專利名稱：：朝藿定c的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及淫羊藿的提取物朝藿定c的用途，屬于藥物
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：淫羊藿為小檗科植物淫羊藿EpimediumbrevicornumMaxim.和箭葉淫羊藿E.sagittatum(S.etZ.)Maxim.或柔毛淫羊藿E.PubescensMaxim.等的全草。是我國傳統(tǒng)的中藥之一，對于淫羊藿及其提取物治療骨質(zhì)疏松癥的作用，近幾年有不少研究。如中國專利03145167.5公開了一種淫羊藿與雌激素組成的治療絕經(jīng)期后婦女骨質(zhì)疏松癥的復(fù)方制劑，公開了淫羊藿及其提取物淫羊藿總黃酮可以用于治療骨質(zhì)疏松癥。還有中國專利200610065215.7公開了一種主要活性成分為淫羊藿總黃酮的治療骨質(zhì)疏松的中藥制劑。但是淫羊藿總黃酮的成分包括朝藿定A、B、C等多種黃酮類成分，而目前，藥典要求的淫羊藿藥材的指標(biāo)性成分僅為淫羊藿苷。對于淫羊藿總黃酮的哪種成分起到治療骨質(zhì)疏松的主要作用，治療效果更好，并沒有相關(guān)報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種朝藿定C的新用途。朝藿定C對于骨質(zhì)疏松癥有顯著的療效朝藿定C的制備方法。(1)提取工藝取淫羊藿藥材，切成斷，加20倍70%乙醇回流3次，每次lh，合并三次的提取液，回收乙醇，并濃縮成6(TC時相對密度為1.15。濃縮液加蒸餾水適量放置，棄沉淀，取上清液，再濃縮得浸膏。依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取至近無色，再用正丁醇反復(fù)萃取至近無色，回收正丁醇至干，即得到含朝藿定C的粗浸膏。(2)分離工藝①硅膠柱色譜的分離將上述所得粗浸膏用甲醇溶解，薄層色譜用硅膠拌樣，硅膠柱色譜分離，以氯仿甲醇(100:17，100:20，100:22)梯度洗脫，以硅膠預(yù)制板跟蹤檢識，展開系統(tǒng)為氯仿甲醇=100:20，收集硅膠預(yù)制板TLC上Rf值小于淫羊藿苷的斑點流份，回收溶劑后，即得朝藿定C粗品。②聚酰胺柱色譜的分離朝藿定C粗品用甲醇溶解，柱色譜用聚酰胺拌樣，聚酰胺柱色譜分離，以乙酸乙酯甲醇:水(8:1:0，8:1:0.2)梯度洗脫，以聚酰胺薄膜跟蹤檢識，展開系統(tǒng)為乙酸乙酯乙醇:水=8:1:1，收集聚酰胺薄膜TLC上Rf值大于淫羊藿苷的斑點流份，回收溶劑后，即得朝藿定C>朝藿定C的純度為8999呢。本發(fā)明的技術(shù)方案。朝藿定C在制備治療骨質(zhì)疏松藥物中的用途。朝藿定C的分子式是這樣的OCH3朝藿定C在制備治療骨質(zhì)疏松口服劑藥物中的用途。朝藿定c在制備治療骨質(zhì)疏松注射劑藥物中的用途。為了證明本發(fā)明的效果，申請人對朝藿定c與淫羊藿及其提取物進(jìn)行了藥理試驗研究，具體如下試驗一朝藿定C與淫羊藿及其提取物的對比試驗1、材料與方法1.l實驗材料1.1.l實驗動物KM種小鼠，雌性，4周齡，體重2022g;—級實驗動物，由貴陽醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，合格證SCXK(黔)2002—0001。1.1.2藥物與試劑淫羊藿(EpimediumbrevicornumMaxim.):由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所郭寶林研究員鑒定。lg浸膏相當(dāng)于生藥量6.28g。給藥以生藥量計。淫羊藿總黃酮由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所郭寶林研究員提供。朝藿定C純度89。/。由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所郭寶林研究員提供。淫羊藿苷南京崇原生物科技有限公司批號20070501己烯雌酚合肥久聯(lián)制藥有限公司批號20060518。1.1.3主要儀器及設(shè)備LUNAR骨密度儀一美國通用電氣有限公司；AB104-S梅特勒一托利多電子分析天平梅特勒一托利多儀器(上海)有限公司；北京杰偉世視音頻設(shè)備有限公司；小鼠骨質(zhì)撓度測試儀一(自制)；A0-820型輪動式切片機(jī)一美國。BI-2000醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)北京杰偉世視音頻設(shè)備有限公司1.2實驗方法昆明雌性小鼠235只，體重20-22克。用0.4%戊巴比妥鈉0.lmg/10g腹腔麻醉。無菌條件下切除卵巢造模，對照組動物切除卵巢旁部分脂肪保留卵巢。一月后取對照組和模型組各3只動物用美國LUNAR骨密度儀檢測，確認(rèn)造模成功。其后將造模小鼠分為模型(等容積常水)、己稀雌酚(2mg/kg)、淫羊藿超高劑量(400mg/kg)、淫羊藿高劑量(200mg/kg)、淫羊藿中劑量(100mg/kg)、淫羊藿低劑量(50mg/kg)、淫羊藿總黃酮高劑量(20mg/kg)、淫羊藿總黃酮中劑量(10mg/kg)、淫羊藿總黃酮低劑量(5mg/kg)、朝藿定C高劑量(20mg/kg)、朝藿定C中劑量(10mg/kg)、朝藿定C低劑量(5mg/kg)、淫羊藿苷高劑量(20mg/kg)、淫羊藿苷中劑量(10mg/kg)、淫羊藿苷低劑量(5mg/kg)15組，加上對照組(等容積常水)，實驗動物共分為16個組。各組動物按各自藥物和劑量灌胃給藥，每日一次，連續(xù)給藥兩個月，停藥后次日，用LUNAR骨密度儀測骨密度；稱取體重，脫頸椎處死動物，取左股骨于小鼠骨撓度測試儀上對其施壓，以股骨斷裂時所承受的最大載荷和最大撓度為判斷其機(jī)械強(qiáng)度的指標(biāo)；取約O.7cm長含股骨頭的右側(cè)股骨常規(guī)脫鈣，石蠟包埋切片，片厚4ym，HE染色，以BI-2000醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行骨組織形態(tài)學(xué)觀察，計量①骨小梁平均寬度;②骨皮質(zhì)平均厚度；③相對骨體積；④成骨細(xì)胞數(shù)；⑤破骨細(xì)胞數(shù)。實驗數(shù)據(jù)用以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差±^表示，采用Excel2000作Student-t檢驗。2、結(jié)果2.1去卵巢后36天對造模成功的判斷與對照組比較，模型組小鼠骨密度大幅度降低，可以判斷為造?；境晒?表l)。表l去卵巢后36天對造模抽樣小鼠骨密度的影響^=±力<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>2.2給藥兩個月對去卵巢小鼠骨相關(guān)指標(biāo)的影響2.2.1對骨密度的影響與對照組比較，模型組小鼠脊柱骨密度和全身骨密度均明顯下降；與模型組比較，各每藥組小鼠脊柱骨密度和全身骨密度均增高，差異顯著(P<0.05、P<0.01;表2)。表2對小鼠骨密度的影響^±^_<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注與模型組比較*<0.05，**P<0.01(下同)。2.2.2對骨生物力學(xué)的影響與對照組比較，模型組小鼠的最大載荷和最大撓度均明顯下降，與模型組比較，各給藥組小鼠最大載荷和最大撓度均明顯提高，差異顯著(P<0.01;表3)。表3對小鼠股骨機(jī)械強(qiáng)度的影響(f<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>2.2.3對骨組織形態(tài)學(xué)的影響與對照組比較，模型組小鼠骨小梁平均寬度變窄、相對骨體積變小、骨皮質(zhì)平均厚度減小、成骨細(xì)胞數(shù)明顯減少，破骨細(xì)胞數(shù)明顯增高，差異顯著(P<0.05、p<0.01);與模型組比較，各給藥組均能明顯提高小鼠骨小梁的平均寬度、骨皮質(zhì)平均厚度、相對骨體積和成骨細(xì)胞數(shù)，使破骨細(xì)胞數(shù)明顯減少，差異顯著(P<0.05、P<0.01;表4表5)。表4對去卵巢小鼠骨組織學(xué)的影響1(^=<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>3、總結(jié)淫羊藿、淫羊藿總黃酮、朝藿定c、淫羊藿苷對小鼠去卵巢所致的骨質(zhì)疏松均有治療作用。淫羊藿、淫羊藿總黃酮、朝藿定c與淫羊藿苷在同等劑量下，朝藿定c作用優(yōu)于淫羊藿、淫羊藿總黃酮及淫羊藿苷，可以用于制備治療骨質(zhì)疏松的藥物。藥典要求的淫羊藿藥材的指標(biāo)性成分為淫羊藿苷，通過本發(fā)明的試驗發(fā)現(xiàn)，對于治療骨質(zhì)疏松癥，朝藿定c的療效比淫羊藿苷和黃酮的療效都好，因此朝藿定c起到了更主要的治療作用，具有意想不到的效果。試驗二朝藿定c和淫羊藿總黃酮加雌激素的復(fù)方制劑對比試驗l實驗方法l.l動物分組實驗動物選用6月齡Wistar雌鼠60只，體重260-330g。由貴陽醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、A組和B組，組15只。所有動物在相同條件下飼養(yǎng)。1.2制備模型各組動物在腹腔注射3%戊巴比妥鈉溶液(45mg/kg)麻醉下做腹部切口，除假手術(shù)組切除少許腎周圍脂肪組織外，其余各組大鼠均行雙側(cè)卵巢切除術(shù)。術(shù)后給予青霉素肌注3d。所有大鼠術(shù)后均自由飲水，標(biāo)準(zhǔn)飼料常規(guī)喂養(yǎng)12周，造成實驗性大鼠骨質(zhì)疏松模型。1.3給藥方法各組動物從造模12周后開始灌胃給藥，假手術(shù)組和模型組每天灌相等體積冷開水；按人鼠體重?fù)Q算給予，A組灌胃淫羊藿總黃酮和雌激素的復(fù)方制劑(99%淫羊藿總黃酮+0.1%雌激素組)，B組灌胃朝藿定C和雌激素的復(fù)方制劑(99y。朝藿定C+0.1%雌激素)，每天1次，連續(xù)12周。1.4BMD測定各組動物灌胃治療12周后，在乙醚麻醉下處死，各組大鼠取雙側(cè)股骨標(biāo)本，用雙能X線骨密度儀測定股骨干骨密度。結(jié)果見表6。1.5統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS11.0軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，采用單因數(shù)方差分析，結(jié)果用(f士幻表示，P〈0.05為差異顯著的統(tǒng)計學(xué)意義。2結(jié)果表6中顯示，模型組BMD明顯低于假手術(shù)組，有顯著差異(P<0.05)，B組BMD略低于假手術(shù)(P〉0.05)，略高于A組(P〉0.05)，明顯高于模型組(P<0.05)。表6大鼠骨密度的影響^i幻<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注t檢驗，與假手術(shù)組比較，Ap<0.05，與模型組比較，AP<0.05?？偨Y(jié)淫羊藿總黃酮和朝藿定C，加雌激素的復(fù)方制劑對小鼠去卵巢所致的骨質(zhì)疏松均有治療作用。在同等劑量下，朝藿定C加雌激素的作用優(yōu)于淫羊藿總黃酮加雌激素。同現(xiàn)有技術(shù)相比，對于治療骨質(zhì)疏松癥，在同等劑量下，朝藿定C作用優(yōu)于淫羊藿、淫羊藿總黃酮及淫羊藿苷，朝藿定C加其他藥物(如雌激素)組成的復(fù)方藥劑，也要好于淫羊藿總黃酮加同種藥物組成的復(fù)方藥劑。本發(fā)明的朝藿定C在同劑量下有效成分更高，為治療骨質(zhì)疏松癥提供了一種更有療效的用藥選擇。具體實施例方式本發(fā)明的實施例l:(1)提取工藝取淫羊藿藥材，切成斷，加20倍70%乙醇回流3次，每次lh，合并三次的提取液，回收乙醇，并濃縮成6(TC時相對密度為1.15。濃縮液加蒸餾水適量放置，棄沉淀，取上清液，再濃縮得浸膏。依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取至近無色，再用正丁醇反復(fù)萃取至近無色，回收正丁醇至干，即得到含朝藿定C的粗浸膏。(2)分離工藝①硅膠柱色譜的分離將上述所得粗浸膏用甲醇溶解，薄層色譜用硅膠拌樣，硅膠柱色譜分離，以氯仿甲醇(100:17，100:20，100:22)梯度洗脫，以硅膠預(yù)制板跟蹤檢識，展開系統(tǒng)為氯仿甲醇=100:20，收集硅膠預(yù)制板TLC上Rf值小于淫羊藿苷的斑點流份，回收溶劑后，即得朝藿定C粗品。②聚酰胺柱色譜的分離朝藿定C粗品用甲醇溶解，柱色譜用聚酰胺拌樣，聚酰胺柱色譜分離，以乙酸乙酯甲醇:水(8:1:0，8:1:0.2)梯度洗脫，以聚酰胺薄膜跟蹤檢識，展開系統(tǒng)為乙酸乙酯乙醇:水=8:1:1，收集聚酰胺薄膜TLC上Rf值大于淫羊藿苷的斑點流份，回收溶劑后，即得朝藿定C。朝藿定C的純度為8999呢。朝藿定C的分子式為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>將所得的朝藿定C加入適量淀粉，混勻，制粒，干燥，制備成顆粒劑，或壓制成片劑，或裝入膠囊制成膠囊劑，以及其他常規(guī)的口服劑，用于治療骨質(zhì)疏松。實施例2:按照實施例1制備朝藿定C，然后加入注射用水，攪勻，調(diào)PH值5-7，灌封，即得朝藿定C注射劑。實施例3:按照實施例1制備朝藿定C提取物，加入注射用水，攪勻，調(diào)PH值5-7，無菌濾過，濾液分裝于滅菌西林瓶中，冷凍干燥，即得凍干粉制劑。實施例4:制備骨松寶顆粒主要成份朝藿定C、續(xù)斷、知母、地黃、三棱、莪術(shù)、赤芍、川芎、牡蠣(煅)制備方法以上九味，牡蠣粉碎成細(xì)粉，備用；按照實施例1制備朝藿定C，備用；其余續(xù)斷等七味加水煎煮三次，第一次2小時，第二、三次各1小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.35(5(TC)的清膏，加入牡蠣粉和朝藿定C，混勻，干燥，粉碎成細(xì)粉，制成顆粒，干燥，制成500g;或取清膏，加入適量的淀粉和蔗糖粉及上述細(xì)粉，混勻，干燥，粉碎成細(xì)粉，制成顆粒，干燥，制成1000g，即得。藥理作用本品具有明顯的抗炎止痛、提高免疫功能、改善"陽虛"癥等作用，具有調(diào)節(jié)鈣磷代謝、提高骨質(zhì)密度，改善骨質(zhì)疏松程度。功能主治補(bǔ)腎活血，強(qiáng)筋壯骨。實施例5:朝藿定C和雌激素的復(fù)方制劑。制備得到朝藿定C，朝藿定C加雌激素(99。/。朝藿定C+0.1%雌激素)再加上適量的輔料，制成顆粒、膠囊、片劑等常規(guī)藥劑。本品對骨質(zhì)疏松癥有明顯的預(yù)防和治療作用。特別是對絕經(jīng)期婦女和老年性骨質(zhì)疏松癥有良好的防治效果。權(quán)利要求1.朝藿定C在制備治療骨質(zhì)疏松藥物中的用途，朝藿定C的分子式是這樣的2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的朝藿定C的用途，其特征在于朝藿定C在制備治療骨質(zhì)疏松口服劑藥物中的用途。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的朝藿定C的用途，其特征在于朝藿定C在制備治療骨質(zhì)疏松注射劑藥物中的用途。全文摘要本發(fā)明公開了一種朝藿定C在制備治療骨質(zhì)疏松藥物中的用途。經(jīng)申請人試驗，在同等劑量下，朝藿定C作用優(yōu)于淫羊藿、淫羊藿總黃酮及淫羊藿苷，可以用于制備治療骨質(zhì)疏松的藥物。同現(xiàn)有技術(shù)相比，對于治療骨質(zhì)疏松癥，在同等劑量下，朝藿定C作用優(yōu)于淫羊藿、淫羊藿總黃酮及淫羊藿苷，朝藿定C加其他藥物(如雌激素)組成的復(fù)方藥劑，也要好于淫羊藿總黃酮加同種藥物組成的復(fù)方藥劑。本發(fā)明的朝藿定C在同劑量下有效成分更高，為治療骨質(zhì)疏松癥提供了一種更有療效的用藥選擇。文檔編號A61K31/7048GK101513427SQ20091030031公開日2009年8月26日申請日期2009年1月22日優(yōu)先權(quán)日2009年1月22日發(fā)明者馮澤熹,寧周,張貴林,張金娟,曾香蘭,楊昌生,王曉春,敏羅,郭寶林,瑩韋申請人:貴州同濟(jì)堂制藥有限公司