專利名稱：黃芪皂苷的制備方法及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種黃芪皂苷的制備方法及其用途，特別涉及一 種具有舒張血管作用的黃芪皂苷的制備方法及其用途。
背景技術(shù)：
高血壓病為我國(guó)人口的常見(jiàn)病、多發(fā)病之一，也是形成心腦血管疾病的重要因素， 這是因?yàn)檠苁湛s與舒張功能的失調(diào)對(duì)心血管疾病的早期發(fā)生、發(fā)展及并發(fā)癥起著主導(dǎo)作 用。高血壓的發(fā)病率日趨增高，對(duì)人類健康危害極大。目前，治療高血壓的藥物主要以西藥 為主，雖然起效迅速，但其藥物依賴性強(qiáng)，需長(zhǎng)期用藥，且會(huì)產(chǎn)生一些毒副作用。而對(duì)于中藥 在治療高血壓疾病方面的研究卻甚少。黃芪為最常用的中藥材之一，具有補(bǔ)氣升陽(yáng)、利水消腫、益氣固表之功效，在心血 管疾病防治方面應(yīng)用廣泛。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明黃芪具有改善心功能、擴(kuò)張血管、保護(hù)缺血 心肌、提高機(jī)體的抗氧化能力、改善血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)、抑制血小板聚集以及抗血栓形成等作 用，常用于冠心病、高血壓、心力衰竭、病毒性心肌炎等病癥的治療。雖然黃芪具有舒張血管 的作用，但是其作用還很有限且活性成分尚不十分明確，針對(duì)黃芪中舒張血管的活性成分 的研究工作一直是中藥學(xué)領(lǐng)域中重要的研究課題之一。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明的目的是提供一種來(lái)自黃芪且具有更強(qiáng)效舒張血管的作用的藥物。用于實(shí)現(xiàn)上述目的的技術(shù)方案如下一種黃芪皂苷的制備方法，其包括以下步驟(1)黃芪加水煎煮提取，過(guò)濾，濃縮濾液；(2)加入乙醇進(jìn)行沉淀，靜置；(3)上清液回收乙醇后加水稀釋，注入大孔吸附樹(shù)脂柱，依次用水、20% (體積/體 積)乙醇水溶液和70% (體積/體積)乙醇水溶液洗脫；(4)除去70% (體積/體積)乙醇水溶液的洗脫液中的乙醇，干燥即得。在上述制備方法的步驟(1)中，煎煮提取的次數(shù)可以為3 5次；加水的重量與黃 芪的重量之比為可以6 8 ；提取時(shí)間可以為1. 5 3小時(shí)。在上述制備方法的步驟(2)中，在加入乙醇的溶液中，乙醇體積占溶液總體積的 80%。在上述制備方法的步驟(3)中，大孔吸附樹(shù)脂優(yōu)選為非極性或弱極性大孔樹(shù)脂， 更優(yōu)選為HPD600型大孔吸附樹(shù)脂。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，上述黃芪皂苷的制備方法為黃芪飲片加10倍 重量的去離子水加熱煎煮提取3小時(shí)，過(guò)濾，濾液備用；藥渣再煎煮提取2次，其加水重量 分別為黃芪飲片重量的8倍和6倍，提取時(shí)間分別為2. 5小時(shí)和1. 5小時(shí)，過(guò)濾，合并濾液， 加乙醇至乙醇體積占溶液體積的80%進(jìn)行醇沉，靜置12小時(shí)。將上清液減壓回收乙醇至無(wú)醇味，所得濃縮液加0. 5倍重量的水稀釋，過(guò)濾，濾液徐徐注入已處理好的大孔吸附樹(shù)脂 柱內(nèi)，先用去離子水洗脫，再用2倍柱體積量的20% (體積/體積)乙醇水溶液洗脫，棄去 20% (體積/體積)乙醇水溶液的洗脫液，再用4倍重量的70% (體積/體積)乙醇水溶 液洗脫，收集70% (體積/體積)乙醇水溶液的洗脫液，回收乙醇至無(wú)醇味，60°C真空干燥， 粉碎，即得黃芪皂苷提取物。本發(fā)明還提供了上述制備方法制備的黃芪皂苷。其中，按照黃芪皂苷總重量計(jì)，黃 芪皂苷包含13.61% (重量)的黃芪甲苷、0.8% (重量)的黃芪皂苷Ι、3·71% (重量)的 黃芪皂苷II和0. 97% (重量)的黃芪皂苷III。本發(fā)明還提供了上述黃芪皂苷在制備舒張血管的藥物中的用途。其中，舒張血管 的藥物優(yōu)選為治療和/或預(yù)防心血管疾病的藥物，例如治療和/或預(yù)防高血壓和/或心絞 痛的藥物。優(yōu)選地，舒張血管的藥物能夠激活血管內(nèi)皮細(xì)胞NO-cGMP系統(tǒng)；舒張血管的藥物 能夠抑制血管平滑肌細(xì)胞外鈣內(nèi)流；或者舒張血管的藥物能夠?qū)崿F(xiàn)K。a和Katp通道的開(kāi)放。本發(fā)明還提供了一種用于舒張血管的藥物組合物，其包含上述黃芪皂苷，以及藥 學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑。本發(fā)明還提供了一種用于治療高血壓的藥物組合物，其包含上述黃芪皂苷，以及 藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑。上述藥物組合物優(yōu)選為口服制劑。本發(fā)明以已知的具有舒張血管作用的傳統(tǒng)中藥黃芪為研究對(duì)象，對(duì)其活性成分進(jìn) 行了系統(tǒng)的篩選和追蹤。本發(fā)明的研究結(jié)果表明以黃芪為原藥材經(jīng)過(guò)提取和純化制得的 黃芪皂苷具有更強(qiáng)的舒張血管活性，是黃芪中最重要的具有舒張血管作用的有效成分。鑒 于此，本發(fā)明進(jìn)一步研究并探討了黃芪皂苷舒張血管的作用機(jī)制以及其在制備用于舒張血 管等的藥物中的應(yīng)用。迄今為止，有關(guān)黃芪皂苷對(duì)血管的藥理作用及其作用機(jī)制尚未見(jiàn)報(bào) 道。為了觀察黃芪皂苷對(duì)血管的調(diào)節(jié)作用，本發(fā)明采用大鼠離體胸主動(dòng)脈環(huán)灌流模 型，以排除活體實(shí)驗(yàn)中循環(huán)激素、神經(jīng)遞質(zhì)、內(nèi)皮源性血管活性因子等對(duì)其擴(kuò)張血管作用的 影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，黃芪皂苷對(duì)基礎(chǔ)狀態(tài)的血管環(huán)張力無(wú)作用，而對(duì)于苯腎上腺素(ΡΕ) (ΙμΜ) 和KCl(35，60mM)預(yù)收縮的內(nèi)皮完整及內(nèi)皮去除的大鼠胸主動(dòng)脈血管環(huán)均具有顯著的舒張 作用，且對(duì)于內(nèi)皮完整血管環(huán)的作用強(qiáng)于內(nèi)皮去除的血管環(huán)。表明黃芪皂苷舒張血管的作 用是部分依賴于內(nèi)皮的，可能與內(nèi)皮源性的血管舒張因子，如一氧化氮、前列環(huán)素等有關(guān); 除此而外，還可能是直接作用于血管平滑肌而導(dǎo)致血管舒張。上述研究結(jié)果表明血管內(nèi)皮 細(xì)胞NO-cGMP系統(tǒng)的激活、血管平滑肌細(xì)胞外鈣內(nèi)流的抑制，以及Kca和Katp通道的開(kāi)放共 同參與了黃芪總皂苷的血管舒張作用，基于黃芪總皂苷的上述藥理作用特點(diǎn)，其可松弛平 滑肌，特別是血管平滑肌，適用于降低血壓、抗心絞痛等血管性疾病。綜上所述，本發(fā)明成功地開(kāi)發(fā)了傳統(tǒng)中藥黃芪中的黃芪皂苷類成分在制備舒張血 管藥物中的新用途，闡明了血管內(nèi)皮細(xì)胞NO-cGMP系統(tǒng)的激活、血管平滑肌細(xì)胞外鈣內(nèi)流 的抑制，以及K。a和Katp通道的開(kāi)放是黃芪皂苷舒張血管的重要作用機(jī)理之一，從而利用黃 芪皂苷的直接舒張血管的作用，將其用于各類相關(guān)血管性疾病的治療之中。相對(duì)于黃芪而 言，黃芪皂苷的療效更強(qiáng)，而且更有利于各類心血管疾病的臨床治療。


圖1顯示了黃芪皂苷(EAM)對(duì)KCl預(yù)收縮的內(nèi)皮完整(E+)的大鼠離體胸主動(dòng)脈 環(huán)張力的影響；圖2顯示了黃芪皂苷(EAM)對(duì)KCl預(yù)收縮的內(nèi)皮去除(E_)的大鼠離體胸主動(dòng)脈 環(huán)張力的影響；圖3顯示了黃芪皂苷(EAM)對(duì)PE預(yù)收縮的內(nèi)皮完整的大鼠離體胸主動(dòng)脈環(huán)張力 的影響；圖4顯示了黃芪皂苷(EAM)對(duì)PE預(yù)收縮的內(nèi)皮去除的大鼠離體胸主動(dòng)脈環(huán)張力 的影響；圖5顯示了 N-硝基左旋精氨酸(L-NNA)、亞甲蘭(Methylene blue)、吲哚美辛 (Indomethacin)預(yù)處理后對(duì)黃芪皂苷(EAM)使PE預(yù)收縮的內(nèi)皮完整的大鼠離體胸主動(dòng)脈 環(huán)產(chǎn)生的舒張效應(yīng)的影響；圖 6 顯示了 四乙胺(tetraethylammonium，TEA)、格列本脲(Glibenclamide)預(yù)處 理后對(duì)黃芪皂苷(EAM)使PE預(yù)收縮的內(nèi)皮去除的大鼠離體胸主動(dòng)脈環(huán)產(chǎn)生的舒張效應(yīng)的 影響；圖7顯示了無(wú)鈣液處理后黃芪皂苷(EAM)對(duì)使PE預(yù)收縮的內(nèi)皮去除的大鼠離體 胸主動(dòng)脈環(huán)產(chǎn)生的舒張效應(yīng)的影響；圖8顯示了無(wú)鈣液處理后對(duì)黃芪皂苷(EAM)使KCl預(yù)收縮的內(nèi)皮去除的大鼠離體 胸主動(dòng)脈環(huán)產(chǎn)生的舒張效應(yīng)的影響。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例詳細(xì)描述本發(fā)明，但這些實(shí)施例僅是示例性的，并不對(duì)本發(fā) 明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下 可以對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的 保護(hù)范圍內(nèi)。實(shí)施例1 黃芪皂苷的制備黃芪飲片加10倍重量去離子水加熱煎煮提取3小時(shí)，過(guò)濾，濾液備用；藥渣再煎煮 提取2次，其加水重量分別為黃芪飲片重量的8倍和6倍，提取時(shí)間分別為2. 5小時(shí)和1. 5 小時(shí)，過(guò)濾，合并濾液，加乙醇調(diào)節(jié)至乙醇體積占溶液體積的80%進(jìn)行醇沉，靜置12小時(shí)。 將上清液減壓回收乙醇至無(wú)醇味，所得濃縮液加0. 5倍重量的水稀釋，過(guò)濾，濾液徐徐注入 已處理好的HPD600型大孔吸附樹(shù)脂柱內(nèi)，先用去離子水洗脫，再用2倍柱體積量的20% (體積/體積)乙醇水溶液洗脫，棄去20% (體積/體積)乙醇水溶液的洗脫液，再用4倍 重量的70% (體積/體積)乙醇水溶液洗脫，收集70% (體積/體積)乙醇水溶液的洗脫 液，回收乙醇至無(wú)醇味，真空干燥(60°C )，粉碎，即得黃芪皂苷提取物。上述黃芪皂苷提取物中4個(gè)主要活性成分的含量測(cè)定方法如下采用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定?；旌蠈?duì)照品溶液的制備精確稱取4種對(duì)照品適量，甲醇溶解，定容至5ml的容量 瓶中。各對(duì)照品的濃度分別是黃芪甲苷0.4mg/ml，黃芪皂苷I 0. 25mg/ml，黃芪皂苷II 0. 3mg/ml，黃芪皂苷 III 0. 27mg/ml。
供試品溶液的制備取上述黃芪總皂苷提取物100g，以流動(dòng)相乙腈_水(體積比 為1 4)溶解，定容至IOml的容量瓶中，配置濃度為10mg/ml的供試品溶液，用0.45μπι 微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動(dòng) 相Α，以水為流動(dòng)相B，按表1中的洗脫條件進(jìn)行梯度洗脫；流速為1. Oml/min ；采用蒸發(fā)光 檢測(cè)器(ELSD)檢測(cè)，柱溫為30°C。表1 HPLC指紋圖譜檢測(cè)的流動(dòng)相梯度條件
權(quán)利要求
1.一種黃芪皂苷的制備方法，其包括以下步驟(1)黃芪加水煎煮提取，過(guò)濾，濃縮濾液；(2)加入乙醇進(jìn)行沉淀，靜置；(3)上清液回收乙醇后加水稀釋，注入大孔吸附樹(shù)脂柱，依次用水、20%(體積/體積) 乙醇水溶液和70% (體積/體積)乙醇水溶液洗脫；(4)除去70%(體積/體積)乙醇水溶液的洗脫液中的乙醇，干燥即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，在步驟(1)中，所述煎煮提取的次數(shù) 為3 5次。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，在步驟(1)中，所述加水的重量 與黃芪的重量之比為6 10 1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于，在步驟(1)中，所述提 取時(shí)間為1. 5 3小時(shí)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于，在步驟(2)中，在加入 乙醇的溶液中，乙醇體積占溶液總體積的80%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于，在步驟(3)中，所述大 孔吸附樹(shù)脂為非極性或弱極性大孔樹(shù)脂，優(yōu)選為HPD600型大孔吸附樹(shù)脂。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的制備方法制備的黃芪皂苷。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的黃芪皂苷，其特征在于，按照黃芪皂苷的總重量計(jì)，所述黃芪 皂苷包含13.61% (重量)的黃芪甲苷、0.8% (重量)的黃芪皂苷Ι、3·71% (重量)的黃 芪皂苷II和0. 97% (重量)的黃芪皂苷III。
9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的黃芪皂苷在制備舒張血管的藥物中的用途。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，所述舒張血管的藥物為治療和/或預(yù)防心血管疾病的 藥物，例如治療和/或預(yù)防高血壓和/或心絞痛的藥物。
11.根據(jù)權(quán)利要求9或10所述的用途，所述舒張血管的藥物能夠激活血管內(nèi)皮細(xì)胞 NO-cGMP 系統(tǒng)。
12.根據(jù)權(quán)利要求9或10所述的用途，所述舒張血管的藥物能夠抑制血管平滑肌細(xì)胞 外鈣內(nèi)流。
13.根據(jù)權(quán)利要求9或10所述的用途，所述舒張血管的藥物能夠?qū)崿F(xiàn)Kca和Katp通道的 開(kāi)放。
14.一種用于舒張血管的藥物組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的黃芪皂苷，以 及藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑。
15.一種用于治療高血壓的藥物組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的黃芪皂苷， 以及藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑。
16.根據(jù)權(quán)利要求14或15所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物為口服制劑。
全文摘要
本發(fā)明提供一種黃芪皂苷的制備方法及其用途，該黃芪皂苷的制備方法包括(1)黃芪加水煎煮提取，過(guò)濾，濃縮濾液；(2)加入乙醇進(jìn)行沉淀，靜置；(3)上清液回收乙醇后加水稀釋，注入大孔吸附樹(shù)脂柱，依次用水、20％(體積/體積)乙醇水溶液和70％(體積/體積)乙醇水溶液洗脫；(4)除去70％(體積/體積)乙醇水溶液的洗脫液中的乙醇，干燥即得。研究表明上述黃芪皂苷能夠激活血管內(nèi)皮細(xì)胞NO-cGMP系統(tǒng)，抑制血管平滑肌細(xì)胞外鈣內(nèi)流，以及實(shí)現(xiàn)KCa和KATP通道的開(kāi)放，進(jìn)而可以松弛平滑肌，特別是血管平滑肌，因此具有顯著的血管舒張作用，適用于降低血壓、抗心絞痛等心血管疾病的預(yù)防和治療。
文檔編號(hào)A61P9/12GK102101880SQ20091024252
公開(kāi)日2011年6月22日 申請(qǐng)日期2009年12月17日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月17日
發(fā)明者屠鵬飛, 張可, 馬旭, 馬治中 申請(qǐng)人:北京大學(xué)