專利名稱：一種環(huán)磷酰胺注射液及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物制劑領(lǐng)域，更具體地說(shuō)是涉及一種含活性成分環(huán)磷酰胺的經(jīng)注射 給藥的制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
環(huán)磷酰胺(cladribine)是本品為最常用的烷化劑類抗腫瘤藥，進(jìn)入體內(nèi)后，在肝 微粒體酶催化下分解釋出烷化作用很強(qiáng)的氯乙基磷酰胺(或稱磷酰胺氮芥)，而對(duì)腫瘤細(xì) 胞產(chǎn)生細(xì)胞毒作用，此外本品還具有顯著免疫作用。臨床用于惡性淋巴瘤，多發(fā)性骨髓瘤， 白血病、乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、支氣管癌、肺癌等，有一定療效。也可 用于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、兒童腎病綜合征以及自身免疫疾病的治療。環(huán)磷酰胺可使血清中假膽 堿酯酶減少，使血清尿酸水平增高，因此，與抗痛風(fēng)藥如別嘌呤醇、秋水仙堿、丙磺舒等同用 時(shí)，應(yīng)調(diào)整抗痛風(fēng)藥物的劑量。此外也加強(qiáng)了琥珀膽堿的神經(jīng)肌肉阻滯作用，可使呼吸暫停 延長(zhǎng)。環(huán)磷酰胺可抑制膽堿酯酶活性，因而延長(zhǎng)可卡因的作用并增加毒性。大劑量巴比妥 類、皮質(zhì)激素類藥物可影響環(huán)磷酰胺的代謝，同時(shí)應(yīng)用可增加環(huán)磷酰胺的急性毒性。環(huán)磷酰 胺可使血清中假膽堿酯酶減少，使血清尿酸水平增高，因此，與抗痛風(fēng)藥如別嘌呤醇、秋水 仙堿、丙磺舒等同用時(shí)，應(yīng)調(diào)整抗痛風(fēng)藥物的劑量。此外也加強(qiáng)了琥珀膽堿的神經(jīng)肌肉阻滯 作用，可使呼吸暫停延長(zhǎng)。環(huán)磷酰胺可抑制膽堿酯酶活性，因而延長(zhǎng)可卡因的作用并增加毒 性。大劑量巴比妥類、皮質(zhì)激素類藥物可影響環(huán)磷酰胺的代謝，同時(shí)應(yīng)用可增加環(huán)磷酰胺的 急性毒性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供適合臨床治療毛細(xì)胞白血病要求的注射藥物，本發(fā)明以注射 給藥的制劑及其制備方法，尤其是靜脈注射給藥，解決了急性、慢性粒細(xì)胞白血病治療上的需求。本發(fā)明的技術(shù)方案一種含活性成分環(huán)磷酰胺經(jīng)注射給藥的制劑，其特征在于由 活性成分環(huán)磷酰胺0. 001-50%和水溶性填充劑、PH調(diào)節(jié)劑、增溶劑、抗氧劑、注射用水、滲 透壓調(diào)節(jié)劑組成。本發(fā)明所述的經(jīng)注射給藥的制劑，其特征在于所述的制劑是指含有環(huán)磷酰胺的凍 干粉針、小針注射液和小輸液。本發(fā)明所述的經(jīng)注射給藥的制劑，其特征在于所述的制劑是a.凍干劑中藥物成分與其它藥用輔料的重量百分比為0. 1-50% ；b.小針注射液中藥物的濃度為50mg/ml-0. 5mg/ml ；c.小輸液中藥物的濃度為lmg/ml-0. 02mg/ml。本發(fā)明所述的經(jīng)注射給藥的制劑，其特征在于所述的小輸液是指環(huán)磷酰胺與水組 成的復(fù)方注射液。本發(fā)明所述的經(jīng)注射給藥的制劑，其特征在于水溶性填充劑是甘露或吐溫；PH調(diào)節(jié)劑是枸櫞酸、磷酸、蘋(píng)果酸等非揮發(fā)性的酸以及氫氧化鉀、氫氧化鈉、碳酸鈉或碳酸氫鈉 鹽、磷酸鈉或鉀或銨鹽；增溶劑是聚乙烯吡咯烷酮、PEG6000、PEG4000、泊洛沙姆、卡波姆、吐 溫80、低分子右旋糖苷或三羥甲基氨基甲烷；抗氧劑是亞硫酸鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉 或亞硫酸氫鈉；有機(jī)硫抗氧劑為硫代甘油、硫脲素或1-硫代山梨糖醇。本發(fā)明含活性成分環(huán)磷酰胺經(jīng)注射給藥制劑的制備方法，其特征在于該方法包括 下列步驟I、組成(1)凍干劑環(huán)磷酰胺0.1 % -30%，，水溶性填充劑50% -70 %,增溶劑 0. 1% -12%，抗氧劑 0. 003% -3%，滲透壓 0.9% ；(2)小針注射液環(huán)磷酰胺0. 05 % -1. 0 %，增溶劑0. 1 % -8 %，抗氧劑 0. 001% -5%，注射用水 70% -90% ；(3)小輸液環(huán)磷酰胺0. 005-0. 1%，增溶劑0. 1% ，抗氧劑0. 003% _1%，滲 透壓0.9%，注射用水88% -98% ；II.不同的經(jīng)注射給藥制劑的制備方法包括下列步驟(1)凍干劑取環(huán)磷酰胺和水溶性填充劑、增溶劑、抗氧劑、滲透壓劑等，加入注射 用水適量，調(diào)節(jié)PH值至4-10使其溶解，加水至刻度，加入0. 1-0. 5%活性炭，在20-50°C下 攪拌10-60分鐘，脫碳，采用微孔濾膜過(guò)濾除菌，濾液進(jìn)行分裝，采用冷凍干燥法，制得白色 疏松塊狀物，封口即的；(2)小針注射液取環(huán)磷酰胺和水溶性填充劑、增溶劑、抗氧劑、滲透壓劑等，加 入注射用水適量，調(diào)節(jié)PH值至4-10使其溶解，加水至刻度，加入0. 1-0. 5 %活性炭，在 20-50°C下攪拌10-60分鐘，脫碳，精濾、灌封、滅菌；(3)小輸液取環(huán)磷酰胺和水溶性填充劑、增溶劑、抗氧劑、滲透壓劑等，加入注射 用水適量約20%，調(diào)節(jié)PH值至4-10使其溶解，加入0. 1-0. 5%活性炭，在20-50°C下攪拌 10-60分鐘，脫碳，加水至刻度，精濾、灌封、滅菌。目前認(rèn)為已糖醇類抗癌活性主要來(lái)自其α，ω 二環(huán)氧化物的兩個(gè)三元環(huán)的張力， 它能和癌細(xì)胞的DNA結(jié)合，破壞DNA，從而阻止其復(fù)制，抑制癌細(xì)胞的增殖。引入兩個(gè)乙酰 基的DADAG脂溶性增加，易通過(guò)細(xì)胞膜，發(fā)揮對(duì)DNA烷化的潛力，故DADAG的療效優(yōu)于DAD。 重慶醫(yī)學(xué)院李維信等[6]用DAD進(jìn)行“慢粒”治療的超微結(jié)構(gòu)觀察結(jié)果與Kerr等人[7，8] 所描述的“細(xì)胞收縮性壞死”以及后來(lái)改稱的“凋亡”在形態(tài)表現(xiàn)上相符合。但DADAG抗腫 瘤作用是否與誘導(dǎo)凋亡有關(guān)，目前尚不完全清楚。在本實(shí)驗(yàn)中，HL-60和K562細(xì)胞經(jīng)DADAG 作用后，其DNA經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳出現(xiàn)凋亡細(xì)胞特征性的生化學(xué)變化-梯狀條帶；流式細(xì)胞 儀同樣檢測(cè)到凋亡峰，并呈一定的量效和時(shí)效關(guān)系，這說(shuō)明DADAG抗腫瘤作用與誘導(dǎo)細(xì)胞 凋亡有關(guān)。DADAG對(duì)K562細(xì)胞的IC50和誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡的劑量明顯大于HL-60，且不 影響K562細(xì)胞的細(xì)胞周期分布，這與K562細(xì)胞連續(xù)表達(dá)有活性的Bcr/Abl酪氨酸激酶有 關(guān)。研究表明Bcr/Abl的表達(dá)可抑制生長(zhǎng)因子的去除和Vp-16誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，Abl酪氨 酸激酶的功能與抑制凋亡的bcl-2相似[9，10]。這表明凋亡有細(xì)胞類型特異性，HL-60和 K562細(xì)胞的凋亡信號(hào)途徑不一樣。對(duì)K562細(xì)胞生化途徑的深入研究，將有助于闡明K562 細(xì)胞對(duì)大多數(shù)化療藥不敏感和耐藥的機(jī)理。本發(fā)明對(duì)二乙酰二環(huán)磷酰胺(diacetyldianhydrogalactitol，DADAG)在體內(nèi)外的抗腫瘤作用進(jìn)行了藥理實(shí)驗(yàn)，探討其抗腫瘤作用與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的關(guān)系。方法建立小 鼠腦內(nèi)接種艾氏腹水癌模型，觀察DADAG體內(nèi)抗瘤作用；MTT法觀察DADAG對(duì)人早幼粒白血 病細(xì)胞株HL-60和人紅白血病細(xì)胞株K562的生長(zhǎng)抑制作用，DNA電泳和流式細(xì)胞儀分析 HL-60和K562細(xì)胞凋亡的情況。結(jié)果DADAG10mg/kgip，每天1次，連續(xù)給藥7天，可顯著延長(zhǎng)小鼠中位生存時(shí)間； 對(duì)HL-60和K562均有生長(zhǎng)抑制作用，藥物作用72h的IC50分別為3. 7mg/L和25. 5mg/L ； 作用HL-60和K562細(xì)胞后電泳顯示有凋亡細(xì)胞特有的“梯狀”條帶，DNA直方圖出現(xiàn)亞Gl峰。結(jié)論DADAG抗腫瘤作用與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有關(guān)。對(duì)大鼠W256抑瘤率為90. 6 % (2mg/kg, ipX6)，Lewis肺癌抑瘤率為52. (3mg/kg, ipX7)，B16黑色素瘤抑瘤率為 72. 6% (3mg/kg，ipX7)，EAC 實(shí)體瘤抑瘤率為 32. 8% (8mg/kg，ipX7)(待發(fā)表)。我們觀 察了 DADAG對(duì)腦內(nèi)移植性EAC實(shí)體瘤的作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在10mg/kg高劑量下，DADAG對(duì)顱內(nèi) 荷瘤小鼠的生命延長(zhǎng)率是四％，表明DADAG有可能透過(guò)血腦屏障。DADAG對(duì)腦瘤的抑制作 用和對(duì)HL-60、K562細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用，表明其有體內(nèi)外抗腫瘤作用，為DADAG臨床應(yīng)用 提供理論依據(jù)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說(shuō)明，實(shí)施例僅為解釋性的說(shuō)明，決不意味 著它以任何方式限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1取環(huán)磷酰胺3g，置于容器中，加增溶劑聚乙烯吡咯烷酮0. lg，注射用水80ml，加氫 氧化鈉0. 2g，攪拌使溶解，加lmol/L的枸櫞酸調(diào)節(jié)PH至7-9. 0，加入甘露醇^g、攪拌使溶 解，補(bǔ)加水至100ml。加入0.5g活性碳，在30°C下攪拌20分鐘，脫碳，采用微孔濾膜過(guò)濾除 菌，濾液按每支Iml進(jìn)行分裝，預(yù)凍2小時(shí)后，冷凍下減壓干燥12小時(shí)，至樣品溫度到室溫 后，再干燥5小時(shí)，制得白色疏松塊狀物，封口即得環(huán)磷酰胺凍干粉針。實(shí)施例2取環(huán)磷酰胺50g，置于容器中，加PEG-6000 2g，注射用水180ml，攪拌使溶解，以 lmol/L的鹽酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH至5. 0-9. 0，加入甘露醇80g、山梨醇20g，攪拌使溶解，補(bǔ) 加水至2000ml。加入0. 5g活性碳，在30°C下攪拌20分鐘，脫碳，采用微孔濾膜過(guò)濾除菌， 濾液按每支2ml進(jìn)行分裝，預(yù)凍2小時(shí)后，冷凍下減壓干燥18小時(shí)，至樣品溫度到室溫后， 再干燥5小時(shí)，制得白色疏松塊狀物，封口即得環(huán)磷酰胺凍干粉針。實(shí)施例3取環(huán)磷酰胺10g，木糖醇0. 3g，加入到已溶解5g十二烷基硫酸鈉的注射用水440ml 中，加入2g硫代硫酸鈉攪拌溶解，加入碳酸氫鈉調(diào)節(jié)PH為5. 5-8. 5，加入0. 5g活性炭，室溫 攪拌吸附30分鐘，除炭，補(bǔ)加水至500ml，精濾、以每支5ml灌封、滅菌，即得環(huán)磷酰胺注射液。實(shí)施例4取環(huán)磷酰胺10g，木糖醇0. 3g，三羥甲基氨基甲烷5g的注射用水440ml中，加入2g EDTA-2Na攪拌溶解，加入碳酸氫鈉調(diào)節(jié)PH為7. 5-9. 0，補(bǔ)加水至500ml，加入5g活性炭，室溫?cái)嚢栉?0分鐘，除炭，精濾，以每支2ml灌封、滅菌，即得環(huán)磷酰胺注射液。實(shí)施例5取環(huán)磷酰胺lg，木糖醇0. Ig加入注射用水180ml中，加0. 5克NaOH攪拌使溶解， 加入3g焦亞硫酸鈉，攪拌溶解，調(diào)節(jié)PH為7. 0-9. 0，補(bǔ)加注射用水至200ml，加入2g活性炭， 攪拌吸附30分鐘，除炭、精濾、以每支2ml灌封、滅菌，即得環(huán)磷酰胺注射液。實(shí)施例6取環(huán)磷酰胺5g，木糖醇0. 5g加入15g磷酸氫二鈉和90g氯化鈉，再加注射用水 2000ml，攪拌使溶解，調(diào)節(jié)PH為7. 5-9. 0，加入IOg活性炭，攪拌吸附30分鐘，除炭，補(bǔ)加水 至10000ml，精濾、灌封每瓶100ml，滅菌，即得環(huán)磷酰胺氯化鈉注射液。實(shí)施例7取環(huán)磷酰胺10g，加入15g氫氧化鈉和Ig木糖醇，15g焦亞硫酸鈉，再加注射用水 2000ml，攪拌使溶解，調(diào)節(jié)PH為5. 0-8. 0，加入IOg活性炭，攪拌吸附30分鐘，除炭，補(bǔ)加水 至10000ml，精濾、灌封每瓶100ml，滅菌，即得環(huán)磷酰胺木糖醇注射液。實(shí)施例8取環(huán)磷酰胺3. 0g，木糖醇0. 5g，加入PEG-400020g，注射用水2000ml，攪拌使溶解， 再加入15g磷酸氫二鈉和500g低分子右旋糖苷，15g EDTA-2Na,攪拌使溶解，調(diào)節(jié)PH為 7. 0-8. 5，加入IOg活性炭，攪拌吸附30分鐘，除炭，補(bǔ)加水至5000ml，精濾、灌封每瓶50ml，
滅菌，即得環(huán)磷酰胺低分子右旋糖苷注射液。
權(quán)利要求
1.一種環(huán)磷酰胺注射液，其特征在于由活性成分環(huán)磷酰胺0. 001-50%和水溶性填充 劑、PH調(diào)節(jié)劑、增溶劑、抗氧劑、注射用水、滲透壓調(diào)節(jié)劑組成。
2.如權(quán)利要求1所述的經(jīng)注射給藥的制劑，其特征在于所述的制劑是指含有環(huán)磷酰胺 的凍干粉針、小針注射液和小輸液。
3.如權(quán)利要求1所述的經(jīng)注射給藥的制劑，其特征在于所述的制劑是a.凍干劑中藥物成分與其它藥用輔料的重量百分比為0.1-50% ；b.小針注射液中藥物的濃度為50mg/ml-0.5mg/ml ；c.小輸液中藥物的濃度為lmg/ml-0.02mg/ml。
4.如權(quán)利要求3所述的經(jīng)注射給藥的制劑，其特征在于所述的小輸液是指環(huán)磷酰胺與 水組成的復(fù)方注射液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的經(jīng)注射給藥的制劑，其特征在于水溶性填充劑是甘露或吐 溫；PH調(diào)節(jié)劑是枸櫞酸、磷酸、蘋(píng)果酸等非揮發(fā)性的酸以及氫氧化鉀、氫氧化鈉、碳酸鈉或 碳酸氫鈉鹽、磷酸鈉或鉀或銨鹽；增溶劑是聚乙烯吡咯烷酮、PEG6000、PEG4000、泊洛沙姆、 卡波姆、吐溫80、低分子右旋糖苷或三羥甲基氨基甲烷；抗氧劑是亞硫酸鈉、焦亞硫酸鈉、 硫代硫酸鈉或亞硫酸氫鈉；有機(jī)硫抗氧劑為硫代甘油、硫脲素或1-硫代山梨糖醇。
6.一種含活性成分環(huán)磷酰胺經(jīng)注射給藥制劑的制備方法，其特征在于該方法包括下列 步驟不同的經(jīng)注射給藥制劑的制備方法包括下列步驟(1)凍干劑取環(huán)磷酰胺和水溶性填充劑、增溶劑、抗氧劑、滲透壓劑等，加入注射用水 適量，調(diào)節(jié)PH值至4-10使其溶解，加水至刻度，加入0. 1-0. 5%活性炭，在20-50°C下攪拌 10-60分鐘，脫碳，采用微孔濾膜過(guò)濾除菌，濾液進(jìn)行分裝，采用冷凍干燥法，制得白色疏松 塊狀物，封口即的；(2)小針注射液取環(huán)磷酰胺和水溶性填充劑、增溶劑、抗氧劑、滲透壓劑等，加入注射 用水適量，調(diào)節(jié)PH值至4-10使其溶解，加水至刻度，加入0. 1-0. 5%活性炭，在20-50°C下 攪拌10-60分鐘，脫碳，精濾、灌封、滅菌；(3)小輸液取環(huán)磷酰胺和水溶性填充劑、增溶劑、抗氧劑、滲透壓劑等，加入注射用水 適量約20%，調(diào)節(jié)PH值至4-10使其溶解，加入0. 1-0. 5%活性炭，在20-50°C下攪拌10-60 分鐘，脫碳，加水至刻度，精濾、灌封、滅菌。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種環(huán)磷酰胺經(jīng)注射給藥的制劑及其制備方法。其特征在于由環(huán)磷酰胺和水溶性填充劑、pH調(diào)節(jié)劑、注射用水、滲透壓調(diào)節(jié)劑組成。其中環(huán)磷酰胺的重量百分比為0.001-50％，余量為藥用輔料或水。本發(fā)明制備的環(huán)磷酰胺經(jīng)注射給藥的制劑，穩(wěn)定性好、生物利用度高，解決了臨床急性、慢性粒細(xì)胞白血病治療要求的注射藥物的需求。
文檔編號(hào)A61K9/08GK102058524SQ200910228568
公開(kāi)日2011年5月18日 申請(qǐng)日期2009年11月13日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月13日
發(fā)明者宋富智 申請(qǐng)人:天津金世制藥有限公司