專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種欖香烯注射液及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及藥物制劑
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種欖香烯注射液及其制備方法。
背景技術(shù)：
：載藥乳劑是在脂肪乳的基礎(chǔ)上研究產(chǎn)生的。脂肪乳創(chuàng)始于20世紀(jì)60年代，是應(yīng)西方發(fā)達(dá)國(guó)家醫(yī)院為搶救危重病人如嚴(yán)重?zé)齻∪?、?chē)禍?zhǔn)軅?、接受手術(shù)后需禁食者、晚期腫瘤兼惡液質(zhì)病人等的需要而開(kāi)發(fā)的，其是以大豆油(富含油酸、亞油酸等長(zhǎng)鏈脂肪酸)為原料，加乳化劑及注射用水，經(jīng)高壓均質(zhì)、高溫滅菌制備而成的一種水包油型可供靜脈注射的乳劑。由于該乳劑含有數(shù)量巨多、粒徑0.01150iim的乳粒，分散度大，總表面積大，表面自由能很高，屬于熱力學(xué)不穩(wěn)定體系，故脂肪乳劑制備技術(shù)難度較高；當(dāng)乳化條件不當(dāng)時(shí)，極易在加熱滅菌或儲(chǔ)存期間發(fā)生乳化膜破裂導(dǎo)致破乳，出現(xiàn)分層、漂油、絮凝等現(xiàn)象。依據(jù)脂肪乳制劑技術(shù)基礎(chǔ)，國(guó)內(nèi)外藥物學(xué)家進(jìn)而廣泛進(jìn)行了載藥乳劑的研究，該劑型具有載藥量大、可將親脂性藥物供動(dòng)靜脈注射且具靶向作用等優(yōu)點(diǎn)。欖香烯注射液(載藥乳劑)系我國(guó)自主研發(fā)，欖香烯(Elemene)化學(xué)名為1_甲基_1_乙烯基-2，4-二異丙烯基環(huán)己烷，分子式(:151124，分子量204.35，有P-欖香烯、Y-欖香烯和S-欖香烯三種同分異構(gòu)體，系從傳統(tǒng)中藥姜科植物溫郁金(Curcumawenyujin)中提取分離的倍半萜類(lèi)抗癌有效成分，以P-欖香烯為主要活性成分，是一種新型的、具有高度選擇性和免疫功能的抗癌藥物。欖香烯注射液(載藥乳劑)系將呈液態(tài)油狀的欖香烯(倍半萜類(lèi)，易揮發(fā))制備成分散度很大的o/w型乳劑，有利于增加藥物的化學(xué)穩(wěn)定性、加快藥物吸收和藥效發(fā)揮、提高藥物的生物利用度等，且靜脈注射后能發(fā)揮靶向作用。經(jīng)多年的臨床使用逐漸發(fā)現(xiàn)脂肪乳的副作用，如報(bào)道大劑量或長(zhǎng)期連續(xù)使用長(zhǎng)鏈脂肪乳會(huì)引起高脂血癥、損害免疫系統(tǒng)和影響網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)、肝臟等重要臟器功能(脂肪乳劑工藝研究，廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2001年Vo117No3P170)。另報(bào)道脂肪乳類(lèi)產(chǎn)品在臨床使用中存在的不良反應(yīng)如發(fā)熱、肝功能異常等與原輔料中帶入的雜質(zhì)有關(guān)，大劑量、長(zhǎng)期使用該類(lèi)產(chǎn)品后果嚴(yán)重，其產(chǎn)生的毒副作用甚至不可逆。國(guó)外報(bào)道狗的亞急性毒性試驗(yàn)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)不同脂肪乳會(huì)造成不同的臟器損害，甚至在試驗(yàn)結(jié)束前死亡(中/長(zhǎng)鏈脂肪乳注射液制備工藝研究，廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2001年9月第17巻第3期，P170)。但對(duì)于原輔料帶入何種雜質(zhì)引起脂肪乳類(lèi)產(chǎn)品產(chǎn)生毒性查現(xiàn)有文獻(xiàn)均語(yǔ)焉不詳，未研究確認(rèn)。申請(qǐng)?zhí)枮?3110091.7的中國(guó)專(zhuān)利(專(zhuān)利甲)公開(kāi)的一種欖香烯乳注射液及其制備方法，系采用欖香烯、膽固醇、大豆卵磷脂及磷酸鹽緩沖液配制而成的小容量注射劑。按照該專(zhuān)利制備的欖香烯乳注射液(國(guó)藥準(zhǔn)字H109601115)被批準(zhǔn)上市以來(lái)，大量臨床研究論文均報(bào)道發(fā)生靜脈炎、注射疼痛和藥物熱等副作用，患者醫(yī)從性差，甚至因難以忍受注射疼痛導(dǎo)致停藥，或需與輸液、脂肪乳等其他藥品聯(lián)用，增加患者藥費(fèi)開(kāi)支及聯(lián)合用藥的配制質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)(欖香烯乳對(duì)晚期肺癌癌性胸水的治療作用，中國(guó)腫瘤臨床，1996年23巻第1期P73-74;欖香烯乳加聯(lián)合化療治療急性非淋巴細(xì)胞白血病療效觀察，中國(guó)腫瘤臨床，1999年29巻第3期P237-238;欖香烯乳治療膀胱癌的臨床觀察，貴州醫(yī)藥2002年9月第第9期P810-811);并因無(wú)法應(yīng)用于淺靜脈用藥，只能采取導(dǎo)管深靜脈用藥，對(duì)護(hù)理技術(shù)要求較高，亦導(dǎo)致臨床使用的不便。申請(qǐng)人:經(jīng)研究證實(shí)專(zhuān)利甲制備的欖香烯乳注射液臨床發(fā)生靜脈炎、注射疼痛和藥物熱等副作用系溶血作用導(dǎo)致，原因有三點(diǎn)(l)未對(duì)乳化劑大豆卵磷脂成分之一的"溶血磷脂"進(jìn)行限量控制，靜脈輸注后由于富含溶血磷脂導(dǎo)致溶血；(2)未對(duì)乳化劑的滲透壓進(jìn)行控制，靜脈大劑量輸注后由于低滲導(dǎo)致溶血；(3)制備過(guò)程未在惰性氣體保護(hù)下進(jìn)行，易使磷脂因氧化水解產(chǎn)生溶血磷脂，增強(qiáng)了乳化劑的溶血作用。研究證實(shí)，溶血磷脂的乳化能力為普通磷脂的5倍(溶血磷脂的乳化性能研究，安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，35(13)P3800-3801)，因此，專(zhuān)利甲制備的欖香烯乳注射液必須在乳化劑大豆卵磷脂中溶血磷脂的重量百分含量^20%的前提下，方可乳化成功；溶血磷脂含量<20%時(shí)，乳粒乳化膜不牢固、熱穩(wěn)定性差，一經(jīng)加熱滅菌就發(fā)生破乳，出現(xiàn)漂油現(xiàn)象。因此，按照專(zhuān)利甲制備的注射液，經(jīng)檢測(cè)溶血呈現(xiàn)陽(yáng)性，導(dǎo)致臨床應(yīng)用發(fā)生如靜脈炎、注射疼痛和藥物熱等副作用。另外專(zhuān)利甲配方中含輔料膽固醇，膽固醇自牛、馬、羊、豬等動(dòng)物大腦中提取，因目前在歐洲爆發(fā)的瘋牛病、瘋羊病等病原體及傳染源至今不明，故存在感染瘋牛病等潛在不安全因素。臨床報(bào)道欖香烯注射液?jiǎn)未斡盟巹┝靠蛇_(dá)8001200mg，以100mg/20ml支的規(guī)格計(jì)單次注射體積可達(dá)160240ml(持續(xù)灌注欖香烯治療惡性腦腫瘤，中國(guó)腫瘤臨床，2001年第28巻第9期P682-683;中藥欖香烯乳注射液治療惡性腦腫瘤40例臨床研究，中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2000年9月第20巻第9期P645-646)，且著名腫瘤專(zhuān)家儲(chǔ)大同研究發(fā)現(xiàn)欖香烯乳注射液直至2000mg/d仍未摸索到人體最大耐受劑量，以100mg/20ml支規(guī)格計(jì)、單次注射劑量已達(dá)400ml(欖香烯乳注射液耐受性試驗(yàn)I期臨床研究，中國(guó)新藥雜志2006年第15巻第21期P1867-1870)。因該藥臨床劑量較大，制劑應(yīng)調(diào)節(jié)滲透壓與血液等滲，才能防止靜脈注射進(jìn)入體內(nèi)后引發(fā)溶血現(xiàn)象。專(zhuān)利甲制備的注射液中無(wú)滲透壓調(diào)節(jié)劑，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)無(wú)"滲透壓"檢測(cè)項(xiàng)目，檢測(cè)專(zhuān)利甲制備的注射液各批次滲透壓顯示在95115mOsmol/kg(相當(dāng)于0.3087%濃度的NaCl溶液，當(dāng)NaCl溶液濃度<0.35%時(shí)將導(dǎo)致完全溶血)。因血漿滲透壓為313mOsmol/kg，故按專(zhuān)利甲所制備的注射液與血液不等滲，當(dāng)大劑量注入體內(nèi)時(shí)，將導(dǎo)致血液中紅血球破裂產(chǎn)生溶血，亦造成臨床副作用(生理學(xué)第五版，主編姚泰，人民衛(wèi)生出版社，P49-50;《中華人民共和國(guó)藥典》2005年版一部附錄IXG滲透壓摩爾濃度測(cè)定法)。專(zhuān)利甲終端濕熱滅菌條件系采用10(TC滅菌40分鐘，其F。值為0.32，不符合2005年版《中華人民共和國(guó)藥典》(簡(jiǎn)稱(chēng)中國(guó)藥典)中關(guān)于"濕熱滅菌F。值一般不低于8分鐘，確保無(wú)菌保證值SAL《10—6"的要求。因?yàn)闊o(wú)菌制劑在F。值<8分鐘時(shí)，經(jīng)滅菌后污染菌存活概率增加、患者存在感染藥源性敗血癥風(fēng)險(xiǎn)，嚴(yán)重時(shí)將危及患者生命安全(F。值是將被滅菌物品在滅菌過(guò)程中不同的受熱溫度與時(shí)間折算到i2rc滅菌時(shí)熱效力相當(dāng)?shù)臏缇鷷r(shí)間。)作為天然藥物的載藥乳劑，專(zhuān)利甲未對(duì)原料藥材的來(lái)源加以限定，也未對(duì)原料(莪術(shù)油)、原料藥(欖香烯)、制劑(欖香烯注射液)的有效成分進(jìn)行指紋圖譜的鑒別，未能進(jìn)行植物藥的物種控制和真?zhèn)舞b定，不利于藥品質(zhì)量的"安全、穩(wěn)定、有效、可控"。由于藥品質(zhì)量關(guān)系公眾的生命，不能允許存在任何潛在的質(zhì)量隱患，故需研究沒(méi)有潛在質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)的、臨床使用安全有效的欖香烯注射液配方和制備方法。申請(qǐng)?zhí)枮?2155072.7的中國(guó)專(zhuān)利(專(zhuān)利乙)公開(kāi)了一種欖香烯脂肪乳注射液及其制備方法，該專(zhuān)利制備的注射液系大容量注射劑，主成分為欖香烯和大豆油(大豆油的重量百分含量高達(dá)10%30%)，系在治療癌癥的同時(shí)補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)成分和提供高能量，臨床適應(yīng)癥主要用于晚期癌癥患者改善生存質(zhì)量，其臨床禁忌應(yīng)等同于脂肪乳。由于脂肪乳注射液說(shuō)明書(shū)中明確規(guī)定脂肪乳禁用于休克和嚴(yán)重脂質(zhì)代謝紊亂(如高脂血癥)血栓患者，慎用于脂肪代謝功能減退的患者如肝、腎功能不全，糖尿病、酮中毒、胰腺炎、甲狀腺機(jī)能低下(伴有高脂血癥)以及敗血癥者；存在可引起體溫升高，偶見(jiàn)發(fā)冷畏寒以及惡心、嘔吐等的不良反應(yīng)。此外，近年實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)期口服脂肪乳導(dǎo)致動(dòng)物誘發(fā)非酒精性脂肪肝及骨質(zhì)疏松癥(脂肪乳劑致動(dòng)物骨質(zhì)疏松及復(fù)方丹參的防治作用觀察，中國(guó)學(xué)位論文文摘數(shù)據(jù)庫(kù)，尤婷婷)。因此，該專(zhuān)利制備的欖香烯脂肪乳注射液臨床使用有一定的局限性，并非所有癌癥患者均可以使用。另外，專(zhuān)利乙采用115t:滅菌30分鐘，其F。值二7.53分鐘，亦不符合2005年版《中華人民共和國(guó)藥典》提出的濕熱滅菌F。值一般不低于8分鐘，保證符合無(wú)菌標(biāo)準(zhǔn)SAL《10—6。作為天然藥物的載藥乳劑，專(zhuān)利乙同樣未對(duì)原料藥材的來(lái)源加以限定，也未對(duì)原料藥材、原料藥、制劑的有效成分進(jìn)行指紋圖譜的鑒別，未能進(jìn)行植物藥的物種控制和真?zhèn)舞b定，不利于藥品質(zhì)量的"安全、穩(wěn)定、有效、可控"。作為大容量靜脈輸注藥品，專(zhuān)利乙中亦未對(duì)溶血、滲透壓等重要的安全性項(xiàng)目進(jìn)行質(zhì)量控制，按照專(zhuān)利乙制備的注射液，由于未控制大豆卵磷脂中溶血磷脂的含量，仍然存在使成品產(chǎn)生溶血，靜脈給藥時(shí)發(fā)生注射疼痛、靜脈炎、藥物熱、機(jī)體產(chǎn)生臟器損害的安全風(fēng)險(xiǎn)。溶血磷脂的病理、生理作用溶血磷脂(lysoph-osphatidylcholine)是由磷脂失去一個(gè)脂肪酸基團(tuán)所形成的磷脂的統(tǒng)稱(chēng)，是普通磷脂被磷脂酶A水解或在約pH4.8時(shí)由磷脂氧化水解生成的一組化合物。已清楚低濃度(2X10—4mol/L)的溶血磷脂就能使細(xì)胞膜溶解，更低的濃度則使紅細(xì)胞的形狀發(fā)生很大的改變，形成棘皮細(xì)胞，所以公認(rèn)溶血磷脂對(duì)紅細(xì)胞具有強(qiáng)溶血作用。因溶血會(huì)使毛細(xì)血管通透性增加而引起出血，使組織釋放組織胺、5_羥色胺、腎上腺素、緩動(dòng)素等等，間接影響心血管及神經(jīng)系統(tǒng)的功能并剌激發(fā)熱中樞產(chǎn)生藥物熱。當(dāng)大劑量溶血磷脂進(jìn)入人體時(shí)，還會(huì)因短時(shí)間內(nèi)紅細(xì)胞大量溶解，導(dǎo)致人體出現(xiàn)各種出血癥狀如嘔血、便血、尿血、皮下出血等等，嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致死亡。此外，大量外源性溶血磷脂如溶血磷脂酰膽堿(LPC)、溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)、溶血磷脂酰絲胺酸(LPS)、溶血磷脂酰肌醇(LPI)等溶血磷脂類(lèi)分子，進(jìn)入人體后，會(huì)在機(jī)體內(nèi)磷脂酶D(PLD)的作用下產(chǎn)生溶血磷脂酸(LPA)(溶血磷脂酸在缺血性腦血管病中的作用，臨床薈萃，2006年IO月5日，第21巻第19期，P1427)。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外醫(yī)學(xué)界有關(guān)溶血磷脂尤其是LPA、LPC等等對(duì)心、腦血管、腎炎、慢性疼痛等疾病的關(guān)聯(lián)性研究深入細(xì)致、方興未艾。如LPA是一種具有多種生物學(xué)活性的磷脂信使，對(duì)各種血細(xì)胞、血管壁細(xì)胞、心肌細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等具有多種特異性作用。研究發(fā)現(xiàn)，在一定條件下LPA會(huì)促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化和血栓形成，從而可能加重心血管疾病特別是缺血性心臟病的發(fā)展。在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化早期，LPA增加血管內(nèi)膜的通透性，使內(nèi)膜的屏障功能異常，并在發(fā)病的后期加重血小板在內(nèi)膜上的聚集和黏附，動(dòng)脈內(nèi)血栓形成，甚至粥樣斑塊破裂，冠狀動(dòng)脈閉塞，以致發(fā)生心肌缺血或心肌梗死丄PA還具有促進(jìn)心肌細(xì)胞肥大和成纖維細(xì)胞增殖等作用，加重了心肌梗死后的心肌肥厚，因此，LPA與缺血性心臟病的發(fā)生和發(fā)展有密切關(guān)系(溶血磷脂酸與缺血性心臟病，醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)，V01.19No2P172)。實(shí)驗(yàn)還證實(shí)，LPA能引起海馬神經(jīng)元凋亡，tau蛋白異常磷酸化以及腦內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接通透性增加，與缺血性腦血管病和血管性癡呆的病理學(xué)改變密切相關(guān)，提示在病理情況下LPA能引起血腦屏障開(kāi)放，并通過(guò)血腦屏障進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，作用于各類(lèi)細(xì)胞而產(chǎn)生不同的病變效應(yīng)，包括引發(fā)腦血管痙攣，LPA對(duì)缺血性腦血管疾病發(fā)生發(fā)展起著至關(guān)重要的作用(溶血磷脂酸對(duì)血腦屏障通透性的影響，國(guó)際腦血管病雜志，2006年4月第14巻第4期，P286)。研究表明，LPA具有神經(jīng)毒性作用，通過(guò)增加線粒體內(nèi)活性氧(ROS)形成，繼而誘導(dǎo)神經(jīng)元凋亡可能是其損傷機(jī)制之一(溶血磷脂酸與神經(jīng)系統(tǒng)，山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2004年8月，35(4)P399;溶血磷脂酸誘導(dǎo)小腦顆粒細(xì)胞氧化性損傷與凋亡，萃中與神經(jīng)疾病，2004年12月第11巻第6期，P321)。溶血磷脂酰膽堿(LPC)是氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的主要活性成分，也具有廣泛的生物學(xué)效應(yīng)，參與動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的各個(gè)環(huán)節(jié)。LPC可以誘發(fā)炎癥反應(yīng)，增加氧化應(yīng)激，干擾血管內(nèi)皮功能，破壞斑塊穩(wěn)定性(溶血磷脂酰膽堿在動(dòng)脈粥樣硬化中的作用，中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志，2006年第14巻第12期，P1083)。日本長(zhǎng)崎大學(xué)的科學(xué)家通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，嗎啡和抗炎藥物等無(wú)法抑制的慢性疼痛(也稱(chēng)為神經(jīng)性疼痛，由神經(jīng)受傷、疼痛感覺(jué)過(guò)敏引起，包括由癌癥引起的疼痛、腰痛，患帶狀皰疹后的疼痛等)系由溶血磷脂所致(日本科學(xué)家發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致慢性疼痛的物質(zhì)溶血磷脂，2004.06.21來(lái)自新浪科技)。由于溶血磷脂的強(qiáng)致溶血性和對(duì)機(jī)體潛在的損害，在制備注射用乳劑時(shí)對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行"溶血"等安全性指標(biāo)的檢測(cè)顯得尤為重要，中國(guó)國(guó)家藥典委員會(huì)在網(wǎng)站發(fā)布國(guó)藥典化發(fā)〔2007〕4號(hào)"注射劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高工作會(huì)議紀(jì)要"(2007.1.10)，公布的首批擬提高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的注射液品種中欖香烯注射液亦被要求增加"其他(溶血與凝聚、異常毒性、過(guò)敏試驗(yàn)、有關(guān)物質(zhì))"等的檢測(cè)項(xiàng)目(《注射劑標(biāo)準(zhǔn)提高工作方案》及附表)，標(biāo)志著我國(guó)藥監(jiān)部門(mén)對(duì)該產(chǎn)品存在溶血風(fēng)險(xiǎn)的高度重視。滅菌條件終端濕熱滅菌是注射液(乳劑)關(guān)鍵生產(chǎn)工序，我國(guó)SFDA《化學(xué)藥品注射劑和多組分生化藥注射劑基本技術(shù)要求》(國(guó)食藥監(jiān)注[2008]7號(hào)，08.1.10)要求"(3)小容量注射劑①應(yīng)首選終端滅菌工藝，相關(guān)技術(shù)要求同大容量注射劑。"即"①應(yīng)采取終端滅菌工藝，建議首選過(guò)度殺滅法(F?！?2)，如產(chǎn)品不能耐受過(guò)度殺滅的條件，可考慮采用殘存概率法(8《F。<12)，但均應(yīng)保證產(chǎn)品滅菌后的SAL不大于10—6。采用其它F。值小于8的終端滅菌條件的工藝，原則上不予認(rèn)可。"按照國(guó)際慣例如英國(guó)藥典(1973年)、美國(guó)藥典(1980增補(bǔ)版)均記載的對(duì)滅菌制劑的無(wú)菌保證的量化標(biāo)準(zhǔn)F。值不小于8分鐘，即經(jīng)滅菌后，產(chǎn)品中污染菌存活的概率不得大于百萬(wàn)分之一(無(wú)菌標(biāo)準(zhǔn)SAL《10—6)。F。值越低對(duì)降低生產(chǎn)過(guò)程中微生物污染的要求就嚴(yán)格，即同等微生物污染控制能力水平時(shí)，經(jīng)滅菌之后的藥品因?yàn)闇缇粡氐?、殘留存活微生物的概率就越高。由于藥品關(guān)系人的生命安全，不能允許存在由潛在的質(zhì)量隱患導(dǎo)致的臨床用藥安全風(fēng)險(xiǎn)，故需要研究一種安全有效的欖香烯注射液。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了一種無(wú)質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)的、安全有效的抗癌藥欖香烯注射液及其制備方法，通過(guò)限制輔料大豆卵磷脂中溶血磷脂的含量、增加滲透壓調(diào)節(jié)劑、濕熱滅菌條件提升F。值至8分鐘15分鐘，將注射液的配制過(guò)程在惰性氣體的保護(hù)下進(jìn)行，杜絕磷脂因氧化水解產(chǎn)生溶血磷脂，克服了以往欖香烯注射液由于配方及滅菌條件不能滿足無(wú)菌保證值(SAL《10—6)導(dǎo)致潛在的質(zhì)量安全性風(fēng)險(xiǎn)，如溶血作用、血管剌激性、滅菌后微生物存活等等，降低了臨床ADR如靜脈炎、注射疼痛、藥物熱等發(fā)生率，以及制劑帶入的溶血磷脂導(dǎo)致對(duì)人體產(chǎn)生近、遠(yuǎn)期的致病性，或因微生物殺滅不徹底造成患者感染敗血癥等質(zhì)量隱患。本發(fā)明提供的注射液不僅解決了以往欖香烯注射液的溶血作用和血管剌激性，而且使欖香烯注射液熱穩(wěn)定性良好，可保證滅菌效果，F(xiàn)。值>8分鐘，無(wú)菌保證值SAL>10—6?！N欖香烯注射液，以注射液的總體積1L計(jì)，由下列原料藥和藥用輔料組成欖香烯5g20g、注射用大豆卵磷脂15g60g、注射用油5g99.9g、注射用甘油12g30g，余量為磷酸鹽緩沖液。作為優(yōu)選所述的注射用大豆卵磷脂中溶血磷脂酰膽堿的重量百分含量應(yīng)小于3.0%，可選用德國(guó)Lipoid公司生產(chǎn)的注射級(jí)大豆卵磷脂系列產(chǎn)品(如S75、S100等)，該系列大豆卵磷脂產(chǎn)品的安全性關(guān)鍵質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為溶血磷脂酰膽堿(Lysophosphatidylcholine,LPC)的重量百分含量小于3.0%，碘值(Lodlnevalue)為8595，過(guò)氧化物值(Peroxidevalue)小于3。通過(guò)對(duì)大豆卵磷脂中的溶血磷脂進(jìn)行限量控制，避免欖香烯注射液靜脈輸注后由于富含溶血磷脂導(dǎo)致溶血。所述的注射用油作為欖香烯和大豆卵磷脂的溶劑，選用注射用大豆油、注射用紅花油、注射用紫蘇油或注射用棕櫚油中的一種。所述的磷酸鹽緩沖液pH值為6.56.8，濃度優(yōu)選為0.01mol/L，可用藥用磷酸氫二鈉和藥用磷酸二氫鈉來(lái)配制，其中藥用磷酸氫二鈉可選用無(wú)水磷酸氫二鈉或磷酸氫二鈉水合物，藥用磷酸二氫鈉可選用無(wú)水磷酸二氫鈉或磷酸二氫鈉水合物。所述的欖香烯是由姜科植物溫郁金(CurcumawenyujinY.H.ChenetC.Ling)的干燥根莖經(jīng)水蒸汽蒸餾獲得的莪術(shù)油中提取的；溫郁金又名溫莪術(shù)(Wenezhu，拉丁名RhizomaCurcumae)，選用浙江省溫州地區(qū)道地產(chǎn)區(qū)的溫郁金，采收期一般為1月份。所述的莪術(shù)油的指紋圖譜與莪術(shù)油標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行對(duì)照，相似度不得低于0.95。所述的莪術(shù)油標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜采用氣相色譜法記錄117分鐘，標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜應(yīng)有19個(gè)特征峰，以e-欖香烯色譜峰的保留時(shí)間為1計(jì)算相對(duì)保留時(shí)間，所述19個(gè)特征峰的相對(duì)保留時(shí)間依次為0.2857，0.3011，0.3428，0.4819，0.5649，0.5904，0.6394，0.6745，0.9073，0.9861，1，1.0453，1.0640，1.0723，1.1074，1.1629，1.1726，1.3455，1.5062;以P_欖香烯色譜峰的峰面積為1計(jì)算相對(duì)峰面積，所述19個(gè)特征峰的相對(duì)峰面積依次為0.1216±0.OIOO，O.2198±0.0170，0.0572±0.0042，0.2693±0.0240，0.4973±0.0308，0.1953±0.0144，0.0416±0.0031，0.0823±0.0057，0.1545±0.0011,0.0335±0.00005，1.0000，0.1873±0.0060，0.0205±0.0006，0.0653±0.0023，0.1096±0.0051，0.3731±0.0084，0.0905±0.0077，0.5639±0.0216，0.2406±0.0617。所述的欖香烯的指紋圖譜與欖香烯標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行對(duì)照，相似度不得低于0.995。所述的欖香烯標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜采用氣相色譜法記錄47分鐘，標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜應(yīng)有6個(gè)特征峰，以P-欖香烯色譜峰的保留時(shí)間為l計(jì)算相對(duì)保留時(shí)間，所述6個(gè)特征峰的相對(duì)保留時(shí)間依次為0.9061，0.9851，1，1.0439，1.0623，1.0709;以P_欖香烯色譜峰的峰面積為1計(jì)算相對(duì)峰面積，所述6個(gè)特征峰的相對(duì)峰面積依次為0.0297±0.0131，0.0392±0.0049，1.OOOO，O.1153±0.0214，0.0155±0.0109，0.0530±0.0320。所述的欖香烯注射液的指紋圖譜與欖香烯注射液標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行對(duì)照，相似度不得低于O.995。所述的欖香烯注射液標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜采用氣相色譜法記錄47分鐘，標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜應(yīng)有6個(gè)特征峰，以e-欖香烯色譜峰的保留時(shí)間為1計(jì)算相對(duì)保留時(shí)間，所述6個(gè)特征峰的相對(duì)保留時(shí)間依次為0.9063，0.9853，1.0000，1.0440，1.0625，1.0710;以e-欖香烯色譜峰的峰面積為1計(jì)算相對(duì)峰面積，所述6個(gè)特征峰的相對(duì)峰面積依次為0.0300±0.0134，0.0395±0.0049，1.OOOO，O.1141±0.0208，0.0154±0.0108，0.0493±0.0301。所述的莪術(shù)油的指紋圖譜、莪術(shù)油標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜、欖香烯的指紋圖譜、欖香烯標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜、欖香烯注射液指紋圖譜和欖香烯注射液標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜均按照中國(guó)藥典2005版附錄VIE氣相色譜法進(jìn)行測(cè)定。所述的欖香烯注射液的制備方法，包括步驟(1)取藥用磷酸氫二鈉和藥用磷酸二氫鈉，加注射用水溶解后再加入注射用甘油，攪拌均勻，用注射用水定容，配制pH值為6.56.8、磷酸鹽濃度為0.Olmol/L的磷酸鹽緩沖液_甘油溶液，過(guò)濾后濾液即為水相；(2)在惰性氣體保護(hù)下將欖香烯、注射用大豆卵磷脂、注射用油混合均勻，于溫度《95t:的夾套水浴中加熱至完全熔融，制成油相；(3)在惰性氣體保護(hù)下，將上述油相乳化后加入占水相總重量50%90%、預(yù)熱至40°C8(TC的水相中，循環(huán)乳化10分鐘60分鐘后，加入余下的40°C8(TC的水相定容，在40°C8(TC乳化后于90MPa620MPa的高壓中均質(zhì)直至粒徑《1Pm的粒子數(shù)目大于90%，經(jīng)過(guò)濾，濾液經(jīng)濕熱滅菌至F。值為8分鐘15分鐘后即得欖香烯注射液。步驟(3)中，所述的濕熱滅菌條件選自114t:濕熱滅菌40分鐘、116t:濕熱滅菌30分鐘、117t:濕熱滅菌25分鐘或12rC濕熱滅菌15分鐘中的任意一種。所述的惰性氣體可選用本領(lǐng)域廣義上所指的惰性氣體，如氮?dú)狻⒑?、氬氣等，?yōu)選氮?dú)狻１景l(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)本發(fā)明采用德國(guó)Lipoid公司的大豆卵磷脂，其溶血磷脂酰膽堿重量百分比含量小于3%，可對(duì)注射液中溶血磷脂的含量進(jìn)行控制，同時(shí)改進(jìn)制備方法如油相混合時(shí)抽真空、充氮，有效避免各種磷脂成分因氧化水解產(chǎn)生溶血磷脂。(2)欖香烯注射液給藥方式為靜脈注射，并且其臨床注射劑量有增大趨勢(shì)，其滲透壓應(yīng)與血漿相等或接近，才能保證臨床用藥的安全，本發(fā)明中加入了注射用甘油以調(diào)節(jié)注射液的滲透壓，使其接近血液的滲透壓，經(jīng)調(diào)整后欖香烯注射液的滲透壓達(dá)到了295315m0smol/kg，與血液滲透壓313m0smol/kg接近。(3)本發(fā)明采用濕熱滅菌，滅菌條件為F。值8分鐘15分鐘，如114。C濕熱滅菌40分鐘(F。值8.0分鐘)或116。C濕熱滅菌30分鐘(F。值9.48分鐘)或121。C濕熱滅菌15分鐘(F。值15分鐘)，符合中國(guó)藥典和SFDA的最新技術(shù)要求，為制劑無(wú)菌量化標(biāo)準(zhǔn)SAL(無(wú)菌保證值)>10—6，提供了安全的前提。(4)本發(fā)明中僅用少量注射用油作為油相溶劑，制備的小容量欖香烯注射液，以每日注射6支欖香烯注射液(600mg/日)計(jì)，人體僅注入注射用油1.211.88g/日(系活性成分的219.8倍)，在飲食正常范圍內(nèi)，無(wú)臨床使用的禁忌，可供臨床廣泛使用。(5)本發(fā)明中無(wú)輔料膽固醇，膽固醇系牛、馬、羊、豬等動(dòng)物大腦中提取，雖然經(jīng)過(guò)大量的研究，但目前在歐洲爆發(fā)的瘋牛病、瘋羊病等病原體及傳染源至今仍然不明，一旦瘋牛病、瘋羊病等在中國(guó)境內(nèi)發(fā)生，注射液含有膽固醇就存在感染瘋牛病等潛在的質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)。(6)通過(guò)穩(wěn)定性考察已證實(shí)本發(fā)明的欖香烯注射液在三年有效期限內(nèi)不發(fā)生破乳現(xiàn)象，各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)穩(wěn)定，無(wú)溶血作用、無(wú)血管剌激性、無(wú)滅菌后存活微生物的風(fēng)險(xiǎn)(配合滅菌工藝驗(yàn)證)。(7)本發(fā)明通過(guò)對(duì)原料、原料藥、制劑指紋圖譜的控制，達(dá)到鑒別真?zhèn)?不同藥材物種來(lái)源、不同藥材產(chǎn)地來(lái)源)的目的。本發(fā)明制備的欖香烯注射液主要質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)如下1.性狀為乳白色的均勻乳狀液體(見(jiàn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)WS「(X-095)-2000Z)。2.鑒別見(jiàn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)WS「(X-095)-2000Z。3.溶血陰性(見(jiàn)中國(guó)藥典2005版一部附錄XVIIIB中藥注射劑安全性檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則溶血與凝聚檢查法)。4.滲透壓295315m0smol/Kg(見(jiàn)中國(guó)藥典2005版二部附錄IXG滲透壓摩爾濃度測(cè)定法)。5.pH值5.57.0(見(jiàn)WS「(X-095)-2000Z標(biāo)準(zhǔn))。6.粒度粒徑《lym的粒子數(shù)目大于90X(見(jiàn)中國(guó)藥典2005版二部附錄IB注射劑之注射用濃溶液乳劑)。7.含量含欖香烯應(yīng)為標(biāo)示量的80.0110.0%(見(jiàn)質(zhì)量標(biāo)WS「(X-095)-2000Z標(biāo)準(zhǔn))。8.熱原應(yīng)符合規(guī)定(見(jiàn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)WS「(X-095)-2000Z)。9.其他除澄明度不檢查外，應(yīng)符合注射劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定(見(jiàn)中國(guó)藥典2005版二部附錄IB)。本發(fā)明制備的欖香烯注射液規(guī)格及適應(yīng)癥、用法用量如下規(guī)格小容量，100mg/20ml、200mg/20ml、300mg/20ml、400mg/20ml、200mg/40ml、300mg/20ml、400mg/20ml;大容量，250mg/50ml、500mg/50ml、1000mg/50ml、500mg/100ml、1000mg/100ml、2000mg/100ml;適應(yīng)癥本品合并放、化療常規(guī)方案，對(duì)肺癌、肝癌、食道癌、鼻咽癌、腦癌、骨轉(zhuǎn)移癌等惡性腫瘤可以增強(qiáng)療效，降低放、化療的毒副作用。并可用于介入、腔內(nèi)化療及癌性胸腹水的治療。用法用量靜注一次0.40.6g，一日1次，23周為一療程。用于惡性胸腹水治療一般200mg400mg/m2，抽胸腹水后，胸腔或腹腔內(nèi)注射，每周12次或遵照醫(yī)囑。具體實(shí)施方式實(shí)施例1:取0.284Kg藥用磷酸氫二鈉(Na2HP04)禾P0.470Kg藥用磷酸二氫鈉(NaH2P042H20)，加適量注射用水溶解后，加入12.5Kg注射用甘油，加注射用水至50萬(wàn)ml，攪拌均勻，配制磷酸鹽濃度為0.01mol/L的磷酸鹽緩沖液_甘油溶液，pH值為6.6，經(jīng)0.45iim聚醚砜濾芯過(guò)濾，濾液即為水相。取2.5Kg欖香烯、7.5Kg注射用大豆油和7.5Kg德國(guó)Lipoid公司生產(chǎn)的注射級(jí)大豆卵磷脂S75，放置于油相罐內(nèi)，抽真空、充氮、攪拌、9(TC夾套水浴加熱至完全混合熔融，制成油相。先取占水相總重量的60X、預(yù)熱至63t:的水相至剪切罐中，加入油相循環(huán)剪切乳化40分鐘；再加入余下的63t:的水相定容至50萬(wàn)ml，再剪切乳化若干分鐘，取樣檢測(cè)含量、pH等符合規(guī)定后在100MPa的高壓均質(zhì)機(jī)中于72t:乳化5遍；取樣檢測(cè)粒度，粒徑《1ym的粒子數(shù)目大于90%，檢驗(yàn)符合要求后，經(jīng)3iim聚偏二氟乙烯濾膜過(guò)濾，灌封于安瓿中，充氮、封口，用旋轉(zhuǎn)式滅菌器在114t:濕熱滅菌40分鐘，即得欖香烯注射液，F(xiàn)。值為8.0分鐘。實(shí)施例2:除了濕熱滅菌的條件為116t:滅菌30分鐘之外，其余操作均同實(shí)施例l，制備欖香烯注射液，其F。值為9.48分鐘。實(shí)施例3:除了濕熱滅菌的條件為12rC滅菌15分鐘之外，其余操作均同實(shí)施例l，制備欖香烯注射液，其F。值為15分鐘。實(shí)施例4:取0.715Kg藥用磷酸氫二鈉(Na2HP0412H20)禾P0.470Kg藥用磷酸二氫鈉(NaH2P042H20)，加適量注射用水溶解后，加入13.5Kg注射用甘油，加注射用水至50萬(wàn)ml，攪拌均勻，配制磷酸鹽濃度為0.Olmol/L的磷酸鹽緩沖液_甘油溶液，pH值為6.5，經(jīng)0.45iim聚醚砜濾芯過(guò)濾，濾液即為水相。取5.0Kg欖香烯，15.OKg注射用大豆油，15.OKg德國(guó)Lipoid公司生產(chǎn)的注射級(jí)大豆卵磷脂S75，放置于油相罐內(nèi)，抽真空、充氮、攪拌、夾套水浴7(TC加熱至完全混合熔融，制成油相。先取占水相總重量的60%、預(yù)熱至65t:的水相至剪切罐中，加入油相循環(huán)剪切乳化30分鐘；加入余下的65t:的水相定容至50萬(wàn)ml，再剪切乳化若干分鐘，取樣檢測(cè)含量、pH等符合規(guī)定后，再經(jīng)壓強(qiáng)為500MPa的高壓均質(zhì)機(jī)中于63t:乳化3遍；取樣檢測(cè)粒度，粒徑《1ym的粒子數(shù)目大于90%，檢驗(yàn)符合要求后，經(jīng)3m聚四氟乙烯濾膜過(guò)濾，灌封于安瓿中，充氮、封口，用旋轉(zhuǎn)式滅菌器在114t:濕熱滅菌40分鐘，即得欖香烯注射液，F(xiàn)。值為8.O分鐘。實(shí)施例5:除了濕熱滅菌的條件為116t:滅菌30分鐘之外，其余操作均同實(shí)施例4，制備欖香烯注射液，其F。值為9.48分鐘。實(shí)施例6:除了濕熱滅菌的條件為12rC滅菌15分鐘之外，其余操作均同實(shí)施例4，制備欖香烯注射液，其F。值為15分鐘。實(shí)施例7:取0.284Kg藥用磷酸氫二鈉(Na2HP04)和0.470Kg藥用磷酸二氫鈉(NaH2P0421120)，加適量注射用水溶解后，加入14.OKg注射用甘油，加注射用水至50萬(wàn)ml，攪拌均勻，配制磷酸鹽濃度為0.Olmol/L的磷酸鹽緩沖液_甘油溶液，pH值為6.7，經(jīng)0.45iim聚醚砜濾芯過(guò)濾，濾液即為水相。取10.0Kg欖香烯，30Kg注射用大豆油，30Kg德國(guó)Lipoid公司生產(chǎn)的注射級(jí)大豆卵磷脂S100，放置于油相罐內(nèi)，抽真空、充氮、攪拌、夾套水浴5(TC加熱至完全混合熔融，制成油相。先取占水相總量60%、預(yù)熱至6rC的水相至剪切罐中，加入油相循環(huán)剪切乳化15分鐘；加入余下的6rC的水相定容至50萬(wàn)ml，再剪切乳化若干分鐘，取樣檢測(cè)含量、pH等負(fù)荷規(guī)定后，在580MPa的高壓均質(zhì)機(jī)中于63t:乳化3遍；取樣檢測(cè)粒度，粒徑《1Pm的粒子數(shù)目大于90^，檢驗(yàn)符合要求后，經(jīng)3iim聚四氟乙烯濾膜過(guò)濾，灌封于安瓿中，充氮、封口，用旋轉(zhuǎn)式滅菌器在114t:濕熱滅菌40分鐘，即得欖香烯注射液，F(xiàn)。值為8.0分鐘。實(shí)施例8:除了濕熱滅菌的條件為116t:滅菌30分鐘之外，其余操作均同實(shí)施例7，制備欖香烯注射液，其F。值為9.48分鐘。實(shí)施例9:除了濕熱滅菌的條件為12rC滅菌15分鐘之外，其余操作均同實(shí)施例7，制備欖香烯注射液，其F。值為15分鐘。實(shí)施例19中所用的欖香烯的指紋圖譜與欖香烯標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度均不低于O.995，且實(shí)施例19中制得的欖香烯注射液與欖香烯注射液標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度均不低于O.995?！?、本發(fā)明制備的欖香烯注射液的檢測(cè)結(jié)果對(duì)實(shí)施例1、實(shí)施例4和實(shí)施例7制備的欖香烯注射液進(jìn)行檢測(cè)，其檢測(cè)結(jié)果如表l所示表1<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>二、穩(wěn)定性試驗(yàn)對(duì)實(shí)施例1至實(shí)施例9制備的注射液進(jìn)行影響因素為光照、4(TC、6(rC、7(rC的加速實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果光照條件下放置10天、4(TC恒溫放置6個(gè)月、6(TC、7(TC各恒溫放置至3個(gè)月后，均未出現(xiàn)破乳現(xiàn)象，溶血檢測(cè)呈陰性，性狀、乳粒粒徑、pH、含量、滲透壓等各項(xiàng)指標(biāo)均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。三、以實(shí)施例1制備的欖香烯注射液為代表與專(zhuān)利甲的欖香烯乳注射液的特殊安全性比較試驗(yàn)，前后兩者的濃度及規(guī)格相當(dāng)。1、試驗(yàn)依據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》一部附錄XVIIIB中藥注射劑安全性檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則。2、試驗(yàn)對(duì)象本發(fā)明制備的欖香烯注射液(簡(jiǎn)稱(chēng)本配方)和其去掉活性成分欖香烯的空白注射液(簡(jiǎn)稱(chēng)本配方空白液)，與專(zhuān)利甲制備的欖香烯乳注射液(簡(jiǎn)稱(chēng)甲配方)和其去掉活性成分欖香烯的空白注射液(簡(jiǎn)稱(chēng)甲配方空白液)。3、特殊安全性實(shí)驗(yàn)結(jié)果毒性經(jīng)急性毒性試驗(yàn)測(cè)半數(shù)致死量(LD5。)，本配方和本配方空白液LD5。均大于40ml/kg，甲配方LD5。為20.9ml/kg，甲配方空白液LD5。為31.3ml/kg;結(jié)論本配方小于甲配方，本配方空白液小于甲配方空白液。血管剌激性經(jīng)血管剌激性試驗(yàn)，本配方肉眼觀察對(duì)家兔耳靜脈無(wú)剌激性，病理檢查對(duì)家兔耳靜脈有輕度剌激性；本配方空白液肉眼觀察對(duì)家兔耳靜脈無(wú)剌激性，病理檢查對(duì)家兔耳靜脈有中度剌激性；甲配方肉眼觀察及病理檢查對(duì)家兔耳靜脈均有中度剌激性；甲配方空白液肉眼觀察及病理檢查對(duì)家兔耳靜脈均有中度剌激性；結(jié)論甲配方家兔耳靜脈血管剌激性大于本配方血管剌激性；甲配方空白液家兔耳靜脈血管剌激性大于本配方空白液血管剌激性。降壓試驗(yàn)經(jīng)降壓試驗(yàn)，本配方和本配方空白液兩者與磷酸組胺對(duì)照品比較dt所致的反應(yīng)值均小于ds反應(yīng)值的一半；甲配方與磷酸組胺對(duì)照品比較dt所致的反應(yīng)值均小于ds反應(yīng)值；甲配方空白液與磷酸組胺對(duì)照品比較dt所致的反應(yīng)值均大于ds反應(yīng)值；結(jié)論本配方降壓幅度小于甲配方，本配方空白液降壓幅度小于甲配方空白液。過(guò)敏反應(yīng)均無(wú)過(guò)敏反應(yīng)。四、本發(fā)明的欖香烯注射液與專(zhuān)利甲的欖香烯乳注射液的藥理試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較取本發(fā)明實(shí)施例1制備的欖香烯注射液，研究其對(duì)裸小鼠SGC-7901胃癌的實(shí)驗(yàn)治療作用。從60只預(yù)先接種SGC-7901裸小鼠中選擇腫瘤生長(zhǎng)較一致的47只裸小鼠隨機(jī)分成6組。1)溶劑對(duì)照組注射未添加欖香烯的空白溶劑(即空白乳劑)，12只；2)實(shí)施例l-100mg/kg組，6只；3)實(shí)施例l-50mg/kg組，6只；4)實(shí)施例l_25mg/kg組，6只；5)專(zhuān)利甲-50mg/kg組，6只；6)Taxol(注射用紫杉醇，百時(shí)美施貴寶公司產(chǎn)品)10mg/kg組，6只。溶劑對(duì)照組每日靜脈注射空白乳劑，欖香烯各給藥組小鼠每日給予相應(yīng)劑量的藥液；Taxol組分別于第1天、第3天、第5天、第7天、第9天、第11天、第13天、第16天、第18天尾靜脈給藥共9次，第20天結(jié)束實(shí)驗(yàn)。各實(shí)驗(yàn)組裸小鼠體重在藥物治療前后均無(wú)顯著降低，并且無(wú)動(dòng)物死亡。溶劑對(duì)照組相對(duì)瘤體積(RTV)為11.1，專(zhuān)利甲-50mg/kg組RTV值為7.6，相應(yīng)的相對(duì)腫瘤增值率(T/C)為68.8%，本發(fā)明實(shí)施例l-100mg/kg組、實(shí)施例l-50mg/kg組和實(shí)施例l-25mg/kg組的RTV值分別為5.1、6.6和6.5，相應(yīng)的相對(duì)腫瘤增值率(T/C)分別為46.1%、59.1%和58.6%。而陽(yáng)性對(duì)照Taxol10mg/kg組RTV值為1.7，相應(yīng)的相對(duì)腫瘤增值率(T/C)為14.9%，具體見(jiàn)表2。20天后剖殺取瘤塊稱(chēng)重，專(zhuān)利甲-5011^/1^組人非小細(xì)胞肺胃癌SGC-7901裸小鼠移植瘤平均重量為0.52±0.10g，其抑瘤率為36.6%。本發(fā)明實(shí)施例l-100mg/kg組、實(shí)施例l-50mg/kg組和實(shí)施例l-25mg/kg組的裸小鼠移植瘤平均重量分別為0.41±0.10g、0.54±0.10g、0.56士0.17g，相對(duì)應(yīng)的腫瘤抑瘤率分別為50.0%、34.1%、31.7%。Taxol10mg/kg組移植瘤重量為0.13±0.06g，相對(duì)應(yīng)的腫瘤抑瘤率為84.1%，具體見(jiàn)表3。表2欖香烯注射液對(duì)人胃癌SGC-7901裸小鼠移植瘤的實(shí)驗(yàn)效果<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表2中，dl表示給藥第1天，d24表示給藥第24天。與同一天的溶劑對(duì)照組相比承表示P<0.01，***表示P<0.0001。表3欖香烯注射液對(duì)人胃癌SGC-7901裸小鼠移植瘤腫瘤重量的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表3中，與同一天的溶劑對(duì)照組相比^表示P<0.01。取本發(fā)明實(shí)施例4制備的欖香烯注射液，研究其對(duì)裸小鼠CHP126原位腦癌的實(shí)驗(yàn)治療作用。將原位接種CHP126神經(jīng)母細(xì)胞瘤的裸鼠隨機(jī)分為溶劑對(duì)照組、專(zhuān)利甲_50mg/kgg組、實(shí)施例4-25mg/kg組、實(shí)施例4-50mg/kg組和實(shí)施例4-100mg/kg組，以及Taxol30mg/kg組。溶劑對(duì)照組每日靜脈注射空白乳劑，欖香烯各給藥組小鼠每日給予相應(yīng)劑量的藥液，Taxol組分別于第1天、第3天、第5天、第8天、第10天、第12天、第15天尾靜脈給藥共10次，第17天結(jié)束實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取裸鼠腦部在熒光體視顯微鏡下觀察，采用ImageProPlus6.0軟件測(cè)定熒光面積和熒光強(qiáng)度，計(jì)算熒光相對(duì)面積。各實(shí)驗(yàn)組裸小鼠體重在藥物治療前后均無(wú)顯著降低，并無(wú)動(dòng)物死亡。溶劑對(duì)照組熒光相對(duì)面積(F/B)為0.56±0.22，專(zhuān)利甲-50mg/kg組為0.35±0.15，實(shí)施例4-25mg/kg組、實(shí)施例4-50mg/kg組和實(shí)施例4-100mg/kg組分別為0.43±0.17、0.34±0.16和0.27±0.15。而陽(yáng)性對(duì)照Taxol10mg/kg組為0.08±0.02，具體見(jiàn)表4。并進(jìn)一步分析各實(shí)驗(yàn)組熒光強(qiáng)度，溶劑對(duì)照組66.2±22.3(a.u.)，欖香烯注射液專(zhuān)利甲-50mg/kg組為44.0±23.6(a.u.)，實(shí)施例4_25mg/kg組、實(shí)施例4-50mg/kg組和實(shí)施例4-100mg/kg組分別為46.3±19.4(a.u.)、42.2±17.3(a.u.)和39.2±21.4(a.u.)。而陽(yáng)性對(duì)照Taxol10mg/kg組為7.3±3.0(a.u.)，具體見(jiàn)表5。表4.欖香烯注射液對(duì)原位人神經(jīng)母細(xì)胞瘤CHP126腫瘤熒光相對(duì)面積的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>表4中，與同一天的溶劑對(duì)照組相比Z表示P<0.05，^表示P<0.001。表5欖香烯注射液對(duì)原位人神經(jīng)母細(xì)胞瘤CHP126腫瘤熒光強(qiáng)度的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>表5中，與同一天的溶劑對(duì)照組相比*表示P<0.01，***表示P<0.001。取本發(fā)明實(shí)施例7制備的欖香烯注射液，研究其對(duì)裸小鼠U87MG腦癌的實(shí)驗(yàn)治療作用。從60只預(yù)先接種U87MG裸小鼠中選擇腫瘤生長(zhǎng)較一致的32只裸小鼠隨機(jī)分成5組。1)溶劑對(duì)照組(欖香烯空白乳)，8只；2)實(shí)施例7-120mg/kg組，6只；3)實(shí)施例7-60mg/kg組，6只；4)實(shí)施例7-30mg/kg組，6只；5)專(zhuān)利甲-60mg/kg組，6只。溶劑對(duì)照組每日靜脈注射空白乳劑，欖香烯各給藥組小鼠每日給予相應(yīng)劑量的藥液，連續(xù)給藥16天，于第17天處死裸小鼠。各組裸小鼠實(shí)驗(yàn)期間體重均無(wú)顯著性變化。溶劑對(duì)照組相對(duì)瘤體積(RTV)為46.7，實(shí)施例7-120mg/kg、實(shí)施例7-60mg/kg、實(shí)施例7-30mg/kg組RTV值分別為25.0、28.5和24.2，相應(yīng)的相對(duì)腫瘤增值率(T/C)分別為53.6%，60.7%及51.9%。專(zhuān)利甲-60mg/kg組RTV值為24.4，相對(duì)腫瘤增值率(T/C)為52.4%，具體見(jiàn)表6。給藥16天后剖殺取瘤塊稱(chēng)重，實(shí)施例7-120mg/kg、實(shí)施例7-60mg/kg、實(shí)施例7-30mg/kg組人腦癌裸小鼠移植瘤平均重量分別為1.18±0.10g、1.26±0.06g和1.14±0.09g，其抑瘤率分別為38.4%，34.2%，及40.6%，而專(zhuān)利甲-60mg/kg組小鼠移植瘤平均重量為1.29±0.15g，抑瘤率為32.8%，具體見(jiàn)表7。表6.欖香烯注射劑對(duì)人腦癌U87MG裸小鼠移植瘤的實(shí)驗(yàn)治療作用G±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>表6中，dl表示給藥第l天，dl6表示給藥第16天。與同一天的溶劑對(duì)照組相比***表示P<0.001。表7欖香烯注射劑對(duì)人腦癌U87MG裸小鼠移植瘤腫瘤重量的影響G±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>表7中，與同一天的溶劑對(duì)照組相比廣表示P<O.Ol，微P<0.001。取本發(fā)明實(shí)施例3制備的欖香烯注射液，研究其對(duì)荷A549肺癌裸小鼠的實(shí)驗(yàn)治療作用。從60只預(yù)先接種A549裸小鼠中選擇腫瘤生長(zhǎng)較一致的43只裸小鼠隨機(jī)分成6組。分別為1)溶劑對(duì)照組(欖香烯空白乳)，8只；2)實(shí)施例3-120mg/kg組，7只；3)實(shí)施例3-60mg/kg組，7只；4)實(shí)施例3-30mg/kg組，7只；5)專(zhuān)利甲_60mg/kg組，7只；6)Taxol10mg/kg組，7只。溶劑對(duì)照組每日靜脈注射空白乳劑，欖香烯各給藥組小鼠每日給予相應(yīng)劑量的藥液，連續(xù)給藥33天；Taxol組(給藥前用生理鹽水稀釋)腹腔注射lmg/ml的Taxol溶液0.lml/10g，每周給藥兩到三次，于第34天處死裸小鼠。溶劑對(duì)照組裸小鼠實(shí)驗(yàn)期間體重保持增長(zhǎng)，實(shí)施例3各劑量組、專(zhuān)利甲組及Taxol組裸小鼠體重均出現(xiàn)不同程度下降。溶劑對(duì)照組相對(duì)瘤體積(RTV)為16.9，實(shí)施例3-120mg/kg組、實(shí)施例3-60mg/kg組、實(shí)施例3-30mg/kg組RTV值分別為7.8、9.0和11.2，相應(yīng)的相對(duì)腫瘤增值率(T/C)分別為46.1%、53.2%及66.3%。專(zhuān)利甲60mg/kg組及Taxol10mg/kg組RTV值為9.9及7.9，相對(duì)腫瘤增值率(T/C)為59.0%及46.9%，具體見(jiàn)表8。給藥33天后剖殺取瘤塊稱(chēng)重，實(shí)施例3-120mg/kg組、實(shí)施例3-60mg/kg組、實(shí)施例3-30mg/kg組人肺癌裸小鼠移植瘤平均重量分別為0.25±0.04g、0.30±0.06g和0.34±0.06g，其抑瘤率分別為44.8%、33.4%及24.2%，而專(zhuān)利甲-60mg/kg組及Taxol10mg/kg組小鼠移植瘤平均重量為0.29±0.05g和0.25±0.06g，抑瘤率為35.3%及43.4%，具體見(jiàn)表9。實(shí)施例3-60mg/kg與專(zhuān)利甲-60mg/kg的抑瘤效果相近。表8欖香烯注射液對(duì)人肺癌A549裸小鼠移植瘤的實(shí)驗(yàn)治療作用(；±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>表8中，dl表示給藥第1天，d34表示給藥第34天。與同一天的溶劑對(duì)照組相比承表示P<0.05，**表示P<0.01，***表示P<0.001。表9欖香烯注射液對(duì)人肺癌A549裸小鼠移植瘤腫瘤重量的影響G±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>表9中，與同一天的溶劑對(duì)照組相比Z表示P<0.05，"表示P<0.001。結(jié)論本發(fā)明欖香烯注射液對(duì)小鼠人A549肺癌、人SGC胃癌、人CHP126神經(jīng)母細(xì)胞瘤原位移植瘤及人U87MG腦癌均有實(shí)驗(yàn)治療作用，與專(zhuān)利甲的欖香烯乳注射液在同等劑量下的抑瘤作用無(wú)顯著性差異，其中對(duì)人CHP126神經(jīng)母細(xì)胞瘤原位移植瘤的抗腫瘤活性本專(zhuān)利略好于專(zhuān)利甲。權(quán)利要求一種欖香烯注射液，以注射液的總體積1L計(jì)，由下列原料藥和藥用輔料組成欖香烯5g～20g、注射用大豆卵磷脂15g～60g、注射用油5g～99.9g、注射用甘油12g～30g，余量為磷酸鹽緩沖液。2.如權(quán)利要求1所述的欖香烯注射液，其特征在于所述的注射用大豆卵磷脂中溶血磷脂酰膽堿的重量百分含量小于3.0%。3.如權(quán)利要求2所述的欖香烯注射液，其特征在于所述的注射用大豆卵磷脂為德國(guó)Lipoid公司生產(chǎn)的大豆卵磷脂系列。4.如權(quán)利要求l所述的欖香烯注射液，其特征在于所述的注射用油為注射用大豆油、注射用紅花油、注射用紫蘇油或注射用棕櫚油中的一種。5.如權(quán)利要求1所述的欖香烯注射液，其特征在于所述的欖香烯是從由浙江省溫州地區(qū)溫莪術(shù)的干燥根莖經(jīng)水蒸汽蒸餾獲得的莪術(shù)油中提取的；所述的莪術(shù)油的指紋圖譜與莪術(shù)油標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行對(duì)照，相似度不得低于0.95;所述的莪術(shù)油標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜采用氣相色譜法記錄117分鐘，標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜應(yīng)有19個(gè)特征峰，以e-欖香烯色譜峰的保留時(shí)間為1計(jì)算相對(duì)保留時(shí)間，所述19個(gè)特征峰的相對(duì)保留時(shí)間依次為0.2857,0.3011,0.3428,0.4819,0.5649,0.5904,0.6394,0.6745，0.9073,0.9861，1，1.0453，1.0640，1.0723，1.1074，1.1629，1.1726，1.3455，1.5062;以P_欖香烯色譜峰的峰面積為1計(jì)算相對(duì)峰面積，所述19個(gè)特征峰的相對(duì)峰面積依次為0.1216±0.OIOO，O.2198±0.0170,0.0572±0.0042,0.2693±0.0240,0.4973±0.0308，0.1953±0.0144,0.0416±0.0031,0.0823±0.0057,0.1545±0.0011,0.0335±0.00005，1.0000，0.1873±0.0060，0.0205±0.0006，0.0653±0.0023，0.1096±0.0051，0.3731±0.0084,0.0905±0.0077,0.5639±0.0216,0.2406±0.0617。6.如權(quán)利要求1所述的欖香烯注射液，其特征在于所述的欖香烯的指紋圖譜與欖香烯標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行對(duì)照，相似度不得低于0.995;所述的欖香烯標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜采用氣相色譜法記錄47分鐘，標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜應(yīng)有6個(gè)特征峰，以e-欖香烯色譜峰的保留時(shí)間為1計(jì)算相對(duì)保留時(shí)間，所述6個(gè)特征峰的相對(duì)保留時(shí)間依次為0.9061,0.9851，1，1.0439，1.0623，1.0709;以P_欖香烯色譜峰的峰面積為1計(jì)算相對(duì)峰面積，所述6個(gè)特征峰的相對(duì)峰面積依次為0.0297±0.0131，0.0392±0.0049，1.OOOO，O.1153±0.0214,0.0155±0.0109,0.0530±0.0320。7.如權(quán)利要求1所述的欖香烯注射液，其特征在于所述的欖香烯注射液的指紋圖譜與欖香烯注射液標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行對(duì)照，相似度不得低于0.995;所述的欖香烯注射液標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜采用氣相色譜法記錄47分鐘，標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜應(yīng)有6個(gè)特征峰，以e-欖香烯色譜峰的保留時(shí)間為l計(jì)算相對(duì)保留時(shí)間，所述6個(gè)特征峰的相對(duì)保留時(shí)間依次為0.9063,0.9853，1.0000，1.0440，1.0625，1.0710;以P-欖香烯色譜峰的峰面積為1計(jì)算相對(duì)峰面積，所述6個(gè)特征峰的相對(duì)峰面積依次為0.0300±0.0134，0.0395±0.0049，1.OOOO，O.1141±0.0208,0.0154±0.0108,0.0493±0.0301。8.如權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)所述的欖香烯注射液的制備方法，包括步驟(1)取藥用磷酸氫二鈉和藥用磷酸二氫鈉，加注射用水溶解后再加入注射用甘油，攪拌均勻，用注射用水定容，配制pH值為6.56.8、磷酸鹽濃度為0.01mol/L的磷酸鹽緩沖液_甘油溶液，過(guò)濾后濾液即為水相；(2)在惰性氣體保護(hù)下將欖香烯、注射用大豆卵磷脂、注射用油混合均勻，于溫度《95t:的夾套水浴中加熱至完全熔融，制成油相；(3)在惰性氣體保護(hù)下，將上述油相乳化后加入占水相總重量50%90%、預(yù)熱至40°C80°C的水相中，循環(huán)乳化10分鐘60分鐘后，加入余下的40°C80°C的水相定容，在40°C8(TC乳化后于90MPa620MPa的高壓中均質(zhì)直至粒徑《1Pm的粒子數(shù)目大于90%，經(jīng)過(guò)濾，濾液經(jīng)濕熱滅菌至F。值為8分鐘15分鐘后即得欖香烯注射液。9.如權(quán)利要求8所述的欖香烯注射液的制備方法，其特征在于步驟(3)中，所述的濕熱滅菌條件選自114。C濕熱滅菌40分鐘、116。C濕熱滅菌30分鐘、117。C濕熱滅菌25分鐘或12rC濕熱滅菌15分鐘中的任意一種。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種欖香烯注射液，以注射液的總體積1L計(jì)，由下列原料組成欖香烯5g～20g、注射用大豆卵磷脂15g～60g、注射用油5g～99.9g、注射用甘油12g～30g，余量為磷酸鹽緩沖液。本發(fā)明還公開(kāi)了該欖香烯注射液的制備方法。通過(guò)控制輔料大豆卵磷脂中的溶血磷脂含量、關(guān)鍵的制備工藝條件制備一種無(wú)溶血作用、無(wú)血管刺激性、滅菌后無(wú)微生物存活風(fēng)險(xiǎn)、適于靜脈注射或動(dòng)脈介入的載藥乳劑劑型的、安全有效的抗癌藥欖香烯注射液。文檔編號(hào)A61K9/107GK101708161SQ20091015501公開(kāi)日2010年5月19日申請(qǐng)日期2009年12月10日優(yōu)先權(quán)日2009年12月10日發(fā)明者李影,謝恬申請(qǐng)人:大連華立金港藥業(yè)有限公司