專利名稱：：抗菌性組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及具有抗菌活性的組合物。
背景技術(shù)：
：流質(zhì)飲食在醫(yī)院或養(yǎng)老機(jī)構(gòu)等中被廣泛使用，用于經(jīng)口營養(yǎng)攝取困難的情況或者有吞咽障礙的情況等。流質(zhì)飲食經(jīng)由從鼻腔、PEG(經(jīng)皮內(nèi)窺鏡下胃造口術(shù))等插入的導(dǎo)管、管被注入到體內(nèi)，但一般來說，流質(zhì)飲食利用者是高齡者或具有某種疾病的患者，免疫力多低下，容易感染病原菌。在這種易感染者多的機(jī)構(gòu)中，一旦感染發(fā)生，有時往往通過醫(yī)務(wù)人員等發(fā)展為院內(nèi)感染*機(jī)構(gòu)內(nèi)感染。雖然對防止院內(nèi)感染對策的認(rèn)識有所提高，但由于高齡者的增加、耐性菌的出現(xiàn)等院內(nèi)感染的問題越來越多。國內(nèi)的院內(nèi)感染菌在1970年代以前以綠膿桿菌為主，但從1980年以后MRSA開始占據(jù)院內(nèi)感染菌的首位。由于MSRA對抗生素顯示抵抗性，因此是特別需要對策的病原菌。如果流質(zhì)飲食具有抗菌作用，則可成為易感染者的防感染手段之一，但到目前為止，還沒有關(guān)于流質(zhì)飲食的抗菌作用的報(bào)告。非專利文獻(xiàn)1:Go印fert，J.M.，Ch皿g，K.C.，Behaviorofsalmonellaeinslicedluncheonmeats,ApplMicrobiol,19，190—192，1970非專利文獻(xiàn)2:中江悅郎著、乳肉蛋的科學(xué)、弘學(xué)出版、pl32-137、1996非專禾U文獻(xiàn)3:KawaiY.，Saito，T.，Kitazawa，H.，andItohT.，Biosci.Biotech.Biochem.62，22438-40，1998非專利文獻(xiàn)4:Shah，N.P.:Somebeneficialeffectsofprobioticbacteria,BioscienceMicroflora,19，2，99-106，2000
發(fā)明內(nèi)容發(fā)明所要解決的課題本發(fā)明的課題在于提供可成為防感染手段的具有抗菌活性的組合物。用于解決課題的方法為了解決上述課題，本發(fā)明人等著眼于酸性流質(zhì)飲食。通常來說流質(zhì)飲食被調(diào)制為中性，但本發(fā)明人等所著眼的酸性流質(zhì)飲食由于含有乳發(fā)酵制品作為蛋白質(zhì)來源，因此呈酸性。本發(fā)明人等在研究酸性流質(zhì)飲食的抗菌作用時，對大腸桿菌和綠膿桿菌等革蘭氏陰性菌顯示了優(yōu)異的抗菌性。進(jìn)而，在研究對革蘭氏陽性菌的效果時，驚異地發(fā)現(xiàn)該酸性流質(zhì)飲食對革蘭氏陽性菌顯示了較作為原料的乳發(fā)酵制品更強(qiáng)的抗菌作用。眾所周知微生物不耐酸性環(huán)境。酸對于微生物繁殖的阻礙作用依賴于氫離子濃3度，在相同pH的情況下，乳酸或乙酸等有機(jī)酸較鹽酸或硫酸等無機(jī)酸顯示了更強(qiáng)的抗菌作用。據(jù)報(bào)告，為沙門氏桿菌時，在乙酸或丙酸中可繁殖的最低pH為pH5.4，在乳酸中為pH4.4(非專利文獻(xiàn)1)。還已知酸乳酪等發(fā)酵乳具有抗菌作用。作為乳酸菌產(chǎn)生的抗菌性物質(zhì)，除了乳酸之外，還可以舉出復(fù)制的少量揮發(fā)性脂肪酸(乙酸、甲酸)、過氧化氫、e-羥基丙醛(口<于'J>)、2-吡咯烷酮-5-羧酸等一組低分子量化合物(非專利文獻(xiàn)2)。已知通過乳酸菌產(chǎn)生的菌素包括乳酸乳球菌乳亞種產(chǎn)生的乳酸鏈球菌素、加氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)LA-39產(chǎn)生的加氏菌素A等(非專利文獻(xiàn)3)。已知乳酸菌所具有的益生菌效果如下對病原菌附著到腸上皮具有抑制效果、通過產(chǎn)生抗菌物質(zhì)對感染癥具有治療預(yù)防效果、通過調(diào)整腸內(nèi)環(huán)境或活化巨噬細(xì)胞對宿主免疫機(jī)能具有剌激效果、對腹瀉"便秘具有預(yù)防效果(非專利文獻(xiàn)4)。但是即便具有上述公知的知識，使用發(fā)酵乳制品調(diào)制的組合物較原料具有更顯著抗菌活性還是完全出乎人意料之外。即，本發(fā)明涉及具有抗菌作用的組合物，具體如下所述。(1)—種抗菌性組合物，該組合物是使用發(fā)酵乳制品調(diào)制的組合物；含有糖質(zhì)、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)，其中能量比為糖質(zhì)50-70%、蛋白質(zhì)4-25%、脂質(zhì)20-30%;且pH值為4.6以下。(2)上述(1)的抗菌性組合物，其中該發(fā)酵乳制品為發(fā)酵乳和/或天然乳酪。(3)上述(1)或(2)的抗菌性組合物，其中100ml該組合物中的乳酸量為200mg以上。(4)上述(1)或(2)的抗菌性組合物，其中100ml該組合物中的乳酸量為300mg以上。(5)上述(1)_(4)中任一項(xiàng)的抗菌性組合物，該組合物包含表1、表3或表5中任一表的混合組成。(6)—種抗菌性組合物的制造方法，其特征在于使用發(fā)酵乳制品作為原料，在含有糖質(zhì)、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、維生素類和礦物類的組合物中，預(yù)先溶解該發(fā)酵制品，添加穩(wěn)定劑后，與其他原料混合，均勻化，滅菌。(7)上述(6)的抗菌性組合物的制造方法，其中該發(fā)酵乳制品為發(fā)酵乳和/或天然乳酪。(8)上述(6)或(7)的抗菌性組合物的制造方法，其特征在于按照來自于該發(fā)酵乳制品的蛋白質(zhì)為該組合物中蛋白質(zhì)的30%重量以上的比例進(jìn)行調(diào)制。(9)上述(6)或(7)的抗菌性組合物的制造方法，其特征在于按照來自于該發(fā)酵乳制品的蛋白質(zhì)為該組合物中蛋白質(zhì)的70%重量以上的比例進(jìn)行調(diào)制。附圖簡述[圖1]為顯示在酸性流質(zhì)飲食、中性流質(zhì)飲食和發(fā)酵乳調(diào)制液中添加大腸桿菌、綠膿桿菌，從開始培養(yǎng)3、6、24小時后，采取的每lml樣品中的活菌數(shù)的圖。[圖2]為顯示在酸性流質(zhì)飲食、中性流質(zhì)飲食和發(fā)酵乳調(diào)制液中添加蟲牙菌、金黃色葡萄球菌、MRSA，從開始培養(yǎng)3、6、24小時后，采取的每lml樣品中的活菌數(shù)的圖。[圖3]為顯示在中性流質(zhì)飲食中添加乳酸、乙酸、檸檬酸將pH值調(diào)節(jié)到4后的樣品中添加大腸桿菌、綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌、MRSA，從開始培養(yǎng)3、6、24小時后，采取的每lml樣品中的活菌數(shù)的圖。[圖4]為顯示在中性流質(zhì)飲食中添加0.125、0.25、0.5、lml乳酸將pH值調(diào)節(jié)到4-6.1后的樣品中添加大腸桿菌、綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌、MRSA，從開始培養(yǎng)3、6、24小時后，采取的每lml樣品中的活菌數(shù)的圖。[圖5]為顯示在酸性流質(zhì)飲食、中性流質(zhì)飲食和發(fā)酵乳調(diào)制液中添加幽門螺桿菌或艱難梭菌，從開始培養(yǎng)3、6、24小時后，采取的每lml樣品中的活菌數(shù)的圖。[圖6]為顯示在中性流質(zhì)飲食中添加0.125或lml乳酸分別將pH值調(diào)節(jié)到4或6.l后的樣品中添加艱難梭菌，從開始培養(yǎng)3、6、24小時后，采取的每lml樣品中的活菌數(shù)的圖。[圖7]為顯示在酸性流質(zhì)飲食、酸性流質(zhì)飲食2、中性流質(zhì)飲食和發(fā)酵乳調(diào)制液中添加MRSA或艱難梭菌，從開始培養(yǎng)3、6、24小時后，采取的每lml樣品中的活菌數(shù)的圖。實(shí)施發(fā)明的最佳方式本發(fā)明提供抗菌性組合物(以下，本發(fā)明的組合物)。本發(fā)明人等確認(rèn)了酸性流質(zhì)飲食的抗菌作用，特別是發(fā)現(xiàn)了對革蘭氏陽性菌優(yōu)異的抗菌作用，并以此為基礎(chǔ)。本發(fā)明的組合物顯示酸性。優(yōu)選pH值為4.6以下。更優(yōu)選pH值小于4.2，最優(yōu)選pH值小于4.0。本發(fā)明的組合物含有糖質(zhì)、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、維生素類和礦物類。在本發(fā)明的組合物中可使用的糖質(zhì)只要是可食用則沒有限制，例如可以舉出蜂蜜、糊精、蔗糖、巴糖、葡萄糖、砂糖、果糖、水糖蜜、糖醇(山梨糖醇、木糖醇、麥芽糖醇等)等。在本發(fā)明的組合物中可使用的蛋白質(zhì)只要是可食用則沒有限制，例如可以舉出酪蛋白、乳清蛋白質(zhì)等來自奶的蛋白質(zhì)；大豆蛋白質(zhì)；這些蛋白質(zhì)通過來自動物的胰蛋白酶、胃蛋白酶等酶和中性酶、堿性酶的水解產(chǎn)物。在本發(fā)明的組合物中可包含的脂質(zhì)只要是可食用則沒有限制。例如除了含有單價(jià)飽和脂肪酸、多價(jià)不飽和脂肪酸的向日葵油、菜籽油、橄欖油、紅花油之外，還可以舉出玉米油、大豆油、棕櫚油、紫蘇子油、亞麻子油、蘇紫油、月見草油、棕櫚核油、椰子油等各種來自植物的油脂，中鏈脂肪酸，EPA，DHA，來自大豆的磷脂質(zhì)，來自奶的磷脂質(zhì)等，但優(yōu)選含有1種以上來自植物的油脂。另外，在本發(fā)明中，在油脂的脂肪酸組成中以10%以上、優(yōu)選20%以上、更優(yōu)選25%以上的比例含有具有2個以上雙鍵的多價(jià)不飽和脂肪酸。對在本發(fā)明的組合物中可含有的維生素類沒有特別限定，可以是公知的維生素類中的任一種。在本發(fā)明的組合物中可含有的礦物類，只要是通常添加在食品中的物質(zhì)即可，可以是任一種，例如可以含有磷酸鉀、碳酸鉀、氯化鉀、氯化鈉、乳酸鈣、葡萄糖酸鈣、泛酸鈣、酪蛋白酸鈣、氯化鎂、檸檬酸、硫酸亞鐵、碳酸氫鈉、焦磷酸鈉、抗壞血酸鈉。在糖質(zhì)、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、維生素類和礦物類中均可以含有其他成分，只要是維持組合物的抗菌性，則不限定于上述具體例。本發(fā)明的組合物按照能量比為糖質(zhì)50_70%、蛋白質(zhì)4_25%、脂質(zhì)20_30%含有上述糖質(zhì)、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)。計(jì)算能量比時，食物纖維不包括在糖質(zhì)中。能量比可如下求得。蛋白質(zhì)能量比=蛋白質(zhì)(g)X4(kcal/g)+總能量(kcal)X100脂質(zhì)能量比=脂質(zhì)量(g)X9(kcal/g)+總能量(kcal)X100糖質(zhì)能量比=糖質(zhì)(g)X4(kcal/g)+總能量(kcal)X100或者糖質(zhì)能量比={總能量(kcal)-(蛋白質(zhì)能量(kcal)+脂質(zhì)能量(kcal)+食物纖維能量(kcal))+總能量(kcal)X1005食物纖維的能量可以根據(jù)日本食品標(biāo)準(zhǔn)成分表(日本國大藏省印刷局發(fā)行)或能量換算系數(shù)(平成13年厚生勞動省告示第98號)進(jìn)行計(jì)算。另外，糖質(zhì)量、蛋白質(zhì)量、脂質(zhì)量的測定可以利用本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的方法進(jìn)行。優(yōu)選按照日本食品標(biāo)準(zhǔn)成分表的記載進(jìn)行。食物纖維量的測定可以通過將上述日本食品標(biāo)準(zhǔn)成分表所記載的7口7*-變法(酶-重量法)或HPLC法組合的方法(A0ACOfficialMethodsofAnalysis(2002))進(jìn)行。本發(fā)明組合物的優(yōu)選方式為100ml該組合物中的乳酸量為200mg以上，更優(yōu)選的方式為100ml該組合物中的乳酸量為300mg以上。乳酸的定量可以利用酶法、HPLC法等本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的方法進(jìn)行。另外，可以根據(jù)記載了有機(jī)酸定量法的文獻(xiàn)進(jìn)行JNutr.，Jan，124(1)，52-60，1994年"半乳糖苷蔗糖和木糖基果糖苷改變消化量度和盲腸有機(jī)酸的濃度在含有膽固醇禾口膽酸的大鼠飼料中(Galactosylsucroseandxylosylf潔tosidealterdigestivetractsizeandconcentrationsofcecalorganicacidsinratsfeddietscontainingcholesterolandcholicacid)，，。本發(fā)明的組合物使用發(fā)酵乳制品進(jìn)行調(diào)制。本發(fā)明中的發(fā)酵乳制品是指使用乳酸菌等促酵物使1種或2種以上乳原料組合而調(diào)制的液狀乳進(jìn)行發(fā)酵的所有制品，所述乳原料包括牛奶、水牛奶、山羊奶、羊奶、馬奶等家畜奶和/或它們的部分脫脂乳、脫脂乳、還原全乳、還原脫脂乳、還原部分脫脂乳、黃油、奶油等。例如，天然乳酪、酸乳酪、發(fā)酵乳、乳清、乳清酪包含在本發(fā)明的發(fā)酵乳制品中。另外，本發(fā)明的乳酪是指利用乳酸菌使奶、脫奶油乳或奶油發(fā)酵，或者從在奶、脫奶油乳或奶油中加入酶所得的凝乳中除去乳清后的物質(zhì)，無論是否進(jìn)行了固體化或熟成。用于制造發(fā)酵乳制品的促酵物，主要可以使用保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌，但并不限定于此，例如可以使用乳鏈球菌、乳酪鏈球菌、醋酸乳酸雙重鏈球菌、屎腸球菌、糞腸桿菌(Enterococcusfecalis)、干酪乳桿菌、瑞士乳桿菌、嗜酸乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、植物乳桿菌、鼠乳桿菌、路氏乳桿菌、短乳桿菌、加氏乳桿菌、長雙歧桿菌、雙岐雙岐桿菌、短雙歧桿菌等乳酸菌或雙岐菌。另外，還可以并用丙酸桿屬菌等其他的菌用于制造發(fā)酵乳制品。本發(fā)明的組合物只要是發(fā)酵乳制品即可，可使用任何一種進(jìn)行調(diào)制。優(yōu)選使用非熟成乳酪或酸乳酪進(jìn)行調(diào)制，更優(yōu)選使用々7A々(quark)或酸乳酪進(jìn)行調(diào)制。々7A々為非熟成型(新鮮)乳酪的一種，脂肪含量低，其特征是有爽口的鮮味和酸味。以下說明々7A々的一般制造方法。對脫脂乳進(jìn)行滅菌。接種0.5_5%的乳酸菌促酵物(主要為保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌)使其發(fā)酵。當(dāng)pH值達(dá)到4.6時，形成凝乳。利用々7A々分離器分離乳清，將所得凝乳冷卻?！?A々組成的一例為總固體成份17-19%、蛋白質(zhì)11-13%、脂肪小于1%、碳水化物2-8%、乳糖小于2%。另外，使用粗制凝乳酶使其凝固也包含在本發(fā)明的々7A々中。將屬于乳球菌的乳酸乳球菌，酪鏈球菌和明串珠菌屬的菌種的混合培養(yǎng)添加到脫脂乳中，培養(yǎng)，除去乳清，可以得到々7A々。使用刀片將與上述方法同樣得到的凝乳切斷，一邊加熱一邊分離乳清，得到非熟成乳酪，該非熟成乳酪也可在本發(fā)明中使用。本發(fā)明的組合物是通過將上述發(fā)酵乳制品和上述糖質(zhì)、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)混合，均勻混合來調(diào)制。優(yōu)選按照來自該發(fā)酵乳制品的蛋白質(zhì)占該組合物中的蛋白質(zhì)的30%重量以上、更優(yōu)選按照占該組合物中的蛋白質(zhì)的70%重量以上的比例進(jìn)行調(diào)制。當(dāng)將本發(fā)明的組合物作為流質(zhì)飲食進(jìn)行調(diào)制時，優(yōu)選按照每lml為0.7-2kcal進(jìn)行調(diào)制。另外，在混合時還可以添加維生素類或礦物類、和/或食物纖維。食物纖維分為水溶性食物纖維和不溶性食物纖維，可以使用兩者中的任一種。水溶性食物纖維可以包含果膠(原果膠、果膠酯酸、果膠酸)、瓜爾膠水解物、葡甘露聚糖、半乳甘露聚糖、寸^'」々A、玉米纖維、藻酸、藻酸分解物、角叉菜膠、難消化性糊精等。不溶性食物纖維可以舉出結(jié)晶纖維素、甜菜纖維、小麥麥糠等。可優(yōu)選使用果膠、瓜爾膠水解物、難消化性糊精。根據(jù)情況還可以添加香料或其他混合物?；旌虾筇畛涞饺萜髦?，根據(jù)需要實(shí)施加熱滅菌處理，可以制成流質(zhì)飲食或經(jīng)腸營養(yǎng)劑。由于本發(fā)明的抗革蘭氏陽性菌組合物為酸性，因此加熱處理可在較通常更為緩和的條件下進(jìn)行。例如，中性流質(zhì)飲食的加熱滅菌處理為高壓滅菌條件120-130°C、20-40分鐘，間接滅菌條件140-145°C、4-10秒時，本發(fā)明組合物可在80-9(TC下進(jìn)行15-30分鐘的高壓滅菌或者在95-ll(TC下進(jìn)行20-60秒的間接滅菌。由于緩和的滅菌條件，可優(yōu)化口味或還可混合不耐熱的成分。另外，還可以利用瓊脂或明膠將本發(fā)明的組合物制成凝膠狀、或通過噴霧干燥等將本發(fā)明的組合物制成顆粒狀食品藥品、或還可制成固體的食品藥品。本發(fā)明的組合物對革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽性菌的雙方都具有抗菌效果。特別是對革蘭氏陽性菌發(fā)揮了優(yōu)異的效果。乳酸菌發(fā)酵物的抗菌活性為通常所知，但本發(fā)明的組合物對于革蘭氏陽性菌顯示了較作為原料的發(fā)酵乳制品更為優(yōu)異的抗菌效果。對于革蘭氏陽性菌的優(yōu)異抗菌效果是通過將發(fā)酵乳制品與糖質(zhì)、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等組合，制成本發(fā)明組合物而得到的效果。本發(fā)明人等首次發(fā)現(xiàn)了通過將發(fā)酵乳制品加工成本發(fā)明的組合物可得到所述的效果。如實(shí)施例所示，本發(fā)明人等確認(rèn)了金黃色葡萄球菌、MRSA、蟲牙菌、艱難梭菌的上述效果。對其他的革蘭氏陽性菌，例如鏈球菌(鏈球菌屬)、腸球菌(腸球菌屬)、棒狀桿菌屬、桿菌、肉毒桿菌等，也可期待其抗菌性。本發(fā)明組合物的特征在于具有上述的抗菌活性，在用實(shí)施例的方法對金黃色葡萄球菌、MRSA、蟲牙菌、艱難梭菌的抗菌活性進(jìn)行測定時，優(yōu)選具有培養(yǎng)24小時后的活菌數(shù)為2.3X102CFU(菌落形成單位)/ml以下的抗菌活性，最優(yōu)選具有培養(yǎng)24小時后的菌落數(shù)為小于10的抗菌活性。本發(fā)明的組合物可作為具有抗菌效果、特別是具有抗革蘭氏陽性菌效果的流質(zhì)飲食或經(jīng)腸營養(yǎng)劑利用。由于流質(zhì)飲食或經(jīng)腸營養(yǎng)劑本身具有抗菌效果，因此可以不僅用作單純的食品，還可以預(yù)防感染為目的進(jìn)行使用。作為附加可預(yù)防感染、具有抗菌活性、或?qū)Ω锾m氏陽性菌具有優(yōu)異的抗菌活性等的食品，可用作例如特定保健用食品、營養(yǎng)功能食品等保健功能食品。在高齡者或醫(yī)院入院患者等多的機(jī)構(gòu)中，這樣的食品可成為院內(nèi)感染，機(jī)構(gòu)內(nèi)感染的有效且安全的預(yù)防措施。還可用作針對嬰兒的抗菌性嬰兒食品、針對普通人的抗菌性營養(yǎng)食品，進(jìn)而還可考慮用作具有控制腸道功能的營養(yǎng)輔助藥品或用于預(yù)防蟲牙的食品。應(yīng)說明的是，本說明書中所引用的全部在先技術(shù)文獻(xiàn)都作為參考納入在本說明書中。實(shí)施例以下，根據(jù)實(shí)施例更具體地說明本發(fā)明。但本發(fā)明并不限定于下述實(shí)施例。[實(shí)施例1]酸性流質(zhì)飲食抗菌作用的研究(1)研究了酸性流質(zhì)飲食對病原菌的抗菌作用。使用大腸桿菌IF03972(大腸菌)、金7黃色葡萄球菌金黃亞種IF012732(金黃色葡萄球菌)、綠膿桿菌NBRC13275(綠膿桿菌)、金黃色葡萄球菌IID1677(MRSA)、變異鏈球菌IF013955(蟲牙菌)作為試驗(yàn)菌。菌液如下調(diào)制即蟲牙菌使用TryptoSoy(卜'j:/卜y<)瓊脂培養(yǎng)基(榮研化學(xué)公司生產(chǎn))、其他的試驗(yàn)菌使用普通瓊脂培養(yǎng)基(榮研化學(xué)公司生產(chǎn))進(jìn)行培養(yǎng)，然后將所得菌體懸浮在滅菌生理鹽水中，按照每1ml的菌數(shù)達(dá)到約108-109。酸性流質(zhì)飲食使用了按照表1所示混合而調(diào)制的酸性流質(zhì)飲食，對照使用了表2所示組成的中性流質(zhì)飲食(^<"，>》、明治乳業(yè)(株))和發(fā)酵乳調(diào)制液。發(fā)酵乳調(diào)制液如下調(diào)制即在々7A々(發(fā)酵乳制品)中添加無菌蒸餾水，調(diào)制成與按照表1所示混合而調(diào)制的上述酸性流質(zhì)飲食中的々7A々濃度(33g/100ml)相同的濃度。在IO(TC下進(jìn)行10分鐘的熱處理，將乳酸菌殺死后使用。應(yīng)說明的是，々7A々制造方法如下首先，相對于脫脂乳接種1%的乳酸菌促酵物(保加利亞乳酸桿菌和嗜熱鏈球菌的混合促酵物)，在35t:下發(fā)酵16小時。通過將所得凝乳放在々7A夕分離器中，分離乳清，得到蛋白質(zhì)約13%、脂質(zhì)約0.3%、糖質(zhì)約5%、總固體成份約19%的夕7A々。另外，調(diào)節(jié)油脂含有棕櫚酸、油酸、亞油酸、亞麻酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸等脂肪酸，脂肪酸組成中，具有雙鍵的脂肪酸的比例為25%，n-6/n-3為7.4。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>在100ml酸性流質(zhì)飲食或?qū)φ罩?，添加lml大腸桿菌、綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌、MRSA或蟲牙菌，在37t:下進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)開始3、6、24小時后采樣，用瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)，測定活菌數(shù)。活菌數(shù)的測定如下進(jìn)行利用SCDLP培養(yǎng)基(日本制藥公司生產(chǎn))適當(dāng)稀釋樣品，通過使用有SCDLPA培養(yǎng)基(日本制藥公司生產(chǎn))的傾注平皿培養(yǎng)法，在35t:下培養(yǎng)2天，計(jì)測發(fā)育的菌落數(shù)。對照使用了滅菌生理鹽水。結(jié)果如圖1、2所示。酸性流質(zhì)飲食對每一菌種的增殖都顯示抑制效果，但對各菌種的抗菌效果是出乎意外的有趣的效果。在發(fā)酵乳調(diào)制液中培養(yǎng)的大腸桿菌的活菌數(shù)(菌落數(shù))在開始培養(yǎng)時為20，000，000、培養(yǎng)3小時后為8，000，000、培養(yǎng)6小時后為2，500，000、培養(yǎng)24小時后為檢測限以下，與此相對，而在酸性流質(zhì)飲食中培養(yǎng)的大腸桿菌的活菌數(shù)在開始培養(yǎng)時為20，000，000、培養(yǎng)3小時后為3，400，000、培養(yǎng)6小時后為83，000、培養(yǎng)24小時后為檢測限以下(在本實(shí)施例中，檢測限以下是指活菌數(shù)小于10。以下相同)。在發(fā)酵乳調(diào)制液中培養(yǎng)的綠膿桿菌的活菌數(shù)(菌落數(shù))在開始培養(yǎng)時為2，000，000、培養(yǎng)3小時后和6小時后為檢測限以下，與此相對，而在酸性流質(zhì)飲食中培養(yǎng)的綠膿桿菌的活菌數(shù)在開始培養(yǎng)時為2，000，000、培養(yǎng)3小時后和6小時后為檢測限以下。即，酸性流質(zhì)飲食對于革蘭氏陰性菌的大腸桿菌、綠膿桿菌的增殖抑制作用與發(fā)酵乳調(diào)制液為同等水平。由此認(rèn)為酸性流質(zhì)飲食對上述各菌的抗菌作用主要是來自發(fā)酵乳制品成份的作用。在中性流質(zhì)飲食中，各菌的增殖隨著培養(yǎng)時間被促進(jìn)(圖l)。另外，還研究了市售的其他中性流質(zhì)飲食的抗菌作用，但未發(fā)現(xiàn)與乂(Meibalance)同樣的抗菌作用(數(shù)據(jù)未顯示)。另一方面，革蘭氏陽性菌的金黃色葡萄球菌、MRSA、蟲牙菌的結(jié)果，顯示出酸性流質(zhì)飲食的增殖抑制效果顯著強(qiáng)于發(fā)酵乳調(diào)制液的效果(圖2)。在發(fā)酵乳調(diào)制液中培養(yǎng)的金黃色葡萄球菌(菌落數(shù))的活菌數(shù)在開始培養(yǎng)時為18，000，000、培養(yǎng)3小時后為7，500，000、培養(yǎng)6小時后為1，000，000，與此相對，而在酸性流質(zhì)飲食中培養(yǎng)的金黃色葡萄球菌的活菌數(shù)在開始培養(yǎng)時為18，000，000、培養(yǎng)3小時后為12，000，000、培養(yǎng)6小時后為2，100，000、培養(yǎng)24小時后在檢測限以下。在發(fā)酵乳調(diào)制液中培養(yǎng)的蟲牙菌(菌落數(shù))在開始培養(yǎng)時為9，000，000、培養(yǎng)3小時后為2，900，000、培養(yǎng)6小時后為400，000、培養(yǎng)24小時后為1，300，與此相對，在酸性流質(zhì)飲食中培養(yǎng)的蟲牙菌在開始培養(yǎng)時為9，000，000、培養(yǎng)3小時后為430，000、早在培養(yǎng)6小時后即達(dá)到檢測限以下。這表明酸性流質(zhì)飲食不僅對革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽性菌均具有抗菌作用，而且特別是對革蘭氏陽性菌具有大大強(qiáng)于原料發(fā)酵乳制品的抗菌作用。[實(shí)施例2]有機(jī)酸抗菌作用的研究由于確認(rèn)了酸性流質(zhì)飲食的抗菌作用，因此對酸性流質(zhì)飲食的成分組成進(jìn)行研究。中性流質(zhì)飲食、酸性流質(zhì)飲食、發(fā)酵乳調(diào)制液的組成如表2所示。中性流質(zhì)飲食中含有用于調(diào)節(jié)pH值的檸檬酸，但幾乎不含其他有機(jī)酸。發(fā)酵乳調(diào)制液中含有405.lmg/100ml由乳酸發(fā)酵產(chǎn)生的乳酸。酸性流質(zhì)飲食中含有的乳酸約為發(fā)酵乳調(diào)制液的2倍，這是由于為了確保流質(zhì)飲食中所必需的鈣量而添加了乳酸鈣。在酸性流質(zhì)飲食和發(fā)酵乳調(diào)制液中，含有多量檸檬酸、乙酸作為乳酸以外的主要有機(jī)酸(表2)。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>研究了酸性流質(zhì)飲食和發(fā)酵乳制品中所含的主要有機(jī)酸的抗菌作用。試驗(yàn)菌、菌液的調(diào)制與上述的研究酸性流質(zhì)飲食的抗菌作用時相同。作為被測樣品，將lml乳酸、2.3ml乙酸或lg檸檬酸中的任一種(和光純藥工業(yè)(株))添加在中性流質(zhì)飲食中，且將pH值調(diào)節(jié)到4。通過改變添加到中性流質(zhì)飲食中的乳酸的量調(diào)制樣品，使用該樣品對酸性流質(zhì)飲食的主要有機(jī)酸——乳酸的抗菌作用進(jìn)行了研究。在中性流質(zhì)飲食中添加了與表2等量的發(fā)酵乳調(diào)制液所含有機(jī)酸(乳酸405.lmg、乙酸5.3mg、擰檬酸34mg、甲酸0.4mg)的被測樣品的pH值為5.l，對任何菌種幾乎都不顯示抗菌作用。在將乳酸、乙酸分別單獨(dú)添加到中性流質(zhì)飲食且將pH值調(diào)節(jié)到4的樣品中，可觀察到對大腸桿菌、綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌、MRSA的抗菌作用(圖3)。添加檸檬酸的樣品對上述4種菌的抗菌作用，弱于相同pH值的添加乳酸或乙酸的樣品(圖3)。另一方面，在中性流質(zhì)飲食中單獨(dú)添加作為酸性流質(zhì)飲食和發(fā)酵乳調(diào)制液主要有機(jī)酸的乳酸的樣品中，添加0.5ml(pH4.8)時幾乎未見抗菌作用，但將pH值調(diào)節(jié)到4時，對大腸桿菌、綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌顯示了顯著的抗菌作用(圖4)。對MRSA的抗菌作用具有獨(dú)特的傾向。即，各有機(jī)酸對于MRSA的抗菌作用，乙酸最強(qiáng)，其次為檸檬酸、乳酸的順序，作為發(fā)酵乳制品主要有機(jī)酸的乳酸的抗菌作用，在所研究的有機(jī)酸中效果最弱。由于酸性流質(zhì)飲食對MRSA的抗菌作用比發(fā)酵乳調(diào)制液顯著，因此認(rèn)為酸性流質(zhì)飲食對MRSA的抗菌作用與發(fā)酵乳制品成份以外的成分有關(guān)。[實(shí)施例3]酸性流質(zhì)飲食抗菌作用的研究(2)如上所述，確認(rèn)了酸性流質(zhì)飲食對各種細(xì)菌的抗菌作用，進(jìn)而研究了對幽門螺桿菌ATCC43504(幽門螺桿菌)和艱難梭菌JCM1296(艱難梭菌)的抗菌作用。幽門螺桿菌為革蘭氏陰性菌，艱難梭菌為革蘭氏陽性菌。對幽門螺桿菌抗菌作用的研究如下進(jìn)行首先，使用羊血液瓊脂培養(yǎng)基(榮研化學(xué)公司生產(chǎn))，在35t:下微需氧培養(yǎng)3天，然后懸浮在滅菌生理鹽水中，按照每lml的菌數(shù)達(dá)到約107-108進(jìn)行調(diào)制，制成菌液。在4.5ml酸性流質(zhì)飲食和作為對照的滅菌生理鹽水、4.5ml添加有5%馬血清的布魯氏桿菌肉湯中，添加0.5ml幽門螺桿菌，在35t:下微需氧條件下進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)開始后的3，6，24小時后采樣，測定活菌數(shù)?；罹鷶?shù)的測定如下進(jìn)行用滅菌生理鹽水適當(dāng)稀釋樣品，涂抹在羊血液瓊脂培養(yǎng)基(榮研化學(xué)公司生產(chǎn))上。在35t:下微需氧條件下培養(yǎng)5天，然后計(jì)測發(fā)育的菌落數(shù)。另外，對艱難梭菌抗菌作用的研究如下進(jìn)行使用GAM瓊脂培養(yǎng)基(日本制藥公司生產(chǎn))，在37t:下厭氧條件下培養(yǎng)艱難梭菌15天，然后懸浮在滅菌生理鹽水中，按照每lml的菌數(shù)達(dá)到約108-109進(jìn)行調(diào)制，制成菌液。在100ml的酸性流質(zhì)飲食和對照中添加lml菌液，在37。C下厭氧條件下進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)開始后的3，6，24小時后采樣，測定活菌數(shù)(厭氧性細(xì)菌數(shù))。艱難梭菌活菌數(shù)的測定如下進(jìn)行用SCDLP培養(yǎng)基(日本制藥公司生產(chǎn))適當(dāng)稀釋樣品，通過使用有GAM瓊脂培養(yǎng)基(日本制藥公司生產(chǎn))的傾注平皿培養(yǎng)法，在35t:下厭氧條件下培養(yǎng)5-6天，然后計(jì)測發(fā)育的菌落數(shù)，得到厭氧性細(xì)菌數(shù)。結(jié)果如圖5所示。酸性流質(zhì)飲食對革蘭氏陰性菌的幽門螺桿菌顯示了優(yōu)異的抗菌活性，其抗菌活性的程度與發(fā)酵乳調(diào)制液一致。另一方面，酸性流質(zhì)飲食對革蘭氏陽性菌的艱難梭菌顯示了大大高于發(fā)酵乳調(diào)制液的抗菌活性。這些結(jié)果與在上述實(shí)施例中所得結(jié)果的傾向相同。進(jìn)而，與上述實(shí)施例2同樣，在中性流質(zhì)飲食中添加乳酸研究對艱難梭菌的抗菌活性時，添加0.125ml乳酸(pH6.1)時幾乎未見抗菌活性，但添加lml乳酸時確認(rèn)了抗菌作用(圖6)。10[實(shí)施例4]組成不同的酸性流質(zhì)飲食抗菌活性的研究根據(jù)表3的混合，調(diào)制與上述酸性流質(zhì)飲食組成不同的酸性流質(zhì)飲食(以下，稱為"酸性流質(zhì)飲食2")，研究該酸性流質(zhì)飲食2對革蘭氏陽性菌的抗菌活性。酸性流質(zhì)飲食2的組成如表4所示。表3原料混合量(100ml)發(fā)酵乳制品22.7g乳清蛋白質(zhì)水解物1.42g巴糖5.Gg糊精5.2g麥芽糖糊精1.9g難消化性糊精1.04g果膠0.45g調(diào)節(jié)油脂3.0g磷脂質(zhì)0.lg大豆卵磷脂0.16g表4成分酸性流質(zhì)飲食2單位(100ml中)一般組成蛋白質(zhì)4.2g脂質(zhì)3.1g碳水化合物14.1g灰分0.8g卡路里100.0Kcal有機(jī)酸乳酸405.1mg乙酸5.3mg檸檬酸388.0mg甲酸1.9mg通過與上述酸性流質(zhì)飲食同樣的方法實(shí)施試驗(yàn)時，在發(fā)酵乳調(diào)制液中培養(yǎng)的MRSA的活菌數(shù)在開始培養(yǎng)時為7，700，000、培養(yǎng)3小時后為4，900，000、培養(yǎng)6小時后為114，600，000、培養(yǎng)24小時后為920，000，與此相對，在酸性流質(zhì)飲食2中培養(yǎng)的MRSA的活菌數(shù)在開始培養(yǎng)時為7，700，000、但早在培養(yǎng)3小時后即變?yōu)?，600、培養(yǎng)6小時后為70、培養(yǎng)24小時后為檢測限以下。在發(fā)酵乳調(diào)制液中培養(yǎng)的艱難梭菌的活菌數(shù)在開始培養(yǎng)時為9，100，000、培養(yǎng)3小時后為10，000，000、培養(yǎng)6小時后為7，000，000、培養(yǎng)24小時后為220，000，與此相對，在酸性流質(zhì)飲食2中培養(yǎng)的艱難梭菌的活菌數(shù)在開始培養(yǎng)時為12，000，000、培養(yǎng)3小時后為9，300，000、培養(yǎng)6小時后劇減為1，400，000、培養(yǎng)24小時后變?yōu)闄z測限以下。在實(shí)施例1的酸性流質(zhì)飲食中培養(yǎng)艱難梭菌時，也顯示了如下的劇減傾向即培養(yǎng)開始時為9，100，000、培養(yǎng)3小時后為2，400，000、培養(yǎng)6小時后為44，000，在培養(yǎng)24小時后變?yōu)闄z測限以下。如上所述，酸性流質(zhì)飲食2對MRSA和艱難梭菌的抗菌活性的傾向和程度與在實(shí)施例1，2中研究的上述酸性流質(zhì)飲食大致一致(圖7)。作為其他的酸性流質(zhì)飲食，按照表5所示的混合調(diào)制酸性流質(zhì)飲食3。本實(shí)施例的酸性流質(zhì)飲食、酸性流質(zhì)飲食2、酸性流質(zhì)飲食3的能量比如表6所示。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>產(chǎn)業(yè)實(shí)用性本發(fā)明提供新型的抗菌組合物。本發(fā)明的組合物特別對革蘭氏陽性菌的效果高。本發(fā)明的組合物通過作為流質(zhì)飲食或經(jīng)腸營養(yǎng)劑利用，對于高齡者等易感染者可成為抗生素以外的防感染的手段。由于流質(zhì)飲食本身具有抗菌作用，因此可以認(rèn)為是防止經(jīng)由導(dǎo)管等的院內(nèi)感染的簡便而有效的方法。特別是，如果考慮作為機(jī)會感染的代表的原因菌——MRSA等衛(wèi)生上重要的菌種為革蘭氏陽性菌，則作為抗革蘭氏陽性菌組合物的本發(fā)明組合物的實(shí)用性高。另外，由于本發(fā)明組合物含有發(fā)酵乳制品，因此還可以期待以下乳酸菌所具有的益生菌效果，即對病原菌附著到腸管上皮具有抑制效果、通過產(chǎn)生抗菌物質(zhì)對感染癥具有治療*預(yù)防效果、通過調(diào)整腸內(nèi)環(huán)境或活化巨噬細(xì)胞對宿主免疫機(jī)能具有剌激效果、對腹瀉便秘具有預(yù)防效果等。本發(fā)明的組合物可以制成口服的抗菌性食品或藥品，在營養(yǎng)上和保健衛(wèi)生上是極為有效的。權(quán)利要求抗菌性組合物在制備用于抑制革蘭氏陽性菌、或革蘭氏陽性和革蘭氏陰性菌的雙方增殖的藥物中的應(yīng)用，該組合物是使用發(fā)酵乳制品調(diào)制的組合物，通過將發(fā)酵乳制品與糖質(zhì)、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)混合而調(diào)制；其中能量比為糖質(zhì)50-70％、蛋白質(zhì)4-25％、脂質(zhì)20-30％；且pH值為4.6以下。2.根據(jù)權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中所述發(fā)酵乳制品為發(fā)酵乳和/或天然乳酪。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的應(yīng)用，其中100ml所述組合物中的乳酸量為200mg以上。4.根據(jù)權(quán)利要求1或2的應(yīng)用，其中100ml所述組合物中的乳酸量為300mg以上。5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的應(yīng)用，含有來自植物的油脂作為脂質(zhì)。6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的應(yīng)用，包含(a)至(c)中任一項(xiàng)的組成(a)每100mL的組合物中，發(fā)酵乳制品33.4g，蜂蜜8g，糊精6.lg，蔗糖lg，難消化性糊精0.61g，果膠0.75g，調(diào)節(jié)油脂2.6g和大豆卵磷脂0.13g;(b)每100mL的組合物中，發(fā)酵乳制品22.7g，乳清蛋白質(zhì)水解物1.42g，巴糖5.6g，糊精5.2g，麥芽糖糊精1.9g，難消化性糊精1.04g，果膠0.45g，調(diào)節(jié)油脂3.Og，磷脂質(zhì)0.lg和大豆卵磷脂0.16g;(c)每100mL的組合物中，發(fā)酵乳制品15.3g，蜂蜜7.5g，糊精16g，蔗糖1.5g，難消化性糊精0.61g，果膠0.75g，調(diào)節(jié)油脂2.6g和大豆卵磷脂0.13g，其中所述調(diào)節(jié)油脂包含選自以下的脂肪酸棕櫚酸、油酸、亞油酸、亞麻酸、二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸，并且具有雙鍵的脂肪酸的比例為25%，n-6/n-3為7.4。7.包含糖質(zhì)、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)的抗菌性組合物的制造方法，其特征在于將發(fā)酵乳制品與蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、糖質(zhì)和其他原料混合，均勻化，滅菌，其中所述其他原料選自維生素類、礦物類和食物纖維。8.權(quán)利要求7的抗菌性組合物的制造方法，其中所述發(fā)酵乳制品為發(fā)酵乳和/或天然乳酪。9.權(quán)利要求7或8的抗菌性組合物的制造方法，其特征在于按照來自于所述發(fā)酵乳制品的蛋白質(zhì)為該組合物中蛋白質(zhì)的30%重量以上的比例進(jìn)行調(diào)制。10.權(quán)利要求7或8的抗菌性組合物的制造方法，其特征在于按照來自于所述發(fā)酵乳制品的蛋白質(zhì)為該組合物中蛋白質(zhì)的70%重量以上的比例進(jìn)行調(diào)制。全文摘要本發(fā)明的目的在于利用食物預(yù)防感染。作為候補(bǔ)食物，本發(fā)明人等著眼于酸性流質(zhì)飲食，該酸性流質(zhì)飲食由于在具有抗菌活性的流質(zhì)飲食中含有發(fā)酵乳制品作為蛋白質(zhì)來源而呈酸性。對于該酸性流質(zhì)飲食的抗菌性，比較研究了原料發(fā)酵乳制品和中性流質(zhì)飲食的抗菌性。雖然已知酸乳酪等發(fā)酵乳具有抗菌作用，但令人預(yù)想不到的是，對于MRSA等公共衛(wèi)生上重要的革蘭氏陽性菌，該酸性流質(zhì)飲食顯示了比原料發(fā)酵乳制品更強(qiáng)的抗菌作用。文檔編號A61K35/20GK101721426SQ20091022282公開日2010年6月9日申請日期2005年3月31日優(yōu)先權(quán)日2004年3月31日發(fā)明者佐佐木一,粂久枝申請人:明治乳業(yè)株式會社