專利名稱::用于治療緩慢性心律失常病態(tài)竇房結(jié)綜合征的藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
:本發(fā)明涉及用于治療緩慢性心律失常病態(tài)竇房結(jié)綜合征的藥物及其制備方法。
背景技術(shù):
:病態(tài)竇房結(jié)綜合征(簡稱病竇綜合征,SickSinusSydrome,SSS)屬緩慢性心律失常范疇,是中老年常見病、難治性疾病,其發(fā)病率無性別差異,發(fā)病年齡20-90歲均有,平均65-70歲,隨著年齡的增加呈上升趨勢,超過50歲后發(fā)病率在0.17%左右。1年存活率85%-92%,5年存活率62%-65%,栓塞發(fā)生率為15%,嚴(yán)重威脅人民健康。常見病因為冠心病、高血壓病、心肌炎、心肌病等,不明原因者占37%。1984年中國衛(wèi)生統(tǒng)計提要報道,我國心血管疾病死亡占總死亡的百分比由1957年的12.上升到43.8%,急診救護(hù)隊報道,院外心臟猝死患者中15%—25%為緩慢性心律失常引起。目前,西醫(yī)對緩慢性心律失常病態(tài)竇房結(jié)綜合征的治療方面尚無特效藥物,主要治療方法是安裝永久心臟起搏器,但起搏器價格昂貴、使用壽命短、僅710年,且此方法屬有創(chuàng)治療,存在著感染、導(dǎo)絲斷裂、心肌穿孔、心律失常、起搏器綜合征、對自主神經(jīng)的調(diào)節(jié)缺乏反應(yīng)及電池能量耗竭導(dǎo)致更換起搏器等缺陷,還存在引起心理障礙等問題,對于兒童和青壯年患者尤為明顯;此外尚有部分病人不適用于起搏器的安裝,如嚴(yán)重糖尿病、消瘦、血管畸形以及無經(jīng)濟(jì)能力等,因此起搏器治療目前尚難以普及。中醫(yī)根據(jù)緩慢性心律失常脈癥表現(xiàn),將其歸于“心悸”、“怔忡”、“遲脈”、“胸痹”等病證范疇。認(rèn)為其病因病機(jī)多因臟腑虛衰,復(fù)感六淫外邪,或加之七情所傷、飲食勞倦等,日久發(fā)展而成,本病病位以心、腎為主,兼涉脾、肝二臟,病性屬本虛標(biāo)實之證,標(biāo)實指寒凝、瘀血、痰飲或兼夾為患,本虛初期多氣虛或氣陰兩虛,后期則逐漸轉(zhuǎn)至陽虛寒凝,或痰濁阻脈,或血脈瘀阻,血行不暢而致遲脈證。此外不少學(xué)者發(fā)現(xiàn)肝失條達(dá)與本病的發(fā)生發(fā)展有一定關(guān)系。中醫(yī)治療緩慢性心律失常大多本著辨證求因、審因論治的原則決定治法和方藥的應(yīng)用,臨床上麻黃附子細(xì)辛湯、參附湯、生脈散、陽和湯、炙甘草湯等較為常用,但目前多數(shù)醫(yī)家在治療上以溫陽益氣補(bǔ)益為主,在認(rèn)識該病病機(jī)特點時,未能足夠重視久病體虛、易受邪氣侵犯而使邪實阻滯、壅塞不通,導(dǎo)致陽氣郁內(nèi)不通的特點。同時,由于中藥復(fù)方制劑研究難度大,該方面系統(tǒng)研究的報道甚微,至今還沒有治療該病的有效復(fù)方中成藥。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一個目的是提供一種用于治療緩慢性心律失常病態(tài)竇房結(jié)綜合征的藥物。本發(fā)明所提供的用于治療緩慢性心律失常病態(tài)竇房結(jié)綜合征的藥物,它的藥效組分是由以下質(zhì)量份數(shù)比的原料制成的紅參炙附子炙甘草桂枝田三七茯苓=1-901-901-901-901-901-90其中,所述紅參、所述炙附子、所述炙甘草、所述桂枝、所述田三七和所述茯苓的質(zhì)量份數(shù)比可為4-122-105-132-102-106_14,具體可以為8696610。在該具體配比的基礎(chǔ)上,其中各種組分的具體用量可以根據(jù)患者的實際情況,在所給出的最低和最高劑量范圍內(nèi)進(jìn)行合理調(diào)整。所述藥物是按照包括如下步驟的方法制備得到的用提取劑提取紅參,收集紅參提取液和紅參殘渣;用水煎煮所述炙附子,然后向其中加入所述紅參殘渣、所述炙甘草、所述桂枝和所述茯苓繼續(xù)煎煮,得到煎液;將煎液與所述紅參提取液合并,再加入所述田三七的粉末,混勻。其中,所述提取紅參的方法為回流提?。惶崛?-3次,溫度為70-90°C;所述提取劑優(yōu)選為乙醇溶液。上述藥物具體為顆粒劑型的。本發(fā)明的另一個目的是提供一種制備用于治療緩慢性心律失常病態(tài)竇房結(jié)綜合征的藥物的方法。本發(fā)明所提供的制備用于治療緩慢性心律失常病態(tài)竇房結(jié)綜合征的藥物的方法,可以包括如下步驟用提取劑提取紅參,收集紅參提取液和紅參殘渣;用水煎煮所述炙附子,然后向其中加入所述紅參殘渣、所述炙甘草、所述桂枝和所述茯苓繼續(xù)煎煮,得到煎液;將煎液與所述紅參提取液合并,再加入所述田三七的粉末,混勻。所述方法中,在加入所述田三七的粉末的同時或之后,還可包括加入糊精的步驟。其中,所述紅參、所述炙附子、所述炙甘草、所述桂枝、所述田三七和所述茯苓的質(zhì)量配比可為1-901-901-901-901-901-90,具體可為4-122-105-132-102-106-14,最佳的為8696610。本發(fā)明的最后一個目的是提供一種散劑型的用于治療緩慢性心律失常病態(tài)竇房結(jié)綜合征的藥物。本發(fā)明所提供的用于治療緩慢性心律失常病態(tài)竇房結(jié)綜合征的藥物,它的藥效組分由紅參、炙附子、炙甘草、桂枝、田三七和茯苓組成,其質(zhì)量配比為1-901-901-901-901-901-90所述紅參、所述炙附子、所述炙甘草、所述桂枝、所述田三七和所述茯苓的質(zhì)量配比可為4-122-105-132-102-106-14,最佳為8696610。在該具體配比的基礎(chǔ)上,其中各種組分的具體用量可以根據(jù)患者的實際情況,在所給出的最低和最高劑量范圍內(nèi)進(jìn)行合理調(diào)整。本發(fā)明藥物以顆粒劑、膏劑、乳劑、散劑、滴丸、口服液、膠囊等藥物劑型為保護(hù)形式,其中,顆粒劑目前為優(yōu)選的劑型。顆粒劑藥物的一個療程為4周,每天二次,早晚各一次,每次服用9克(兒童減半)。本發(fā)明藥物對患者無年齡要求,但孕婦禁忌服用。本發(fā)明藥物紅參、附子為君藥。紅參性溫,大補(bǔ)元氣,益血,養(yǎng)心安神。《神農(nóng)本草經(jīng)》“補(bǔ)五臟,安精神,定魂魄,止驚悸”。附子辛熱,其性走而不守,能通行十二經(jīng),溫經(jīng)散寒,助陽通脈,適用于心腎陽虛,心悸氣短等陽虛諸癥。參、附兩藥合用,有益氣溫陽復(fù)脈之功,故為君藥。炙甘草味甘、性平,具有益氣溫陽,復(fù)脈止悸作用,與附子、紅參、桂枝相伍,辛甘化陽,增加補(bǔ)益心陽之功,主治心氣虛弱、心陽不振所致的心動悸,脈結(jié)代。炙甘草與紅參相伍,益心氣,以資氣血生化之源;炙甘草與附子相配,益氣溫中,解附子之毒,緩附子辛熱之性,以防傷陰。桂枝,辛、甘、溫,入心助陽,逐寒痹,通陽復(fù)脈,用于陽氣不通之心悸等癥,故為臣藥。田三七、茯苓為佐使藥。田三七為五加科人參屬植物,味甘微苦,性溫,專走血分,善行瘀血,具有利氣養(yǎng)血活血作用。茯苓甘淡、性平,歸心、脾、腎經(jīng),益心脾而寧心安神。田三七茯苓相配,養(yǎng)血寧心安神之效更佳。茯苓桂枝相伍,一利一溫,共奏通陽復(fù)脈之功。本方諸藥合用,共奏通陽復(fù)脈,益氣活血之功,使陽氣充而血脈通,氣血充足,心脈得以濡養(yǎng),悸定脈復(fù),通陽復(fù)脈,益氣活血,適用于陽虛血瘀為主要特征的緩慢性心律失常病態(tài)竇房結(jié)綜合征等。紅參能調(diào)節(jié)神經(jīng)、心血管及內(nèi)分泌系統(tǒng),促進(jìn)機(jī)體物質(zhì)代謝及蛋白質(zhì)和RNA、DNA的合成,能益心復(fù)脈,低濃度時能提高心臟收縮力,具有與強(qiáng)心甙極其相似的強(qiáng)心作用,心率加速,有緩解小動脈痙攣,擴(kuò)張冠狀動脈,改善心肌供血的作用附子強(qiáng)心,興奮腎上腺素受體,并縮短A-H間期改善房室傳導(dǎo),提高心律,消除異位搏動,擴(kuò)張冠狀動脈,抗心肌缺血缺氧;甘草中類黃酮與異甘草素對烏頭堿致動物心律失常作用有明顯拮抗效果,甘草中的甘草次酸能與附子中的生物堿形成復(fù)鹽,在體內(nèi)逐漸分解而起作用,避免機(jī)體因短時間內(nèi)吸收過量生物堿而引起的強(qiáng)烈反應(yīng),增加附子的臨床用藥安全范圍;田三七有明顯擴(kuò)張冠狀動脈,增加冠脈血流量,降低全血粘度,降低心肌耗氧量,抗心律失常等多種藥理作用;獲苓含有茯苓聚糖、茯苓酸等,具有鎮(zhèn)靜作用;桂枝能擴(kuò)張血管,增強(qiáng)血液循環(huán)等活血化瘀作用。基礎(chǔ)實驗研究的各檢測指標(biāo)統(tǒng)計結(jié)果表明本發(fā)明藥物能縮短AA間期、提高心率,增強(qiáng)竇房結(jié)自律性,改善竇房結(jié)傳導(dǎo)功能,減少兔右冠狀動脈缺血再灌注損傷所致的心律失常發(fā)生,其作用機(jī)制與抑制竇房結(jié)細(xì)胞凋亡,調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)基因Bax、Bcl-2、Fas-L蛋白表達(dá),降低模擬缺血再灌注誘導(dǎo)的竇房結(jié)細(xì)胞內(nèi)鈣超載有關(guān)。藥理學(xué)實驗結(jié)果也表明,本發(fā)明藥物具有提高小鼠耐常壓缺氧的能力;能改善低切變率下的全血粘度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)及纖維蛋白原含量等血液流變學(xué)指標(biāo);能提高異搏定致緩慢性心律失常動物模型的心率;能改善甲醛致家兔竇房結(jié)急性損傷模型的竇房結(jié)功能和心電圖缺血性ST段改變。臨床研究的各方面療效統(tǒng)計指標(biāo)表明,本發(fā)明藥物在改善臨床癥狀上明顯優(yōu)于阿托品,能夠改善患者心功能,提高患者生活質(zhì)量;在提高心率和Holter、心電圖等療效指標(biāo)、改善心臟超聲心功能指標(biāo)中EF、CO值和心電圖ST段等方面優(yōu)于阿托品;研究過程中治療組未出現(xiàn)明顯不良影響,臨床上安全有效。另外,本發(fā)明方法為每個病人每年至少減少醫(yī)療費用1萬元以上,而且還沒有西醫(yī)療法的諸多缺陷,因此,本發(fā)明藥物在治療緩慢性心律失常病態(tài)竇房結(jié)綜合征領(lǐng)域中具有巨大的推廣應(yīng)用價值。圖1為動物體內(nèi)實驗中原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記法檢測細(xì)胞凋亡情況。圖2為Fas-L蛋白表達(dá)情況(免疫組化二步法,X400)。圖3為Bax蛋白表達(dá)情況(免疫組化二步法,X400)。圖4為Bcl-2蛋白表達(dá)情況(免疫組化二步法,X400)。圖5為體外培養(yǎng)的竇房結(jié)細(xì)胞的形態(tài)(蘇木精-伊紅染色,10X20)。圖6為體外細(xì)胞實驗中原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記法檢測細(xì)胞凋亡情況(TUNELX100)。圖7為流式細(xì)胞術(shù)檢測竇房結(jié)細(xì)胞凋亡情況。具體實施例方式下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明,均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的材料、試劑等,如無特殊說明,均可從商業(yè)途徑得到。紅參、炙附子、炙甘草、桂枝、田三七、茯苓均購自北京本草方圓藥業(yè)有限公司。實施例1、用于治療緩慢性心律失常病態(tài)竇房結(jié)綜合征藥物(強(qiáng)心復(fù)脈顆粒)的制備一、本實施例制備了顆粒劑和散劑兩種劑型的藥物,每種劑型中各原料的質(zhì)量配比分別如下1、藥物I紅參4g、炙附子2g、炙甘草5g、桂枝2g、田三七2g、茯苓6g。2、藥物II紅參8g、炙附子6g、炙甘草9g、桂枝6g、田三七6g、茯苓10g。3、藥物III紅參12g、炙附子10g、炙甘草13g、桂枝10g、田三七10g、茯苓14g。二、藥物的制備方法(一)顆粒劑的制備方法取紅參352g、炙附子264g、炙甘草396g、桂枝264g、田三七264g、茯苓440g。將田三七粉碎成細(xì)粉,6°Co輻射滅菌備用;取紅參352g,將其以15(紅參75%乙醇)的重量份數(shù)比與75%乙醇(乙醇水=31,體積比)混合,在80°C條件下回流提取2h,抽濾,收集第一次回流提取液1和濾渣1;將得到的所有濾渣1與75%乙醇混合,75%乙醇的量與第一次相同,在80°C條件下回流提取2h,收集第二次回流提取液2和濾渣2,并將提取液2與提取液1合并;將得到的所有濾渣2與75%乙醇混合,75%乙醇的量與第一次相同,80°C回流提取2h,抽濾,收集第三次回流提取液3;將提取液1、提取液2和提取液3合并,獲得紅參提取液,紅參殘渣備用。炙附子加8倍量水,煎煮2小時,再向其中加入紅參殘渣及炙甘草、桂枝、茯苓,煎煮二次,每次1.5小時,合并煎液,過濾,濾液與上述紅參提取液合并,濃縮至相對密度為1.30(55-60°C)的稠膏,干燥粉碎,加入干膏粉2倍量糊精、田三七細(xì)粉,混勻,制粒、干燥,共制成顆粒1000g,分裝即得。(二)散劑的制備方法將各原料按相應(yīng)的質(zhì)量份數(shù)比混合,得散劑。三、藥物的使用方法顆粒劑用溫水沖服,每次服用9克(兒童減半)。散劑取一副藥,包好后,加水浸泡50-60分鐘,用武火(大火)煎開鍋后用文火(小火)煎30分鐘左右濾出藥液,取藥液服用,溫服。實施例2、通過基礎(chǔ)研究檢測本發(fā)明藥物的效果本實施例中是分別對顆粒劑型的藥物I、藥物II、藥物III均進(jìn)行了以下各實驗。數(shù)據(jù)結(jié)果均采用SPSS軟件統(tǒng)計處理,兩樣本均數(shù)比較用t檢驗,多樣本資料采用完全隨機(jī)方差分析,多組間均數(shù)比較用LSD組間多重比較,計數(shù)資料采用x2檢驗。一、體內(nèi)動物實驗成年大耳白家兔,一級,雌雄不拘,12周齡,體重2.2-3.Okg(購自北京富豪實驗動物養(yǎng)殖中心,許可證編號SCXK(京)2005-2009),隨機(jī)分成5組,每組8只,具體如下正常對照組生理鹽水10ml/kg,不造模,絲線僅穿過右冠狀動脈根部下方曠置而不結(jié)扎;模型對照組生理鹽水10ml/kg,造模不給藥;阿托品給藥組按0.36mg/kg劑量給藥(相當(dāng)于臨床劑量的12倍);強(qiáng)心復(fù)脈高劑量組按6.66g/kg劑量給藥(相當(dāng)于臨床劑量的12倍);強(qiáng)心復(fù)脈低劑量組按3.33g/kg劑量給藥(相當(dāng)于臨床劑量的6倍)。以上各組均采用造模前每日灌胃一次,IOml/次,連續(xù)灌胃3天,實驗當(dāng)日于造模穩(wěn)定IOmin后由十二指腸給藥一次5ml。動物模型參照王慶志等兔缺血_再灌注病竇模型制作方法(王慶志等.竇房結(jié)和房室結(jié)缺血再灌注動物模型的建立和確認(rèn)[J].中國臨床解剖學(xué)雜志,2004,22(5);552-554.)。具體如下取健康成年大耳白家兔,用1.5%戊巴比妥鈉(2mL/kg)靜脈注射麻醉后固定于兔臺上,胸前剪毛,消毒。分離氣管,放置氣管插管,接動物呼吸機(jī)。腹部皮膚切開,找出十二指腸并在其表面打一荷包結(jié)備給藥用。胸骨正中止血鉗斷第23肋骨,并用拉鉤牽拉,保持雙側(cè)胸膜完整。暴露心臟,縱向剪開心包后行心包吊床術(shù),暴露右冠狀動脈。緊貼右冠狀動脈第一分支前起始部下方套一絲線,絲線穿過一細(xì)塑料管,抽緊后以紋氏鉗夾閉右冠狀動脈根部以造成竇房結(jié)動脈的急性閉塞。以出現(xiàn)明顯竇緩(AA間期即兩心房間期延長40ms以上)及(或)結(jié)性逸搏心律為竇房結(jié)動脈急性閉塞致竇房結(jié)損傷為標(biāo)準(zhǔn)。缺血60min后松鉗再灌注60min。保持適宜室溫,兔均予肝素抗凝。用注射針頭刺入兔四肢皮下記錄動物體表標(biāo)II導(dǎo)心電圖,以上信號輸入BL-420E生物機(jī)能實驗系統(tǒng)并顯示于計算機(jī)顯示器,行全程心電監(jiān)護(hù)。用多道生理記錄儀記錄強(qiáng)心復(fù)脈對竇房結(jié)組織電生理功能的影響(包括自律性指標(biāo)AA間期、心率、SNRT和傳導(dǎo)性指標(biāo)SACT),倒置顯微鏡觀察組織細(xì)胞病理變化,TUNEL法和免疫組化的方法測定細(xì)胞凋亡和凋亡相關(guān)基因Fas-L,Bax,Bcl-2蛋白表達(dá)。部分指標(biāo)的檢測結(jié)果如下(1)兩心房間期(AA間期)、心率變化比較結(jié)果如表1和表2所示。與模型對照組比較,強(qiáng)心復(fù)脈高、低劑量組以及阿托品組在缺血再灌注各時相點均可明顯縮短AA間期(P<0.01或P<0.05),明顯提高心率(P<0.01或P<0.05),且強(qiáng)心復(fù)脈高劑量組較阿托品組效果顯著。說明強(qiáng)心復(fù)脈能縮短AA間期、提高心率,且效果優(yōu)于阿托品。表1、缺血再灌注期不同時段AA間期的變化(ms,η=8,x±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注與正常對照組比較,*P<0.05,<0.01;與模型對照組比較,ΔP<0.05,ΔΔP<0.01.表2、缺血再灌注期不同時段心率的變化(ms,η=8,;±8)缺血時間(min)再灌注時間(min)組別缺血前-_10_30_60_15_30_60正常對照238±34235±34234士31229±33230±28227±32219±32模型對照249±36187±27**177±12**182±27*180±25**181±19*180±17*阿托品240士23202±19+215士17厶218±18218±22*厶217±22*218±17*Δ強(qiáng)心復(fù)脈高269±31223±26Δ239±30ΔΔ236±38ΔΔ231±35厶Δ232±37ΔΔ232±38ΔΔ強(qiáng)心復(fù)脈低239±29197±21*209士23*_211士27_210±22*_208±22_206±24注與正常對照組比較,*Ρ<0.05,<0.01;與模型對照組比較,ΔP<0.05,ΔΔP<0.01.(2)竇房結(jié)傳導(dǎo)時間(SACT)變化比較結(jié)果如表3所示。與模型對照組比較,強(qiáng)心復(fù)脈高、低劑量組以及阿托品組各時間點SACT值均有不同程度縮短(P<0.01或P<0.05),且強(qiáng)心復(fù)脈高、低劑量組均較阿托品組效果顯著。說明通陽活血中藥強(qiáng)心復(fù)脈能增強(qiáng)竇房結(jié)傳導(dǎo)功能,且效果優(yōu)于阿托品。表3各組動物缺血再灌注不同時間點SACT變化(ms,η=8,S±s)缺血(min)再灌注(min)組別缺血前-_30_60_60_正常對照18.21士3.4516.25±6.6118.75士5.4218.57±4.76模型對照20.00士6.1241.88±12.81**57.50±15.55**35.50±6.71**阿托品24.29±7.8728.50±8.59Δ20.42±7.49ΔΔ25.36±4.66Δ強(qiáng)心復(fù)脈高15.63±6.2321.25±4.94ΔΔ19.38±4.17ΔΔ19.58±6.00ΔΔ強(qiáng)心復(fù)脈低_19.79士6.34_26.90±10.56Δ_24.35±14.86ΔΔ22.89±8.13ΔΔA注與正常對照組比較,*P<0.05,<0.01;與模型對照組比較,ΔP<0.05,ΔΔΡ<0.01;與阿托品組比較,AP<0.05.(3)竇房結(jié)恢復(fù)時間(SNRT)比較結(jié)果如表4-6所示。與模型對照組比較,強(qiáng)心復(fù)脈高、低劑量組以及阿托品組各時間點SNRT、CSNRT和ISNRT值均有不同程度下降(P<0.01或P<0.05)。強(qiáng)心復(fù)脈高劑量組SNRT的下降較阿托品組效果顯著。說明強(qiáng)心復(fù)脈能改善竇房結(jié)自律性,且效果優(yōu)于阿托品。表4各組動物缺血再灌注不同時間點SNRT變化(ms,η=8,±s)組別_缺血前_缺血(min)_再灌注(min)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表5各組動物缺血再灌注不同時間點CSNRT變化(ms,n=8,X土5)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表6各組動物缺血再灌注不同時間點ISNRT變化(ms,n=8,x土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注與正常對照組比較,*P<0.05,<0.01;與模型對照組比較,AP<0.05,AAP<0.01.(4)心律失常評分變化比較結(jié)果如表7所示。相同缺血時段心律失常評分,強(qiáng)心復(fù)脈高、低劑量組均低于模型組(P<0.01或P<0.05),兩組療效無明顯劑量相關(guān)性,兩組各有1例由交界性逸搏心律轉(zhuǎn)為竇性心律,其余竇性心律不齊于缺血lOmin后恢復(fù)正常,無1例死亡。兩組于再灌注期60min后心律失常評分基本恢復(fù),只有1例出現(xiàn)I度AVB,約lmin后恢復(fù)正常。強(qiáng)心復(fù)脈高劑量組于再灌注15-30min和30-60min時段較阿托品組效果顯著(P<0.05)。說明強(qiáng)心復(fù)脈能有效減少兔右冠狀動脈缺血再灌注損傷所致的心律失常,且較阿托品組效果顯著。表7缺血再灌注期不同時段心律失常的評分變化(5±s,n=8)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注與正常對照組比較,*P<0.05,<0.01;與模型對照組比較,AP<0.05,AAP<0.01,與阿托品組比較,AP<0.05.(5)光鏡觀察竇房結(jié)組織形態(tài)學(xué)比較造模后模型組的起搏細(xì)胞(P細(xì)胞)邊界不清,胞核染色加深,胞漿嗜酸性增強(qiáng),伊紅染色松散,部分細(xì)胞腫脹明顯,部分胞質(zhì)可見空泡及散在的細(xì)胞核固縮;阿托品組P細(xì)胞未見明顯腫脹,胞質(zhì)見極少空泡及散在的細(xì)胞核固縮;強(qiáng)心復(fù)脈高、低劑量組的P細(xì)胞亦未見明顯腫脹,胞質(zhì)見極少空泡及散在的細(xì)胞核固縮,未見粒細(xì)胞浸潤,其余結(jié)構(gòu)正常。說明強(qiáng)心復(fù)脈和阿托品均能保護(hù)兔右冠狀動脈缺血再灌注誘導(dǎo)的竇房結(jié)細(xì)胞受損。(6)原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記(TUNEL法)檢測細(xì)胞凋亡率比較結(jié)果如表8和圖1所示(A為模型對照組(TUNEL,X400),B為強(qiáng)心復(fù)脈高劑組(TUNEL,X400))。在體兔右冠狀動脈根部結(jié)扎/放松造成兔竇房結(jié)缺血再灌注損傷,可明顯引起竇房結(jié)細(xì)胞凋亡,此現(xiàn)象與光鏡下觀察結(jié)果一致。強(qiáng)心復(fù)脈高、低劑量組及阿托品組兔竇房結(jié)細(xì)胞凋亡發(fā)生率明顯減少,與模型組比較,差異有顯著性(P<0.01)。與阿托品組比較,強(qiáng)心復(fù)脈治療組凋亡率降低差異無統(tǒng)計學(xué)意義。說明強(qiáng)心復(fù)脈、阿托品均能阻斷或抑制凋亡,強(qiáng)心復(fù)脈可能有類似阿托品樣作用。表8各組兔竇房結(jié)細(xì)胞凋亡情況(n=10,i±s),<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注與正常組比較,#P<0.01;與模型組比較,AAP<0.01。(7)免疫組化法測定凋亡相關(guān)基因Bax、Bcl_2、Fas_L蛋白表達(dá)比較結(jié)果如表9(表中,A0D值表示細(xì)胞凋亡發(fā)生率)、10和圖2(A為模型對照組Fas-L蛋白表達(dá),B為強(qiáng)心復(fù)脈高劑組Fas-L蛋白表達(dá))、圖3(A為模型對照組Bax蛋白表達(dá),B為強(qiáng)心復(fù)脈高劑組Bax蛋白表達(dá))、圖4(A模型對照組Bcl-2蛋白表達(dá),B為強(qiáng)心復(fù)脈高劑組Bcl_2蛋白表達(dá))所示。兔右冠狀動脈根部結(jié)扎/放松所致兔竇房結(jié)缺血再灌注損傷,可顯著引發(fā)Fas-L基因蛋白表達(dá)增強(qiáng)。強(qiáng)心復(fù)脈治療組及阿托品組Fas-L蛋白表達(dá)均下降,且強(qiáng)心復(fù)脈高、低劑量組下降較阿托品組明顯。兔竇房結(jié)缺血再灌注損傷,在顯著引發(fā)Fas-L基因蛋白表達(dá)增強(qiáng)的同時,亦引發(fā)Bax、Bcl-2基因蛋白表達(dá)增強(qiáng),但Bcl-2基因蛋白表達(dá)即免疫反應(yīng)增強(qiáng)的程度輕于Bax基因。通過計算Bcl-2/Bax比值,發(fā)現(xiàn)模型對照組Bcl-2/Bax比值下降,與正常組比較,差異有顯著性(P<0.01)。強(qiáng)心復(fù)脈治療組能夠顯著下調(diào)Bax基因的蛋白表達(dá),上調(diào)Bcl-2基因的蛋白表達(dá),從而顯著上調(diào)Bcl-2/Bax比值,其中尤以強(qiáng)心復(fù)脈高劑量組更為顯著,與模型組比較,差異有顯著性(P<0.01)。阿托品組也有同強(qiáng)心復(fù)脈組相似的趨勢,但僅Bax表達(dá)值與模型組比較差異有顯著性(P<0.05),Bcl-2表達(dá)值以及Bcl-2/Bax比值與模型組比較,差異無顯著性。說明強(qiáng)心復(fù)脈調(diào)節(jié)Fas-L、Bax、Bcl-2,Bcl-2/Bax比值的效果優(yōu)于阿托品組。表明通過調(diào)節(jié)缺血再灌注竇房結(jié)BaX、Bcl-2、Fas-L基因的蛋白表達(dá)從而抑制和阻斷細(xì)胞凋亡發(fā)生,可能是中藥復(fù)方強(qiáng)心復(fù)脈防治病竇綜合征缺血再灌注損傷的分子作用機(jī)制之一。表9兔竇房結(jié)Fas-L基因蛋白表達(dá)情況比較(n=10,I±S)組別Fas-L表達(dá)AOD值正常對照0.136士0.039模型對照0.353±0.073**阿托品0.245±0.047A強(qiáng)心復(fù)脈低劑量0.214±0.041AA強(qiáng)心復(fù)脈高劑量0.172士0.057AA注與正常組比較,*P<0.05,#P<0.01;與模型組比較,AP<0.01,AAP<0.01。表10兔竇房結(jié)Bax、Bcl-2基因蛋白表達(dá)情況比較(n=10,5±s)組別BaxBcl-2Bcl-2/Bax正常對照0.169±0.0390.196±0.0521.434±0.434模型對照0.349±0.041**0.232士0.0550.555土0.153**阿托品0.259士0.017**厶A0.258士0.0600.987±0.167強(qiáng)心復(fù)脈低劑量0.226±0.014AA0.290士0.0221.285±0.123A強(qiáng)心復(fù)脈高劑量0.207±0.040AA0.353±0.076**AA1.738±0.432AAA注與正常組比較,*P<0.05,#P<0.01;與模型組比較,AP<0.05,AAP<0.01,與阿托品組比較,AP<0.05。藥物I、藥物II、藥物III得到了相同的實驗效果。二、竇房結(jié)細(xì)胞體外實驗體外細(xì)胞實驗中,通過體外培養(yǎng)竇房結(jié)細(xì)胞,倒置顯微鏡觀察模擬缺血-再灌注引起竇房結(jié)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)損傷,TUNEL法和流式細(xì)胞術(shù)AV-PI染色分別定性和定量檢測竇房結(jié)細(xì)胞凋亡,F(xiàn)luo-4熒光探針檢測竇房結(jié)細(xì)胞鈣離子濃度變化。1、分離得到竇房結(jié)細(xì)胞的方法;參照Marvin等乳鼠竇房結(jié)細(xì)胞的原代培養(yǎng)與鑒定(MarvinWJ,JaneK.Theisolatedsinoatrialnodecellinprimaryculturefromthenewbornrat[J].11CircRes,1984,55(2);253-260.)取出生24hWistar乳鼠20只,將乳鼠呈仰臥位固定,消毒胸腹部皮膚,沿胸骨右緣剪開并去除胸前壁,暴露心臟,置于解剖顯微鏡下分離心包膜,將心臟向右下方輕輕牽拉,輕撥移右心耳,于界嵴中部靜脈竇側(cè)、前腔靜脈根部取0.7mmX0.7mmX0.7mm的組織塊。剪碎組織塊成0.51mm3碎塊,在組織塊中加入0.08%胰酶,37°C水浴5分鐘,吹打1分鐘,自然沉淀,棄上清液;加入0.025%膠原酶,置于37水浴中振蕩15分鐘。再吹打12min,自然沉淀,吸取上清液,用400目金屬濾網(wǎng)過濾后移入50mL離心管,離心管中加等體積DMEM培養(yǎng)液(含15%胎牛血清),重復(fù)消化5次至組織塊基本消化成單細(xì)胞為止。細(xì)胞懸液離心,棄上清液,再用DMEM培養(yǎng)液洗細(xì)胞一次,離心,棄上清液。加入DMEM培養(yǎng)液(含15%胎牛血清),打散細(xì)胞團(tuán)為單細(xì)胞懸液。調(diào)整細(xì)胞數(shù)為1X105個/毫升,將單細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)板中,臺盼藍(lán)檢測活細(xì)胞率達(dá)95%以上。將培養(yǎng)容器置于37°C、5%C02孵箱中培養(yǎng)90分鐘后,采用差速貼壁分離技術(shù),得到純化的竇房結(jié)細(xì)胞。通過竇房結(jié)細(xì)胞的形態(tài)和搏動頻率來鑒定細(xì)胞,竇房結(jié)細(xì)胞有3種形態(tài),即梭形、三角形與不規(guī)則形,其中梭形細(xì)胞最多,且以梭形細(xì)胞搏動頻率最快(168士8/min)。每天換液一次,并用倒置顯微鏡觀察,連續(xù)5天。細(xì)胞存活率計算方法計算計數(shù)板4個大格內(nèi)未藍(lán)染活細(xì)胞及細(xì)胞總數(shù),則細(xì)胞存活率(%)=活細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)X100%。細(xì)胞計數(shù)法取1滴臺盼藍(lán)液與9滴細(xì)胞懸液混勻后,再取適量混合液滴于細(xì)胞計數(shù)板上,計數(shù)4個大格的細(xì)胞數(shù),再用下述公式求出細(xì)胞數(shù)細(xì)胞數(shù)(個/ml)=(4個大格數(shù)/4)X104X2。2、獲得含藥物血清的方法成年雄性Wistar大鼠40只,分成4組,正常對照組,阿托品組,強(qiáng)心復(fù)脈高劑組,強(qiáng)心復(fù)脈低劑組,每組10只,連續(xù)灌胃7天,日2次,所用藥物分別以人臨床用量X動物等效劑量比值為參考濃度(強(qiáng)心復(fù)脈2.22g、8.88g生藥/10ml/kg、阿托品0.006mg/10ml/kg),用蒸餾水配制成混懸液,正常對照組給予等量正常飲用水。末次給藥前禁食不禁水12h,末次給藥后2小時,斷頭取血,2000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘,自然分離血清,56°C滅活30min,0.22um微孔濾膜過濾除菌,所得血清分別為空白血清、強(qiáng)心復(fù)脈高、低劑量藥物血清和阿托品藥物血清,-80V冷藏備用。4、模擬缺血_再灌注的方法參考鐘理、Koyama等原代培養(yǎng)乳鼠竇房結(jié)細(xì)胞模擬缺血-再灌注模型制備的方法并加以改進(jìn),以缺氧缺糖模擬缺血,以恢復(fù)氧和糖供應(yīng)模擬再灌注。具體步驟如下a.竇房結(jié)細(xì)胞消化分離后接種到預(yù)先置有消毒蓋玻片的24孔板上,進(jìn)行竇房結(jié)細(xì)胞培養(yǎng)。5d后倒置顯微鏡下隨機(jī)計數(shù)100個細(xì)胞,選取梭形細(xì)胞占所有細(xì)胞60%以上的培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行實驗。b.用預(yù)先N2飽和的模擬缺血液置換舊培養(yǎng)基,置密閉盒中持續(xù)通以30倍體積約10L的95%N2+5%C02混合氣,充分排盡盒中殘余的氧氣,以缺氧缺糖模擬缺血,放入C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)60min。N2飽和的模擬缺血液的組成為(mmol/L):NaCl98.5、KC110、NaH2P040.9、NaHC036.0、CaCl21.8、MgS041.2、乳酸鈉40、HEPES20,PH6.8。c.模擬再灌注從密閉盒中取出換成模擬再灌注液,以恢復(fù)氧和糖供應(yīng)模擬再灌12注放回5%C02孵箱中培養(yǎng)3h。模擬再灌注液的組成為(mmol/L):NaCl129.5、KC15.0、NaH2P040.9、NaHC0320、CaC121.8、MgS041.2、葡萄糖55、HEPES20,PH7.4。分組①正常對照組;②模型組;③阿托品藥物血清組;④強(qiáng)心復(fù)脈藥物血清高劑組;⑤強(qiáng)心復(fù)脈藥物血清低劑組。強(qiáng)心復(fù)脈藥物血清高、低劑量組及阿托品藥物血清組用含15%藥物血清的DMEM培養(yǎng)基在有氧環(huán)境中預(yù)先培養(yǎng)30min后,再進(jìn)行模擬缺血再灌注。模型組和正常對照組均同樣預(yù)先用含15%空白血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)30min。缺血時間為60分鐘,再灌注時間為3小時,進(jìn)行模擬缺血-再灌注實驗。模擬再灌注結(jié)束后,取竇房結(jié)細(xì)胞進(jìn)行指標(biāo)檢測。5、各指標(biāo)的檢測(1)細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化比較結(jié)果如圖5(A為正常對照組,B為模型對照組,C為強(qiáng)心復(fù)脈藥物血清高劑組,D為強(qiáng)心復(fù)脈藥物血清低劑組,E為阿托品藥物血清組)所示。用倒置顯微鏡觀察培養(yǎng)的竇房結(jié)細(xì)胞,見有3種形態(tài),即梭形、三角形與不規(guī)則形,其中梭形細(xì)胞最多,且以梭形細(xì)胞搏動頻率最快(168士8/min)。模擬缺血再灌注后的各組竇房結(jié)細(xì)胞中,模型對照組大部分細(xì)胞雖仍堅持貼壁,但已出現(xiàn)腫脹變形,少部分細(xì)胞出現(xiàn)偽足回縮,甚至細(xì)胞脫落;阿托品藥物血清組細(xì)胞與模型對照組相似;而強(qiáng)心復(fù)脈藥物血清高、低劑量組,細(xì)胞貼壁生長良好,未見明顯細(xì)胞腫脹和脫落,基本與正常培養(yǎng)細(xì)胞相似。細(xì)胞用蘇木精-伊紅染色(HE染色)后光鏡觀察發(fā)現(xiàn),模型對照組的細(xì)胞和細(xì)胞核腫脹,胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)數(shù)量較多的微小空泡,胞核核膜有皺褶,胞膜可有局部破損,細(xì)胞核、胞質(zhì)染色變淺淡;阿托品藥物血清組細(xì)胞與模型對照組相似;而強(qiáng)心復(fù)脈藥物血清高、低劑量組的細(xì)胞膜、核膜基本平滑完整,細(xì)胞大小形態(tài)正常。說明強(qiáng)心復(fù)脈藥物血清與模擬缺血再灌注竇房結(jié)細(xì)胞共同孵育,可減少細(xì)胞損傷,結(jié)果優(yōu)于阿托品組。(2)原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記(TUNEL法)檢測細(xì)胞凋亡比較結(jié)果如圖6(A為正常對照組,B為模型對照組,C為阿托品藥物血清組,D為強(qiáng)心復(fù)脈藥物血清高劑量組,E為強(qiáng)心復(fù)脈藥物血清低劑量組)所示。正常對照組細(xì)胞未見胞核陽性著色,為陰性;模型對照組可見胞核呈棕色的竇房結(jié)細(xì)胞,為(++)級中度陽性著色;阿托品藥物血清組與模型對照組相似,胞核亦呈棕色(++)級著色;而強(qiáng)心復(fù)脈藥物血清高劑量組細(xì)胞未見胞核陽性著色,低劑量組可見胞核呈淡棕色,為(士)級弱陽性著色。說明抑制或阻斷細(xì)胞凋亡可能是強(qiáng)心復(fù)脈藥物血清保護(hù)細(xì)胞受損的機(jī)制之一。(3)流式細(xì)胞術(shù)檢測竇房結(jié)細(xì)胞凋亡率比較結(jié)果如表11和圖7(A為正常對照組,B為模型對照組,C為阿托品藥物血清組,D為強(qiáng)心復(fù)脈藥物血清高劑量組,E為強(qiáng)心復(fù)脈藥物血清低劑量組)所示。與正常對照組相比,模型對照組可見細(xì)胞凋亡率顯著增加(P<0.01);與模型對照組比較,阿托品藥物血清組凋亡率未見明顯降低(P>0.05),強(qiáng)心復(fù)脈藥物血清高劑量組凋亡率明顯降低(P<0.05),低劑量組凋亡率降低差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。說明強(qiáng)心復(fù)脈高劑量組抑制凋亡從定量角度優(yōu)于阿托品組。表11FCM檢測各組竇房結(jié)細(xì)胞凋亡率(n=3,S±s)組別凋亡率(%)正常對照組8.96±0.03模型對照組27.38士5.62**阿托品藥物血清組20.69±2.53*強(qiáng)心復(fù)脈藥物血清高劑量組17.00±6.16A強(qiáng)心復(fù)脈藥物血清低劑量組18.47士7.35注與正常對照組比較,*P<0.05,<0.01;與模型組比較,AP<0.05,AAP<0.01(4)竇房結(jié)細(xì)胞胞質(zhì)[Ca2+]i變化比較結(jié)果如表12所示。正常對照組的竇房結(jié)細(xì)胞內(nèi)游離鈣濃度為(437士12)nmol/L;模擬缺血60min,模擬再灌注3h后的模型對照組竇房結(jié)細(xì)胞胞質(zhì)游離Ca2+濃度增加,約為正常組的2倍,表現(xiàn)出明顯的鈣超載現(xiàn)象,其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。與模型對照組比較,在缺血前給予強(qiáng)心復(fù)脈藥物血清高、低劑量預(yù)處理的竇房結(jié)細(xì)胞[Ca2+]i明顯降低(P<0.01)。而阿托品藥物血清組的竇房結(jié)細(xì)胞[Ca2+]i未見降低(P>0.05)。抑制鈣超載可能為強(qiáng)心復(fù)脈藥物血清保護(hù)細(xì)胞受損的機(jī)制之一。表12各組竇房結(jié)細(xì)胞的[Ca2+]i熒光強(qiáng)度平均值(S±s,n=4)組別熒光強(qiáng)度(nmol/L)正常對照組437±12模型對照組835±94*阿托品藥物血清組868±92*強(qiáng)心復(fù)脈藥物血清高劑量組571±47AA強(qiáng)心復(fù)脈藥物血清低劑量組635±39AA與正常對照組比較,*P<0.01與模擬缺血再灌注組比較,AP<0.01;與阿托品藥物血清組比較,AP<0.01。上述表1-12中,n表示每組中用于實驗的動物例數(shù)。藥物I、藥物II、藥物III得到了相同的實驗效果。以上基礎(chǔ)實驗研究的各檢測指標(biāo)統(tǒng)計結(jié)果表明強(qiáng)心復(fù)脈干預(yù)組能縮短AA間期、提高心率,增強(qiáng)竇房結(jié)自律性,改善竇房結(jié)傳導(dǎo)功能,減少兔右冠狀動脈缺血再灌注損傷所致的心律失常發(fā)生,其作用機(jī)制與抑制竇房結(jié)細(xì)胞凋亡,調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)基因Bax、Bcl-2、Fas-L蛋白表達(dá),降低模擬缺血再灌注誘導(dǎo)的竇房結(jié)細(xì)胞內(nèi)鈣超載,從而保護(hù)細(xì)胞受損有關(guān)。實施例3、通過臨床研究檢測本發(fā)明藥物的效果本實施例中是分別對散劑型的藥物I、藥物II、藥物III均進(jìn)行了以下各實驗。為評價強(qiáng)心復(fù)脈合劑治療緩慢性心律失常病態(tài)竇房結(jié)綜合征(陽虛血瘀證)的有效性及安全性,采用隨機(jī)對照、多中心臨床研究方法。藥物經(jīng)如下煎煮后,服用取一副藥,包好后,加適量水浸泡50-60分鐘,用武火(大火)煎開鍋后用文火(小火)煎30分鐘左右濾出藥液,取藥液服用,溫服。共對171例被診斷患有病態(tài)竇房結(jié)綜合征(中醫(yī)辨證為陽虛血瘀證)的病例進(jìn)行14跟蹤隨訪,均經(jīng)患者同意。其中,90例為口服強(qiáng)心復(fù)脈合劑治療組(每次100ml,2次/日,療程4周),81例為口服阿托品片對照組(0.3mg/次,3次/日,療程4周)。觀察病態(tài)竇房結(jié)綜合征患者中醫(yī)證侯、Holter(總心率、平均心率、最快心率、最慢心率等)、心功能(EF、CO、SV)、心電圖(T波、ST段)及血尿便常規(guī)、肝腎功能等變化。對171例觀察病例進(jìn)行療前、療后中醫(yī)癥狀,舌、脈象評分記錄。治療后由第三方采用SPSS軟件統(tǒng)計處理,計量資料采用t檢驗,計數(shù)資料采用x2檢驗。強(qiáng)心復(fù)脈治療組與阿托品對照組治療前在性別、年齡、民族情況、結(jié)婚情況、家族史、過敏史、病程、既往是否服用治療本病藥物、療前癥狀評分、體重、血壓、總心率、平均心率、最快心率、最慢心率、病情、舌苔、舌質(zhì)、脈象等方面均進(jìn)行了比較,無顯著性差異(P>0.05),證明了兩組臨床觀察病例有可比性。方法及結(jié)果如下1、癥候積分比較療效指數(shù)(n)=(療前積分-療后積分)/療前積分X100%。痊愈療效指數(shù)彡95%;顯效療效指數(shù)為60%95%;有效療效指數(shù)為30%60%;無效療效指數(shù)<30%。療前、療后積分統(tǒng)計方法如中華人民共和國衛(wèi)生部.中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則第二輯19945經(jīng)過4周的療程后,統(tǒng)計兩組的有效率,結(jié)果如表13所示。治療組主要癥狀痊愈率為22%,顯效率68%,總有效率99%;對照組總有效率42%,兩組治療后癥候療效比較差異顯著(P<0.01)。強(qiáng)心復(fù)脈治療組與阿托品對照組治療后癥狀組間比較除舌苔外均有差異(P<0.05)。說明強(qiáng)心復(fù)脈治療組在改善臨床癥狀、提高心功能和生活質(zhì)量方面優(yōu)于阿托品對照組。表13兩組治療前后癥狀療效比較<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>Z=-4260,P=00002、24小時動態(tài)心電圖(HoIter)比較經(jīng)過4周的療程后,對每位患者進(jìn)行24小時動態(tài)心電圖檢查,統(tǒng)計兩組的有效率。結(jié)果如表14所示。治療組與對照組治療后心率均有顯著提高(P<0.01),治療組平均心率增加9次/分,對照組平均心率增加4次/分。治療后兩組組間比較,治療組在總心率、平均心率、最快心率、最慢心率等方面改善較對照組明顯(P<0.05)。表14、兩組治療前后Holter結(jié)果比較<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>注與治療前比較,#P<0.01;治療后兩組組間比較,AP<0.05,AAP<0.013、心功能比較經(jīng)過4周的療程后,檢測患者的心功能左室收縮期射血分?jǐn)?shù)(EF)、心輸出量(CO)、每搏輸出量,并與療前比較。結(jié)果如表15所示。治療組治療前后顯效率EF為73%,CO為37%、SV為42.5%;對照組顯效率EF為18%,C0為19%、SV為19%,兩組治療后心臟超聲心功能左室收縮期射血分?jǐn)?shù)(EF)值、心輸出量(CO)值療效比較差異顯著(P<0.05),說明強(qiáng)心復(fù)脈改善心功能(EF)及心輸出量(CO)的作用優(yōu)于阿托品對照組。判斷顯效標(biāo)準(zhǔn)SV、CO、EF恢復(fù)正常。判斷有效標(biāo)準(zhǔn)SV、C0、EF未恢復(fù)正常,但較治療前提高>30%。判斷無效標(biāo)準(zhǔn)SV、CO、EF較治療前提高但<30%。判斷加重標(biāo)準(zhǔn)SV、CO、EF低于正常水平,且較治療前降低彡30%。表15、兩組患者心功能療效比較<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>注EF(%)射血分?jǐn)?shù);C0(L/分)心輸出量;SV(ml/次)每搏輸出量。*治療前心功能異常病例數(shù),與對照組比較*P<0.054、心電圖比較經(jīng)過4周的療程后,檢測患者的缺血性心電圖ST段治療前后的改變情況。兩組治療后缺血性心電圖ST段療效比較有顯著性差異(P<0.01);說明強(qiáng)心復(fù)脈能改善心臟供血,且作用優(yōu)于阿托品。5、安全性比較臨床試驗中對治療組及對照組患者,治療前后分別進(jìn)行了血常規(guī)、尿常規(guī)、便常規(guī)、肝功能、腎功能等檢查,治療后每周末進(jìn)行血壓檢測。結(jié)果表明強(qiáng)心復(fù)脈對肝、腎功能及血壓無不良影響。治療組有1例睡前服藥后輕度失眠,將藥物改為晚餐前服用后失眠消失;對照組1例服藥過程中一直存在口干眼干等癥狀,均未做特殊處理。臨床研究的各方面療效統(tǒng)計指標(biāo)顯示,強(qiáng)心復(fù)脈合劑在改善臨床癥狀上明顯優(yōu)于阿托品,能夠改善患者心功能,提高患者生活質(zhì)量;在提高心率和Holter、心電圖等療效指標(biāo)、改善心臟超聲心功能指標(biāo)中EF、CO值和心電圖ST段等方面優(yōu)于阿托品;研究過程中治療組未出現(xiàn)明顯不良影響,臨床上安全有效,具有巨大的推廣應(yīng)用價值。藥物I、藥物II、藥物III得到了相同的實驗效果。實施例4、通過藥理學(xué)研究檢測本發(fā)明藥物的效果本實施例中是分別對藥物I、藥物II、藥物III均進(jìn)行了以下各實驗。針對強(qiáng)心復(fù)脈方的功能主治,從耐缺氧、血液流變性、異搏定致緩慢型心律失常、甲醛致竇房結(jié)急性損傷誘發(fā)的緩慢型心律失常等4個方面對其進(jìn)行較系統(tǒng)的藥效學(xué)研究。1、對小鼠耐缺氧能力的影響以Wistar大鼠為實驗動物。強(qiáng)心復(fù)脈以2.78g生藥/kg;5.55g生藥/kg及11.IOg生藥/kg(相當(dāng)于人用劑量的5倍;10倍和20倍)三個劑量灌胃,陽性對照組用復(fù)方丹參片0.5g/kg(相當(dāng)于人用量的10倍);觀察各組小鼠在密閉容器中的存活時間。實驗結(jié)果如表16所示。表明,三個劑量組均能明顯延長小鼠在常壓缺氧條件下的存活時間。低、中、高三個劑量組小鼠在存活時間上較比對照組分別延長了15.51%、17.30%和19.36%,均差異顯著P<0.01。說明該藥具有提高機(jī)體耐常壓缺氧的能力,大劑量組的作用與陽性參比藥復(fù)方丹參作用近似。表16、強(qiáng)心復(fù)脈藥對小鼠耐常壓缺氧的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>注與對照組比較*Ρ<0.012、強(qiáng)心復(fù)脈對“血瘀”大鼠血液流變學(xué)的影響強(qiáng)心復(fù)脈以2.22g生藥/kg、4.44g生藥/kg及8.88g生藥/kg組(相當(dāng)于人用劑量的4倍;8倍和16倍)三個劑量,陽性對照組用復(fù)方丹參片0.5/kg(相當(dāng)于人用劑量的10倍)。對大鼠皮下注射腎上腺素外加冷刺激造成寒凝血瘀型動物模型,觀察各組對血液流變學(xué)指標(biāo)發(fā)生異常改變的改善作用。實驗結(jié)果如表17所示。強(qiáng)心復(fù)脈能降低低切變率下的全血粘度(P<0.05);能減小紅細(xì)胞變形指數(shù)和紅細(xì)胞聚集指數(shù)(P<0.05),從而起到維護(hù)紅細(xì)胞正常的變形性及抗紅細(xì)胞聚集的作用;能使血液中纖維蛋白原的含量明顯降低(P<0.05),從而顯示出較好抗纖維蛋白原凝集的作用。各組又以中劑量組作用最為明顯。復(fù)方丹參片亦有一定的減小紅細(xì)胞變形指數(shù)和降低纖維蛋白原的作用。本法造模對全血粘度高切應(yīng)力200s和紅細(xì)胞壓積影響不大。表17、強(qiáng)心復(fù)脈對“血瘀”大鼠血液流變學(xué)的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>注與正常對照組比較▲P<0.05,ΔP<0.01;與模型對照組比較*Ρ<0.053.強(qiáng)心復(fù)脈對異搏定致小鼠緩慢性心律失常模型的影響強(qiáng)心復(fù)脈在2.78g生藥/kg、5.55g生藥/kg及11.IOg生藥/kg(相當(dāng)于人用劑量的5倍;10倍和20倍)三個劑量作用下,觀察各組對異搏定誘發(fā)心動過緩模型心率的影響。實驗結(jié)果如表18所示。異搏定可致小鼠心律失常,心率緩慢下降。造模Imin后,各組小鼠心率較造模前有所下降,組間比較未有明顯差異(P>0.05)。造模后5min,強(qiáng)心復(fù)脈對心率有提高作用,大劑量組作用明顯,作用持續(xù)至20min觀察期,與對照組比較有顯著性差異(P<0.05)。20min時,對照組小鼠的心率平均減慢了(27.8士8.9)%,強(qiáng)心復(fù)脈小、中、大三個劑量組分別為(18.8士8.5)%、(23.8士7.4)%和(18.8士6.7)%。而陽性參比藥阿托品組為(28.9士9.4)%,未顯示出提高心率的作用。實驗結(jié)果表明,強(qiáng)心復(fù)脈具有拮抗異搏定致心率下降的作用,阿托品對異搏定致心率下降沒有拮抗作用。表18、對異搏定所致小鼠心律失常時心率的影響(Af)Um±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>注與對照組比較*P<0.054、強(qiáng)心復(fù)脈對家兔竇房結(jié)急性損傷模型的影響強(qiáng)心復(fù)脈在1.67g生藥/kg、3.33g生藥/kg、6.66g生藥/kg(分別相當(dāng)于人用劑量的3倍、6倍、和12倍)三個劑量作用下,觀察各組對甲醛致家兔竇房結(jié)急性損傷誘發(fā)的緩慢型心律失常模型心率及心電圖ST段的影響。實驗結(jié)果如表19-21所示。強(qiáng)心復(fù)脈顆粒大、中、小劑量組在十二指腸給藥30min即發(fā)揮藥效作用(P<0.05),心率分別提高了25.3%、36.5%和29.3%,給藥60min后,平均心率又進(jìn)一步加快并持續(xù)至120min觀察期;陽性參比藥阿托品亦顯示出良好的提高心率作用;而對照組家兔心率則沒有明顯提高。提示強(qiáng)心復(fù)脈對甲醛致家兔竇房結(jié)損傷的有明顯促修復(fù)作用,用藥后心率有明顯的增加。且所有家兔經(jīng)甲醛造模后,心電圖ST段均出現(xiàn)下移樣缺血性改變(P<0.05)。強(qiáng)心復(fù)脈組給藥30min后心電圖ST段即開始逐漸恢復(fù)(P<0.05),以中、大劑量組最為明顯;阿托品組給藥后心電圖ST段未見明顯改變。實驗過程中還發(fā)現(xiàn),接受小劑量強(qiáng)心復(fù)脈的治療組在給藥60min時,心電圖正?;謴?fù)率(ST段恢復(fù)到造模前水平)為60%;90min時心電圖完全恢復(fù)正常。中劑量組于給藥60min時,心電圖正?;謴?fù)率為90%,并持續(xù)至120min實驗期。大劑量組于給藥30min時,心電圖完全恢復(fù)正常,作用較中、小劑量組好。而阿托品對心電圖缺血性ST改變作用不明顯,至給藥90分鐘后心電圖才有所改善,120分鐘時心電圖恢復(fù)正常者僅2例(40%)(P>0.05)。模型對照組心電圖正?;謴?fù)率在60min時為20%,至120min時心電圖正?;謴?fù)率僅為30%。表19、強(qiáng)心復(fù)脈對家兔竇房結(jié)損傷模型心率的影響(次/分1±;3)鼠數(shù)劑量T^1、+.^wr.,^_給藥后心率__組別(K)gkg-正吊'[、本造模后屯、車-----.......................Dg'Kg_^_60min90min120min對照組10283+26197+17209+28205+54211+69209+68強(qiáng)心復(fù)脈101.67292±30190±46249±32林258土33林266±54251±90-J-強(qiáng)心復(fù)脈10&33285±24189±42258±23**265±33**265±38264±40條弓雖心復(fù)脈106.66277±22198±18256±28**262±32**264±32*265±31*J1SJau100.6XIO"3280±25195±35252±46*260±42*262±29264±36*注與模型對照組比較*P<0.05;**P<0.01表20、強(qiáng)心復(fù)脈對家兔竇房結(jié)損傷模型心率凈增作用的比較(次/分1±3)<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>與正常比較ΔP<0.05;與造模后比較*Ρ<0.05,**Ρ<0.01藥物I、藥物II、藥物III得到了相同的實驗效果。藥理學(xué)實驗結(jié)果表明,強(qiáng)心復(fù)脈顆粒具有提高小鼠耐常壓缺氧的能力;能改善低切變率下的全血粘度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)及纖維蛋白原含量等血液流變學(xué)指標(biāo);能提高異搏定致緩慢性心律失常動物模型的心率;能改善甲醛致家兔竇房結(jié)急性損傷模型的竇房結(jié)功能和心電圖缺血性ST段改變。權(quán)利要求一種用于治療緩慢性心律失常病態(tài)竇房結(jié)綜合征的藥物,它的藥效組分是由以下質(zhì)量份數(shù)比的原料制成的紅參∶炙附子∶炙甘草∶桂枝∶田三七∶茯苓=1-90∶1-90∶1-90∶1-90∶1-90∶1-90。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物,其特征在于所述紅參、所述炙附子、所述炙甘草、所述桂枝、所述田三七和所述茯苓的質(zhì)量份數(shù)比為4-122-105-132-102-106_14。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物,其特征在于所述紅參、所述炙附子、所述炙甘草、所述桂枝、所述田三七和所述茯苓的質(zhì)量份數(shù)比為8696610。4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一所述的藥物,其特征在于所述藥物是按照包括如下步驟的方法制備得到的用提取劑提取所述紅參,收集紅參提取液和紅參殘渣;用水煎煮所述炙附子,然后向其中加入所述紅參殘渣、所述炙甘草、所述桂枝和所述茯苓繼續(xù)煎煮,得到煎液;將煎液與所述紅參提取液合并,再加入所述田三七的粉末,混勻。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物,其特征在于所述提取紅參的方法為回流提??;提取2-3次,溫度為70-90°C;所述提取劑為乙醇溶液。6.一種制備用于治療緩慢性心律失常病態(tài)竇房結(jié)綜合征的藥物的方法,包括如下步驟用提取劑提取紅參,收集紅參提取液和紅參殘渣;用水煎煮所述炙附子,然后向其中加入所述紅參殘渣、所述炙甘草、所述桂枝和所述茯苓繼續(xù)煎煮,得到煎液;將煎液與所述紅參提取液合并,再加入所述田三七的粉末,混勻。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法,其特征在于所述紅參、所述炙附子、所述炙甘草、所述桂枝、所述田三七和所述茯苓的質(zhì)量配比為1-901-901-901-901-901-908.一種用于治療緩慢性心律失常病態(tài)竇房結(jié)綜合征的藥物,它的藥效組分由紅參、炙附子、炙甘草、桂枝、田三七和茯苓組成,其質(zhì)量配比為1-901-901-901-901-901-909.根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥物,其特征在于所述紅參、所述炙附子、所述炙甘草、所述桂枝、所述田三七和所述茯苓的質(zhì)量配比為4-122-105-132-102-106_14。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的藥物,其特征在于所述紅參、所述炙附子、所述炙甘草、所述桂枝、所述田三七和所述茯苓的質(zhì)量配比為8696610。全文摘要本發(fā)明公開了一種用于治療緩慢性心律失常病態(tài)竇房結(jié)綜合征的藥物及其制備方法。該用于治療緩慢性心律失常病態(tài)竇房結(jié)綜合征的藥物,它的藥效組分是由按以下重量配比的原料制成的紅參1-90g、炙附子1-90g、炙甘草1-90g、桂枝1-90g、田三七1-90g、茯苓1-90g。本發(fā)明藥物在改善臨床癥狀上明顯優(yōu)于阿托品,能夠改善患者心功能,提高患者生活質(zhì)量;在提高心率和Holter、心電圖等療效指標(biāo)、改善心臟超聲心功能指標(biāo)中EF、CO值和心電圖ST段等方面優(yōu)于阿托品;研究過程中治療組未出現(xiàn)明顯不良影響,臨床上安全有效。因此,本發(fā)明藥物在治療緩慢性心律失常病態(tài)竇房結(jié)綜合征領(lǐng)域中具有巨大的推廣應(yīng)用價值。文檔編號A61K36/714GK101822729SQ20091007926公開日2010年9月8日申請日期2009年3月5日優(yōu)先權(quán)日2009年3月5日發(fā)明者劉如秀,劉志明申請人:吉林康乃爾藥業(yè)有限公司