專利名稱：：6-姜烯酚治療宮頸癌、白血病和乳腺癌的醫(yī)藥用途的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及天然藥物領域，具體涉及6-姜烯酚在治療宮頸癌、白血病和乳腺癌中的用途。
背景技術：
：生姜及干姜分別為姜科植物姜ZingiberofficinaleRose.的新鮮根莖及干燥根莖，均為常用中藥。姜的臨床應用相當廣泛，國外對其關注程度亦較高。近年來，針對姜及其主要活性成分的化學和藥理學報道較為豐富。6-姜烯酚(6-shogaol)是姜中的揮發(fā)成分之一，其分子式為(:17112403，分子量為276.37，為黃色粉狀物或結晶物，易溶于乙醇，難溶于水，其化學結構式如下H3C'文獻報道6-姜烯酚具有強心、抗血小板或抗血栓、舒縮血管等生物活性。近年來，生姜中活性強的姜烯酚類成分的抗腫瘤作用日漸受到關注。最近，有國外文獻報道6-姜烯酚對人肺癌A549細胞有抗腫瘤活性，[6-Shogaol，anActiveConstituentofDietaryGinger，InducesAutophagybyInhibitingtheAKT/mTORPathwayinHumanNon-S腿llCellLungCancerA549Cells.JAgricFoodChem.2009Oct2.]，但其活性不強，抑制A549細胞生長的IC50為55.4iiM;還有文獻報導6-姜烯酚對人結腸癌COLO205細胞有活性[6_Shogaolinduces即optosisinhumancolorectalcarcinomacellsviaR0Sproduction,caspaseactivation，andGADD153expression.MolNutrFoodRes.2008,52,527-37.]，其活性也很弱，抑制COLO205細胞生長的IC50>60yM。本發(fā)明公開了6-姜烯酚的抗宮頸癌、白血病和乳腺癌的作用，即6-姜烯酚可用于
發(fā)明內(nèi)容制備抗宮頸癌、乳腺癌和白血病的藥物，并且其藥效優(yōu)異。發(fā)明人在對6-姜烯酚藥理活性的研究中發(fā)現(xiàn)，盡管6-姜烯酚對多種腫瘤都顯示有治療活性，但不同的腫瘤活性差異很大，在眾多的抑制腫瘤試驗中，e-姜烯酚對宮頸癌、乳腺癌和白血病的療效最好，對這三種癌癥的治療效果明顯好于對其它癌癥的治療效果。發(fā)明人分別對人肝癌細胞S匪C-7721、人乳腺癌MCF-7、人宮頸癌HeLa、人胰腺癌Aspc-1、人急性早幼粒白血病細胞HL-60、人鼻咽癌CNE2、前列腺癌PC-3及文獻報道的人肺癌A549、人結腸癌HCT15、C0L0205等腫瘤細胞進行體外MTT篩選，發(fā)現(xiàn)其對人宮頸癌HeLa細胞、人急性早幼粒白血病HL-60細胞和人乳腺癌MCF-7細胞的抗增殖活性強并呈良好的時效與量效關系，對A549、HCT15和C0L0205的活性弱，跟文獻報道一致；同時將其作用正常肝細胞L-02，未發(fā)現(xiàn)毒性反應。以下結合實施例對6-姜烯酚的藥理活性做進一步闡述。圖1為6-姜烯酚作用不同細胞株的MTT檢測的IC5。結果圖2為不同濃度6-姜烯酚作用不同細胞株24小時后的抑制生長效果圖3為不同濃度6-姜烯酚作用不同細胞株72小時后的抑制生長效果具體實施例方式實施例16-姜烯酚的體外抗腫瘤作用取對數(shù)生長期的細胞，根據(jù)細胞的大小接種410X103個于96孔板上，待生長24小時后，棄上清，然后按以下分組給藥腫瘤細胞設不加藥組和加藥組(濃度125iiM)，每組設5或6個復孔，培養(yǎng)24或72小時，棄上清，加入100ill含0.5mg/ml的MTT(四氮唑鹽)無血清培養(yǎng)液培養(yǎng)4小時，加入lOOiUDMSO(二甲亞砜)，放置于微型振蕩儀上振蕩10min，再置于酶標儀上570nm處檢測OD值。正常人細胞系L_02做毒性評價，每次實驗重復3次。結果見表l和圖1圖2。表l6-姜烯酚作用不同細胞株的ICs。結果<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>從表1可看出6-姜烯酚對A549、C0L0205和HCT15細胞株的24小時作用的IC5。>50iiM，72小時作用后IC5。"50iiM，說明6-姜烯酚對A549、COLO205和HCT15的活性比較弱；同時也可以得出6-姜烯酚作用MCF-7、HL-60和HeLa細胞24小時后的IC5。均在10iiM左右，72小時后的IC5。均接近5iiM，說明對MCF-7、HL-60和HeLa細胞的抑制活性好；6_姜烯酚對Aspc-1、SMMC-7721的活性也明顯不如對MCF-7、HL-60和HeLa的活性。圖l為在不同化合物濃度下(1，5，10，15，20，25iiM)對MCF-7、HeLa、Aspc-l、S匪C-7721及L-02細胞株作用24小時后的生長抑制情況，結果提示，隨著化合物的濃度增加，與相應不加化合物的對照組比較，MCF-7、HeLa、HL-60、Aspc-l和SMMC-7721細胞增殖活性分別下降，提示該化合物呈濃度依賴性抑制腫瘤細胞細胞增殖；而不抑制正常肝細胞系L-02細胞的增殖。圖2為在不同化合物濃度下(1，5，10，15，20，25iiM)對MCF-7、HeLa、HL_60、Aspc-l、S匪C-7721及L-02細胞株作用72小時后的生長抑制情況，可得出72小時后，相應濃度作用腫瘤細胞株的抑制率增加并不抑制正常肝細胞L-02的生長。綜合上述實驗結果，提示該化合物具有良好的時效和量效關系，同時對正常細胞具有低毒的特性。實施例2細胞形態(tài)學觀察和AO(吖啶橙)染色腫瘤細胞設不加藥組和加藥組(5iiM)。細胞經(jīng)作用不同時間(0，2，4，8，12，24小時)后經(jīng)過4%多聚甲醛固定30min后，0.01M的PBS洗滌2_3次，A0染色10min，熒光顯微鏡下觀察細胞核形態(tài)。發(fā)現(xiàn)陰性處理組的細胞形態(tài)正常，經(jīng)過染色試劑染色后細胞核完整，經(jīng)過6-姜烯酚處理后的許多細胞形態(tài)變圓或皺縮，在熒光顯微鏡下用藍色光激發(fā)發(fā)現(xiàn)細胞核固縮。AO熒光染色后，典型的凋亡細胞胞核致密濃染，呈塊狀或顆粒狀黃綠色熒光；正常細胞均勻淡染；死細胞不染色。實驗結果顯示陰性對照組細胞細胞核均勻淡染，呈黃綠色熒光，偶爾有幾個因自然凋亡導致而被染成致密濃染的凋亡細胞；e-姜烯酚處理組隨作用時間延長，被染成呈塊狀或顆粒狀致密濃染的細胞數(shù)目明顯增加(見圖3)，結果表明化合物處理后的細胞部分凋亡，說明6-姜烯酚抑制腫瘤細胞增殖可能跟細胞凋亡相關。實施例3流式細胞儀檢測細胞凋亡實驗設陰性對照組(即不加藥物處理組)和6-姜烯酚處理組(15iiM)。細胞經(jīng)6-姜烯酚作用12小時后，用不含EDTA的0.1%胰酶消化，含血清培養(yǎng)基終止消化后，收集到10ml的玻璃離心管中于500rpm(或100g)離心5min，棄上清，用0.01M的PBS于500rpm(或100g)離心5min洗滌2次，然后按AnnexinV/PI雙染試劑盒說明書添加結合液體并染色后進行流式細胞儀(BectonDickinsonFACScanFlowCytometer)檢測，F(xiàn)ACS數(shù)據(jù)由流式細胞儀專業(yè)操作人員用FL0WJ0software(TreeStar,CA)軟件進行數(shù)據(jù)分析。結果顯示6-姜烯酚可以誘導細胞凋亡。不加藥的陰性組18小時細胞凋亡率為4.8±1.7%。加6_姜烯酚處理18小時的細胞凋亡率為68.7±5.4%。結果表明6-姜烯酚能誘導細胞凋亡，誘導細胞凋亡是其抑制增殖活性的機制之一。權利要求6-姜烯酚在制備治療和/或預防腫瘤疾病的藥物中的應用，其特征在于所述腫瘤疾病為人宮頸癌、乳腺癌或白血病。全文摘要本發(fā)明涉及天然藥物領域，具體涉及6-姜烯酚治療宮頸癌、白血病和乳腺癌中的用途。在對6-姜烯酚藥理活性的研究中發(fā)現(xiàn)，盡管6-姜烯酚對多種腫瘤都顯示有治療活性，但不同的腫瘤活性差異很大，在眾多的抑制腫瘤試驗中，6-姜烯酚對宮頸癌、乳腺癌和白血病的療效最好，對這三種癌癥的治療效果明顯好于對其它癌癥的治療效果。文檔編號A61K31/12GK101721397SQ20091023259公開日2010年6月9日申請日期2009年12月8日優(yōu)先權日2009年12月8日發(fā)明者劉慧,彭詠波,成小蘭,李萍,齊煉文申請人:中國藥科大學