專利名稱：：改進(jìn)的螯合劑綴合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：WO95/19187中公開了線性或環(huán)狀的3-50聚體的合成肽與連接在肽羧基末端上的多齒螯合劑的綴合物，其可用作放射性藥物。將PnAO、BnAO、和PentAO等二胺二肟稱作適宜的螯合劑。WO99/60018中公開了用于血栓造影的二胺二將配位體與肽的二胺二肟螯合物綴合物。聲稱優(yōu)選的這類螯合劑是具有Q=-(CH2)2NR(CH2)2-的二胺二將。本發(fā)明WO99/60018的二胺二肟-肽螯合劑綴合物是化學(xué)式I:Y然而它確實(shí)具有一些明顯的缺點(diǎn)。因此在與99mTc螯合時(shí)，這種氮雜-二胺二肝生成幾種可以用色語法分離和檢測(cè)的锝化合物。在環(huán)境溫度下，原始放射性標(biāo)記的化合物(中間體)會(huì)隨時(shí)間(2-3h)轉(zhuǎn)化成穩(wěn)定的產(chǎn)物。采用較高的pH(>pH8)和加熱，可以促進(jìn)這種中間體產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化。在醫(yī)院放射藥物學(xué)上這些條件是不理想的，因此需要具有較少中間體和/或較快中間體一產(chǎn)物轉(zhuǎn)化速率的螯合劑。顯然不希望要求加熱和使用可能較高的pH,使所需的"mTc螯合物達(dá)到足夠的放射化學(xué)純度(RCP)，因?yàn)檫@類加熱可以分解所連接的生物靶向分子或肽?；瘜W(xué)式I的氮雜二胺二肟螯合劑的另一個(gè)問題，是橋頭位置的叔胺氮堿性較強(qiáng)。這意味著在水溶液中生成相應(yīng)的,Tc絡(luò)合物時(shí)，至少有一部分叔胺發(fā)生質(zhì)子化，結(jié)果使綴合物帶上電荷。該電荷可以限制所標(biāo)記的生物靶向部分的用途，因?yàn)樵撾姾煽梢允?改射性標(biāo)記的綴合物更難穿過細(xì)胞膜。本發(fā)明提供另一種螯合劑體系(化學(xué)式I，式中丁=0,該體系克服化學(xué)式i式中T=N，Y=-0€2012順-[肽]，了現(xiàn)有技術(shù)的這些問題，并提供一些能用放射性標(biāo)記的綴合物，以便在室溫和水溶液條件下，在接近中性的pH時(shí)獲得優(yōu)良的RCP。放射性金屬絡(luò)合物的穩(wěn)定性是優(yōu)良的?，F(xiàn)有技術(shù)N2S2和N3S含硫醇雙官能螯合劑具有一些缺點(diǎn)，硫醇對(duì)空氣敏感，在中性到堿性條件下，在空氣中能迅速氧化成相應(yīng)的二硫化物。因此在使用前它們必須保存在惰性氣氛中或保存在保護(hù)性基質(zhì)中。采用另一種方法，可以把它們用作被保護(hù)的物質(zhì)，例如疏代乙酸酯或四氫吡喃基半酮縮硫醇，但這些化合物必需在使用前用酸或堿并加熱除去保護(hù)基。與本發(fā)明的螯合劑相比，所有這些特性都降低了這些螯合劑的方便性。因此，本發(fā)明的螯合劑適合范圍廣泛的生物耙向部分的綴合和》丈射性標(biāo)記。發(fā)明詳述在第一個(gè)方面，本發(fā)明提供具有生物靶向部分的二胺二將配位體螯合劑綴合物。術(shù)語"螯合劑綴合物，，，系指其中的金屬螯合劑是以共價(jià)鍵與生物靶向部分結(jié)合的('綴合的，)化合物。所述螯合劑綴合物是化學(xué)式II的化合物R<l丄R1，化學(xué)式n式中R1、R2、和R3各自分別是R基；Y是-(A)n-X畫Z式中X是-NR4-、-C02-、-N(C=S)-、-S(CO)-、-S-、或-O-;Z是生物靶向部分，R"蟲立是R基；-(A)n-是連接基團(tuán)，其中每個(gè)A獨(dú)立是-CR2-、-CR=CR-、Nlo國(guó)C三C畫、-NRCO-、-CONR隱、-S02NR-、-NRSOr、-CR2OCR2-、-CR2SCR2-、-CR2NRCR2-、C4—8亞環(huán)雜烷基、C4—8亞環(huán)烷基、Cw2亞芳基、C3_12亞雜芳基或聚烷撐二醇、聚乳酸或聚乙醇酸部分；n是0—IO的整數(shù)值；每個(gè)R基獨(dú)立是H或CwQ烷基、Cwo烷芳基、C2.u)烷氧烷基、d.K)羥烷基、C,.u)氟代烷基，或者2個(gè)或更多個(gè)R基與連接它們的原子一起形成飽和或不飽和的碳環(huán)、雜環(huán)。所謂術(shù)語"生物靶向部分"，系指3—100聚體的肽或肽類似物，它們可以是線性肽或環(huán)狀肽，或它們的組合；單克隆抗體或其片段；或酶底物或抑制劑；合成受體結(jié)合化合物；寡核苷酸，或寡-DNA或寡-RNA片段。生物靶向部分可以是合成或天然來源的，但優(yōu)選是合成的。優(yōu)選的生物耙向部分是3—20聚體的肽，它們可以是合成或天然來源的，但優(yōu)選是合成的。所謂術(shù)語"環(huán)狀肽"，系指5—15個(gè)氨基酸的序列，其中二個(gè)末端氨基酸通過共價(jià)鍵結(jié)合起來的，共價(jià)鍵可以是肽鍵或二硫鍵或合成的非肽鍵，例如硫醚鍵、磷酸二酯鍵、二硅氧烷鍵或尿烷^t。所謂術(shù)語"氨基酸"，系指L-氨基酸或D-氨基酸、氨基酸類似物或氨基酸模擬物(aminoacidmimetic)，它們可以是天然產(chǎn)生的，或者是純合成來源的，可以是旋光純的，即單對(duì)映體，因而是手性的，或?qū)τ丑w的混合物。本發(fā)明的氨基酸優(yōu)選是旋光純的。所謂術(shù)語"氨基酸模擬物"，系指天然存在的氨基酸的合成類似物，它們是電子等排物，即已經(jīng)設(shè)計(jì)用來模擬天然化合物的空間和電子結(jié)構(gòu)。對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言，這些電子等排物是眾所周知的，它們包括但不限于酯肽(depsipeptides)、retro-inverso肽、碌L代酰胺、環(huán)烷、或1,5-二取代的四唑[參見M.Goodman,生物聚合物(Biopolymers)，24，137，(1985)]。適合本發(fā)明使用的肽包括一促生長(zhǎng)素抑制素、抑生長(zhǎng)肽(octreotide)、和類似物，—與ST受體結(jié)合的肽，其中ST系指由大腸桿菌和其它微生物產(chǎn)生的熱穩(wěn)定毒素；一層粘連蛋白片段，例如YIGSR、PDSGR、IKVAV、LRE和KCQAGTFALRGDPQG，—N-甲酰肽，用于靶向白細(xì)胞聚集的部位，一血小板因子4(PF4)及其片段，一包含RGD的肽，一Ct2-抗纖溶酶、纖連蛋白或(3-酪蛋白、血纖維蛋白原或血小板反應(yīng)蛋白(thrombospondin)的肽片段。ctr抗纖溶酶、纖連蛋白、p-酪蛋白、血纖維蛋白原和血小板反應(yīng)蛋白的氨基酸序列可以在下列參考文獻(xiàn)中找到ct2-抗纖溶酶前體[MTone等人，生物化學(xué)雜志(J.Biochem.)，102，1033，(1987)];(3-酪蛋白[L.Hansson等人，基因(Gene),139，193，(1994)〗；纖連蛋白[A.Gutman等人，F(xiàn)EBSLett.，巡，145，(1996)];血小板反應(yīng)蛋白-l前體[V.Dixit等人，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，5449，(1986)];R.F.Doolittle,Ann.Rev.Biochem.,11,195,(1984)。本發(fā)明的肽優(yōu)選包括取自下列N-末端的氨基酸序列(i)CC2-抗纖溶酶，即NH2-Asn-Gln-Glu-Gln-Val陽Ser-Pro隱Leu-Thr-Leu-Thr-Leu-Leu誦Lys-OH或其變異體，其中已經(jīng)交換、添加或去除一個(gè)或多個(gè)氨基酸，例如NH2-Asn-Gln-Glu-Gln-Val-Ser-Pro-Leu-Thr-Leu-Thr-Leu-Leu-Lys-Gly-OH，NH2-Asn-Gln-Glu-Ala-Val-Ser-Pro-Leu-Thr-Leu-Thr-Leu-Leu-Lys曙Gly-OH,NH2-Asn-Gln-Glu-Gln-Val-Gly-OH;或(ii)酪蛋白即Ac-Leu-Gly-Pro-Gly-Gln畫Ser-Lys-Val-Ile隱Gly。本發(fā)明的合成肽可以采用常規(guī)固相合成方法制備，在P.Lloyd-Williams,F.Albericio和E.Girald所著合成肽和蛋白質(zhì)的化學(xué)方法，CRCPress，1997中，敘述了這種常規(guī)固相合成方法。適合在本發(fā)明中使用的單克隆抗體或其片段包括抗B細(xì)胞表面表達(dá)的CD-204元原的抗體；抗白細(xì)月包(anti-leucocyte)抗體或抗4立細(xì)月包4元體；抗肌球蛋白抗體或抗癌胚抗原(CEA)抗體。適宜的酶底物或抑制劑包括葡萄糖和葡萄糖類似物，例如氟代脫氧葡萄糖；脂肪酸或彈性蛋白酶抑制劑。適合的合成受體結(jié)合化合物，包括雌二醇、雌激素、黃體酮(progestin)、孕酮(progesterone)、和其它類固醇激素；多巴胺D-l或D-2受體的配體，或多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的配體，例如托烷；和血清素受體的配體。所謂術(shù)語"氟代烷基"，系指具有至少一個(gè)氟取代基的烷基，即該術(shù)語包括從一氟代烷基(例如-CH2F)到全氟烷基(例如CF"的基團(tuán)。在本發(fā)明的二胺二肟螯合劑中，W優(yōu)選是H。還優(yōu)選至少一個(gè)W基是H，更優(yōu)選所有的R"基都是H。每個(gè)W優(yōu)選是d.3烷基、<:2.4烷氧烷基、Cw羥烷基或Q.3氟代烷基，最優(yōu)選d.3烷基或C！.3氟代烷基。尤其最優(yōu)選所有的R"基都是CH3。優(yōu)選的化學(xué)式II的螯合劑綴合物，其中2個(gè)或更多個(gè)R基與連接它們的原子一起形成飽和或不飽和的碳環(huán)、雜環(huán)，包括這些具有3—6個(gè)原子，特別是5—6個(gè)原子的環(huán)。最優(yōu)選的這些環(huán)是飽和碳環(huán)。優(yōu)選的碳環(huán)是2個(gè)連接到相同或相鄰碳原子上的R"基結(jié)合起來，形成3—6元、特別是5元或6元飽和環(huán)的那些碳環(huán)。設(shè)想連接基團(tuán)-(A)n的作用是將金屬配位時(shí)產(chǎn)生的體積較大的放射性金屬絡(luò)合物與生物靶向部分的活性位點(diǎn)隔開，所以，例如受體的結(jié)合不會(huì)被削弱。這種作用可以通過撓性(例如簡(jiǎn)單的烷基鏈)和/或剛性(例如環(huán)烷基或芳基間隔基)的結(jié)合來實(shí)現(xiàn)，其中撓性使體積大的基團(tuán)對(duì)其本身不處于活性位點(diǎn)的位置具有自由度，而剛性使不處于活性位點(diǎn)的金屬絡(luò)合物定向。也可以利用連接基團(tuán)的性質(zhì)改進(jìn)所得的綴合物放射性金屬絡(luò)合物的生物分布(biodistribution)。因此，例如在連接基團(tuán)中引入醚基團(tuán)將有助于使血漿蛋白結(jié)合減到最小。優(yōu)選的連接基團(tuán)-(A)n,具有構(gòu)成-(A)部分的被連接原子的主鏈，其中包含2—IO個(gè)原子，最優(yōu)選2—5個(gè)原子，特別優(yōu)選2—3個(gè)原子。2個(gè)原子的最小連接基團(tuán)主鏈具有一些優(yōu)點(diǎn)，螯合劑能與生物靶向部分完全分離，所以能將任何相互作用減到最小。另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是，X和Z基團(tuán)可能的螯合物環(huán)尺寸是很大的(對(duì)于2個(gè)原子主鏈至少是8),以致這些基團(tuán)不可能有效地與螯合劑竟?fàn)帉?duì)放射性金屬的配位。這樣，在這種類型的綴合物中就能保持生物靶向部分的生物靶向特性，和二胺二肟螯合劑絡(luò)合金屬的能力。亞烷基或亞芳基等非肽連接基團(tuán)也具有下述優(yōu)點(diǎn)，即與綴合的生物靶向部分沒有明顯的氫鍵相互作用，所以連接基團(tuán)不會(huì)環(huán)繞在生物耙向部分上。優(yōu)選的亞烷基隔離基是-(CH2)n-，其中n是2—5。優(yōu)選的亞芳基隔離基的化學(xué)式如下因此優(yōu)選的Y基是-CH2CH2-X-Z，最優(yōu)選-CH2CH2-NR氣Z,尤其最優(yōu)選Y=-CH2CH2-NH-Z。該基團(tuán)具有另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)，其主干來源于中間體I^C(CH2CH2NH2)3，優(yōu)選中間體HC(CH2CH2NH2)3，并且是對(duì)稱的，因?yàn)榫哂胁煌滈L(zhǎng)的三胺要求使用在化學(xué)上能區(qū)別不同胺的合成策略(例如通過保護(hù)基)，所以其合成要容易得多?；鶊F(tuán)X是官能團(tuán)，它很容易使螯合劑與生物靶向部分Z綴合。由于大多數(shù)肽和蛋白質(zhì)都具有可用于官能化的羧基或氨基位點(diǎn)，當(dāng)Z是肽和蛋白質(zhì)時(shí)，優(yōu)選的X基團(tuán)是-NRt和-C02-,因?yàn)檫@些基團(tuán)容易通過酰胺^t綴合，所以包含半胱氨酸的肽和蛋白質(zhì)可以具有游離的巰基，當(dāng)Z是包含半胱氨酸的肽和蛋白質(zhì)時(shí)，優(yōu)選的X基團(tuán)是親巰基(thiolphilic)基團(tuán)，例如馬來酰亞胺和丙烯酰胺，因?yàn)檫@些基團(tuán)容易通過硫醚鍵綴合。本發(fā)明優(yōu)選的二胺二肟螯合劑是對(duì)稱的，即選擇在-CY(R3)-部分上的二個(gè)-CR、R、NHCR、C(=N-0H)W取代基是相同的。這有優(yōu)點(diǎn)，螯合劑不包含手性中心，因?yàn)檫@些中心可以產(chǎn)生非對(duì)映體的放射性金屬絡(luò)合物，并可能要求純化特定的異構(gòu)體?？梢匀芜x以酸式鹽形式使用化學(xué)式II的螯合劑綴合物，即在用生物相容性酸使二胺二肟供體組或Y基團(tuán)的一個(gè)或多個(gè)胺發(fā)生質(zhì)子化的場(chǎng)合。例如采用在流動(dòng)相中使用這些酸(例如乙酸或三氟乙酸)的HPLC純化方法，或?qū)⑸锵嗳菪运峒拥津蟿┚Y合物溶液中，都可以直接獲得這些鹽類。鹽的形式有助于純化(例如通過沉淀或重結(jié)晶)或有利于溶解在水介質(zhì)中(此后如果需要，可以很容易地調(diào)節(jié)pH)。本發(fā)明的螯合劑綴合物可以如下制備通過使化學(xué)式in的雙官能螯合物與生物靶向部分反應(yīng)式中a和b獨(dú)立是0、1、和2?；瘜W(xué)式III式中-r1、R2和R3各自獨(dú)立是r基團(tuán)；E是-(A)n-J式中J是適合與Z綴合的官能團(tuán)；-(A)n-是連接基團(tuán)，其中每個(gè)A獨(dú)立是-CRr、-CR=CR-、-C三C-、-NRCO-、-CONR-、-S02NR-、-NRS02-、-CR2OCR2-、-CR2SCRr、-CR2NRCR2-、Q.s亞環(huán)雜烷基、(^4.8亞環(huán)烷基、C5.12亞芳基、Cm亞雜芳基或聚烷撐二醇、聚乳酸或聚乙醇酸部分；n是0—10的整數(shù)值；每個(gè)R基獨(dú)立是H或Cw。烷基、C3-H)烷芳基、C2-H)烷氧烷基、羥烷基、C卜K)氟代烷基，或者2個(gè)或更多個(gè)r基團(tuán)與連接它們的原子一起形成飽和或不飽和的碳環(huán)、雜環(huán)。所謂術(shù)語"適合綴合的官能團(tuán)"，系指與相應(yīng)的Z官能團(tuán)(一般是胺、羧基或巰基)反應(yīng)，使二胺二將螯合劑與Z發(fā)生化學(xué)結(jié)合的官能團(tuán)。優(yōu)選的這些適合綴合的官能團(tuán)是-NR5R6、-C02M、-NCS、-NCO、-SM1、-OM1、馬來酰亞胺或丙烯酰胺，其中RS和I^獨(dú)立是R基或pG;M是H、陽離子、pG或活性酯；M'是H或pG;和P。是保護(hù)基。陽離子適合是帶正電荷的反離子，例如金屬離子、銨(NH4+)或季銨或憐離子。陽離子優(yōu)選是生物相容性陽離子。術(shù)語'生物相容性陽離子，、'活性酯，、和'保護(hù)基，與下面定義的相同。當(dāng)官能團(tuán)是-NRSRS時(shí)，RS和Re至少其中之一是H，優(yōu)選r5和r6二者都是H。所謂術(shù)語"保護(hù)基"，系指能抑制或降低不希望的化學(xué)反應(yīng)的基團(tuán)，但設(shè)計(jì)該基團(tuán)具有足夠的活性，在不會(huì)改變其余分子的足夠緩和的條件下，該基團(tuán)可以與上述的官能團(tuán)分離開。在去掉保護(hù)以后，可以采用上述的基團(tuán)使化學(xué)式III的雙官能螯合物與生物相容性耙部分綴合。對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言，保護(hù)基是眾所周知的，當(dāng)J是-NI^RS時(shí)，保護(hù)基適合選自Boc(這里Boc是叔丁氧羰基)、Fmoc(這里Fmoc是藥基甲氧羰基)、三氟乙?；?、烯丙氧羰基、Dde[即1-(4,4-二曱基-2，6-二氧雜亞環(huán)己基)乙基]或Npys(即3-硝基-2-吡啶亞磺?；?；和當(dāng)J是-C02pG時(shí)，保護(hù)基適合選自曱酯、叔丁酯和爺酯，當(dāng)J是-OPG時(shí)，適宜的保護(hù)基是乙?；?、苯曱酰基、三苯甲基(Trt)或四丁基二曱基曱硅烷基。當(dāng)J是-SpG時(shí)，適宜的保護(hù)基是三苯曱基、和4-曱氧千基。在TheorodoraW.Greene、和PeterG.M.Wuts所著的'在有機(jī)合成中的保護(hù)基，(JohnWiley&Sons,1991)中，敘述了對(duì)另一些保護(hù)基的使用。所謂術(shù)語"生物相容性陽離子"，系指帶正電荷的反離子，它們與電離的帶負(fù)電荷的基團(tuán)生成鹽，在所述的帶正電荷的反離子也是無毒的場(chǎng)合，它們適合用于哺乳動(dòng)物體，特別是人體的給藥。適宜的生物相容性陽離子的實(shí)例包括堿金屬(例如鈉或鉀)；堿土金屬(例如鈣或4JU;和4妄離子。優(yōu)選的生物相容性陽離子是鈉離子(Na+)。所謂術(shù)語"活性酯"，系指羧酸的酯衍生物，設(shè)計(jì)它們是較好的離去基團(tuán)，因此它們更容易與在生物靶向部分上存在的親核試劑例如胺反應(yīng)。適宜的活性酯的實(shí)例是N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)、五氟苯酚、五氟苯硫酚、對(duì)硝基苯酚和羥基苯并三唑。因此可以使化學(xué)式III胺官能化的螯合劑(即J二NR5116)，通過酰胺4建與生物靶向部分的羧基綴合。這種偶合可以直接進(jìn)行(例如采用固相肽合成)或在適宜的活化劑例如BOP[即苯并三唑-l-基氧基-三(二甲氨基)-轔]或N，N'-二環(huán)己基碳二亞胺(DCCI)存在下進(jìn)行。這種偶合也可以利用本領(lǐng)域已知的適宜的中間體進(jìn)行，例如利用生物靶向部分羧基的活化酯進(jìn)行。另一種方法，可以首先將雙官能螯合劑的側(cè)胺基轉(zhuǎn)化成異硫氰酸酯基團(tuán)(-NCS)或異氰酸酯基團(tuán)(-NCO)，這些基團(tuán)通過分別生成硫脲和脲鍵與含胺的生物靶向部分綴合。另一種方法，可以使雙官能螯合劑的側(cè)胺基與二酸反應(yīng)，通過連接基團(tuán)引入末端羧基。在類似的方法中，可以使用帶有羧基官能團(tuán)(即J=-C02M)的雙官能螯合劑，通過酰胺鍵直接與含胺的生物靶向部分偶合。雙官能螯合物也可以帶有設(shè)計(jì)與生物靶向部分上的巰基反應(yīng)生成穩(wěn)定的硫醚鍵的基團(tuán)。這些基團(tuán)的實(shí)例是馬來酰亞胺(可以通過馬來酸酐與相應(yīng)的胺反應(yīng)，然后加熱與乙酸酐反應(yīng)制備)、和丙烯酰胺(可以通過烯丙酰氯與胺反應(yīng)制備)。在第二個(gè)方面，本發(fā)明提供上述螯合劑綴合物的放射性金屬絡(luò)合物。適宜的放射性金屬可以是正電子發(fā)射體，例如"Cu、48V、52Fe、55Co、94mTc、或MGa;或y-發(fā)射體例如99mTc、川In、113mIn、或67Ga。對(duì)于診斷造影，最優(yōu)選的放射性金屬是Y-發(fā)射體，特別是99mTc。某些放射性核素的金屬絡(luò)合物，作為放射性治療癌癥等各種疾病或治療血栓形成或再狹窄的;^文射性藥物是有效的。適合這些放射性治療應(yīng)用的有效放射性同位素包括9GY、89Sr、67Cu、1G3Pd、186Re、188Re、169Er、153Sm、和198Au。更優(yōu)選使生物輩巴向部分Z以這樣的方式與螯合劑結(jié)合，使這種鍵不容易在血液中代謝，代謝會(huì)造成金屬絡(luò)合物在標(biāo)記的生物靶向部分在生物體內(nèi)達(dá)到所需的耙部位之前被切下。因此生物靶向部分優(yōu)選通過不容易代謝的鍵(例如該鍵是酯鍵)與本發(fā)明的金屬絡(luò)合物共價(jià)結(jié)合。本發(fā)明優(yōu)選的放射性金屬絡(luò)合物是對(duì)稱的，即選擇在-CY(R3)-部分上的二個(gè)-CR、R、NHCR、C(-N-OH)W取代基是相同。其優(yōu)點(diǎn)是放射性金屬絡(luò)合物不包含手性中心，因?yàn)檫@些中心可以產(chǎn)生非對(duì)映異構(gòu)體的放射性金屬絡(luò)合物和可能要求純化特定的異構(gòu)體。還優(yōu)選螯合劑綴合物的放射性金屬絡(luò)合物是電中性的。相信本發(fā)明螯合劑的"m丁c絡(luò)合物是中性的，Tc(V)二氧代絡(luò)合物如上所示。在本發(fā)明的"，c-二胺二肟絡(luò)合物中，W優(yōu)選是H。還優(yōu)選至少一個(gè)rs基是h。更優(yōu)選所有的rS基都是H，每個(gè)r'優(yōu)選是q-3烷基、c2—4烷氧烷基、C,—3羥烷基、或Q-3氟代烷基，最優(yōu)選C,-3烷基或C卜3氟代烷基。最特別優(yōu)選所有的Rt基都是CH3。對(duì)于99raTc絡(luò)合物，優(yōu)選的Y基與上面對(duì)螯合劑綴合物所述的相同。本發(fā)明優(yōu)選的放射性金屬絡(luò)合物，其中2個(gè)或更多個(gè)R基與連接它們的原子一起形成飽和或不飽和的碳環(huán)、雜環(huán)，包括這些具有3—6個(gè)原子，特別是5或6個(gè)原子的環(huán)。最優(yōu)選的這些環(huán)是飽和碳環(huán)。優(yōu)選的碳環(huán)是2個(gè)連接到相同或相鄰碳原子上的W基結(jié)合起來，生成3—6元、特別是5元或6元飽和環(huán)的那些^友環(huán)?？梢允谷芤褐械倪m宜氧化態(tài)的放射性金屬在適宜的pH下與螯合物綴合物反應(yīng)，制備本發(fā)明的放射性金屬絡(luò)合物。該溶液可以優(yōu)選包含對(duì)金屬絡(luò)合弱的配位體(例如葡萄糖酸根或檸檬酸根)，即放射性金屬絡(luò)合物是通過配位體交換或螯合轉(zhuǎn)移(transchelation)制備的。這些條件對(duì)降低金屬離子水解等不希望的副反應(yīng)是有效的。當(dāng)放射性金屬離子是9^Tc時(shí)，常用的起始材料是來自"Mo發(fā)生器的高锝酸鈉。锝在"m丁c高锝酸鹽中以Tc(VII)氧化態(tài)存在，是相對(duì)不活潑的。因此低級(jí)氧化態(tài)Tc(I)—Tc(V)的锝絡(luò)合物的制備，通常要求加入藥物學(xué)上可接受的適宜還原劑，例如連二亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、抗壞血酸、曱脒亞磺酸、亞錫離子、Fe(II)或Cu(I)，以有利于絡(luò)合。藥物學(xué)上可接受的還原劑優(yōu)選亞錫鹽，最優(yōu)選氯化亞錫、氟化亞錫或酒石酸亞錫。在第三個(gè)方面，本發(fā)明提供放射性藥物，其中包括適合人體給藥的無菌形式的上述螯合劑綴合物的放射性金屬絡(luò)合物。這些放射性藥物適合以密封容器提供，該密封容器適合用皮下注射針能在一處或多處(例如在隔膜密封物上起褶皺處)刺穿，同時(shí)又保持整體是無菌的。這些容器可以裝有一個(gè)或多個(gè)患者的劑量。優(yōu)選的多劑量容器包括一個(gè)裝有多個(gè)患者劑量的大容積的玻璃瓶(例如容積10—30cm3),因此可以在制備適合臨床情況的切實(shí)可行的有效期內(nèi)，按不同的時(shí)間間隔將單個(gè)患者的劑量從其中抽到臨床級(jí)的注射器中。將預(yù)充填注射器設(shè)計(jì)容納一個(gè)人的劑量，因此優(yōu)選使用一次性注射器，或適合臨床使用的其它注射器。預(yù)充填注射器可以任選具有注射器防護(hù)罩，以保護(hù)操作人員免受放射性劑量的輻射。這些適宜的放射性藥物注射器防護(hù)罩在本領(lǐng)域是已知的，其中優(yōu)選包括鉛或鴒。適合診斷造影的放射性藥物的99mTc放射性含量，是180—1500MBq,視在生物體內(nèi)造影的位置、吸收和靶對(duì)本底的比例而定。就使用""Tc放射性藥物進(jìn)行心臟造影而言，對(duì)應(yīng)激反應(yīng)的研究可以4吏用約1110MBq(30mCi)，對(duì)于其余的研究可以使用約350MBq(10mCi)。在第四個(gè)方面，本發(fā)明提供制備99mTc放射性藥物組合物的無放射性試劑盒。設(shè)計(jì)這些試劑盒用來獲得適合人體給藥的無菌放射性藥品，例如直接注射到血流中的藥品。對(duì)于"，c，試劑盒優(yōu)選是凍干的，設(shè)計(jì)用來自99mTc放射性同位素發(fā)生器的無菌"，c-高锝酸鹽(Tc(V)進(jìn)行重建，獲得適合人體給藥的溶液，而不需進(jìn)一步處理。適宜的試劑盒包括容器(例如用隔膜密封的玻璃瓶)，其中裝有游離堿式鹽或酸式鹽形式的化學(xué)式II的螯合劑綴合物，以及藥物可接受的還原劑，例如連二亞辟u酸鈉、亞石克酸氫鈉、抗壞血酸、甲脒亞磺酸、亞錫離子、Fe(II)或Cu(I)。藥物學(xué)上可接受的還原劑優(yōu)選亞錫鹽，例如氯化亞錫或酒石酸亞錫。采用另一種方案，試劑盒可以任選包含金屬絡(luò)合物，當(dāng)加入放射性金屬時(shí)，金屬絡(luò)合物會(huì)發(fā)生金屬轉(zhuǎn)移作用(transmetallation)(即金屬交換)，獲得所需的產(chǎn)物。非放射性試劑盒還可以任選包括附加成分，例如轉(zhuǎn)螯合劑(transchelator)、輻射防護(hù)劑、抗;微生物防腐劑、pH調(diào)節(jié)劑或填充劑。"轉(zhuǎn)螯合劑"是能與锝迅速反應(yīng)生成弱絡(luò)合物，然后被二胺二肟置換的化合物。由于高锝酸鹽的迅速還原與锝的絡(luò)合作用進(jìn)行竟?fàn)帲詫⑸梢堰€原的水解锝(RHT)的危險(xiǎn)性降低到最小。這類適宜的轉(zhuǎn)螯合劑，是弱有機(jī)酸即pKa為3—7的有機(jī)酸與生物相容性陽離子的鹽。這類適宜的弱有機(jī)酸是乙酸、檸檬酸、酒石酸、葡萄糖酸、葡庚糖酸、苯曱酸、苯酚或膦酸。因此，適宜的鹽是乙酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、葡萄糖酸鹽、葡庚糖酸鹽、苯曱酸鹽、酚酸鹽或膦酸鹽。優(yōu)選的這類鹽是酒石酸鹽、葡萄糖酸鹽、葡庚糖酸鹽、苯曱酸鹽、或膦酸鹽，最優(yōu)選膦酸鹽，尤其最優(yōu)選二膦酸鹽。優(yōu)選的這類轉(zhuǎn)螯合劑，是MDP即亞甲基二膦酸與生物相容性陽離子的鹽。所謂術(shù)語"輻射防護(hù)劑"，系指能通過捕獲高活性的自由基，例如水輻射分解產(chǎn)生的含氧自由基，抑制氧化還原過程等降解反應(yīng)的化合物。本發(fā)明的輻射防護(hù)劑適合選自抗壞血酸、對(duì)氨基苯曱酸(即4-氨基苯曱酸)、龍膽酸(即2,5-二羥基苯曱酸)、和它們與上述生物相容性陽離子的鹽。所謂術(shù)語"抗微生物防腐劑"，系指抑制可能有害的微生物例如細(xì)菌、酵母菌、或霉菌生長(zhǎng)的試劑?？刮⑸锓栏瘎┮部梢跃哂幸恍⒕男阅?，這取決于劑量。本發(fā)明的抗微生物防腐劑的主要作用，是抑制任何這類微生物在放射性藥物組合物重組后中的生長(zhǎng)，即在放射性診斷制品本身內(nèi)的生長(zhǎng)。然而，還可以在重組前任選使用抗微生物防腐劑抑制可能有害的微生物在本發(fā)明的非放射性試劑盒的一種或多種成分中的生長(zhǎng)。適宜的抗微生物防腐劑包括對(duì)鞋基苯曱酸酯類，即對(duì)羥基苯曱酸曱酯、乙酯、丙酯、或丁酯，或它們的混合物；苯甲醇；苯酚；甲酚；溴棕三甲銨和硫柳汞。優(yōu)選的抗微生物防腐劑是對(duì)羥基苯曱酸酯類。術(shù)語"pH調(diào)節(jié)劑，，，系指用來確保重組試劑盒的pH在人或哺乳動(dòng)物給藥可接受范圍(pH約4.0—10.5)內(nèi)的化合物或化合物混合物。適宜的這類pH調(diào)節(jié)劑包括藥物學(xué)上可接受的緩沖劑，例如麥黃酮、磷酸鹽、或TRIS[即三(羥曱基)氨基曱烷]，和藥物學(xué)上可接受的石威，例如碳酸鈉、碳酸氫鈉或它們的混合物。當(dāng)以酸式鹽形式使用化學(xué)式II的綴合物時(shí)，可任選在一個(gè)單獨(dú)的玻璃瓶或容器中提供pH調(diào)節(jié)劑，所以試劑盒的使用者可以調(diào)節(jié)pH,將其作為多個(gè)操作步驟的一部分。所謂術(shù)語"填充劑"，系指在藥物學(xué)上可接受的增量劑(bulkingagent)，它使材料在生產(chǎn)和凍干過程中容易處理。適宜的填充劑包括無機(jī)鹽類，例如氯化鈉、和水溶性的糖類，例如蔗糖、麥芽糖、或海藻糖。在第五個(gè)方面，本發(fā)明提供適合制備螯合劑-生物耙向部分綴合物的雙官能二胺二肟螯合劑，其化學(xué)式ffl是化學(xué)式III式中R1、R2、和R3各自獨(dú)立是R基；E是-(A)n-J式中J是適合與Z綴合的官能團(tuán)；-(A)n-是連接基團(tuán)，其中每個(gè)A獨(dú)立是-CRr、-CR=CR-、-OC-、-皿CO-、-CONR-、-S02NR-、-NRS02-、-CR2OCR2-、-cr2scr2-、-cr2nrcr2-、c4-8亞環(huán)雜烷基、c4—8亞環(huán)烷基、<:5一12亞芳基、<33-12亞雜芳基或聚烷撐二醇、聚乳酸或聚乙醇酸部分；n是0—10的整數(shù)值；每個(gè)R基獨(dú)立是H或C卜K)烷基、C3叫o烷芳基、<32-1()烷氧烷基、C卜10羥烷基、C卜u)氟代烷基，或者2個(gè)或更多個(gè)R基與連接它們的原子一起形成飽和或不飽和的碳環(huán)、雜環(huán)。所謂術(shù)語"適合綴合的官能團(tuán)"，系指能與Z的相應(yīng)官能團(tuán)(一般是胺、羧基或巰基)反應(yīng)，使二胺二肝螯合劑與Z發(fā)生化學(xué)結(jié)合的官能團(tuán)。優(yōu)選的這類適合綴合的官能團(tuán)是-nr5r6、-C02m、-ncs、-nco、-sm1、-om1、馬來酰亞胺或丙烯酰胺，其中RS和I^獨(dú)立是R基或pG;M是H、陽離子、PG或活性酯；^^是H或pG;pG是保護(hù)基。陽離子適合是帶正電荷的反離子，例如金屬離子、銨離子(NH/)或季銨離子或轔離子。陽離子優(yōu)選是生物相容性陽離子。術(shù)語"生物相容性陽離子"、"活性酯"和"保護(hù)基"與上面定義的相同。當(dāng)官能團(tuán)是-NRSRS時(shí)，至少115和116之一是11，優(yōu)選115和r6二者都是H。在本發(fā)明化學(xué)式in的雙官能螯合劑中，W優(yōu)選是H。還優(yōu)選至少一個(gè)W基是H，更優(yōu)選所有的R"基都是H。每個(gè)Rt優(yōu)選是C卜3烷基、C2—4烷氧烷基、C卜3羥烷基、或C卜3氟代烷基，最優(yōu)選是C卜3烷基或C卜3氟代烷基。尤其最優(yōu)選所有的R'基都是CH3。優(yōu)選的雙官能螯合劑，其中2個(gè)或更多個(gè)R基與連接它們的原子一起，生成飽和或不飽和的碳環(huán)、雜環(huán)，包括這些具有3—6個(gè)原子、特別是5個(gè)或6個(gè)原子的環(huán)。最優(yōu)選的這些環(huán)是飽和碳環(huán)。優(yōu)選的碳環(huán)是2個(gè)連接到相同或相鄰碳原子上的W基團(tuán)結(jié)合在一起形成3—6元、特別是5元或元飽和環(huán)的那些-友環(huán)?？梢匀芜x以酸式鹽形式使用化學(xué)式III的螯合劑綴合物，即在用生物相容性酸使二胺二肟供體組或Y基團(tuán)的一個(gè)或多個(gè)胺發(fā)生質(zhì)子化的情況下。例如采用在流動(dòng)相中使用這些酸(例如乙酸或三氟乙酸)的HPLC純化方法，或者將生物相容性酸加到螯合劑綴合物溶液中，都可以直接獲得這些鹽類。鹽的形式有助于純化(例如通過沉淀或重結(jié)晶)，或者有助于溶解在水介質(zhì)中(此后必要時(shí)，可以很容易地調(diào)節(jié)pH)。雙官能螯合劑優(yōu)選的連接基團(tuán)-(A)n,具有連接構(gòu)成-(A)部分的連接原子的主鏈，其中包含2—10個(gè)原子，最優(yōu)選2—5個(gè)原子，特別優(yōu)選2個(gè)或3個(gè)原子。2個(gè)原子的最小連接基團(tuán)主鏈具有一些優(yōu)點(diǎn)，在綴合以后，螯合劑與生物靶向部分完全分離，所以能將任何相互作用減到最小。另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是，X和Z基團(tuán)的潛在螯合物環(huán)尺寸可能很大(對(duì)2個(gè)原子的主鏈至少8),以致這些基團(tuán)不可能與螯合劑有效地竟?fàn)帉?duì);改射性金屬的配位。非肽連接基團(tuán)例如亞烷基或亞芳基具有一些優(yōu)點(diǎn)，與綴合的生物靶向部分沒有明顯的氫鍵相互作用，所以連接基團(tuán)不會(huì)環(huán)繞在生物靶向部分上。優(yōu)選的亞烷基隔離基是-(CH2)n-，其中n是2-5。優(yōu)選的亞芳基隔離基的化學(xué)式如下因此優(yōu)選的E基團(tuán)是-CH2CH2-J，最優(yōu)選-CH2CH2-NHR5或-CH2CH2-C02H，或其活性酯，特別優(yōu)選E;CH2CH2-NH2。也可以通過例如與氯曱酸異丁酯和堿反應(yīng)，將酸轉(zhuǎn)化成混合的酸酐?；旌系乃狒才c胺等親核試劑反應(yīng)?；鶊F(tuán)E;CH2CH2-NH2具有另一些優(yōu)點(diǎn)，其主干來源于中間體R3C(CH2CH2NH2)3，優(yōu)選中間體HC(CH2CH2NH2)3，并且是對(duì)稱的，由于具有不同鏈長(zhǎng)的三胺要求采用在化學(xué)上能區(qū)別不同胺的合成方案(例如通過保護(hù)基)，所以它的合成容易得多。本發(fā)明化學(xué)式III優(yōu)選的雙官能二胺二肟螯合劑是對(duì)稱的，即選擇-CY(R3)-部分上的二個(gè)-C(R2)2(R2)2NHCR、C(=N-OH)R1取代基是相式中a和b獨(dú)立是O、1、和2。同的。這有一些優(yōu)點(diǎn)，螯合劑不包含手性中心，因?yàn)檫@些中心可以生成非對(duì)映體的放射性金屬絡(luò)合物，并可能要求純化特定的異構(gòu)體。特別優(yōu)選的雙官能二胺二肟螯合劑的化學(xué)式如下這種化合物的酸式鹽也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本發(fā)明的雙官能二胺二肟螯合劑適合如下制備使用下列化合物(i)適宜的氯亞硝基(chloronitroso)衍生物C1誦C(R1)2-CH(NO)(ii)化學(xué)式C1-C(R1)2-C=NOH)R'的a-氯肝(chloro-oxime);(iii)化學(xué)式Br-C(R1)2-C(=0)R^的cc-溴酮;使化學(xué)式IV的化合物烷基化<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>化學(xué)式rv式中A、J、R2、RS和n與上面對(duì)化學(xué)式m定義的相同，然后用羥胺將所得二胺二酮產(chǎn)物轉(zhuǎn)化成二胺二肟。S.Jurisson等人敘述了合成路線(i)[無機(jī)化學(xué)(Inorg.Chem.)，26,3576-82(1987)]。采用實(shí)施例3中所述的亞硝酰氯(NOC1)處理適宜的烯烴可以獲得氯亞灘基化合物。Ramalingam,K.等人在合成通訊(Synth.Commun.,),25(5)，743—52(1995)中;Glaser等人在有機(jī)化學(xué)雜志(J.Org.Chem.),61(3),1047—48(1996)中；Clapp，LeallynB.等人在有機(jī)化學(xué)雜志，36(8),1169—70(1971)中；Saito，Giulichi等人在ShizenKagaku，47,41—9(1995)中；和Schulz,MantredZ.在化學(xué)(Chem.),21(11)，404—5(1981)中，給出合成氯亞硝基化合物更詳細(xì)的資料。Nowotnik等人采用廣泛的術(shù)語敘述了合成路線(iii)[四面體(Tetrahedron),50(29)，p.8617—8632(1994)]。a-氯-肟可以通過相應(yīng)的a-氯-酮或ot-氯-醛的肟化獲得，a-氯-酮或a-氯-醛可以在市場(chǎng)上買到。a-溴酮也可以在市場(chǎng)上買到。當(dāng)J是-nh2時(shí)，化學(xué)式IV的三胺首先可以任選是單保護(hù)的(mono-protected)，使J基團(tuán)的伯胺被保護(hù)。然后根據(jù)上述的路線(i)、(ii)、或(iii)制備二胺二將，最后除掉保護(hù)基。適宜的保護(hù)基在本領(lǐng)域是已知的，其中包括上述的BOC(即叔丁氧羰基)或Fmoc。化學(xué)式IV的化合物適合由HC(CH2CH2OAc)3制備，該方法是將一種或多種乙酸酯水解成伯醇，并用曱烷磺酰氯和吡啶將其轉(zhuǎn)化成離去基團(tuán)例如甲烷磺酸酯。然后可以用可以轉(zhuǎn)化成所需官能團(tuán)的適宜親核試劑置換這個(gè)離去基團(tuán)。采用氰化物陰離子產(chǎn).生羧酸(即J=-C02H)。氰化物的酸解會(huì)產(chǎn)生所需的羧酸。為了產(chǎn)生胺，采用疊氮化物親核試劑產(chǎn)生烷基疊氮化物。烷基疊氮化物氫化生成胺。為了產(chǎn)生硫醇(即J=-SH),用硫代乙酸陰離子置換該離去基團(tuán)，獲得硫代乙酸酯，在酸解時(shí)硫代乙酸酯就生成硫醇。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供化學(xué)式V的化合物HC(CH2CH2NR7R8)3化學(xué)式V式中！^和rs獨(dú)立是h或pG,或R7和rs—起生成pG;或其鹽。pG是上面定義的保護(hù)基。對(duì)于本發(fā)明的雙官能螯合劑范圍，化學(xué)式V的化合物是有效的前體。優(yōu)選的化學(xué)式V的化合物是HC(CH2CH2NH2)2(CH2CH2nr7r8)，即上述單保護(hù)的三胺。最優(yōu)選所有的W和rS基都是H,即本發(fā)明最優(yōu)選的化合物是化合物HC(CH2CH2NH2)3或其酸式鹽。圖1示出化合物1—6的化學(xué)結(jié)構(gòu)。圖2顯示化合物V的全部化學(xué)結(jié)構(gòu)。圖3示出采用疊氮化物合成實(shí)施例1的1,1,1-三(2-氨基乙基)胺的反應(yīng)流程示意圖。圖4示出采用另一種方法合成實(shí)施例2的1，1,1-三(2-氨基乙基)胺的反應(yīng)流程示意圖。下面采用詳細(xì)的非限制性實(shí)施例說明本發(fā)明。實(shí)施例1敘述了新化合物1,1,1-三(2-氨基乙基)甲烷的合成。實(shí)施例2提供l,l，l-三(2-氨基乙基)曱烷的另一種合成方法，該方法避免使用可能有危險(xiǎn)的疊氮化物中間體。實(shí)施例3敘述了各種氯亞硝基烷烴前體的合成。實(shí)施例4敘述了本發(fā)明優(yōu)選的胺取代雙官能二胺二坊(化合物1)的合成。實(shí)施例5敘述了化合物1的苯曱酰胺綴合物(化合物2)的合成。實(shí)施例6示出如何能引入有效地將雙官能螯合劑的末端胺官能轉(zhuǎn)化成末端羧基官能的間隔基。實(shí)施例7敘述了血栓革巴向肽的固相合成。實(shí)施例8提供用靶向肽合成化合物5即化合物1綴合物的方法。實(shí)施例9敘述了化合物7和化合物8即包含環(huán)結(jié)構(gòu)的二胺二肟類似物的合成。實(shí)施例IO將化合物2的"，c-放射性標(biāo)記與氮雜類似物一一現(xiàn)有技術(shù)的螯合物(化合物3)的"，c放射標(biāo)記進(jìn)行比較，表明在中等條件即室溫和堿性較低的pH下標(biāo)記，本發(fā)明的螯合劑比現(xiàn)有技術(shù)的螯合物更有效和更迅速得多。因此，在室溫下現(xiàn)有技術(shù)的螯合劑需要pH10和至少120min的時(shí)間才能達(dá)到超過80%的RCP，而標(biāo)記化合物3在15min內(nèi)就能達(dá)到超過95%RCP。實(shí)施例11表明化合物5用99mTc標(biāo)記能獲得高放射化學(xué)純度的制劑。實(shí)施例12示出,Tc標(biāo)記的化合物5與現(xiàn)有技術(shù)的化合物一一99mTc-化合物6在體外對(duì)血凝塊吸收的比較，表明當(dāng)與本發(fā)明的二胺二肟螯合劑綴合時(shí)，仍然保留了肽的生物靼向特性。實(shí)施例13示出了化合物9在適度條件下的"m丁c放射性標(biāo)記，化合物9是具有環(huán)肽的化合物1的綴合物，并且具有多個(gè)比較敏感的二硫鍵。實(shí)施例l:1,1,1-三(2-氨基乙基)曱烷的合成。步驟l(a):3(甲氧羰基亞甲基)戊二酸二曱酯。采用3-氧代戊二酸二甲酯(87g，0.5mol)處理曱酯基亞曱基三苯基正膦(167g，0.5mol),用120。C的油浴將反應(yīng)加熱到IOO'C,在氮?dú)夥罩斜３?6h。然后將反應(yīng)在真空中濃縮，油狀殘余物用600ml40/60石油醚(petrolether)/二乙基醚1:1磨碎。沉淀出氧化三苯膦，傾析/過濾出上清液。真空蒸發(fā)殘余物是在高真空Bpt(沸點(diǎn))(在0.2torr下爐溫180—200°C)下用庫格爾若蒸餾器(Kugelrohr)蒸餾，獲得3-(甲氧羰基亞曱基)戊二酸二曱酉旨(89.08g,53%)。NMR'H(CDC13):S3.31(2H,s,CH2),3.7(9H，s,3xOCH3),3,87(2H，s，CH2),5.79(1H，s,=CH)ppm。NMR13C(CDC13),536.56,CH3，48.7,2xCH3，52.09和52.5(2xCH2);122.3和146.16C=CH;165.9,170.0和170.53xCOOppm。步驟l(b):3-(甲氧羰基亞甲基)戊二酸二甲酯的氫化。在氫氣體(3.5bar)氣氛中將3-(曱氧羰基亞曱基)戊二酸二曱基酯(89g,267mmol)的甲醇(200ml)溶液與(10%的炭載把50°/。水)(9g)振蕩(30h)。通過硅藻土過濾溶液，在真空中濃縮，獲得3-(曱氧羰基曱基)戊二酸二曱酯油產(chǎn)品(84.9g,94%)。NMR'H(CDC13)，52.48(6H，d,J=8Hz，3xCH2)，2.78(1H，hextet，J=8Hz，CH，)3.7(9H，s，3xCH3)。NMR13C(CDC13)，S28.6,CH;37.50，3xCH3;51.6,3xCH2;172.28,3xCOO。步驟l(c):將三曱酯還原和酯化成三乙酸酯在2L的3頸圓底燒瓶中，在氮?dú)夥罩?，用?曱氧羰基曱基)曱烷(40g，212mmo1)的四氬吹喃(200ml)溶液，小心處理氫化鋁鋰(20g,588mmol)的四氳呋喃(400ml)溶液lh。發(fā)生強(qiáng)烈的放熱反應(yīng)，使溶劑大量回流。用油浴將反應(yīng)物在90。C加熱回流3天。小心滴加乙酸(100ml)冷卻反應(yīng)，直到停止放出氫為止。在引起適當(dāng)回流的速率下，用乙酸酐溶液(500ml)小心地處理攪拌的反應(yīng)混合物。裝備燒瓶進(jìn)行蒸餾，攪拌，然后在90°C(油浴溫度)加熱到蒸餾出四氫呋喃。再加入一份乙酸酐(300ml)，反應(yīng)返回到回流狀態(tài)，攪拌，用油浴加熱到140°C,保持5h。使反應(yīng)冷卻并過濾。用乙酸乙酯洗滌氧化鋁沉淀物，合并的濾液用旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)器在真空(5mmHg)中濃縮，水浴溫度50。C，得到油。將油吸收到乙酸乙酯(500ml)中，用飽和石灰酸鉀水溶液洗滌。分離乙酸乙酯溶液，在石克酸鈉上干燥，在真空中濃縮，得到油。用庫格爾若蒸餾器在高真空下蒸餾該油，獲得三(2-乙酰氧基乙基)曱烷(45.3g，95.9%)油。在0.1mmHg下沸點(diǎn)(Bp.)220。C。NMR(CDC13)，51.66(7H，m,3xCH2,CH),2.08(1H,s，3xCH3);4.1(6H,t,3xCH20)。NMR13C(CDC13),520.9，CH3;29.34,CH;32.17,CH2;62.15,CH20;171，CO。步驟l(d):從三乙酸酯中除去乙酸酯基團(tuán)用油浴將三(2-乙酰氧基乙基)曱烷(45.3g，165mM)的曱醇(200ml)和880氨(100ml)溶液加熱到80°C，保持2天。用另一部分880氨(50ml)處理反應(yīng)，用油浴加熱到8(TC，保持24h。加入另一部分880氨(50ml)，將反應(yīng)加熱到80。C，保持24h。然后將反應(yīng)在真空中濃縮，除去所有的溶劑，得到油。將該油吸收到880氨(150ml)中，加熱到80。C，保持24h。然后將反應(yīng)在真空中濃縮，除去所有的溶劑，得到油。用庫格爾若蒸餾器蒸餾，獲得乙酰胺，在0.2mm下，沸點(diǎn)170—180。C。將包含氣泡的乙酰胺洗滌干凈，繼續(xù)蒸餾。三(2-輕乙基)曱烷(22.53g,92%)在0.2mm沸點(diǎn)220。C下蒸餾。NMR!H(CDC13)，51.45(6H，q，3xCH2),2.2(1H，quintel,CH);3.7(6H,t,3xCH2OH);5.5(3H,brs，3xOH)。NMR13C(CDC13),522.13,CH;33.95,3xCH2;57.8,3xCH2OH。步驟l(e):將三元醇轉(zhuǎn)化成三(甲烷磺酸酯)。在氮?dú)夥罩性跀嚢柘?，在水冷卻的三(2-羥乙基)曱烷(10g,0.0676mol)二氯甲烷(50ml)溶液中，以溫度不升高到15。C以上的速率，緩慢地滴加曱烷磺酰氯(40g,0.349mol)二氯甲烷(50ml)溶液。然后以溫度不升高到15。C以上的速率，滴加溶解在二氯曱烷(50ml)中的吡啶(21.4g,0.27mol,4eq),發(fā)生放熱反應(yīng)。反應(yīng)保持在室溫下攪拌24h,然后用5N鹽酸溶液(80ml)處理，分層。水溶液層用另一份二氯曱烷(50ml)萃取，合并有機(jī)萃取物，在硫酸鈉上干燥，過濾，在真空中濃縮，獲得含有過量曱烷磺酰氯雜質(zhì)的三[2-(曱基磺酰氧基(methylsulphonyloxy))乙基]曱烷，理論產(chǎn)量是25.8g。NMR'H(CDC13)，54,3(6H，t,2xCH2),3.0(9H,s，3xCH3)2(1H，hextet，CH)，1.85(6H，q，3xCH2)。步驟l(f):1,1,1-三(2-疊氮基乙基)曱烷的制備。在氮?dú)庵袛嚢枞齕2-(甲基磺酰氧基)乙基]甲烷[來自步驟1(e)，含有過量的曱基磺酖氯雜質(zhì)](25.8g,67mmol,理論量)的無水DMF(250ml)溶液，用疊氮化鈉(30.7g,0.47mol)分批處理15min。觀測(cè)到》文熱，用冰浴冷卻反應(yīng)。在30min后,用油浴將反應(yīng)混合物力口熱到50。C,寸呆持24h。反應(yīng)混合物變成棕色。使反應(yīng)冷卻，用碳酸鉀稀溶液(200ml)處理，用40/60石油醚/二乙基醚10:1(3x150ml)萃取三次。用水(2x150ml)洗滌有機(jī)萃取物，在硫酸鈉上干燥，過濾。在石油/乙醚溶液中加入乙醇(200ml)，使三疊氮化物保持在溶液中，在真空中將體積縮小到不低于200ml,加入乙醇(200ml)，在真空中重新濃縮，除去最后的痕量石油，留下不低于200ml乙醇溶液。這種三疊氮化物乙醇溶液直接在步驟1(g)中使用。注意:不要除去所有的溶劑，因?yàn)榀B氮化物有可能爆炸，在任何時(shí)候疊氮化物都應(yīng)保存在稀溶液中。在真空中蒸發(fā)不到0.2ml的溶液，除去乙醇，用NMR分析這個(gè)小試樣。畫R'H(CDC13)，S3.35(6H,t，3xCH2)，1.8(1H，septet,CH)，1.6(6H，q,3xCH2)。歩驟l(g):1,1,1-三(2-氨基乙基)甲烷的制備用10%的炭載鈀(2g，50%水)處理三(2-疊氮乙基)甲烷(15.06g，0.0676mol)(假定來自前面反應(yīng)100%產(chǎn)率)的乙醇(200ml)溶液，氫化12h。每2h排空反應(yīng)容器，以除去反應(yīng)中釋放的氮?dú)?，重新充入氫氣。取樣進(jìn)行NMR分析，以證明三疊氮化物完全轉(zhuǎn)化成三胺。警告未還原的疊氮化物能在蒸餾時(shí)發(fā)生爆炸。通過硅藻土墊(celitepad)過濾反應(yīng)物，以除去催化劑，在真空中濃縮，獲得三(2-氨基乙基)甲烷油。采用庫^"爾若蒸餾器蒸餾在0.4mm/Hg沸點(diǎn)180—20CTC下進(jìn)一步純化該油，獲得無色的油(8.1g,三元醇的總產(chǎn)率為82.7%)。雨R!H(CDCl3),2.72(6H,t，3xCH2N)，1.41(H,septet,CH),1.39(6H，q,3xCH2)。NMR13C(CDC13),539.8(CH2NH2),38.2(CH2),31.0(CH)。實(shí)施例2:1,1,1-三(2-氨基乙基)甲烷的另一種制備方法。步驟2U):用對(duì)甲氣基-芐胺使三甲酯酰胺化。將三(甲氧羰基曱基)曱烷[2g,8.4mmol;和上述的步驟1(b)同樣制備]溶解在對(duì)曱氧基-千胺(25g,178.6mmol)中。建立蒸餾設(shè)備，在氮?dú)饬髦屑訜岬?2(TC,保持24h。采用收集的甲醇量監(jiān)測(cè)反應(yīng)的進(jìn)展。將反應(yīng)混合物冷卻到環(huán)境溫度，加入30ml乙酸乙酯，然后攪拌30min,沉淀三酰胺產(chǎn)物。采用過濾分離三酰胺，濾餅用足夠量的乙酸乙酯洗滌幾次，除去過量的對(duì)曱氧基-千胺。在干燥后獲得4.6g，100%的白色粉末。在下一個(gè)步驟中直接使用這種高度不溶的產(chǎn)品，而不需進(jìn)一步純化或表征鑒定。步驟2(b):1,1,1-三2-(對(duì)曱氧基芐氨基)乙基l甲烷的制備在1000ml用水-水浴冷卻的3頸圓底燒瓶中，將步驟2(a)的三酰胺(10g，17.89mmo1)小心地加入到250ml1M硼烷溶液(3.5g,244.3mmo1)中。加入完成后，除掉冰-水浴，將反應(yīng)混合物緩慢加熱到60°C。反應(yīng)混合物在60°C下攪拌20h。抽取反應(yīng)混合物試樣(lml),與0.5ml5NNCI混合，靜置30min。向試樣中加入0.5ml50NaOH，然后加入2ml水，攪拌溶液，直到所有的白色沉淀物全都溶解為止。溶液用乙醚(5ml)萃取，蒸發(fā)。將殘余物溶解在乙腈中，濃度lmg/ml，采用MS進(jìn)行分析。如果在MS光譜中見到一酰胺和二酰胺(M+H/z-520和534),反應(yīng)是不完全的。為了使反應(yīng)進(jìn)行完全，再加入100ml1M硼烷THF溶液，反應(yīng)混合物在60。C下攪拌6h以上，按照前面的采樣方法，取新的試樣。當(dāng)需要時(shí)，再繼續(xù)加入1M硼烷THF溶液，直到完全轉(zhuǎn)化成三胺為止。將反應(yīng)混合物冷卻到環(huán)境溫度，緩慢加入5NHC1，[注意會(huì)產(chǎn)生大量的泡沫！]。加入HC1，直到觀測(cè)不到釋放氣體為止。混合物攪拌30min，然后蒸發(fā)。將塊狀物懸浮在NaOH水溶液(20—40%;1:2w/v)中，攪拌30min。然后用水(3倍體積)稀釋混合物。然后混合物用乙醚(2xl50ml)萃取[注意不要使用卣化溶劑]。然后用水(1x200ml)、鹽水(150ml)洗滌合并的有機(jī)相，在硫酸鎂上干燥。蒸發(fā)后得到油狀物7.6g,84%畫R'H(CDCl3)，5:1.45,(6H，m，3xCH2;1.54，(1H,septet,CH);2.60(6H,t，3xCH2N);3.68(6H,s,ArCH2);3.78(9H，s,3xCH30);6.94(6H，d,6xAr)，7.20(6H，d，6xAr)NMR13C(CDC13),5:32.17，CH;34.44,CH2;47.00,CH2;53.56，ArCH2;55.25,CH30;113.78,Ar;129.29,Ar;132.61，Ar;158.60,Ar;步驟2(c):l，l,l-三(2-氨基乙基)曱烷的制備。將1,1,1-三[2-(對(duì)甲氧基千氨基)乙基]甲烷(20.0g，0.036mol)溶解在甲醇(100ml)中，加入Pd(OH)2(5.0g)。將混合物氬化(在壓熱器中，3bar，100°C),攪拌5h。在10h和15h后分別加入另二份(2x5g)Pd(OH)2。將反應(yīng)混合物過濾，濾液用曱醇洗滌。采用前面實(shí)施例1所述的方法，蒸發(fā)合并的有機(jī)相，殘余物在真空中蒸餾(lxl(T2，110°C),獲得2.60g(50%)l，l,l-三(2-氨基乙基)曱烷。實(shí)施例3:3-氯-3-甲基-2-亞硝基丁烷的制備。用cardice和曱醇浴將2-曱基丁-2-烯(147ml,1.4mol)和亞硝酸異戊酯(156ml，U6mo1)的混合物冷卻到-30。C，用安裝在頂部的空氣攪拌器強(qiáng)烈攪拌，以保持溫度低于-2(TC的速率，滴加濃鹽酸(140ml，1.68mol)進(jìn)行處理。處理約需lh，因?yàn)闀?huì)釋放大量的熱，所以處理時(shí)必須小心地進(jìn)行，以防過熱。加入乙醇(100ml)，以降〗氐加入結(jié)束時(shí)生成的漿液的粘度，反應(yīng)物在-20—-10。C下再攪拌2h,使反應(yīng)完全。在真空下過濾收集沉淀物，用4x30ml冷(-20。C)乙醇和100ml水冷的水洗滌，在真空中干燥，獲得3-氯-3-曱基-2-亞硝基丁烷白色固體。將乙醇濾液和洗液合并，用水(200ml)稀釋，冷卻，在-10。C靜置lh,同時(shí)進(jìn)一步結(jié)晶出大量3-氯-3-曱基-2-亞硝基丁烷。過濾收集沉淀物，用最少的水洗滌，在真空中干燥，獲得3-氯-3-甲基-2-亞硝基丁烷(115g,0.85mol,73°/。)，采用NMR分析總產(chǎn)物的純度>98%。NMR]H(CDC13),作為異構(gòu)體混合物(異構(gòu)體1,90%)1.5d,(2H，CH3)，1.65d，(4H,2xCH3),5.85,q，和5.95，q，以及1H。(異構(gòu)體2,10%),1.76s,(6H，2xCH3),2.07(3H，CH3)。以類似的方法從亞乙基環(huán)戊烷制備l-氯-l-(l-亞硝基乙基)環(huán)戊烷(產(chǎn)率55%)[有機(jī)化學(xué)雜志，36(8),p.1169—70]。以類似的方法從亞乙基環(huán)己烷制備l-氯-l-(1-亞硝基乙基)環(huán)己烷(產(chǎn)率63°/。)[有機(jī)化學(xué)雜志，36(8),p.1169—70]。5H(CDC13;270MHz)，1.52(3H，dJHH7Hz,CH3),1.48-2.20(10H，m,CH2x5),5.96(1H，q，JHH7Hz，CH)。以類似的方法從l-曱基-環(huán)己烯制備1-氯-l-曱基-2-亞硝基-環(huán)己烷(產(chǎn)率57%)[Ind.J.Chem.SectB16B(10),917—20(1978)，Z.Chem.，21(11)404—5(1981),J.Pract.Chem.,320(3)，433—51(1978)]。SH(CDC13;270MHz)，1.41-2.28(11H,m,CH3，CH2x4),5.72-5.79(1H，m,CH)。實(shí)施例4:雙fN-(1,l-二甲基-2-N-羥基亞胺丙基)2-氨基乙基1-(2-氨基乙基)曱烷(化合物l)的合成。在氮?dú)夥罩?，在室溫和?qiáng)烈攪拌下，在三(2-氨基乙基)曱烷(4.047g,27.9mmol)的無水乙醇(30ml)溶液中,加入無水碳酸鉀(7.7g，55.8mmol,2eq)。將3-氯-3-曱基-2-亞硝基丁烷(7.56g,55.8mol，2eq)溶解在無水乙醇(100ml)中，將75ml這種溶液緩慢地滴加到反應(yīng)混合物中。然后在反應(yīng)中加入二氧化硅載帶的TLC[這些板按100/30/5^f吏用二氯曱烷、甲醇、濃氨(0.88sg)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；并噴淋茚三酮和加熱，使TLC板成象]。隨著流量(RF)按該順序增加，可以看見一、二、和三烷基化的產(chǎn)品。分析用的HPLC是采用RPR反相柱進(jìn)行的，乙腈在3%氨水中的變化率為7.5—75%。反應(yīng)在真空中濃縮，除去乙醇，重新懸浮在水(110mi)中。用乙醚(100ml)萃取水漿，除去一些三烷基化的化合物和親脂性的雜質(zhì)，在水層中留下一烷基化和所需的二烷基化產(chǎn)品。用乙酸銨(2eq，4.3g，55.8mmol)緩沖該水溶液，確保優(yōu)良的色譜。在用所準(zhǔn)備的自動(dòng)HPLC純化之前，該水溶液在4。C下存》t過夜。產(chǎn)品(2.2g,6.4醒ol，23%)。質(zhì)譜；正離子10V圓錐電壓。求得344;算得M+H=344。麗R'H(CDCl3)，S1.24(6H，s，2xCH3)，1.3(6H，s，2xCH3),1.25-1,75(7H，m,3xCH2,CH),(3H,s,2xCH2)，2.58(4H,m，CH2N)，2.88(2H,t,CH2N2),5.0(6H，s,NH2,2xNH,2xOH)。NMR!H((CD3)2SO),51.14xCH;1.29,3xCH2;2.1(4H,t,2xCH2);畫R13C((CD3)2SO)，S9.0(4xCH3)，25.8(2xCH3),31.02xCH2，34.6CH2，56.82xCH2N;160.3，C=N。HPLC條件在采用25mmPRP柱時(shí)，流量為8ml/minA-3。/。氨溶液(sp.gr=0.88)/水。時(shí)間％B07.51575.02075.0227.5307.5每個(gè)實(shí)驗(yàn)的載荷是3ml水溶液，在時(shí)間窗為12.5—13.5min進(jìn)行收集。實(shí)施例5:化合物2—化合物l的苯甲酰胺綴合物的制備用冰浴在氮?dú)夥罩袑⒒衔?(0.5g，1.45mmol)的無水乙腈(50ml)和三乙胺(150mg，1.45mmol)溶液冷卻到0°C。在攪拌下在反應(yīng)物中加入苯曱酸酐(330mg,1.45mmol),使反應(yīng)物上升到室溫，攪拌過夜。在真空中除去乙腈，將殘余物重新溶解在二氯甲烷(50ml)中，用碳酸鉀水溶液(2x50ml)洗滌，分離，在硫酸鈉上干燥。用二氯甲烷(2x50ml)萃取碳酸鉀水溶液，在硫酸鈉上干燥。在真空中將合并的二氯曱烷萃取物濃縮成膠狀物。HPLC分析表明，產(chǎn)物并不象要求的那么純，因此采用自動(dòng)制備型HPLC進(jìn)行純化，獲得化合物2。采用TLC和分析使用的HPLC，所分析的產(chǎn)物為一個(gè)色斑。HPLC條件在采用150mmx25mmPRP柱時(shí)，流量為8ml/min;每個(gè)實(shí)驗(yàn)試樣都裝載在2ml30%的乙醇水溶液中。八=3%氨溶液(sp.gr=0.88)/水。B-乙腈時(shí)間％B07.51575.02075.0307.5在15.25—16,5min洗脫所需的產(chǎn)物。真空蒸發(fā)產(chǎn)物溶液，獲得無色玻璃狀的泡沫(304mg，0.68mmol，47%)，熔點(diǎn)(m.p.)55°C。麗R'H(CDC13)，1.26(12H，s,4xCH3),1.43(2H,m，CH2)，1.57(4H，m，CH2),1.75(1H,m,CH),1.823(6H，s,2xCH3)，2.58(4H,m，2xCH2N)，3.56(2H,m，CH2NHCO)，6.95(1H,m，NHCO),7.42(3H,m,3xArH),7.79(2H,d,ArH)。NMR13C(CDC13),10.09，25.7，26.1,28.5。32.8，33.3，37.93，57.57，127.0，128.4,131.4，158.98，168.15。M/SC24H41N503M+H=448實(shí)測(cè)值448在100:30:5/CH2Cl2:MeOH:880氨條件下，流量(RF)為0.8，使用水合茚三酮顯現(xiàn)。實(shí)施例6:雙f(1,l-二曱基-2-N-羥基亞胺丙基)2-氨基乙基1-(2-(戊二酰胺)乙基)曱烷f化合物4;化合物l的戊二酰胺衍生物l的合成用水浴在氮?dú)夥罩袑⒒衔?(0.5g，1.45mmo1)的無水乙腈(50ml)和三乙胺(150mg,1.45mmo1)溶液冷卻到0。C。在4覺^^下在反應(yīng)物中加入戊二酸酐(165mg，1.45mmo1),使反應(yīng)物上升到室溫，攪拌過夜。用過濾收集過夜生成的沉淀物，在真空中干燥，獲得不純的標(biāo)題化合物試樣(267mg,0.583mmol，40%)。在真空中濃縮濾液，獲得無色的玻璃狀物，將玻璃狀物與已收集的沉淀物一起重新溶解在5%0.880sg氨水(50ml)中，采用自動(dòng)制備型HPLC純化。HPLC條件在采用150mmx25mmPRP柱時(shí)，流量為8ml/min;每個(gè)實(shí)驗(yàn)的試樣裝載在2ml溶液中。八=3%氨溶液(sp.gr=0.88)/水。B-乙腈時(shí)間％B07.51575.02075,0227.5317.5在15.25—16.5min洗脫所需的產(chǎn)物。在真空中蒸發(fā)產(chǎn)物溶液，獲得無色玻璃狀的泡沫(304mg，0.68mmo1，47%)，熔點(diǎn)54.8°C。采用TLC和分析型HPLC,所分析的產(chǎn)物為一個(gè)色斑。NMR'H(DMSO)，0.7(12H，s，4xCH3)，0.85(4H，m,2xCH2)，1.0(1H，m,CH)，1.3(6H,s,2xCH3)，1.3(4H,m,2xCH2),1.6(2H，m,CH2)，1.75(6，m，3xCH2),2.6(2,m，2xOH)，3.2(2H，t,麗)，7.3(1H,t，麗)。NMR13C(CD3SO)，8.97,20.51,20.91,25.09，25.60,31.06,33.41，33.86,56.89,66,99，160.07，1712.34，174.35,174.56。M/SC22H43N505M+H=457實(shí)測(cè)值457.6實(shí)施例7:被保護(hù)的肽Ac-NOEOVSP(3-1)YTLLKG的合成通過將Fmoc-Gly-錨定到樹脂上，在2-氯三笨曱基固相樹脂上裝配被保護(hù)的肽Ac-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)國(guó)Gln(Trt)誦Val畫Ser(tBu)-Pro-Tyr(31)-Thr(tBu)-Leu-Leu-Lys(Boc)-Gly-OH,然后用適當(dāng)4呆護(hù)的氨基酸以及偶聯(lián)劑DCCI和HOBt進(jìn)行陸續(xù)脫保護(hù)/偶聯(lián)循環(huán)。采用0.5%FTA將末端的天冬酰胺乙酰基化并從樹脂上切下，所得肽無需進(jìn)一步純化。實(shí)施例8:化合物5—化合物l的肽綴合物的合成從固相樹脂上切下實(shí)施例7^f皮保護(hù)的Ac-NQEQVSPY(3I)TLLKG肽，然后采用苯并三唑-l-基-氧代三吡咯烷-鱗六氟磷酸鹽和1-羥基苯并三唑作為偶聯(lián)劑，使其與溶液中的化合物1偶聯(lián)。通過用試劑K(試劑K是82.5%TFA、5%苯酚、5%處理過的水、5%苯硫基甲烷和2.5%乙二硫醇)脫保護(hù)，獲得化合物5。首先采用使用TFA的RP-HPLC純化粗肽，接著使用乙酸進(jìn)行第二次純化和鹽交換，凍干，用0.22pm過濾器過濾，最后凍干，獲得化合物5。為了比較，采用同樣的方法制備現(xiàn)有技術(shù)相同肽即Ac-NQEQVSPY(31)TLLKG的氮雜-二胺二將螯合物綴合物(化合物6—見圖1)。實(shí)施例9:1-(1-{3-(2-氨基乙基)-5-U-(1-羥基亞氨基乙基)環(huán)己基氨基l戊氨基l環(huán)己基)乙酮二肟化合物71的制備。在室溫和強(qiáng)烈攪拌下，在氮?dú)夥罩校趌,l，l-三(2-氨基乙基)曱烷(0.96g，6.6mmo1)的無水乙醇(7.5ml)溶液中，加入石友酸鉀(無水的)(1.8g,13畫ol)和三乙胺(1,33g，13mmo1)。在1h內(nèi)滴加l-氯-l-(1-亞硝基乙基)環(huán)己烷(2.3g，13mmo1)的二氯曱烷(30ml)溶液。然后混合物在室溫下攪拌18h。然后在減壓下除去溶劑。然后在反應(yīng)殘余物中加入水(30ml)和乙醚(25ml)。然后分離水相和有機(jī)相。HPLC:恒溶劑成分90%B(MeOH)，10o/o(NH3,3%)。乙醚萃取物HPLC表明有二個(gè)主要帶一一第一個(gè)帶二肟，第二個(gè)帶三肟。二肟(0.55g，20%),FABm/z424(M+H),HRMS:實(shí)測(cè)值424.3642,計(jì)算值424.3652(C23H45N502)。NMR:SH(CDC13;270固z),1.34—1.72(33H,m,CH,CH2xl3，CH3x2)，2.18—2.33(4H,m，NCH2x2),2.56—2.69(2H，m,NCH2)。采用類似的方法制備化合物1-(1-{3-(2-氨基乙基)-5-[1-(1-羥基亞氨基乙基)環(huán)己氨基]戊氨基}環(huán)己基)乙酮二肝[化合物8]:化合物8FABm/z396(M+H),HRMS:實(shí)測(cè)值396.3322,計(jì)算值396.3339(C21H42N503)。實(shí)施例10:將化合物2與相應(yīng)的氮雜-類似物(化合物3,現(xiàn)有技術(shù))的99mTc放射性標(biāo)記進(jìn)行比較制備包含下列成分的凍干制品23jig化合物2(化合物1的苯甲酰胺衍生物一見實(shí)施例3),36嗎氯化亞錫二水合物，90嗎亞曱膦酸(Medronate)三鈉，4.0mg乙酸鈉，在氮?dú)?USP/NF)中將其密封在10ml玻璃瓶中。這是在室溫下采用來自"，c發(fā)生器的"，c-高锝酸鹽溶液重組的。采用HPLC和ITLC(瞬時(shí)薄層色譜)研究RCP。將這些結(jié)果與化合物3的結(jié)果對(duì)比，這些結(jié)果示于表1和2中表l:ITLC放射化學(xué)純度結(jié)果(％):<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>表2:化合物2的ITLC和HPLC放射化學(xué)純度的結(jié)果(％):<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>表中RHT=還原型水解锝實(shí)施例11:化合物5—化合物1的肽綴合物的""^c放射性標(biāo)記在氮?dú)庵袑铝谐煞值膬龈芍苿┟芊庠?0ml的玻璃瓶中50|ugPABA(對(duì)氨基苯甲酸)，30pgSnCl2,90|LLgMDP(亞曱基二膦酸)，1.32mgNaHC03,98|agNa2C03,4mgNaOAc。從冷藏庫中取出玻璃瓶，在室溫下放置15min,然后用100jil包含化合物5即肽-螯合劑綴合物Ac-Asn-Gln-Glu-Gln-Val-Ser-Pro-(I-Tyr)-Thr-Leu-Leu-Lys-Gly-[化合物1](在2ml水中包含2mg)的溶液，和Xml"，c-高锝酸鹽溶液重組，在室溫下來自AmertecII99mTc發(fā)生器的放射性濃度為0.5GBq/ml。采用離子室測(cè)定放射性。采用ITLC和HPLC測(cè)定RCP。對(duì)不同X值的結(jié)果示于表3:表3:化合物5的ITLC和HPLC放射化學(xué)純度結(jié)果(％):<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>實(shí)施例12:99mTc標(biāo)記的化合物5的體外血凝塊吸收與99mTc標(biāo)記的化合物6(現(xiàn)有技術(shù))的體外血凝塊吸收根據(jù)實(shí)施例10進(jìn)行"mTc放射性標(biāo)記。從冷藏庫(-20。C)中取出血漿(每個(gè)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目5ml)和凝血酶(100單位/ml)，解凍到室溫。在使用前觀測(cè)血漿，確保沒有血凝塊生成或樣品降解的跡象。將10|al"，c-化合物5或"，c-化合物6加到一個(gè)5ml的血漿(大鼠、兔、狗和人)瓶中。將10lal,Tc-DTPA平行地加到裝有5ml血漿的第二個(gè)玻璃瓶中，作為陰性對(duì)照。向四個(gè)瓶中加入800nl的鈣三(羥甲基)氨基曱烷緩沖劑和40pl牛凝血酶溶液，產(chǎn)生生成凝塊的孵育混合物(富含鈣/凝血酶的生成血凝塊的緩沖液)。將800pl三(羥曱基)氨基甲烷緩沖鹽溶液加入到40|ilAnalaR水中，產(chǎn)生不生成凝塊的孵育混合物即本底結(jié)合試驗(yàn)混合物(缺乏4丐/凝血酶的不生成血凝塊的緩沖液)。在富含鈣/凝血酶和缺乏4丐/凝血酶的二種孵育混合物中，分別加入400|il用試驗(yàn)制品("，c-化合物5或"，c-化合物6)或放射性標(biāo)記的陰性對(duì)照(99mTc-DTPA)示蹤的人血漿，每個(gè)試驗(yàn)平行做四個(gè)。向各瓶中加入一個(gè)脫血纖蛋白棒，以利于血漿生成凝塊。每個(gè)試驗(yàn)瓶在環(huán)境溫度下孵育lh。通過向每個(gè)P7瓶中加入lml0.4MEDTA溶液而停止反應(yīng)。將前面用試驗(yàn)制品和陰性對(duì)照示蹤的400^1血漿樣品加入到各個(gè)玻璃閃爍瓶中，測(cè)定存在的總放射性(一式四份)。采用碘化鈉閃爍掃描法測(cè)定與這些標(biāo)準(zhǔn)品有關(guān)的放射性。將每個(gè)P7瓶中的內(nèi)容物倒在真空歧管上各個(gè)BSA封閉的硝基纖維素膜濾器上。用2mlTBST溶液沖洗每個(gè)P7瓶，然后用四個(gè)5ml的TBST溶液沖洗每個(gè)濾器。血凝塊在真空歧管上干燥lh。然后將濾紙轉(zhuǎn)移到各個(gè)閃爍瓶中，測(cè)定存在的放射性。通過用不生成凝塊的混合物中存在的總放射性，減去生成凝塊的混合物中存在的總放射性，求出試驗(yàn)制品與硝基纖維素膜濾器的非特異性結(jié)合的因數(shù)。采用單獨(dú)在凝塊中存在的放射性，除以血漿標(biāo)準(zhǔn)品中存在的平均放射性，然后乘以100，將凝塊單獨(dú)的吸收(特異性或非特異性)表示為血漿中試驗(yàn)制品的吸收百分率吸收％=濾器上凝塊的吸收％—濾器的吸收％x100(已校正本底)將特異性結(jié)合百分率規(guī)定為放射性吸收，放射性吸收只是由于因子XIIIa在血纖蛋白和試驗(yàn)制品之間形成異肽共價(jià)4建引起的。特異性結(jié)合是從用放射性標(biāo)記的試驗(yàn)制品校正本底(硝基纖維素濾膜)后的吸收百分率，減去用放射性同位素標(biāo)記的對(duì)FXIIIa沒有親和力的陰性對(duì)照(99mTc-DTPA)修正本底(硝基纖維素濾膜)后的吸收百分率計(jì)算的試驗(yàn)制品的特異性結(jié)合=試驗(yàn)制品的吸收。/。-DTPA的吸收％(對(duì)凝塊)(在凝塊中)(在凝塊中)對(duì)體外效力的影響比較"，c-化合物5和"，c-化合物6在體外生成血漿凝塊中的吸收數(shù)據(jù)。在這種凝血模型中，這兩種分子(30.66±5.01，與29力9±6.33比較)的效力沒有顯著性差異(p〉0.Q5)?；衔?是化合物1與所示環(huán)肽的綴合物，即[化合物l]-Cys-Cys-Glu-Leu-Cys畫Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Ala-Cys-Tyr-OH?；衔?是采用與實(shí)施例7和8相似的方法制備的，使用99mTc的溶液(制劑1)標(biāo)記的，或者利用才艮據(jù)實(shí)施例IO的凍千試劑盒(制劑2)標(biāo)記。對(duì)于制劑1,將100嗎的化合物9溶解在lmlpH8.5的硼酸鹽緩沖液中。將該溶液轉(zhuǎn)移到P6瓶中密封。在室溫下加入lml9^Tc-高锝酸鹽溶液(1.0GBq/ml,來自AmertecII發(fā)生器)以及O.lmlSnCl2溶液(10mgSnCl2，溶于100mlN2吹掃過的鹽水中)。采用離子室測(cè)定放射性。采用ITLC和HPLC測(cè)定RCP。制劑1表明，采用ITLC測(cè)定，RCP為96%，采用HPLC測(cè)定，RCP為82%。圖1顯示化合物1-6的化學(xué)結(jié)構(gòu)。圖2顯示化合物5的化學(xué)結(jié)構(gòu)-肽-鰲合劑綴合物，即Ac漏Asn-Gln-Glu-Gln-Val-Ser-Pro-(I-Tyr)-Thr-Leu-Leu-Lys-Gly-[化合物1〗。圖3顯示經(jīng)疊氮化物生成1，1，1-三(2-氨乙基)甲烷的路線。圖4顯示l，l,1-三(2-氨乙基)甲烷的另一種合成法。權(quán)利要求1.化學(xué)式如下的化合物HC(CH2CH2NR7R8)3式中R7和R8獨(dú)立地是H或PG，或R7和R8一起形成PG；其中PG是保護(hù)基；或其鹽。2.化合物HC(CH2CH2NH2)3。全文摘要本發(fā)明涉及改進(jìn)的化學(xué)式(II)的具有生物靶向分子的螯合劑綴合物，其適合與放射性金屬生成金屬絡(luò)合物。放射性金屬絡(luò)合物、特別是具有放射性金屬^99mTc的放射性金屬絡(luò)合物，適合用作放射性藥物。化合物1-6的化學(xué)結(jié)構(gòu)。文檔編號(hào)A61P9/08GK101607913SQ20091020352公開日2009年12月23日申請(qǐng)日期2002年7月10日優(yōu)先權(quán)日2001年7月10日發(fā)明者C·M·阿徹爾,H·J·瓦德斯沃斯,T·恩格爾申請(qǐng)人:通用電氣健康護(hù)理有限公司