專利名稱：一種人參次苷h提取物及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥提取物及其制備，特別涉及人參次苷H提取物及其制備。
背景技術(shù)：
人參在治療心腦血管疾病方面，有許多報道。人參次苷，可治療冠心病和缺血性中風(fēng)。人參次苷H為人參皂苷類成分經(jīng)水解產(chǎn)生的次級皂苷，再經(jīng)硅膠柱層析精制所得 到的有效部位-H組皂苷，其組分為人參皂苷Mil、Mi2和他3，其中他2為該藥的主要成分， 也是該藥的主要抗癌活性成分。藥效學(xué)研究表明人參皂苷他2對肝癌、黑色素瘤B16、宮 頸癌及肉瘤S180等癌細(xì)胞的增殖有顯著的特異性的抑制作用。其作用機(jī)理為在癌細(xì)胞 增殖過程中，經(jīng)人參皂苷他2作用，使癌細(xì)胞停止在一定的增殖期，并促使其逆轉(zhuǎn)為正常細(xì) 胞。含有人參皂苷Mil、Mi2和他3的H組皂苷，為“人參次苷H”，體外實驗研究發(fā)現(xiàn)人參次 苷H對多種人源腫瘤細(xì)胞的增殖均有明顯的抑制作用?，F(xiàn)有技術(shù)分離人參次苷H的效果不佳，本發(fā)明人在對人參次苷H提取物進(jìn)行研究 過程中，采用新的分離技術(shù)，試驗出一組新的人參次苷H提取物及其制備方法，這些人參次 苷H提取物具有療效高，純度高，吸收好，質(zhì)量穩(wěn)定，同時制備方法分離效果佳，含量高，工 藝簡單，操作方便，成本低廉，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種人參次苷H提取物，提取物中含人參皂苷Iih1含量范圍為 2% -25%，人參皂苷他2含量范圍為15% -35%;人參總次苷含量以人參皂苷他2計不少于 60 %，人參皂苷Iih1和人參皂苷Mi2含量之和不少于35 %。本發(fā)明的人參次苷H提取物，制備方法如下步驟1、含有人參皂苷類成分的藥材用水提取，提取液通過大孔吸附樹脂柱，先用 水洗脫，再用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮至干，得總皂苷；步驟2、步驟1得到的總皂苷溶于醇堿溶液中反應(yīng)，除醇，收集沉淀物；步驟3、沉淀物用乙醇溶解，拌入硅膠中，進(jìn)行硅膠柱層析，用乙醇和乙酸乙酯混合 液進(jìn)行洗脫，收集富含人參皂苷Mil和他2的流份，濃縮即得；其中，步驟1中所述大孔吸附樹脂為弱極性或非極性大孔吸附樹脂，所述乙醇范 圍為 30-95% ；步驟2中所述的醇堿溶液選自乙醇和氫氧化鈉，氫氧化鉀，碳酸氫鈉或碳酸氫鉀 形成的溶液，步驟3所述乙醇和乙酸乙酯混合液為含有5-10%乙醇的乙酸乙酯。優(yōu)選的制備方法如下步驟1、選自西洋參葉、西洋參、三七、三七葉、人參或人參葉等含有人參皂苷類成 分的藥材經(jīng)水提取，提取液通過大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫，洗脫至流出液近無色，繼用85%乙醇洗脫，收集85%乙醇洗脫液，濃縮至干得總皂苷；步驟2、總皂苷溶于含20%氫氧化鈉的醇溶液，加熱回流10小時，減壓回收乙醇至 無醇，析出沉淀，收集沉淀物，得人參總次苷粗品；步驟3、人參總次苷粗品用乙醇加熱使溶解，拌入2倍量的硅膠中，進(jìn)行硅膠柱層 析，用含5-10%乙醇的乙酸乙酯進(jìn)行洗脫，薄層TLC檢查洗脫結(jié)果，收集富含人參皂苷Mil 和人參皂苷他2的流份，濃縮至干，即得人參次苷H組合物。更優(yōu)選的制備方法如下步驟1、選自西洋參葉、西洋參、三七、三七葉、人參或人參葉等含有人參皂苷類成 分的藥材用水提取2-3次，每次1-2小時，每次加水8-12倍量，提取液通過大孔吸附樹脂 柱，先用水洗脫，洗脫至流出液近無色，繼用85 %乙醇洗脫，收集85 %乙醇洗脫液，濃縮至 干得總皂苷；步驟2、總皂苷溶于含20%氫氧化鈉的醇溶液，加熱回流10h，減壓回收乙醇至無 醇，析出沉淀，收集沉淀物，得人參總次苷粗品；步驟3、人參總次苷粗品用乙醇加熱使溶解，拌入2倍量的硅膠中，進(jìn)行硅膠柱層 析，用含5-10%乙醇的乙酸乙酯進(jìn)行洗脫，薄層TLC檢查洗脫結(jié)果，收集富含人參皂苷Mil 和人參皂苷他2的流份，濃縮至干，即得人參次苷H組合物。本發(fā)明的人參次苷H提取物的檢測方法，步驟如下(1)人參次苷H中人參總次苷含量以人參皂苷Mi2計不得少于60%對照品溶液的制備精密稱取經(jīng)40°C減壓干燥M小時的人參皂苷Mi2對照品適 量，加甲醇制成每Iml含0. 15mg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備精密稱取人參次苷H組合物10mg，用50ml正丁醇飽和的水超 聲5分鐘后轉(zhuǎn)移至分液漏斗，加入2g氯化鈉溶解后，用水飽和的正丁醇-乙酸乙酯=1 4 萃取三次，每次50ml，合并正丁醇乙酸乙酯層溶液，濃縮至干，殘渣用甲醇溶解，定量轉(zhuǎn)移至 50ml量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即得；測定法精密量取對照品溶液及供試品溶液各1ml，分別置15ml具塞試管中，水 浴蒸干，精密加入新配制的5%香草醛冰醋酸-高氯酸=1 4混合溶液anl，搖勻，密塞， 置60°C水浴中加熱15分鐘，取出，立即放入冰水中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸10ml，搖 勻，以試劑作空白，照中國藥典2005年版一部附錄VA分光光度法，在550nm的波長處測定 吸收度，計算，即得；本品按干燥品計算，含人參總次苷以人參皂苷Rh2(C36H62O8)計，不得少于60. 0% ；(2)人參次苷H中人參皂苷Iih1和人參皂苷Mi2含量之和不得少于35% ；色譜條件 與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵和硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以0. 2%磷酸 溶液為流動相B，按下列梯度進(jìn)行洗脫；檢測波長為203nm，理論板數(shù)按人參皂苷Mi2峰計算 應(yīng)不低于7000 ；
權(quán)利要求
1.一種人參次苷H提取物，其特征在于，提取物中含人參皂苷Iih1含量范圍為 2% -25%，人參皂苷他2含量范圍為15% -35%;人參總次苷含量以人參皂苷他2計不少于 60 %，人參皂苷Iih1和人參皂苷Mi2含量之和不少于35 %。
2.權(quán)利要求1的人參次苷H提取物，其特征在于，制備方法如下步驟1、含有人參皂苷類成分的藥材，用水提取，提取液通過大孔吸附樹脂柱，先用水洗 脫，再用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮至干，得總皂苷；步驟2、步驟1得到的總皂苷溶于醇堿溶液中反應(yīng)，除醇，收集沉淀物； 步驟3、沉淀物用乙醇溶解，拌入硅膠中，進(jìn)行硅膠柱層析，用乙醇和乙酸乙酯混合液進(jìn) 行洗脫，收集富含人參皂苷Mil和他2的流份，濃縮即得；其中，步驟1中所述大孔吸附樹脂為弱極性或非極性大孔吸附樹脂，所述乙醇范圍為 30-95% ；步驟2中所述的醇堿溶液選自乙醇和氫氧化鈉，氫氧化鉀，碳酸氫鈉或碳酸氫鉀形成 的溶液，步驟3所述乙醇和乙酸乙酯混合液為含有5-10%乙醇的乙酸乙酯。
3.權(quán)利要求1的人參次苷H提取物，其特征在于，制備方法如下步驟1、選自西洋參葉、西洋參、三七、三七葉、人參或人參葉等含有人參皂苷類成分的 藥材經(jīng)水提取，提取液通過大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫，洗脫至流出液近無色，繼用85% 乙醇洗脫，收集85%乙醇洗脫液，濃縮至干得總皂苷；步驟2、總皂苷溶于含20%氫氧化鈉的醇溶液，加熱回流10小時，減壓回收乙醇至無 醇，析出沉淀，收集沉淀物，得人參總次苷粗品；步驟3、人參總次苷粗品用乙醇加熱使溶解，拌入2倍量的硅膠中，進(jìn)行硅膠柱層析，用 含5-10%乙醇的乙酸乙酯進(jìn)行洗脫，薄層TLC檢查洗脫結(jié)果，收集富含人參皂苷和人參 皂苷他2的流份，濃縮至干，即得人參次苷H組合物。
4.權(quán)利要求1的人參次苷H提取物，其特征在于，制備方法如下步驟1、選自西洋參葉、西洋參、三七、三七葉、人參或人參葉的含有人參次苷H的藥材 用水提取2-3次，每次1-2小時，每次加水8-12倍量，提取液通過大孔吸附樹脂柱，先用水 洗脫，洗脫至流出液近無色，繼用85 %乙醇洗脫，收集85 %乙醇洗脫液，濃縮至干得總皂 苷；步驟2、總皂苷溶于含20%氫氧化鈉的醇溶液，加熱回流10h，減壓回收乙醇至無醇，析 出沉淀，收集沉淀物，得人參總次苷粗品；步驟3、人參總次苷粗品用乙醇加熱使溶解，拌入2倍量的硅膠中，進(jìn)行硅膠柱層析，用 含5-10%乙醇的乙酸乙酯進(jìn)行洗脫，薄層TLC檢查洗脫結(jié)果，收集富含人參皂苷和人參 皂苷他2的流份，濃縮至干，即得人參次苷H組合物。
5.權(quán)利要求1的人參次苷H提取物的檢測方法，其特征在于，步驟如下(1)人參次苷H中人參總次苷含量以人參皂苷Rh2計不得少于60%對照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)40°C減壓干燥M小時的人參皂苷Mi2對照品適量，加甲醇制成每Iml含0. 15mg 的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備精密稱取人參次苷H組合物10mg，用50ml正丁醇飽和的水超聲 5分鐘后轉(zhuǎn)移至分液漏斗，加入2g氯化鈉溶解后，用水飽和的正丁醇-乙酸乙酯=1 4萃取三次，每次50ml，合并正丁醇乙酸乙酯層溶液，濃縮至干，殘渣用甲醇溶解，定量轉(zhuǎn)移至 50ml量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即得；測定法精密量取對照品溶液及供試品溶液各1ml，分別置15ml具塞試管中，水浴蒸 干，精密加入新配制的5%香草醛冰醋酸-高氯酸=1 4混合溶液anl，搖勻，密塞，置60°C 水浴中加熱15分鐘，取出，立即放入冰水中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸IOml，搖勻，以試劑 作空白，照中國藥典2005年版一部附錄V A分光光度法，在550nm的波長處測定吸收度，計 算，即得；本品按干燥品計算，含人參總次苷以人參皂苷Mi2(C36H62O8)計，不得少于60.0% ； (2)人參次苷H中人參皂苷Iih1和人參皂苷Mi2含量之和不得少于35% ； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵和硅膠為填充劑；以乙腈為流動相 A，以0. 2%磷酸溶液為流動相B，按下列梯度進(jìn)行洗脫；檢測波長為203nm， 理論板數(shù)按人參皂苷Mi2峰計算應(yīng)不低于7000 ；
6.含權(quán)利要求1的人參次苷H提取物的藥物組合物。
7.權(quán)利要求1的人參次苷H提取物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
8.權(quán)利要求1的人參次苷H提取物的制備方法，其特征在于，步驟如下步驟1、含有人參皂苷類成分的藥材用水提取，提取液通過大孔吸附樹脂柱，先用水洗 脫，再用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮至干，得總皂苷；步驟2、步驟1得到的總皂苷溶于醇堿溶液中反應(yīng)，除醇，收集沉淀物； 步驟3、沉淀物用乙醇溶解，拌入硅膠中，進(jìn)行硅膠柱層析，用乙醇和乙酸乙酯混合液進(jìn) 行洗脫，收集富含人參皂苷Mil和他2的流份，濃縮即得；其中，步驟1中所述大孔吸附樹脂為弱極性或非極性大孔吸附樹脂，所述乙醇范圍為 30-95% ；步驟2中所述的醇堿溶液選自乙醇和氫氧化鈉，氫氧化鉀，碳酸氫鈉或碳酸氫鉀形成 的溶液，步驟3所述乙醇和乙酸乙酯混合液為含有5-10%乙醇的乙酸乙酯。
9.權(quán)利要求9的制備方法，其特征在于，步驟如下步驟1、選自西洋參葉、西洋參、三七、三七葉、人參或人參葉等含有人參皂苷類成分的 藥材用水提取2-3次，每次1-2小時，每次加水8-12倍量，提取液通過大孔吸附樹脂柱，先 用水洗脫，洗脫至流出液近無色，繼用85%乙醇洗脫，收集85%乙醇洗脫液，濃縮至干得總 皂苷；步驟2、總皂苷溶于含20%氫氧化鈉的醇溶液，加熱回流10h，減壓回收乙醇至無醇，析 出沉淀，收集沉淀物，得人參總次苷粗品；步驟3、人參總次苷粗品用乙醇加熱使溶解，拌入2倍量的硅膠中，進(jìn)行硅膠柱層析，用 含5-10%乙醇的乙酸乙酯進(jìn)行洗脫，薄層TLC檢查洗脫結(jié)果，收集富含人參皂苷Mil和人參 皂苷他2的流份，濃縮至干，即得。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種中藥提取物及其制備，特別涉及人參次苷H提取物及其制備。本發(fā)明的提取物中含人參皂苷Rh1含量范圍為2％-25％，人參皂苷Rh2含量范圍為15％-35％；人參總次苷含量以人參皂苷Rh2計不少于60％，人參皂苷Rh1和人參皂苷Rh2含量之和不少于35％。
文檔編號A61P35/00GK102058647SQ20091022848
公開日2011年5月18日 申請日期2009年11月17日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月17日
發(fā)明者周水平, 宋兆輝, 張?zhí)m蘭, 朱永宏, 林萬里, 蔡楠, 黃芝娟 申請人:天津天士力制藥股份有限公司