專利名稱：桃花或桃葉總黃酮及它們在制備降血糖血脂、預(yù)防和/或治療糖尿病及并發(fā)癥藥物或保健 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及桃花或桃葉總黃酮，桃花或桃葉初提物，以及它們在制備降血糖血脂、預(yù)防和/或治療糖尿病及其并發(fā)癥藥物或保健品中的用途。

背景技術(shù)：
糖尿病(diabetes)是由遺傳因素、免疫功能紊亂、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等各種致病因子作用于機(jī)體導(dǎo)致胰島功能減退、胰島素抵抗等而引發(fā)的糖、蛋白質(zhì)、脂肪、水和電解質(zhì)等一系列代謝紊亂綜合征，臨床上以高血糖為主要特點(diǎn)。
糖尿病主要分1型糖尿病和2型糖尿病，其中在糖尿病患者中，2型糖尿病所占的比例約為95％，并且2型糖尿病隨著生活水平的提高和生活方式的改變，愈來愈高發(fā)和年輕化。由于血糖持續(xù)升高，引起全身代謝紊亂，可隱匿性導(dǎo)致心臟、血管、腎、神經(jīng)等多組織和器官的慢性并發(fā)癥，以致最終因功能衰竭而危及生命。
現(xiàn)有技術(shù)中，用于治療糖尿病的藥物主要為西藥和一些中西藥復(fù)方制劑。這些藥物雖然能有效降低血糖，但由于持久使用會(huì)導(dǎo)致藥物對機(jī)體的損害，因而其使用被嚴(yán)格限制。目前也出現(xiàn)用于治療糖尿病的中藥制劑，它們被證明對糖尿病的調(diào)節(jié)有一定作用，然而，中藥成分復(fù)雜，各組分藥效不明確，質(zhì)量不易控制，不利于制備成藥物制劑。另外，現(xiàn)有的糖尿病藥物的作用僅限于降低血糖，無法降低和延緩糖尿病慢性病變的發(fā)展。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足提供一種桃花或桃葉總黃酮，該總黃酮類物質(zhì)及包含該總黃酮類物質(zhì)的藥物組合物不僅能夠有效降低血糖血脂，且可以降低和延緩糖尿病慢性病變的發(fā)展。
本發(fā)明同時(shí)還要提供一種桃花或桃葉初提物，其能夠用于預(yù)防和/或治療糖尿病，達(dá)到降低血糖血脂和延緩慢性病變的發(fā)展的目的。
本發(fā)明另外還要提供包含了上述桃花或桃葉總黃酮或桃花或桃葉初提物的藥物組合物，該藥物組合物可以作為藥物用于治療糖尿病或降血糖血脂，也可以作為保健品用于預(yù)防糖尿病的發(fā)生。
為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明采取的一種技術(shù)方案是 一種桃花或桃葉總黃酮，其通過如下方法制備得到 (1)、以桃花或桃葉為原料，以水或碳數(shù)1～6的醇為提取溶劑，在10℃～100℃的溫度下進(jìn)行提取，得到桃花/葉的提取液； (2)、使所述桃花/葉的提取液通過大孔吸附樹脂進(jìn)行分離即得桃花或桃葉總黃酮。
根據(jù)本發(fā)明，所述作為原料的桃花或桃葉可以為薔薇科李屬桃亞屬植物普通桃、新疆桃、山桃或扁桃的桃花或桃葉。所述作為提取溶劑的醇優(yōu)選為選自甲醇、乙醇、正丁醇、異丁醇中的一種或多種的混合物，醇的質(zhì)量百分比濃度可以為5wt％～95wt％。優(yōu)選地，使提取在提取溶劑的45℃～100℃溫度下進(jìn)行。
根據(jù)本發(fā)明，在步驟(2)之前，對步驟(1)獲得的提取液進(jìn)行除雜處理。根據(jù)除雜處理的一個(gè)具體方面，其是指將絮凝劑例如甲殼素加入到提取液中進(jìn)行絮凝沉淀，之后除去沉淀物獲得澄清的溶液的過程。
根據(jù)本發(fā)明的進(jìn)一步實(shí)施方案步驟(2)的具體過程為將所述提取液通過大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附后，依次用水、5％～90％的甲醇或乙醇進(jìn)行洗脫，分段收集水和醇洗脫物，真空干燥獲得桃花或桃葉總黃酮。其中，所述大孔吸附樹脂可以為101型，AB-8型，D101型，DM301型，NKA-9型，HPD100型或HPD200型大孔吸附樹脂，優(yōu)選DM301型大孔吸附樹脂。另外，本領(lǐng)域的一般技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，為了分離更容易進(jìn)行，可將提取液進(jìn)行一定程度的濃縮處理。
本發(fā)明所采取的另一技術(shù)方案是一種用于降血糖血脂和/或預(yù)防和治療糖尿病及其并發(fā)癥的藥物組合物，其有效成分中至少包含上述的桃花或桃葉總黃酮。具體的說，所述組合物為桃花或桃葉總黃酮與藥學(xué)可接受的藥物載體制成的各種類型的口服劑或注射劑或復(fù)方制劑。其中，所述載體是指藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的滿足制劑要求而選用的任何藥物載體，包括稀釋劑如淀粉、糊精、微晶纖維素等；濕潤劑如水、甘油、聚乙烯吡咯烷酮等；潤滑劑如硬脂酸鎂、微粉硅膠等；以及其它添加劑如四氟乙烷、二甲醚等。所述口服劑可以是膠囊、片劑、丸劑、顆粒劑、液體制劑、緩釋劑等。
根據(jù)本發(fā)明的所述藥物組合物，其有效成分還可以包括其它用于治療糖尿病及其并發(fā)癥的藥物成分，如磺酰脲類藥物格列美脲或雙胍類藥物二甲雙胍或格列酮類藥物匹格列酮或醛糖還原酶抑制劑依帕司他等；所述有效成分還可以包含葛根及其它中藥材初提物。如此，可從不同作用環(huán)節(jié)、不同作用機(jī)制來協(xié)同治療糖尿病、糖尿病并發(fā)癥和相關(guān)的代謝性疾病。
本發(fā)明所采取的又一技術(shù)方案是一種桃花或桃葉初提物，其是以桃花或桃葉為原料，以水或碳數(shù)1～6的醇為提取溶劑，在10℃～100℃的溫度下優(yōu)選45℃～100℃進(jìn)行提取獲得。
其中，所述提取溶劑優(yōu)選為甲醇、乙醇、正丁醇、異丁醇中的一種或多種的混合物，醇的質(zhì)量百分比濃度可以為5wt％～95wt％。優(yōu)選地，使提取在提取溶劑的回流溫度下進(jìn)行。
本領(lǐng)域的一般技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，當(dāng)以水為提取溶劑時(shí)，初提物既可以液體形式，也可以以固體形式被使用；當(dāng)以醇為提取溶劑時(shí)，則需要將溶劑除去。
上述桃花或桃葉初提物被證明能夠有效降低血糖血脂，因而其可作為預(yù)防糖尿病的保健品或作為治療糖尿病藥物的有效成分被使用。為此，本發(fā)明還提供一種有效成分至少包括所述桃花或桃葉初提物的藥物組合物，其是所述初提物與藥學(xué)可接受的載體制成的藥學(xué)可接受的各種劑型，例如片劑、膠囊劑、注射劑等。
與前述相同，也可以將桃花或桃葉初提物與其它對預(yù)防和/或治療糖尿病的藥物成分復(fù)配使用。
實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明的桃花或桃葉總黃酮，桃花或桃葉初提物，包含桃花或桃葉總黃酮和/或桃花或桃葉初提物的藥物組合物用于治療糖尿病特別是2型糖尿病時(shí)取得了良好的效果。本領(lǐng)域的一般技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，治療時(shí)的給藥劑量取決于包括相關(guān)疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度，患者的年齡、體重及個(gè)體反應(yīng)，給藥途徑及給藥次數(shù)在內(nèi)的眾多因素。劑量給藥可以是單一劑量形式或多劑量形式。對于具體的個(gè)體而言，劑量和用藥方式依賴于癥狀和病人的自身情況，并且可以由醫(yī)生根據(jù)具體的需要進(jìn)行調(diào)整。
根據(jù)本發(fā)明，桃花或桃葉初提物的成人口服量/日(以生藥計(jì))約為30～500mg/kg，優(yōu)選50～-150mg/kg。在含量不低于30％時(shí)，桃花或桃葉總黃酮的成人日服量/日約為1mg～100mg/kg，優(yōu)選5mg～20mg/kg，分3～4次給藥。如在靜脈給藥時(shí)，成人日用量一天約為0.2mg～30mg/kg，優(yōu)選2mg～5mg/kg。
由于以上技術(shù)方案的實(shí)施，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn) 根據(jù)藥效試驗(yàn)，本發(fā)明的桃花/總黃酮和桃花或桃葉初提物均能夠有效降低血糖血脂和延緩糖尿病慢性病變的發(fā)展，并且本發(fā)明安全性更好。另外，本發(fā)明以桃花或桃葉為原料，成本低廉；且容易將桃花/總黃酮和桃花或桃葉初提物配制成各種藥物制劑。



圖1為對照品混合溶液的液相色譜圖； 圖2為實(shí)施例10樣品的液相色譜圖； 圖3為實(shí)施例10樣品經(jīng)100目聚酰胺樹脂進(jìn)一步分離(洗脫溶劑為35％乙醇)純化后的液相色譜圖； 圖4為實(shí)施例10樣品經(jīng)100目聚酰胺樹脂進(jìn)一步分離(洗脫溶劑為50％乙醇)純化后的液相色譜圖。

具體實(shí)施例方式 桃花(Prunus persica Batch)為薔薇科植物桃Prunus persica(L.)Batsch或山桃P.davidiana(Carr.)Franch.的花(peach blossom)?！肚Ы鹚幏健份d“桃花三株，空腹飲用，細(xì)腰身”。桃花性味甘，平無毒，可消食順氣，痰飲，積滯，本方單味減肥美容護(hù)膚，是極好的美容品?！镀諠?jì)方》在介紹桃花酒功用時(shí)說三月三采新鮮桃花，以上等白酒浸泡，久服，可除病益顏。也曾有桃樹，性味苦、平，具有和血、益氣、止渴的功能。桃葉為薔薇科植物桃Prunus persica(L.)Batsch或山桃P.davidiana(Carr.)Franch.的樹葉(peach tree leaves)，味苦，性平，歸脾腎經(jīng)，綱目載桃葉“療傷寒，治頭風(fēng)，通大小便”，綱草匯言載桃葉“破婦人血閉血瘕”。本發(fā)明的核心是以桃花或桃葉為原料，制備得到其初提物，并且進(jìn)一步由初提物獲得具有降血糖血脂效果的總黃酮成分。
以下結(jié)合具體的實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的説明，但本發(fā)明并不限于這些實(shí)施例。
實(shí)施例1 按照本實(shí)施例的桃花初提物，通過如下步驟制備得到 (1)、取1kg的壽桃干桃花，按重量比1∶10(花∶水)的比例放入水中浸泡半小時(shí)，75℃水浴恒溫回流1小時(shí)，過濾，濾渣進(jìn)行第二次回流，如此共提取3次，合并提取液。
(2)、向步驟(1)所得提取液中加入甲殼素，絮凝沉淀，除去沉淀物得到澄清的提取液，75℃減壓濃縮提取液，于80℃真空干燥24小時(shí)，得到干的初提物131.5克左右，經(jīng)定性試驗(yàn)表明初提物中含有黃酮類、有機(jī)酸類、酚類、苷類、多糖類、三萜等化學(xué)成分。
實(shí)施例2 按照本實(shí)施例的桃花初提物，以水蜜桃干桃花為原料，按照與實(shí)施例1相同的方法進(jìn)行提取，最后得到初提物118.8g左右，定性試驗(yàn)結(jié)果同實(shí)施例1。
實(shí)施例3 按照本實(shí)施例的桃花初提物，以蟠桃干桃花為原料，按照與實(shí)施例1相同的方法進(jìn)行提取，最后得到初提物125.4g左右，定性試驗(yàn)結(jié)果同實(shí)施例1。
實(shí)施例4 按照本實(shí)施例的桃葉初提物，通過如下步驟制備得到 (1)、取1kg的壽桃干桃葉，按重量比1∶12(葉∶水)的比例放入水中浸泡半小時(shí)，80℃水浴恒溫回流1小時(shí)，過濾，濾渣進(jìn)行第二次回流，如此共提取3次，合并提取液； (2)、向步驟(1)所得提取液中加入甲殼素，絮凝沉淀，除去沉淀物得到澄清的提取液，75℃減壓濃縮，80℃真空干燥24小時(shí)，得到初提物173.4g左右。
實(shí)施例5 按照本實(shí)施例的桃葉初提物，通過如下步驟制備得到 (1)、取1kg的水蜜桃干桃葉，按重量比1∶10(花∶水)的比例放入提取溶媒水中浸泡半小時(shí)，80℃水浴恒溫回流1小時(shí)，過濾，濾渣進(jìn)行第二次回流，如此共提取3次，合并提取液； (2)、向步驟(1)所得提取液中加入甲殼素，絮凝沉淀，除去沉淀物得到澄清的提取液，75℃減壓濃縮，80℃真空干燥24小時(shí)，得到初提物188.1g左右。
實(shí)施例6 按照本實(shí)施例的桃葉初提物，以蟠桃干桃葉為原料，按照與實(shí)施例5相同的方法進(jìn)行提取，最后得到初提物174.8g左右。
桃花或桃葉初提物對四氧嘧啶所致I型糖尿病小鼠的作用研究 1、試驗(yàn)方法取清潔級昆明種雄性小鼠，22-25g，禁食12h，按60mg/kg體重尾靜脈注射四氧嘧啶溶液。于第4天禁食12h，測空腹血糖≥11.0mmol/L者確定為糖尿病小鼠，隨機(jī)分為模型組和治療組。模型組按20ml/kg體重灌以蒸餾水，治療組分為上述實(shí)施例的中華壽桃花水提物組(3g/kg，以生藥材計(jì)，以下同)，中華壽桃葉水提物組(3.5g/kg)，白花水蜜桃花水提物組(3g/kg)，白花水蜜桃葉水提物組(3.5g/kg)，新疆蟠桃花水提物組(3g/kg)，新疆蟠桃葉水提物組(3.5g/kg)及拜糖平對照組(0.1g/kg)，灌胃給藥每日1次，連續(xù)10天，禁食12h，測空腹血糖值，比較給藥前后小鼠空腹血糖。于給藥15天，進(jìn)行葡萄糖負(fù)荷試驗(yàn)(口服葡萄糖2g/kg)，比較藥物對四氧嘧啶所致糖尿病小鼠糖耐量的影響。
2、試驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果見表1和2。從中可見，實(shí)施例的桃花水提物和桃葉水提物均可不同程度降低四氧嘧啶糖尿病小鼠空腹血糖，且能明顯改善小鼠的葡萄糖耐量。而拜堂平雖然能有效降低血糖，但其對于葡萄糖負(fù)荷無明顯改善作用。
表1桃花/葉水提物對四氧嘧啶糖尿病小鼠空腹血糖的影響(Mean±SD，n＝10)
與給藥后模型對照比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
表2桃花或桃葉初提物對四氧嘧啶糖尿病小鼠糖耐量的影響(Mean±SD，n＝10)
與給藥后模型對照比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
實(shí)施例7 按照本實(shí)施例的桃葉總黃酮，通過如下方法制備 (1)、取1kg的壽桃干桃葉，按重量比1∶12(葉∶水)的比例放入水中先浸泡半小時(shí)，在80℃水浴恒溫回流1小時(shí)，共提取3次，合并提取液； (2)向步驟(1)所得提取液中加入甲殼素，絮凝沉淀，除去沉淀物得到澄清的提取液，進(jìn)入DM-301大孔樹脂柱，進(jìn)行吸附分離純化，依次用水、2倍柱容的25％、50％、75％、90％乙醇溶液進(jìn)行梯度洗脫，洗脫液混合后回收乙醇，經(jīng)80℃真空干燥24小時(shí)得到初提物48.85g左右。經(jīng)鑒定其中總黃酮含量可達(dá)45.32～51.64％。
實(shí)施例8 按照本實(shí)施例的桃葉總黃酮，其制備方法基本同實(shí)施例7，不同的是，步驟(1)中，水浴溫度為45℃，最后獲得初提物41.32g左右，其中總黃酮含量可達(dá)43.46～52.17％。
實(shí)施例9 按照本實(shí)施例的桃葉總黃酮，其制備方法基本同實(shí)施例7，不同的是，步驟(1)中，水浴溫度為75℃，提取溶劑為45％的乙醇，最后獲得初提物40.21g左右，其中總黃酮含量可達(dá)48.21～56.62％。
實(shí)施例10 按照本實(shí)施例的桃花總黃酮，通過如下步驟制備 (1)、取1kg的壽桃干桃花，按重量比1∶10的比例放入水中先浸泡半小時(shí)，在75℃水浴恒溫回流1小時(shí)，共提取3次，合并提取液； (2)、向步驟(1)所得提取液中加入甲殼素，絮凝沉淀，除去沉淀物得到澄清的提取液，進(jìn)DM-301大孔樹脂柱，進(jìn)行吸附分離純化，依次用水、2倍柱容的5％、25％、55％、75％、90％乙醇溶液進(jìn)行梯度洗脫，洗脫液混合后回收乙醇，經(jīng)真空干燥24小時(shí)得到初提物61.32g左右，其中總黃酮含量達(dá)49.48～55.25％。
實(shí)施例11 按照本實(shí)施例的桃花總黃酮，制備方法基本同實(shí)施例10，不同的是，步驟(1)中提取溶劑為45wt％的乙醇，最后獲得初提物55.61g左右，其中總黃酮含量可達(dá)51.29～54.32％。
實(shí)施例12 按照本實(shí)施例的桃花總黃酮，制備方法基本同實(shí)施例11，不同的是，步驟(1)中提取溶劑為15wt％的乙醇，最后獲得初提物49.25g左右，其中總黃酮含量可達(dá)52.51～53.62％。
實(shí)施例13 按照本實(shí)施例的桃花總黃酮，制備方法基本同實(shí)施例10，不同的是，原料為水蜜桃干桃花，提取溶劑為水，最后獲得初提物60.06g左右，其中總黃酮含量達(dá)43.48～51.25％。
實(shí)施例14 按照本實(shí)施例的桃葉總黃酮，制備方法基本同實(shí)施例7，不同的是其原料為水蜜桃干桃葉，最后獲得初提物38.53g左右，其中總黃酮含量達(dá)44.63～49.81％。
實(shí)施例15 按照本實(shí)施例的桃花總黃酮，通過如下步驟制備 取1kg的新疆蟠桃干桃花，按重量比1∶10的比例放入45％乙醇中先浸泡半小時(shí)，在75℃水浴恒溫回流1小時(shí)，共提取3次，每次1小時(shí)，萃取液經(jīng)回收乙醇后，用甲殼素除雜、用DM-301大孔樹脂柱吸附、分離純化，依次用水、2倍柱容的5％、25％、55％、75％、90％乙醇溶液進(jìn)行梯度洗脫，洗脫液混合后回收乙醇，經(jīng)真空干燥24小時(shí)得到初提物共50.81g左右，其中總黃酮含量達(dá)47.52～51.33％。
實(shí)施例16 按照本實(shí)施例的桃葉總黃酮，通過如下步驟制備 取1kg的新疆蟠桃干桃葉，按重量比1∶12的比例放入提取溶媒水中先浸泡半小時(shí)，在80℃水浴恒溫回流1小時(shí)，共提取3次，每次1小時(shí)，萃取液經(jīng)回收乙醇后，用甲殼素除雜、用DM-301大孔樹脂柱吸附、分離純化，依次用水、2倍柱容的5％、25％、55％、75％、90％乙醇溶液進(jìn)行梯度洗脫，洗脫液混合后回收乙醇，經(jīng)真空干燥24小時(shí)得到初提物共41.01g左右，其中總黃酮含量達(dá)45.12～48.68％。
桃花或桃葉總黃酮定性試驗(yàn) 1、常規(guī)黃酮類物質(zhì)鑒別試驗(yàn)將實(shí)施例7至16所得總黃酮的樣品，應(yīng)用常規(guī)黃酮類物質(zhì)鑒別試驗(yàn)方法檢測，結(jié)果見表3，所有實(shí)驗(yàn)均呈陽性，實(shí)施例7至16所獲產(chǎn)品均含黃酮類物質(zhì)。
表3
注“+”表示陽性結(jié)果；“-”表示陰性結(jié)果。
2、液相色譜分析取實(shí)施例10所得樣品，在下述色譜條件下分析島津LC-10ADvp雙泵，SPD-M10Avp DAD檢測器；島津Shim-Pack CLC-ODS(150mm×4.6mm，5μm)色譜柱；流動(dòng)相0.1％乙酸水溶液(A)-甲醇(B)，梯度洗脫；紫外檢測波長289nm；流速1.0mL/min；進(jìn)樣量20μL。檢測結(jié)果見圖1至4。圖1為對照品混合溶液的液相色譜圖，圖中六個(gè)色譜峰分別為香豆素(t＝16.341)、槲皮苷(t＝22.914)、紫云英苷(t＝23.507)、柚皮素(t＝29.738)、橙皮素(t＝31.243)、山奈酚(35.738)。對照圖1、2至4，可見香豆素，紫云英苷，橙皮素，山奈酚等為桃花總黃酮的重要構(gòu)成成分。
桃花或桃葉總黃酮對四氧嘧啶所致I型糖尿病小鼠的作用研究 1、試驗(yàn)方法取清潔級昆明種雄性小鼠，22-25g，禁食12h，按60mg/kg體重尾靜脈注射四氧嘧啶溶液。于第4天禁食12h，測空腹血糖≥11.0mmol/L者確定為糖尿病小鼠，隨機(jī)分為模型組和治療組。模型組按20ml/kg體重灌以蒸餾水，治療組分為壽桃葉醇提總黃酮組(150mg/kg，實(shí)施例9樣品)，壽桃花水提總黃酮組(150mg/kg，實(shí)施例10樣品)，壽桃花醇提總黃酮組(150mg/kg，實(shí)施例11樣品)，水蜜桃桃花水提總黃酮組(150mg/kg，實(shí)施例13樣品)，新疆蟠桃花醇提總黃酮組(150mg/kg，實(shí)施例15樣品)，新疆蟠桃葉水提總黃酮組(150mg/kg，實(shí)施例16樣品)及拜糖平對照組(100mg/kg)，灌胃給藥每日1次，連續(xù)10天，禁食12h，測空腹血糖值，比較給藥前后小鼠空腹血糖。于給藥15天，進(jìn)行葡萄糖負(fù)荷試驗(yàn)(口服葡萄糖2g/kg)，比較藥物對四氧嘧啶所致糖尿病小鼠糖耐量的影響。
2、試驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果見表4和5。從中可見，實(shí)施例的桃花總黃酮和桃葉總黃酮均可有效降低四氧嘧啶糖尿病小鼠空腹血糖，且能明顯改善小鼠的葡萄糖耐量。而拜堂平雖然能有效降低血糖，但其對于葡萄糖負(fù)荷無明顯改善作用。
表4桃花或桃葉總黃酮對四氧嘧啶糖尿病小鼠空腹血糖的影響(Mean±SD，n＝10)

與給藥后模型對照比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
表5桃花或桃葉總黃酮對四氧嘧啶糖尿病小鼠糖耐量的影響(Mean±SD，n＝10)
注與給藥后模型對照比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
桃花或桃葉總黃酮對STZ造成的II型糖尿病大鼠的作用研究 1、試驗(yàn)方法取清潔級SD雄性大鼠，150～180g，用高脂飼料喂養(yǎng)60天，禁食12h，以40mg/kg劑量，腹腔注射STZ溶液，4d后，禁食12h后，查空腹血糖≥11.0mmol/L者確定為糖尿病大鼠，隨機(jī)分為模型組和治療組。模型組按5ml/kg體重灌服蒸餾水，治療組分為壽桃葉醇提總黃酮組(100mg/kg，實(shí)施例9樣品，)，壽桃花水提總黃酮組(100mg/kg，實(shí)施例10樣品)，壽桃花醇提總黃酮組(100mg/kg，實(shí)施例11樣品)，水蜜桃桃花水提總黃酮組(100mg/kg，實(shí)施例13樣品)，新疆蟠桃花醇提總黃酮組(100mg/kg，實(shí)施例15樣品)，新疆蟠桃葉水提總黃酮組(100mg/kg，實(shí)施例16樣品)及拜糖平對照組(60mg/kg)，，灌胃給藥每日1次，連續(xù)10天，禁食12h，測空腹血糖值，比較給藥前后大鼠空腹血糖。于給藥20天禁食12h，測血清甘油三酯(TG)、膽固醇(TC)、游離脂肪酸(FFA)濃度。
2、試驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果見表6和表7。從表中可見，實(shí)施例的桃葉總黃酮、桃花總黃酮以及拜糖平均可有效降低血糖。并且，桃葉總黃酮、桃花總黃酮對大鼠血脂異常升高有不同程度的抑制作用，與模型組比較有顯著差異。
表6桃花或桃葉總黃酮對STZ糖尿病大鼠空腹血糖的影響(mmol/L，Mean±SD)

注與模型對照比較，＊p＜0.05，＊＊p＜0.01。
表7桃花或桃葉總黃酮對STZ糖尿病大鼠血脂水平的影響(mmol/L，Mean±SD)
注與給藥后模型對照比較，＊p＜0.05，＊＊p＜0.01。
桃花或桃葉總黃酮對大鼠全血血小板聚集的作用研究 1、試驗(yàn)方法取清潔級雄性大鼠，200±20g，隨機(jī)均分為6組正常對照組(0.5％CMC)，阿司匹林組(30mg/kg)，壽桃葉總黃酮組(100mg/kg，實(shí)施例9樣品)，壽桃花水提總黃酮組(100mg/kg，實(shí)施例10樣品)，水蜜桃花水提總黃酮組(100mg/kg，實(shí)施例13樣品)和蟠桃花醇提總黃酮組(100mg/kg，實(shí)施例15樣品)，動(dòng)物連續(xù)灌胃給藥2周，末次給藥1小時(shí)后，眼眶靜脈叢取血，各0.5ml至專用玻璃硅化試管肝素抗凝(終濃度30U·ml-1)，分別用ADP(終濃度為5μmol·L-1)誘導(dǎo)聚集，測定5min內(nèi)全血血小板最大聚集值(單位Ω)。為保證結(jié)果準(zhǔn)確，在室溫條件下2h內(nèi)測完。
2、試驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果見表8。桃葉總黃酮、各桃花總黃酮和阿司匹林均可有效降低血小板最大聚集，與模型組比較有顯著差異。
表8桃花或桃葉總黃酮對正常大鼠全血血小板聚集的作用(n＝10，Mean±SD)

注與給藥后正常對照比較，＊p＜0.05，＊＊p＜0.01。
桃花或桃葉總黃酮對大鼠實(shí)驗(yàn)性血栓的作用 1、試驗(yàn)方法取清潔級雄性大鼠，200±50g，隨機(jī)均分為5組正常對照組(0.5％CMC)，阿司匹林組(30mg/kg)，壽桃葉總黃酮組(100mg/kg，實(shí)施例9樣品)，壽桃花水提總黃酮組(100mg/kg，實(shí)施例10樣品)，水蜜桃花水提總黃酮組(100mg/kg，實(shí)施例13樣品)和蟠桃花醇提總黃酮組(100mg/kg，實(shí)施例15樣品)，動(dòng)物連續(xù)灌胃給藥2周，末次給藥后1h腹腔注射(20％烏拉坦5ml·kg-1)麻醉，制作頸總動(dòng)脈內(nèi)皮受損血栓模型，分離兩側(cè)頸總動(dòng)脈，左側(cè)頸總動(dòng)脈備采血用，右側(cè)頸總動(dòng)脈分離后其下置小片塑料薄膜(4cm×1.8cm)，用于保護(hù)血管周圍組織，將吸有20％FeCl3溶液的小片濾紙(0.5cm×0.5cm)敷于右側(cè)頸總動(dòng)脈上。敷紙片后7分鐘去除紙片，去除紙片后25分鐘后，剪下右側(cè)頸總動(dòng)脈血栓部位血管，放于濾紙片上吸干余血，以分析天平測定血栓重量。
2、試驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果見表9。從中可見，桃葉總黃酮、各桃花總黃酮對大鼠血栓濕重有明顯的降低作用，與正常對照組比較有顯著差異。
表9桃花或桃葉總黃酮對正常大鼠全血血小板聚集的作用(n＝10，Mean±SD) 注與正常對照比較，＊p＜0.05，＊＊p＜0.01。
實(shí)施例17 一種含桃花初提物的藥物組合物，為片劑，其可通過如下方法制備取實(shí)施例1所得的桃花初提物10g，加入可壓性淀粉5g，糊精5g，混勻，采用50％乙醇濕法來制粒，降溫至60℃以下進(jìn)行干燥，整粒，加入滑石粉0.5g，混勻，壓制成100片，桃花初提物含量為0.1g/片。
本實(shí)施例的藥物片劑組合物可用于降血糖血脂、預(yù)防/治療糖尿病及其并發(fā)癥。
實(shí)施例18 一種含桃花總黃酮的藥物組合物，為注射劑，其可通過如下方法制備取實(shí)施例10所得的桃花總黃酮50g，溶于425ml 25％乙醇液溶解，制備溶液，用活性炭脫色，濾過，加注射用水制成5％的水溶液1000ml，用微孔濾膜(Φ0.20μm)濾過至澄明，滅菌，無菌分裝，每瓶2ml，封口。
實(shí)施例19 一種桃花總黃酮與匹格列酮的復(fù)方制劑，其可通過如下方法制備取實(shí)施例10所得的桃花總黃酮5g，匹格列酮1.5g，糊精25g，微晶纖維素10g，混勻，采用50％乙醇濕法來制粒，降溫至60℃以下進(jìn)行干燥，整粒，加入硬脂酸鎂0.2g，混勻，灌制膠囊100粒，平均每粒含總黃酮0.05g，匹格列酮0.015g。
實(shí)施例20 一種含桃葉初提物的藥物組合物，為片劑，其制備過程為取實(shí)施例4所得的桃葉初提物10g，加入可壓性淀粉5g，糊精5g，混勻，采用50％乙醇濕法來制粒，降溫至60℃以下進(jìn)行干燥，整粒，加入滑石粉0.5g，混勻，壓制成100片，桃葉初提物含量為0.1g/片。
實(shí)施例21 一種桃葉總黃酮與匹格列酮的藥物組合物，為膠囊劑，其制備過程為取實(shí)施例9所得的桃葉總黃酮5g，匹格列酮1.5g，糊精25g，微晶纖維素10g，混勻，采用50％乙醇濕法來制粒，降溫至60℃以下進(jìn)行干燥，整粒，加入硬脂酸鎂0.2g，混勻，灌制膠囊100粒，平均每粒含總黃酮0.05g，匹格列酮0.015g。
以上對本發(fā)明做了詳盡的描述，其目的在于讓熟悉此領(lǐng)域技術(shù)的人士能夠了解本發(fā)明的內(nèi)容并加以實(shí)施，并不能以此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍，凡根據(jù)本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)所作的等效變化或修飾，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種用于降血糖血脂和/或預(yù)防和/或治療糖尿病及其并發(fā)癥的桃花或桃葉總黃酮，其特征在于所述總黃酮通過如下方法制備得到
(1)、以桃花或桃葉為原料，以水或碳數(shù)1～6的醇為提取溶劑，在10℃～100℃的溫度下進(jìn)行提取，得到桃花/葉的提取液；
(2)、使所述桃花/葉的提取液通過大孔吸附樹脂進(jìn)行分離獲得所述的桃花或桃葉總黃酮。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的桃花或桃葉總黃酮，其特征在于所述作為原料的桃花或桃葉為薔薇科李屬桃亞屬植物普通桃、新疆桃、山桃或扁桃的桃花或桃葉。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的桃花或桃葉總黃酮，其特征在于所述作為提取溶劑的醇為選自甲醇、乙醇、正丁醇、異丁醇中的一種或多種的混合物，所述醇的質(zhì)量百分比濃度范圍為5wt％～95wt％。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的桃花或桃葉總黃酮，其特征在于步驟(1)中，所述提取在溫度45℃～100℃下進(jìn)行。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的桃花或桃葉總黃酮，其特征在于所述制備總黃酮的方法還包括在步驟(2)之前，對步驟(1)獲得的提取液進(jìn)行除雜處理。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的桃花或桃葉總黃酮，其特征在于步驟(2)的具體過程為將所述提取液通過大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附后，依次用水、5wt％～90wt％的甲醇或乙醇進(jìn)行洗脫，分段收集水和醇洗脫物，真空干燥獲得所述桃花或桃葉總黃酮。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的桃花或桃葉總黃酮，其特征在于所述大孔吸附樹脂為101型，AB-8型，D101型，DM301型，NKA-9型，HPD100型或HPD200型大孔吸附樹脂。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的桃花或桃葉總黃酮，其特征在于步驟(2)中，采用洗脫溶劑濃度逐漸增大的梯度洗脫法進(jìn)行所述的洗脫。
9.一種如權(quán)利要求1至8所述的桃花或桃葉總黃酮，含有所述桃花或桃葉總黃酮的藥物組合物在制備降血糖血脂、預(yù)防和/或治療糖尿病及其并發(fā)癥藥物或保健品中的用途。
10.一種用于降血糖血脂和/或預(yù)防和/或治療糖尿病及其并發(fā)癥的藥物組合物，其特征在于所述藥物組合物的有效成分中至少包含權(quán)利要求1至8所述的桃花或桃葉總黃酮。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的藥物組合物，其特征在于所述藥物組合物為所述桃花或桃葉總黃酮與藥學(xué)可接受的藥物載體制成的口服劑或注射劑或復(fù)方制劑。
12.一種桃花或桃葉初提物，其特征在于所述初提物是以桃花或桃葉為原料，以水或碳數(shù)1～6的醇為提取溶劑，在10℃～100℃的溫度下進(jìn)行提取獲得。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的桃花/葉初提物，其特征在于步驟(1)中，所述提取在溫度45℃～100℃下進(jìn)行。
14.一種如權(quán)利要求12或13所述的桃花或桃葉初提物，或含有所述的桃花或桃葉初提物的藥物組合物在制備降血糖血脂、預(yù)防和/或治療糖尿病及其并發(fā)癥藥物或保健品中的用途。
15.一種用于降血糖血脂和/或預(yù)防和/或治療糖尿病及其并發(fā)癥的藥物組合物，其特征在于所述藥物組合物為權(quán)利要求12或13所述的桃花或桃葉初提物與藥學(xué)可接受的藥物載體制成的口服劑或注射劑或復(fù)方制劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種桃花或桃葉總黃酮，桃花或桃葉初提物，含有桃花或桃葉初提物和/或桃花或桃葉總黃酮的藥物組合物及它們在制備降血糖血脂以及預(yù)防和/或治療糖尿病及其并發(fā)癥藥物或保健品中的用途。所述桃花或桃葉初提物以薔薇科植物桃花或桃葉為原料，經(jīng)水或碳數(shù)1～6的醇類提取獲得，所述桃花或桃葉總黃酮由所述初提物進(jìn)一步經(jīng)過大孔樹脂吸附分離提純獲得。本發(fā)明的桃花或桃葉初提物、桃花或桃葉總黃酮以及含有桃花或桃葉初提物和/或桃花或桃葉總黃酮的藥物組合物對于預(yù)防和治療糖尿病特別是2型糖尿病及其并發(fā)癥具有療效好、副作用少和費(fèi)用低的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號A61P3/06GK101816719SQ20091018688
公開日2010年9月1日 申請日期2009年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月31日
發(fā)明者王寶民 申請人:王寶民