專利名稱：：用于預防和治療與受損神經(jīng)傳遞相關的失調(diào)癥的新型試劑的制作方法用于預防和治療與受損神經(jīng)傳遞相關的失調(diào)癥的新型試劑本發(fā)明涉及一種用作藥物，尤其用于治療與受損神經(jīng)傳遞相關的失調(diào)癥的香豆素醚，本發(fā)明還涉及了含有上述香豆素醚的飲食組合物和藥學組合物、植物原料和萃取物，及其用途。已知受損神經(jīng)傳遞(例如神經(jīng)傳遞素水平較低)與例如抑郁癥的精神疾病相關。因此，使大腦中神經(jīng)傳遞素水平增加并由此增強其傳遞性的化合物具有抗抑郁性會g，并且對各禾中其它精神疾病有益("Neurotransmitters,drugsandbrainfunction"R.A.Webster(編輯)，JohnWiley&Sons，NewYork，2001，p.187-211，289-452，477-498)。主要的神經(jīng)傳遞素是5-羥色胺、多巴胺、去甲腎上腺素(=降腎上腺素)、乙酰膽堿、谷氨酸鹽、Y_氨基_丁酸以及神經(jīng)肽。神經(jīng)傳遞增強通過如下方式實現(xiàn)增加神經(jīng)傳遞素在突觸間隙中的濃度因而通過抑制再攝取入突觸前神經(jīng)末梢來增強或延長神經(jīng)傳遞，或通過抑制例如單氨基氧化酶A和B的酶的降解來抑制神經(jīng)傳遞素分解代謝。例如丙咪嗪、阿密曲替林和氯米帕明的三環(huán)抗抑郁劑化合物(TCA)抑制5-羥色胺和去甲腎上腺素的再攝取。它們被廣泛地認為是最有效的抗抑郁劑之一，但因為它們與多個例如類膽堿受體的腦受體發(fā)生作用所以有很多缺點。最重要的是，當過量、頻繁服用TCA時，該藥物不安全，具有劇烈的心臟毒性。另一類抗抑郁劑藥物是所謂的SSRI(選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑)，該SSRI包括氟西汀(fluoxetine)、帕羅西汀、舍曲林、西酞普蘭(citalopram)、阻礙5_羥色胺轉(zhuǎn)運體(SERT)的氟優(yōu)沙明、通過攝取5-羥色胺而終止含5-羥色胺的神經(jīng)傳遞的高親合性的依賴氯化鈉的神經(jīng)傳遞素。已經(jīng)證明它們可以有效地治療抑郁癥和焦慮癥，并且通常比TCA的耐受性要好。這些藥物通常起始劑量較低，并可以增加直到達到治療水平。通常的副作用是惡心。其它可能的副作用包括，食欲降低、口干、發(fā)汗、感染、便秘、打呵欠、震顫、嗜睡、性功能紊亂。另外，通過抑制單氨基氧化酶(MA0)A和B，從而更廣泛地抑制神經(jīng)傳遞素分解代謝的化合物具有抗抑郁癥療效。MA0催化含氨基的神經(jīng)傳遞素(例如，5-羥色胺、去甲腎上腺素和多巴胺)的氧化。而且，神經(jīng)傳遞調(diào)節(jié)劑對精神功能和認知功能具有各種影響。需要一種用于治療或預防精神疾病和/或失調(diào)癥的化合物，該化合物沒有已知抗抑郁癥藥的副作用。許多患者對替代的治療法很感興趣，這些治療可以將與大劑量服用藥物相關的副作用最小化，同時產(chǎn)生額外的臨床益處。嚴重的抑郁癥是一種長期的、易復發(fā)的疾病，該疾病通常難以診斷。而且，許多患者患有輕微或中度抑郁癥。因此，開發(fā)一種可以用于治療精神疾病/失調(diào)癥，或抑制例如人類抑郁癥的精神疾病/失調(diào)癥發(fā)生的風險，并穩(wěn)定情緒的化合物以及藥學組合物和/或飲食組合物是令人感興趣的。根據(jù)本發(fā)明，式I香豆素醚滿足以上要求。其中，W是H、0H或(E)-3-甲基-丁-2-烯基，R2選自由甲基、3-(4，5-二氫-5，5-二甲基-4-呋喃酮-2-基)-2-(E/Z)-丁烯基、(E/Z)-3，7-二甲基辛-2，6-二烯基、7-羥基-3，7-二甲基-2-辛烯-6-酮-基和(E/Z，E/Z)-ll-乙酰氧_3，7，11，11-四甲基_十一烷_2，7-二烯-10-酮-基組成的組，R3是H，R1和R20—起形成基團-O-C(C(=CH2)CH3)H-CH2-0-或基團-C(H)=C(H)_C(CH3)2_0-，或R20和R3—起形成基團_0_C(H)(C(CH3)2(H)-0-C(0)CH3)-CH2-。因此，一方面，本發(fā)明涉及W、R2和R3如上定義的式I香豆素醚，優(yōu)選地，涉及R1和R勺一起形成基團-0-C(C(=CH》CH3)H-CH廠0-的香豆素醚，更優(yōu)選地，涉及0bliquin，最優(yōu)選地，涉及(S)-Obliquin，上述化合物可用作藥物，具體地，可用作治療與受損神經(jīng)傳遞相關的失調(diào)癥的藥物。另一方面，本發(fā)明涉及如上所定義的式I香豆素醚用于制造治療與受損神經(jīng)傳遞相關的失調(diào)癥的組合物的用途，具體地，用于制造抗抑郁齊U、情緒改善齊U、壓力釋放齊IJ、病情改進劑、焦慮減輕劑和/或強迫行為減輕劑的用途。另一方面，本發(fā)明涉及一種含有至少一種如上所定義式I香豆素醚的飲食組合物，以及涉及一種含有至少一種如上所定義式I香豆素醚和通常藥學載體的藥學組合物。另外，本發(fā)明涉及了一種用于治療與動物(包括人類)受損神經(jīng)傳遞相關的失調(diào)癥的方法，所述方法包括，將有效劑量的如上所定義式I香豆素醚給予需要所述式I香豆素醚的動物(包括人類)。在本發(fā)明的上下文中，動物包括人類，并包含哺乳動物、魚類和鳥類。優(yōu)選的"動物"是人類、寵物和家畜。寵物實例是狗、貓、鳥、寵物魚、天竺鼠、長腿大野兔(jackrabbit)、野兔和雪貂。家畜實例是魚、豬、馬、反芻動物(牛、棉羊和山羊)和家禽。在本發(fā)明的優(yōu)選方面，式I的香豆素醚選自由如下化合物組成的組Obliquin(式II化合物，見圖1)、花椒內(nèi)酯(xanthyletin，式III化合物，見圖1)、軟木花椒素(suberosin，式IV化合物，見圖1)、7-香葉基氧-香豆素(7-geranyloxycoumarin，式V化合物，見圖1)、6'-脫氫馬爾敏(6'-dehydromarmin，式VI化合物，見圖1)、Geiparvarin(式VIII化合物，見圖1)、0-乙酰基二氫山芹醇(O-acetylcol咖bianetin，式IX化合物，見圖1)和式VII化合物(見圖l)。更優(yōu)選地，式I香豆素醚是Obliquin，最優(yōu)選地，式I香豆素醚是(S)-Obliquin。術語"式I香豆素醚"還包括含有上述式I香豆素醚的任何植物原料或植物萃取物，尤其包括那些基于植物原料或萃取物的總重含有至少90重量％上述式I香豆素醚的任何植物原料或植物萃取物。在本發(fā)明上下文中，所用的術語"植物的原料"和"植物原料"意指植物的任何部分。"0bliquin"意指外消旋混合物，以及純R-Obliquin或純S-Obliquin，或其混合物。Obliquin可以從如下植物中分離，但并不限于這些植物Cedrelopsisgreve，Ptaeroxylonobliq皿m，Leontopodi咖alpi皿m，Helichrys咖ssp.，Iflogaspicata，Nidorellaanomala，Cneorumtricoccum，Phaenocomaprolifera禾口Cedrelopsismicrofoliata(JournalofNaturalProducts2002，65，1349-1352)。因此，該術語可以涵蓋任何上述這些植物的原料或萃取物，或含有0bliquin的任何其它植物原料或萃取物。"Obliquin"包括"天然的"(分離的)禾P"人造的"(制備的)Obliquin。J.Chem.Soc.(C)1969，526-331以及Phytochemistry1973，12，726-727中描述了0bliquin的合成方法。也被稱為"葡萄柚內(nèi)酯"的7-香葉基氧香豆素可以從如下植物中分離，但并不限于這些植物Citrusssp.，Aeglemarmelos，Ponci:rustrifoliata，Afraeglepaniculata，Severiniabuxifolia，Atalantiamonophylla，Pteleatrifoliata禾口Fortunellahindsii。因此，該術語可以涵蓋任何上述這些植物的原料或萃取物，或含有7-香葉基氧香豆素的任何其它植物原料或萃取物。"7-香葉氧基香豆素"包括"天然的"(分離的)和"人造的"(制備的)7-香葉基氧香豆素。根據(jù)TetrahedronLetters,28(23)，2579-82，1987可以制備7_香葉基氧香豆素。軟木花椒素可以從如下植物中分離，但并不限于這些植物Plumbagozeylanica，Seselissp.，Heracleumcandicans，Citrusssp.，Prangoslipskyi禾口Prangoslophoptera。因此，該術語可以涵蓋任何上述這些植物的原料或萃取物，或含有軟木花椒素的任何其它植物原料或萃取物。"軟木花椒素"包括"天然的"(分離的)和"人造的"(制備的)軟木花椒素。軟木花椒素的合成方法例如在JournaloftheChemicalSociety,ChemicalCommunications1986，16，1264-1266的數(shù)篇文章中進行了描述。式VII化合物(CAS[374702-57-5])可以從Ferulatadshikorum和其它植物中分離。因此，該術語可以涵蓋任何上述植物的原料或萃取物，或含有式VII化合物的任何其它植物原料或萃取物。"式VII化合物"包括"天然的"(分離的)禾P"人造的"(制備的)。6'-脫氫馬爾敏可以從Geijeraparviflora和其它植物的果實中分離。因此，該術語可以涵蓋任何上述植物的原料或萃取物，或含有6'-脫氫馬爾敏的任何其它植物原料或萃取物。"6'-脫氫馬爾敏"包括"天然的"(分離的)禾P"人造的"(制備的)6'-脫氫馬爾敏。Geiparvarin可以從Geijeraparviflora和其它植物的葉子中分離。因此，該術語可以涵蓋任何上述植物的原料或萃取物，或含有Geiparvarin的任何其它植物原料或萃取物。"Geiparvarin"包括"天然的"(分離的)禾P"人造的"(制備的)Geiparvarin。Geiparvarin可以根據(jù)JournalofOrganicChemistry1985，50(21)，3997-4005或Bioorganic&MedicinalChemistryLetters2002，12(24)，3551-3555中所描述的方法來制備。(S)-O-乙?；渖絕醇可以從如下植物中分離，但不限于這些植物Cnidiummo皿ieri和Angelicassp。因此，該術語可以涵蓋任何上述植物的原料或萃取物。"0_乙酰基二氫山芹醇"包括"天然的"(分離的)和"人造的"(制備的)0-乙?；渖角鄞?。除了0bliquin、花椒內(nèi)酯、7-香葉基氧香豆素、軟木花椒素、6'-脫氫馬爾敏、GeiparvariruO-乙酰基二氫山^醇和式VII化合物這些(純)化合物以外，尤其優(yōu)選的是基于植物原料/萃取物的總重含有至少90重量％上述化合物的植物原料和植物萃取物。根據(jù)本發(fā)明，不僅具有如上所定義的R1、R2和R3和其優(yōu)選范圍的式I香豆素醚本身可用作藥物，尤其可用于治療與受損神經(jīng)傳遞相關的疾病，而且含有上述式I香豆素醚的植物原料和萃取物，以及含有上述式I香豆素醚的飲食組合物和藥學組合物也可用作藥物，尤其可用于治療與受損神經(jīng)傳遞相關的疾病。根據(jù)本發(fā)明的飲食組合物還可包括保護性水狀膠質(zhì)(例如，樹膠、蛋白質(zhì)和改性淀粉)、粘合劑、成膜試劑、封裝試劑/原料、壁/殼原料、基質(zhì)化合物、涂層、乳化劑、表面活性劑、穩(wěn)定劑(油、脂肪、臘、卵磷脂等)、吸附劑、載體、填料、共化合物(co-compound)、分散劑、潤濕劑、加工助劑(溶劑)、流平劑、味道掩蔽劑、加重劑、凝膠試劑(jellyfyingagent)、成膠試劑、抗氧劑和抗菌劑。術語"飲食組合物"包括任何類型的營養(yǎng)物，例如(強化的)食品/飼料和飲料，上述營養(yǎng)物還包括臨床營養(yǎng)物和飲食補充劑。除了藥學上可接受載體和至少一種具有如上所定義W、R2和R3和其優(yōu)選范圍的式I香豆素醚以外，根據(jù)本發(fā)明的藥學組合物還可以包括常用的藥學添加劑和佐劑、賦性劑或稀釋劑，上述物質(zhì)包括，但不限于，水、任何來源的凝膠、植物樹膠、木質(zhì)素磺酸鹽、滑石、糖類、淀粉、阿拉伯樹膠、植物油、聚亞烷基二醇、調(diào)味劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、乳化劑、緩沖劑、潤滑劑、著色劑、潤濕劑、填料等。載體物質(zhì)可以是適于口服給藥/腸胃外給藥/注射給藥的有機或無機惰性載體物質(zhì)。根據(jù)本發(fā)明的飲食組合物和藥學組合物可以是任何適于給藥到包括人體的動物體的草本制劑形式(galenicform)，尤其是任何通常用于口服給藥的形式，例如，如下固體形式，諸如食品或飼料的(添加劑/補充劑)、食品或飼料預混合料、強化食品或飼料、藥片、藥丸、顆粒、drag6es、膠囊、和諸如粉末和藥片的泡騰配制品，和如下液體形式，諸如溶液、乳液或懸浮液，如飲料、糊狀物或油狀懸浮液。糊狀物可以填充到硬殼或軟殼膠囊中，從而該膠囊的基質(zhì)為例如(魚、豬、家禽、牛)凝膠、植物蛋白質(zhì)或木質(zhì)磺酸鹽。其它應用形式是皮膚給藥、胃腸外給藥或注射給藥形式。飲食組合物和藥學組合物可以是控釋(緩釋)配制品。食品的實例是乳制品，例如酸乳酪。強化食品的實例是谷物制的條糕(cerealbars)、烘制食品，例如，蛋糕和餅干。飲料包括非酒精類和酒精類飲料，以及被添加到飲用水和液體食品中的液體制劑。非酒精類飲料是，例如，軟飲料、運動飲料、果汁、檸檬水、茶和加奶飲料。液體食品是，例如，湯和乳制品(例如，牛奶什錦早餐飲料(mueslidrink))。具有如上所定義W、R2和R3和其優(yōu)選范圍的式I香豆素醚可用于制造治療與受損神經(jīng)傳遞相關的失調(diào)癥的藥物。在本發(fā)明的上下文中，"治療"還涵蓋聯(lián)合治療以及預防。"預防"可以是預防初次發(fā)生(初級預防)或預防再次發(fā)生(次級預防)。因此，本發(fā)明還涉及一種用于預防與動物(包括人類)受損神經(jīng)傳遞相關的失調(diào)癥的方法，所述方法包括，將有效劑量的具有如上所定義W、R2和R3和優(yōu)選范圍的式I香豆素醚給予需要上述式I香豆素醚的動物(包括人類)。在這方面，有效劑量的具有如上所定義W、R2和R3和優(yōu)選范圍的式I香豆素醚尤其可用于保持精神健康、認知功能平衡、有助于減少情緒發(fā)生波動的風險、有助于保持積極情緒和維持認知健康。在本發(fā)明的上下文中，術語"失調(diào)癥"("disorder")也包括疾病。用于治療與受損神經(jīng)傳遞相關疾病的藥物包括，抗抑郁劑、情緒改善劑、壓力釋放劑、病情改進劑、焦慮減輕劑和/或強迫行為減輕劑。它們都改善、增強和維持了生理學神經(jīng)傳遞，尤其是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的生理學神經(jīng)傳遞，并因此緩解了精神障礙?？挂钟魟┦怯糜谥委熍c精神、行為和情緒/情感、神經(jīng)、神經(jīng)退化、飲食和壓力相關的失調(diào)癥的藥物，上述失調(diào)癥例如，單向抑郁癥、雙相抑郁癥、急性抑郁癥、慢性抑郁癥、亞慢性抑郁癥(subchronicd印ression)、精神抑郁癥、產(chǎn)后抑郁癥、經(jīng)前期煩躁/綜合癥(PMS)、更年期抑郁綜合癥、攻擊、注意力缺乏失調(diào)癥(ADS)、社交焦慮癥、季節(jié)性情緒失調(diào)癥、焦慮(失調(diào)癥)、纖維肌痛綜合癥、慢性疲勞、睡眠失調(diào)癥(失眠)、創(chuàng)傷后壓力失調(diào)癥、驚恐失調(diào)癥、強迫癥、不寧腿綜合癥(restlesslegsyndrome)、神經(jīng)過敏、偏頭痛/原發(fā)性頭痛和普通痛、嘔吐、貪食癥、神經(jīng)性食欲缺乏、暴食癥、胃腸失調(diào)、筋疲力盡綜合癥、易怒和疲倦?？挂钟魟┻€可用于進行初級和次級預防和/或治療認知神經(jīng)損害，和用于制備進行初級和次級預防和/或治療認知神經(jīng)損害的組合物。而且，它們還可以有效地治療抑郁綜合癥或其它與擾亂神經(jīng)傳遞相關的其它綜合癥，上述綜合癥作為例如心血管病、中風、癌癥、Alzheimer病癥、Parkinson病癥和其它慢性病癥的共生病。因此，具有如上所定義的R1、R2和R3和優(yōu)選范圍的式I香豆素醚，以及(基本上)包含上述式I香豆素醚的植物原料和植物萃取物，和包含上述式I香豆素醚的飲食/藥學組合物適于治療動物，包括人類。特別地，寵物和家畜可能處于需要增強或改善神經(jīng)傳遞的狀態(tài)。例如，在動物被捕獲、運送或圈養(yǎng)后，當動物具有類似的失調(diào)癥，并且感到悲傷或具有侵略性，或具有刻板行為或焦慮和強迫行為時，會出現(xiàn)上述狀態(tài)。因此，具有如上所定義的R1、R2和R3和優(yōu)選范圍的式I香豆素醚一般可用作動物(包括人類，優(yōu)選人類、寵物和家畜)的抗抑郁劑。在本發(fā)明的另一實施方式中，發(fā)現(xiàn)具有如上所定義的W、R2和R3和優(yōu)選范圍的式I香豆素醚可用作情緒改進劑，以及可用于制造具有上述用途的組合物(植物原料/萃取物；飲食/藥學組合物)。"情緒改進劑"或"情緒健康調(diào)節(jié)劑"意指，采用上述藥劑進行治療的人的情緒被提高了，自尊心增強了，并且/或者消極想法和/或負面的緊張感減少了。它還意味著，平衡了情緒，并且/或者改善或維持了一般健康狀態(tài)(generalwell-being)，尤其是精神健康，以及(有助于)減少了情緒波動的風險并且(有助于)保持積極情緒。而且，具有如上所定義的R1、R2和R3和優(yōu)選范圍的式I香豆素醚以及包含有效劑量的上述式I香豆素醚的組合物可用于治療、預防和緩解與壓力相關的綜合癥，可用于治療、預防和緩解與超負荷工作、疲勞和/或筋疲力盡相關的綜合癥，可用于增強抗壓性或耐壓性，并且/或者有助于正常健康個體的松弛，即，這種組合物具有"壓力釋放劑"的療效。此外，具有如上所定義的W、R2和R3和優(yōu)選范圍的式I香豆素醚，以及包含有效劑量的上述式I香豆素醚的組合物可用于治療、預防和緩解人類和動物的焦慮行為和強迫行為。本發(fā)明的另一實施方式涉及，具有如上所定義的W、I^和RS和優(yōu)選范圍的式I香豆素醚和包含上述式I香豆素醚的組合物(植物萃取物、飲食/藥學組合物)作為"病情改進劑"的用途，即，作為減輕易怒(irritability)和疲勞，減輕、抑制或緩解身體和精神疲乏，有助于無擾睡眠(即，消除失眠癥和睡眠失調(diào)癥，并且改善睡眠)，并且以更通用的術語來表示作為增強精力，尤其增加患病或正常健康個體的腦能量產(chǎn)生的手段。而且，上述式I香豆素醚和其組合物一般而言可用于改善認知、尤其用于保持或改善注意力和集中力、記憶力和記憶能力、學習能力、語言表達能力、解決問題能力和智力機能；用于改善短期記憶力；用于增強思維活躍性；用于提高精神警惕性；用于減少精神疲勞；用于維持認知健康；維持認知機能平衡；調(diào)節(jié)饑飽以及調(diào)節(jié)活動性。本發(fā)明不僅涉及了可用作藥物(尤其可用于治療與受損神經(jīng)傳遞相關的失調(diào)癥的藥物)、具有如上所定義的R1、R2和R3和優(yōu)選范圍的式I香豆素醚和其組合物(即，基本上包含上述式I香豆素醚的植物萃取物；包含上述式I香豆素醚的飲食/藥學組合物)，還涉及了用于治療以上已經(jīng)提及的失調(diào)癥的方法。在上述方法的尤其優(yōu)選的實施方式中，對患有與圈養(yǎng)、捕獲或運送相關的失調(diào)癥、并表現(xiàn)出焦慮或強迫行為的寵物或家畜進行治療。對于人類，為了本發(fā)明的目的，具有如上所定義的W、R2和R3和優(yōu)選范圍的式I香豆素醚的適當日劑量可以在每天0.001mg/kg體重到約20mg/kg體重的范圍內(nèi)。更優(yōu)選的日劑量為約0.01到約10mg/kg體重，尤其優(yōu)選的日劑量是約0.05-5.Omg/kg體重。由此可以計算出含有上述式I香豆素醚的植物原料或植物萃取物的量。在人用固體劑量單位制劑中，具有如上所定義的R1、R2和R3和優(yōu)選范圍的式I香豆素醚的適當含量為約0.lmg到約1000mg，優(yōu)選為約lmg到約500mg/劑量單位。在飲食組合物，尤其在人用食品和飲料中，具有如上所定義的W、f和W和優(yōu)選范圍的式1香豆素醚的適當用量基于所述食品或飲料的總重為約0.0001重量％(lmg/kg)到約5重量％(50g/kg)，優(yōu)選為約0.001%(10mg/kg)到約1重量％(10g/kg)，更優(yōu)選為約0.01(100mg/kg)到約0.5重量％(5g/kg)。在本發(fā)明優(yōu)選實施方式的食品和飲料中，具有如上所定義的R1、R2和R3和優(yōu)選范圍的式I香豆素醚的量為10到30mg每份，S卩，120mg/kg食品或飲料。對于除人類以外的動物，為了本發(fā)明的目的，具有如上所定義的W、R2和R3和優(yōu)選范圍的式I香豆素醚的適當日劑量可以在每天0.001mg/kg體重到約1000mg/kg體重的范圍內(nèi)。更優(yōu)選的日劑量為約0.lmg到約500mg/kg體重，尤其優(yōu)選的日劑量是約lmg-100mg/kg體重。通過以下實施例進一步說明本發(fā)明。實施例在實施例1中，使用得自MicroSourceDiscoverySystemsInc，21GeorgeWashingtonPlaza，Gaylordsville,CT06755USA的Obliquin的外消旋混合物。該混合物的純度>96%。在實施例2和3中，使用根據(jù)J.Chem.Soc.(C)1969，526-531合成的Obliquin的外消旋混合物?；ń穬?nèi)酯也得自Microsource。7-香葉基氧香豆素、6'-脫氫馬爾敏、Geiparvarin、(S)_0_乙?；渖角鄞己蛙浤净ń匪氐米訟PINChemicals,43dMiltonPark,Abingdon,Oxon，0X14■，UnitedKingdom。式VII化合物得自InterBioScreenLtd.，InstitutskyProspect,7a142432Chernogolovka，Russia。實施例1:式I香豆素醚對5_羥色胺攝取的抑制作用和經(jīng)標記的西酞普蘭的替代作用穩(wěn)定表達人5-羥色胺再攝取轉(zhuǎn)運體(hSERT)的HEK-293細胞得自R.Blakely，VanderbiltUniversity,USA。該細胞在購自Bioconc印t，Allschwil，Switzerland、并含有10X胎牛血清、青霉素、鏈霉素、L-谷酰胺和抗生素G418的Dulbeco'sModifiedEaglesMedium培養(yǎng)基中進行常規(guī)生長，并且在將試驗細胞種于上述培養(yǎng)基中以前1天進行胰蛋白酶化(trypsinisation)。在試驗即將開始以前將培養(yǎng)基用購自SigmaChemicalsLtd.的KrebsRingers重碳酸鹽緩沖劑來替換，并用35iiM巴吉林、2.2mMCaCl2、lmM抗壞血酸和5mMN-2-羥基乙基哌嗪-N'-2-乙烷磺酸(被稱為"H印es"的緩沖液)進行補充。通過添加經(jīng)車畐身寸t示i己(3H)的5—羅圣色月安(AmershamBiosciencesGEHealthcare,Slough，UK)直至^農(nóng)度為20nM，并在室溫下培養(yǎng)30分鐘來測定攝取入細胞的5-羥色胺。通過采用上述緩沖液洗滌3遍除去未結合的標記后，將結合的5-羥色胺通過液體閃爍計數(shù)法進行量化。根據(jù)Galli等的JournalofExperimentalBiology1995，198，2197-2212，3，由上述細胞系制備含有hSERT的膜。在50mMTris-HCl、300mMNaCl(pH7.4)中，對每個數(shù)據(jù)點將涂敷有3iig膜蛋白質(zhì)和0.8mgWheatGermAglutinin的SPA⑧(親近閃爍檢測)球(AmershamBiosciencesGEHealthcare,Slough，UK)與輻射標記的(3H)西酞普蘭(AmershamBiosciencesGEHealthcare,Slough，UK)進行混合，直至撮終濃度為3.3nM。在室溫下培養(yǎng)18小時后，經(jīng)結合的西酞普蘭通過液體閃爍計數(shù)法來量化。通過在添加(3H)5-羥色胺/西酞普蘭以前和過程中，在實驗中引入在0.03-100yM濃度范圍內(nèi)的式I香豆素醚10分鐘，來測定式I香豆素醚對5-羥色胺的攝取和西酞普蘭結合的影響。經(jīng)由轉(zhuǎn)運體的5-羥色胺的攝取和西酞普蘭的結合都被式I香豆素醚以劑量依賴的方式抑制。對于式I香豆素醚對5-羥色胺的攝取和西酞普蘭的結合的抑制作用，利用Cheng-Prusoff方程(Y.C.Cheng，W.H.Prusoff，Biochem.Pharmacol.1973，22，p.3099-3108)由所測定的IC50得到的計算出的抑制常數(shù)Ki列于表1中。表l:式I香豆素醚對5-羥色胺攝取入經(jīng)轉(zhuǎn)染的HEK-293細胞的抑制作用和經(jīng)標記的西酞普蘭與含有hSERT膜進行替換作用的抑制作用常數(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>如果一個實驗實施兩次或數(shù)次，則取平均值。實施例2:0bli叫in對單氨基氧化酶的抑制作用由O.0405g外消旋0bliquin在750ii1的二甲基亞砜(DMSO)的原料溶液(92.5%，等于37.5mg純化合物)，制備在反應緩沖液(0.05M磷酸鈉，pH7.4，0.2%DMSO)中Obliquin濃度為4X10—4M的工作溶液。在該測試體系中，Obliquin的最終濃度為10—4M、10—5M、10—6M、10—7M。為了測定對單氨基氧化酶活性的抑制作用，按照廠商說明書使用AmplexRed單氨基氧化酶試劑盒(分子探針Nr.A-12214,比色法)。使用p-酪胺作為MAO-A酶(SigmaNr.M7316)的底物，芐胺作為MAO-B酶(SigmaNr.M7441)的底物。在工作溶液中，MAO-A酶的濃度為8單位/ml，MAO-B為4單位/ml。MAO-A和MAO-B試驗，比色法對于試驗，使用501的工作溶液(見上)。作為對照溶液，用50ill的反應緩沖液替代含有Obliquin的工作溶液。分別加入50ii1最終濃度為2單位/ml的稀釋MAO-A禾P50最終濃度為1單位/ml的稀釋MAO-B。加入100ill含有辣根過氧化酶(2U/ml)和底物酪胺(MAO-A用)或底物芐胺(MAO-B用)的Amplex溶液。為了扣除背景吸收，100ii1Amplex溶液和100y1反應緩沖液的混合物作為"空白"。將樣品在室溫下黑暗中培養(yǎng)1小時，然后在SoftmaxMicroplate光度計(MolecularDevice)中測定在535nm處的消光。結果列于表2和表3中。:0bliquin濃度的增加對MA0-A的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>:0bliquin濃度的增加對MA0-B的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>由此，表明了Obliquin對MAO-B抑制作用的特異性要高于對MAO-A抑制作用的特異性。實施例3:ProsoIt游泳測試對于抑郁癥，"BehaviouralDespairTest"或"Porsolt受迫游泳測試"是有效的動物模型(見，T.Nagatsu，NeuroToxicology2004，25，11-20，特別是p.16，右欄中間部分，和Porsolt等的Arch.Int.Pharmacodyn.1977，229，327-336)。上述動物模型反應了數(shù)種神經(jīng)傳遞素(包括5-羥色胺、多巴胺或去甲腎上腺素)的傳遞的增強。探測抗抑郁劑活性的測試根據(jù)Porsolt等在Arch.Int.Pharmacodyn.1977，229，327-336中的描述來實施。在它們不能快速逃離的情形下被迫游泳的小鼠變得穩(wěn)定?？挂钟魟┛s短了穩(wěn)定時間。將各個小鼠放置在含有10cm水(22°C)的圓筒(高=24cm，直徑二13cm)中，小鼠不能從上述圓筒中逃離。將小鼠放置在水中6分鐘，并測量在最后4分鐘期間的穩(wěn)定時間。對四個組中的每組10只小鼠進行研究。該測試是"盲"測試，S卩，實施該實驗的人員與注射小鼠的人員不同，因此他們不知道每個小鼠屬于四個組中的哪個組。將0bliquin以三種劑量(10、30和80mg/kg體重)進行評估，在測試以前30分鐘將其進行腹腔給藥，并與對照組進行比較。給藥的Obliquin溶于含有3重量％匿SO和3重量^Tween⑧80的鹽水溶液(所謂的"媒介物")中。將由含有3重量％匿SO和3重量^Tween⑧80的鹽水溶液組成的媒介物經(jīng)腹腔給予對照組。使用UnpairedStudentT測試和變量分析(ANOVA)，將治療組和對照組進行比較來分析數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)列在表4中。表4:隨著Obliquin濃度的增加"穩(wěn)定時間"減少<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>*與對照組相比明顯不同(p<0.01，Student的T測試)因此，在最高Obliquin劑量組中，穩(wěn)定時間明顯下降了25%。總的來說，Obliquin具有明顯的劑量依賴性(ANOVAp<0.05)實施例4:作為焦虎或強迫行為測試的MarbleBurying測試"抵御埋藏"行為通過大鼠埋藏例如裝滿令鼠討厭味道的液體的飲水噴嘴(Wilkie等的JournaloftheExperimentalAnalysisofBehavior1979，31，299-306頁)或震動剌棒(shockprods)(Pinel禾口Treit的JournalofComparativeandPhysiologicalPsychology1978，92，708-712頁)等的有害物體來證明。MarbleBurying測試被設計成上述測試的改進。Poling等(JournaloftheExperimentalAnalysisofBehavior1981，35，31-44頁)將大鼠每天置于含有25顆彈球(marble)的單個籠中連續(xù)10或21天。計算在10天周期的每天內(nèi)或在暴露21天后24小時中所埋藏的彈球數(shù)。作者報道了，埋藏彈球不會由于新鮮事物或任何有害剌激物而受到影響。據(jù)報道，除了其劑量不會誘發(fā)鎮(zhèn)靜的SSRI(例如，氟優(yōu)沙明、氟西汀、西酞普蘭)、三環(huán)抗抑郁劑(例如，丙咪嗪、地昔帕明)和選擇性去甲腎上腺素攝取抑制劑(瑞波西汀)以外，小鼠的彈球埋藏行為對于輕鎮(zhèn)靜劑(例如，安定)和強鎮(zhèn)靜劑(例如，氟哌丁苯)也敏感(Broekkamp等的EurJPharmacol.1986，126,223-229頁)。上述模型可以反映焦慮行為或強迫行為(見DeBoer禾口Koolhaas的EuropeanJournalofPharmacology2003，463，145-161頁)。此處所應用的方法按照Broekkamp等(1986)描述的進行。將小鼠(每個治療組n=15)分別放置于透明塑料籠(33X21X8cm)中，該塑料籠的底板上具有5cm木屑，并且籠中心處集中了25顆彈球(直徑lcm)。另一個頂朝下的籠作為蓋子。在測試過程的最后30分鐘計數(shù)被木屑覆蓋(至少三分之二)的彈球數(shù)。進行測試的調(diào)查員并不知曉藥物治療方案。在測試以前，通過使10只未經(jīng)測試的小鼠留在每個籠中15分鐘來使所有的籠子和彈球被灌輸("impregnated")。將7-香葉基氧香豆素以10、30和80mg/kg的劑量進行評估，在測試以前30分鐘將其進行腹腔(i.P.)給藥，并與對照組進行比較。7-香葉基氧香豆素溶于含有3重量％匿SO和3重量XTween⑧80的鹽水溶液(所謂的"媒介物")中。將由含有3重量％匿SO和3重量XTween⑧80的鹽水溶液組成的媒介物腹腔給予對照組。在相同實驗條件下給予的氟西汀(32mg/kg)被用作參照物質(zhì)。使用UnpairedStudentT測試將經(jīng)治療組和媒介物對照組進行比較來分析數(shù)據(jù)。結果表5:7-香葉基氧香豆素和氟西汀在小鼠彈球埋藏測試中的影響7-香葉基氧香豆素(mg/kg)由木屑覆蓋的彈球數(shù)i.p.-30分鐘平均值±平均標準偏差評估相對于對照組的變化％媒介物18.4±1.3--313.4±2.0*0.0488-27%1011.3±2.4*0.0151-39%30斗了士15***O.0001-74%氟西汀32mg/kgi.p.-30min0.3±0.2***<0扁1-98%n=15;StudentT測試*=p<0.05;***=p<0.001。7-香葉基-氧香豆素(3、10和30mg/kg)在測試前30分鐘進行腹腔(i.p.)給藥。與媒介對照組相比，上述7-香葉基-氧香豆素減少的所覆蓋的彈球數(shù)依賴于其用量(分別為_27%，p<0.05，-39%，p<0.05，-74%，p<0.001)。與媒介對照組相比，在相同實驗條件下給予的氟西汀(32mg/kgi.p.)幾乎消除了彈球埋藏行為(_98%，p<0.001)。這些結果表明，7-香葉基-氧香豆素在減少焦慮/強迫行為方面與SSRI氟西汀具有類似的活性。實施例5:軟凝膠膠囊的制備可以制備包括如下成分的軟凝膠膠囊(500mg):<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>成人每天服用兩顆膠囊，服用3個月，以治療輕度慢性精神抑郁癥。實施例6:軟凝膠膠囊的制備可以制備包括如下成分的軟凝膠膠囊(600mg):<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>優(yōu)選在月經(jīng)周期的后半期，每天服用一顆膠囊，服用14天，用于治療經(jīng)期前綜合癥和經(jīng)期前的煩躁不安。實施例7:藥片的制備可以制備包括如下成分的4Q0mg藥片<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>為了一般健康狀態(tài)、補充能量和緩解壓力，每天服用兩次，每次一片藥片，服用3個月。實施例8:方便香味軟飲料的制造<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>將Obliquin與脫脂奶粉預混合，并放置在行星式碗狀混合器中。加入脆玉米片和脆爆米，并將混合物輕輕混合。然后，加入干燥切片的蘋果。在第一蒸煮罐中，將糖、水和鹽以上述用量進行混合(溶液l)。在第二蒸煮罐中，將葡萄糖糖漿、轉(zhuǎn)化糖糖漿和山梨醇糖漿以上述用量進行混合(溶液2)。烘焙脂肪、棕仁脂肪、卵磷脂和乳化劑混合物是脂肪相。將溶液1加熱至110°C。將溶液2加熱至113t:，然后在冷水浴中進行冷卻。此后，將溶液1和溶液2合并。將脂肪相在75t:的水浴中熔化。將脂肪相加入溶液1和溶液2的合并混合物中。將蘋果香精和檸檬酸加入液體糖-脂肪混合物中。將液體物質(zhì)加入干燥成分中，并在行星式碗狀混合器中充分混合。將所得物放置在大理石板上，并軋成所希望的厚度。將所得物冷卻至室溫并切成條。每份(30g)非烘烤糧谷制的條糕包括約25mg0bliquin。為了一般健康狀態(tài)和補充能量，每天可以吃1-2塊糧谷制的條糕。權利要求一種飲食或藥學組合物，包括至少一種式I香豆素醚其中，R1是H、OH或(E)-3-甲基-丁-2-烯基，R2是(E/Z)-3，7-二甲基辛-2，6-二烯基，R3是H。F2009102209985C00011.tif2.如權利要求1所述的飲食或藥學組合物，其中，所述式I香豆素醚是7-香葉基氧香豆素。3.如權利要求1或2所述的飲食組合物，所述組合物以如下形式存在食品形式、飲食補充劑形式和飲料形式。4.如權利要求3所述的飲食組合物，其中，所述食品形式包括，乳制品、糧谷制的條糕和烘制食品。5.如權利要求3所述的飲食組合物，其中，所述飲食補充劑形式包括藥片、藥丸、顆粒、drag6es、膠囊和泡騰配制品。6.如權利要求3所述的飲食組合物，其中，所述飲料形式包括非酒精類和酒精類飲料以及被添加到飲用水和液體食品中的液體制劑。7.如權利要求1到6中任意一項所述的飲食組合物或權利要求1或2所述的藥學組合物在制造抗抑郁劑、情緒改善劑、壓力釋放劑、病情改進劑、焦慮減輕劑和/或強迫行為減輕劑中的用途。8.—種式I香豆素醚，其中，W是H、0H或(E)-3-甲基-丁-2-烯基，f是(E/Z)-3，7-二甲基辛_2，6_二烯基，R3是H，所述式I香豆素醚用作藥物。9.一種式I香豆素醚其中，W是H、0H或(E)-3-甲基-丁-2-烯基，f是(E/Z)-3，7-二甲基辛_2，6_二烯基，R3是H，所述式I香豆素醚用作治療與受損神經(jīng)傳遞相關的失調(diào)癥的藥物。10.—種式I香豆素醚，其中，W是H、0H或(E)-3-甲基-丁-2-烯基，f是(E/Z)-3，7-二甲基辛_2，6_二烯基，R3是H，所述式I香豆素醚根據(jù)權利要求9所述用作抗抑郁劑、情緒改善劑、壓力釋放劑、病情改進劑、焦慮減輕劑和/或強迫行為減輕劑。11.如權利要求8-10中任意一項所述的式I香豆素醚，其中，所述香豆素醚是7-香葉基氧香豆素。12.式I香豆素醚用于制造治療與受損神經(jīng)傳遞相關的失調(diào)癥的組合物的用途，其中，W是H、OH或(E)-3-甲基-丁-2-烯基，f是(E/Z)-3，7-二甲基辛_2，6_二烯基，R3是H。13.如權利要求12所述的用途，其中，所述組合物是抗抑郁劑、情緒改善劑、壓力釋放劑、病情改進劑、焦慮減輕劑和/或強迫行為減輕劑。全文摘要本發(fā)明涉及一種用于預防和治療與受損神經(jīng)傳遞相關的失調(diào)癥的新型試劑，即式I香豆素醚，其中，R1是H、OH或(E)-3-甲基-丁-2-烯基，R2是(E/Z)-3，7-二甲基辛-2，6-二烯基，R3是H，上述式I香豆素醚可用作藥物，尤其用于治療和/或預防與受損神經(jīng)傳遞相關的失調(diào)癥，并且涉及了包含上述式I香豆素醚的飲食組合物和藥學組合物和植物萃取物，并且涉及了上述化合物和組合物的用途。文檔編號A61P25/24GK101703239SQ200910220998公開日2010年5月12日申請日期2005年10月21日優(yōu)先權日2004年10月22日發(fā)明者伯恩德·穆斯勒,安·福勒,安托恩·德·賽茨厄,戈德·斯庫勒,瑞吉納·古拉爾奇克申請人:帝斯曼知識產(chǎn)權資產(chǎn)管理有限公司