蛋白、多肽、糖類、多核苷酸、核酸 及其復(fù)合物、結(jié)合物和組合。
25.一種藥物組合物，所述藥物組合物包含大量前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的粒子。
26.一種增加活性劑的細(xì)胞攝取的方法，所述方法包括將細(xì)胞與表面改性粒子在足以增加表面改性粒子的細(xì)胞攝取的條件下相接觸，所述粒 子包含粒子核心和與粒子核心結(jié)合的涂層，其中粒子核心包含活性劑，涂層包含調(diào)理素，并 且表面改性粒子具有從約Inm到約2，OOOnm的平均粒度。
27.權(quán)利要求26的方法，其中細(xì)胞是細(xì)胞吞噬性細(xì)胞。
28.權(quán)利要求26-27的方法，其中所述接觸離體進(jìn)行。
29.權(quán)利要求26-28的方法，其中所述接觸在體內(nèi)進(jìn)行。
30.權(quán)利要求26-29的方法，其中細(xì)胞是選自巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、粒細(xì)胞、無(wú)粒細(xì)胞、 嗜中性細(xì)胞及其組合的細(xì)胞吞噬性細(xì)胞。
31.權(quán)利要求26-30的方法，其中所述接觸通過(guò)向?qū)ο蠼o藥一定量的所述表面改性粒 子進(jìn)行，所述給藥量有效治療傳染性疾病或紊亂、炎性疾病或紊亂、神經(jīng)變性疾病或紊亂或 增殖性疾病或紊亂。
32.權(quán)利要求26-31的方法，其中所述給藥經(jīng)靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下、真皮內(nèi)、關(guān) 節(jié)內(nèi)、鞘內(nèi)、硬膜外、腦內(nèi)、頰、直腸、局部、透皮、口、鼻內(nèi)、經(jīng)肺途徑、腹膜內(nèi)、眼內(nèi)或通過(guò)它 們的組合進(jìn)行。
33.權(quán)利要求26-32的方法，其中對(duì)象是哺乳動(dòng)物對(duì)象。
34.權(quán)利要求26-33的方法，其中對(duì)象患有神經(jīng)變性疾病或紊亂，所述神經(jīng)變性疾病或 紊亂選自帕金森氏癥、阿茨海默氏病、多發(fā)性硬化、腦脊髓炎、腦炎、亨廷頓舞蹈癥、肌萎縮 性側(cè)索硬化、額顳癡呆、朊病毒疾病、克雅氏病和腎上腺腦白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良。
35.權(quán)利要求26-34的方法，其中對(duì)象患有炎性疾病或紊亂，所述炎性疾病或紊亂選自 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)、重癥肌無(wú)力、甲狀腺炎、糖尿病、炎性腸病、自體免疫性卵 巢炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡和干燥綜合征。
36.權(quán)利要求26-35的方法，其中對(duì)象患有增殖性疾病或紊亂，所述增殖性疾病或紊亂 選自結(jié)腸癌、腎癌、非小細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌、宮頸癌、乳腺癌、前列腺癌、腦癌、肉瘤、黑素 瘤、白血病、急性淋巴細(xì)胞性白血病、急性髓性白血病、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、慢性髓性白 血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、骨髓瘤和成膠質(zhì)細(xì)胞瘤。
全文摘要
本發(fā)明公開涉及表面改性粒子及其制造和使用方法。所述表面改性粒子包含粒子核心和與粒子核心結(jié)合的涂層，其中粒子核心包含活性劑，涂層包含調(diào)理素，并且表面改性粒子具有從約1nm到約2,000nm的平均粒度。
文檔編號(hào)A61K39/44GK101965195SQ200980107803
公開日2011年2月2日 申請(qǐng)日期2009年3月5日 優(yōu)先權(quán)日2008年3月5日
發(fā)明者巴雷特·拉比諾, 簡(jiǎn)·韋林, 阿諾·貝迪諾, 霍華德·根德爾曼 申請(qǐng)人:巴克斯特國(guó)際公司;巴克斯特醫(yī)療保健股份有限公司;內(nèi)布拉斯加大學(xué)董事委員會(huì)